JP2015518169A5

JP2015518169A5 -

Info

Publication number: JP2015518169A5
Application number: JP2015515158A
Authority: JP
Filing date: 2013-05-29
Publication date: 2016-07-14

Description

[0107]本明細書において好ましい態様について示し、記載してきたが、当業者には、本明細書の趣旨から逸脱することなく様々な変形、付加、置換などが可能であることが明らかである。従ってこれらは請求の範囲に定義された本発明の範囲内であるとみなされる。
これに限定されるものではないが、本発明は以下の態様の発明を包含する。
（１）in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施するための方法であって：
ある容量の試験サンプルとある容量のキャリブレーティングサンプルとを混和して最終容量を形成する工程であって、前記キャリブレーティングサンプルの容量は既知濃度のキャリブレータを含み、前記最終容量は試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比を含む、前記工程；
電気泳動ゲルのウェルに充填画分を付着させる工程であって、前記充填画分は前記最終容量の画分である、前記工程；
前記試験サンプルの成分とキャリブレータが共通する分離レーンに沿って互いに分離されるように、電気泳動ゲルの共通する分離レーンに沿って充填画分を分離する工程；
前記共通する分離レーン内でキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とを検出する工程；及び
前記検出する工程に基づいてキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とのレベルを測定し、in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施する工程、
を含む前記方法。
（２）キャリブレータの測定されたレベル、試験サンプルの分離された成分の測定されたレベルと、試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比に基づいて、前記最終容量中の試験サンプル成分の濃度を計算する工程をさらに含む、（１）に記載の方法。
（３）試験サンプルの成分とキャリブレータがそれぞれ、検出可能なシグナルを発生させることができる、または発生させる原因となるシグナル発生分子と結合する、（１）に記載の方法。
（４）前記方法は、試験サンプルの分離された成分及び/またはキャリブレータと、シグナル発生分子と相互作用する能力のある試薬とを接触させる工程をさらに含み、前記シグナル発生分子は、試薬と接触すると検出可能なシグナルを発生させ、前記検出する工程は、前記検出可能なシグナルを検出する工程を含む、（３）に記載の方法。
（５）前記試験サンプルの成分とキャリブレータは、互いに識別可能であるシグナル発生分子に結合する、（３）に記載の方法。
（６）前記試験サンプルの成分が少なくとも二つの異なる成分を含む、（３）に記載の方法。
（７）少なくとも二つの前記成分のそれぞれが異なる検出可能なシグナルに結合し、前記検出可能なシグナルのそれぞれは互いに識別可能である、（６）に記載の方法。
（８）前記検出可能なシグナルは、放射線測定、比色分析、発光または蛍光分析手段により検出可能である、（３）に記載の方法。
（９）前記試験サンプルの一つ以上の前記成分がリポタンパク質粒子またはその一部を含み、前記検出する工程は、前記リポタンパク質粒子またはその一部を検出する工程を含む、（１）に記載の方法。
（１０）前記リポタンパク質粒子またはその一部が、アポリポタンパク質A、アポリポタンパク質B、アポリポタンパク質C、アポリポタンパク質D、アポリポタンパク質E、アポリポタンパク質H、リポタンパク質(a)、高密度リポタンパク質、中間密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質、カイロミクロン、リポタンパク質X、その酸化変異体及び混合物からなる群から選択される、（９）に記載の方法。
（１１）前記付着させる工程は、電気泳動コームを使用して実施する、（１）に記載の方法。
（１２）前記キャリブレータがフルオロフォアである、（１）に記載の方法。
（１３）前記キャリブレータがタンパク質を含む、（１）に記載の方法。
（１４）前記キャリブレータがアルブミンを含む、（１３）に記載の方法。
（１５）前記アルブミンがシグナル発生分子に結合する、（１４）に記載の方法。
（１６）前記アルブミンがフルオロフォアに結合する、（１４）に記載の方法。
（１７）前記キャリブレータは、前記試験サンプルの成分よりも早い速度でゲル電気泳動の間に電気泳動ゲル上を移動する、（１）に記載の方法。
（１８）前記キャリブレータは、前記リポタンパク質粒子よりも早い速度でゲル電気泳動の間に電気泳動ゲル上を移動する、（９）に記載の方法。
（１９）前記試験サンプルが生体サンプルである、（１）に記載の方法。
（２０）前記キャリブレータ及び分離された成分は、前記検出する工程の前に固定される、（１）に記載の方法。
（２１）前記キャリブレータ及び分離された成分は、免疫固定技法により固定され、前記免疫固定技法は、
前記キャリブレータ及び分離された成分を、第一の抗体またはそのフラグメント及び第二の抗体またはそのフラグメントを含む抗血清と接触させる工程であって、前記第一の抗体またはそのフラグメントがキャリブレータと結合し、且つ前記第二の抗体またはそのフラグメントが分離された成分と結合するように接触させる、前記工程；及び
電気泳動ゲルを洗浄して、前記ゲル中の結合していない材料を除去する工程、を含む、（２０）に記載の方法。

Claims

in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施するための方法であって、
ある容量の試験サンプルとある容量のキャリブレーティングサンプルとを混和して最終容量を形成する工程、ここで、前記キャリブレーティングサンプルの容量は既知濃度のキャリブレータを含み、前記最終容量は試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比を含む；
電気泳動ゲルのウェルに充填画分を付着させる工程、ここで、前記充填画分は前記最終容量の画分である；
前記試験サンプルの成分と前記キャリブレータが共通する分離レーンに沿って互いに分離されるように、電気泳動ゲルの共通する分離レーンに沿って充填画分を分離する工程、ここで、試験サンプルの成分とキャリブレータがそれぞれ、検出可能なシグナルを発生させることができ、または発生させる原因となるシグナル発生分子と結合し、ここで、試験サンプルの成分とキャリブレータは、互いに識別可能であるシグナル発生分子に結合する；
前記共通する分離レーン内でキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とを検出する工程；及び
前記検出する工程に基づいてキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とのレベルを測定し、in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施する工程；
を含む、前記方法。
キャリブレータの測定されたレベル、試験サンプルの分離された成分の測定されたレベルと、試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比に基づいて、前記最終容量中の試験サンプル成分の濃度を計算する工程；
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
試験サンプルの分離された成分及び/またはキャリブレータと、シグナル発生分子と相互作用する能力のある試薬とを接触させる工程、ここで、前記シグナル発生分子は、試薬と接触すると検出可能なシグナルを発生させ、ここで、前記検出する工程は、前記検出可能なシグナルを検出する；
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記試験サンプルの成分が少なくとも二つの異なる成分を含む、請求項１に記載の方法。
少なくとも二つの前記成分のそれぞれが異なる検出可能なシグナルに結合し、前記検出可能なシグナルのそれぞれは互いに識別可能である、請求項４に記載の方法。
前記検出可能なシグナルは、放射線測定、比色分析、発光または蛍光分析手段により検出可能である、請求項１に記載の方法。
前記試験サンプルの一つ以上の前記成分がリポタンパク質粒子またはその一部を含み、前記検出する工程は、前記リポタンパク質粒子またはその一部を検出する工程を含む、請求項１に記載の方法。
前記リポタンパク質粒子またはその一部が、アポリポタンパク質A、アポリポタンパク質B、アポリポタンパク質C、アポリポタンパク質D、アポリポタンパク質E、アポリポタンパク質H、リポタンパク質(a)、高密度リポタンパク質、中間密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質、カイロミクロン、リポタンパク質X、その酸化変異体及び混合物からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
前記付着させる工程は、電気泳動コームを使用して実施する、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータがフルオロフォアである、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータがタンパク質を含む、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータがアルブミンを含む、請求項１１に記載の方法。
前記アルブミンがシグナル発生分子に結合する、請求項１２に記載の方法。
前記アルブミンがフルオロフォアに結合する、請求項１２に記載の方法。
前記キャリブレータは、前記試験サンプルの成分よりも早い速度でゲル電気泳動の間に電気泳動ゲル上を移動する、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータは、前記リポタンパク質粒子よりも早い速度でゲル電気泳動の間に電気泳動ゲル上を移動する、請求項７に記載の方法。
前記試験サンプルが生体サンプルである、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータ及び分離された成分は、前記検出する工程の前に固定される、請求項１に記載の方法。
前記キャリブレータ及び分離された成分は、免疫固定技法により固定され、前記免疫固定技法は、
第一の抗体またはそのフラグメントがキャリブレータと結合し、且つ第二の抗体またはそのフラグメントが分離された成分と結合するように、前記キャリブレータ及び分離された成分を、第一の抗体またはそのフラグメント及び第二の抗体またはそのフラグメントを含む抗血清と接触させる工程；及び
電気泳動ゲルを洗浄して、前記ゲル中の結合していない材料を除去する工程；
を含む、請求項１８に記載の方法。
前記キャリブレータが、フルオロフォアに結合する、タンパク質又はポリペプチドを含む、請求項１に記載の方法。
in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施するための方法であって、
ある容量の試験サンプルとある容量のキャリブレーティングサンプルとを混和して最終容量を形成する工程、ここで、前記キャリブレーティングサンプルの容量は既知濃度のキャリブレータを含み、前記最終容量は試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比を含む；
電気泳動ゲルのウェルに充填画分を付着させる工程、ここで、前記充填画分は前記最終容量の画分である；
前記試験サンプルの成分と前記キャリブレータが共通する分離レーンに沿って互いに分離されるように、電気泳動ゲルの共通する分離レーンに沿って充填画分を分離する工程、ここで、試験サンプルの成分とキャリブレータがそれぞれ、検出可能なシグナルを発生させることができ、または発生させる原因となるシグナル発生分子と結合する；
試験サンプルの分離された成分及び/またはキャリブレータと、シグナル発生分子と相互作用する能力のある試薬とを接触させる工程、ここで、前記シグナル発生分子は、試薬と接触すると検出可能なシグナルを発生させる；
前記共通する分離レーン内でキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とを検出する工程、ここで、前記検出する工程は、前記検出可能なシグナルを検出する工程を含む；及び
前記検出する工程に基づいてキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とのレベルを測定し、in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施する工程；
を含む、前記方法。
in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施するための方法であって、
ある容量の試験サンプルとある容量のキャリブレーティングサンプルとを混和して最終容量を形成する工程、ここで、前記キャリブレーティングサンプルの容量は既知濃度のキャリブレータを含み、前記最終容量は試験サンプル対キャリブレーティングサンプルの既知容量比を含み、ここで、前記キャリブレータが、シグナル発生分子に結合するアルブミンを含む；
電気泳動ゲルのウェルに充填画分を付着させる工程、ここで、前記充填画分は前記最終容量の画分である；
前記試験サンプルの成分とキャリブレータが共通する分離レーンに沿って互いに分離されるように、電気泳動ゲルの共通する分離レーンに沿って充填画分を分離する工程；
前記共通する分離レーン内でキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とを検出する工程；及び
前記検出する工程に基づいてキャリブレータと試験サンプルの分離された成分とのレベルを測定し、in-situキャリブレーションを用いて電気泳動を実施する工程；
を含む、前記方法。