JP2015209400A - Novel tripeptide, peptide-containing composition, and use of these, and eating inhibitor, anti-obesity agent, artery relaxing agent, hypotensive agent, metabolic syndrome preventive/ameliorative agent, or food composition for appetite modulation, comprising these as active ingredients - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a novel tripeptide and a peptide containing composition which are applicable to various fields, and use of these, and an eating inhibitor, an anti-obesity agent, an artery relaxing agent, a hypotensive agent, a metabolic syndrome preventive/ameliorative agent, or a food composition for appetite modulation, comprising these as active ingredients.SOLUTION: The invention provides a novel tripeptide comprising a sequence of pyroglutamate-arginine-phenylalanine derived from foxtail millet. The invention also provides an eating inhibitor, an anti-obesity agent, an artery relaxing agent, a hypotensive agent, or a metabolic syndrome preventive/ameliorative agent, which comprise the novel tripeptide. The invention also provides a food composition for appetite modulation, which comprises the novel tripeptide.

Description

本発明は、新規トリペプチド及びペプチド含有組成物に関し、さらには、それらの使用、それらを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、メタボリックシンドローム予防改善剤、又は食欲調節用の食品組成物に関する。   The present invention relates to novel tripeptides and peptide-containing compositions, and further to their use, antifeedants, anti-obesity agents, arterial relaxants, antihypertensive agents, and metabolic syndrome prevention / improvement agents containing them as active ingredients Or a food composition for appetite regulation.

一般に、高カロリ食、飲酒・喫煙、運動不足、ストレス等の生活習慣が原因で生ずる病気として、肥満、高血圧、高血糖、高脂血症等の生活習慣病が知られている。これらの生活習慣病は、心筋梗塞、脳梗塞等の成人病の原因とされる動脈硬化症の危険因子として知られ、社会的に重大な問題となっている。一般に、上記生活習慣病のうち複数種類の生活習慣病を併発している症状をメタボリック症候群という。より具体的には、内臓脂肪蓄積等の中心性肥満の症状がある他に、高血圧、高血糖、及び高脂血症のうち２つ以上の症状に該当する場合をいう。これらの症状は、食生活の改善、適度な運動以外に根本的な治療法が確立されていないのが現状である。メタボリック症候群に該当する人は、健常者に比べ、心筋梗塞や脳梗塞を発症するリスクが高いため、現在、高血圧等のメタボリック症候群該当因子の予防薬や治療薬の開発が急務となっている。   In general, lifestyle-related diseases such as obesity, hypertension, hyperglycemia, and hyperlipidemia are known as diseases caused by lifestyle such as high calorie diet, drinking / smoking, lack of exercise, and stress. These lifestyle-related diseases are known as risk factors for arteriosclerosis, which is a cause of adult diseases such as myocardial infarction and cerebral infarction, and are a serious social problem. In general, a symptom that is accompanied by a plurality of types of lifestyle-related diseases among the lifestyle-related diseases is called metabolic syndrome. More specifically, it refers to a case in which there are two or more symptoms among hypertension, hyperglycemia, and hyperlipidemia in addition to symptoms of central obesity such as visceral fat accumulation. The present condition is that these symptom have not been fundamentally cured except for improvement of eating habits and moderate exercise. Since people who fall into metabolic syndrome are at a higher risk of developing myocardial infarction and cerebral infarction than healthy individuals, there is an urgent need to develop preventives and therapeutic agents for factors associated with metabolic syndrome such as hypertension.

従来より、特許文献１，２に開示される特定のペプチドを含有する抗肥満剤が知られている。特許文献１は、アルギニン−芳香族アミノ酸配列を含む抗肥満ペプチドについて開示する。特許文献２は、天然素材として大豆ペプチド、コラーゲンペプチド、及びグルタミンを含有する体脂肪減少促進剤について開示する。   Conventionally, anti-obesity agents containing specific peptides disclosed in Patent Documents 1 and 2 are known. Patent Document 1 discloses an anti-obesity peptide containing an arginine-aromatic amino acid sequence. Patent Document 2 discloses a body fat reduction promoter containing soybean peptide, collagen peptide, and glutamine as natural materials.

国際公開第２０１２／０７０５５４号パンフレットInternational Publication No. 2012/070554 Pamphlet 特開２００２−２０３１２号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2002-20212

本発明の目的とするところは、様々な分野に適用することができる新規トリペプチド及びペプチド含有組成物、並びにそれらの使用、それらを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、メタボリックシンドローム予防改善剤、又は食欲調節用の食品組成物を提供することにある。   The object of the present invention is to provide novel tripeptides and peptide-containing compositions that can be applied in various fields, and their use, feeding inhibitors, anti-obesity agents, arterial relaxation containing them as active ingredients It is to provide an agent, an antihypertensive agent, an agent for improving and preventing metabolic syndrome, or a food composition for appetite regulation.

本発明は、アワ由来のグルテリン加水分解物から新規ペプチドを得たことに基づくものである。また、かかる新規ペプチドが優れた摂食抑制作用等を有することを見出したことに基づくものである。   The present invention is based on obtaining a novel peptide from a millet hydrolyzate derived from millet. Moreover, it is based on having discovered that this novel peptide has the antifeeding effect etc. which were excellent.

上記目的を達成するために、本発明の一態様では、アワ由来のピログルタミン酸−アルギニン−フェニルアラニンの配列からなる新規トリペプチドが提供される。また、本発明の別の一態様では、前記新規トリペプチドを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤が提供される。摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のために用いられる旨の表示を付すことが好ましい。また、本発明の別の一態様では、前記新規トリペプチドを含有する食欲調節用の食品組成物が提供される。本発明の別の一態様では、前記新規トリペプチドを経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用（ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。   In order to achieve the above object, in one embodiment of the present invention, there is provided a novel tripeptide consisting of a millet-derived pyroglutamic acid-arginine-phenylalanine sequence. In another aspect of the present invention, an antifeedant, an anti-obesity agent, an arterial relaxant, a hypotensive agent, or a metabolic syndrome prevention / amelioration agent containing the novel tripeptide as an active ingredient is provided. It is preferable to attach an indication that it is used for suppression of eating, anti-obesity, arterial relaxation, blood pressure lowering, or prevention of metabolic syndrome. Moreover, in another one aspect | mode of this invention, the food composition for appetite regulation containing the said novel tripeptide is provided. In another aspect of the present invention, the novel tripeptide is orally ingested, which is used for suppression of feeding, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or prevention of metabolic syndrome (medical practice for humans). Are provided).

また、本発明の別の一態様では、アワ由来のグルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させた酵素処理物を、特定の条件で高速液体クロマトグラフィによる分離処理に供したときに得られる成分を含有するペプチド含有組成物であって、前記特定の条件は、内径２０ｍｍで長さ２５０ｍｍのＯＤＳカラムを使用すること、ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入時は、０．１％トリフルオロ酢酸／水混合物、その後、５０分までの間に０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物が５０容量％となる溶媒を移動相として使用すること、及び移動相の流速が１０ｍＬ／分であることを含み、ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入後２０〜３０分までの間にカラムから溶出する成分を含有するペプチド含有組成物が提供される。前記プロテアーゼは、サーモリシンであることが好ましい。   In another aspect of the present invention, when an enzyme-treated product obtained by allowing a protease that cleaves the N-terminal of a hydrophobic amino acid to milletin derived from millet is subjected to a separation treatment by high performance liquid chromatography under specific conditions. A peptide-containing composition containing the obtained component, wherein the specific condition is that an ODS column having an inner diameter of 20 mm and a length of 250 mm is used, and when the enzyme-treated product is charged into the ODS column, 0.1% Use a trifluoroacetic acid / water mixture as the mobile phase, followed by 50% by volume of the 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile mixture up to 50 minutes, and a mobile phase flow rate of 10 mL / min. There is provided a peptide-containing composition containing a component that elutes from the column within 20 to 30 minutes after the enzyme-treated product is charged into the ODS column. It is. The protease is preferably thermolysin.

また、本発明の別の一態様では、前記ペプチド含有組成物を有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤が提供される。摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のために用いられる旨の表示を付すことが好ましい。また、本発明の別の一態様では、前記ペプチド含有組成物を含有する食欲調節用の食品組成物が提供される。本発明の別の一態様では、前記ペプチド含有組成物を経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用（ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。   In another aspect of the present invention, an antifeedant, an anti-obesity agent, an arterial relaxant, a hypotensive agent, or a metabolic syndrome prevention / amelioration agent containing the peptide-containing composition as an active ingredient is provided. It is preferable to attach an indication that it is used for suppression of eating, anti-obesity, arterial relaxation, blood pressure lowering, or prevention of metabolic syndrome. Moreover, in another one aspect | mode of this invention, the food composition for appetite regulation containing the said peptide containing composition is provided. In another aspect of the present invention, the use of the peptide-containing composition for oral administration of the peptide-containing composition for the prevention of feeding, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or prevention of metabolic syndrome (medical treatment for humans) (Excluding acts).

本発明によれば、新規トリペプチド及びペプチド含有組成物を様々な分野に適用することができる。   According to the present invention, the novel tripeptide and peptide-containing composition can be applied to various fields.

アワグルテリンの各プロテアーゼ分解物の動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＣＴ−１）のカルシウム応答性を示すグラフ。The graph which shows the arterial relaxation rate of each protease decomposition product of awaglutelin, and the calcium responsiveness of an enteroendocrine cell (SCT-1). アワグルテリンのサーモリシン分解物の消化管運動抑制作用及び血圧降下作用を示すグラフ（各数値は、平均±標準偏差を示す。＊は、コントロール群に比べＰ＜０．０５である場合を示す）。（ａ）消化管運動抑制作用を示すグラフ。（ｂ）血圧降下作用を示すグラフ。The graph which shows the gastrointestinal motility inhibitory effect and blood pressure lowering effect | action of the thermolysin decomposition product of awagluterin (each numerical value shows the average +/- standard deviation. * Shows the case where it is P <0.05 compared with a control group). (A) The graph which shows a digestive tract movement inhibitory effect. (B) A graph showing blood pressure lowering action. アワグルテリンのサーモリシン分解物のＨＰＬＣチャートを示すグラフ。The graph which shows the HPLC chart of the thermolysin decomposition product of awaglutelin. アワグルテリンのサーモリシン分解物のＨＰＬＣの各フラクションにおける動脈弛緩率とＳＴＣ−１のカルシウム応答性を示すグラフ。The graph which shows the arterial relaxation rate and calcium responsiveness of STC-1 in each HPLC fraction of the thermolysin degradation product of awaglutelin. アワグルテリンのサーモリシン分解物のＨＰＬＣの各フラクション（細分取）における動脈弛緩率とＳＴＣ−１のカルシウム応答性を示すグラフ。The graph which shows the arterial relaxation rate and the calcium responsiveness of STC-1 in each HPLC fraction (fractionation) of the thermolysin degradation product of awaglutelin. ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ（ｐＥＲＦ）配列及びＡｒｇ−Ｐｈｅ（ＲＦ）配列の動脈弛緩作用と血圧降下作用を示すグラフ（各数値は、平均±標準偏差を示す。＊は、コントロール群に比べＰ＜０．０５である場合を示す。＊＊は、コントロール群に比べＰ＜０．０１である場合を示す）。（ａ）動脈弛緩率を示すグラフ。（ｂ）血圧降下作用を示すグラフ。A graph showing arterial relaxing action and blood pressure lowering action of the pyroGlu-Arg-Phe (pERF) sequence and Arg-Phe (RF) sequence (each numerical value shows mean ± standard deviation. * indicates P <0 compared to the control group) .05 indicates a case where ** indicates a case where P <0.01 compared to the control group). (A) Graph showing arterial relaxation rate. (B) A graph showing blood pressure lowering action. ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅの配列の摂食抑制作用を示すグラフ（各数値は、平均±標準偏差を示す。＊は、コントロール群に比べＰ＜０．０５である場合を示す）。The graph which shows the feeding inhibitory effect | action of the arrangement | sequence of pyroGlu-Arg-Phe (each numerical value shows mean +/- standard deviation. * shows the case where it is P <0.05 compared with a control group).

以下、本発明のトリペプチドを具体化した一実施形態を説明する。
本実施形態の新規トリペプチドは、ピログルタミン酸−アルギニン−フェニルアラニン（ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ）の配列を有する。この新規トリペプチドを構成するアミノ酸は、Ｌ体のアミノ酸、Ｄ体のアミノ酸、又はＤＬ体のアミノ酸（Ｄ体とＬ体が混合されたアミノ酸であればラセミ体といずれか一方のエナンチオマーが過剰なアミノ酸のいずれも含まれる）のいずれを使用してもよい。好ましくはＬ体のアミノ酸のみ、又はＤ体のアミノ酸のみからなるペプチドが用いられる。より好ましくは、Ｌ体のアミノ酸のみからなるペプチドがよい。本実施形態の新規トリペプチドは、塩、溶媒和物等の形態を包含する。 Hereinafter, an embodiment embodying the tripeptide of the present invention will be described.
The novel tripeptide of this embodiment has the sequence pyroglutamate-arginine-phenylalanine (pyroGlu-Arg-Phe). The amino acid constituting this novel tripeptide is an L-form amino acid, a D-form amino acid, or a DL-form amino acid (if the D-form and L-form are mixed amino acids, the racemate and either enantiomer are excessive. Any of the amino acids may be used. Preferably, peptides consisting of only L-form amino acids or D-form amino acids are used. More preferably, a peptide consisting only of L-form amino acids is preferred. The novel tripeptide of this embodiment includes forms such as salts and solvates.

ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ配列からなるトリペプチドの塩としては、酸付加塩と塩基塩が挙げられる。酸付加塩の具体例としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、過塩素酸等の無機塩、クエン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸の塩が挙げられる。これらの酸付加塩は、１種類を用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。塩基塩の具体例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。これらの塩基塩は、１種類を用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。   Examples of the tripeptide salt comprising the pyroGlu-Arg-Phe sequence include acid addition salts and base salts. Specific examples of acid addition salts include inorganic salts such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, perchloric acid, citric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, p- Examples thereof include salts of organic acids such as toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, methanesulfonic acid, and trifluoroacetic acid. One type of these acid addition salts may be used, or two or more types may be used in combination. Specific examples of the base salt include alkali metal salts such as sodium, potassium and lithium, and alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium. One type of these base salts may be used, or two or more types may be used in combination.

溶媒和物の具体例としては、水（水和物の場合）、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸、テトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、アセトアミド、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジメトキシエタン等の溶媒和物が挙げられる。これらの溶媒和物は、１種類を用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。   Specific examples of solvates include water (in the case of hydrates), methanol, ethanol, isopropanol, acetic acid, tetrahydrofuran, acetone, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, dimethylacetamide, acetamide, ethylene glycol, propylene glycol, dimethoxyethane, and the like. Of the solvates. One type of these solvates may be used, or two or more types may be used in combination.

次に、上記のように構成された本実施形態の新規トリペプチドの製造方法を説明する。
本実施形態の新規トリペプチドは、例えば天然のタンパク質やポリペプチドをプロテアーゼによる加水分解処理により得ることができる。加水分解されるタンパク質やポリペプチドとしては、アワ由来のグルテリンが挙げられる。グルテリンは、穀物の種子中に含まれ、穀物の具体例としては、アワ、小麦、大麦、ライ麦、米、ヒエ等が挙げられる。これらの原料の中で、効率的に新規トリペプチドが得られる観点からアワグルテリンが用いられる。 Next, the manufacturing method of the novel tripeptide of this embodiment comprised as mentioned above is demonstrated.
The novel tripeptide of this embodiment can be obtained, for example, by hydrolyzing a natural protein or polypeptide with a protease. Examples of the protein and polypeptide to be hydrolyzed include millet derived from millet. Glutelin is contained in cereal seeds, and specific examples of cereals include millet, wheat, barley, rye, rice, millet and the like. Among these raw materials, awagluterin is used from the viewpoint of efficiently obtaining a novel tripeptide.

これらのアワ素材由来のグルテリンは、天然素材をそのままプロテアーゼ処理してもよく、必要に応じて濃縮、脱塩、抽出、精製等の処理を行った後、プロテアーゼ処理してもよい。グルテリンの食品素材からの抽出又は精製方法としては、公知の方法、例えばアルカリ抽出法を採用することができる。   The glutelins derived from these millet materials may be treated with proteases as they are, or may be treated with proteases after concentration, desalting, extraction, purification, etc. as necessary. As a method for extracting or purifying glutelin from a food material, a known method such as an alkali extraction method can be employed.

加水分解処理に用いられるプロテアーゼとして、疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼが用いられる。より具体的には、サーモリシン等が挙げられる。サーモリシンは、金属プロテアーゼに分類され、至適ｐＨは約６．５〜８．５である。サーモリシンは、イソロイシン、ロイシン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン等の大きな疎水性側鎖を持つアミノ残基のＮ末端を優先的に切断するエンドペプチダーゼである。また、単独で又は組み合わせることによりサーモリシンと同様の部位を切断することができる他のプロテアーゼ又は他のプロテアーゼの組み合わせも使用することができる。サーモリシンを用いたタンパク質分解酵素処理は、好ましくは１０〜５５℃、より好ましくは２０〜４５℃、さらに好ましくは３０〜４０℃の条件下で行われる。処理時間は、処理温度により適宜設定されるが、処理効率等の観点から０．５〜４８時間程度反応させる。   As a protease used for the hydrolysis treatment, a protease that cleaves the N-terminus of a hydrophobic amino acid is used. More specifically, thermolysin and the like can be mentioned. Thermolysin is classified as a metalloprotease, and the optimum pH is about 6.5 to 8.5. Thermolysin is an endopeptidase that preferentially cleaves the N-terminus of amino residues having large hydrophobic side chains such as isoleucine, leucine, valine, phenylalanine and methionine. In addition, other proteases or combinations of other proteases that can cleave the same site as thermolysin alone or in combination can also be used. The proteolytic enzyme treatment using thermolysin is preferably performed under conditions of 10 to 55 ° C, more preferably 20 to 45 ° C, and even more preferably 30 to 40 ° C. The treatment time is appropriately set depending on the treatment temperature, but the reaction is carried out for about 0.5 to 48 hours from the viewpoint of treatment efficiency and the like.

グルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させて得られた酵素処理物は、さらに１又は２以上のクロマトグラフィを用いて分離する工程を経ることにより、新規トリペプチドを分離・精製することができる。抽出又は精製工程における分離・精製の程度は、精製された新規トリペプチドを指標とすることにより、又は各種成分分析することにより行うことができる。クロマトグラフィとしては、公知のクロマトグラフィ、例えばガスクロマトグラフィ、液体クロマトグラフィ、超臨界流体クロマトグラフィ、及び薄層クロマトグラフィを用いることができる。液体クロマトグラフィとしては、例えばカラムクロマトグラフィを用いることができ、より具体的には高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）及びオープンカラムクロマトグラフィを挙げることができる。クロマトグラフィ担体としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィ、分配クロマトグラフィ（順相・逆相クロマトグラフィ）、吸着クロマトグラフィ、及び分子排斥クロマトグラフィが挙げられる。分配クロマトグラフィとして、具体的にはシリカゲル担体を用いることが抽出成分の分離効率が優れる観点から好ましい。シリカゲル担体として、表面がオクタデシルシリル基（ＯＤＳ）等により表面修飾されたものを使用してもよい。   An enzyme-treated product obtained by allowing a protease that cleaves the N-terminal of a hydrophobic amino acid to act on glutelin further separates and purifies a novel tripeptide through a step of separation using one or more chromatography. be able to. The degree of separation / purification in the extraction or purification step can be performed by using the purified novel tripeptide as an index or by analyzing various components. As the chromatography, known chromatography such as gas chromatography, liquid chromatography, supercritical fluid chromatography, and thin layer chromatography can be used. As liquid chromatography, column chromatography can be used, for example, and more specifically, high performance liquid chromatography (HPLC) and open column chromatography can be mentioned. Examples of the chromatography carrier include ion exchange chromatography, partition chromatography (normal phase / reverse phase chromatography), adsorption chromatography, and molecular exclusion chromatography. Specifically, it is preferable to use a silica gel carrier as the distribution chromatography from the viewpoint of excellent separation efficiency of the extracted components. A silica gel carrier whose surface is modified with an octadecylsilyl group (ODS) or the like may be used.

例えば、以下の方法により、グルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させて得られた酵素処理物から新規トリペプチドを分離・精製することができる。前記酵素処理物は、特定の条件で高速液体クロマトグラフィによる分離処理に供される。前記特定の条件として、内径２０ｍｍで長さ２５０ｍｍのＯＤＳカラムが使用される。ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入時は、０．１％トリフルオロ酢酸／水混合物、その後、５０分までの間に０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物が５０容量％の線形濃度勾配となる溶媒を移動相として使用される。移動相の流速は、１０ｍＬ／分である。ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入後２０〜３０分までの間にカラムから溶出する成分中に新規トリペプチドが含有される。   For example, by the following method, a novel tripeptide can be separated and purified from an enzyme-treated product obtained by allowing a protease that cleaves the N-terminal of a hydrophobic amino acid to act on glutelin. The enzyme-treated product is subjected to separation treatment by high performance liquid chromatography under specific conditions. As the specific condition, an ODS column having an inner diameter of 20 mm and a length of 250 mm is used. When the enzyme-treated product is loaded onto the ODS column, a 0.1% trifluoroacetic acid / water mixture and then a 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile mixture with a linear concentration gradient of 50% by volume up to 50 minutes. Is used as the mobile phase. The mobile phase flow rate is 10 mL / min. A novel tripeptide is contained in a component that elutes from the column within 20 to 30 minutes after the enzyme-treated product is charged into the ODS column.

かかる新規トリペプチドが含有される画分は、さらにクロマトグラフィに供することにより、又は画分をより細分取することにより、目的とする新規トリペプチドを得ることができる。   The fraction containing the novel tripeptide can be further subjected to chromatography, or the fraction can be further subdivided to obtain the desired novel tripeptide.

次に、本実施形態の新規トリペプチドの作用について説明する。
本実施形態の新規トリペプチドは、高い摂食抑制作用、抗肥満作用、動脈弛緩作用、及び血圧降下作用を有している。また、これらの作用により、メタボリックシンドローム予防改善作用を併せて有している。よって、新規トリペプチドを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、及びメタボリックシンドローム予防改善剤として、好ましく適用することができる。また、それにより、好ましくはヒトに対する医療行為を除く、新規トリペプチドを経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用が提供される。 Next, the effect | action of the novel tripeptide of this embodiment is demonstrated.
The novel tripeptide of this embodiment has a high antifeedant action, anti-obesity action, arterial relaxation action, and blood pressure lowering action. In addition, these actions also have an effect of preventing and improving metabolic syndrome. Therefore, it can be preferably applied as an antifeedant, anti-obesity agent, arterial relaxant, antihypertensive agent, and metabolic syndrome prevention / amelioration agent containing a novel tripeptide as an active ingredient. Also, the use for improving feeding prevention, anti-obesity, arterial relaxation, lowering blood pressure, or preventing metabolic syndrome, characterized in that by taking a novel tripeptide orally, preferably excluding medical practices for humans. Provided.

本実施形態の新規トリペプチドの生体への投与経路は特に限定されず、経口投与、及び非経口投与のいずれを採用してもよい。より具体的には、これらの剤は、各作用の効果・効能とする医薬品、医薬部外品、皮膚外用剤、飲食品等の形態で適用され得る。飲食品として適用する場合、さらに食欲調節用の食品組成物として構成してもよい。   The administration route to the living body of the novel tripeptide of this embodiment is not particularly limited, and any of oral administration and parenteral administration may be adopted. More specifically, these agents can be applied in the form of pharmaceuticals, quasi-drugs, external preparations for skin, foods and drinks, etc. having the effects and effects of each action. When applied as a food or drink, it may be configured as a food composition for appetite control.

本実施形態の新規トリペプチドを医薬品、医薬部外品、及び皮膚外用剤として使用する場合は、服用（経口摂取）、血管内投与、経腸投与、経皮投与、腹腔内投与の他、患部に塗布又は直接患部に投与する方法等のあらゆる投与方法を採用することが可能である。これらの中で、容易に摂取が可能なことから服用が好ましい。   When the novel tripeptide of this embodiment is used as a pharmaceutical, a quasi-drug, and a skin external preparation, in addition to taking (oral intake), intravascular administration, enteral administration, transdermal administration, intraperitoneal administration, affected area Any administration method such as a method of applying or directly administering to the affected part can be employed. Among these, taking is preferable because it can be taken easily.

剤形としては、各投与方法に適した剤形を適宜採用することができるが、例えば、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、液剤、注射剤、軟膏、スプレー剤、シート剤、散剤等が挙げられる。医薬組成物の形で投与される場合、製剤用担体と混合して調製されることが好ましい。製剤用担体としては、製剤分野において公知の担体を適用することができるが、本実施形態の新規トリペプチドと反応しない物質が好ましく適用される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形態であってもよい。錠剤又は顆粒剤の場合、周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本実施形態の新規トリペプチドを水、生理食塩水、又はブドウ糖溶液に溶解させて調製してもよい。また緩衝剤及び保存剤を添加してもよい。   As the dosage form, a dosage form suitable for each administration method can be appropriately adopted. For example, powder, powder, granule, tablet, capsule, pill, suppository, liquid, injection, ointment, spray Agents, sheet agents, powders and the like. When administered in the form of a pharmaceutical composition, it is preferably prepared by mixing with a pharmaceutical carrier. As the pharmaceutical carrier, a carrier known in the pharmaceutical field can be applied, but a substance that does not react with the novel tripeptide of this embodiment is preferably applied. The liquid preparation may be dissolved or suspended in water or other appropriate solvent at the time of use. In the case of a tablet or granule, it may be coated by a known method. In the case of an injection, the novel tripeptide of this embodiment may be prepared by dissolving in water, physiological saline, or a glucose solution. Buffering agents and preservatives may also be added.

本実施形態の新規トリペプチドを飲食品に適用する場合、各疾患の患者用の飲食品に好ましく採用される。本実施形態の新規トリペプチドを種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって使用することができる。また、本実施形態の新規トリペプチド自体を、食欲調節用の食品組成物として構成してもよい。飲食品の形態としては、特に限定されず、液状、粉末状、ゲル状、固形状等のいずれであってもよく、また剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤のいずれであってもよい。その中でも、吸湿性が抑えられることから、カプセル剤であることが好ましい。飲食品は、製剤用担体と混合して調製されてもよい。   When applying the novel tripeptide of this embodiment to food and drink, it is preferably employed in food and drink for patients with each disease. The novel tripeptide of this embodiment can be used by adding it to various food materials or beverage materials. Moreover, you may comprise the novel tripeptide itself of this embodiment as a food composition for appetite regulation. The form of the food or drink is not particularly limited, and may be any of liquid, powder, gel, solid and the like, and the dosage form is any of tablets, capsules, granules, and drinks. There may be. Among these, a capsule is preferable because hygroscopicity is suppressed. The food and drink may be prepared by mixing with a pharmaceutical carrier.

上述した医薬品又は飲食品に用いることができる製剤用担体、経口摂取用担体、希釈剤、又は賦形剤の具体例としては、乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げられる。   Specific examples of the carrier for formulation, the carrier for oral intake, the diluent, or the excipient that can be used for the above-mentioned pharmaceutical or food and drink include lactose, glucose, mannitol, dextrin, cyclodextrin, starch, sucrose, Magnesium aluminate, synthetic aluminum silicate, sodium carboxymethylcellulose, hydroxypropyl starch, carboxymethylcellulose calcium, ion exchange resin, methylcellulose, gelatin, gum arabic, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, light anhydrous silica Acid, magnesium stearate, talc, tragacanth, bentonite, bee gum, titanium oxide, sorbitan fatty acid ester, sodium lauryl sulfate, Serine, fatty acid glycerol ester, purified lanolin, glycerogelatin, polysorbate, macrogol, vegetable oils, waxes, liquid paraffin, white petrolatum, fluorocarbons, nonionic surfactants, propylene glycol, water and the like.

経口投与用の固形製剤を製造するには、有効成分と賦形剤成分、例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、無水ケイ酸等と混合して散剤とする。さらに必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤等を加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とすることができる。錠剤を製造するには、これらの散剤及び顆粒剤をそのまま打錠してもよく、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤を加えて打錠してもよい。これらの顆粒又は錠剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸メチルポリマー等の腸溶剤基剤で被覆して腸溶剤製剤、又はエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油等で被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造する場合、散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填してもよく、有効成分をそのまま、又はグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油等に溶解した後ゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。   In order to produce a solid preparation for oral administration, the active ingredient and excipient components such as lactose, starch, crystalline cellulose, calcium lactate, silicic anhydride and the like are mixed to obtain a powder. Furthermore, if necessary, a binder such as sucrose, hydroxypropylcellulose, polyvinylpyrrolidone, or the like, a disintegrant such as carboxymethylcellulose or carboxymethylcellulose calcium, and the like can be added to form a granule by wet or dry granulation. In order to produce tablets, these powders and granules may be compressed as they are, or may be tableted with a lubricant such as magnesium stearate and talc. These granules or tablets are coated with an intestinal solvent base such as hydroxypropylmethylcellulose phthalate or methacrylic acid-methyl methacrylate polymer and coated with an enteric solvent preparation, or with ethylcellulose, carnauba wax, hardened oil, etc. to form a sustained-release preparation. You can also. When producing capsules, powders or granules may be filled into hard capsules, and the active ingredients are coated as they are or dissolved in glycerin, polyethylene glycol, sesame oil, olive oil, etc. can do.

経口投与用の液状製剤を製造するには、有効成分と白糖、ソルビトール、グリセリン等の甘味剤とを水に溶解して透明なシロップ剤、更に精油、エタノール等を加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウム等を加えて乳剤又は懸濁剤としてもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、着色剤、保存剤等を加えてもよい。   In order to produce a liquid preparation for oral administration, an active ingredient and a sweetener such as sucrose, sorbitol, and glycerin are dissolved in water to add a transparent syrup, further essential oil, ethanol, etc. to make an elixir, Gum arabic, tragacanth, polysorbate 80, sodium carboxymethyl cellulose and the like may be added to form an emulsion or suspension. These liquid preparations may contain a corrigent, a colorant, a preservative and the like as desired.

注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖等の等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填することができる。更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチン等を加えて真空凍結乾燥し、用時溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等を加えて水中で乳化させることにより注射剤用乳剤とすることもできる。   In order to produce an injection, the active ingredient is optionally adjusted to pH adjusting agents such as hydrochloric acid, sodium hydroxide, lactose, lactic acid, sodium, sodium monohydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, sodium chloride, glucose, etc. It can be dissolved in distilled water for injection together with an isotonic agent, and sterile filtered and filled into ampoules. Further, mannitol, dextrin, cyclodextrin, gelatin and the like may be added and lyophilized in vacuum to form a dissolving injection at the time of use. Alternatively, lecithin, polysorbate 80, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, etc. may be added to the active ingredient and emulsified in water to make an emulsion for injection.

経腸投与又は経皮投与を製造する場合、有効成分をカカオ脂、脂肪酸のトリ、ジ及びモノグリセリド、ポリエチレングリコール等の座剤用基材と共に加湿して溶解し型に流し込んで冷却するか、有効成分をポリエチレングリコール、大豆油等に溶解した後、ゼラチン膜で被覆してもよい。   When manufacturing enteral or transdermal administration, the active ingredients are moistened with suppository base materials such as cacao butter, fatty acid tri, di and monoglycerides, polyethylene glycol, etc., dissolved and poured into a mold for cooling or effective. The component may be dissolved in polyethylene glycol, soybean oil or the like and then coated with a gelatin film.

皮膚用外用剤を製造する場合、有効成分を白色ワセリン、ミツロウ、流動パラフィン、ポリエチレングリコール等に加えて必要ならば加湿して練合し軟膏剤とすることができる。また、ロジン、アクリル酸アルキルエステル重合体等の粘着剤と練合した後ポリアルキル等の不織布に展延してテープ剤とする。   When producing an external preparation for skin, the active ingredient can be added to white petrolatum, beeswax, liquid paraffin, polyethylene glycol or the like and moisturized and kneaded as necessary to obtain an ointment. Further, after kneading with an adhesive such as rosin or alkyl acrylate polymer, it is spread on a non-woven fabric such as polyalkyl to obtain a tape agent.

飲食品の具体例としては、飲料類（コーヒー、ココア、ジュース、清涼飲料、ミネラル飲料、茶飲料、緑茶、紅茶、烏龍茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料等）、ガム、グミ、ゼリー、キャンデー、クッキー、クラッカー、ビスケット、氷菓（アイスクリーム、アイスキャンディ、シャーベット、かき氷等）、レトルト食品、ゼリー状食品（ゼリー、寒天、ゼリー状飲料等）等を挙げることができる。   Specific examples of food and drink include beverages (coffee, cocoa, juice, soft drinks, mineral drinks, tea drinks, green tea, tea, oolong tea, milk drinks, lactic acid bacteria drinks, yogurt drinks, carbonated drinks, etc.), gums, gummi, Examples include jelly, candy, cookies, crackers, biscuits, ice confectionery (ice cream, ice candy, sorbet, shaved ice, etc.), retort food, jelly-like food (jelly, agar, jelly-like beverage, etc.).

本実施形態に係る新規トリペプチドを添加・配合して調製しうる食品としては、いわゆる健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、特定保健用食品、病者用食品・病者用組合わせ食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）又は高齢者用食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）としてもよく、素錠、フィルムコート錠、糖衣錠、顆粒、粉末、タブレット、カプセル（ハードカプセルとソフトカプセルとのいずれも含む。）、チュアブルタイプ、シロップタイプ、ドリンクタイプ等とすることもできる。本実施形態に係る新規トリペプチドを添加・配合した食品の調製は、公知の方法を適宜採用することができる。   Foods that can be prepared by adding and blending the novel tripeptides according to this embodiment include so-called health foods, functional foods, dietary supplements, supplements, foods for specified health use, foods for the sick, and combinations for the sick. It may be a food (Ministry of Health, Labor and Welfare, a special-purpose food) or a food for the elderly (Ministry of Health, Labor and Welfare, a special-purpose food), uncoated tablet, film-coated tablet, sugar-coated tablet, granule, powder, tablet, capsule (hard capsule and soft capsule And chewable type, syrup type, drink type, etc. A publicly known method can be suitably adopted for the preparation of foods to which the novel tripeptide according to this embodiment is added and blended.

本実施形態の新規トリペプチドの投与量は、特に限定されないが、投与方法、投与される者の状態や年齢等により適宜決定される。例えば、成人１日あたり通常は０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．０５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇである。   The dose of the novel tripeptide of the present embodiment is not particularly limited, but is appropriately determined depending on the administration method, the condition and age of the administered person. For example, it is usually 0.01 mg / kg (body weight) to 500 mg / kg (body weight) per day for an adult, preferably 0.05 mg / kg to 100 mg / kg, more preferably 0.1 to 30 mg / kg.

上記実施形態の新規トリペプチドによれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態の新規トリペプチドは、高い摂食抑制作用、抗肥満作用、動脈弛緩作用、血圧降下作用、メタボリックシンドローム予防改善作用を有している。したがって、上記摂食抑制作用等を目的とした医薬品等の各種用途に好ましく適用することができる。 According to the novel tripeptide of the above embodiment, the following effects can be obtained.
(1) The novel tripeptide of this embodiment has a high feeding inhibitory action, an anti-obesity action, an arterial relaxation action, a blood pressure lowering action, and a metabolic syndrome prevention and improving action. Therefore, it can be preferably applied to various uses such as pharmaceuticals for the purpose of suppressing the above-mentioned feeding.

（２）本実施形態の新規トリペプチドは、天然成分であるアワ由来のグルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させた酵素処理物を、各種クロマトグラフィを用いて分離・精製することにより得ることができる。したがって、安価に入手することができる。   (2) The novel tripeptide of the present embodiment is obtained by separating and purifying an enzyme-treated product obtained by allowing a protease that cleaves the N-terminal of a hydrophobic amino acid to act on glutelin derived from millet, which is a natural component, using various chromatographies. Can be obtained. Therefore, it can be obtained at low cost.

なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・アワ由来のグルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させて得られた酵素処理物を、特定の条件で高速液体クロマトグラフィによる分離処理に供したときに得られる成分をペプチド含有組成物として、上述した医薬品及び飲食品等の各種用途に適用してもよい。上記特定の条件は、内径２０ｍｍで長さ２５０ｍｍのＯＤＳカラムが使用される。ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入時は、０．１％トリフルオロ酢酸／水混合物、その後、５０分までの間に０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物が５０容量％となる溶媒を移動相として使用される。移動相の流速が１０ｍＬ／分である。ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入後２０〜３０分までの間にカラムから溶出する成分である。かかる構成によっても、高い摂食抑制作用、抗肥満作用、動脈弛緩作用、血圧降下作用、及びメタボリックシンドローム予防改善作用を期待することができる。よって、ペプチド含有組成物を有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、及びメタボリックシンドローム予防改善剤として適用することができる。また、それにより、好ましくはヒトに対する医療行為を除く、ペプチド含有組成物を経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用が提供される。ペプチド含有組成物は、食欲調節用の食品組成物として構成してもよい。 In addition, you may change the said embodiment as follows.
・ Peptide-containing composition containing components obtained when enzyme-treated product obtained by allowing protease treated to cleave the N-terminal of hydrophobic amino acid to milletin derived from millet is subjected to separation treatment by high performance liquid chromatography under specific conditions You may apply to various uses, such as a pharmaceutical and food-drinks mentioned above as a thing. As the specific condition, an ODS column having an inner diameter of 20 mm and a length of 250 mm is used. When the enzyme-treated product is put into the ODS column, the 0.1% trifluoroacetic acid / water mixture is transferred, and then the solvent in which the 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile mixture becomes 50% by volume within 50 minutes is transferred. Used as a phase. The mobile phase flow rate is 10 mL / min. It is a component that elutes from the column within 20 to 30 minutes after the enzyme-treated product is charged into the ODS column. Such a configuration can also be expected to have a high antifeedant action, an anti-obesity action, an arterial relaxation action, a blood pressure lowering action, and a metabolic syndrome prevention and improvement action. Therefore, it can be applied as an antifeedant, anti-obesity agent, arterial relaxant, antihypertensive agent, and metabolic syndrome prevention / improving agent containing the peptide-containing composition as an active ingredient. Also, thereby preferably taking a peptide-containing composition orally, excluding medical practice for humans, characterized in that it is used for suppression of eating, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or prevention of metabolic syndrome Is provided. The peptide-containing composition may be configured as a food composition for appetite regulation.

・上記実施形態の新規トリペプチド又はペプチド含有組成物は、ヒトが摂取する医薬品又は飲食品等に対して適用することができるのみならず、家畜等の飼養動物に対する飼料、薬剤等に適用してもよい。   -The novel tripeptide or peptide-containing composition of the above embodiment can be applied not only to pharmaceuticals or foods and drinks consumed by humans, but also to feeds, drugs, etc. for domestic animals such as domestic animals. Also good.

・上記実施形態の新規トリペプチド又はペプチド含有組成物は、高い摂食抑制作用、抗肥満作用、動脈弛緩作用、血圧降下作用、メタボリックシンドローム予防改善作用を有している。上記実施形態の新規トリペプチド又はペプチド含有組成物を実験用・研究用試薬として適用してもよい。摂食抑制作用等が関係する生理作用のメカニズムの解明等を目的として用いることができる。   -The novel tripeptide or peptide-containing composition of the above embodiment has a high feeding suppression effect, an anti-obesity effect, an arterial relaxation effect, a blood pressure lowering effect, and a metabolic syndrome prevention and improvement effect. The novel tripeptide or peptide-containing composition of the above embodiment may be applied as an experimental / research reagent. It can be used for the purpose of elucidating the mechanism of physiological action related to feeding inhibition and the like.

・上記実施形態の新規トリペプチド又はペプチド含有組成物は、好ましくは摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、及びメタボリックシンドローム予防改善剤として適用される。しかしながら、上記実施形態の新規トリペプチドの使用は、これらの用途に限定されるものではない。   -The novel tripeptide or peptide-containing composition of the above embodiment is preferably applied as an antifeedant, anti-obesity agent, arterial relaxant, antihypertensive agent, and metabolic syndrome prevention / amelioration agent. However, the use of the novel tripeptide of the above embodiment is not limited to these uses.

・上記実施形態の新規トリペプチド又はペプチド含有組成物は、好ましくは医薬品、医薬部外品、皮膚外用剤、飲食品等の形態で適用され得る。これらに適用する場合、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のために用いられる旨の表示を付すことが、表示のないものと区別することができる観点からより好ましい。   -The novel tripeptide or peptide-containing composition of the above embodiment can be preferably applied in the form of pharmaceuticals, quasi-drugs, external preparations for skin, foods and drinks and the like. When applied to these, the indication that it is used to prevent eating, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or metabolic syndrome prevention is better from the viewpoint that it can be distinguished from those without indication. preferable.

以下に試験例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
＜試験例１：アワグルテリンの加水分解物の血圧降下作用及び摂食抑制作用に関する試験＞
アワグルテリンの各種プロテアーゼによる加水分解物について、血圧降下作用及び摂食抑制作用について測定した。 Although the test example is given below and the embodiment is described more specifically, the present invention is not limited to these.
<Test Example 1: Test on blood pressure lowering action and feeding suppression action of awaglutelin hydrolyzate>
About the hydrolyzate by various proteases of awaglutelin, it measured about the blood pressure lowering effect and the feeding suppression effect.

（１−１）アワグルテリンの抽出及びプロテアーゼ処理
原料としてアワ（４００ｇ）に食塩水（３％ＮａＣｌ）４,０００ｍＬを添加し、超音波微細化粉砕装置（ウルトラソニック）を用いて、４℃で所定時間粉砕・微細処理を行った。その後、遠心分離（１７，０００×ｇ、２０分、４℃）し、得られた沈殿について、さらに７０％エタノールを添加し、再懸濁した。所定時間撹拌後、遠心分離（１７，０００×ｇ、２０分、４℃）を行った。得られた沈殿について、さらに０．１％水酸化ナトリウム液を２４００ｍＬ加え１時間室温で攪拌し、遠心分離（１７，０００×ｇ、２０分、４℃）にて上清を得た。その上清を０．０５Ｍ酢酸でｐＨ４．５に調整した後、更に遠心分離（１７，０００×ｇ、２０分、４℃）で沈殿させた画分を凍結乾燥することによってグルテリンを含有する組成物を得た。本操作を９回おこない、組成物として２７ｇ（タンパク質含有率４１．７９％）を得た。 (1-1) Extract of Awagluterin and Protease Treatment Add 4,000 mL of saline (3% NaCl) to millet (400 g) as a raw material and use an ultrasonic micronizer (Ultrasonic) at 4 ° C. Crushing and fine processing were performed for a predetermined time. Thereafter, the mixture was centrifuged (17,000 × g, 20 minutes, 4 ° C.), and the obtained precipitate was further suspended by adding 70% ethanol. After stirring for a predetermined time, centrifugation (17,000 × g, 20 minutes, 4 ° C.) was performed. The obtained precipitate was further added with 2400 mL of 0.1% sodium hydroxide solution and stirred at room temperature for 1 hour, and a supernatant was obtained by centrifugation (17,000 × g, 20 minutes, 4 ° C.). The supernatant is adjusted to pH 4.5 with 0.05 M acetic acid, and further, the fraction precipitated by centrifugation (17,000 × g, 20 minutes, 4 ° C.) is freeze-dried to contain glutelin. I got a thing. This operation was performed 9 times, and 27 g (protein content 41.79%) was obtained as a composition.

上記のように得られたグルテリンを含有する組成物に水を加え（２０ｍｇ／ｍＬ）、酵素処理用の水溶液を調製した。次に、前記水溶液に、次の各プロテアーゼを添加することにより、反応液を調整した。中性プロテアーゼとしてサーモリシン、アルカリ性プロテアーゼのサチライシン、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）由来の中性プロテアーゼ（スミチームＦＰ）の３種類を使用した。反応液は、各プロテアーゼの至適ｐＨに調整し、酵素：タンパク質＝１：１００となるように、酵素を添加した。続いて、サーモリシン及びサチライシンを添加した反応液を３７℃で、スミチームを添加した反応液を５０℃で、インキュベートすることにより、プロテアーゼ分解酵素処理を実施した。５時間後、分解処理を終了し、アワグルテリンの各プロテアーゼ分解物を得た。   Water was added to the composition containing glutelin obtained as described above (20 mg / mL) to prepare an aqueous solution for enzyme treatment. Next, the reaction solution was prepared by adding the following proteases to the aqueous solution. Three neutral proteases, thermolysin, alkaline protease subtilisin, and neutral protease (Sumiteam FP) derived from Aspergillus oryzae were used. The reaction solution was adjusted to the optimum pH of each protease, and enzymes were added so that enzyme: protein = 1: 100. Subsequently, the protease solution was incubated by incubating the reaction solution to which thermolysin and subtilisin had been added at 37 ° C and the reaction solution to which Sumiteam had been added at 50 ° C. After 5 hours, the degradation treatment was terminated, and each protease degradation product of awaglutelin was obtained.

（１−２）アワグルテリンのプロテアーゼ分解物の動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性に関する試験
上記のように得られた各プロテアーゼ分解物について、血圧降下作用に関連する動脈弛緩率、及び摂食抑制作用に関連する腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性について試験を行った。 (1-2) Test on Arterial Relaxation Rate of Awagluterin Protease Degradation Product and Calcium Responsivity of Enteroendocrine Cells (STC-1) For each protease degradation product obtained as described above, arteries related to blood pressure lowering action The relaxation rate and the calcium responsiveness of intestinal endocrine cells (STC-1) related to the antifeedant effect were tested.

（ａ）使用動物
高血圧自然発症の雄ラット（SHRs/Izm）及び雄性ddYマウス（日本ＳＬＣ社製）を使用した。各動物は、２３℃、１２時間／１２時間の明暗サイクルに制御された部屋で飼育した。餌は、固形ＳＰ飼料（船橋農場社製）及びＣＥ−２（日本クレア社製）を与え、水と共に自由摂取させた。 (A) Animal used Male rats with spontaneous hypertension (SHRs / Izm) and male ddY mice (manufactured by SLC, Japan) were used. Each animal was housed in a room controlled at 23 ° C., 12 hours / 12 hours light / dark cycle. As the bait, solid SP feed (manufactured by Funabashi Farm) and CE-2 (manufactured by CLEA Japan) were given and freely ingested with water.

（ｂ）動脈弛緩実験
高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）（１５〜３４週齢）の腸間膜動脈を摘出し、螺旋状に切開して標本を作成した。Krebs-Henseleit栄養液（（１２０ｍＭのＮａＣｌ，４．７ｍＭのＫＣｌ，１．２ｍＭのＭｇＳＯ_４，１．２ｍＭのＫＨ_２ＰＯ_４，２．５ｍＭのＣａＣｌ_２，２５ｍＭのＮａＨＣＯ_３，１０ｍＭのグルコース）、３７℃、５％ＣＯ_２、９５％Ｏ_２混合ガス飽和）を満たしたマグヌス管中にこの標本を懸垂し、その張力（緊張）変化を歪みトランスデューサー（三栄社製）を介してポリグラフ上に記録した。尚、上記試験の装置は、例えば国際公開第２０１２／０７０５５４号パンフレットの図１を参酌してもよい。 (B) Arterial Relaxation Experiment A mesenteric artery of a spontaneously hypertensive rat (SHR) (15-34 weeks old) was removed, and a specimen was prepared by incising it in a spiral shape. Krebs-Henseleit nutrient solution ((120 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.2 mM MgSO ₄ , 1.2 mM KH ₂ PO ₄ , 2.5 mM CaCl ₂ , 25 mM NaHCO ₃ , 10 mM glucose), The specimen was suspended in a Magnus tube filled with 37 ° C., 5% CO ₂ , 95% O ₂ mixed gas saturation), and the tension (tension) change was applied to a polygraph via a strain transducer (manufactured by Saneisha). Recorded. In addition, the apparatus of the said test may consider FIG. 1 of the international publication 2012/070554 pamphlet, for example.

実験では、腸間膜動脈標本を予めフェニレフリン（血管収縮剤）で収縮させ、その後、上記各プロテアーゼ分解物を添加して添加後の動脈の張力変化を観察した。尚、コントロールとして蒸留水を使用した。結果を図１に示す。   In the experiment, a mesenteric artery specimen was contracted in advance with phenylephrine (a vasoconstrictor), and then each protease degradation product was added to observe changes in the tension of the artery after the addition. Distilled water was used as a control. The results are shown in FIG.

（ｃ）腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性試験
マウス腸内分泌細胞ＳＴＣ−１を用いて、各プロテアーゼ分解物を添加し、細胞応答性を検討した。ＳＴＣ−１細胞において、ＣＣＫ分泌の際に細胞内カルシウム濃度が上昇することが既に知られている。ＣＣＫは、内因性摂食抑制ホルモンであり、その分泌が刺激されると満腹感を惹起することが知られている。ＣＣＫ分泌能を有する腸内分泌細胞として知られるＳＴＣ−１では、細胞内Ｃａ^２＋濃度上昇後にＣＣＫ分泌が促進される。細胞内Ｃａ^２＋濃度は、カルシウム蛍光指示薬Fluo-4を用いて測定した。結果を図１に示す。 (C) Test of calcium responsiveness of enteroendocrine cells (STC-1) Using mouse enteroendocrine cells STC-1, each protease degradation product was added, and cell responsiveness was examined. In STC-1 cells, it is already known that the intracellular calcium concentration increases during CCK secretion. CCK is an endogenous antifeedant hormone and is known to cause a feeling of fullness when its secretion is stimulated. In STC-1, which is known as an enteroendocrine cell having CCK secretion ability, CCK secretion is promoted after an increase in intracellular Ca ²⁺ concentration. Intracellular Ca ²⁺ concentration was measured using the calcium fluorescent indicator Fluo-4. The results are shown in FIG.

図１に示されるように、特に、アワグルテリンのサーモリシン分解物が、優れた動脈弛緩作用を有することが確認された。アワグルテリンのサーモリシン分解物をＳＴＣ−１細胞の培養液中に添加したところＣａ^２＋濃度が認められ、実際にＣＣＫ遊離が促進しているものと考えられる。特に、アワグルテリンのサーモリシン分解物が、優れた動脈弛緩作用及び腸内分泌細胞反応性を有することが確認された。 As shown in FIG. 1, it was confirmed that the thermolysin degradation product of awaglutelin in particular has an excellent arterial relaxing action. When a thermolysin degradation product of awaglutelin was added to the culture solution of STC-1 cells, a Ca ²⁺ concentration was observed, and it is considered that CCK release was actually promoted. In particular, it was confirmed that the thermolysin degradation product of awaglutelin has an excellent arterial relaxing action and intestinal endocrine cell reactivity.

（１−３）アワグルテリンのサーモリシン分解物の消化管運動抑制作用及び血圧降下作用に関する試験
さらに、アワグルテリンのサーモリシン分解物について、消化管運動抑制作用及び血圧降下作用について試験した。 (1-3) Test on Gastrointestinal Movement Suppressing Action and Blood Pressure Lowering Action of Awagluterin Thermolysin Degradation Product Furthermore, the digestion tract movement inhibiting action and blood pressure lowering action of awaglutelin thermolysin degradation product were tested.

（ａ）消化管運動抑制作用
ＣＣＫの代表的な生理作用として消化管運動抑制作用が知られている。雄性ddYマウスを使用した。１８時間絶食後、図２（ａ）に示される投与量でアワグルテリンのサーモリシン分解物を胃ゾンデにより経口投与し、その３０分後に色素溶液を経口投与した。さらに、色素溶液投与５分後に、頚椎脱臼に安楽死させ、消化管を取り出し、色素溶液の移動距離を測定した（ｎ＝５）。移動率は、以下の式により算出した。結果を図２（ａ）に示す。 (A) Gastrointestinal motility inhibitory action As a typical physiological action of CCK, a gastrointestinal motility inhibitory action is known. Male ddY mice were used. After fasting for 18 hours, the thermolysin degradation product of awaglutelin was orally administered with a gastric sonde at the dose shown in FIG. 2 (a), and the dye solution was orally administered 30 minutes later. Further, 5 minutes after the administration of the dye solution, the cervical dislocation was euthanized, the digestive tract was taken out, and the moving distance of the dye solution was measured (n = 5). The migration rate was calculated by the following formula. The results are shown in FIG.

移動率（％）＝（色素溶液移動距離（ｃｍ）／小腸の長さ（ｃｍ））×１００
（ｂ）血圧降下作用の検討
高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）に図２（ｂ）に示される投与量でアワグルテリンのサーモリシン分解物を胃ゾンデにより経口投与した。無麻酔下のラットについて、tail-cuff法での収縮期血圧（Systolic blood pressure）を測定した。血圧測定にはMK-2000（室町機械社製）を使用した。投与前、投与２時間後の血圧を測定し、測定した血圧の変化の結果を図２（ｂ）に示す。 Transfer rate (%) = (Dye solution transfer distance (cm) / length of small intestine (cm)) × 100
(B) Examination of blood pressure lowering effect A spontaneously hypertensive rat (SHR) was orally administered with a thermolysin degradation product of awaglutelin at a dose shown in FIG. Systolic blood pressure was measured for the unanesthetized rat by the tail-cuff method. MK-2000 (Muromachi Kikai Co., Ltd.) was used for blood pressure measurement. The blood pressure was measured before administration and 2 hours after administration, and the results of changes in the measured blood pressure are shown in FIG.

図２（ａ）に示されるように、アワグルテリンのサーモリシン分解物により消化管運動抑制作用を示し、ＣＣＫ様作用を示すことが確認された。また、アワグルテリンのサーモリシン分解物により高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）において血圧降下傾向を示すことが確認された。   As shown in FIG. 2 (a), it was confirmed that the thermolysin degradation product of awaglutelin exhibited a gastrointestinal motility inhibitory action and a CCK-like action. Moreover, it was confirmed that the thermolysin degradation product of awaglutelin shows a tendency to lower blood pressure in spontaneously hypertensive rats (SHR).

＜試験例２：新規トリペプチド（ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ）の血圧降下作用及び摂食抑制作用に関する試験＞
上記のように得られたアワグルテリンのサーモリシン分解物について、逆相ＨＰＬＣにより、その作用本体について、単離を試みた。 <Test Example 2: Test on blood pressure lowering action and feeding inhibitory action of novel tripeptide (pyroGlu-Arg-Phe)>
About the thermolysin degradation product of awaglutelin obtained as described above, an attempt was made to isolate its action body by reverse phase HPLC.

（２−１）アワグルテリンの加水分解物のＨＰＬＣの各画分における動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性に関する試験
（ａ）上記のように得られたアワグルテリンのサーモリシン分解物について、下記ＨＰＬＣの条件にて、分離処理を行った。溶出液は、５分単位で５０分間採取した。それぞれフラクションＡ〜Ｊとする。ＨＰＬＣチャートを図３に示す。
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム（ＯＤＳカラム（コスモシール5C₁₈-ARII：ナカライティスク社製），２０ｍｍ×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ（0.1%TFA H₂O）：Ｂ（0.1%TFA CH₃CN）
Ｂ：０（０分）→５０％（５０分）、直線グラジェント（１％／分）
流速：１０ｍＬ／分
（ｂ）上記のように得られたフラクションＡ〜Ｊについて、動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性について測定した。測定方法は、上記（１−２）欄に示される方法に従った。結果を図４に示す。 (2-1) Test on arterial relaxation rate and calcium responsiveness of enteroendocrine cells (STC-1) in HPLC fractions of awaglutelin hydrolyzate (a) Awaglutelin thermolysin obtained as described above The decomposition product was subjected to separation treatment under the following HPLC conditions. The eluate was collected every 5 minutes for 50 minutes. Let each be fractions AJ. An HPLC chart is shown in FIG.
<HPLC conditions>
Column (ODS column (Cosmo Seal 5C ₁₈ -ARII: manufactured by Nacalai Tesque), 20 mm x 250 mm)
Mobile phase: A (0.1% TFA H ₂ O): B (0.1% TFA CH ₃ CN)
B: 0 (0 min) → 50% (50 min), linear gradient (1% / min)
Flow rate: 10 mL / min (b) The fractions A to J obtained as described above were measured for arterial relaxation rate and calcium responsiveness of enteroendocrine cells (STC-1). The measuring method followed the method shown in the above (1-2) column. The results are shown in FIG.

図４に示されるように、優れた動脈弛緩率又は腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性を示すフラクションとして溶出時間２０〜３０分のフラクションＥ，Ｆが認められた。   As shown in FIG. 4, fractions E and F having an elution time of 20 to 30 minutes were observed as fractions showing an excellent arterial relaxation rate or calcium responsiveness of enteroendocrine cells (STC-1).

かかるフラクションＥ，Ｆの溶出時間の範囲について、さらに１５秒単位で細分取を試みた。得られた各フラクションについて、上記と同様に動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性について測定した。結果を図５に示す。   With respect to the elution time range of the fractions E and F, further subdivision was attempted in units of 15 seconds. For each of the obtained fractions, the rate of arterial relaxation and the calcium responsiveness of intestinal endocrine cells (STC-1) were measured in the same manner as described above. The results are shown in FIG.

図５に示されるように、溶出時間２４〜２５分付近のフラクションＮｏ．４５について、優れた動脈弛緩率及び腸内分泌細胞（ＳＴＣ−１）のカルシウム応答性の両方を示すことが確認された。   As shown in FIG. 5, the fraction no. No. 45 was confirmed to exhibit both excellent arterial relaxation rate and enteroendocrine cell (STC-1) calcium responsiveness.

（２−２）活性成分の特定、及び新規トリペプチド（ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ）の血圧降下作用及び摂食抑制作用に関する試験
（ａ）上記フラクションＮｏ．４５について、ＬＣ／ＭＳにより機能性分子の同定を試みた。その結果、ｐｙｒｏＧｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ（pERF）に相当する分子が含まれていることが判明した。さらに、pERFを化学合成し、その生理作用を検討した。 (2-2) Identification of active ingredient and test on blood pressure lowering action and feeding suppression action of novel tripeptide (pyroGlu-Arg-Phe) (a) Fraction No. For 45, an attempt was made to identify a functional molecule by LC / MS. As a result, it was found that a molecule corresponding to pyroGlu-Arg-Phe (pERF) was included. Furthermore, pERF was chemically synthesized and its physiological action was examined.

（ｂ）pERF配列の動脈弛緩活性及び血圧降下作用に関する試験
化学合成したpERF配列について、上記（１−２）欄に示される方法に従って動脈弛緩活性について試験した。比較例として、Ａｒｇ−Ｐｈｅ（RF）配列を有するジペプチドについても同様に試験した。結果を図６（ａ）に示す。また、上記（１−３）欄に示される方法に従って血圧降下作用について試験した。尚、コントロールとして蒸留水を使用した。血圧は、投与前、経口投与後２時間毎に６時間まで測定し（ｎ＝３〜７）、測定した血圧の変化の結果を図６（ｂ）に示す。 (B) Test on pERF sequence arterial relaxation activity and blood pressure lowering action The chemically synthesized pERF sequence was tested for arterial relaxation activity according to the method described in the above section (1-2). As a comparative example, a dipeptide having an Arg-Phe (RF) sequence was similarly tested. The results are shown in FIG. In addition, the blood pressure lowering effect was tested according to the method shown in the above (1-3) column. Distilled water was used as a control. The blood pressure was measured up to 6 hours before administration and every 2 hours after oral administration (n = 3 to 7), and the results of changes in the measured blood pressure are shown in FIG.

図６（ａ）（ｂ）に示されるように、pERFは、動脈弛緩作用を示すとともに、経口投与により血圧降下作用を示すことが確認された。pERFは、従来動脈弛緩活性を有することが知られているＡｒｇ−Ｐｈｅ（RF）配列を有するジペプチドよりも優れた動脈弛緩作用を有することが確認された。   As shown in FIGS. 6 (a) and 6 (b), it was confirmed that pERF exhibits arterial relaxation and also exhibits blood pressure lowering by oral administration. It was confirmed that pERF has an arterial relaxation action superior to a dipeptide having an Arg-Phe (RF) sequence that is conventionally known to have arterial relaxation activity.

（ｃ）pERF配列の摂食抑制作用に関する試験
化学合成したpERF配列について、摂食抑制作用について試験した。試験方法は、雄性ddYマウスを使用し、１８時間絶食後に、pERF配列含有試料を図７に示される投与量において腹腔内投与し、２０分間の摂食量を測定した（ｎ＝６，７）。結果を図７に示す。 (C) Test on feeding inhibitory action of pERF sequence The chemically synthesized pERF sequence was tested on feeding inhibitory action. As a test method, male ddY mice were used, and after 18 hours of fasting, a pERF sequence-containing sample was intraperitoneally administered at the dose shown in FIG. 7, and the food intake for 20 minutes was measured (n = 6, 7). The results are shown in FIG.

図７に示されるように、pERF配列は、摂食抑制作用を併せ持つことが確認された。
以上により、新規トリペプチドpERFは、アワタンパク質由来の初めての機能性ペプチドである。摂食抑制作用と血圧降下作用の両方を併せ持つ新規トリペプチドpERFは、上記試験結果に示されるように、肥満と高血圧の両方を予防又は改善することが期待される。したがって、抗メタボリックシンドローム素材としての応用が期待される。尚、メタボリックシンドローム患者では、ＣＣＫ反応性が低下しているとの報告があり、今回発見した新規トリペプチドpERFは、ＣＣＫ分泌促進作用を有することが強く予想される。かかる観点からも、抗メタボリックシンドローム素材としてより好適である。 As shown in FIG. 7, it was confirmed that the pERF sequence also has an antifeedant action.
As described above, the novel tripeptide pERF is the first functional peptide derived from millet protein. The novel tripeptide pERF having both an antifeedant action and a blood pressure lowering action is expected to prevent or improve both obesity and hypertension, as shown in the test results. Therefore, application as an anti-metabolic syndrome material is expected. In patients with metabolic syndrome, there is a report that CCK reactivity is decreased, and the novel tripeptide pERF discovered this time is strongly expected to have a CCK secretion promoting action. From this viewpoint, it is more suitable as an anti-metabolic syndrome material.

次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）医薬品又は飲食品として適用される前記新規トリペプチド又はペプチド含有組成物。 Next, technical ideas that can be grasped from the above-described embodiment and other examples will be described below together with their effects.
(A) The novel tripeptide or peptide-containing composition applied as a pharmaceutical product or food or drink.

Claims (11)

アワ由来のピログルタミン酸−アルギニン−フェニルアラニンの配列からなる新規トリペプチド。   A novel tripeptide comprising a sequence of pyroglutamic acid-arginine-phenylalanine derived from millet. 請求項１に記載の新規トリペプチドを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤。   An antifeedant, anti-obesity agent, arterial relaxant, antihypertensive agent, or metabolic syndrome preventive / ameliorating agent comprising the novel tripeptide according to claim 1 as an active ingredient. 摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のために用いられる旨の表示を付した請求項２に記載の摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤。   The anti-obesity agent, anti-obesity agent, arterial relaxant, blood pressure lowering according to claim 2 with an indication that it is used for suppression of eating, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or prevention of metabolic syndrome Agent or metabolic syndrome prevention and improvement agent. 請求項１に記載の新規トリペプチドを含有する食欲調節用の食品組成物。   A food composition for appetite regulation comprising the novel tripeptide according to claim 1. 請求項１に記載の新規トリペプチドを経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用（ヒトに対する医療行為を除く）。   The use of the novel tripeptide according to claim 1 for oral intake, anti-obesity, arterial relaxation, hypotension, or improvement of metabolic syndrome prevention (excluding medical practice for humans). アワ由来のグルテリンに疎水性アミノ酸のＮ末端を切断するプロテアーゼを作用させた酵素処理物を、特定の条件で高速液体クロマトグラフィによる分離処理に供したときに得られる成分を含有するペプチド含有組成物であって、
前記特定の条件は、内径２０ｍｍで長さ２５０ｍｍのＯＤＳカラムを使用すること、ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入時は、０．１％トリフルオロ酢酸／水混合物、その後、５０分までの間に０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物が５０容量％となる溶媒を移動相として使用すること、及び移動相の流速が１０ｍＬ／分であることを含み、ＯＤＳカラムへの酵素処理物の投入後２０〜３０分までの間にカラムから溶出する成分を含有するペプチド含有組成物。 A peptide-containing composition containing components obtained when an enzyme-treated product obtained by allowing a protease that cleaves the N-terminal of a hydrophobic amino acid to gluterin derived from millet is subjected to separation treatment by high performance liquid chromatography under specific conditions. There,
The specific condition is that an ODS column having an inner diameter of 20 mm and a length of 250 mm is used. When the enzyme-treated product is put into the ODS column, a 0.1% trifluoroacetic acid / water mixture is used, and then for up to 50 minutes Use of a solvent in which a 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile mixture is 50% by volume as a mobile phase, and the flow rate of the mobile phase is 10 mL / min, and the enzyme treatment product is charged into the ODS column. A peptide-containing composition comprising a component that elutes from the column in the next 20 to 30 minutes. 前記プロテアーゼは、サーモリシンである請求項６に記載のペプチド含有組成物。   The peptide-containing composition according to claim 6, wherein the protease is thermolysin. 請求項６又は請求項７に記載のペプチド含有組成物を有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤。   An antifeedant, anti-obesity agent, arterial relaxant, antihypertensive agent, or metabolic syndrome prevention / amelioration agent comprising the peptide-containing composition according to claim 6 or 7 as an active ingredient. 摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のために用いられる旨の表示を付した請求項８に記載の摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、又はメタボリックシンドローム予防改善剤。   9. An anti-obesity agent, an anti-obesity agent, an arterial relaxant, a blood pressure lowering according to claim 8, with an indication that it is used for suppression of eating, anti-obesity, arterial relaxation, blood pressure decrease, or prevention of metabolic syndrome. Agent or metabolic syndrome prevention and improvement agent. 請求項６又は請求項７に記載のペプチド含有組成物を含有する食欲調節用の食品組成物。   A food composition for appetite regulation comprising the peptide-containing composition according to claim 6 or 7. 請求項６又は請求項７に記載のペプチド含有組成物を経口摂取させることを特徴とする、摂食抑制、抗肥満、動脈弛緩、血圧降下、又はメタボリックシンドローム予防改善のための使用（ヒトに対する医療行為を除く）。   Use of the peptide-containing composition according to claim 6 or 7 for oral intake (anti-obesity, anti-obesity, arterial relaxation, blood pressure lowering, or prevention of metabolic syndrome prevention) Excluding acts).