JP2016098191A - Antiallergic agent - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a food-derived antiallergic agent that can be taken without any problems in daily dietary habits and is effective in prophylaxis, improvement and the like of allergic disease.SOLUTION: An antiallergic agent comprises at least one selected from the group consisting of Hypholoma sublateritium extract, Debaryomyces hansenii bacterial cell, and Phyllanthus niruri extract as an active ingredient.SELECTED DRAWING: Figure 3

Description

本発明は、アレルギーの患者が容易に摂取することができる天然食品素材由来の抗アレルギー剤に関する。   The present invention relates to an antiallergic agent derived from a natural food material that can be easily taken by allergic patients.

近年、日本国内において食習慣の欧米化が進み、それに伴い食物アレルギー症状を有する患者が増えている。なかでも0歳〜5歳くらいまでの乳幼児のアレルギー患者数は近年増加傾向にあり、現在では50万人いると言われている。食物アレルギー患者のうち5歳以下が全患者数の70％以上を占めており、幼児全体の5％がアレルギーを有すると言われている。また、原因となる食べ物は鶏卵が38％、牛乳が16％、小麦が8％と続いており、これら3種類だけでも全アレルギーの原因の60％を超える（非特許文献１）。これら乳幼児の患者における食物アレルギーは即時型アレルギーまたはＩ型アレルギーと呼ばれ、肥満細胞や血中の好塩基球の表面にあるＦｃεレセプターにアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体が結合し、食物由来のアレルゲンがIgEに結合するとヒスタミンやロイコトリエンなどのケミカルメディエーターが過剰に放出され、喘息や蕁麻疹などのアレルギー症状が誘発される。   In recent years, the westernization of eating habits has progressed in Japan, and the number of patients with food allergies is increasing accordingly. In particular, the number of allergic patients in infants from 0 to 5 years of age has been increasing in recent years, and it is said that there are currently 500,000 people. Of those who are allergic to food, 5% or younger account for more than 70% of all patients, and 5% of all infants are allergic. The causative food is 38% for chicken eggs, 16% for milk, and 8% for wheat, and these three types alone account for 60% of all-allergic causes (Non-patent Document 1). Food allergies in these infant patients are called immediate allergies or type I allergies. Allergen-specific IgE antibodies bind to Fcε receptors on the surface of mast cells and blood basophils, and food-derived allergens become IgE. When it binds to the substance, excessive chemical mediators such as histamine and leukotriene are released, and allergic symptoms such as asthma and urticaria are induced.

このような患者に対し、遊離したヒスタミンがレセプターに結合するのを阻害する抗ヒスタミン剤や、炎症を抑制するステロイド等が医薬品として用いられており、効果はあるものの副作用の恐れがあり、日常的に摂取することは難しい。   For such patients, antihistamines that inhibit the binding of free histamine to receptors and steroids that suppress inflammation are used as pharmaceuticals, which may be effective but may cause side effects. Difficult to do.

一方で近年、緑茶成分（特許文献１）、ビールのホップ成分（特許文献２）などの食物素材が抗アレルギー作用を有することが知られてきており、花粉症を抑える緑茶などの商品が出回っていて一定の評価を受けている。植物素材の場合はこれまでの研究成果から、マスト細胞にIgE抗体が結合した後に、それが抗原と結合する際のヒスタミン遊離を抑制することが明らかとなっている。これら植物素材は食品であるので日常摂取しても問題ないが、医薬品と比較して概して効果は弱いため、必ずしもすべての食物アレルギー患者に有効とは限らず、効果はその患者の体質や体調などに左右される。   On the other hand, in recent years, it has been known that food materials such as a green tea component (Patent Document 1) and a beer hop component (Patent Document 2) have an antiallergic action, and products such as green tea that suppresses hay fever are on the market. Have received a certain reputation. In the case of plant material, the results of research so far have shown that after IgE antibody binds to mast cells, it inhibits histamine release when it binds to an antigen. Since these plant materials are foods, they can be taken daily, but they are generally less effective than pharmaceuticals, so they are not necessarily effective for all food allergy patients. Depends on.

さらに近年、プロバイオティクス等の研究が盛んになるに伴い、乳酸菌やビフィズス菌の腸内環境改善効果が明らかになり、実際にアレルギー症状を抑えたとの報告もある。そのためラクトバシルス アシドフィルス（L.acidophilus）（特許文献３）、ビフィドバクテリウム ロンガム (B.longum)（特許文献４）といった菌を含むヨーグルトやサプリメントが売られるようになった。また、漬物などから単離された植物性乳酸菌は過酷な環境でも生息できるため、生きたまま腸まで到達できることが知られ、これを含有する清涼飲料等も開発されている（特許文献５）。また、活性を強力にするために乳酸菌と酵母菌（特許文献６）、酒粕と乳酸菌など複数の抗アレルギー成分を含む食品素材（特許文献７）も開発されている。
乳酸菌等の菌体素材は、そのメカニズムの詳細は不明な点が多いが、Th1/Th2バランスが崩れTh2細胞優位な状態を戻す機構や、マスト細胞がIgE抗体と結合するのを阻害する等によりヒスタミンを遊離させない、などと言われている。 Furthermore, in recent years, as research on probiotics and the like has become active, the effect of improving the intestinal environment of lactic acid bacteria and bifidobacteria has been revealed, and it has been reported that allergic symptoms were actually suppressed. Therefore, yogurt and supplements containing bacteria such as Lactobacillus acidophilus (Patent Document 3) and Bifidobacterium longum (Patent Document 4) have been sold. In addition, since plant lactic acid bacteria isolated from pickles and the like can live in harsh environments, it is known that they can reach the intestines alive, and soft drinks containing this have been developed (Patent Document 5). In addition, food materials (Patent Document 7) containing a plurality of antiallergic components such as lactic acid bacteria and yeasts (Patent Document 6), sake lees and lactic acid bacteria have been developed to enhance the activity.
Cellular materials such as lactic acid bacteria have many details about the mechanism, but there are mechanisms that restore the Th1 / Th2 balance by losing Th1 / Th2 balance, and inhibiting mast cells from binding to IgE antibodies. It is said that histamine is not released.

これら従来の菌体素材の問題点は、乳酸菌やビフィズス菌は腸まで到達するまでに多くが死滅する。さらにこれら乳酸菌やビフィズス菌等を含む食品素材は乳成分を含むため、牛乳アレルギー患者は摂取できないという問題点があった。また、植物性乳酸菌素材は乳成分を含まず、腸まで生きたまま到達するが、哺乳動物の腸内には定着せず、すぐに体外に排出されてしまう。また、菌を生きた状態で食品製造に応用するとなると、殺菌工程や他の食品製造へのコンタミ等の問題もあり、様々な食品に応用しにくいという問題点もあった。   The problems with these conventional bacterial cell materials are that many lactic acid bacteria and bifidobacteria die before reaching the intestines. Furthermore, since the food material containing these lactic acid bacteria and bifidobacteria contains milk components, there is a problem that milk allergy patients cannot take it. In addition, plant lactic acid bacteria materials do not contain milk components and reach the intestines alive, but do not settle in the intestines of mammals and are immediately discharged out of the body. In addition, if the bacteria are applied to food production in a living state, there are problems such as contamination in the sterilization process and other food production, and there is also a problem that it is difficult to apply to various foods.

したがって、乳成分を含まず、腸内で効果が期待でき、応用範囲が広く、日常的に摂取できる、副作用の少ない抗アレルギー作用を有する食品素材は現在も求められている。   Therefore, a food material having an antiallergic action with few side effects, which does not contain milk components, can be expected to be effective in the intestine, has a wide range of applications, and can be taken on a daily basis, is still required.

特開２００８−１７３１３０号公報JP 2008-173130 A 特開２０１１−７４０６２号公報JP 2011-74062 A 特許第４４７９１６２号公報Japanese Patent No. 4479162 特開２００６−２７３８５２号公報JP 2006-273852 A 特開２０１１−２５４７７３号公報JP 2011-254773 A 特開２０１０−２０９０１５号公報JP 2010-209015 A 特開２０１０−５１３１１号公報JP 2010-51311 A

『食物アレルギー診療の手引き２０１１』厚生労働科学研究班“Food Allergy Medical Guide 2011” Health and Labor Science Research Group

本発明はアレルギー性の症状や疾患、特にI型アレルギー性疾患の予防や改善に有効な、日常的に摂取可能な食品由来の抗アレルギー剤を提供することである。特に食物アレルギー患者のうちの多数を占める乳幼児が摂取しやすい安全で副作用のない抗アレルギー剤を提供することである。   The present invention is to provide a food-derived antiallergic agent that can be taken on a daily basis and is effective in preventing or ameliorating allergic symptoms and diseases, particularly type I allergic diseases. In particular, it is to provide a safe and side effect-free antiallergic agent that can be easily taken by infants who occupy a large number of patients with food allergies.

本発明者らは、種々検討の結果、クリタケ抽出物、好塩性酵母であるデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物に即時型アレルギー抑制活性があることを初めて見出した。さらにこれらを組み合わせた場合に、相乗効果的に該抑制活性が上昇することを見出し、本発明を完成した。   As a result of various studies, the present inventors have found for the first time that cricket extract, halophilic yeast, Debaryomyces hansenii, and Kichitachikansou extract have immediate type allergy suppressing activity. Furthermore, when these were combined, it discovered that this inhibitory activity rose synergistically and completed this invention.

すなわち本発明は、以下を包含する。
[１]クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
[２]有効成分がクリタケ抽出物またはデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、[１]に記載の抗アレルギー剤。
[３]有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、[２]に記載の抗アレルギー剤。
[４]有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物である、[１]に記載の抗アレルギー剤。
[５]デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体が、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物からなる群から選択される少なくとも１種である[１]〜[４]のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
[６]Ｉ型アレルギー用である[１]〜[５]のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
[７]受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体。
[８]［７］に記載の酵母菌体を含有する組成物。 That is, the present invention includes the following.
[1] An antiallergic agent containing, as an active ingredient, at least one selected from the group consisting of Kuritake extract, Debaryomyces hansenii cells, and Kichimachikansou extract.
[2] The antiallergic agent according to [1], wherein the active ingredient is Kurita mushroom extract or Debaryomyces hansenii cells.
[3] The antiallergic agent according to [2], wherein the active ingredient is a Debaryomyces hansenii cell.
[4] The antiallergic agent according to [1], wherein the active ingredient is a microbial cell of Debaryomyces hansenii and an extract of citrus citrus fruit.
[5] The cells of [1] to [4], wherein the cells of Debaryomyces hansenii are at least one selected from the group consisting of living cells, dead cells and treated cells of the cells. The antiallergic agent according to any one of the above.
[6] The antiallergic agent according to any one of [1] to [5], which is for type I allergy.
[7] A yeast cell belonging to the genus Devalyomyces, having accession number NITE P-01951.
[8] A composition containing the yeast cell according to [7].

本発明によれば、安全で副作用もなく、日常的に摂取可能な、安価で保存性に優れ、且つ味、食感、風味に優れ、利便性の良い抗アレルギー剤、およびそれを含有する飲食品をアレルギー患者に提供できる。
本発明によれば、食物アレルギー患者の寛解を早め、一般の飲食品をより早く摂取可能にすることができる。
本発明によれば、牛乳アレルギー患者にも投与することができ、小児患者にも安全に提供できる。
本発明によれば、アレルギーの発症する前に摂取することでアレルギー症状を抑制または軽減することができる。
本発明によれば、有効成分が天然由来の成分のため長期に摂取しても安全である。 According to the present invention, an antiallergic agent that is safe, has no side effects, can be ingested on a daily basis, is inexpensive, excellent in storage stability, excellent in taste, texture, and flavor, and convenient, and food and drink containing the same Products can be provided to allergic patients.
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the remission of a food allergy patient can be accelerated | stimulated and general food-drinks can be ingested earlier.
According to the present invention, it can be administered to milk allergy patients and can be safely provided to pediatric patients.
According to the present invention, allergic symptoms can be suppressed or reduced by ingesting before the onset of allergy.
According to the present invention, since the active ingredient is a naturally derived ingredient, it is safe even if ingested for a long time.

図１は、デバリョマイセス・ハンセニ菌体のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率測定結果を示す。FIG. 1 shows the measurement results of the β-hexosaminidase release rate of Devalyomyces hanseni cells. 図２は、クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率測定結果を示す。FIG. 2 shows the results of measuring the β-hexosaminidase release rate of the Kurita mushroom extract and the citrus extract. 図３は、クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体（Debaryomyces hansenii）のオボアルブミン感作マウスの色素滲出抑制効果を示す。FIG. 3 shows the pigment oozing-inhibiting effect of the ovalbumin-sensitized mouse | mouth of a Kurita mushroom extract, a Kutachikankanso extract, and a Debaryomyces hansenii cell body (Debaryomyces hansenii).

本発明は、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有する抗アレルギー剤に関する（以下本発明の抗アレルギー剤とも略する）。   The present invention relates to an antiallergic agent containing, as an active ingredient, at least one selected from the group consisting of Kurita mushroom extract, Debaryomyces hansenii cells, and Kichimachikansou extract (hereinafter referred to as the antiallergic agent of the present invention) Also abbreviated).

本発明において、クリタケ抽出物は、ハラタケ目モエギタケ科クリタケ属に属するキノコであるクリタケの抽出物であり、クリタケをそのままでまたは乾燥させたものを溶媒で抽出して得られるものである。   In the present invention, the cricket extract is an extract of cricket, which is a mushroom belonging to the genus Agaricaceae, and is obtained by extracting cricket as it is or after drying it with a solvent.

抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、グリセリン、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等のアルコール類、またはアセトンなどのケトン類、酢酸エチル、酢酸メチル、ヘキサン、ジクロロメタン、ジエチルエーテルなどの溶媒を単独でも２種類以上を混合して使用してもよい。食品に適用されるという点で水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、またはこれらの混合溶剤を用いるのが好ましく、水、エタノールがより好ましい。   Extraction solvents include water, methanol, ethanol, glycerin, 1-propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol and other alcohols, or ketones such as acetone, ethyl acetate, methyl acetate, hexane, dichloromethane, diethyl ether These solvents may be used alone or in admixture of two or more. It is preferable to use water, ethanol, methanol, acetone, ethyl acetate, or a mixed solvent thereof in terms of application to foods, and water and ethanol are more preferable.

抽出する際のクリタケと溶媒との比率は、特に限定されるものではないが、通常クリタケ乾燥物１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍であり、１〜２００重量倍が好ましく、２〜１００重量倍がより好ましい。   The ratio of the cricket and the solvent at the time of extraction is not particularly limited, but is usually 0.5 to 1000 times by weight of the solvent with respect to dried cricket 1 and preferably 1 to 200 times by weight. 100 times by weight is more preferable.

抽出温度は、通常０〜１００℃であり、４〜５０℃が好ましく、１０〜４０℃がより好ましい。抽出時間は、抽出温度等によって異なるが、通常０．５〜２４０時間であり、５〜１２０時間が好ましく、１２〜７２時間がより好ましい。   Extraction temperature is 0-100 degreeC normally, 4-50 degreeC is preferable and 10-40 degreeC is more preferable. Although extraction time changes with extraction temperature etc., it is 0.5 to 240 hours normally, 5 to 120 hours are preferable and 12 to 72 hours are more preferable.

得られた抽出物は、溶媒を含んだ状態、あるいは溶媒除去、洗浄、濃縮等の慣用の工程を経てクリタケ抽出物として使用することができる。また凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥あるいは天日干し等の慣用の乾燥工程により乾燥させて使用することができる。さらに乾燥物を粉砕等の慣用の方法で粉末状または顆粒状にして使用することができる。   The obtained extract can be used as a cricket extract in a state containing a solvent or through a conventional process such as solvent removal, washing, and concentration. Further, it can be used after being dried by a conventional drying process such as freeze drying, reduced pressure drying, spray drying or sun drying. Further, the dried product can be used in the form of powder or granules by a conventional method such as pulverization.

本発明の抗アレルギー剤において、クリタケ抽出物の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、クリタケ抽出物の乾燥重量として、通常０．１ｍｇ〜１００ｇであり、好ましくは０．１ｇ〜６０ｇであり、より好ましくは、１ｇ〜２０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常７０μｇ〜７０ｇであり、好ましくは７０ｍｇ〜４０ｇであり、より好ましくは、０．７ｇ〜１４ｇである。 In the antiallergic agent of the present invention, the daily dose as an active ingredient of the cricket extract varies depending on the subject, age, sex, symptom, etc., but when administered orally (adult, weight 60 kg) The weight is usually 0.1 mg to 100 g, preferably 0.1 g to 60 g, and more preferably 1 g to 20 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
In parenteral administration, it is usually 70 μg to 70 g, preferably 70 mg to 40 g, and more preferably 0.7 g to 14 g.

クリタケ抽出物の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象物により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、クリタケ抽出物の乾燥重量として、通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。   The amount of anti-allergic agent in Kurita extract is different depending on the application target and cannot be specified unconditionally. However, the dry weight of Kurita extract is usually 10 to 100% by weight with respect to the total amount of anti-allergic agent. 30 to 70% by weight is preferable, and 40 to 60% by weight is more preferable.

本発明において、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体は、子嚢菌門デバリョマイセス属に属する酵母であり、市販のものであっても、単離されたものであってもよい。   In the present invention, the cells of Debaryomyces hansenii are yeast belonging to the genus Ascomycota debaryomyces and may be commercially available or isolated.

本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体としては、例えばデニッシュブルーチーズ（Danish blue cheese）から採取され、他の公知菌株との比較により菌学的性質から、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）属に属する新規な酵母菌体と同定されたものが好ましく挙げられる。本酵母菌体は、２０１４年１０月１５日に独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託されて受託番号 ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１が付与されている。   As the Debaryomyces hansenii microbial cells used in the present invention, for example, it is collected from Danish blue cheese, and it is a novel belonging to the genus Debaryomyces hansenii because of its bacteriological properties by comparison with other known strains. What is identified as a novel yeast cell is preferred. This yeast cell was deposited at the Patent Microorganism Deposit Center, National Institute of Technology and Evaluation on October 15, 2014, and assigned the deposit number NITE P-01951.

上記受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体の菌学的性質は以下のとおりである。
（ａ）培養的・形態的性質
YM寒天培地に接種し、25℃〜30℃で2日から3日間、好気培養すると、白色〜茶色がかった白色のコロニーを形成する。細胞は球形であり、直径は3〜6μｍである。
（ｂ）胞子の形成
培養条件によって子嚢を形成し、子嚢の中に１個か２個の胞子を内生する。胞子の形状は、球形〜だ円形である。
（ｃ）生理学的性質
食塩１０％で生育できる耐塩性があり、グルコース、ガラクトース、サッカロース、マルトース、ラクトース、エタノールを資化できる。 The mycological properties of the yeast cells belonging to the genus Devalyomyces having the accession number NITE P-01951 are as follows.
(A) Cultural and morphological properties
When inoculated on a YM agar medium and aerobically cultured at 25 ° C. to 30 ° C. for 2 to 3 days, white to brownish white colonies are formed. The cells are spherical and have a diameter of 3-6 μm.
(B) Spore formation Ascending cysts are formed according to the culture conditions, and one or two spores are endogenously grown in the ascending sac. The spore shape is spherical to elliptical.
(C) Physiological properties It has salt tolerance that can grow with 10% salt, and can assimilate glucose, galactose, saccharose, maltose, lactose, and ethanol.

本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体は、酵母菌の培養の常法に従って、例えば、グルコース、ペプトン、酵母エキス等を含む液体培地を使用し、温度１０〜４０℃、好ましくは１５〜３５℃、より好ましくは２０〜３０℃、ｐＨ３〜１０、好ましくはｐＨ４〜９、より好ましくはｐＨ５〜８で行われ、通常１〜４日間培養を行って得られたものでもよい。培地のｐＨ調整には、希塩酸や水酸化ナトリウム溶液等が用いられる。培養物から遠心分離などの固−液分離手段によって集菌し、１〜２回、生理食塩水などで洗浄し、本発明の目的に使用することが出来る。   The Debaryomyces hanseni cell used in the present invention is, for example, a liquid medium containing glucose, peptone, yeast extract and the like according to a conventional method for culturing yeast, and a temperature of 10 to 40 ° C, preferably 15 to 35 ° C. More preferably, it is carried out at 20 to 30 ° C., pH 3 to 10, preferably pH 4 to 9, more preferably pH 5 to 8, and usually obtained by culturing for 1 to 4 days. For adjusting the pH of the medium, dilute hydrochloric acid, sodium hydroxide solution, or the like is used. Bacteria are collected from the culture by solid-liquid separation means such as centrifugation, washed once or twice with physiological saline, and used for the purpose of the present invention.

本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体は、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物であってもよいが、該菌体の培養生菌体、培養死菌体および培養死菌体処理物が好ましく、培養死菌体、培養死菌体処理物等がより好ましく、培養死菌体処理物が特に好ましい。
菌体処理物としては、菌体の乾燥物、冷凍物、冷蔵物、凍結乾燥物、加熱物、加圧物、超音波破砕物、界面活性剤処理物、有機溶剤処理物、溶媒抽出物、溶菌酵素処理物、固定化菌体或いは菌体から精製した酵素等に加え、該菌株の培養液の濃縮物、乾燥物、冷凍物、冷蔵物、凍結乾燥物、加熱物、加圧物、超音波破砕物、界面活性剤処理物、有機溶媒処理物、溶媒抽出物、溶菌酵素処理物等が挙げられる。菌体処理物の中でも、該菌株の培養液の濃縮物、該菌株の培養液の凍結乾燥物等が好ましく、該菌株の培養液の凍結乾燥物がより好ましい。 The Devalyomyces hanseni cells used in the present invention may be live cells, dead cells and treated cells of the cells, but the cultured cells, cultured dead cells and cultured deaths of the cells. Processed bacterial cell products are preferred, cultured dead cell cultures, cultured dead cell processed products, and the like are more preferable, and cultured dead cell processed products are particularly preferable.
As the processed microbial cell product, dried product, frozen product, refrigerated product, lyophilized product, heated product, pressurized product, ultrasonic crushed product, surfactant-treated product, treated organic solvent, solvent extract, In addition to lysed enzyme-treated products, immobilized cells or enzymes purified from cells, etc., concentrates, dried products, frozen products, refrigerated products, freeze-dried products, heated products, pressurized products, Examples include sonicated products, surfactant-treated products, organic solvent-treated products, solvent extracts, and lytic enzyme-treated products. Among the treated bacterial cells, a concentrate of the culture solution of the strain, a freeze-dried product of the culture solution of the strain, and the like are preferable, and a freeze-dried product of the culture solution of the strain is more preferable.

本発明の抗アレルギー剤において、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の乾燥重量として、通常９０μｇ〜９０ｇであり、好ましくは９０ｍｇ〜５５ｇであり、より好ましくは、０．９ｇ〜１８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常６０μｇ〜６０ｇであり、好ましくは６０ｍｇ〜３５ｇであり、より好ましくは、０．６ｇ〜１３ｇである。 In the antiallergic agent of the present invention, the daily dose as an active ingredient of Devalyomyces hanseni cells varies depending on the subject, age, sex, symptom, etc., but for oral administration (adult, weight 60 kg), Debaryomyces hanseni The dry weight of the cells is usually 90 μg to 90 g, preferably 90 mg to 55 g, more preferably 0.9 g to 18 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
In parenteral administration, it is usually 60 μg to 60 g, preferably 60 mg to 35 g, and more preferably 0.6 g to 13 g.

デバリョマイセス・ハンセニ菌体の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の乾燥重量として通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。   The amount of the antiallergic agent of Debaryomyces hanseni cells varies depending on the application target and cannot be specified unconditionally. However, the dry weight of debaryomyces hanseni cells is usually 10 to 100% by weight with respect to the total amount of antiallergic agents. 30 to 70% by weight is preferable, and 40 to 60% by weight is more preferable.

本発明において、キダチコミカンソウ抽出物は、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する植物であるキダチコミカンソウの抽出物であり、キダチコミカンソウをそのままでまたは乾燥させたものを溶媒で抽出して得られるものである。   In the present invention, the citrus citrus extract is an extract of citrus citrus, a plant belonging to the genus Euphorbiaceae, and is obtained by extracting a dried citrus as it is or with a solvent.

抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、グリセリン、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等のアルコール類、またはアセトンなどのケトン類、酢酸エチル、酢酸メチル、ヘキサン、ジクロロメタン、ジエチルエーテルなどの溶媒を単独でも２種類以上を混合して使用してもよい。食品に適用されるという点で水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、またはこれらの混合溶剤を用いるのが好ましく、水、エタノールがより好ましい。   Extraction solvents include water, methanol, ethanol, glycerin, 1-propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol and other alcohols, or ketones such as acetone, ethyl acetate, methyl acetate, hexane, dichloromethane, diethyl ether These solvents may be used alone or in admixture of two or more. It is preferable to use water, ethanol, methanol, acetone, ethyl acetate, or a mixed solvent thereof in terms of application to foods, and water and ethanol are more preferable.

抽出する際のキダチコミカンソウと溶媒との比率は、特に限定されるものではないが、通常キダチコミカンソウ乾燥物１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍であり、１〜２００重量倍が好ましく、２〜１００重量倍がより好ましい。   The ratio of the yellow citrus fruit and the solvent at the time of extraction is not particularly limited, but is usually 0.5 to 1000 times by weight of the solvent relative to the dried dried citrus fruit 1, and preferably 1 to 200 times by weight. 2-100 weight times is more preferable.

抽出温度は、通常０〜１００℃であり、４〜５０℃が好ましく、１０〜４０℃がより好ましい。抽出時間は、抽出温度等によって異なるが、通常０．５〜２４０時間であり、５〜１２０時間が好ましく、１２〜７２時間がより好ましい。   Extraction temperature is 0-100 degreeC normally, 4-50 degreeC is preferable and 10-40 degreeC is more preferable. Although extraction time changes with extraction temperature etc., it is 0.5 to 240 hours normally, 5 to 120 hours are preferable and 12 to 72 hours are more preferable.

得られた抽出物は、溶媒を含んだ状態、あるいは溶媒除去、洗浄、濃縮等の慣用の工程を経てキダチコミカンソウ抽出物として使用することができる。また凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥あるいは天日干し等の慣用の乾燥工程により乾燥させて使用することができる。さらに乾燥物を粉砕等の慣用の方法で粉末状または顆粒状にして使用することができる。   The obtained extract can be used as a citrus citrus extract in a state containing a solvent or through a conventional process such as solvent removal, washing, and concentration. Further, it can be used after being dried by a conventional drying process such as freeze drying, reduced pressure drying, spray drying or sun drying. Further, the dried product can be used in the form of powder or granules by a conventional method such as pulverization.

本発明の抗アレルギー剤において、キダチコミカンソウ抽出物の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、キダチコミカンソウ抽出物の乾燥重量として、通常０．１ｍｇ〜１００ｇであり、好ましくは０．１ｇ〜６０ｇであり、より好ましくは、１ｇ〜２０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常７０μｇ〜７０ｇであり、好ましくは７０ｍｇ〜４０ｇであり、より好ましくは、０．７ｇ〜１４ｇである。 In the antiallergic agent of the present invention, the daily dose as an active ingredient of the extract of citrus citrus fruit varies depending on the subject, age, sex, symptom, etc., but for oral administration (adult, body weight 60 kg) The dry weight is usually 0.1 mg to 100 g, preferably 0.1 g to 60 g, more preferably 1 g to 20 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
In parenteral administration, it is usually 70 μg to 70 g, preferably 70 mg to 40 g, and more preferably 0.7 g to 14 g.

キダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、キダチコミカンソウ抽出物の乾燥重量として通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。   The compounding amount of the antiallergic agent of the extract of citrus citrus varies depending on the application target and cannot be specified unconditionally. However, the dry weight of the extract of citrus citrus extract is usually 10 to 100% by weight with respect to the total amount of the antiallergic agent 30 to 70% by weight is preferable, and 40 to 60% by weight is more preferable.

本発明の抗アレルギー剤においては、クリタケ抽出物およびデバリョマイセス・ハンセニ菌体を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。 In the antiallergic agent of the present invention, when Kurita extract and Debaryomyces hanseni cells are included as active ingredients, the daily dose varies depending on the subject, age, sex, symptoms, etc. In administration (adult, body weight 60 kg), it is usually 40 μg to 40 g and 40 μg to 40 g, preferably 40 mg to 25 g and 40 mg to 25 g, more preferably 0.4 g to 8 g and 0.4 g to 8 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
For parenteral administration, it is usually 28 μg to 28 g and 28 μg to 28 g, preferably 28 mg to 16 g and 28 mg to 16 g, and more preferably 0.28 g to 5.5 g and 0.28 g to 5.5 g.

クリタケ抽出物およびデバリョマイセス・ハンセニ菌体の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、クリタケ抽出物１重量部に対してデバリョマイセス・ハンセニ菌体が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。   The mixing ratio of Kuritatake extract and debaryomyces hanseni antiallergic agent varies depending on the application target and cannot be specified unconditionally, but as dry weight of each, debaryomyces hanseni microbial cell with respect to 1 part by weight of cricket extract Is usually 1 to 10 parts by weight, preferably 3 to 7 parts by weight, and more preferably 4 to 6 parts by weight.

デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。 When containing Debaryomyces hanseni cells and Aspergillus oryzae extract as active ingredients, the daily dose varies depending on the subject, age, sex, symptoms, etc., but each is dry weight, orally administered (adult, 60 kg body weight) And usually 40 μg to 40 g and 40 μg to 40 g, preferably 40 mg to 25 g and 40 mg to 25 g, more preferably 0.4 g to 8 g and 0.4 g to 8 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
For parenteral administration, it is usually 28 μg to 28 g and 28 μg to 28 g, preferably 28 mg to 16 g and 28 mg to 16 g, and more preferably 0.28 g to 5.5 g and 0.28 g to 5.5 g.

デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、デバリョマイセス・ハンセニ菌体１重量部に対してキダチコミカンソウ抽出物が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。   The mixing ratio of the antiallergic agent of Debaryomyces hanseni cells and Kichitachikansou extract differs depending on the application target, but cannot be specified unconditionally, but as dry weight of each, the amount of debaryomyces hanseni cells is 1 part by weight The extract is usually preferably 1 to 10 parts by weight and 3 to 7 parts by weight, more preferably 4 to 6 parts by weight.

クリタケ抽出物およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。 When Kuritake extract and Aspergillus oryzae extract are included as active ingredients, the daily dose varies depending on the subject, age, sex, symptoms, etc., but each of them is usually dry weight orally (adult, body weight 60 kg). It is 40 μg to 40 g and 40 μg to 40 g, preferably 40 mg to 25 g and 40 mg to 25 g, more preferably 0.4 g to 8 g and 0.4 g to 8 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.
For parenteral administration, it is usually 28 μg to 28 g and 28 μg to 28 g, preferably 28 mg to 16 g and 28 mg to 16 g, and more preferably 0.28 g to 5.5 g and 0.28 g to 5.5 g.

クリタケ抽出物およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、クリタケ抽出物１重量部に対してキダチコミカンソウ抽出物が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。   The mixing ratio of the anti-allergic agent of Kurita mushroom extract and Kichitake Kumiso extract differs depending on the application target and cannot be specified unconditionally. 1 to 10 parts by weight and 3 to 7 parts by weight are preferable, and 4 to 6 parts by weight are more preferable.

クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常２７μｇ〜２７ｇ、２７μｇ〜２７ｇおよび２７μｇ〜２７ｇであり、好ましくは２７ｍｇ〜１７ｇ、２７ｍｇ〜１７ｇおよび２７ｍｇ〜１７ｇであり、より好ましくは、０．２７ｇ〜５ｇ、０．２７ｇ〜５ｇおよび０．２７ｇ〜５ｇである。
非経口投与では、通常１９μｇ〜１９ｇ、１９μｇ〜１９ｇおよび１９μｇ〜１９ｇであり、好ましくは１９ｍｇ〜１１ｇ、１９ｍｇ〜１１ｇおよび１９ｍｇ〜１１ｇであり、より好ましくは、０．１９ｇ〜４ｇ、０．１９ｇ〜４ｇおよび０．１９ｇ〜４ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。 When Kuritake extract, Debaryomyces hanseni cells and Aspergillus extract are included as active ingredients, the daily dose varies depending on the subject, age, sex, symptoms, etc. The weight is usually 27 μg to 27 g, 27 μg to 27 g, and 27 μg to 27 g, preferably 27 mg to 17 g, 27 mg to 17 g, and 27 mg to 17 g, more preferably 0.27 g to 5 g, 0.27 g to 5 g and 0.27 g to 5 g.
For parenteral administration, it is usually 19 μg to 19 g, 19 μg to 19 g and 19 μg to 19 g, preferably 19 mg to 11 g, 19 mg to 11 g and 19 mg to 11 g, more preferably 0.19 g to 4 g, 0.19 g to 4 g and 0.19 g to 4 g. The daily dose can be administered at once or in several divided doses. It does not matter before meals, after meals, and between meals. The administration period is not particularly limited.

クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、上記各配合割合を勘案して決めることができる。   The blending ratio of the antiallergic agent of Kuritatake extract, Debaryomyces hanseni cell body and Kichitachikansou extract can be determined in consideration of the above blending ratios.

本発明の抗アレルギー剤は、その剤型に制限はなく、経口製剤、非経口製剤のいずれでもよい。その剤型としては、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤、マイクロカプセル剤、ドリンク剤、乳剤、あるいは懸濁液剤等の経口投与剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、液剤、ローション剤、パック剤、入浴剤などの皮膚外用剤、注射剤などとすることができる。   The dosage form of the antiallergic agent of the present invention is not limited, and any of oral preparations and parenteral preparations may be used. Examples of the dosage form include tablets, granules, powders, capsules, elixirs, syrups, microcapsules, drinks, emulsions or suspensions, orally administered ointments, creams, gels, It may be a liquid preparation, lotion preparation, pack preparation, skin external preparation such as bath preparation, injection preparation and the like.

経口的に投与する場合には、本発明の抗アレルギー剤は、必要に応じて、担体、賦形剤、結合剤、膨化剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、防腐剤、乳化剤、被覆剤等を含有することができ、これらとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で用いることができる。本発明の抗アレルギー剤におけるクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物は指示された範囲の適当な用量が得られるようにすればよい。   When administered orally, the antiallergic agent of the present invention comprises a carrier, excipient, binder, swelling agent, lubricant, sweetener, flavoring agent, preservative, emulsifier, coating agent as necessary. And can be used in unit dosage forms required for generally accepted formulation practice. In the antiallergic agent of the present invention, the Kurita extract, Debaryomyces hanseni cells, and Kichitachikanso extract may be made to obtain an appropriate dose within the indicated range.

本発明の抗アレルギー剤において、含有することができる具体的な成分としては、例えばトラガント、アラビアゴム、コーンスターチ及びゼラチンのような結合剤；微晶性セルロース、結晶セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラチン化デンプン、アルギン酸、デキストリンのような膨化剤；ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；微粒二酸化ケイ素、メチルセルロースのような流動性改善剤；グリセリン脂肪酸エステルのような滑沢剤；ショ糖、乳糖及びアスパルテームのような甘味剤；ペパーミント、ワニラ香料及びチェリー又はオレンジのような香味剤；モノグリセリド、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチンなどの乳化剤等が挙げられる。   Specific components that can be contained in the antiallergic agent of the present invention include, for example, binders such as tragacanth, gum arabic, corn starch and gelatin; excipients such as microcrystalline cellulose and crystalline cellulose; corn starch Bulking agents such as pregelatinized starch, alginic acid, dextrin; lubricants such as magnesium stearate; fluidity improvers such as fine silicon dioxide, methylcellulose; lubricants such as glycerin fatty acid esters; sucrose, Sweeteners such as lactose and aspartame; peppermint, vanilla flavor and flavoring agents such as cherry or orange; emulsifiers such as monoglyceride, polyglycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, lecithin and the like.

調剤単位形態がカプセル剤である場合には上記のタイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。   When the dispensing unit form is a capsule, a liquid carrier such as fats and oils can be further contained in the above type of material.

また、種々の他の材料を、調剤単位の物理的形態を変化させるために含有させることができる。錠剤の被覆剤としては、例えば、シェラック、砂糖又はその両方などが挙げられる。シロップ剤又はエリキシル剤は、例えば、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルパラベン及びプロピルパラベン、色素及びチェリー又はオレンジ香味等などを含有することができる。その他、各種ビタミン類、各種アミノ酸類を含有しても良い。   Various other materials can also be included to change the physical form of the dispensing unit. Examples of the coating agent for tablets include shellac, sugar, or both. A syrup or elixir can contain, for example, sucrose as a sweetening agent, methylparaben and propylparaben as preservatives, a pigment, a cherry or orange flavor, and the like. In addition, various vitamins and various amino acids may be contained.

腸溶性製剤とするときは、例えばヒドロキシルフェニルメチルセルロースの水溶液を被覆前処理剤とし、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの水溶液及びポリアセチンの水溶液を被覆剤として常法により腸溶性製剤とすればよい。   When an enteric preparation is used, for example, an aqueous solution of hydroxylphenylmethylcellulose may be used as a coating pretreatment agent, and an aqueous solution of hydroxypropylmethylcellulose phthalate and an aqueous solution of polyacetin may be used as a coating agent to form an enteric preparation by a conventional method.

本発明の抗アレルギー剤は、有効成分として、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物を含有するが、更に任意の他の有効成分を含有してもよい。   The antiallergic agent of the present invention contains Kurita mushroom extract, Debaryomyces hanseni cells, Aspergillus extract or a mixture thereof as an active ingredient, but may further contain any other active ingredient.

非経口的に投与する場合には、例えば、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物を含有する溶液を点鼻噴霧することや注射剤として投与すること等ができる。又は本発明の抗アレルギー剤を皮膚外用剤とする場合には、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物を種々の基剤に分散させて常法により製剤化すればよく、かかる基剤としては、ワセリン、流動パラフィン、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシルなどの高級脂肪酸エステル、スクワラン、ラノリン、セタノールなどの高級アルコール、シリコーン油、動植物油脂などの油脂性基剤、エタノールなどの低級アルコール類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、α−モノグリセリルエーテル、レシチン、ソルビタン脂肪酸エステル、デキストリン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸金属塩、硫酸マグネシウムなどの乳化又は乳化安定剤、芳香剤、防腐剤、色素、増粘剤、酸化防止剤、紫外線防御剤、創傷治癒剤、抗炎症剤、保湿剤などの各種薬効剤、水などが挙げられる。   In the case of parenteral administration, for example, a solution containing Kuritake extract, Debaryomyces hanseni cells or Kichitachikanso extract can be sprayed nasally or administered as an injection. Alternatively, when the antiallergic agent of the present invention is used as an external preparation for skin, it may be formulated by a conventional method by dispersing Kurita extract, Debaryomyces hanseni cells or Kichitachikansou extract in various bases. Bases include petrolatum, liquid paraffin, isopropyl myristate, higher fatty acid esters such as octyldodecyl myristate, higher alcohols such as squalane, lanolin, and cetanol, oily bases such as silicone oil and animal and vegetable oils, and lower grades such as ethanol Emulsification or milk such as alcohols, polyhydric alcohols such as polyethylene glycol, propylene glycol, α-monoglyceryl ether, lecithin, sorbitan fatty acid ester, dextrin fatty acid ester, fatty acid monoglyceride, fatty acid metal salt, magnesium sulfate Stabilizers, fragrances, preservatives, dyes, thickeners, antioxidants, ultraviolet protective agents, wound healing agents, anti-inflammatory agents, various medicinal agents such as humectants, and water.

本発明の抗アレルギー剤を医薬品として使用する場合には、本発明の抗アレルギー剤そのものであってもよく、また他の添加物等を含有するものであってもよい。   When the antiallergic agent of the present invention is used as a pharmaceutical product, it may be the antiallergic agent of the present invention itself or may contain other additives.

本発明の抗アレルギー剤を食品として使用する場合には、本発明の特定の機能に着目して摂取される健康食品の他、保健機能食品制度に規定される特定保健用食品や栄養機能食品を意味し、さらにダイエタリーサプリメントも包含される。あるいはクッキー、ビスケット、ボーロ等の乳幼児用の焼き菓子や、チョコレート、キャンディー、ケーキ、ガム等の菓子類、調味料、麺類、米飯類、味噌、豆腐、茶飲料、炭酸飲料、スポーツ飲料、コーヒー、ココア飲料、牛乳、豆乳等に添加した形態であってもよい。   When the antiallergic agent of the present invention is used as a food, in addition to the health foods that are ingested by paying attention to the specific functions of the present invention, the foods for specified health and nutritional functions that are defined in the health function food system Meaning dietary supplements. Or baked confectionery for infants such as cookies, biscuits, Bolo, confectionery such as chocolate, candy, cake, gum, seasoning, noodles, cooked rice, miso, tofu, tea drink, carbonated drink, sports drink, coffee, The form added to cocoa drink, milk, soy milk, etc. may be sufficient.

食品に含まれるクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物の量は、特に限定されないが、１日あたりの飲食量が本発明の抗アレルギー剤における上記の投与量の範囲内となるようにするのが好ましい。本発明の抗アレルギー剤の保健機能食品の形態は、特に限定されない。   The amount of Kurita mushroom extract, Debaryomyces hanseni cells or Kichitachikansou extract contained in the food is not particularly limited, but the amount of food and drink per day falls within the above dose range in the antiallergic agent of the present invention. It is preferable to do so. The form of the health functional food of the antiallergic agent of the present invention is not particularly limited.

本願における食品は、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物が１食当たりの摂取単位量の形態で包装された形態や、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物が懸濁あるいは溶解した飲料が１食あたりの飲み切りの形態で瓶等に充填された形態などが挙げられる。１食あたりの用量は上記に示した１日の投与量であってもよい。   The food in the present application is a form in which Kurita mushroom extract, Debaryomyces hanseni cell body, Kidney citrus extract or a mixture thereof is packaged in the form of an intake unit amount per meal, Kurita extract, Debaryomyces hanseni cell body, Examples include a form in which a beverage in which an extract of citrus citrus or a mixture thereof is suspended or dissolved is filled in a bottle or the like in the form of a drink per serving. The dose per meal may be the daily dose shown above.

具体的には、１食当たりの単位包装形態において、該単位のクリタケ抽出物の１回の摂取量としては、通常０．１ｍｇ〜１００ｇが好ましく、１００ｍｇ〜６０ｇがより好ましく、１ｇ〜２０ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記の量を回数で勘案した量が単位包装形態の量として挙げられる。   Specifically, in a unit packaging form per serving, the intake amount of the cricket extract per unit is usually preferably 0.1 mg to 100 g, more preferably 100 mg to 60 g, and particularly preferably 1 g to 20 g. preferable. In addition, for example, when ingesting twice or more a day, an amount obtained by taking the above amount into consideration by the number of times can be cited as the amount of the unit packaging form.

同様に、１食当たりの単位包装形態において、該単位のデバリョマイセス・ハンセニ菌体の１回の摂取量としては、通常９０μｇ〜９０ｇが好ましく、９０ｍｇ〜５５ｇがより好ましく、０．９ｇ〜１８ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記と同様である。   Similarly, in a unit packaging form per serving, the intake amount of Devalyomyces hanseni cells per unit is usually preferably 90 μg to 90 g, more preferably 90 mg to 55 g, particularly 0.9 g to 18 g. preferable. For example, when taking twice or more a day, it is the same as above.

同様に、１食当たりの単位包装形態において、該単位のキダチコミカンソウ抽出物の１回の摂取量としては、通常０．１ｍｇ〜１００ｇが好ましく、１００ｍｇ〜６０ｇがより好ましく、１ｇ〜２０ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記と同様である。   Similarly, in a unit packaging form per serving, the intake amount of the perilla extract of this unit is usually preferably 0.1 mg to 100 g, more preferably 100 mg to 60 g, and particularly preferably 1 g to 20 g. . For example, when taking twice or more a day, it is the same as above.

１食当たりの単位包装形態において、該単位の本発明における有効成分を２種又は３種と組み合わせる場合には、上記配合割合を勘案して適宜配合することができる。   In the unit packaging form per serving, when combining the active ingredient in the present invention of the unit with two or three kinds, it can be appropriately blended in consideration of the blending ratio.

本発明の抗アレルギー剤は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ラット、マウス等の哺乳動物に対して、優れた抗アレルギー作用を示す。
抗アレルギー作用とは、アレルギーの改善、抑制、治療および予防作用を意味する。
アレルギーとは免疫反応が、特定の抗原に対して過剰に起こることと定義され、その発生機序によりＩ〜Ｖ型に分類される。本発明のアレルギー剤は、いずれの分類のアレルギーにも適用可能であるが、Ｉ型アレルギーに適用するのが好ましい。 The antiallergic agent of the present invention exhibits an excellent antiallergic action against mammals such as humans, dogs, cows, horses, rats and mice.
Anti-allergic action means allergic improvement, suppression, treatment and prevention action.
Allergy is defined as an immune reaction that occurs excessively against a specific antigen, and is classified into types I to V depending on the mechanism of its occurrence. The allergic agent of the present invention can be applied to any type of allergy, but is preferably applied to type I allergy.

Ｉ型アレルギーは、免疫グロブリンIgEが関与するアレルギーである。IgEが肥満細胞や血中の好塩基球の表面にあるＦｃεレセプターに結合し、そこに外部からのアレルゲンが結合するとこれらの細胞がヒスタミン、ロイコトルエン、セロトニンなどのケミカルメディエーターを放出する。それにより血管拡張や血管透過性亢進などが起こり、浮腫、掻痒などの症状があらわれる。この反応は抗原が体内に入るとすぐに生じ、Ｉ型アレルギーは即時型アレルギーとも呼ばれる。Ｉ型アレルギー性疾患としては、蕁麻疹、食物アレルギー、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、アナフィラキシーショック等が挙げられる。本発明の抗アレルギー剤は、上記疾患に有効であるが、なかでもアナフィラキシーショック、食物アレルギーに好ましく使用され、食物アレルギーにより好ましく使用される。   Type I allergy is an allergy involving immunoglobulin IgE. IgE binds to Fcε receptors on the surface of mast cells and blood basophils, and when external allergens bind thereto, these cells release chemical mediators such as histamine, leucotoluene, and serotonin. As a result, vasodilation and increased vascular permeability occur, and symptoms such as edema and pruritus appear. This reaction occurs as soon as the antigen enters the body, and type I allergies are also called immediate allergies. Examples of type I allergic diseases include urticaria, food allergy, hay fever, allergic rhinitis, allergic gastroenteritis, bronchial asthma, atopic dermatitis, eczema, anaphylactic shock and the like. The antiallergic agent of the present invention is effective for the above-mentioned diseases, but is preferably used for anaphylactic shock and food allergy, and is preferably used for food allergy.

さらに本発明の抗アレルギー剤は、ヒスタミンの発生そのものを抑えることができるので、アレルギーの予防に有効である。アレルギーの予防のために投与する場合は、乾燥重量として、上記クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の１日の投与量の１／２〜１／１０程度を長期間投与することも可能である。
例えば、食物アレルギーの場合には、アレルゲン完全除去期間中は毎日食前に服用し、部分解除中も完全解除後も同様に服用し続けるという投与方法が挙げられる。これにより食物アレルギーの主な症状が抑制または軽減される。 Furthermore, since the antiallergic agent of the present invention can suppress the occurrence of histamine itself, it is effective in preventing allergy. When administering for the prevention of allergies, as a dry weight, about 1/2 to 1/10 of the daily dose of the above-mentioned Kurita extract, Debaryomyces hanseni cells and P. citrus extract is administered for a long period of time. It is also possible.
For example, in the case of food allergies, the administration method may be such that it is taken daily before meals during the period of complete allergen removal and continued to be taken in the same manner during and after partial release. This suppresses or reduces the main symptoms of food allergies.

本発明において、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有するアレルギー疾患の予防または治療剤も本発明の別の態様である。
有効成分およびその含量、疾患の定義等は上述と同様である。 In the present invention, a prophylactic or therapeutic agent for allergic diseases containing at least one selected from the group consisting of Kuritake extract, Debaryomyces hanseni cells, and Aspergillus extract as an active ingredient is another aspect of the present invention. .
The active ingredient, its content, the definition of the disease, etc. are the same as described above.

発明の抗アレルギー剤は飼料に添加することができる。飼料としては、愛玩動物用のペットフードや家畜用の飼料などが挙げられる。   The antiallergic agent of the invention can be added to feed. Examples of feed include pet food for pets and feed for livestock.

本発明において、受託番号 ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体も本発明に包含される。
また受託番号 ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体を含有する組成物も本発明に包含される。当該組成物は、上述のように医薬品、医薬部外品および食品として使用することができる。投与量、その他については既述に準ずる。 In the present invention, yeast cells belonging to the genus Devalyomyces having the deposit number NITE P-01951 are also included in the present invention.
A composition containing yeast cells belonging to the genus Devalyomyces having the deposit number NITE P-01951 is also included in the present invention. The composition can be used as a pharmaceutical, a quasi drug and a food as described above. Dosage and others are as described above.

以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

（製造例１）
＜キダチコミカンソウ抽出物の調製法＞
キダチコミカンソウ乾燥物をオスターブレンダーで粉砕し、粉末状とした。７．６gをとり、５０％エタノール水溶液４０mLを加え３０℃にて２０時間振とうした。次いで遠心（２０００g、２分）後、上清を別容器に移し、遠心エバポレーター（SPD２０１０、SpeedVac Systems Thermo-Savant社、ローターRH２６-５０）遠心濃縮後、真空ポンプで乾固させ、抽出物粉末０．３１gを得た。 (Production Example 1)
<Preparation method of the extract of citrus citrus>
The dried dried citrus fruit was pulverized with an oster blender to obtain a powder. 7.6 g was taken, 40 mL of 50% aqueous ethanol was added, and the mixture was shaken at 30 ° C. for 20 hours. Then, after centrifugation (2000 g, 2 minutes), the supernatant was transferred to another container, concentrated by centrifugation using a centrifugal evaporator (SPD2010, SpeedVac Systems Thermo-Savant, rotor RH26-50), and then dried to dryness with a vacuum pump. .31 g was obtained.

（製造例２）
＜クリタケ抽出物の調製法＞
クリタケ乾燥物をオスターブレンダーで粉砕し、粉末状とした。１．５gをとり、５０％エタノール水溶液３５mLを加え３０℃にて２０時間振とうした。次いで遠心（２０００g、２分）後、上清を別容器に移し、遠心エバポレーター（SPD２０１０、SpeedVac Systems Thermo-Savant社、ローターRH２６-５０）遠心濃縮後、真空ポンプで乾固させ、抽出物粉末０．２９gを得た。 (Production Example 2)
<Method for preparing Kurita extract>
The dried Kurita mushroom was pulverized with an oster blender to obtain a powder. 1.5 g was taken, 35 mL of 50% ethanol aqueous solution was added and shaken at 30 ° C. for 20 hours. Then, after centrifugation (2000 g, 2 minutes), the supernatant was transferred to another container, concentrated by centrifugation using a centrifugal evaporator (SPD2010, SpeedVac Systems Thermo-Savant, rotor RH26-50), and then dried to dryness with a vacuum pump. .29 g was obtained.

（製造例３）
＜デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルの調製法＞
デバリョマイセス・ハンセニ（Danish blue cheese 由来）株（受託番号 ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１）を、YM寒天プレート（YMブロス（Becton, Dickinson and Company社）に寒天１.５％を添加し、オートクレーブ滅菌後、固化した）に塗布し、２８℃で、２４時間培養した。プレート上に増殖した菌体を、YMブロス５０ｍLの入った坂口フラスコに１白金耳植菌し、２８℃で４８時間、振とう培養した。次いでこの培養液を、YPD（グルコース２％、ペプトン２％、酵母エキス１％）ブロス５０ｍLの入った坂口フラスコ１７０本に、それぞれ０．５ｍLずつ添加し、３０℃で７２時間振とう培養した。８．５L分の培養液を遠心分離し（１２,０００ｇ、15分）、沈殿した菌体を回収し、蒸留水で３回洗浄し、７０℃で３０分間、加熱処理した。次いで遠心分離し（１２,０００ｇ、１０分、８℃）、沈殿した菌体を回収し凍結乾燥し、乳鉢で粉末化し１２ｇの乾燥菌体サンプルを得、これを被験サンプルとした。 (Production Example 3)
<Preparation method of Devalyomyces hanseni cell sample>
Debaryomyces Hanseni (from Danish blue cheese) strain (Accession No. NITE P-01951) was added to a YM agar plate (YM broth (Becton, Dickinson and Company)) with 1.5% agar and solidified after autoclaving. ) And cultured at 28 ° C. for 24 hours. The cells grown on the plate were inoculated with 1 platinum ear in a Sakaguchi flask containing 50 mL of YM broth, and cultured with shaking at 28 ° C. for 48 hours. Next, 0.5 mL each of this culture solution was added to 170 Sakaguchi flasks containing 50 mL of YPD (glucose 2%, peptone 2%, yeast extract 1%) broth, and cultured with shaking at 30 ° C. for 72 hours. The culture solution for 8.5 L was centrifuged (12,000 g, 15 minutes), the precipitated cells were collected, washed 3 times with distilled water, and heat-treated at 70 ° C. for 30 minutes. Subsequently, the mixture was centrifuged (12,000 g, 10 minutes, 8 ° C.), the precipitated cells were collected, freeze-dried, and powdered in a mortar to obtain a 12-g dry cell sample, which was used as a test sample.

（実施例１）
＜ヒスタミン遊離抑制活性測定法＞
製造例１〜３によって得たサンプルのヒスタミン遊離抑制活性を測定した。
Ｉ型アレルギーのメカニズムは、マスト細胞のFcεRＩに結合したIgE抗体にアレルゲンが架橋結合するとマスト細胞が活性化されてヒスタミン等のメディエーターが遊離し、それが好酸球を遊走し、炎症が起きる。細胞株は通常用いられているラット好塩基球性白血病細胞（RBL−２H３細胞）株を用いた。細胞内のヒスタミンが遊離されると、同時にβ−ヘキソサミニダーゼが遊離される。このβ−ヘキソサミニダーゼの放出を指標として、その抑制活性（脱顆粒抑制活性）を以下の方法で測定した。 Example 1
<Measurement method of histamine release inhibitory activity>
The histamine release inhibitory activity of the samples obtained in Production Examples 1 to 3 was measured.
The mechanism of type I allergy is that when an allergen is cross-linked to an IgE antibody bound to FcεRI of mast cells, the mast cells are activated and mediators such as histamine are released, which migrates eosinophils and causes inflammation. As a cell line, a commonly used rat basophilic leukemia cell (RBL-2H3 cell) line was used. When intracellular histamine is released, β-hexosaminidase is released at the same time. Using the release of β-hexosaminidase as an index, its inhibitory activity (degranulation inhibitory activity) was measured by the following method.

デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルはマスト細胞がIgE抗体との結合を阻害する等でヒスタミンが遊離しなくなると考えられているので、RBL-2H3細胞にIgE抗体を添加する前に被験サンプルを添加した。一方クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物の場合はマスト細胞にIgE抗体が結合した後に、それが抗原と結合する際のヒスタミン遊離を抑制すると考えられるので、RBL-2H3細胞にIgE抗体を添加した後に被験サンプルを添加した。   Since the Debaryomyces hanseni cell sample is thought to prevent histamine from being released due to mast cells inhibiting the binding with IgE antibody, the test sample was added before adding IgE antibody to RBL-2H3 cells. On the other hand, in the case of Kuritake extract and P. citrus extract, after binding IgE antibody to mast cells, it is thought that it suppresses histamine release when binding to antigen, so after adding IgE antibody to RBL-2H3 cells A test sample was added.

デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルは１００ｍｇ／ｍＬとなるようにMT buffer（Modified Tyrode buffer、１３７ｍｍｏｌ/L NaCl、２．７ｍｍｏｌ/L KCl、１．８ｍｍｏｌ/L CaCl₂、１ｍｍｏｌ/L MgCl₂、５．６ｍｍｏｌ/L glucose、２０ｍｍｏｌ/L HEPES、０．１% BSA、pH６．８)を添加し、懸濁液を調製した。必要に応じてMT bufferで希釈した。
クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物は１５．０ｍｇを秤量し、MT buffer ０．３ｍＬに溶解した。メンブランフィルター（孔径：０．４５μm）でろ過し、５０ｍｇ/ｍLとした。必要に応じてMT bufferで希釈した。 MT buffer (Modified Tyrode buffer, 137 mmol / L NaCl, 2.7 mmol / L KCl, 1.8 mmol / L CaCl ₂ , 1 mmol / L MgCl ₂ , 5.6 mmol so that the cell sample of Debaryomyces hanseni is 100 mg / mL. / L glucose, 20 mmol / L HEPES, 0.1% BSA, pH 6.8) was added to prepare a suspension. Diluted with MT buffer as needed.
15.0 mg of Kurita mushroom extract and Apricot citrus extract was weighed and dissolved in 0.3 mL of MT buffer. It filtered with the membrane filter (pore diameter: 0.45 micrometer), and was 50 mg / mL. Diluted with MT buffer as needed.

陽性対照物質として、wortmannin(シグマアルドリッチジャパン)をMT bufferにて、１μMに希釈して使用した。   As a positive control substance, wortmannin (Sigma Aldrich Japan) was diluted to 1 μM with MT buffer and used.

凍結保存されたRBL-2H3細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンクJCRB0023）を解凍し、培養液（１０%FBS含有E-MEM培地）に懸濁した。細胞懸濁液を遠心分離し、沈渣を培養液に懸濁後、培養ディッシュに播種した。細胞がコンフルエントになる前に、D-PBS及びトリプシン溶液を用いて、細胞をディッシュから剥離して継代培養した。同様の操作を測定終了まで繰り返した。継代培養時、９６well plateディッシュに測定用のRBL-2H3細胞を２．５×１０⁴ cells/wellで播種した（２５×１０⁴ cells/ｍL、１００μL/well）。 The cryopreserved RBL-2H3 cells (Human Science Research Resource Bank JCRB0023) were thawed and suspended in a culture solution (E-MEM medium containing 10% FBS). The cell suspension was centrifuged, and the sediment was suspended in a culture solution and then seeded on a culture dish. Before the cells became confluent, the cells were detached from the dish and subcultured using D-PBS and a trypsin solution. The same operation was repeated until the measurement was completed. At the time of subculture, 96-well plate dishes were seeded with RBL-2H3 cells for measurement at 2.5 × 10 ⁴ cells / well (25 × 10 ⁴ cells / mL, 100 μL / well).

（試験例1）
被験サンプルがデバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルの場合の培養上清分取方法は、Microbiol Immunol 2010; 54: 54-57（Bifidobacterium suppresses IgE-mediated degranulation of rat basophilic leukemia (RBL-2H3)cells. Gaku Harata et al）に従って行った。
細胞播種翌日に培養液を捨て、被験サンプルを２５μL/well添加し、３７℃で１０分間培養した（３７℃、５% CO₂、水蒸気飽和状態）。被験サンプル添加１０分後、MT bufferを２２５ μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。MT buffer添加３時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。抗DNP-IgE抗体（５０nｇ/ｍL、Sigma社）を１００μL添加し、３７℃で２時間培養した。なお、被験サンプルを含まないMT bufferを添加し、同様に反応させたものをコントロールとした。抗DNP-IgE抗体添加２時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。MT buffer及びDNP-HSA（DNP-labeled human serum albumin、１００ｎｇ/ｍL、Sigma社)をそれぞれ５０μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。DNP-HSA添加3時間後、１０分間氷冷し、培養上清全量を空のwellに分取した。 (Test Example 1)
When the test sample is a Debaryomyces hanseni cell sample, the culture supernatant fractionation method is Microbiol Immunol 2010; 54: 54-57 (Bifidobacterium suppresses IgE-mediated degranulation of rat basophilic leukemia (RBL-2H3) cells. Gaku Harata et al).
On the day after cell seeding, the culture solution was discarded, the test sample was added at 25 μL / well, and cultured at 37 ° C. for 10 minutes (37 ° C., 5% CO ₂ , water vapor saturation state). Ten minutes after the addition of the test sample, 225 μL / well of MT buffer was added and cultured at 37 ° C. for 3 hours. Three hours after the addition of MT buffer, the well was emptied by washing once with MT buffer (100 μL / well). 100 μL of anti-DNP-IgE antibody (50 ng / mL, Sigma) was added and cultured at 37 ° C. for 2 hours. In addition, what added MT buffer which does not contain a test sample and made it react similarly was used as control. Two hours after addition of the anti-DNP-IgE antibody, the well was emptied by washing once with MT buffer (100 μL / well). MT buffer and DNP-HSA (DNP-labeled human serum albumin, 100 ng / mL, Sigma) were each added at 50 μL / well and cultured at 37 ° C. for 3 hours. Three hours after addition of DNP-HSA, the mixture was ice-cooled for 10 minutes, and the whole culture supernatant was separated into empty wells.

（試験例2）
被験サンプルがクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物の場合の培養上清分取方法は、日本食品科学工学会誌、 Vol. 55(2008)、 No. 11、 P535-540（RBL-2H3細胞を用いた食品成分の脱顆粒抑制作用簡易スクリーニング法 堀籠 悟ほか）に従って行った。
細胞播種翌日に培養液を捨て、抗DNP-IgE抗体（５０ｎｇ/ｍL、Sigma社）を１００μL添加し、３７℃で２時間培養した。抗DNP-IgE抗体添加２時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。被験サンプルを５０μL/well添加し、３７℃で１０分間培養した。なお、被験サンプルを含まないMT bufferを添加し、同様に反応させたものをコントロールとした。また、細胞を播種していないwellに、上記と同様な操作を行い、被験サンプルによる吸光度への影響を評価するためのブランクを作成した。被験サンプル添加１０分後、DNP-HSA（１００ｎｇ/ｍL、Sigma社）を５０μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。DNP-HSA添加３時間後、１０分間氷冷し、培養上清全量を空のwellに分取した。 (Test Example 2)
The culture supernatant fractionation method when the test sample is Kuritake extract or Kichimachikansou extract was used in Japan Food Science and Technology Society, Vol. 55 (2008), No. 11, P535-540 (RBL-2H3 cells were used. This was carried out according to a simple screening method for suppressing degranulation of food ingredients.
The culture solution was discarded the day after cell seeding, 100 μL of anti-DNP-IgE antibody (50 ng / mL, Sigma) was added, and the mixture was cultured at 37 ° C. for 2 hours. Two hours after addition of the anti-DNP-IgE antibody, the well was emptied by washing once with MT buffer (100 μL / well). A test sample was added at 50 μL / well and cultured at 37 ° C. for 10 minutes. In addition, what added MT buffer which does not contain a test sample and made it react similarly was used as control. Moreover, the same operation as the above was performed to the well which has not seed | inoculated the cell, and the blank for evaluating the influence on the light absorbency by a test sample was created. Ten minutes after the addition of the test sample, 50 μL / well of DNP-HSA (100 ng / mL, Sigma) was added, followed by culturing at 37 ° C. for 3 hours. Three hours after addition of DNP-HSA, the mixture was ice-cooled for 10 minutes, and the whole culture supernatant was fractionated into empty wells.

培養上清分取後、Lysis Buffer （Promega社、Passive Lysis ５×bufferをMT bufferで５倍希釈した）を１００μL/well添加し、室温で１０分間反応させた。１０分間反応後、培養上清及び細胞溶解液を３７℃で５分間加温した。培養上清及び細胞溶解液を加温後、基質溶液｛4-Nitrophenyl N-Acetyl-β-D-glucosaminide 東京化成工業株式会社、１００ｍｍｏｌ/Lクエン酸緩衝液（pH４．５）で３．３ｍｍｏｌ/Lに調製した｝を５０μL/well添加し、３７℃で２５分間反応させた。次いでGlycine buffer（２ｍｏｌ/L Glycine、ｐＨ１０．４）を５０μL/well添加し、反応を停止した。反応停止後、４０５nm（参照波長：６５０nm）の吸光度をプレートリーダーで測定した。   After separation of the culture supernatant, Lysis Buffer (Promega, Passive Lysis 5 × buffer diluted 5-fold with MT buffer) was added at 100 μL / well and allowed to react at room temperature for 10 minutes. After reacting for 10 minutes, the culture supernatant and cell lysate were warmed at 37 ° C. for 5 minutes. After warming the culture supernatant and cell lysate, the substrate solution {4-Nitrophenyl N-Acetyl-β-D-glucosaminide, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 3.3 mmol / L with 100 mmol / L citrate buffer (pH 4.5) L prepared} was added at 50 μL / well and reacted at 37 ° C. for 25 minutes. Next, 50 μL / well of Glycine buffer (2 mol / L Glycine, pH 10.4) was added to stop the reaction. After stopping the reaction, the absorbance at 405 nm (reference wavelength: 650 nm) was measured with a plate reader.

＜β−ヘキソサミニダーゼの遊離率＞
以下の式によりβ−ヘキソサミニダーゼの遊離率を求め、コントロールの遊離率を100%として、被験サンプル及び陽性対照のβ−ヘキソサミニダーゼの相対遊離率を計算した。
β−ヘキソサミニダーゼ遊離率（％）＝｛（培養上清の吸光度A）／（A＋細胞溶解液の吸光度B）｝×１００ <Releasing rate of β-hexosaminidase>
The release rate of β-hexosaminidase was determined by the following formula, and the release rate of β-hexosaminidase of the test sample and the positive control was calculated with the release rate of the control as 100%.
β-hexosaminidase release rate (%) = {(absorbance A of culture supernatant) / (A + absorbance B of cell lysate)} × 100

試験例1のデバリョマイセス・ハンセニ菌体アッセイに関しては、
A＝培養上清の吸光度
B＝細胞溶解液の吸光度
とした。 For Devalyomyces Hanseni cell assay of Test Example 1,
A = absorbance of culture supernatant
B = absorbance of cell lysate.

試験例２のクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物のアッセイ時の吸光度については、以下のようにA及びBを求めた。
A＝培養上清の吸光度 − 被験サンプル添加のみwell上清の吸光度(細胞なし)
B＝細胞溶解液の吸光度 − 被験サンプル添加のみwell細胞溶解液の吸光度(細胞なし) About the light absorbency at the time of the assay of the Kuritake extract of the test example 2 and a citrus citrus extract, A and B were calculated | required as follows.
A = Absorbance of culture supernatant-Absorbance of well supernatant (no cells) for test sample addition only
B = Absorbance of cell lysate-Test sample addition only Absorbance of well cell lysate (no cells)

コントロールのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率を１００%とし、陽性対照物質及び被験サンプルの相対遊離率を図１及び図２に示した。   The control β-hexosaminidase release rate was 100%, and the relative release rates of the positive control substance and the test sample are shown in FIG. 1 and FIG.

図１に示す通り、試験例1での相対遊離率は陽性対照物質のwortmannin（１μM）が79%であったのに対し、デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は、その濃度が１０〜１００ｍｇ/ｍLの濃度において、９０%（１０ｍｇ/ｍL）〜５７%（１００ｍｇ/ｍL）であった。濃度依存的に強い活性を示した。   As shown in FIG. 1, the relative release rate in Test Example 1 was 79% for the positive control substance wortmannin (1 μM), whereas the β-hexosaminidase release rate of the Devalyomyces hanseni cell sample was The concentration was 90% (10 mg / mL) to 57% (100 mg / mL) at a concentration of 10 to 100 mg / mL. Strong activity was shown in a concentration-dependent manner.

図２に示す通り、試験例2での相対遊離率は陽性対照物質のwortmannin（１μM）が３１．２%であったのに対し、各サンプルのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は、クリタケ抽出物５ｍｇ/ｍLにおいて２８%と、陽性対象物質よりも強い活性を示した。キダチコミカンソウ抽出物においては０．５ｍｇ/ｍLでも強い活性を示し、５及び５０ｍｇ/ｍLのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は０であった。   As shown in FIG. 2, the relative release rate in Test Example 2 was 31.2% for the positive control substance wortmannin (1 μM), whereas the β-hexosaminidase release rate of each sample was extracted from Kuritatake. The activity was 28% at 5 mg / mL of the product, which was stronger than the positive target substance. The extract of P. citrus fruit showed strong activity even at 0.5 mg / mL, and the β-hexosaminidase release rate at 5 and 50 mg / mL was zero.

（実施例２）
＜実験動物を用いた抗アレルギー活性評価＞
オボアルブミン感作マウスを用いて即時型アレルギー抑制試験を実施した。試験方法は概ね特開２０００−２３９１７５号公報に従った。 (Example 2)
<Evaluation of antiallergic activity using experimental animals>
An immediate allergy suppression test was performed using ovalbumin-sensitized mice. The test method generally followed Japanese Patent Application Laid-Open No. 2000-239175.

＜試料の調製＞
・アレルゲン原液
OVA（Albumin from chicken egg white、 A7641、 SIGMA）を生理食塩水に２．０ｍｇ/ｍＬの濃度で溶解し、０．４５μｍの滅菌済みフィルターで濾過し、アレルゲン原液とした。
・感作用アレルゲンエマルジョン
アレルゲン原液とフロイント不完全アジュバント（コスモバイオ株式会社）を１：１の体積比で混合して乳化させ、感作用アレルゲンエマルジョンとした。
・誘発用アレルゲン溶液
アレルゲン原液を生理食塩水で２０倍に希釈して、誘発用アレルゲン溶液とした。
・被験サンプル投与液
各被験サンプルは、１８６ｍｇ量り取り蒸留水に溶解して１．２４ｍＬとすることで経口投与液を調製した。これらの調製は投与日に用時調製した。
・ヒドロコルチゾン投与液
ポジティブコントロールとしてヒドロコルチゾンを用いた。ヒドロコルチゾン（和光純薬株式会社）は、５ｍｇ量り取り蒸留水に懸濁して５ｍＬとすることで経口投与液を調製した。これらの調製は投与日に用時調製した。 <Preparation of sample>
・ Allergen stock solution
OVA (Albumin from chicken egg white, A7641, SIGMA) was dissolved in physiological saline at a concentration of 2.0 mg / mL, and filtered through a 0.45 μm sterilized filter to obtain an allergen stock solution.
-Sensitive allergen emulsion Allergen stock solution and Freund's incomplete adjuvant (Cosmo Bio Inc.) were mixed and emulsified at a volume ratio of 1: 1 to give a sensitive allergen emulsion.
-Inducing allergen solution The allergen stock solution was diluted 20-fold with physiological saline to obtain an inducing allergen solution.
Test sample administration solution Each test sample was prepared by weighing 186 mg and dissolving in distilled water to make 1.24 mL. These preparations were prepared on the day of administration.
-Hydrocortisone administration liquid Hydrocortisone was used as a positive control. Hydrocortisone (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was prepared by weighing 5 mg and suspending it in distilled water to make 5 mL. These preparations were prepared on the day of administration.

＜アレルギー抑制評価試験＞
実験動物はICR系マウス雄５週齢(日本SLC株式会社)を用いた。
１週間の馴化飼育後のマウス体重に基づき、各群の平均体重が均等になるように体重別層化法により、１群６匹の７群に群分けした（平均体重約３３．６ｇ）。
マウス下腹部の腹腔内に、感作用アレルゲンエマルジョンを１匹当たり５０μＬ注射し、オボアルブミン感作を行なった。感作日から２０日間、各被験サンプル投与液を０．２ｍＬ/匹の用量（３０ｍｇ分、混合サンプルの場合は各１５ｍｇ）で１日１回毎日反復強制経口投与した。コントロール群には蒸留水を０．２ｍＬ/匹投与した。なお、感作日は感作の６０分前、誘発日は誘発の６０分前に投与した。各群のマウスの尾静脈にエバンスブルー溶液を１匹当たり１００μＬ投与した。次いでイソフルラン麻酔下で速やかに腹部の皮膚を剥離し腹壁を露出させ、エバンスブルー溶液の投与から６分後に、腹壁内に誘発用アレルゲン溶液５０μＬを投与した。腹壁内注射から７分後にマウスを頚椎脱臼により屠殺し、色素滲出部位を含んだ腹壁を切り取り、色素滲出部位の長径と短径を計測し、面積を計算した。各群の色素滲出面積データについて、平均値と標準誤差（S.E.M.）を算出し、Studentのt-検定を用いて、２群間の平均値の差を検定した。いずれの解析についても検定は両側検定を行い、Ｐ＜０．０５の場合を有意と判定した。 <Allergy suppression evaluation test>
As experimental animals, ICR mouse male 5 weeks old (Japan SLC Co., Ltd.) was used.
Based on the mouse weight after acclimation breeding for 1 week, the mice were divided into 7 groups of 6 animals per group (average body weight of about 33.6 g) so that the average body weight of each group became equal.
50 μL of the sensitizing allergen emulsion per mouse was injected into the abdominal cavity of the lower abdomen of the mouse to perform ovalbumin sensitization. For 20 days from the sensitization day, each test sample administration solution was repeatedly orally administered by gavage once a day at a dose of 0.2 mL / animal (30 mg, 15 mg each for mixed samples). Distilled water was administered to the control group at 0.2 mL / animal. The sensitization day was administered 60 minutes before the sensitization, and the induction day was administered 60 minutes before the induction. 100 μL of Evans Blue solution was administered per mouse to the tail vein of each group of mice. Next, under isoflurane anesthesia, the skin of the abdomen was quickly peeled to expose the abdominal wall, and 6 minutes after administration of the Evans Blue solution, 50 μL of the allergen solution for induction was administered into the abdominal wall. Seven minutes after intra-abdominal injection, the mice were sacrificed by cervical dislocation, the abdominal wall including the pigment exudation site was cut out, the major axis and minor axis of the pigment exudation site were measured, and the area was calculated. For the pigment exudation area data of each group, the average value and standard error (SEM) were calculated, and the difference in the average value between the two groups was tested using Student's t-test. For both analyses, the two-sided test was performed, and a case where P <0.05 was determined to be significant.

その結果、図３に示す通り、コントロール群と比較して、クリタケ抽出物投与群、クリタケ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、キダチコミカンソウ抽出物投与群、キダチコミカンソウ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、いずれの被験物質も色素滲出を抑制する傾向にあったが、特にキダチコミカンソウ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群（ｐ＝０．０１７３）、デバリョマイセス・ハンセニ菌体単独投与群（ｐ＝０．０３２４）において有意な色素滲出面積の低値が認められた。   As a result, as shown in FIG. 3, compared with the control group, Kurita extract extract administration group, Kuritatake extract + Debaryomyces hanseni cell administration group, Aspergillus oryzae extract administration group, Aspergillus oryzae extract + Debaryomyces hanseni fungus Body administration group, Debaryomyces hanseni fungus body administration group, all the test substances tended to suppress pigment exudation, but particularly, Kidney beetle extract + Debaryomyces hanseni fungus body administration group (p = 0.173), Debaryomyces -A significant low value of pigment exudation area was observed in the group administered with Hanseni cells alone (p = 0.0324).

以上の結果からクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体はオボアルブミン感作マウスにおいて即時型アレルギー反応を抑制することが明らかとなった。   From the above results, it was clarified that Kurita mushroom extract, Kichitachikansou extract, and Debaryomyces hanseni cells suppress immediate allergic reaction in ovalbumin-sensitized mice.

本発明のクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物からなる抗アレルギー剤はヒスタミン遊離を抑制し、即時型アレルギー反応を抑制し、Ｉ型アレルギー性疾患の食物アレルギー、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等の症状の改善、治療および予防に適用できる。   The anti-allergic agent comprising the Kurita extract of the present invention, Debaryomyces hanseni cells, and Kichitachikansou extract suppresses histamine release, suppresses immediate allergic reaction, food allergy of type I allergic disease, hay fever, bronchial It can be applied to the improvement, treatment and prevention of symptoms such as asthma and atopic dermatitis.

Claims (8)

クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する抗アレルギー剤。   An antiallergic agent comprising, as an active ingredient, at least one selected from the group consisting of Kuritake extract, Debaryomyces hansenii cells, and Kichimachikansou extract. 有効成分がクリタケ抽出物またはデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、請求項１に記載の抗アレルギー剤。   The antiallergic agent according to claim 1, wherein the active ingredient is Kurita extract or Debaryomyces hansenii. 有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、請求項２に記載の抗アレルギー剤。   The antiallergic agent according to claim 2, wherein the active ingredient is a Debaryomyces hansenii cell. 有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物である、請求項１に記載の抗アレルギー剤。   The antiallergic agent according to claim 1, wherein the active ingredient is a cell of Debaryomyces hansenii and an extract of citrus citrus fruit. デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体が、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。   The cell body of Debaryomyces hansenii (Debaryomyces hansenii) is at least one selected from the group consisting of live cells, dead cells and treated cells of the cells. The antiallergic agent described. Ｉ型アレルギー用である請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。   The antiallergic agent according to any one of claims 1 to 5, which is used for type I allergy. 受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体。   A yeast cell belonging to the genus Devalyomyces having a deposit number of NITE P-01951. 請求項７に記載の酵母菌体を含有する組成物。   A composition comprising the yeast cell according to claim 7.