JP2016088912A - Ｗ／ｏ／ｗ型エマルション - Google Patents

Abstract

【課題】パッションフルーツの種子抽出物に含まれ、紫外線ダメージ効果やＭＭＰ−２の阻害作用を持つピセアタンノールがｐＨ２．０以下で強酸性領域若しくは５．０以上で不安定であるため、安定化するための新規なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション及びその製造方法の提供。
【解決手段】ピセアタンノール等のポリフェノールを含有する内水相と、内水相を囲繞する油相と、油相を囲繞する外水相と、を含んで構成され、内水相と油相の界面にトリオレイン酸ペンタグリセリル等の第１の両親媒性物質によって形成される第１の閉鎖小胞体が介在し、油相と外水相の外界面に第２の両親媒性物質によって形成される第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子が介在する、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
【選択図】なし

Description

本発明は、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション及びその製造方法に関する。

ピセアタンノールは、スチルベン類の化合物であって、例えば、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）の果物であるパッションフルーツの種子に含まれており、シミ、ソバカス、日焼けなどによる色素沈着の原因となるメラニンの生成を抑制する効果があることが報告されている（特許文献１を参照）。

また、ピセアタンノールは、フトモモ科テンニンカ属（Rhodomyrtus）の常緑低木であるテンニンカやフトモモ科ブラシノキ属（Callistemon）の常緑の木本であるマキバブラシノキ（Callistemon rigidus）にも含まれている。それらの抽出物には、それぞれ紫外線ダメージ回復効果やＭＭＰ-２の阻害作用があり、その有効成分は、抽出物に含まれるピセアタンノールであることが報告されている（特許文献２及び非特許文献１を参照）。

特開２００９−１０２２９８号公報 特開２０１２− ４６４４８号公報

佐々木健郎他、東北薬科大学研究誌、５７、６１−６５（２０１０）

本発明は、新規なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション及びその製造方法を提供することを目的とする。

本発明者等は、ポリフェノール、特にパッションフルーツの種子抽出物に含まれるピセアタンノールは、ｐＨ２．０以下の強酸性域やｐＨ５．０以上のｐＨでは不安定であることを見出した。そして、上記不安定域でのポリフェノールの製剤方法を開発すべく、鋭意努力した結果、ポリフェノールをＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションとすることによって、外水相が上記不安定域のｐＨであっても、ポリフェノールを安定に保持できることを見出し、本発明の完成に至った。

本発明の一実施態様は、ポリフェノールを含有する内水相と、前記内水相を囲繞する油相と、前記油相を囲繞する外水相と、を含んで構成され、前記内水相と前記油相の界面に第１の両親媒性物質によって形成される第１の閉鎖小胞体が介在し、前記油相と前記外水相の界面に第２の両親媒性物質によって形成される第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子が介在する、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションである。前記内水相と外水相のｐＨが異なってもよい。前記内水相が酸性のポリフェノール溶液であってもよい。前記外水相が中性またはアルカリ性の溶液であってもよい。前記第１の両親媒性物質は前記油相中での前記第１の閉鎖小胞体形成能を有してもよい。前記第１および第２の両親媒性物質が、同じまたは異なるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成されてもよい。前記第１の両親媒性物質からなる前記第１の閉鎖小胞体の粒子径が、８ｎｍ以上であるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成されてもよい。前記第１の両親媒性物質が、トリオレイン酸ペンタグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、及び／またはポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルであってもよい。前記ポリフェノールがスチルベンであってもよい。前記スチルベンがピセアタンノールであってもよい。前記ポリフェノールが植物のエキス由来であってもよい。前記エキスがパッションフルーツ種子、テンニンカ、またはマキバブラシノキのエキスであってもよい。

本発明にかかる、他の実施態様は、第１の両親媒性物質で形成された第１の閉鎖小胞体を含有する油性溶液を調製する工程と、ポリフェノールを含有する第１の水性溶液を調製する工程と、第２の両親媒性物質で形成された第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を含有する第２の水性溶液を調製する工程と、前記油性溶液と前記第１の水性溶液とを混合することによって、前記第１の閉鎖小胞体を前記第１の水性溶液からなる内水相と前記内水相を囲繞する前記油性溶液との界面に介在させてＷ／Ｏ型エマルションを形成させる工程と、前記Ｗ／Ｏ型エマルションを前記第２の水性溶液と混合して、前記第２の閉鎖小胞体または前記粒子を、前記油性溶液からなり前記内水相を囲繞する油相と前記第２の水性溶液からなり前記油相を囲繞する外水相との界面に介在させてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを形成させる工程と、を含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法である。前記内水相と外水相のｐＨが異なってもよい。前記内水相が酸性のポリフェノール溶液であってもよい。前記外水相が中性またはアルカリ性の溶液であってもよい。前記第１の両親媒性物質は前記油相中での前記第１の閉鎖小胞体形成能を有してもよい。前記第１および第２の両親媒性物質が、同じまたは異なるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成されてもよい。前記第１の閉鎖小胞体の粒子径が、８ｎｍ以上であってもよい。前記第１の両親媒性物質がトリオレイン酸ペンタグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、及び／またはポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルであってもよい。前記ポリフェノールがスチルベンであってもよい。前記スチルベンがピセアタンノールってもよい。前記ポリフェノールが植物のエキス由来であってもよい。前記エキスがパッションフルーツ種子、テンニンカ、またはマキバブラシノキのエキスであってもよい。

本発明によって、新規なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション及びその製造方法を提供することができるようになった。

本発明の一実施形態における、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの模式図である。 本発明の一実施例において得られたＷ／Ｏ／Ｗエマルションの顕微鏡写真である。 本発明の一実施例において、（Ａ）ピセアタンノール純品溶液、（Ｂ）パッションフルーツ種子エキスを含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション中のピセアタンノール（ＰＩＣ）の安定性を調べた結果を表す図である。 本発明の一実施例において、パッションフルーツ種子エキスを含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション中のスキルプシンＢ（ＳｃｉＢ）の安定性を調べた結果を表す図である。 本発明の一実施例において、パッションフルーツ種子エキスを含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション中のエピカテキンの安定性を調べた結果を表す図である。 本発明の一実施例において、パッションフルーツ種子エキスを含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション中のピセアタンノールの安定性を調べた結果を表す図である。 本発明の一実施例において、ピセアタンノール純品溶液の安定性に対するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの第２の両親媒性物質の影響を調べた結果を表す図である。

本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。

（１）ポリフェノール
ポリフェノールは、分子内に複数のフェノール性ヒドロキシ基を有する化合物の総称であり、植物に含まれるものが多い。本発明によって安定化できるポリフェノールは、限定されないが、特にスチルベン類が好ましい。

ここで、スチルベン類とは、スチルベン骨格を基本とした化合物の総称であり、例えば、スチルベン、ピセアタンノール、スキルプシンＡ、スキルプシンＢ、スキルプシンＣ、ラポンチゲニン、イソラポンチゲニン、プテロスチルベン、レスベラトロール、オキシレスベラトロール、ピセイド、アストリンジン、ラポンチシン、及び、ε-ビニフェリンなどが挙げられる。スチルベン類は、単量体、二量体などの多量体、または、配糖体であっても良い。スチルベン類の分子量は、特に限定されないが、例えば、２０００以下であっても良く、１０００以下であることが好ましく、６００以下であることがより好ましい。

（２）パッションフルーツ種子エキスの製法
上記ポリフェノールは、化学合成品であってもよいが、植物のエキス由来であってもよい。

植物のエキスの具体的な製造方法として、公知の方法を用いることができ、例えば、植物を、乾燥した後に、破砕、粉砕、または、切断などによって種子分解物を得、溶媒を用いて抽出し、残渣を除去することによって抽出液を得ることができる。この抽出液をそのまま用いてもよく、この抽出液から様々な方法でポリフェノールを精製して得られた様々な純度の抽出液を用いてもよいが、さらに、抽出液から溶媒を除去することによって、抽出物を得ることができる。抽出物の形状は、特に限定されず、例えば粉体などの固体状、アモルファス状、または、オイル状であっても良い。このように、植物から抽出物を得る段階のいずれのものも、本発明の植物のエキスとして使用することができる。

抽出に用いる溶媒の種類は、当業者であれば適切に選択することができるが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−プロパノール、１，４−ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されないが、例えば水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、水とエタノールとの体積比は、１：９９〜９９：１であっても良く、３：９７〜８０：２０であることが好ましく、５：９５〜５０：５０であることがより好ましく、１０：９０〜４０：６０であることが特に好ましい。

溶媒として、水、または、水との混合溶媒を用いる場合には、熱水、または、熱水との混合溶媒であること、あるいは、水、または、水と溶媒を混合した後に加熱することが好ましい。水、または、水との混合溶媒は塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良いが、酸性であることが好ましく、ｐＨ６以下の酸性であることがより好ましく、ｐＨ２．５〜ｐＨ５の酸性であることがさらに好ましい。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。

抽出液からポリフェノールを純化する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、イオン交換樹脂や合成吸着樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーなどがよく知られている。

抽出液から溶媒を除去する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、減圧留去、凍結乾燥、または、スプレードライ（噴霧乾燥）であっても良いが、凍結乾燥、または、スプレードライであることが好ましく、スプレードライであることがより好ましい。

ここで、植物の種類は、ポリフェノールを含む植物であれば特に限定されず、パッションフルーツ（例えば、Passiflora edulis、Passiflora alata、Passiflora amethystine、Passiflora antioquiensis、Passiflora biflora、Passiflora buonapartea、Passiflora capsularis、Passiflora cearensis、Passiflora coccinea、Passiflora cochinchinesis、Passiflora filamentosa、Passiflora herbertiana、Passiflora laurifolia、Passiflora ligularis、Passiflora lunata、Passiflora lutea、Passiflora maliformis、Passiflora mixta、Passiflora mucronata、Passiflora mollissima、Passiflora nibiba、Passiflora organensis、Passiflora pallida、Passiflora parahypensis、Passiflora pedeta、Passiflora pinnatistipula、Passiflora popenovii、Passiflora quadrangularis、Passiflora riparia、Passiflora rubra、Passiflora serrate、Passiflora tiliaefolia、Passiflora tripartite、Passiflora villosa、Passiflora warmingiiなど）、テンニンカ（例えば、Rhodomyrtus tomentosaなど）、ブラシノキ（例えば、マキバブラシノキCallistemon speciosus、Callistemon rigidusなど）、カラガナチベチカ（Caragana tibetica）（例えば茎）、イタドリ（Fallopia japonica）（例えば根）、落花生（Arachis hypogaea）、ブドウ（Vitaceae）（例えば果実）、ブルーベリー（Cyanococcus）（例えば果実）、ディアベリー（Vaccinium stamineum）（例えば果実）などが挙げられるが、ピセアタンノールを高濃度で含むことが知られている、パッションフルーツ、テンニンカ、または、ブラシノキであることが好ましい。抽出するのは、植物全体のうち、どの部分であっても良く、例えば、果実、花、種子、葉、枝、樹皮、幹、茎、または、根であっても良いが、パッションフルーツを用いる場合は種子であることが好ましく、テンニンカである場合には果実であることが好ましく、ブラシノキである場合には茎であることが好ましい。

（３）ポリフェノールを含有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション
本発明では、ポリフェノールの製剤化に、三相乳化法（特許第３８５５２０３号「乳化分散剤及びこれを用いた乳化分散方法並びに乳化物」、特許第３８５８２３０号「混合エマルション組成物」等参照）で得られるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを用いる。これは、両親媒性化合物をナノ粒子として用いて、ファンデルワールス力によって油性基材表面に付着させ、油/両親媒性化合物/水系の三相を形成させることで乳化を行う方法である。

本発明のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションは、ポリフェノールを含有する内水相と、内水相を囲繞する油相と、油相を囲繞する外水相と、を含み、内水相と油相の界面に第１の両親媒性物質によって形成される第１の閉鎖小胞体が介在し、油相と外水相の界面に第２の両親媒性物質によって形成される第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子が介在するように構成される。ここで、閉鎖小胞体とは、両親媒性物質が自発的に形成するベシクルのことを言う。

ポリフェノールを含有する内水相は、例えば、精製ポリフェノールをバッファーに溶解させた水溶液や植物エキスなどのポリフェノール溶液など、上述したポリフェノールを含む水性溶液であれば限定されない。ポリフェノールを含有する内水相のｐＨは酸性であってもよく、ｐＨ６以下であってもよく、あるいはｐＨ５以下であってもよい。また、ｐＨ１以上であってもよく、ｐＨ３．５以上であってもよい。なお、水性溶液とは、水そのものまたは水が主たる成分または溶媒であって油と相分離する任意の溶液をいう。

第１の閉鎖小胞体を形成する第１の両親媒性物質は、油性溶液中での閉鎖小胞体形成能を有するものが好ましく、具体的には、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル等の脂肪酸エステルや、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン等のリン脂質が例示できる。特に、トリオレイン酸ペンタグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルが好ましい。

油相を構成する油性溶液は、大豆油、ヤシ油、コメ油、コーン油、パーム油、紅花油、菜種油（例、キャノーラ油等）、オリーブ油等の植物性油脂；炭素数６〜１０の飽和脂肪酸（例えば、カプリン酸、カプリル酸等）を主要な構成成分とした脂肪酸とグリセリンとから構成される中鎖飽和脂肪酸トリグリセリド（以下、「ＭＣＴ」ともいう。）；牛脂、豚脂、鶏脂、及び魚油等の動物油脂類；オレイン酸などの脂肪酸；並びにこれらの混合物等が例示されるが、これらに限定されず、油そのものまたは油が主たる成分または溶媒であって、水と相分離する任意の溶液をいう。

第２の閉鎖小胞体を形成する第２の両親媒性物質は、第１の両親媒性物質と同じであっても異なっていてもよく、第１の両親媒性物質として例示されたものと同じものを利用できる。また、水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子は、デンプンや寒天などの多糖類の粒子が例示できる。

外水相は水性溶液であれば特に限定されず、水であってもバッファーであってもよく、当業者が適宜好適なものを選択できる。外水相のｐＨも特に限定されず、アルカリ性、中性、酸性のいずれであってもよく、ｐＨ８以上、あるいはｐＨ１０以上のアルカリ性、ｐＨ６−８程度の中性、ｐＨ６以下、あるいはｐＨ４以下の酸性のいずれであってもよい。また、ｐＨの上限については、ｐＨ１２以下であることが好ましく、ｐＨ１１以下であることがより好ましく、ｐＨの下限については、ｐＨ１以上であることが好ましく、ｐＨ３以上であることがより好ましい。外水相のｐＨは、内水相のｐＨと同じでも異なっていてもよいが、特にｐＨ２．０以下やｐＨ５．０以上というピセアタンノールが不安定であるｐＨであってもかまわない。

このように、ポリフェノールをＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの内水相に含有させることによって、外水相のｐＨがアルカリ性や中性あるいは強酸性であっても、ポリフェノールを安定して保存することが可能になる。

（４）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製法
ポリフェノールを含有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを製造するために、まず、第１の両親媒性物質で形成された第１の閉鎖小胞体を含有する油性溶液と、ポリフェノールを含有する第１の水性溶液と、第２の両親媒性物質で形成された第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を含有する第２の水性溶液を調製する。

油性溶液中の第１の両親媒性物質の濃度は特に限定されないが、通常０．００５〜１５重量％、好ましくは０．１〜１０重量％、より好ましくは０．５〜５重量％である。油性溶液に第１の両親媒性物質を混合して撹拌後、静置することによって、第１の閉鎖小胞体を含有する油性溶液を調製することができる。第１の閉鎖小胞体は、油性溶液中に分散した状態で維持されていることが好ましい。第１の閉鎖小胞体の粒子径は、通常は分子構造に起因して８ｎｍ以上になるが、特に限定されない。

ポリフェノールを含有する第１の水性溶液は、（３）に記載した内水相に適したものであれば限定されない。

第２の水性溶液中の第２の両親媒性物質または水酸基を有する重縮合ポリマーの濃度は特に限定されないが、通常０．００５〜１５重量％、好ましくは０．１〜１０重量％、より好ましくは０．５〜５重量％である。第２の水性溶液に第２の両親媒性物質または水酸基を有する重縮合ポリマーを混合して撹拌後、静置することによって、第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を含有する第２の水性溶液を調製することができる。第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子は、第２の水性溶液中に分散し、維持されていることが好ましい。

第１の閉鎖小胞体を含有する油性溶液と、ポリフェノールを含有する第１の水性溶液とを混合することによって、第１の閉鎖小胞体を第１の水性溶液からなる内水相と内水相を囲繞する油性溶液との界面に介在させて、Ｗ／Ｏ型エマルションを形成させる。

こうして得られたＷ／Ｏ型エマルションを、第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を含む第２の水溶液と混合して、第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を油性溶液からなり内水相を囲繞する油相と油相を囲繞する第２の水性溶液からなる外水相との界面に介在させてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを形成させる。図１にＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの模式図を示す。

この後、外水相は、希釈したり置換したりして、適宜好ましい水性溶液にすることができる。この水性溶液の条件は、第２の水性溶液と同様で、特に限定されない。

さらに、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションをカプセルにすることで、薬品（医薬及び試薬を含む）、化粧品、食品など、様々な用途に用いることができるようになる。

［実施例１]
（１）サンプル調製
まず、内水相となるｐＨ４．５のピセアタンノール（ポリフェノール）純品溶液（図ではPICと表記）、およびパッションフルーツ種子エキス（ポリフェノール含有）、を準備した。ピセアタンノール純品はパッションフルーツ種子エキスからの純度９８％以上の精製物を使用し、これをｐＨ４．５の１０ｍＭ酢酸バッファーで０．５ｍｇ／ｍＬになるよう室温で溶解した。一方、パッションフルーツ種子エキスは、パッションフルーツの種子を破砕し、含水エタノール（水：エタノール＝２０：８０（ｖ／ｖ））で抽出した。含水エタノール抽出溶液を適量にまで濃縮した後、スプレードライすることによって、抽出物を粉体として得た。この抽出物を純水で室温にて溶解させることによって、３０ｍｇ／ｍＬの抽出物を含有する各抽出物水溶液を得た。エキスのｐＨは５．０であった。なお、得られたパッションフルーツ種子エキスは４．２ｍｇ／ｍＬのピセアタンノールを含有していた。

（２）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション作製
まず、Ｗ／Ｏ型エマルション作製のため、乳化剤となる第１の閉鎖小胞体を形成する第１の両親媒性物質としてトリオレイン酸デカグリセリルを、油相を構成する中鎖脂肪酸油に、４ｗｔ％になるように添加し、常温で撹拌して、乳化粒子分散液を作製した。この分散液３０ｇをホモジナイザー（IKA, T25 digital ULTRA TURRAX）で撹拌しながら、内水相となるピセアタンノール純品溶液またはパッションフルーツ種子エキス３０ｇを加えた。次に、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション作製のため、乳化剤となる第２の閉鎖小胞体を形成する第２の両親媒性物質として。ジステアリン酸デカグリセリルを使用し、純水に２ｗｔ％になるよう添加し、常温で撹拌して、外水相となる分散液を作製した。この分散液３０ｇをホモジナイザーで撹拌しながら、先に作製したＷ／Ｏ型エマルション３０ｇを加え、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを作製した。このようにして得られたＷ／Ｏ／Ｗエマルションの顕微鏡写真（VHX-5000; 株式会社キーエンス社製により撮影）を図２に示す。

（３）安定性測定
各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを、ｐＨ７．２の２６．０ｍＭクエン酸−３４８．１ｍＭリン酸バッファーを用いて５倍希釈し、それぞれスクリュー管バイアル（アズワン, ラボランスクリュー管瓶 No.6 30mL, 型番 9-852-08）に１５ｍＬずつ分注し、アルミホイルで遮光して、４℃、４００rpmで撹拌しながら保管した。コントロールとしては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとせず、単にピセアタンノール純品溶液またはパッションフルーツ種子エキスを、同じリン酸バッファーにて希釈した溶液を用いた。４日後または８日後に、各サンプルにおけるピセアタンノールの濃度をＨＰＬＣで測定した。また、パッションフルーツ種子エキスについてはさらに、エキス中に含まれるピセアタンノール以外のスチルベン類であるスキルプシンＢ（図ではSciBと表記）や、スチルベン類以外のポリフェノール類であるエピカテキンの濃度も測定した。測定条件は以下の通りである。

［ＨＰＬＣ条件］
・カラム：Mightysil RP-18 GP250-10 径10 mm、長さ250 mm（関東化学株式会社製）
・カラム温度：40℃
・溶出条件：流速3mL/min、0％メタノール−100％純水 → 30％メタノール−70％純水（グラジエント、10min）
・ＵＶ検出：280nm
得られた結果を図３に示す。

（４）結果
図３に示すように、いずれのサンプルにおいても、サンプル溶液をそのまま保存するより、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの剤形で保存する方が、ピセアタンノールの残存率が高かった。また、図４および図５に示すように、パッションフルーツ種子エキスにおける、ピセアタンノール以外のスチルベン類であるスキルプシンＢや、スチルベン以外のポリフェノール類であるエピカテキンについても同様に、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの剤形で保存する方が、パッションフルーツ種子エキス中でのスキルプシンＢおよびエピカテキンの残存率が高かった。このように、中性付近で不安定なポリフェノールであっても、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションにすることによって、外水相が中性であっても安定化することが可能になり、長期保存ができるようになる。

[実施例２]
（１）サンプル調製
内水相となるｐＨ３．５のピセアタンノール純品溶液（図ではPICと表記）を準備した。ピセアタンノール純品はパッションフルーツ種子エキスからの純度９８％以上の精製物を使用し、これをｐＨ３．５の７２ｍＭクエン酸―５６ｍＭリン酸バッファーで５ｍｇ／ｍＬになるよう室温で溶解した。

（２）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション作製
実施例１と同様にＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを作製した。

（３）安定性測定
各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションについて、実施例１と同様に希釈・保管し、４日、８日後に、ピセアタンノールの安定性を測定した。コントロールとしては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとせず、単にピセアタンノール純品溶液をＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションと同様に希釈し、保管した溶液を用いた。

（４）結果
図６に示すように、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの内水相のｐＨが３．５であっても、ピセアタンノールは安定化した。実施例１の結果と合わせて考えると、内水相のｐＨが３．５〜５．０であるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションにすることによって、内水相のピセアタンノールは安定化された。このように、中性付近で不安定なポリフェノールであっても、内水相のｐＨを酸性にしてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションにすることによって、外水相が中性であっても安定化することが可能になり、長期保存ができるようになる。

[実施例３]
（１）サンプル調製
実施例１と同様に、内水相となるｐＨ４．５のピセアタンノール純品溶液（図ではPICと表記）、を準備した。

（２）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション作製
第２の閉鎖小胞体を形成する第２の両親媒性物質であるジステアリン酸デカグリセリルを、第１の閉鎖小胞体を形成する第１の両親媒性物質と同じトリオレイン酸デカグリセリルとした以外は、実施例１と同様にＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを作製した。

（３）安定性測定
各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションについて、実施例１と同様にピセアタンノールの安定性を測定した。コントロールとしては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとせず、単にピセアタンノール純品溶液をＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションと同様に希釈した溶液を用いた。

本実施例では、４日、８日後に測定した。

（４）結果 図７に示すように、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの第２の両親媒性物質をトリオレイン酸デカグリセリンに変えても、同様に内水相のピセアタンノールは安定化した。

[実施例４]
（１）サンプル調製
実施例１と同様に、内水相となるパッションフルーツ種子エキス溶液を準備した。

（２）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション作製
第１の閉鎖小胞体を形成する第１の両親媒性物質として、トリオレイン酸デカグリセリル以外に、トリオレイン酸ペンタグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルを用いた以外は、実施例１と同様にＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを作製した。

（３）第１の両親媒性物質の油相中での粒度分布測定
各第１の両親媒性物質を中鎖脂肪酸油に４ｗｔ％になるように添加し、常温で一晩撹拌して、乳化粒子分散液を作製した。この溶液を、濃厚系粒径アナライザー FPAR-1000（大塚電子株式会社）で、希薄系プローブを使用して粒径測定を３分間、３回測定を行い、その平均値を算出した。

（４）結果
第１の両親媒性物質のそれぞれについて、油相中に分散するかどうか、および油相中での平均粒子径、さらにＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションが作製できたかどうかを表１にまとめた。このように、第１の両親媒性物質が油相中へ分散し、かつ、油相中での平均粒子径は８ｎｍ以上であることが分かった。

Claims (24)

1. ポリフェノールを含有する内水相と、前記内水相を囲繞する油相と、前記油相を囲繞する外水相と、を含んで構成され、
   前記内水相と前記油相の界面に第１の両親媒性物質によって形成される第１の閉鎖小胞体が介在し、
   
   前記油相と前記外水相の界面に第２の両親媒性物質によって形成される第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子が介在する、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
2. 前記内水相と外水相のｐＨが異なる、請求項１に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
3. 前記内水相が酸性のポリフェノール溶液である、請求項１または２に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
4. 前記外水相が中性またはアルカリ性の溶液である、請求項１から３のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
5. 前記第１の両親媒性物質は前記油相中での前記第１の閉鎖小胞体形成能を有する、請求項１からのいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
6. 前記第１および第２の両親媒性物質が、同じまたは異なるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成される、請求項１から５のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
7. 前記第１の両親媒性物質からなる前記第１の閉鎖小胞体の粒子径が、８ｎｍ以上であるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成される、請求項１から６のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
8. 前記第１の両親媒性物質が、トリオレイン酸ペンタグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、及び／またはポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルである、請求項１から７のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
9. 前記ポリフェノールがスチルベンである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
10. 前記スチルベンがピセアタンノールである、請求項９に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
11. 前記ポリフェノールが植物のエキス由来である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
12. 前記エキスがパッションフルーツ種子、テンニンカ、またはマキバブラシノキのエキスである、請求項１１に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション。
13. 第１の両親媒性物質で形成された第１の閉鎖小胞体を含有する油性溶液を調製する工程と、
    ポリフェノールを含有する第１の水性溶液を調製する工程と、
    第２の両親媒性物質で形成された第２の閉鎖小胞体または水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子を含有する第２の水性溶液を調製する工程と、
    前記油性溶液と前記第１の水性溶液とを混合することによって、前記第１の閉鎖小胞体を前記第１の水性溶液からなる内水相と前記内水相を囲繞する前記油性溶液との界面に介在させてＷ／Ｏ型エマルションを形成させる工程と、
    前記Ｗ／Ｏ型エマルションを前記第２の水性溶液と混合して、前記第２の閉鎖小胞体または前記粒子を、前記油性溶液からなり前記内水相を囲繞する油相と前記第２の水性溶液からなり前記油相を囲繞する外水相との界面に介在させてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを形成させる工程と、
    を含むＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
14. 前記内水相と外水相のｐＨが異なる、請求項１３に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
15. 前記内水相が酸性のポリフェノール溶液である、請求項１３または１４に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
16. 前記外水相が中性またはアルカリ性の溶液である、請求項１３から１５のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
17. 前記第１の両親媒性物質は前記油相中での前記第１の閉鎖小胞体形成能を有する、請求項１３から１６のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
18. 前記第１および第２の両親媒性物質が、同じまたは異なるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成される、請求項１３から１７のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
19. 前記第１の閉鎖小胞体の粒子径が、８ｎｍ以上であるポリグリセリン脂肪酸エステルで構成される、請求項１３から１８のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
20. 前記第１の両親媒性物質がトリオレイン酸ペンタグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、及び／またはポリリシノレイン酸ヘキサグリセリルである、請求項１３から１９のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
21. 前記ポリフェノールがスチルベンである、請求項１３〜２０のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
22. 前記スチルベンがピセアタンノールである、請求項２１に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
23. 前記ポリフェノールが植物のエキス由来である、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。
24. 前記エキスがパッションフルーツ種子、テンニンカ、またはマキバブラシノキのエキスである、請求項２３に記載のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの製造方法。