JP2016056201A - Oral photoaging inhibitor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、経口用光老化抑制剤に関し、より詳細には、紫外線により誘発されるシワ形
成の抑制剤として有効な経口用光老化抑制剤に関する。
The present invention relates to an oral photoaging inhibitor, and more particularly to an oral photoaging inhibitor effective as an inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays.
皮膚は常に紫外線に曝露されており、長年かつ繰り返しの紫外線曝露によって皮膚の光
老化が促進される。紫外線暴露により、皮膚真皮の細胞外マトリックスの大半を占めるコ
ラーゲンが切断されて顕著に減少するとともにコラーゲン繊維束の乱れが生じ、皮膚の弾
力性が失われ、シワが形成される。
The skin is constantly exposed to ultraviolet light, and photoaging of the skin is promoted by long-term and repeated exposure to ultraviolet light. By exposure to ultraviolet rays, collagen that occupies most of the extracellular matrix of the skin dermis is cut and markedly reduced, and the collagen fiber bundle is disturbed, the elasticity of the skin is lost, and wrinkles are formed.
ヒアルロン酸は、生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類であり、その高い保湿機能
により、化粧料の成分として広く利用されている。ヒアルロン酸は、光老化や紫外線によ
り誘発されるシワ形成を抑制するための化粧料にも利用されており、例えば、ヒアルロン
酸、紫外線吸収剤および抗酸化剤を配合した化粧料を皮膚に塗布することにより、日焼け
現象等の紫外線障害を抑制することが知られている（特許文献１）。
Hyaluronic acid is a mucopolysaccharide present in living organisms, particularly subcutaneous tissues, and is widely used as a component of cosmetics due to its high moisturizing function. Hyaluronic acid is also used in cosmetics to suppress wrinkle formation induced by photoaging and ultraviolet rays. For example, cosmetics containing hyaluronic acid, ultraviolet absorbers and antioxidants are applied to the skin. Therefore, it is known to suppress ultraviolet ray damage such as sunburn phenomenon (Patent Document 1).
しかしながら、従来の化粧料において、ヒアルロン酸は皮膚に潤いを与えるための保湿
成分として使用されており、特許文献１の化粧料による紫外線障害の抑制効果も紫外線吸
収剤および抗酸化剤により得られるものであるため、ヒアルロン酸のみを皮膚に塗布した
場合、光老化や紫外線により誘発されるシワ形成を十分に抑制できない。
However, in conventional cosmetics, hyaluronic acid is used as a moisturizing component for moisturizing the skin, and the effect of suppressing UV damage by the cosmetics of Patent Document 1 can also be obtained by UV absorbers and antioxidants. Therefore, when only hyaluronic acid is applied to the skin, wrinkle formation induced by photoaging and ultraviolet rays cannot be sufficiently suppressed.
また、紫外線吸収剤や酸化防止剤を含有する化粧料の効果が期待できるのは、塗布を行
った皮膚の局所的な部分のみであり、広範囲の皮膚で光老化を抑制するには不向きである
。
In addition, the effect of cosmetics containing ultraviolet absorbers and antioxidants can be expected only in the local area of the applied skin, and is not suitable for suppressing photoaging in a wide range of skin. .
本発明は、光老化、特に紫外線により誘発されるシワの形成の抑制に有効な経口用光老
化抑制剤を提供する。
The present invention provides an oral photoaging inhibitor effective for suppressing photoaging, particularly wrinkle formation induced by ultraviolet rays.
本発明者らは、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が、経口摂取により光老
化を抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
The present inventors have found that hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof suppresses photoaging by ingestion, and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、
（１）ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特
徴とする経口用光老化抑制剤、
（２）紫外線により誘発されるシワ形成の抑制剤として使用されることを特徴とする（１
）に記載の経口用光老化抑制剤、
（３）皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤として使用されることを
特徴とする（１）または（２）に記載の経口用光老化抑制剤、
である。
That is, the present invention
(1) An oral photoaging inhibitor comprising hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient,
(2) It is used as an inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays (1
) Oral photoaging inhibitor according to
(3) The oral photoaging inhibitor according to (1) or (2), which is used as a production promoter for collagen and / or decorin in the skin,
It is.
上記経口用光老化抑制剤によれば、光老化、特に紫外線により誘発されるシワの形成を
抑制することができる。また、上記経口用光老化抑制剤によれば、皮膚中のコラーゲンお
よび／またはデコリンの産生を促進するため、光老化の抑制に有効な新規製剤が提供され
る。
According to the oral photoaging inhibitor, the formation of wrinkles induced by photoaging, particularly ultraviolet rays, can be suppressed. Moreover, according to the said oral photoaging inhibitor, since it accelerates | stimulates the production | generation of the collagen in a skin and / or decorin, the novel formulation effective in suppression of photoaging is provided.
また、上記経口用光老化抑制剤は経口摂取するものであることから、生体内で作用する
ことができるため、広範囲の皮膚で光老化を抑制することができる。
Moreover, since the said oral photoaging inhibitor is orally ingested, since it can act | operate in the living body, it can suppress photoaging in a wide range of skin.
以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断
らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the drawings. In the present invention, “parts” means “parts by mass” and “%” means “mass%” unless otherwise specified.
１．経口用光老化抑制剤
本発明の経口用光老化抑制剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効
成分として含有することを特徴とする。
1. Oral Photoaging Inhibitor The oral photoaging inhibitor of the present invention is characterized by containing hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
１．１．ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩
本発明において、「ヒアルロン酸」とは、β−Ｄ−グルクロン酸とβ−Ｄ−Ｎ−アセチ
ルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類である。すなわ
ち、ヒアルロン酸は、β−Ｄ−グルクロン酸の１位とβ−Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミ
ンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものである。また、「ヒ
アルロン酸の薬学的に許容される塩」としては、特に限定されないが、例えば、ナトリウ
ム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げら
れる。
1.1. Hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof In the present invention, “hyaluronic acid” has at least one repeating structural unit consisting of a disaccharide of β-D-glucuronic acid and β-DN-acetylglucosamine. It is a polysaccharide. That is, hyaluronic acid is a disaccharide or more containing at least one disaccharide unit in which the 1-position of β-D-glucuronic acid and the 3-position of β-DN-acetyl-glucosamine are bonded. The “pharmaceutically acceptable salt of hyaluronic acid” is not particularly limited, and examples thereof include sodium salt, potassium salt, calcium salt, zinc salt, magnesium salt, ammonium salt and the like.
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は、動物等の生体組織（例えば鶏冠、さ
い帯、皮膚、関節液等）から抽出されたものでもよく、あるいは、微生物、動物細胞また
は植物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵
法）、化学的または酵素的に合成されたもの等を使用することができる。
Hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be extracted from a living tissue such as an animal (for example, chicken crown, umbilical cord, skin, joint fluid, etc.), or cultured microorganisms, animal cells or plant cells. (Eg, a fermentation method using Streptococcus bacteria), chemically or enzymatically synthesized products, and the like can be used.
なお、本発明において使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の純度は
、医薬品で使用できるレベルであればよく、好ましくは９０％以上であればよく、より好
ましくは９５％以上であればよい。この純度は、カルバゾール硫酸法（例えば日本薬局方
）にて測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。
The purity of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the present invention may be a level that can be used in pharmaceuticals, preferably 90% or more, and more preferably 95% or more. That's fine. This purity is a value calculated from a glucuronic acid quantitative value measured by a carbazole sulfate method (for example, Japanese Pharmacopoeia).
カルバゾール硫酸法は、ホウ酸ナトリウム・硫酸溶液中にヒアルロン酸水溶液を加えて
混和し、ヒアルロン酸を加熱分解した後冷却し、カルバゾール・エタノール溶液を加えて
混和し、加熱後放冷した試料液の吸光度（５３０ｎｍ）を測定する方法である。同様に処
理したＤ−グルクロノラクトンを用いて検量線を作成し、Ｄ−グルクロノラクトン換算値
を算出した後、１．１０２を乗じてグルクロン酸定量値を求める。得られたグルクロン酸
定量値に（ヒアルロン酸類の分子量／グルクロン酸の分子量）を乗じてヒアルロン酸類の
含有量を算出する。
In the carbazole sulfate method, an aqueous solution of hyaluronic acid is added and mixed in a sodium borate / sulfuric acid solution. This is a method for measuring absorbance (530 nm). A calibration curve is prepared using D-glucuronolactone processed in the same manner, and a D-glucuronolactone conversion value is calculated, and then multiplied by 1.102 to obtain a glucuronic acid quantitative value. The obtained glucuronic acid quantitative value is multiplied by (molecular weight of hyaluronic acid / molecular weight of glucuronic acid) to calculate the content of hyaluronic acid.
また、本発明の経口用光老化抑制剤で使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容さ
れる塩の平均分子量は、光老化抑制効果を十分に得られる点から、好ましくは１００万以
下であり、より好ましくは４００〜１０万以下、さらに好ましくは２，０００〜２万であ
る。
In addition, the average molecular weight of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the oral photoaging inhibitor of the present invention is preferably 1,000,000 or less from the viewpoint of sufficiently obtaining a photoaging inhibiting effect, More preferably, it is 400-100,000 or less, More preferably, it is 2,000-20,000.
なお、本発明で規定されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量
は、以下の方法により測定される。
The average molecular weight of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof defined in the present invention is measured by the following method.
即ち、約０．０５ｇの精製ヒアルロン酸を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナ
トリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液及びこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並び
に１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加え
て正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液及び０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度
の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１
法 毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃
度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物
に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸と
の交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３
））に代入し、平均分子量を算出する（T.C. Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,:B
.B.A., 42, 476-485(1960)）。
（式１）
比粘度 ＝ {(試料溶液の所要流下秒数)/(0.2moｌ/L塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数)}
−1
（式２）
還元粘度 = 比粘度/(本品の換算した乾燥物に対する濃度（g/100mL）)
（式３）
極限粘度 ＝ ３．６×１０−４Ｍ０．７８
Ｍ：平均分子量
That is, about 0.05 g of purified hyaluronic acid was accurately weighed and dissolved in 0.2 mol / L sodium chloride solution to make exactly 100 mL, and 8 mL, 12 mL and 16 mL of this solution were accurately weighed, and A solution obtained by adding a 2 mol / L sodium chloride solution to make exactly 20 mL is used as a sample solution. About this sample solution and 0.2 mol / L sodium chloride solution, viscosity measurement method (No. 1 of Japanese Pharmacopoeia (14th revision) general test method)
The specific viscosity is measured at 30.0 ± 0.1 ° C. (method (capillary viscosity measurement method)) (formula (1)), and the reduced viscosity at each concentration is calculated (formula (2)). A graph is drawn with the reduced viscosity on the vertical axis and the concentration (g / 100 mL) of the product converted to dry matter on the horizontal axis, and the intrinsic viscosity is determined from the intersection of the straight line connecting the points and the vertical axis. The intrinsic viscosity obtained here is expressed by Laurent's formula (formula (3
)) And calculate the average molecular weight (TC Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,: B
.BA, 42, 476-485 (1960)).
(Formula 1)
Specific viscosity = {(required flow time of sample solution) / (required flow time of 0.2 mol / L sodium chloride solution)}
−1
(Formula 2)
Reduced viscosity = specific viscosity / (concentration of the product in terms of dry matter (g / 100mL))
(Formula 3)
Intrinsic viscosity = 3.6 × 10 −4 M 0.78
M: average molecular weight
本発明の経口用光老化抑制剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の
含有量は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が有効成分として機能しうる量
であればよく、通常１質量％以上であり、好ましくは５〜９５質量％である。
The content of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the oral photoaging inhibitor of the present invention may be an amount that allows hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof to function as an active ingredient, Usually, it is 1 mass% or more, preferably 5 to 95 mass%.
１．２．光老化の抑制
本発明の経口用光老化抑制剤は、経口投与により、紫外線暴露による皮膚の光老化を抑
制する。
皮膚は常に紫外線に曝露されており、長年かつ繰り返しの紫外線曝露によって皮膚の光
老化が促進される。特に、顔や手のような直接紫外線を浴びるケースが多い露出部の肌の
老化原因はほとんどが光老化であると考えられている。したがって、顔や手においては、
加齢によって起こる自然老化よりも光老化を抑制することが重要である。
1.2. Inhibition of Photoaging The oral photoaging inhibitor of the present invention suppresses photoaging of the skin due to ultraviolet exposure by oral administration.
The skin is constantly exposed to ultraviolet light, and photoaging of the skin is promoted by long-term and repeated exposure to ultraviolet light. In particular, it is considered that the cause of aging of exposed skin, which is often exposed directly to ultraviolet rays such as the face and hands, is photoaging. Therefore, in the face and hands,
It is more important to suppress photoaging than to natural aging caused by aging.
光老化の主な症状としては、深いシワの形成や、しみの発生であるが、本発明の経口用
光老化抑制剤は、特に紫外線により誘発されるシワの形成を抑制することができる。紫外
線により誘発されるシワは、紫外線により皮膚真皮のコラーゲンが切断されて減少すると
ともにコラーゲン繊維束の乱れが生じ、皮膚の弾力性が失われることによって形成される
。
The main symptoms of photoaging are the formation of deep wrinkles and the occurrence of stains, but the oral photoaging inhibitor of the present invention can particularly suppress the formation of wrinkles induced by ultraviolet rays. The wrinkles induced by ultraviolet rays are formed by the fact that the collagen of the skin dermis is cut and reduced by the ultraviolet rays, the collagen fiber bundles are disturbed, and the elasticity of the skin is lost.
本発明の経口用光老化抑制剤は、経口投与により、紫外線暴露による皮膚中のコラーゲ
ンの産生を促進することができる。また、本発明の光老化抑制剤は、コラーゲンの形成に
関与する遺伝子の発現を促進する作用を有する。
さらに、本発明の経口用光老化抑制剤は、経口投与により、紫外線暴露による皮膚中の
デコリンの産生を促進することができる。
皮膚中のコラーゲンは、例えば血管壁や皮膚を構成しており、これらの器官に弾力性を
与えるのに重要な役割を担っており、皮膚においては弾力やハリを保つのに大きな役割を
果たしている。また、デコリンは、皮膚真皮のコラーゲン繊維を束ね、コラーゲン繊維形
成を正常にし、皮膚の保水力やハリに影響を与える。
The oral photoaging inhibitor of the present invention can promote the production of collagen in the skin by exposure to ultraviolet rays by oral administration. In addition, the photoaging inhibitor of the present invention has an action of promoting the expression of genes involved in collagen formation.
Furthermore, the oral photoaging inhibitor of the present invention can promote the production of decorin in the skin by exposure to ultraviolet rays by oral administration.
Collagen in the skin constitutes, for example, blood vessel walls and skin and plays an important role in giving elasticity to these organs, and plays a major role in maintaining elasticity and elasticity in the skin . Decorin also binds the collagen fibers of the skin dermis, normalizes the formation of collagen fibers, and affects the water retention and elasticity of the skin.
したがって、本発明の経口用光老化抑制剤は、皮膚中のコラーゲンおよびデコリンの産
生を促進することができるため、皮膚の弾力やハリを保持し、シワ形成を効果的に抑制す
ることができる。また、本発明の経口用光老化抑制剤は、経口投与により、紫外線暴露に
よる皮膚中のコラーゲンおよびデコリンの減少を抑制することができる。
Therefore, since the oral photoaging inhibitor of the present invention can promote the production of collagen and decorin in the skin, the elasticity and elasticity of the skin can be maintained, and wrinkle formation can be effectively suppressed. Moreover, the oral photoaging inhibitor of the present invention can suppress a decrease in collagen and decorin in the skin due to ultraviolet exposure by oral administration.
皮膚中のコラーゲン量およびデコリン量の産生促進作用は、例えば、ウエスタンブロッ
ティング、ＥＬＩＳＡ、アフィニティクロマトグラフィー等によるコラーゲンおよびデコ
リン蛋白質の検出によって、コラーゲン遺伝子の発現促進は、例えば、ノーザンブロッテ
ィング、ＤＮＡアレイ、ＤＮＡチップ等によるコラーゲンｍＲＮＡの検出または定量等の
公知の生化学的分析方法により確認することができる。
Production of collagen and decorin in skin is promoted by the detection of collagen and decorin protein by Western blotting, ELISA, affinity chromatography, etc., and collagen gene expression is promoted by, for example, Northern blotting, DNA array, DNA It can be confirmed by a known biochemical analysis method such as detection or quantification of collagen mRNA using a chip or the like.
また、本発明の経口用光老化抑制剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容さ
れる塩は、前記のようなコラーゲン遺伝子の発現促進作用を有することから、コラーゲン
遺伝子発現促進剤として使用することができる。
前記コラーゲン遺伝子としては、Col4a1（その配列は「Assay ID : Mm00802372_m1, Ac
cession
number : Bru, Col4a-1, Del(8)44H, Raw, Svc」にて閲覧可能である）、Col1a1（その配
列は「Assay ID:
Mm00801666_g1 Accession number : Mov13, RP23-112C19.9, Col1a-1, Cola-1, Cola1,
Mov-13」にて閲覧可能である）、Col3a1（その配列は「Assay ID: Mm01254476_m1 Access
ion
number : AW550625, Col3a-1, KIAA4231, MMS10-W, Ms10w, mKIAA4231」にて閲覧可能で
ある）およびCol7a1（その配列は「Assay ID: Mm00483818_m1 Accession
number : AW209154」にて閲覧可能である）が挙げられる。
In addition, hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the oral photoaging inhibitor of the present invention has a collagen gene expression promoting action as described above, and is therefore used as a collagen gene expression promoting agent. be able to.
The collagen gene is Col4a1 (the sequence is “Assay ID: Mm00802372_m1, Ac
cession
number: Bru, Col4a-1, Del (8) 44H, Raw, Svc ”), Col1a1 (the sequence is“ Assay ID:
Mm00801666_g1 Accession number: Mov13, RP23-112C19.9, Col1a-1, Cola-1, Cola1,
Mov-13 ”, Col3a1 (the sequence is“ Assay ID: Mm01254476_m1 Access
ion
number: AW550625, Col3a-1, KIAA4231, MMS10-W, Ms10w, mKIAA4231 ”and Col7a1 (the sequence is“ Assay ID: Mm00483818_m1 Accession ”
number: AW209154 ”).
本発明の経口用光老化抑制剤によれば、皮膚中のコラーゲンおよびデコリンの産生を促
進し、紫外線暴露による皮膚中のコラーゲンおよびデコリン量の減少を抑制する結果、光
老化、特に紫外線により誘発されるシワの形成を抑制することができる。
According to the oral photoaging inhibitor of the present invention, the production of collagen and decorin in the skin is promoted, and the decrease in the amount of collagen and decorin in the skin due to UV exposure is suppressed. The formation of wrinkles can be suppressed.
本発明の経口用光老化抑制剤を経口摂取することによって皮膚中のコラーゲンおよびデ
コリンの産生が促進される作用機序については必ずしも明らかではないが、ヒアルロン酸
を経口摂取したマウスの腸管上皮表面の受容体にヒアルロン酸が結合することが報告され
ている（Akira Asari, Tomoyuki Kanemitsu, Hithoshi Kurihara, Oral
Administration of High Molecular Weight Hyaluronan (900 KDa) Controls Immune
System via Toll-like Receptor 4 in the Intestinal Epithelium）。したがって、本発
明の有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容できる塩を経口摂取すると、該
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容できる塩が腸管上皮表面の受容体に結合し、情報伝
達された結果、皮膚の真皮繊維芽細胞等でコラーゲンやデコリンの産生が促進されたと推
察される。
なお、ヒアルロン酸も皮膚真皮に含まれ、皮膚の水分を保持し保湿に寄与しているが、
皮膚を保湿するだけでは、光老化で形成される深いシワの形成を十分に抑制することがで
きない。
Although the mechanism of action by which the production of collagen and decorin in the skin is promoted by oral ingestion of the oral photoaging inhibitor of the present invention is not necessarily clear, the intestinal epithelial surface of mice ingested hyaluronic acid orally It has been reported that hyaluronic acid binds to the receptor (Akira Asari, Tomoyuki Kanemitsu, Hithoshi Kurihara, Oral
Administration of High Molecular Weight Hyaluronan (900 KDa) Controls Immune
System via Toll-like Receptor 4 in the Intestinal Epithelium). Therefore, when hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which is an active ingredient of the present invention, is orally ingested, the hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is bound to a receptor on the surface of the intestinal epithelium and signaled. As a result, it is presumed that the production of collagen and decorin was promoted in dermal fibroblasts of the skin.
Hyaluronic acid is also contained in the skin dermis and keeps the skin moisture and contributes to moisture retention.
Just moisturizing the skin cannot sufficiently suppress the formation of deep wrinkles formed by photoaging.
本発明の経口用光老化抑制剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩
は、上記のような作用機序により生体内で作用するため、本発明の経口用光老化抑制剤は
、広範囲の皮膚で光老化を抑制することができる。
Since the hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the oral photoaging inhibitor of the present invention acts in vivo by the action mechanism as described above, the oral photoaging inhibitor of the present invention is Can suppress photoaging in a wide range of skin.
本発明の経口用光老化抑制剤は、有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容
される塩以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、その他の原料を含むことができる。
そのような原料の例としては水、賦形剤、抗酸化剤、防腐剤、湿潤剤、粘稠剤、緩衝剤、
吸着剤、溶剤、乳化剤、安定化剤、界面活性剤、滑沢剤、水溶性高分子、甘味料、矯味剤
、酸味料、アルコール類等が挙げられる。
The oral photoaging inhibitor of the present invention can contain other raw materials in addition to the active ingredient hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as long as the effects of the present invention are not impaired.
Examples of such raw materials include water, excipients, antioxidants, preservatives, wetting agents, thickeners, buffers,
Examples include adsorbents, solvents, emulsifiers, stabilizers, surfactants, lubricants, water-soluble polymers, sweeteners, corrigents, acidulants, and alcohols.
本発明の経口用光老化抑制剤の剤形は特に限定されないが、本発明の経口用光老化抑制
剤を経口摂取する場合、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤等の固形
製剤、水剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。
The dosage form of the oral photoaging inhibitor of the present invention is not particularly limited, but when the oral photoaging inhibitor of the present invention is orally ingested, for example, tablets, powders, fine granules, granules, capsules, pills Oral administration agents such as liquid preparations such as solid preparations such as liquid preparations, suspensions, syrups and emulsions.
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は生体物質であるため、多量に摂取して
も副作用がない、またはきわめて低いと考えられるが、本発明の経口用光老化抑制剤とし
て摂取するヒアルロン酸及び／またはその塩の量は、一日当たり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ
、好ましくは１００〜５００ｍｇを目安とすることができる。投与回数は、紫外線照射量
や季節に応じて一日当たり一回もしくは複数回を選択できる。
Hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is a biological substance, so it is considered that there is no side effect or very low even if it is ingested in a large amount. However, hyaluronic acid taken as an oral photoaging inhibitor of the present invention And / or the amount of salt is 10 mg to 1000 mg per day
Preferably, a standard of 100 to 500 mg can be used. The number of administrations can be selected once or a plurality of times per day depending on the ultraviolet irradiation amount and the season.
２．紫外線により誘発されるシワ形成の抑制剤
皮膚は紫外線暴露により、皮膚真皮の細胞外マトリックスの大半を占めるコラーゲンが
破壊され顕著に減少するとともに、コラーゲン繊維束の乱れが生じるため、皮膚の弾力性
が失われ、シワが形成される。
2. Inhibitors of UV-induced wrinkle formation Skin exposure to UV rays destroys and significantly reduces the collagen that occupies most of the extracellular matrix of the skin dermis. Lost and wrinkles are formed.
本発明の経口用光老化抑制剤は、紫外線により誘発されるシワ形成の抑制剤用途に好適
に用いることができる。本発明の一実施形態に係る紫外線により誘発されるシワ形成の抑
制剤は、経口投与により、紫外線暴露による皮膚中のコラーゲンの減少を抑制することが
できるため、紫外線により誘発されるシワ形成を効果的に抑制することができる。
The oral photoaging inhibitor of the present invention can be suitably used for an inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays. Since the inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays according to an embodiment of the present invention can suppress a decrease in collagen in the skin due to ultraviolet exposure by oral administration, the effect of wrinkle formation induced by ultraviolet rays is effective. Can be suppressed.
本実施形態に係る紫外線により誘発されるシワ形成の抑制剤において、有効成分として
含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記本発明に係る経口
用光老化抑制剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容
される塩を使用することができる。また、本実施形態に係る紫外線により誘発されるシワ
形成の抑制剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量
ならびに他の成分もまた、上記本発明に係る経口用光老化抑制剤におけるヒアルロン酸ま
たはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量と同様である。
In the inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays according to this embodiment, hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof contained as an active ingredient is an active ingredient in the oral photoaging inhibitor according to the present invention. Hyaluronic acid used as a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used. Further, the content and dose of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays according to the present embodiment and other components are also the oral light according to the present invention. This is the same as the content and dosage of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an aging inhibitor.
３．皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤
皮膚中のコラーゲンは、例えば血管壁や皮膚を構成しており、これらの器官に弾力性を
与えるのに重要な役割を担っており、皮膚においては弾力やハリを保つのに大きな役割を
果たしている。皮膚は紫外線暴露により、皮膚真皮の細胞外マトリックスの大半を占める
コラーゲンが顕著に減少するとともにコラーゲン繊維束の乱れが生じ、皮膚の弾力性が失
われ、シワが形成される。また、デコリンは、皮膚真皮のコラーゲン繊維を束ね、コラー
ゲン繊維形成を正常にし、皮膚の保水力やハリに影響を与える。
3. Collagen and / or decorin production promoter in the skin Collagen in the skin constitutes, for example, blood vessel walls and skin, and plays an important role in giving elasticity to these organs. It plays a big role in maintaining elasticity and elasticity. When the skin is exposed to ultraviolet rays, the collagen occupying most of the extracellular matrix of the skin dermis is remarkably reduced, the collagen fiber bundle is disturbed, the elasticity of the skin is lost, and wrinkles are formed. Decorin also binds the collagen fibers of the skin dermis, normalizes the formation of collagen fibers, and affects the water retention and elasticity of the skin.
本発明の経口用光老化抑制剤は、皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促
進剤用途に好適に用いることができる。本発明の一実施形態に係る皮膚中のコラーゲンお
よび／またはデコリンの産生促進剤は、経口投与により、皮膚中のコラーゲンおよびデコ
リンの産生を促進することができるため、皮膚の弾力やハリを保持し、シワ形成を効果的
に抑制することができる。
The oral photoaging inhibitor of the present invention can be suitably used for the use of collagen and / or decorin production promoter in the skin. Since the collagen and / or decorin production promoter in skin according to one embodiment of the present invention can promote collagen and decorin production in the skin by oral administration, it retains the elasticity and firmness of the skin. , Wrinkle formation can be effectively suppressed.
本実施形態に係る皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤において、
有効成分として含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記本
発明に係る経口用光老化抑制剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはそ
の薬学的に許容される塩を使用することができる。また、本実施形態に係る皮膚中のコラ
ーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許
容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分もまた、上記本発明に係る経口用光老化
抑制剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量と同様
である。
In the collagen and / or decorin production promoter in the skin according to the present embodiment,
As hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof contained as an active ingredient, hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof used as an active ingredient in the oral photoaging inhibitor according to the present invention is used. can do. In addition, the content and dose of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof and other components in the collagen and / or decorin production promoter in the skin according to the present embodiment are also the oral dose according to the present invention. This is the same as the content and dosage of hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the photoaging inhibitor for medical use.
本実施形態に係る皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤によれば、
皮膚中のコラーゲンおよびデコリンの産生を促進し、紫外線暴露による皮膚中のコラーゲ
ンおよびデコリン量の減少を抑制する結果、光老化、特に紫外線により誘発されるシワの
形成を抑制することができる。また、上記経口用光老化抑制剤は経口摂取するものである
ことから、生体内で作用することができるため、広範囲の皮膚で光老化を抑制することが
できる。
According to the collagen and / or decorin production promoter in the skin according to the present embodiment,
As a result of promoting the production of collagen and decorin in the skin and suppressing the decrease in the amount of collagen and decorin in the skin due to exposure to ultraviolet rays, it is possible to suppress photoaging, particularly the formation of wrinkles induced by ultraviolet rays. Moreover, since the said oral photoaging inhibitor is orally ingested, since it can act | operate in the living body, it can suppress photoaging in a wide range of skin.
４．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されな
い。
4). Examples Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples. However, the present invention is not limited to the examples.
４．１．実施例１〜３および比較例１
下記の各ヒアルロン酸をそれぞれ精製水に溶解させ、各経口用光老化抑制剤を得た。
なお、後述する試験例１において、各ヒアルロン酸の投与量が２００ｍｇ／Ｋｇ／日とな
るように、ラットの平均体重及び平均飲水量から濃度を算出して、試験液を調製した。
実施例１：ヒアルロン酸（平均分子量３０万、白色粉末、キユーピー株式会社製）
実施例２：ヒアルロン酸（平均分子量５万、白色粉末、キユーピー株式会社製）
実施例３：ヒアルロン酸（平均分子量８,０００、白色粉末、キユーピー株式会社製）
また、滅菌精製水を比較例１とした。
4.1. Examples 1 to 3 and Comparative Example 1
Each of the following hyaluronic acids was dissolved in purified water to obtain each oral photoaging inhibitor.
In Test Example 1 described below, a test solution was prepared by calculating the concentration from the average body weight and the average amount of water consumed so that the dose of each hyaluronic acid was 200 mg / Kg / day.
Example 1: Hyaluronic acid (average molecular weight 300,000, white powder, manufactured by QP Corporation)
Example 2: Hyaluronic acid (average molecular weight 50,000, white powder, manufactured by QP Corporation)
Example 3: Hyaluronic acid (average molecular weight 8,000, white powder, manufactured by QP Corporation)
Further, sterilized purified water was used as Comparative Example 1.
４．２．試験例１
試験例１では、ヒアルロン酸の光老化抑制作用を確認し、該作用機序を解明するために
、へアレスマウスにヒアルロン酸を蒸留水に溶解させた水溶液を経口投与した。
4.2. Test example 1
In Test Example 1, in order to confirm the photoaging inhibition action of hyaluronic acid and elucidate the mechanism of action, an aqueous solution in which hyaluronic acid was dissolved in distilled water was orally administered to hairless mice.
Ｈｏｓ：ＨＲ−１系雄ヘアレスマウス（６週齢）を皮膚水分量、皮膚粘弾性、体重によ
り有意差のないよう群分けを行い、実施例１〜３および比較例１の経口用光老化抑制剤の
評価を、各群ｎ＝６で行った（表１参照）。
Hos: HR-1 male hairless mice (6 weeks old) were grouped so that there was no significant difference according to skin water content, skin viscoelasticity, and body weight, and oral photoaging suppression of Examples 1-3 and Comparative Example 1 The evaluation of the agent was performed in each group n = 6 (see Table 1).
マウスの背部に３回／週の頻度で、６週間ＵＶＢを照射した。総照射量は１回当たり２
．８Ｊとした。
試験期間中、１回／日の頻度で、実施例１〜３の経口用光老化抑制剤を体重１ｋｇあた
り２００ｍｇ経口投与した。
The back of the mice was irradiated with UVB at a frequency of 3 times / week for 6 weeks. Total dose is 2 per dose
. 8J.
During the test period, 200 mg / kg body weight of the oral photoaging inhibitor of Examples 1 to 3 was orally administered once / day.
［背部皮膚の状態観察］
試験期間終了後、背部皮膚の状態を観察した。背部皮膚の写真を図１に示す。
図１より、ＵＶ（＋）コントロール群では、ＵＶ（−）コントロール群と比較して、Ｕ
ＶＢ照射によって背部の正中線に対して垂直方向に深いシワが形成されており、ＵＶＢ照
射による顕著なシワ形成の誘発が確認された。
一方、本発明の経口用光老化抑制剤を投与した群（実施例１〜３投与群）では、ＵＶ（
−）コントロール群と比較するとシワが形成されているが、ＵＶ（＋）コントロール群と
比較してシワの深さは浅く、ＵＶＢ照射により誘発されるシワ形成の抑制効果が認められ
た。
[Observation of back skin condition]
After the test period, the condition of the back skin was observed. A photograph of the back skin is shown in FIG.
From FIG. 1, the UV (+) control group has U as compared with the UV (−) control group.
Deep wrinkles were formed in the direction perpendicular to the midline of the back by VB irradiation, and it was confirmed that remarkable wrinkle formation was induced by UVB irradiation.
On the other hand, in the group administered with the oral photoaging inhibitor of the present invention (Examples 1-3 administration group), UV (
-) Wrinkles were formed compared to the control group, but the depth of the wrinkles was shallower than that of the UV (+) control group, and an effect of suppressing wrinkle formation induced by UVB irradiation was observed.
［表皮厚の測定］
試験期間終了後、マウスを解剖し、背部皮膚組織標本から表皮厚を測定した。背部皮膚
組織標本をヘマトクリット染色したものの写真を図２に、表皮厚の測定結果を図３に示す
。
図２より、ＵＶ（＋）コントロール群では、ＵＶ（−）コントロール群と比較して表皮
の肥厚化が認められた。一方、実施例１〜３の経口用光老化抑制剤を投与した群では、い
ずれもＵＶ（＋）コントロール群と比較して表皮の肥厚化が抑制された。
図３より、ＵＶ（−）コントロール群に対し、ＵＶ（＋）コントロール群は１％、実施
例１投与群および実施例２投与群では５％の危険率で有意に表皮厚が増加し、実施例３投
与群では有意な増加は見られなかった。しかし、実施例１〜３の経口用光老化抑制剤を投
与した群では、ＵＶ（＋）コントロール群と比較して、いずれも表皮厚が低値であった。
また、ＵＶ（＋）コントロール群とのＤｕｎｎｅｔの検定において、実施例２投与群では
ｐ＝０．０６５、実施例３投与群ではｐ＝０．０５４となり、両群ともに表皮の肥厚化を
抑制する傾向があることが確認できた。
[Measurement of skin thickness]
After the test period, the mice were dissected and the epidermis thickness was measured from the back skin tissue specimen. A photograph of hematocrit-stained back skin tissue specimen is shown in FIG. 2, and the measurement result of epidermis thickness is shown in FIG.
From FIG. 2, in the UV (+) control group, thickening of the epidermis was recognized as compared with the UV (−) control group. On the other hand, in the group to which the oral photoaging inhibitor of Examples 1 to 3 was administered, the thickening of the epidermis was suppressed as compared with the UV (+) control group.
As shown in FIG. 3, the UV (−) control group has a significant increase in the epidermis thickness at a risk rate of 1% in the UV (+) control group and 5% in the Example 1 administration group and the Example 2 administration group. There was no significant increase in the Example 3 administration group. However, in the group to which the oral photoaging inhibitor of Examples 1 to 3 was administered, the epidermis thickness was low as compared with the UV (+) control group.
In Dunnet's test with the UV (+) control group, p = 0.065 in the administration group of Example 2 and p = 0.054 in the administration group of Example 3, and both groups suppress the thickening of the epidermis. It was confirmed that there was a tendency.
［皮膚中のI型コラーゲン量およびデコリン量］
試験期間終了後、マウスの背部から皮膚を切除して取り出し、凍結粉砕後、ラウリル硫
酸ナトリウムを含む緩衝液に溶解することで試料を調製し、ウエスタンブロット法により
、I型コラーゲン量およびデコリン量を測定した。
ここで、ウエスタンブロット法とは、ゲル電気泳動によって分子量にしたがい分離した
タンパク質を転写膜に写し取り、さらに特定のタンパク質に対する抗体を用いて転写膜上
で抗原抗体反応によって特定のタンパク質を発色させてその存在を肉眼観察する方法をい
い、蛍光試薬で発色させる方法や、酵素反応を利用して発色させる方法など、多くの周知
の手法が適用可能である。今回、I型コラーゲンを識別するために抗ブタ真皮由来I型コラ
ーゲンウサギ抗血清を作製して一次抗体として使用し、デコリンに対しては抗ウシ胎盤由
来デコリンウサギ抗血清を作製して使用した。それぞれ、二次抗体としてＡｎｔｉ−Ｒａ
ｂｂｉｔ
ＩｇＧ ＨＲＰ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて発色反応を行った。
結果をそれぞれ図４、図５に示す。
[The amount of type I collagen and decorin in the skin]
At the end of the test period, the skin is excised from the back of the mouse, removed, frozen and crushed, and then dissolved in a buffer containing sodium lauryl sulfate, and the amount of type I collagen and decorin is determined by Western blotting. It was measured.
Here, Western blotting is a method in which a protein separated according to the molecular weight by gel electrophoresis is copied onto a transfer membrane, and then a specific protein is colored by an antigen-antibody reaction on the transfer membrane using an antibody against the specific protein. It refers to a method of observing the presence with the naked eye, and many well-known methods such as a method of developing color with a fluorescent reagent and a method of developing color using an enzyme reaction are applicable. In order to identify type I collagen, an anti-pig dermis-derived type I collagen rabbit antiserum was prepared and used as a primary antibody, and an anti-bovine placenta-derived decorin rabbit antiserum was prepared and used against decorin. Anti-Ra as secondary antibody, respectively
bbit
Color reaction was performed using IgG HRP Conjugate (manufactured by Promega).
The results are shown in FIGS. 4 and 5, respectively.
図４に示すように、ウエスタンブロット法によりI型コラーゲンα１鎖のバンドが認め
られ、このバンド強度をＩｍａｇｅＪ（米国国立衛生研究所（ＮＩＨ））を使用して測定
し、コラーゲン量を定量した。
ＵＶ（＋）コントロール群では、ＵＶ（−）コントロール群と比較してI型コラーゲン
α１鎖の量が減少しており、ＵＶＢ照射による皮膚中のI型コラーゲン量の減少が認めら
れた。一方、実施例１投与群では、I型コラーゲンα１鎖の量はＵＶ（＋）コントロール
群と比較してわずかに増加し、実施例２投与群および実施例３投与群では、I型コラーゲ
ンα１鎖の量がＵＶ（＋）コントロール群と比較して顕著に増加した。
このように、本発明の経口用光老化抑制剤の経口投与により、皮膚中のI型コラーゲン
量が増加することが確認された。
As shown in FIG. 4, a band of type I collagen α1 chain was recognized by Western blotting, and the intensity of this band was measured using ImageJ (National Institutes of Health (NIH)) to quantify the amount of collagen.
In the UV (+) control group, the amount of type I collagen α1 chain was decreased as compared with the UV (−) control group, and a decrease in the amount of type I collagen in the skin due to UVB irradiation was observed. On the other hand, in the administration group of Example 1, the amount of type I collagen α1 chain slightly increased as compared with the UV (+) control group, and in the example 2 administration group and the example 3 administration group, type I collagen α1 chain. Significantly increased compared to the UV (+) control group.
Thus, it was confirmed that the amount of type I collagen in the skin was increased by oral administration of the oral photoaging inhibitor of the present invention.
図５に示すように、ウエスタンブロット法によりデコリンのバンドが認められ、このバ
ンド強度をＩｍａｇｅＪ（米国国立衛生研究所（ＮＩＨ））を使用して測定し、デコリン
量を定量した。
ＵＶ（＋）コントロール群では、ＵＶ（−）コントロール群と比較してデコリンの量が
著しく低下しており、ＵＶＢ照射による皮膚中のデコリン量の低下が認められた。一方、
本発明の経口用光老化抑制剤を投与した群では、いずれの群においてもデコリンの量がＵ
Ｖ（＋）コントロール群と比較して増加し、特に実施例２投与群および実施例３投与群で
は、ＵＶ（−）コントロール群と同等以上のデコリンの量であった。
また、ウエスタンブロット法により検出されるデコリンのバンドの位置で、デコリンの
分子量を推定できるが、実施例２投与群および実施例３投与群は、ＵＶ（−）コントロー
ル群と比較して高分子の位置にバンドが検出された。
このように、本発明の経口用光老化抑制剤の経口投与により、皮膚中のデコリン量が増
加することが確認された。
As shown in FIG. 5, a decorin band was observed by Western blotting, and the intensity of this band was measured using ImageJ (National Institutes of Health (NIH)) to quantify the decorin amount.
In the UV (+) control group, the amount of decorin was significantly reduced as compared with the UV (−) control group, and a decrease in the amount of decorin in the skin due to UVB irradiation was observed. on the other hand,
In the group administered with the oral photoaging inhibitor of the present invention, the amount of decorin is U in any group.
The amount of decorin increased compared to the V (+) control group, and in particular, in the Example 2 administration group and the Example 3 administration group, the amount of decorin was equal to or greater than that in the UV (−) control group.
Further, although the molecular weight of decorin can be estimated at the position of the decorin band detected by Western blotting, the administration group of Example 2 and the administration group of Example 3 have higher molecular weight than the UV (−) control group. A band was detected at the position.
Thus, it was confirmed that the amount of decorin in the skin was increased by oral administration of the oral photoaging inhibitor of the present invention.
［I型コラーゲンのｍＲＮＡ発現量］
本発明の経口用光老化抑制剤がI型コラーゲンの遺伝子発現に与える影響を確認するた
めに、ｍＲＮＡ発現量の測定を以下の方法にて行った。
[Type I collagen mRNA expression level]
In order to confirm the influence of the oral photoaging inhibitor of the present invention on the gene expression of type I collagen, the mRNA expression level was measured by the following method.
試験期間終了後、マウスの背部から切除した皮膚組織からＴＲＩｚｏｌ試薬（インビト
ロジェン株式会社）を用いｍＲＮＡを回収して、リアルタイムＰＣＲ機器（Ｔｈｅｒｍａ
ｌ
Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ Ｒｅａｌ
Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＴＰ８００、タカラバイオ株式会社）を用いたI型コラーゲンお
よびデコリンのｍＲＮＡの定量を行った。まず、逆転写によってｍＲＮＡからｃＤＮＡを
合成し、ｃＤＮＡを用いてＰＣＲ反応を行った。すなわち、熱変性（９５℃、５秒）およ
びアニーリング（６０℃、３０秒）を４０回繰り返す増幅反応を行い、同時にＤＮＡに結
合するＣｙｂｒＧｒｅｅｎの蛍光をモニタリングすることによってＤＮＡの増幅を測定し
、対照のｍＲＮＡ量を１とした場合の定量を行った。用いたマウスI型コラーゲン、デコ
リン、ＧＡＰＤＨのプライマーはＴｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ ＤｉｃｅＴＭ Ｒｅａｌ
Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＴＰ８００
Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒ.１．０２Ａで設計した。I型コラーゲンの配列は５’−ＡＴＧ
ＣＣＧＣＧＡＣＣＴＣＡＡＧＡＴＧ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ）、５’−ＴＧＡＧＧＣＡＣ
ＡＧＡＣＧＧＣＴＧＡＧＴＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ）、ＧＡＰＤＨの配列は５’−ＴＧ
ＴＧＴＣＣＧＴＣＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ）、５’−ＴＴＧＣＴＧ
ＴＴＧＡＡＧＴＣＧＣＡＧＧＡＧ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ）である。
結果をそれぞれ表２に示す。結果は、ＵＶ（−）コントロール群のｍＲＮＡ発現量を１
とした場合の相対値で示す。
After completion of the test period, mRNA was collected from the skin tissue excised from the back of the mouse using TRIzol reagent (Invitrogen Corporation), and a real-time PCR instrument (Therma) was collected.
l
Cycler Dice Real
Quantification of type I collagen and decorin mRNA was performed using Time System TP800 (Takara Bio Inc.). First, cDNA was synthesized from mRNA by reverse transcription, and PCR reaction was performed using the cDNA. That is, amplification reaction was repeated 40 times of heat denaturation (95 ° C., 5 seconds) and annealing (60 ° C., 30 seconds), and simultaneously the fluorescence of CybrGreen bound to DNA was monitored to measure the amplification of the DNA. Quantification was performed when the amount of mRNA was 1. The primers for mouse type I collagen, decorin, and GAPDH used were Thermal Cycler Dice ™ Real.
Time System TP800
Designed with Software Ver. 1.02A. The type I collagen sequence is 5'-ATG
CCGCGCACCCAAGATG-3 ′ (Forward), 5′-TGAGGCAC
AGACGGCTGAGTA-3 ′ (Reverse), GAPDH sequence is 5′-TG
TGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '(Forward), 5'-TTGCTG
TTGAAGTCGCAGGGAG-3 ′ (Reverse).
The results are shown in Table 2, respectively. The result shows that the mRNA expression level of the UV (−) control group is 1
The relative value is shown.
表２より、ＵＶ（＋）コントロール群では、ＵＶ（−）コントロール群と比較してI型
コラーゲンのｍＲＮＡ量が減少しており、ＵＶＢ照射によるI型コラーゲンのｍＲＮＡの
減少が認められた。一方、本発明の実施例３投与群では、ＵＶ（−）コントロール群と比
較してI型コラーゲンのｍＲＮＡ量が増加した。
このように、ヒアルロン酸の経口投与により、I型コラーゲンのｍＲＮＡ量が増加する
ことが確認された。
From Table 2, the amount of type I collagen mRNA was decreased in the UV (+) control group as compared to the UV (−) control group, and a decrease in type I collagen mRNA due to UVB irradiation was observed. On the other hand, in the group administered with Example 3 of the present invention, the amount of type I collagen mRNA increased as compared to the UV (−) control group.
Thus, it was confirmed that the amount of type I collagen mRNA was increased by oral administration of hyaluronic acid.
４．３．実施例４
実施例１で使用したヒアルロン酸（平均分子量３０万のヒアルロン酸）を経口用光老化
抑制剤として使用して、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。
4.3. Example 4
Using the hyaluronic acid used in Example 1 (hyaluronic acid having an average molecular weight of 300,000) as an oral photoaging inhibitor, soft capsules having the following composition were prepared.
［配合割合］
経口用光老化抑制剤（平均分子量３０万のヒアルロン酸） ２０％
オリーブ油 ５０％
ミツロウ １０％
中鎖脂肪酸トリグリセリド １０％
乳化剤 １０％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％
[Combination ratio]
Oral photoaging inhibitor (hyaluronic acid with an average molecular weight of 300,000) 20%
50% olive oil
Beeswax 10%
Medium chain fatty acid triglyceride 10%
Emulsifier 10%
――――――――――――――――――――――――――――――――
100%
４．４．実施例５
実施例２で使用したヒアルロン酸（平均分子量５万のヒアルロン酸）を経口用光老化抑
制剤として使用して、下記の配合の散剤（顆粒剤）を製した。
4.4. Example 5
Using the hyaluronic acid (hyaluronic acid having an average molecular weight of 50,000) used in Example 2 as an oral photoaging inhibitor, a powder (granule) having the following composition was prepared.
［配合割合］
経口用光老化抑制剤（平均分子量５万のヒアルロン酸） １０％
乳糖 ６０％
トウモロコシデンプン ２５％
ヒプロメロース ５％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％
[Combination ratio]
Oral photoaging inhibitor (hyaluronic acid with an average molecular weight of 50,000) 10%
Lactose 60%
Corn starch 25%
Hypromellose 5%
――――――――――――――――――――――――――――――――
100%
４．５．実施例６
実施例３で使用したヒアルロン酸（平均分子量８，０００のヒアルロン酸）を光老化抑
制剤として使用して、下記の配合の錠剤を製した。
4.5. Example 6
Using the hyaluronic acid (hyaluronic acid having an average molecular weight of 8,000) used in Example 3 as a photoaging inhibitor, a tablet having the following composition was produced.
［配合割合］
経口用光老化抑制剤（平均分子量８，０００のヒアルロン酸） ２５％
乳糖 ２４％
結晶セルロース ２０％
トウモロコシデンプン １５％
デキストリン １０％
乳化剤 ５％
二酸化ケイ素 １％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％
[Combination ratio]
Oral photoaging inhibitor (hyaluronic acid with an average molecular weight of 8,000) 25%
Lactose 24%
20% crystalline cellulose
Corn starch 15%
Dextrin 10%
Emulsifier 5%
Silicon dioxide 1%
――――――――――――――――――――――――――――――――
100%
（１） ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする経口用光老化抑制剤であり、
前記ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の分子量が１００万以下であり、
前記経口用光老化抑制剤は、紫外線により誘発されるシワ形成の抑制剤として使用されることを特徴とする、
経口用光老化抑制剤、
（２）皮膚中のコラーゲンおよび／またはデコリンの産生促進剤として使用されることを特徴とする（１）に記載の経口用光老化抑制剤、
（３）ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、前記ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の分子量が１００万以下である、
紫外線により誘発されるシワ形成抑制用経口組成物。
(1) An oral photoaging inhibitor comprising hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient,
The hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof has a molecular weight of 1 million or less,
The oral photoaging inhibitor is used as an inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays,
Oral photoaging inhibitor,
(2) The oral photoaging inhibitor according to (1), which is used as a production promoter for collagen and / or decorin in the skin,
(3) Hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is contained as an active ingredient, and the molecular weight of the hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is 1,000,000 or less.
An oral composition for suppressing wrinkle formation induced by ultraviolet rays.
Claims (3)
する経口用光老化抑制剤。 An oral photoaging inhibitor comprising hyaluronic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
に記載の経口用光老化抑制剤。 It is used as an inhibitor of wrinkle formation induced by ultraviolet rays.
An oral photoaging inhibitor as described in 1. above.
とする請求項１または２に記載の経口用光老化抑制剤。 The oral photoaging inhibitor according to claim 1 or 2, which is used as a production promoter of collagen and / or decorin in the skin.
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