JP2015210174A - 膜タンパク質評価法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】[1]RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を形成する工程と、[2]前記工程[1]後のセンサーチップの表面に、前記膜タンパク質との相互作用を評価する対象となる被験物質の溶液を接触させる工程とを含むことを特徴とする測定方法。前記工程[1]は、前記薄層を形成するために、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理(たとえばプラズマ処理)が施されたRIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜の溶液を接触させる工程であることが好ましい。
【選択図】なし
Description
[項1]
反射干渉分光法(RIfS)に基づく膜タンパク質の相互作用測定方法であって、
[1]RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を形成する工程と、
[2]前記工程[1]後のセンサーチップの表面に、前記膜タンパク質との相互作用を評価する対象となる被験物質の溶液を接触させる工程と
を含むことを特徴とする相互作用測定方法。
[項2]
前記工程[1]が、前記薄層を形成するために、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理が施されたRIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜の溶液を接触させる工程である、項1に記載の相互作用測定方法。
[項3]
前記親水化処理がプラズマ処理である、項2に記載の相互作用測定方法。
[項4]
前記RIfS用センサーチップの光学薄膜が、ZrO2(酸化ジルコニウム)、TiO2(二酸化チタン)、Ta2O5(五酸化タンタル)、Nb2O5(五酸化ニオブ)、ITO(酸化インジウムスズ)、HfO2(酸化ハフニウム)またはSiN(窒化シリコン)のいずれかの化合物からなるものである、項1〜3のいずれか一項に記載の相互作用測定方法。
[項5]
RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を備えることを特徴とする、RIfS用センサーチップ。
[項6]
前記膜タンパク質含有脂質二重膜からなる厚さ2nm以上7nm以下の薄層が、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理が施されたRIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜の溶液を接触させることにより形成されたものである、項5に記載のRIfS用センサーチップ。
[項7]
前記親水化処理がプラズマ処理である、項6に記載のRIfS用センサーチップ。
[項8]
前記RIfS用センサーチップの光学薄膜が、ZrO2(酸化ジルコニウム)、TiO2(二酸化チタン)、Ta2O5(五酸化タンタル)、Nb2O5(五酸化ニオブ)、ITO(酸化インジウムスズ)、HfO2(酸化ハフニウム)またはSiN(窒化シリコン)のいずれかの化合物からなるものである、項5〜7のいずれか一項に記載のRIfS用センサーチップ。
以下、本発明の実施形態の一例を示す図1を参照しながら、本発明の相互作用測定方法について説明する。
本発明のRIfSに基づく膜タンパク質の相互作用測定方法は、少なくとも下記[1]および[2]の工程を含むものであり、必要に応じて公知のRIfSに基づく相互作用測定方法で用いられているその他の工程を含んでいてもよい。
膜タンパク質含有脂質二重膜溶液処理工程は、RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を形成する工程である。前述したように、本発明における典型的な実施形態では、前記光学薄膜の表面は、膜タンパク質含有脂質二重膜溶液処理工程を行う前に、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理が施された状態になっている。
被験物質溶液処理工程は、膜タンパク質含有脂質二重膜溶液処理工程後のセンサーチップの表面に、前記膜タンパク質との相互作用を評価する対象となる被験物質の溶液を接触させる工程である。
[1.センサーチップの作製工程]
シリコンウエハ(100)の上に、ZrO2(酸化ジルコニウム)を70nmの厚さになるようCVDで蒸着し、ZrO2からなる光学薄膜を最表面に有する無修飾のセンサーチップを作製した。
RIfS方式の分子間相互作用測定装置(商品名「MI−Affinity」、コニカミノルタ(株)製)の電源を入れて光源が安定するまで約20分間待機した。
ベースラインが安定化したのを確認した後、分光反射率の最小値を取る波長のシフト(Δλ)の測定を開始した。測定開始10分後、MPR1を含有するベシクル(MRP1ベシクル)、およびコントロールとしての、MRP1を含有しないベシクル(コントロールベシクル)を、前記ランニングバッファー10mM Tris−HClで50倍希釈した溶液100μLを、インジェクターよりセンサーチップ上に導入した。これら2種類の試薬はべクトン・ディッキンソン アンド カンパニー社より購入したものであり、Tris−HClで50倍希釈した溶液の濃度は、そこに含まれる膜タンパク質の濃度として100μg/mLである。さらに20分後(測定開始30分後)、10μg/mLの抗MRP1抗体(clone: IU2H10, Novus Biologicals社)溶液100μLをインジェクターよりセンサーチップ上に導入した。
[3.測定工程]において、MRP1ベシクルおよびコントロールベシクルそれぞれについて、前記ランニングバッファー10mM Tris−HClで500倍希釈した溶液(溶液の濃度は、そこに含まれる膜タンパク質の濃度として10μg/mLである。)100μLを、インジェクターよりセンサーチップ上に導入することで膜タンパク質の固定化を行った。それ以外は実施例と同様の方法にて測定を実施した。
[2.測定準備工程]において、無修飾のセンサーチップに対してプラズマ照射による親水化処理を行わなかった。それ以外は実施例と同様の方法にて測定を実施した。
10 測定部材
12 センサーチップ
12a 基板
12b 光学薄膜
14 フローセル
14a 溝
14b 密閉流路
14c 流入口
14d 流出口
16 膜タンパク質
18 脂質二重膜
20 白色光源
30 分光器
40 光伝達部
41 第一の光ファイバ
42 第二の光ファイバ
50 制御装置
60 試料溶液
62 被験物質
Claims (8)
- 反射干渉分光法(RIfS)に基づく膜タンパク質の相互作用測定方法であって、
[1]RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を形成する工程と、
[2]前記工程[1]後のセンサーチップの表面に、前記膜タンパク質との相互作用を評価する対象となる被験物質の溶液を接触させる工程と
を含むことを特徴とする相互作用測定方法。 - 前記工程[1]が、前記薄層を形成するために、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理が施されたRIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜の溶液を接触させる工程である、請求項1に記載の相互作用測定方法。
- 前記親水化処理がプラズマ処理である、請求項2に記載の相互作用測定方法。
- 前記RIfS用センサーチップの光学薄膜が、ZrO2(酸化ジルコニウム)、TiO2(二酸化チタン)、Ta2O5(五酸化タンタル)、Nb2O5(五酸化ニオブ)、ITO(酸化インジウムスズ)、HfO2(酸化ハフニウム)またはSiN(窒化シリコン)のいずれかの化合物からなるものである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の相互作用測定方法。
- RIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に膜タンパク質含有脂質二重膜からなる平均厚さが2nm以上7nm以下の薄層を備えることを特徴とする、RIfS用センサーチップ。
- 前記膜タンパク質含有脂質二重膜からなる厚さ2nm以上7nm以下の薄層が、空気中での水との静的接触角が10°以下となる親水化処理が施されたRIfS用センサーチップの光学薄膜の表面に、膜タンパク質含有脂質二重膜の溶液を接触させることにより形成されたものである、請求項5に記載のRIfS用センサーチップ。
- 前記親水化処理がプラズマ処理である、請求項6に記載のRIfS用センサーチップ。
- 前記RIfS用センサーチップの光学薄膜が、ZrO2(酸化ジルコニウム)、TiO2(二酸化チタン)、Ta2O5(五酸化タンタル)、Nb2O5(五酸化ニオブ)、ITO(酸化インジウムスズ)、HfO2(酸化ハフニウム)またはSiN(窒化シリコン)のいずれかの化合物からなるものである、請求項5〜7のいずれか一項に記載のRIfS用センサーチップ。
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