JP2014523873A - 強化された免疫賦活化剤 - Google Patents

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Abstract

【課題】本発明は、免疫反応を刺激、変調あるいは増強するのに有用な新規の方法および組成物を提供する。
【解決手段】イヌリン粒子と病原体関連分子パターン物質ＰＡＭＰを組み合わせることにより、驚くほど安全で有効な免疫反応を誘導するに至った。
【選択図】なし

Description

発明の詳細な説明
本発明は、一般に、免疫学の分野に関する。さらに特定すると、本発明は、免疫応答を変調あるいは増強する組成物および方法に関する。さらに特定すると、本発明は、イヌリン粒子と病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）で構成され免役応答に影響を与える組成物および方法に関する。
本明細書において既報の文献や考察の引用は、必ずしも先行文献が最高水準の技術あるいは一般知識の一部であることを承認するものではない。
すでに文献で知られているように、微生物由来の物質は同時に投与されるワクチン抗原に対し、自然免疫反応と共に獲得免疫反応を活性化する。このような物質は現在病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）として知られ、ＰＡＭＰは宿主分子とは免疫学的に区別される病原体由来の構造的に保存されたモチーフであり自然免疫受容体により認識される（Ｈｅｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００５）。
ＰＡＭＰｓは特定の病原体によって発現される特定の種類のタンパク質、脂質、リポタンパク質、炭水化物、糖脂質、糖タンパク質および核酸に存在し、三アシル・リポペプチド、ポーリン、グリカン、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、フラジェリン、リポテイコ酸、Ｎ−フォルミルメチオニンおよび細菌またはウイルスＤＮＡを含む。
ＰＡＭＰｓは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体、ＲＩＧリガーゼ受容体およびＣ型レクチン受容体のようなＰＡＭＰ特異的自然免疫受容体と結合することにより自然免疫活性剤として働く。このことが免疫細胞の炎症性遺伝子経路の活性化を誘導する。
これらのＰＡＭＰ物質に共通することは、すべての物が、特に炎症性遺伝子を活性化する為の主たる転写制御機構である核内因子κＢ（ＮＦκＢ）の活性化により自然免疫系を活性化することである。この炎症反応は、病原体関連分子パターンの副産物あるいは付随効果として、同時に投与された抗原に対する獲得免疫反応を増強することがある。
抗原と共に投与され獲得免疫を増強する物質は「アジュバント」として知られている。理論によって限定されることを望むものではないが、アジュバント効果を持つ物質に一般的な要因は、それらが免疫学的「危険信号」を発生させ（Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ，２００２）自然免疫を誘導し、ＮＦκＢやその他の炎症性経路を活性化するということであることが当業者に認められている。
免疫増強作用をもたらす危険信号は、局所組織の傷害、例えば油乳剤のような炎症性物質の注射、より詳細には病原体の進入や組織の傷害を感知する自然免疫受容体へのＰＡＭＰｓの結合により引き起こされる。ＰＡＭＰ特異的危険信号は、認められた脅威に対して防御激的な炎症性反応を開始する必要があることを自然免疫系に警告する。
このような危険を探知するＰＡＭＰ受容体の活性化は、主要なＮＦκＢ経路を含む炎症性遺伝子経路を活性化し、単核球の様な免疫細胞の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１２のごとき主要炎症性物質を分泌を誘導する。ＰＡＭＰ活性化に呼応したこれら炎症仲介性物質の放出が、ＰＡＭＰｓの抗原特異的獲得免疫の増強作用に極めて重要であると文献的に信じられており、新規のアジュバント物質をＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−８またはＩＬ−１２の様な炎症性サイトカインの誘導能を指標としたハイスループットな細胞を用いたアッセイがなされた（Ｂｕｃｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ，２００８）。
概念的に、二つまたはそれ以上のこれらの病原体関連分子パターン剤が混合されればより強い危険信号を誘導し、より高いレベルの炎症性遺伝子の活性化を引き起こし、増強されたアジュバント効果を示すことが予測される（Ｑｕｅｒｅｃ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｋａｓｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ，２０１１）。
しかしながら、当業者に周知のごとく、ＰＡＭＰｓを単独あるいは特に複数混合したものを免疫調整剤またはワクチン・アジュバントとして用いる場合の問題は炎症性反応による極めて高い毒性であり、この方法で獲得免疫を増強することは、自然免疫増強剤の投与量に応じて増大する局所と全身性の炎症反応に伴う毒性により投与量が限定される。
例えば、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓ）ワクチンにおける高度に減毒化されたＰＡＭＰ誘導体であるモノホスフォリピドＡ（ＭＰＡ）と水酸化アルミニウム（アラム）の混合アジュバントは、アラム・アジュバント単独のＨＢｓワクチンより有意に高い接種部位の局所反応、発熱およびその他の全身性福作用を引き起こす（Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００５）。
二つあるいはそれ以上の病原体関連分子パターン剤をワクチン組成に混合したときのワクチンの副作用や毒性の増加がこれらが免疫原性によい影響を与えるかもしれないにもかかわらず当局の認可に対し大きな障壁となっている（Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ，２００８）。
さらにいくつかの病原体関連分子パターン剤の組み合わせが同時に投与された抗原に対して誘導する獲得免疫は、病原体関連分子パターン剤の単独投与に勝らないことや劣ることさえあるなど病原体関連分子パターン剤の必ずしもすべてが免疫学見地から好適ではない。例えば、アラムとマラリアのサーカムスポロゾイトＣ末端組換え蛋白質で免疫されたヒトはアラムとＭＰＬの混合物と共に免疫されたヒトより高い抗原特異的抗体を得た（Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５）。
ワクチンにおいて抗原と共に用いられたとき免疫反応を増強するための物質はアジュバントとして知られている。ここで用いられるように、「アジュバント」という用語は、抗原と同時にまたは付随して投与されると抗原に対する免疫反応を増加させるすべての物質または材料を意味すると理解されるべきである。
近代ワクチンで用いられる精製された組換えまたは合成抗原の問題点は、精製度が劣る従前の生あるいは不活化全粒子ワクチンより免疫原性が劣ることである。このことが効果的なアジュバントの開発の必要性を生じさせた。アジュバントはまたアジュバントを使用しない場合より早いあるいはより強い免疫反応を誘導するためにも用いられた。更に、アジュバントはアジュバントを用いない場合に必要な抗原量より少量で同様の免疫反応を誘導したり、免疫学的防御に有効な特定のサブクラスの抗体を誘導したり特定の細胞性免疫（すなわちＣＤ４またはＣＤ８記憶Ｔ細胞反応）を増強するために用いられるかもしれない（Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，２００４）。
既知のアジュバントは、（一般的に「アラム」と呼ばれる）アルミニウム塩を含む。少数の例外を除き、アラム・アジュバントは多くの国でヒトへの使用を認可された唯一のアジュバントである。アラム・アジュバントは、しばしば同時に投与された抗原に対する優れた抗体（Ｔｈ２）反応を惹起するが、多くの病原体に対する防御に重要な細胞性（Ｔｈ１）免疫反応を刺激することには多くの場合無効である。
更に、アラムは稀に重篤な無菌性膿瘍、好塩基球増加症およびマクロファージ性筋膜炎などの局所や全身性の副作用を引き起こす（Ｉｓｒａｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。アルツハイマー病のような神経変性疾患にアルミ塩がかかわっているかもしれないという地域的懸念もある（Ｂｏｎｄｙ，２０１０）。他の認可されたアジュバントには、インフルエンザ・ワクチンの一部にヨーロッパで認可されたスクワレン油乳濁液のＭＦ５９（Ｄｕｒａｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０１０）とヨーロッパでＢ型肝炎ワクチンに認可された水酸化アルミとモノフォスフォリル・リピドＡ（ＭＰＬ）の組み合わせであるＡＳ０４がある。
しかし、単独で使用するか否かにかかわらず改良されたヒト用アジュバントの開発における唯一最大の障壁は局所および全身性の毒性と副作用の問題である。このことは安全が最大限要求される子供用ワクチンの開発に特に問題となる。
ワクチンによる副作用には、接種部位の炎症や肉芽腫の形成、発熱、吐き気、アジュバント関節炎、ブドウ膜炎、好酸球増加症、アレルギー、アナフィラキシー、臓器特異的毒性または免疫毒性（例えば、炎症性サイトカインの放出）などがある（Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ）。このような重篤な毒性のため、病原体関連分子パターンアジュバントによる炎症経路の過度な刺激による毒性を示す完全フロインド・アジュバントは、非常に有効なアジュバントであるが使用できない。
有効に獲得免疫を増強し、同時に痛みが少なく、ヒトに安全かつ無毒である化合物または混合物は今だ非常に発見しにくく、病原体関連分子パターン剤やワクチンアジュバント活性があるとして知られる何百もの化合物のうち十以下のものがヒトへの使用を許可され、わずか二つの化合物、アラムとＭＰＬがアメリカ合衆国のワクチン市場でヒト用ワクチンへの使用がＦＤＡに認可されたところである。理想的には、アジュバントはできるだけ多くのワクチン抗原と共に使用でき、免疫応答の弱い子供、老人および免疫不全状態の個人にも安全に使用できるべきである。
このように、ワクチン研究の主要な課題の一つは局所や全身性の毒性の悪化を誘導することなく、いかにワクチンの有効性を増強させるかということである。この目的を達成することの難しさは、アラム・アジュバントが発見から９０年たった今もヒト用アジュバントとして独占的に使用されている事実に例示されている。アジュバントの作用機序の多くが未知のままであるため、現在の知識では一般にある化合物や化合物の混合物がアジュバント活性を経験的な原則で予想することは不可能である。同様に、特定のアジュバントやアジュバントの混合物が安全で受忍できるか否かを経験的な原則で予想することは不可能である。
さらに、それぞれのアジュバントと抗原の混合物は異なるタイプの免疫反応を引き起こすかも知れず、当該病原体に対する抵抗性を必ずしも増強しないかもしれない。例えば、Ｔヘルパー（Ｔｈ）１、Ｔｈ２およびＴｈ１７のごとき異なるタイプの獲得免疫反応を引き起こすことが知られている。特定の病原体に対しては、ある獲得免疫反応がその他のものより防御に有効であるかもしれない。
例えば、リーシュマニア症に対してはＴｈ１ワクチン反応は防御的であるが、Ｔｈ２反応は望ましくない結果をもたらすかもしれない。その他の病原体にとっては、逆がまた真かもしれずＴｈ２ワクチン反応が有益でＴｈ１反応が有害でありえ、さらに他の状況ではＴｈ１７ワクチン反応が望ましいかもしれない。
このことは、有効なアジュバントと抗原の組み合わせの発見は、現在の技術では広範な試行錯誤試験に頼ることを意味する。実験動物モデルでの広範囲な確認後であっても、動物攻撃モデルでは有効なアジュバントと抗原の組み合わせが、ヒトに投与されると無効であったり有害でさえある例は多い。
無効である例は、ヒト・インフルエンザ・ワクチンにおけるアラム・アジュバントであり、動物実験では防御効果の増強を示した。他の例は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）ワクチンであり、アラム・アジュバントで調整されたワクチンはＲＳウイルス感染動物モデルでは増強された免疫原性と感染防御を示したが、ヒトの子供に投与するとＴｈ１反応ではなく誤った免疫反応タイプであるＴｈ２反応を誘導し病気の悪化とＲＳウイルス感染による死亡率の上昇を引き起こした（Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９８６）。
β−Ｄ−（２→１）ポリフルクトフラノシルα−Ｄ−グルコース（一般にイヌリンとして知られる）は、安定した粒子状の構造で結晶化されると有用な特性を持つ多糖体（国際特許ＷＯ ８７／０２６７９、ＷＯ ２００６／０２４１００およびＷＯ ２０１１／０３２２２９号において開示されており、それらの内容は参照により本明細書に組み入れられる）である。
イヌリンは比較的疎水性のポリオキシエチレン様の骨格を有し、この珍しい構造に加えてイオン化されない性質が、再結晶による容易で、非常に純粋なイヌリンの調製を可能にしている。未処理のイヌリンは、一般的に温水に可溶性であるが、国際特許ＷＯ ８７／０２６７９、ＷＯ ２００６／０２４１００およびＷＯ ２０１１／０３２２２９号において開示されているように、特異的な処理により既報のガンマ（ｇＩＮ）、デルタ（ｄＩＮ）およびエプシロン（ｅＩＮ）型のような、より安定な多形形態に結晶化され得る。
このようなイヌリン粒子（以降単に総称として単に「イヌリン粒子」と呼ぶ）は、一般的な哺乳動物の体温ではほぼ不溶性であり、すぐれたアジュバント能を示すことが知られている。理論に束縛されることを望むものではないが、これらイヌリンの安定的構造はイヌリン粒子が免疫細胞に結合および作用するに十分な時間、安定的に存在するために重要である。
一方、イヌリン粒子の懸濁液が高温に加熱されイヌリン粒子が解離され溶解されたイヌリン溶液は、すべての免疫学的性質とアジュバント能を失う。イヌリン粒子は抗原処理能や適切な免疫細胞による抗原提示能を増強する能力を含むアジュバント能に関する特性を共有し、より可溶性のイヌリン多形形態の特性は共有しない。
理論に束縛されることを望むものではないが、我々は各イヌリン多形形態は溶解する温度が上昇すると共に免疫効果が上昇することを観察した。すなわちｄＩＮ粒子はｇＩＮ粒子より熱安定でありアジュバント効果も高く、さらにｅＩＮ粒子はｄＩＮ粒子よりさらに熱安定でありアジュバント効果も高い。このように、ｇＩＮ、ｄＩＮあるいはｅＩＮ多形形態の順によりアジュバント活性を示す。国際特許ＷＯ８７／０２６７、ＷＯ２００６／０２４１００およびＷＯ２０１１／０３２２２９号において開示されているように、ｇＩＮ、ｄＩＮあるいはｅＩＮの適切な大きさと組成を持つ粒子から成る安定なイヌリン組成物は、同時に投与されるワクチン抗原に対する液性および／または細胞性獲得免疫反応を増強できる。
本明細書に後述されるごとく、イヌリン粒子の生物学的効果を研究した所、我々は抗炎症作用もまたもたらされるという驚くべき発見に至った。より詳細には、ヒト抹消血単核球（ＰＢＭＣ）またはマウス脾細胞とイヌリン粒子を共に培養すると抗炎症性遺伝子の発現を下方抑制せずむしろ上方抑制するということを見出した。反対に、イヌリン粒子は多くの炎症誘発性遺伝子の発現を下方制御し、そして特にイヌリン粒子はＮＦκＢの発現を活性化しない。
このことは広く「危険モデル（ｄａｎｇｅｒ ｍｏｄｅｌ）」として知られている概念、すなわちすべてのアジュバントはＮＦκＢおよび／またはインフラマソームの活性化を通して炎症誘発性自然免疫系を活性化することによりＴＮＦ−αやＩＬ−１のような炎症性サイトカインの産生を誘導することにより作用するという概念を否定するように見える。
危険モデルは、例えば自然免疫系を刺激すると同時に直接または間接的に同時に投与される抗原に対する獲得免疫を増強するＴＬＲアゴニストのようなＰＡＭＰｓのアジュバント作用に基づいて構築された。ＰＡＭＰ由来のアジュバントは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−１およびＩＬ−６のような炎症誘発性サイトカインを誘導するという特色を共有する。
ＰＡＭＰｓは免疫細胞に炎症を誘導する主たる転写因子であるＮＦκＢの活性化を通じてこれらのサイトカインを誘導する（Ｗｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００３）。同様にアラム・アジュバントや油懸濁アジュバントは、もし活性化されるとＩＬ−１のような炎症性サイトカインの産生を引き起こす組織傷害探知機構であるインフラマソームを活性化する（Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２００８）。対照的にイヌリン粒子は、ヒトＰＢＭＣと共に培養すると驚くべきことにＮＦκＢを活性化せず、代わりにインターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、サイクロオキシゲネース（Ｃｏｘ）−２、ＮＡＬＰ３、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＣＡＲＤ１２、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＤＯ、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＲ７、ＣＤ１４、ＴＬＲ４、ＮＯＤ２、フォルミル・レセプター１・２および３のような炎症誘発性遺伝子の発現を下方制御し、自然免疫反応の下方制御に伴う遺伝子を上方制御し、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１８ＢＰ、ＣＤ３３、ＡＴＦ３、ＴＲＥＭ１、ＰＰＡＲ−ガンマ、ＦＣＲＬ２およびＣＤ３６のような炎症誘発性ＩＬ−１サイトカイン経路を阻害する。
このような結果は、イヌリン粒子が抗炎症活性を持ち後述する本発明の第一の局面に至る。それゆえ我々はまず炎症性疾患の治療や予防にイヌリン粒子を用いるという観点でイヌリン粒子の炎症抑制能を試そうとした。
イヌリン粒子が炎症誘発性免疫活性化剤の副作用を軽減できるか否かを試すため、インリン粒子がＰＡＭＰｓやその他の病原体関連分子パターン剤により誘導される炎症とアジュバント活性の両者を阻害するであろうことを予測して、インリン粒子をｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおいてさまざまなＰＡＭＰｓおよび広範囲のＴＬＲアゴニストと共に試験した。
結果は予想外で驚くべきものであり、本発明の第二の局面をもたらした。予測されたとおり、イヌリン粒子とＣｐＧモチーフ含有オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）のような古典的病原体関連分子パターンＰＡＭＰを同時に投与するとＣｐＧ ＯＤＮによる炎症性遺伝子の活性化が下方修正された。しかしながら予想外であったことは、逆に、ＰＡＭＰによって誘導される炎症性シグナルをうまく阻害するにもかかわらず、イヌリン粒子は同時に投与された抗原に対する防御的免疫記憶反応増強能で測定されるような獲得免疫反応に関してＰＡＭＰのアジュバント能を実際に強化したということである。
この発見はイヌリン粒子が同時に投与されたＰＡＭＰｓによる自然免疫の活性化と炎症誘導性「危険信号」を下方制御するという予測に反し驚くべきものであった。アジュバント活性が危険信号モデルに従うという概念の元では、イヌリン粒子は炎症性反応を阻害することでＰＡＭＰのアジュバント能を減少させると予測されていた。
我々は引き続きさらに広く多様なＰＡＭＰアジュバントを用いて実験を繰り返し、一貫してイヌリン粒子の炎症を抑制するがアジュバント能は増強するという同様の有益な効果を観察した。複数のアジュバントを一つの組成物に組み込むとき現在の知識ではその結果を予測できないことを考えると、イヌリン粒子と試したすべてのＰＡＭＰｓの混合物が一貫した結果をもたらしたことはさらに驚くべき結果であった。
理論に束縛されることを望むものではないが、イヌリン粒子のＰＡＭＰｓにより誘導される炎症誘発性自然免疫経路の下方制御は、ＰＡＭＰｓの獲得免疫記憶反応を逆に増強し、ＰＡＭＰｓにより誘導されるＩＬ−１のような炎症誘発性自然免疫サイトカインのレベルが高すぎると獲得免疫記憶反応を刺激するよりむしろ抑制するのかもしれない。
このようにワクチン抗原と同時にＰＡＭＰのような病原体関連分子パターン剤およびイヌリン粒子を同時に投与すると、同時に投与されたワクチン抗原に対する免疫記憶反応の増強に驚くべき相乗作用をもたらした。イヌリン粒子とＰＡＭＰのような病原体関連分子パターン剤の同時投与は、同様のアジュバント能がより少量のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤によって得られるという驚くべき用量節約効果をもまたもたらした。
このイヌリン粒子の作用もまたアジュバントの危険信号モデルでは予測され得ない。
このことはイヌリン粒子がより少量の病原体関連分子パターン剤で同等の獲得免疫増強効果を得ることを可能にし、それによりＰＡＭＰｓを含む病原体関連分子パターン剤に伴う炎症のような用量特異的副作用を軽減する可能性をもたらした。
イヌリン粒子の同時投与はさらに、炎症性遺伝子の発現を阻害または減弱させることにより病原体関連分子パターン剤やＰＡＭＰｓの炎症に伴う副作用を減少する能力もある。以上のように出願人はイヌリン粒子とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の組合せが、驚くほど良好で相乗的な免疫反応をもたらすことを発見した。
ＰＣＴ／ＡＵ８６／００３１１（ＷＯ８７／０２６７９）ｔｉｔｌｅｄ″Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔ″ ＰＣＴ／ＡＵ２００５／００１３２８（ＷＯ２００６／０２４１００）ｔｉｔｌｅｄ″Ｎｅｗ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｏｒｍ ｏｆ ｉｎｕｌｉｎ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ” ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／００１２２１（ＷＯ２０１１／０３２２２９）ｔｉｔｌｅｄ″Ａ ｎｏｖｅｌ ｅｐｓｉｌｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｏｒｍ ｏｆ ｉｎｕｌｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｓａｍｅ″
Ｂｉｌｋｅｉ−Ｇｏｒｚｏ，Ａ，Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３１（５）：３５７−３６１（１９９３）． Ｃｏｏｐｅｒ，ＰＤ ａｎｄ Ｍ Ｃａｒｔｅｒ，．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３（８）：８９５−９０１（１９８６）． Ｃｏｏｐｅｒ，ＰＤ ａｎｄ ＥＪ Ｓｔｅｅｌｅ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ６６：３４５−３５２（１９８８）． Ｃｏｏｐｅｒ，ＰＤ ａｎｄ ＥＪ Ｓｔｅｅｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ ９：３５１−３５７（１９９１）． Ｃｒａｐｐｅｒ，ＤＲ ｅｔ ａｌ．，．Ｓｃｉｅｎｃｅ １８０（８５）：５１１−５１３（１９７３）． Ｇａｒｒｕｔｏ，ＲＭ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ ７８（２）：２１０−２１９（１９８９）． Ｋａｗａｈａｒａ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ ５５（２）：２１１−２１７（２００１）． Ｐｅｔｒｉｋ，ＭＳ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９（１）：８３−１００（２００７）． Ｐｈｅｌｐｓ，ＣＦ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，９５：４１−４７（１９６５）． Ｖｅｒｒｏｕｓｔ，ＰＪ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６：１５７−１６９（１９７４）． Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓａｆｅｔｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，１７１，ｐｐ．１５７６−１５８５，（１９９５） Ｔｏｎｇ ＮＫ，Ｂｅｒａｎ Ｊ，Ｋｅｅ ＳＡ ｅｔ ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２００５ Ｎｏｖ；６８（５）：２２９８−３０３． Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２ Ａｐｒ １２；２９６（５５６６）：３０１−５． Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ Ｎ，Ａｇｕｉｌａｒ ＪＣ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００４ Ｏｃｔ；８２（５）：４８８−９６． Ｉｓｒａｅｌｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｒｅｖ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０ Ｓｅｐ ３０． Ｂｏｎｄｙ ＳＣ．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．２０１０ Ｓｅｐ；３１（５）：５７５−８１． Ｄｕｒａｎｄｏ Ｐ，Ｉｃａｒｄｉ Ｇ，Ａｎｓａｌｄｉ Ｆ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ Ａｐｒ；１０（４）：６３９−５１． Ｐｒｉｎｃｅ ＧＡ，Ｊｅｎｓｏｎ ＡＢ，Ｈｅｍｍｉｎｇ ＶＧ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９８６ Ｍａｒ；５７（３）：７２１−８． Ｈｅｉｎｅ Ｈ，Ｕｌｍｅｒ ＡＪ．Ｃｈｅｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ．２００５；８６：９９−１１９． Ｗｅｒｌｉｎｇ Ｄ，Ｊｕｎｇｉ ＴＷ．Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２００３ Ｊａｎ１０；９１（１）：１−１２． Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ ＳＣ，Ｃｏｌｅｇｉｏ ＯＲ，Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８ Ｊｕｎ１９；４５３（７１９８）：１１２２−６． Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ ＥＲ，Ｓｔｒｕｔｈｅｒｓ Ｍ，Ｂｅｔｔ ＡＪ，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１ Ａｐｒ２２． Ｓｃｈａｓｆｏｏｒｔ，Ｒｉｃｈａｒｄ Ｂ Ｍ（Ｅｄｉｔｏｒ）ａｎｄ Ｔｕｄｏｓ Ａｎｎａ Ｊ（Ｅｄｉｔｏｒ）（２００８）． Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ．ＲＳＣ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ．ＩＳＢＮ９７８−０−８５４０４−２６７−８． Ｄｏｕｇｌａｓ Ｈｕｇｈｅｓ．；Ｊａｅ Ｃｈｏｉ，Ｍｅｇａｎ Ｄｏｂｂｓ，ｅｔ ａｌ：ａｔ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／ｐｒｅｖｉｅｗｓ／２０１２−ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｓｅｃｒｅｔｅｄ−ｄｕａｌ−ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ−ｒｅｐｏｒｔｅｒ−ａｓｓａｙｓ／ Ｂｕｃｋｎｅｒ Ｄ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｓ，Ｋｕｒｋ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ．２００６ Ｓｅｐ；１１（６）：６６４−７１． Ｋａｓｔｕｒｉ ＳＰ，Ｓｋｏｕｎｔｚｏｕ Ｉ，Ａｌｂｒｅｃｈｔ ＲＡ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１１ Ｆｅｂ２４；４７０（７３３５）：５４３−７． Ｑｕｅｒｅｃ Ｔ，Ｂｅｎｎｏｕｎａ Ｓ，Ａｌｋａｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００６ Ｆｅｂ２０；２０３（２）：４１３−２４． Ｍａｒｔｅｌｌｅｔｔｉ Ｐ，Ｇｒａｎａｔａ Ｍ，Ｇｉａｃｏｖａｚｚｏ Ｍ．，Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ １９９３ Ｏｃｔ；１３（５）：３４３−５ Ｒａｉｎｅｒｏ Ｉ，Ｐｉｎｅｓｓｉ Ｌ，Ｓａｌａｎｉ Ｇ，Ｖａｌｆｒｅ Ｗ，Ｒｉｖｏｉｒｏ Ｃ，Ｓａｖｉ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅａｄａｃｈｅ ２００２ Ｍａｙ；４２（５）：３３７−４０．
本発明は、好ましい抗炎症作用および／または免疫反応を誘導する製品と方法に関する。本発明はイヌリン粒子が、これまで未知であった抗炎症作用をもたらすために使用できるという驚くべき発見に基ずく。
本発明のさらなる態様は、イヌリン粒子と病原体関連分子パターン剤の同時投与が自然免疫と獲得免疫のバランスを好ましくかつ相乗的に変調し、もしあるとすれば炎症による副作用を軽減し、同時に投与された抗原に対する免疫記憶反応を増強するという予想外の発見に基づく。
従って、第一の態様において本発明は、個体の炎症を抑制または阻止および／または炎症性疾患の治療や防止に使用できるイヌリン粒子から成るまたはイヌリン粒子組成物を提供する。
関連局面において、本発明の第一の態様は、個体の炎症を軽減または阻止および／または炎症性疾患の治療や防止（予防を含む）する方法、治療的有効量のイヌリン粒子から成るまたはイヌリン粒子組成物を投与することから成る方法を提供する。
別の関連局面において本発明の第一の態様は、イヌリン粒子から成るまたはイヌリン粒子組成物を個体の炎症の抑制または阻止および／または炎症性疾患の治療や防止のための医薬品の製造に用いる方法を提供する。
本発明の第一の態様の一つの実施形態においては、個体、より必要に応じて具体的には個体の単核球、樹状細胞、顆粒球、ＮＫ細胞および／またはリンパ球を含む骨髄またはリンパ系細胞において、一つあるいは複数の抗炎症性遺伝子および／または蛋白質の発現の上方制御および／または一つあるいは複数の炎症誘発性遺伝子および／または蛋白質の発現の下方制御に炎症の軽減や阻止および／または炎症性疾患の治療や防止は特徴付けられるかもしれない。
この文脈において、個体に下方制御するための例示的炎症誘発性遺伝子は、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ６、サイクロオキシゲネース（Ｃｏｘ）−２、ＦＰＲ２、ＭＹＤ８８、ＮＡＬＰ３、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＣＡＲＤ１２、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＤＯ、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＲ７、ＣＤ１４、ＴＬＲ４、ＮＯＤ２、フォルミル・レセプター１・２および３そしてＣＸＣＬケモカイン・ファミリーおよび／またはＴＬＲファミリー・メンバーを含むことができる。
この文脈において、個体に上方制御するための例示的抗炎症性遺伝子は、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１８ＢＰ、ＣＤ５Ｌ、ＣＤ３３、ＡＴＦ３、ＴＲＥＭ１、ＰＰＡＲ−ガンマ、ＦＣＲＬ２およびＣＤ３６を含むことができる。
したがって、個体において炎症を軽減または阻害する本発明の第一の態様に従ってイヌリン粒子を使用することができる。個体において炎症は、例えば一つあるいは複数の病原体の感染（細菌、ウイルス、真菌または原虫感染、パンデミックや季節性インフルエンザ、吸入炭疽、グラム陰性敗血症、全身性のウイルス血症、脳炎、Ｑ熱、野兎病、天然痘、慢性Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルス感染症、ＳＡＲＳ、百日咳、マラリア、ＨＩＶ、結核、ポリオ、狂犬病、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、赤痢、単核球症、サイトメガロウイルスや毒素ショック症候群、アレルギー物質、典型的なアレルゲンは昆虫毒、犬や猫のふけ、ホソムギ、チリダニ抗原、および花粉である、または例えばワクチン組成物やアレルギー減感作組成物または抗癌治療のような他の炎症誘発性物質または組成物により引き起こされるかもしれない。
イヌリン粒子は、個体の一つまたは複数の炎症誘発物質の暴露前、暴露と同時あるいは暴露後個体に投与され得る。
本発明の第一の態様における特に興味深い一実施形態は、病原体関連分子パターン剤及びその機能的変異体、誘導体または類似体を含む特に病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を含む炎症誘発物質又は含有する組成物への（投与等による）曝露によって引き起こされる個体の炎症を低減または阻止するためのイヌリン粒子の使用である。
炎症誘発組成物は、例えば個体に意図的に投与される炎症誘発組成物であって薬理学的に許容される組成あるいは他の例では、個体が意図的にあるいは偶発的に暴露される炎症誘発物質（例えば生物あるいは病原物質または有機体）かもしれない。このように本実施形態においては、イヌリン粒子を含む組成物は、炎症誘発性物質または組成物に対する被験体の炎症反応を減少させるまたは阻止するために使用される。
炎症誘発性組成物がＰＡＭＰから成るあるいは組成されるアジュバント組成物である場合、例えば、イヌリン粒子が頭痛、倦怠感、筋肉痛、下痢、発熱、炎症、接種部位の肉芽腫形成、発熱作用、吐き気、アジュバント関節炎、ブドウ膜炎、好酸球増加症、アレルギー、アナフィラキシー、臓器特異的な毒性や炎症性サイトカインの毒性量の放出による免疫毒性の様なＰＡＭＰにより個体に発生する一つあるいは複数の副作用を抑制または予防するために使用することができるかもしれない。
イヌリン粒子はまた、個体における炎症性疾患を治療または予防するために本発明の第一の態様に従って使用することができるかもしれない。この概念で治療または予防のために特に興味深い炎症性疾患の種類は、によって特徴付けられる、またはＮＦκＢの活性化および／またはＩＬ−１遺伝子または蛋白質レベルや信号の増加またはＩＬ−１の調節異常に伴うあるいは特徴付けられる炎症性疾患を含む。
例示的な炎症性疾患は、片頭痛、慢性疲労症候群、関節リウマチ、喘息、慢性閉塞性気道疾患、潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、クローン病、慢性疲労症候群、新生児発症多臓器の炎症性疾患とマックル・ウェルズ症候群を含むクリオピリン関連周期性症候群、インフラマソーム関連疾患、乾癬、アテローム性動脈硬化症、１型または２型糖尿病、遺伝性発熱症候群、腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群、シュニッツラー症候群、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肝炎、ベーチェット病および特発性再発性心膜炎を含む。
このように、本発明の第一の態様の方法による治療対象は、現在そうであるかまたは（好ましくは、翌月以内に、翌週以内に、６、５、４、３、２、あるいは１日以内に、または２４、１２、６、５、４、３、２あるいは１時間以内にそうであることのリスクが増加するようにスケジュールされているという意味で）将来、同時に一つまたは複数の病原体感染（細菌、ウイルス、真菌または原虫感染を含む）、アレルギー性物質またはワクチンや減感作に用いられる組成物のような炎症誘導性アジュバントから成る組成物を含む炎症誘導性物質および／またはＩＬ−１レベルあるいはシグナルの上昇あるいはＩＬ−１の調節不全によるかあるいはそれに伴う炎症性疾患に苦しんでいるまたはそのリスクがある個体および片頭痛、慢性疲労症候群、慢性関節リウマチ、潰瘍性大腸炎やクローン病を含む炎症性腸疾患、慢性疲労症候群、新生児発症多臓器の炎症性疾患とマックル・ウェルズ症候群を含むクリオピリン関連周期性症候群、インフラマソーム関連疾患、乾癬、アテローム性動脈硬化症、２型糖尿病、遺伝性発熱症候群、腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群、シュニッツラー症候群、ベーチェット病および特発性再発性心膜炎からなるグループから選ぶこともできる。
本発明の第二の態様は、下記のものから成る、免疫学的および／または薬学的に許容される組成物を提供する。
（ａ）イヌリン粒子および／または１つまたは複数のその他のＩＬ−１の抗炎症阻害剤および／または１つまたは複数のその他のＮＦκＢの活性化を阻害する抗炎症阻害剤。
（ｂ）１つまたは複数の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）から成るあるいはで構成される物質であって、必要に応じて更に
（ｃ）例えば、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、淡白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、組換えウイルスベクター、微生物、またはウイルスからなる群から選択される１つまたは複数の物質。
本発明の第一及び第二の態様で使用される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰｓ）は、自然免疫系を活性化する能力を有する分子を指す。ＰＡＭＰｓは、直接または間接的に一または複数の自然免疫受容体に認識され、そして／または免疫細胞の炎症性遺伝子経路を活性化する。
ＰＡＭＰｓは、例えば、リンパ球、単球、顆粒球、ＮＫ細胞、樹状細胞の１つまたは複数の免疫細胞に炎症誘導性遺伝子の発現および炎症誘導性蛋白質の産生を誘導する。
炎症誘導性遺伝子は、例えばＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１からＩＬ−３３より具体的には、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０の１つまたは複数のサイトカイン、１型インターフェロンおよびガンマ・インターフェロン、ＣＸＣＬ１からＣＸＣＬ１７を含むＣＸＣファミリー・ケモカインを含み、ＣＣＬ１からＣＣＬ２８を含むＣＣファミリー・ケモカイン、フラクタルカインを含むＣＸ３Ｃケモカイン、ＸＣＬ１からＸＣＬ２を含むＣファミリー・ケモカインの発現を含み、これらの炎症誘発性遺伝子の誘導は一般的にＮＦκＢ転写因子の活性化が関与する。
本出願では、ＰＡＭＰという用語は単に自然界に見つけられるものだけでなく、合成ＰＡＭＰｓを含み、機能的に同等の模倣体、変異体、誘導体および類似体をも含むことを意図している。数多くの天然に存在するものと合成ＰＡＭＰｓは、当該技術分野で知られており、その多くは、以下により詳細に説明される。
発明の第二の態様の組成物の成分（ａ）は、例えば、ＩＬ−１の抗炎症阻害剤またはＮＦκＢの抗炎症阻害剤などの抗炎症成分である。本発明で特に興味深い実施形態では、抗炎症成分がイヌリン粒子またはそれを含む組成物である。他に興味深いＩＬ−１の抗炎症阻害剤は、本質的に同等の抗炎症特性および／または特異性および／または本質的に同等のアジュバント能を有するという意味で、機能的にイヌリン粒子と同等である。
これらは、ＩＬ１受容体アンタゴニスト、ＩＬ１ＲＡ、Ａｎａｋｉｎｒａ、Ｒｉｌｏｎａｃｅｐｔ、ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ１ＲａｃＰ／Ｆｃ−融合淡白質、Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ、大量のＩＬ−１βブロッキング抗体、ＩＬ１受容体遮断薬、ＩＬ−１ＲＩＩ、インドメタシン、インドメタシンを含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、グルココルチコイド、カスパーゼ１阻害剤を含む、カスパーゼ阻害剤、インフラマソーム阻害剤、クロロキン、Ｐ２Ｘ７受容体阻害剤、ＳＴ２受容体阻害剤、クルクミン、レスベラトロール、およびエイコサノイド生合成阻害剤含み得る。
本発明の第二の態様の組成物の成分（ｂ）は、一つまたは複数の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）から成るまたは構成される物質である。一実施形態では、物質は、１０種を越さない異なる分子種のＰＡＭＰ、すなわち９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下または１の異なる分子種のＰＡＭＰであり得る。一つのオプションでは、成分（ｂ）のＰＡＭＰの異なる分子種の数に、特定のタイプのイヌリンから成るまたは構成されるイヌリン粒子との組み合わせに関し、制限があり得る。
別の実施形態では、成分（ａ）がデルタ・イヌリンから成るあるいは構成されるイヌリン粒子であるとき、成分（ｂ）は１０種、９種、８種、７種、６種、５種、４種、２種、２種、あるいは１種を越さない異なる分子種のＰＡＭＰで構成され得る。
別の実施形態では、成分（ａ）がエプシロン・イヌリンから成るあるいは構成されるイヌリン粒子であるとき、成分（ｂ）は１０種、９種、８種、７種、６種、５種、４種、２種、２種、あるいは１種を越さない異なる分子種のＰＡＭＰで構成され得る。
本発明の第二の態様では、ＰＡＭＰの異なる分子種は、例えば構造的に区別され得る。このような構造上の区別は、例えば、質量分析、核磁気共鳴、ＦＴＩＲ、ＣＤ、または示差走査熱量測定などの当該分野で知られており日常的である構造解析法によって決定され得る。
さらに、またはあるいは、本発明の第二の態様では、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の異なる分子種は、機能的に異なる得る。ＰＡＭＰの機能的に異なる分子種は、自然免疫受容体に異なる結合プロファイルを示することで特徴付けられ得る。これは、例えば、自然免疫受容体のパネルに対するＰＡＭＰ分子の結合能を測定することにより評価し得、自然免疫受容体のパネルは、ヒトまたは動物のＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−５、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７は、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９、マウスのＴＬＲ−１１などのＴＬＲ、ＮＯＤ−１、ＮＯＤ−２やＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＣ４の様な他のＮＯＤ様受容体（ＮＬＲｓ）、デクチン−１、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＡＩＭ−２、Ｃ型レクチン、ＭＤ２、ＣＤ１４、ＬＢＰ、ＣＤ３６、ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２および／またはＡＳＣを含むＲＩＧ−Ｉ様受容体などから選ぶことができる。
これらの受容体に対するＰＡＭＰ分子種の結合は、表面プラズモン共鳴などの一般的な方法によって評価し得る（Ｓｃｈａｓｆｏｏｒｔ，２００８）。当業者は、通常、非常に厳しい条件に適度で結合特異性の評価を提供するように選択されるべきである結合を評価する際の適切な条件を決定することができるであろう。
さらに、別法として、当業者によって知られているように、ＴＨＰ−１またはＲＡＷ細胞株などの免疫細胞株で、例えばＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社のＰｉｅｒｃｅルシフェラーゼ測定キットやＮＦκＢの活性化レポーター・アッセイを使用してあるいは、ＰＡＭＰ活性化能が知られている物質と細胞株を培養し炎症性遺伝子や蛋白質の活性化を測定する機能的アッセイにより、ＰＡＭＰの特性を検出または定量し得る。
本発明の第二の態様の一実施形態においては、組成物（必要に応じて、成分（ｃ）が別のＰＡＭＰを含む場合、組成物中のすべてのＰＡＭＰ）の成分（ｂ）に存在するすべてのＰＡＭＰ全体として、特に興味深い３、２、あるいは１以上の受容体と結合しないＰＡＭＰと上述の自然免疫受容体のパネルの受容体の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、あるいは１以上に結合しない。
貪食細胞におけるリソソームの溶解、インフラマソームの活性化、カスパーゼの活性化、免疫細胞死の誘導および内因性ＤＮＡの放出を通して、間接的に自然免疫系を活性化することができるが、アラム（あるいは他の金属塩またはマグネシウム、カルシウムやアルミニウムのリン酸塩、硫酸塩、水酸化物または水和物のような析出物）の様なアジュバント特性を有する抗原結合担体材料は、それ自体は特定のＰＡＭＰ受容体と結合することが示されておらず、そして病原体に発現する分子構造を模さず自然免疫受容体に結合する分子的に定義されているＰＡＭＰｓとは異なる方法で作用ため、これらは本明細書で使用するＰＡＭＰｓの定義から外れる。
なお、本発明の第二の態様の組成物の任意の成分（ｃ）は、例えば、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、淡白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、組換えウイルスベクター、微生物粒子、またはウイルス粒子からなる群から選択される１つまたは複数の追加の物質を含むことができ、成分（ｃ）は組成物に１つまたは複数の追加のＰＡＭＰｓを提供し得ることが理解されるであろう。例えば、微生物粒子、ウイルス粒子、エンドトキシンなどには、分子的、構造的、物理的および／または機能的に異なるＰＡＭＰの分子種が（確実に１０を超える）多数含まれる。
したがって、本発明の第二態様の組成物におけるＰＡＭＰｓの異なる分子種の総数は１０以上であり得る。しかし、それは本発明の第二の態様の一実施形態において、組成物の成分（ｂ）が１０またはより少ない異なるＰＡＭＰの分子種から成るという要件を損なうものでは無い。典型的には、それゆえ、任意に存在する成分は、分子構造的におよび／または機能的に成分（ｂ）に含まれる分子とは異なる分子である。
本発明の第二の態様の組成物に成分（ｂ）ぬ含まれる１つまたは複数のＰＡＭＰｓ（好ましくはすべてのＰＡＭＰｓ）は、平均分子量が２００，０００ＫＤａ以下、例えば、１５０，０００ＫＤａ以下、１００，０００ＫＤａ以下、５０，０００ＫＤａ以下、４０，０００ＫＤａ以下、２０，０００ＫＤａ以下、１０，０００ＫＤａ以下、５，０００ＫＤａ以下、２，０００ＫＤａ以下、１，０００ＫＤａ以下、５００ＫＤａ以下、４５０ＫＤａ以下、４００ＫＤａ以下、３５０ＫＤａ以下、３００ＫＤａ以下、２５０ＫＤａ以下、２００ＫＤａ以下、１５０ＫＤａ以下、１００ＫＤａ以下、５０ＫＤａ以下、４０ＫＤａ以下、３０ＫＤａ以下、２０ＫＤａ以下、１０ＫＤａ以下、９ＫＤａ以下、８ＫＤａ以下、７ＫＤａ以下、６ＫＤａ以下、５ＫＤａ以下、４ＫＤａ以下、３ＫＤａ以下、２ＫＤａ以下、１ＫＤａ以下あるいはそれ以下である。
本発明の第二の態様に係る組成物は、薬学的に許容される組成物であってもよい。
さらに薬学的に許容される組成物は、ヒトのような個体に例えば、静脈内、皮下または筋肉注射として安全に投与される組成物であってもよい。
一つの実施形態では、もしそれが全くまたは実質的にエンドトキシンを含まない場合、組成物は安全であると定義し得る。エンドトキシンは、多くの場合、グラム陰性菌の外細胞壁の主要構成成分であるリポ多糖体という用語と同義に使用される。それは、エンドトキシンで観察される毒性効果の原因である脂質Ａとして知られている脂質部分と多糖類（糖）鎖から構成されている。
糖鎖は、異なる細菌間で非常に異なり、エンドトキシンの血清型を決定し、脂質成分もまた、単一エンドトキシンのサンプルが何十から何百の異なる分子種を含むように、非常に多様である。エンドトキシンのサイズは約１０ｋＤａであるが、最大１０００ｋＤａの大きな凝集体をも形成し得る。
エンドトキシンは、治療用組成物内で通常有害で発熱性であり、規制当局は医薬組成物内のエンドトキシンの許容レベルに厳しい制限を課している。従って、本発明の第二の態様に記載の組成物中のエンドトキシンのレベルが最小化されるべきであり、用量当たり１００エンドトキシン単位（ＥＵ）未満または９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ以下のＥＵ／用量であり得る。本発明の第二の態様に記載の組成物中のエンドトキシンの濃度は、２００ＥＵ／ｍ３未満または１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ以下のＥＵ／ｍ３であり得る。
いくつかの実施形態では、これらの制限は、成分（ａ）のイヌリン粒子が、ガンマ・イヌリン、デルタ・イヌリンまたはエプシロン・イヌリンの内の１つまたは２つので構成または組成される本発明の第二の態様の組成物に適用され得る。カブトガニ・アメボサイト・アッセイ（ＬＡＬ）法のようなエンドトキシンレベルの測定方法は、当該分野で周知である。
本発明の第二の態様の組成物は、必要に応じてパッケージ化されたおよび／または便利な単位剤形で提供することができる。
本発明の第二の態様の組成物中の成分（ｂ）（および必要に応じて、組成物全体におけるＰＡＭＰの量および／または濃度）に含まれるＰＡＭＰの量および／または濃度は、好ましくは、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないだけという点でのみ異なっている同等の組成物に要求されるＰＡＭＰの量以下である。換言すれば、本発明の第二の態様の組成物の成分（ａ）のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の存在が、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないだけという点でのみ異なっている同等の組成に比して成分（ｂ）のより少量のＰＡＭＰにより個体に免疫反応を誘導または変調し得る。
従って、本発明の第二の態様の組成物の成分（ｂ）の一つあるいは複数のＰＡＭＰｓの量または濃度（および必要に応じて、組成物全体における一つまたは複数のＰＡＭＰｓの量および／または濃度）は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないだけという点でのみ異なっている同等の組成物で必要とされてるＰＡＭＰｓと同じまたはそれ以上の最適量の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０５％、０．０４％、０．０２％、０．０１（重量）％あるいはそれ未満であり得る。
同等の組成におけるＰＡＭＰｓの最適量は、例えば許容できないレベルの炎症および／または他の副作用を引き起こす程高くは無いが、同時に投与される抗原に対する免疫応答を増強するアジュバント効果を達成するために必要とされる量である。当該技術分野では、これは、例えば動物モデルにおいて用量毒性試験を行うことによる、あるいは細胞ベースの機能アッセイにおけるＮＦκＢの活性化の程度を測定するような代理指標の利用による等の日常的方法を用いて、個々のＰＡＭＰについて経験的に決定することができることが知られている。
現実には、このような同等の組成物は、イヌリン粒子が存在しない場合には、いかなる量のＰＡＭＰが含まれていても、同じレベルまたはタイプの誘導や調整を達成でき得ないかもしれない。いくつかの実施形態では、これらの制限は、ガンマ・イヌリン、デルタ・イヌリンまたはエプシロン・イヌリンの一つまたは二つで構成または組成される成分（ａ）にイヌリン粒子が含まれる本発明の第二の態様の組成物に適用され得る。
成分（ａ）内のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）と本発明の第二の態様の組成物の成分（ｂ）内のＰＡＭＰの所望の効果を達成するために適切なまたは最適な比率は、当業者によって日常的方法により、それぞれの特定のイヌリン粒子とＰＡＭＰの組み合わせに毎に経験的に決定され得る。しかしながら、典型的には、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）とＰＡＭＰの重量／重量比は１０，０００：１から１：１、１０００：１から１：１、１００：１から１：１、あるいは１００：１から１０：１の範囲であり得る。
従って、本発明の第二の態様に係る免疫学的組成物は、所望の免疫応答を誘導するための有効量を含むことができ、前記組み合わせは、少なくとも一種のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）と少なくとも一つのＰＡＭＰ自然免疫賦活剤を含む。免疫学的組成物におけるＰＡＭＰ自然免疫賦活剤は、当該技術分野において既知の任意のタイプのＰＡＭＰ自然性免疫賦活剤あり得る。
例えば、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、一つまたは複数の自然免疫受容体と結合しアゴニストとして知られている物質のいずれかグループから選択し得る。従って、本発明で使用できるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、ＴＬＲｓ、ＲＮＡヘリカーゼ、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＣ４などのような他のＮＯＤ様受容体（ＮＬＲｓ）のアゴニストに結合し、デクチン−１、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＡＩＭ−２、Ｃ型レクチン、ＭＤ２、ＣＤ１４、ＬＢＰ、ＲＩＧ−Ｉを含むＲＩＧ−Ｉ様受容体、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２および／またはＡＳＣ、Ｃ型レクチン受容体、補体受容、Ｆｃ受容体、およびスカベンジャー受容体の任意の一つまたは複数の自然免疫受容体と結合しアゴニストとして働き得る。
本発明の第三の態様は、（ａ）第一の容器はイヌリン粒子および／または一つあるいは複数のＩＬ−１またはＮＦκＢ（本発明の第二の態様に関して上記で説明した）の抗炎症阻害剤で構成あるいは組成物され、そして（ｂ）ＰＡＭＰで構成または組成される物質が含まれている第二の容器からなるキットを提供する。
本発明の第二の態様の特定の実施形態における組成物中の各種成分のアイデンティティ、種類、量、濃度等に関する上記の開示は、本発明の第三の態様のキットの第一および第二の容器の組成物および物質の定義に準用することができる。
したがって、本発明の第三の態様の一実施形態では、第二の容器内に存在する物質は、１０を越えない、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、またはそれ以下の異なる分子種のＰＡＭＰを含むことができる。一つのオプションでは、第二の容器内に存在する物質におけるＰＡＭＰの異なる分子種の数の制限は、キットの第一のコンテナーが、ガンマ・イヌリンのみ、デルタ・イヌリンのみあるいはエプシロン・イヌリンのみというような特定の種類のイヌリン粒子から成るまたは組成される場合のみ適用することができる。
本発明の第三の態様の別の実施形態では、第二の容器内に存在するＰＡＭＰの全体は２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以上の上述の自然免疫受容体のパネルの受容体と結合しないことがある。
本発明の第三の態様のキットの最初のコンテナおよび／または第二の容器の一方または両方が必要に応じてさらに、例えば、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、淡白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、組換えウイルスベクター、微生物粒子、またはウイルス粒子からなる群から選択される、一つまたは複数の追加の物質を含んでいてもよい。
本発明の第三の態様のキットの第二の容器中に存在するひとつまたは複数のＰＡＭＰｓ（好ましくは全てのＰＡＭＰｓ）は、最大の平均分子量が２００，０００ＫＤａ未満、１５０，０００ＫＤａ、１００，０００ＫＤａ、５０，０００ＫＤａ、４０，０００ＫＤａ、２０，０００ＫＤａ、１０，０００ＫＤａ、５，０００ＫＤａ、２，０００ＫＤａ、１，０００ＫＤａ、５００ＫＤａ、４５０ＫＤａ、４００ＫＤａ、３５０ＫＤａ、３００ＫＤａ、２５０ＫＤａ、２００ＫＤａ、１５０ＫＤａ、１００ＫＤａ、５０ＫＤａ、４０ＫＤａ、３０ＫＤａ、２０ＫＤａ、１０ＫＤａ、９ＫＤａ、８ＫＤａ、７ＫＤａ、６ＫＤａ、５ＫＤａ、４ＫＤａ、３ＫＤａ、２ＫＤａ、１ＫＤａあるいはより小さいのもである。
本発明の第三の態様のキットの最初の容器および／または第二の容器の一方または両方が、その中に含まれる物質の単位用量が含まれ得る。上記で定義した本発明の第三の態様のキットの最初の容器および／または第二の容器のいずれかまたは両方は、典型的には、薬学的に許容される組成物となる。したがって、キットの最初の容器および／または第二の容器のいずれか、または両方のエンドトキシンのレベルは用量当たり１００ＥＵ未満または９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ以下のＥＵ／用量であり得る。キットの最初の容器および／または第二の容器のいずれか、または両方にのエンドトキシンの濃度は、２００ＥＵ／ｍ３未満または１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ以下のＥＵ／ｍ３であり得る。いくつかの実施形態では、これらの制限は、第一の容器内に存在するイヌリン粒子がガンマ・イヌリン、デルタ・イヌリンまたはエプシロン・イヌリンの１つまたは二つで構成される本発明の第三の態様のキットに適用し得る。
本発明の第三の態様のキットの最初の第二の容器に存在するＰＡＭＰの量および／または濃度は、好ましくは最適量の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０５％、０．０４％、０．０２％、０．０１（重量）％あるいはそれ未満であり得る。
本発明の第三の態様の一実施形態では、第一の容器内のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）と第二の容器内のＰＡＭＰの重量／重量比は１００００：１から１：１、１０００：から１：１、１００：１から１：１、あるいは１００：１から１０：１の範囲であり得る。
本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかのさらなる実施形態において、ＰＡＭＰから成るまたはで構成される物質は、自然免疫賦活剤とし、ＴＬＲｓ、ＲＮＡヘリカーゼ、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＣ４などのような他のＮＯＤ様受容体（ＮＬＲｓ）のアゴニストに結合し、デクチン−１、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＡＩＭ−２、Ｃ型レクチン、ＭＤ２、ＣＤ１４、ＬＢＰ、ＲＩＧ−Ｉを含むＲＩＧ−Ｉ様受容体、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２および／またはＡＳＣ、Ｃ型レクチン受容体、補体受容、Ｆｃ受容体、およびスカベンジャー受容体の一つまたは複数と結合しアゴニストとして働き得る。
本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかのさらなる実施形態において、各ＰＡＭＰは、ジアシルリポペプチド、トリアシルリポペプチド、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、リポテイコ酸、ペプチドグリカン、ＨＳＰ７０、ザイモサン、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡは、二本鎖ＤＮＡ、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ−ＬＣ）、ＨｉｌｔｏｎｏｌＴＭ、ＰｏｌｙＩ：ＰｏｌｙＣ１２−Ｕ、ＡｍｐｌｉｇｅｎＴＭ、ＭＰＬＡ、ヒート・ショック淡白質、フィブリノーゲン、ヘパラン硫酸断片、ヒアルロン酸断片、合成ＴＬＲ４アゴニスト、イミダゾキノリン、ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ、ロキソリビン、ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ、ＣＬ２６４、Ｒ８４８、ＣＬ０７５、ＰｏｌｙＵ、イミキモッド、レシキモッド、ｓｓＰｏｌｙＵ／ＬｙｏＶｅｃ、ｓｓＲＮＡ４０／ＬｙｏＶｅｃ、非メチル化ＣｐＧオリゴヌクレオチド、クラスＢ ＯＤＮ、クラスＣ ＯＤＮ、ＣｐＧ２００６、ＣｐＧ１８２６、ＣｐＧ７９０９、Ｃ１２−ｉＥ−ＤＡＰ、ｉＥ−ＤＡＰ、Ｔｒｉ−ＤＡＰ、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、Ｌ８−ＭＤＰ、Ｍ−ＴｒｉＤＡＰ、ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ、ＰＧＮ−ＥＣｎｄｉ、ＰＧＮ−ＥＣｎｄｓｓ、ＰＧＮ−Ｓａｎｄｉ、ｐｏｒｉｎ、リポアラビノマンナン、ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｍａｎｎａｎ、ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｘｙｌｏｍａｎｎａｎ、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型淡白質、ヘモゾイン、ウイルスの二本鎖ＤＮＡ、合成二本鎖ＤＮＡ、ウイルス二本鎖ＲＮＡ、合成二本鎖ＲＮＡ、ムラミルを含むペプチドグリカン、ＮＡＧ−ＮＡＭ−γ−Ｄ−グルタミルメソジアミノピメリン酸ジペプチド、ＮＡＧ−ＮＡＭ−Ｌ−アラニールーイソグルタミンムラミルジペプチドを含むペプチドグリカン、Ｎ−ホルミルメチオニン、ムラミルトリペプチド、β−１，３−グルカン、ザイモサン、臍帯因子、トレハロース−６，６−ジベヘネート、Ｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）、Ｐｏｌｙ（ｄＧ：ｄＣ）、５’ｐｐｐ−二本鎖ＲＮＡ、低密度リポ淡白質（ＬＤＬ）、酸化ＬＤＬ、化学的に修飾されたＬＤＬ、ヘモゾイン、ＡＴＰからなる群より世羅ばれる物質であり得る。
本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかの別の実施形態では、イヌリン粒子は、ガンマ・イヌリン、デルタ・イヌリンとエプシロン・イヌリンの一つまたは複数から選択されるイヌリンで構成または組成されていてもよく、さらに、本明細書に記載のような方法によって得ることができるようフォスガムリン、フォスデルチィン、フォスエプシリン、アルガムリン、そしてアルガムリン、アルデルチィン、アルエプシリンを含むイヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの一つまたは複数の組み合わせであり得る。アルファおよび／またはベータ／イヌリンあるいは他の修飾イヌリン粒子は、それらが適切な粒子の形状を提供する、ガンマ、デルタまたはエプシロンイヌリンに加えて、または代わりに使用され得る。
前記第一の態様、第二の態様および／または第三の態様のキットの第一および／または第二の容器の組成物のさらなる実施形態において使用される組成物は、少なくとも二つのイヌリン製剤の粒子を含み、または構成されており、その後の製剤は、イヌリン多形態の存在および／または抗原結合担体材料の存在や種が異い得る。例えば−
● イヌリン粒子は、ガンマ・イヌリン（および／またはガンマ・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とデルタ・イヌリンの混合物であってもよい。
● イヌリン粒子は、ガンマ・イヌリン（および／またはガンマ・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とエプシロン・イヌリンの混合物であってもよい。
● イヌリン粒子は、デルタ・イヌリン（および／またはデルタ・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とガンマ・イヌリンの混合物であってもよい。
● イヌリン粒子は、デルタ・イヌリン（および／またはデルタ・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とエプシロン・イヌリンの混合物であってもよい。
● イヌリン粒子は、エプシロン・イヌリン（および／またはエプシロン・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とガンマ・イヌリンの混合物であってもよい。
● イヌリン粒子は、エプシロン・イヌリン（および／またはデルタ・イヌリンとリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムの混合物）とデルタ・イヌリンの混合物であってもよい。
上記のリストにおいて、ガンマ、デルタおよび／またはエプシロン・イヌリンは必要に応じて、アルファ・イヌリンおよび／またはベータ・イヌリンと置き換えてもよい。
本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかのさらなる実施形態では、第一の態様で使用される組成物、第二の態様および／または第三の態様で使用される組成物、および／または第三の態様のキットの第一および／または第二の容器の組成は、さらに、例えば、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、淡白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、組換えウイルスベクター、微生物粒子、またはウイルス粒子からなる群から選択され得る一つまたは複数の追加の物質を含んでいてもよい。
従って、本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかのさらなる実施形態では、組成物は、第一の態様、第二の態様および／または第三の態様のキットの第一および／または第二の容器の組成は、さらに、一つまたは複数の抗原を含んでもよい。各抗原は、当該分野で公知の抗原の任意のタイプであってよく、淡白質、糖淡白質、ペプチド、ポリペプチド、細胞、細胞抽出物、多糖類、多糖類コンジュゲート、脂質、糖脂質、核酸および炭水化物、炭水化物のコンジュゲート、脂質と淡白質、ポリペプチド／ペプチド抗原のコンジュゲート、多糖のペプチド模倣体、または抗原はまた核酸配列内にコード化され得る、からなる群から選ばれ得る。抗原は未精製、精製あるいは組換え体として投与し得る。抗原は、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫などの感染性病原体に由来、または腫瘍抗原、アレルゲン、または自己淡白由来であり得る。
一つまたは複数の抗原、特に一つまたは複数のワクチン抗原が本発明の第一、第二または第三の態様のいずれかのさらなる実施形態に含まれてる場所、それがまたさらに、抗原の混合物中に一つまたは複数の抗原結合担体を含めることが適当であり得る。
本発明の第二および第三の態様はまた、第二の態様の組成物または第三の態様のキットの組成物を調製する方法を提供する。方法は、コンポーネント部品を提供する段階と、第二の態様の組成物または第三の態様のキットの組成物を形成するためにそれらを一緒にする工程を含んでもよい。
また、本発明は、個体に第二の態様または第三の態様のよるキットの免疫学的組成物の治療的有効量を投与ことを含む、免疫応答を刺激またはを調節する方法を提供する。方法は、個体に第二の態様または第三の態様のよるキットの免疫学的組成物を投与する段階を含み、組成物または各構成物が所望の免疫応答または効果を誘導する有効量、効果的な時間と経路で投与されることを含む。
従って、本発明の第四の態様は、個体に免疫反応を誘導あるいは調節する方法を提供し、前記方法は、個体に本発明の第二の態様による組成物の治療有効量を投与するか、本発明の第三の態様のキットの第一及び第二の容器の内容物の治療有効量を同時に、順番にあるいは別々に投与することから成る。
別の言い方をすると、本発明の第四の態様は、個体に免疫反応を誘導あるいは調節するために使用する、本発明の第二の態様に係る組成物または本発明の第三の態様に係るキットに係る組成物を提供する。
さらに換言すると、本発明の第四の態様は、個体に免疫反応を誘導あるいは調節するための薬剤製造に用いる本発明の第二の態様に係る組成物および／または本発明の第三の態様に係るキットの使用法を提供する。
本発明の第四の態様の一実施形態では、免疫応答の調節は、イヌリン粒子を含まないという点でのみ異なる同等の組成物が個体に生じる免疫反応の発達の速度に比べて、より速い速度で免疫応答を発達させるということを含んでもよい。この免疫反応は、例えば、一つあるいは複数の抗原に対する獲得免疫反応であってもよい。獲得免疫反応は、一つまたは複数のＴ細胞（一つまたは複数のＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）および／またはＢ細胞、そして例えばＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭのような一つまたは複数のタイプやサブタイプの抗体またはＩＦＮ−γ、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ７、ＩＬ−８、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−２０のような一つまたは複数のサイトカインの生産であってもよい。
本発明の第四の態様の別の実施形態では、免疫反応の調節は、イヌリン粒子を含まないという点でのみ異なる同等の組成物が個体に生じる免疫反応の特異性に比して個体の免疫反応をより特異的にする調節を含んでもよい。この免疫反応は、例えば、獲得免疫反応であってもよい。
獲得免疫反応は、一つまたは複数のＴ細胞（一つまたは複数のＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）および／またはＢ細胞、そして例えばＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭのような一つまたは複数のタイプやサブタイプの抗体の生産であってもよい。特異性の上昇は、例えば投与された組成物に含まれるいかなる抗原に対するＢ−またはＴ−細胞の特異性の上昇を含んでもよい。
本発明の第四の態様の別の実施形態では、免疫反応の調節は、イヌリン粒子を含まないという点でのみ異なる同等の組成物が個体に生じる免疫反応の大きさに比して個体の免疫反応の大きさを増大を含んでもよい。この免疫反応は、例えば、獲得免疫反応であってもよい。獲得免疫反応は、一つまたは複数のＴ細胞（一つまたは複数のＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）および／またはＢ細胞、そして例えばＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭのような一つまたは複数のタイプやサブタイプの抗体の生産であってもよい。
本発明の第四の態様の別の実施形態では、免疫反応の調節は、イヌリン粒子を含まないという点でのみ異なる同等の組成物が個体に生じる免疫反応の持続時間に比して個体の免疫反応の持続時間の増大を含んでもよい。この免疫反応は、例えば、獲得免疫反応であってもよい。獲得免疫反応は、一つまたは複数のＴ細胞（一つまたは複数のＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）および／またはＢ細胞、そして例えばＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭのような一つまたは複数のタイプやサブタイプの抗体の生産であってもよい。
本発明の第四の態様の別の実施形態では、免疫反応の調節は、イヌリン粒子を含まないという点でのみ異なる同等の組成物が個体に生じる免疫反応のタイプに比して個体の免疫反応のタイプの修飾を含んでもよい。この免疫反応は、例えば、獲得免疫反応であってもよい。獲得免疫反応のタイプは、一つまたは複数の他の獲得免疫の態様に比べ速度、大きさ、特異性、および／または持続期間の一つまたは複数によって特徴づけることができてもよい。
獲得免疫の態様は、例えば一つまたは複数のＴ細胞（一つまたは複数のＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７およびＴｒｅｇ細胞を含む）および／またはＢ細胞の反応を含み、そして例えば一つまたは複数のＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭのような一つまたは複数のタイプまたはサブタイプ抗体の産生により決定され得る。
本発明の第四の態様によれば、個体の免疫反応のタイプのより具体的な修飾例は、自然免疫と獲得免疫反応のバランスの修正、免疫記憶反応の増強、他の反応に比してＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７またはＴｒｅｇ細胞の反応を増強あるいは抑制、ＩｇＥ反応の抑制、ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＧサブタイプ反応の一つまたは複数の増強を含む。別の言い方をすると、本発明の第四の態様は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないという点でのみ異なる同等の組成物またはキットを使用した場合には達成し得ない、ワクチン抗原に対する最適なＴ−またはＢ−細胞反応を含む、最適な免疫サブクラスまたはサブタイプ応答を得る方法を提供する。
本発明の第五の態様は、抗原に対する免疫反応を誘導または調節するための方法を提供し、前記方法は−
（ａ）個体に、本発明の第二の態様に係る組成物の治療有効量を投与することであって、前記組成物はまた、抗原および必要に応じてさらに抗原結合担体材料を含み；あるいは
（ｂ）同時に、順次または別々に本発明の第三の態様のキットの第一および第二の容器の内容物の治療的有効量を個体に投与する。ここではキットの第一および／または第二の容器の内容物は、抗原および必要に応じてさらに抗原結合担体材料を含む。
別の言い方をすると、本発明の第五の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を提供し、ここで組成物は、抗原および必要に応じて、さらに抗原に対する免疫反応を変調するために使用する抗原結合担体材料を含み、さらに抗原結合担体材料を含むキットの第一および／または第二の容器の内容物が抗原に対する免疫反応を変調するために使用する抗原結合担体材料を含む本発明の第三の態様のキットを提供する。
さらに換言すると、本発明の第五の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を使用するために提供され、前記組成物はまた、抗原および必要に応じて、さらに抗原に対する免疫反応を誘導または調節するための医薬の製造のための抗原結合担体材料を含み、さらに本発明の第三の態様のキットを使用するために提供され、前記組成物はまた、キットの第一および／または第二の容器の内容物が抗原および必要に応じて、さら抗原に対する免疫反応を変調するための医薬の製造のための抗原結合担体材料を含む。
本発明の第六の態様は、個体のワクチン接種のための方法を提供し、その方法は−
（ａ）個体に本発明の第二の態様に係る組成物の治療有効量を投与することであって、前記組成物はまた、抗原および必要に応じて、さらに抗原結合担体材料を含み、あるいは
（ｂ）同時に、順次または別々に本発明の第三の態様のキットの第一および第二の容器の内容物の治療的有効量を個体に投与する。ここではキットの第一および／または第二の容器の内容物は、抗原および必要に応じてさらに抗原結合担体材料を含む。
別の言い方をすると、本発明の第六の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を提供し、ここで組成物は、抗原および必要に応じて、さらに抗原に対する免疫反応を変調するために使用する抗原結合担体材料を含み、さらに抗原結合担体材料を含むキットの第一および／または第二の容器の内容物が抗原に対する免疫反応を変調するために使用する抗原結合担体材料を含む本発明の第三の態様のキットを提供する。
さらに換言すると、本発明の第六の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を使用するために提供され、前記組成物はまた、抗原および必要に応じて、さらに抗原に対する免疫反応を誘導または調節するための医薬の製造のための抗原結合担体材料を含み、さらに本発明の第三の態様のキットを使用するために提供され、前記組成物はまた、キットの第一および／または第二の容器の内容物が抗原および必要に応じて、さらに抗原に対する免疫反応を変調するための医薬の製造のための抗原結合担体材料を含む。
本発明の第五および／または六の態様で使用するのに適したワクチン抗原は、上記の本発明の第一、第二および第三の態様について記載したものを含めて、本出願のどこかで記載されたものを含んでよい。
本発明の第五および／または第六の態様で使用する抗原の量および／または濃度は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないという点でのみ異なる同等の組成物および／またはキットに必要なものより少ない抗原であってもよい。換言すれば、組成物および／またはキットに存在するイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が、より少ない抗原量で第五の態様における免疫反応の誘導または調節あるいは第六の態様で個体を免疫する方法や使用法を提供してもよい。
したがって、本発明の第五および／または第六の態様の組成物および／またはキットの一つまたは複数の抗原の量または濃度は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が含まれていないという点でのみ異なる同等の組成物および／またはキットで所望の免疫反応、または個体に効果的なワクチン接種を達成するために必要とされているものと同じ一つまたは複数の抗原の最適量の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０５％、０．０４％、０．０２％、０．０１（重量）％あるいはそれ未満であり得る。
同等の組成物における最適量は、許容できないレベルの炎症および／または他の副作用を引き起ことなく、免疫反応の望ましい誘導または調節効果を達成するために必要とされる量である。この量は、抗原とＰＡＭＰそれぞれにつき、日常的な方法を使用して、当業者によって経験的に決定され得る。実際、このような同等の組成物は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の非存在下では、いかなる量の抗原を使用したとしても、同じレベルまたはタイプの免疫誘導や変調、またはワクチン接種、を完全には達成できないかもしれない。
本発明はまた、例えばアレルゲン特異的ＩｇＥの下方制御またはアレルゲン特異的アレルギー阻止ＩｇＧの誘導により、アレルゲンに対するアレルギー、または慢性炎症性疾患のような個体に既存の望ましくない免疫反応を下方制御する方法を提供する。この方法は、第二の態様の組成物または第三の態様のキットの構成物、そして必要に応じて望ましくない免疫反応を下方制御しさらに／または望ましい反規制免疫反応を誘導する、有効量で効果的な時間と経路で投与される抗原またはアレルゲンなどのさらなる組成物を個体に投与する工程を含む。
従って、本発明の第七の態様は、個体をアレルゲンに対し減感作するための方法を提供し、この方法は−
（ａ）個体に本発明の第二の態様に係る組成物の治療有効量を投与することであって、前記組成物はまた、アレルゲン必要に応じさらにアレルゲン結合担体材料を含む、または
（ｂ）同時に、順次または別々に本発明の第三の態様のキットの第一および第二の容器の内容物の治療有効量を個体に投与することであって、ここではキットの第一および／または第二の容器の内容は、アレルゲン、必要に応じてさらにアレルゲン結合担体材料をも含む。
別の言い方をすると、本発明の第七の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を提供し、ここで組成物は、アレルゲンおよび必要に応じて、さらに個体のアレルゲン減感作に使用するアレルゲン結合担体材料を含み、キットの第一および／または第二の容器の内容物がアレルゲンおよび必要に応じて、さらに個体のアレルゲン減感作に使用するアレルゲン結合担体材料を含む本発明の第三の態様のキットを提供する。
さらに換言すると、本発明の第七の態様は、本発明の第二の態様に記載の組成物を使用するために提供され、前記組成物はまた、アレルゲンおよび必要に応じて、さらに個体のアレルゲン減感作に使用するための医薬の製造のためのアレルゲン結合担体材料を含み、さらに本発明の第三の態様のキットを使用するために提供され、前記組成物はまた、キットの第一および／または第二の容器の内容物がアレルゲンおよび必要に応じて、さらに個体のアレルゲン減感作に使用するための医薬の製造のためのアレルゲン結合担体材料を含む。
本発明の第八の態様は、癌治療のための方法を提供し、前記方法は、個体に請求項の第二の態様に記載の組成物の治療的有効量を投与することによるか、または同時に、連続して、あるいは別々に、個体に本発明の第三の態様のキットの第一および第二の容器の内容物の治療的有効量を投与することから成る。
別の言い方をすると、本発明の第八の態様は、癌治療に使用する本発明の第二の態様に係る組成物または本発明の第三の態様のキットを提供する。
さらに別の言い方では、本発明の第八の態様は、本発明の第二の態様または本発明の第三の態様のキットに記載の組成物の癌治療に使用する医薬の製造における使用方を提供する。
本発明の第八の態様の一実施形態では、本発明の第二の態様に係る組成物は、さらにそこで用いられるように癌抗原を含む。
本発明の第八の態様の別の実施形態では、本発明の第三の態様のキットの第一および／または第二の容器の内容物は、さらに、そこで用いられるように癌抗原を含む。
本発明の第九の態様は、ワクチンの製造法、本発明の第二の態様の組成物の成分（ａ）および（ｂ）と抗原を結合させる工程から成る方法、および必要に応じて抗原結合担体材料をも結合させワクチン組成物を製造する方法を提供する。
従って、本発明の第九の態様はまた、ワクチンのアジュバントとして、本発明の第二態様の組成物の使用を提供する。
以下の実施例において、我々が、本発明に係る組成物は、ワクチンの単回投与により、そうでなければ致死的感染症に対する防御を提供できることを実証することに留意されたい。我々はまた、マウスモデルにおいて本発明の組成物は、インフルエンザワクチンと調整すると、効果的な単回投与による防御を提供することができることを見出した。単回投与ワクチンによる防御は、ワクチン学の分野で達成することが非常に望ましいが、従来達成困難であった。しかし、本願の組成物は、単回投与ワクチンによる防御を提供することが見出されている。
従って、本発明の第九の態様の別の実施形態では、単回投与ワクチン組成物は、イヌリン粒子（必要に応じて本発明の第二の態様または第三の態様のキットに記載の組成物の形で）、抗原、必要に応じてさらに抗原結合担体材料から成るまたは組成される単回投与ワクチン組成物を提供する。このような単回投与ワクチン組成物は、ワクチンの単回投与のみで個体にワクチンによる防御を有効に提供できる。
さらに、個体にワクチンの単回投与することから成る方法による個体のワクチン投与法もまた提供される。方法は一つまたは複数の他の工程を含んでもよいが、初回投与後にいかなる追加のワクチン投与ステップも含まない。
したがって、別の言い方をすると、本発明はまた上記で定義された単回投与ワクチンもまた提供し、個体にワクチンを単回投与することから成る方法により個体のワクチンに使用できる。
さらに換言すれば、本発明はまた上記で定義された単回投与ワクチンの使用法もまた提供し、個体にワクチンを単回投与することから成る方法により個体のワクチンに使用するための医薬の製造のための使用法を提供する。
本発明のさらに有利な特徴は、本発明の他の側面による組成物、物質、キットおよび方法は、従来のアジュバントおよびワクチン組成物に全くあるいは十分に反応しない典型的な個体群の治療に特に効果的である。このような対象グループは、若年、高齢者や妊婦を含んでもよい。一実施形態において、本発明のインフルエンザワクチンは、このような個体への投与が特に興味深いかもしれない。
従って、本発明の他の局面に係る組成物、物質、キットおよび方法によって治療される対象は、たとえば男性または女性の子供であってよい。子供は、例えば彼らの生年月日を基準に１８歳以下、１７歳、１６歳 １５歳、、１４歳、１３歳、１２歳、１１歳、１０歳、９歳、８歳、７歳、６歳、５歳、４歳、３歳、２歳、１歳、１１ヶ月、１０ヶ月、９ヶ月、８ヶ月、７ヶ月、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、または１ヶ月であってよい。
あるいは、本発明の他の局面に係る組成物、物質、キットおよび方法によって治療される対象は、たとえば男性または女性のより年長者であってよい。年長者は、少なくとも４０歳、少なくとも４５歳、少なくとも５０歳、少なくとも５５歳、少なくとも６０歳、少なくとも６５歳、少なくとも７０歳、少なくとも７５歳、少なくとも８０歳、少なくとも８５歳、または少なくとも９０歳であってよい。
あるいは、本発明の他の局面に係る組成物、物質、キットおよび方法によって治療される対象は、妊娠中の女性であってよい。女性は最大あるいは少なくとも、妊娠５、１０、１５、２０、２５、３０、３５または４０週であってよい。
本発明の第十の態様は、本発明の第二の態様の組成物の成分（ａ）と（ｂ）の最適な濃度と比率を同定する方法を提供し、その方法は、必要に応じて抗原を結合する工程、および必要に応じて抗原結合担体材料もまた本発明の第二の態様に係る組成物の成分（ａ）および（ｂ）とを異なる投与量の範囲内で一連の個体に投与し、その結果生ずる免疫反応を測定し、さらに必要に応じて個体を生きた病原体で攻撃し、最適な組成を同定することによる。
本発明の第十の態様の別の実施形態では、本発明の第三の態様に係るキットの第一および／または第二の容器の内容物は、必要に応じて抗原と共に、所望の免疫反応のための最適な組成物を同定するための測定キットを構成する。
本発明の第十の態様の別の実施形態では、測定キットの製造方法を提供し、その方法は、抗原、必要に応じて、抗原結合担体材料と本発明の第二の態様に係る組成物の成分（ａ）と（ｂ）を結合させる工程を含み、それによってワクチン測定キットを製造する。
これらおよび他の態様および本発明の実施形態を以下により詳細に記載する。
発明の詳細な説明
本発明の実施は、特に反する指示がない限り、ウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡの一般的方法が当該技術の範囲内で用いられ、例示の目的のために以下でその多くが説明される。このような技法は文献で十分に説明されている。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ．ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ＩＳＢＮ ９７８０４７１５２２７６８（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ），Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍａｎｍｏｈａｎ Ｓｉｎｇｈ ｅｄ．２００７），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＩＳＢＮ ９７８１６０７６１５８４２（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ），Ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０１１，ＩＳＢＮ：１４４１９１３３８６（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）を参照されたい。
特記しない限り、本明細書で使用される専門用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本発明の実施または試験において、本明細書に記載のものと類似のまたは同等の任意の方法および材料を用いることができるが、好ましい方法および材料を以下に記載する。
当分野で経験がある者に知られているように、自然免疫の活性化は獲得免疫記憶反応の種類や大きさを増強するために使用することができる。獲得免疫反応の増強または調整は、特定の病原体に対する免疫記憶反応の持続時間を拡大または拡張する手段を提供したり、あるいはより有益な免疫反応のタイプに変更できるので、ワクチン接種時またはアレルゲン減感作時に有利である。
例えば、ある病原体にとっては、免疫する抗原に対する強い抗体（Ｔｈ２）の誘導が有利かも知れず、また他の病原体にとっては、強いＴｈ１またはＴｈ１７反応が有利かもしれない。一方アレルゲンのような抗原に対しては、既存のＩｇＥ反応を抑制しその代わりアレルゲンに対するＴｈ１反応を誘導する方が有利かも知れない。
本発明では、イヌリン粒子と病原体関連分子パターン剤の組み合わせが、例えば同時に投与される抗原に対する獲得免疫記憶反応を調節するために使用することができる、様々な独特の免疫反応を得ることを可能にするが発見された。
本発明は第一の態様として、個体におい炎症の軽減または阻止および／または炎症性疾患の治療または予防に用いるイヌリン粒子で組成または構成される組成物を提供する。
本発明は第二の態様は、（ａ）イヌリン粒子および・または他のＩＬ−１の抗炎症阻害剤と共に（ｂ）一つまたは複数の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）のような病原体関連分子パターン剤から成るあるいはで構成される免疫学的および／または薬学的に許容される組成物を提供する。理論に束縛されることを望むものではないが、免疫学的組成物の２つの成分の各々が免疫遺伝子の独立したセットの転写を調節し、個々の成分により誘導される遺伝子発現パターンとは異なる混合物に固有な混合免疫組成物に応答した免疫遺伝子発現パターンを誘導するために、望ましい免疫応答が引き起こされる。
本発明は第三の態様は、（ａ）第一の容器がイヌリン粒子および／または一つあるいは複数の他のＩＬ−１の抗炎症阻害剤（本発明の第二の態様に関し上述した）と（ｂ）第二の容器が病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）で組成または構成される物質を含む成分で構成されるキットを提供する。
本発明の第二の態様または本発明の第三の態様のキットの成分（ａ）は、ＩＬ−１の抗炎症阻害剤またはＮＦκＢの抗炎症阻害剤のような抗炎症成分から成るあるいはで構成される。
本発明の特に興味のある実施形態では、抗炎症成分はイヌリンの粒子から成るあるいはで構成されている。ここで用いられる「イヌリン粒子」という用語は、（イヌリンとして知られる）β−Ｄ−（２−１）ｐｏｌｙｆｒｕｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅから成る粒子のみならず、例えば末端グルコースを除去できるインベルターゼまたはイヌラーゼ酵素を使用しイヌリンの末端グルコースを酵素的に除去したβ−Ｄ−（２−１）ｐｏｌｙｆｒｕｃｔｏｓｅのような誘導体をも指す。
イヌリン粒子という用語はまた、イヌリンまたはその誘導体含む構成あるいは被覆されている任意の天然または合成粒子をも指す。この用語の範囲内に含まれる適切なイヌリン誘導体は、遊離ヒドロキシル基が、例えば公知の方法によるアルキル基、アリル基またはアシル基の化学的置換により、アセチル化、メチル化、エーテル化またはエステル化されたイヌリンの誘導体である。安定したイヌリン粒子は、固体または中空であってもよいし、完全にイヌリン分子から構成されてもよく、あるいは、例えば糖化合物、金属化合物、淡白質や脂質から成る非糖核、骨格や殻であって、共有結合または非共有結合により核となる物質の表面にイヌリン粒子を発現してもよい。
好ましくは、イヌリン粒子はｇＩＮ、ｄＩＮおよびｅＩＮ、またはそれらの修飾物の群から選択されて得る。最も好ましくは、イヌリン粒子はｄＩＮでよい。好ましくは、イヌリン粒子は、２０ｎＭから２０μＭの範囲の直径を持ってよい。より好ましくは、イヌリン粒子は、０．１から５μＭの範囲の直径を持ってよい。最も好ましくは、イヌリン粒子は、０．５から５μＭの範囲の直径を持ってよい。
一実施形態において、本発明で使用されるイヌリン粒子は、安定したイヌリン粒子である。本明細書で用いられる「安定」という用語は、それが投与される個体の体温において完全に不溶性または主に不溶性または部分的に不溶であるイヌリン粒子を指す。この文脈において安定性とは、必要に応じて２５℃まであるいは３０℃まで、３７℃まで、４０℃まで、４２℃まで、４５℃まで、５０℃まで、５２℃まで、５５℃まで、５８℃まで、または６０℃までの温度で、蒸留水または生理食塩水で０．５ｍｇ／ｍｌまたは１ｍｇ／ｍｌまたは２ｍｇ／ｍＬを超えない濃度で存在し、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、または６０分間インキュベートしてもイヌリン粒子が不溶であるという意味を含んでもよい。
不溶性のイヌリン量は、分光光度計を用いて３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍの波長（ＯＤ７００）でのイヌリン懸濁液の光学密度の変化により測定でき、この文脈において、イヌリン粒子は、もしそれが定義された条件でＯＤ７００の値が定義された温度（好ましくは１０℃あるいはそれ以上インキュベーション温度より低い温度で測定する時）におけるインキュベーション前の同一溶媒および同一濃度のイヌリン組成物のＯＤ７００の値の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％あるいは実質的に１００％の値を下回っていないことにより不溶性のままであれば安定であると言える。
本発明の第二の態様の組成物の成分（ａ）またはこの態様のキットでイヌリン粒子の代わりにまたは同時に使用することができる他の抗炎症成分は、以下を含むことができる−
（ｉ）本質的に同等の抗炎症性、活性および／または特異性および／または本質的に同等の免疫調節剤またはアジュバント特性を持つという意味で特にイヌリン粒子と機能的に同等であるＩＬ−１経路の遺伝子や淡白質の阻害剤、
（ｉｉ）一つあるいは複数のＩＬ１受容体拮抗薬、ＩＬ１ＲＡ、Ａｎａｋｉｎｒａ、Ｒｉｌｏｎａｃｅｐｔ、ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ１ＲａｃＰ／Ｆｃ−融合淡白質、Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ、ヒト ＩＬ−１β抗体、ＩＬ１受容体遮断薬、ＩＬ−１ＲＩＩ、インドメタシン、非ステロイド性抗炎症（ＮＳＡＩＤ）、グルココルチコイド、カスパーゼ１阻害剤、ＮＡＬＰ３拮抗剤を含むインフラマソーム阻害剤、クルクミン、レスベラトロール、クロロキン、Ｐ２Ｘ７受容体阻害剤、ＳＴ２受容体阻害剤、および／またはＡＴＰアンタゴニスト、
（ｉｉｉ）抗炎症蛋白質ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲ−γ）を上方制御または活性化する薬剤または特に（ＰＰＡＲ−γ経路遺伝子がイヌリン粒子によっても上方制御される）単球や樹状細胞においてＰＰＡＲ−γ経路の遺伝子や淡白質を上方制御薬剤。ＰＰＡＲ−γの上方制御は、以前ＬＰＳ誘発ＩＬ−１およびＴＮＦαの抑制逆にＩＬ１およびＴＮＦαによるＰＰＡＲ−γの阻害を含む炎症反応の阻害することが示された。適切な薬剤はロシグリタゾン、ピオグリタゾン、プロスタグランジンＪ２、クルクミン、レスベラトロール、ｔｈｉａｚｏｌｉｄｅｎｅｄｉｏｎｅｓ、ベルベリン、パーフルオロノナン酸、ＲＳ５４４４、遊離脂肪酸、ビタミンＤ、および／またはエイコサノイドの一つあるいは複数を含んでもよい。
（ｉｖ）例えば、アスピリン、イブプロフェン、およびナプロキセン、サリチル酸、顎下腺ペプチド−Ｔ、フェニルアラニン−グルタミン−グリシン（ＦＥＧ）、ショウガ、ウコン、セスキテルペンラクトン、オメガ３脂肪酸、プロスタグランジン−Ｅ、プロスタグランジン−Ｅ３、クルクミン、メサラジン、セレクティブグルココルチコイド受容体アゴニスト、Ｌｉｓｏｆｙｌｌｉｎｅ、Ｍｏｆｅｚｏｌａｃ、Ｏｌｅｏｃａｎｔｈａｌ、Ｉｂｕｐｒｏｘａｍ、シクロペンテノン、プロスタグランジン、カンナビジオール、ＢＭＳ−３４５５４１、ＢＭＳ−４７０、５３９、アンレキサノクス、Ａｍｉｘｅｔｒｉｎｅ、アリシン、Ａｃｔａｒｉｔ、Ｂｕｔｙｌｐｙｒａｚｏｌｉｄｉｎｅｓ、例えば、フェニルブタゾン、メフエブタゾン、オキシフェンブタゾン、Ｃｌｏｆｅｚｏｎｅ、Ｋｅｂｕｚｏｎｅ、Ｓｕｘｉｂｕｚｏｎｅ、酢酸誘導体とインドメタシンなどの関連物質スリンダク、トルメチン、ゾメピラク、ジクロフェナク、Ａｌｃｌｏｆｅｎａｃ、Ｂｕｍａｄｉｚｏｎｅ、エトドラク、Ｌｏｎａｚｏｌａｃ、Ｆｅｎｔｉａｚａ、アセメタシン、Ｄｉｆｅｎｐｉｒａｍｉｄｅ、Ｏｘａｍｅｔａｃｉｎ、Ｐｒｏｇｌｕｍｅｔａｃｉ、ケトロラッ、アセクロフェナク、ブフェキサマク、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカムなどのオキシカム、テノキシカム、Ｄｒｏｘｉｃａｍ、ロルノキシカム、メロキシカム、イブプロフェンなどのプロピオン酸誘導体、ナプロキセン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、ベノキサプロフェン、スプロフェン、Ｐｉｒｐｒｏｆｅｎ、フルルビプロフェン、インドプロフェン、チアプロフェン酸、オキサプロジン、Ｉｂｕｐｒｏｘａｍ、Ｄｅｘｉｂｕｐｒｏｆｅｎ、Ｆｌｕｎｏｘａｐｒｏｆｅｎ、アルミノプロフェン、Ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ、Ｎａｐｒｏｘｃｉｎｏｄ、ナプロキセンとエソメプラゾール、ナプロキセンとミソプロストール、Ｖｅｄａｐｒｏｆｅｎ、カルプロフェン、Ｔｅｐｏｘａｌｉｎ。メフェナム酸などのフェナメート、トルフェナム酸、フルフェナム酸、メクロフェナム酸、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、Ｆｉｒｏｃｏｘｉｂ、Ｒｏｂｅｎａｃｏｘｉｂ、Ｍａｖａｃｏｘｉｂ、Ｃｉｍｉｃｏｘｉｂなどのコキシブ類、その他の抗炎症およびナブメトンなどの抗リウマチ剤、ニフルム酸、アザプロパゾン、グルコサミン、ベンジダミン、グルコサミノグリカンペントサンポリサルフェート、Ｐｒｏｑｕａｚｏｎｅ、Ｏｒｇｏｔｅｉｎ、ニメスリド、Ｆｅｐｒａｚｏｎｅ、ジアセレイン、Ｍｏｒｎｉｆｌｕｍａｔｅ、テニダプ、Ｏｘａｃｅｐｒｏｌ、コンドロイチン硫酸、アボカドおよび大豆油、不けん化物、ニフルム酸、Ｆｅｐｒａｚｏｎｅ、組合せ、ペントサンポリサルフェート、アミノプロピオニトリル、抗炎症／抗リューマチ剤とコルチコステロイドの組み合わせ、例えばフェニルブタゾンとコルチコステロイド、Ｄｉｐｙｒｏｃｅｔｙｌとコルチコステロイド、アセチルサリチル酸とコルチコステロイド、Ｏｘｙｃｉｎｃｈｏｐｈｅｎなどのキノリン、Ｓｏｄｉｕｍ ａｕｒｏｔｈｉｏｍａｌａｔｅ、Ｓｏｄｉｕｍ ａｕｒｏｔｈｉｏｓｕｌｆａｔｅ、Ａｕｒａｎｏｆｉｎ、Ａｕｒｏｔｈｉｏｇｌｕｃｏｓｅ、Ａｕｒｏｔｉｏｐｒｏｌなどの金製剤、および／またはペニシラミンと例えば、ブシラミンなどの類似の剤。
一般的なルールとして、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）は、免疫される個体の体重１キログラムあたり０．００１ｍｇから１００ｍｇの範囲の量で使用することができる。例えば、本発明の組成物のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が体重キロ当たり０．１ｍｇから１００．０ｍｇの範囲の濃度で存在してもよい。
別の例では、組成物のイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）が用量当たり２０ｍｇのように投与量あたり１から１００ｍｇの範囲で成人ヒト個体に投与することができる。
「アジュバント」と言う用語は、抗原に対する免疫反応を増強する物質または混合物を指す。多くの場合、抗原のみによる一次免疫は、アジュバントの非存在下では、免疫反応を誘発することに失敗する。
「アゴニスト」と言う用語は、細胞反応を生成する細胞受容体と相互作用する淡白質、核酸、脂質、炭水化物、または化学物質を指す。自然免疫受容体を刺激するアゴニストに、本発明で特に興味があってよい。
「病原体関連分子パターン剤」と言う用語は、自然免疫系の機能に関与する細胞を直接または間接的に活性化する任意の物質を指すと理解されるべきである。
自然免疫の活性化は、限定することなく、一つまたは複数の遺伝子発現や淡白質産生、サイトカインまたはケモカイン産生または分泌の誘導、細胞形態の変化、分化、細胞***、細胞表面淡白質の発現の変化、走化性、貪食、エキソサイトーシス、オートファジー、またはアポトーシスの変化により細胞レベルで明白であってよい。
「ワクチン」と言う用語は、予防的または既存の状態の治療のために投与される、特定の抗原に対する有益な免疫反応を誘発するよう設計された免疫刺激療法と定義される。
「免疫原性」と言う用語は、体液性および／または細胞性免疫のいずれかを含む免疫反応を誘発し得る抗原の能力を指す。
抗原または病原体関連分子パターン剤に関して本明細書で使用される「免疫学的に有効な量」と言う用語は、当業者に公知の標準的なアッセイによって測定されるような免疫反応を誘発するのに十分な病原体関連分子パターン剤の量を指す。免疫原としての抗原の有効性は、Ｔ細胞の増殖やサイトカイン分泌アッセイ、特定の標的細胞を溶解するＴ細胞の能力を測定するためのクロム放出アッセイなどの細胞毒性アッセイ、または血清中の抗原特異的循環抗体のレベルの測定によるＢ細胞の活性化レベルの測定や例えばＥＬＩＳＰＯＴなどの抗体のスポットを形成するＢ細胞の数を測定することにより測定され得る。さらに、免疫反応の防御レベルは、免疫された抗原を含有する増殖可能なウイルス、病原体または細胞で免疫された宿主を攻撃することにより測定し得る。
例えば、免疫応答が望まれる抗原がウイルスまたは腫瘍細胞である場合、「免疫学的に有効な量」の抗原によって誘発される防御レベルは、動物をウイルスや腫瘍細胞で攻撃後の生存率を検出することにより測定され得る。あるいは、防御はまた動物を攻撃後のウイルス複製または腫瘍増殖の減少として測定し得る。免疫原性の量を提供するのに必要な抗原の量は、当業者であれば例えば、様々に濃度を変化させた抗原で本発明の一連のワクチンを準備し、適した実験動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、またはウサギ）へワクチン製剤を投与し、血清または粘膜の抗体価、抗原に誘発された皮膚の腫れ（遅延型過敏反応アッセイ）、Ｔ細胞増殖、サイトカイン産生や細胞傷害活性、病原体攻撃に対する防御などにより容易に決定し得る。
「非経口」という用語は、身体の任意の組織にワクチンを投与する事を指し、当技術分野で周知の方法および送達デバイスによって筋肉内投与、皮下投与、、皮内、腹腔内および眼内経路のワクチン投与を含む。
本発明の局面の重要な態様において、対象はヒトである。他の実施形態では、対象は、動物、犬、猫、馬、ラクダ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、タカ、ウサギおよび魚からなる群から選択される。「動物」という用語は、すべての家畜と野生哺乳類、魚、家禽、およびこれらに限定されない、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、イヌ、ネコ、ウサギ、鹿、ミンク、鶏、アヒル、ガチョウ、七面鳥、野生の鳥など含む。
一実施形態では、付加的な成分として、本発明の組成物はまた、必要に応じて、単球、樹状細胞、ＮＫ細胞、リンパ球または顆粒球などの自然免疫細胞の１つまたは複数のタイプを活性化する化学物質の免疫学的有効量を含んでいてもよい。当分野で知られているように、自然免疫細胞の活性化を誘発する化学物質の例としては、ロイコトリエン、プロスタグランジン、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、キニン、ビタミンＤ、フォルボールミリスチン酸アセテート、イオノマイシン、マイトジェン、オプソニン、ヒスタミン、ブラジキニン、セロトニン、ロイコトリエン、ｃＡＭＰ、抗菌ペプチド、およびプロドラッグまたは上記物質の誘導剤を含む。
重要な態様において、本発明のＰＡＭＰ自然免疫賦活剤は、自然免疫受容体に結合する物質の免疫学的に有効な量である。現在知られている自然免疫受容体は、ＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−５、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７は、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９、マウスＴＬＲ−１１、ＮＯＤ−１、ＮＯＤ−２、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＣ４などなどの他のＮＯＤ様受容体（ＮＬＲｓ）、デクチン−１、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＡＩＭ−２、Ｃ−タイプレクチンを含むマンノース受容体、ＭＤ２、ＣＤ１４、ＬＢＰ、ＲＩＧ−１（レチノイン酸誘導性遺伝子−１）およびＭＤＡ−５（メラノーマ分化関連遺伝子−５）、ＬＧＰ２およびＡＳＣのようなＣＡＲＤ（カスパーゼ活性化およびリクルートドメイン）を含む蛋白質、ＣＤ−３６、ＣＤ−６８、およびＳＲＢ−１を含むスカベンジャー受容体、Ｃ反応性蛋白、マンノース結合レクチン、Ｃ３ａおよびＣ４ｂを含む補体受容体、およびＦＰＲやＦＰＲＬ１を含むＮ−フォルミル・メチオニン受容体を含む。本発明において特に興味深いものは、ＴＬＲ−１、−２、−３、−５、−６、−７、−９およびＮＯＤ様受容体に結合し活性化するＰＡＭＰＳである。より好ましくは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９およびＮＯＤ２受容体アゴニストである。最も好ましくは、ＴＬＲ９アゴニストである。
本発明のすべての局面の重要な態様において、免疫学的に有効な量の一つまたは複数のＰＡＭｐｓ（病原体関連分子パターン）が使用される。ＰＡＭｐは、病原体に由来する構造的に保存された分子であり、免疫学的に宿主分子と区別可能であり、自然免疫受容体に認識され特異的に結合する。
ＰＡＭＰＳは、特定の病原体により特定の淡白質、脂質、リポ淡白質、炭水化物、脂質、糖淡白質、および核酸に発現され、ジ−およびトリ−アシルリポペプチド、ｌｉｐｏｔｅｃｈｏｉｃ酸、ザイモサン、ペプチドグリカン、ポリン、リポアラビノマンナン、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｍａｎｎａｎ含むＴＬＲ２アゴニストを含む核酸、Ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｘｙｌｏｍａｎｎａｎ、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型寄生虫淡白質を含むＴＬＲ２アゴニスト、例えばポリイノシン：ポリシチジル酸（ＰｏｌｙＩ：Ｃ）のような合成ｄｓＲＮＡを含む二本鎖ＲＮＡを含む、ＴＬＲ３アゴニスト、マンナン、ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｘｙｌｏｍａｎｎａｎ、熱ショック淡白質、フィブリノーゲンおよび合成ＭＰＬを含むＴＬＲ４アゴニスト、フラジェリン含むＴＬＲ５アゴニスト、ｌｉｐｏｔｅｃｈｏｉｃ酸含むＴＬＲ６アゴニスト、例えばイミクイモドおよびレシクイモド（Ｒ８４８）などのウイルス由来または合成一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡを含むＴＬＲ８アゴニスト、および非メチル化シトシン−グアニンジヌクレオチド オリゴヌクレオチド配列（ＣｐＧＯＤＮ）およびｈｅｍｏｚｏｉｎを含むを含むＴＬＲ９アゴニスト、例えば、ウイルスまたは合成二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡなどのＲＩＧ−１アゴニスト、ウイルス由来または合成二本鎖ＤＮＡなどのＭＤＡ５アゴニスト、ムラミルジペプチドＮＡＧ−ＮＡＭ−γ−Ｄ−グルタミル−メソジアミノピメリン酸を含むペプチドグリカンを含むＮＯＤ２アゴニスト、ｓｓＲＮＡおよびｄｓＲＮＡを含むＲＩＧ１およびＭＤＡ５アゴニスト、Ｎ−フォルミルメチオニンを含むＮ−フォルミルメチオニン受容体アゴニストに存在する。
従って、本発明で使用されるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、上記のアゴニストまたは合成類似体またはその誘導体のグループのいずれかから選択することができる。
本発明の態様の重要な局面において、一つまたは複数の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）から成るまたはで構成される物質は、体重１キログラム当たり０．０１から５００マイクログラムの範囲内の免疫学的に有効な量および／または濃度で、存在あるいは投与されてよい。
本発明の態様の重要な局面において、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）から成るまたはで構成される各物質は、純粋で、はっきりとした単一分子や化学実体として、存在あるいは投与されてよい。
本発明の態様の一実施形態では、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）から成るまたはで構成される物質は、高度に精製された状態で、はっきりとした単一分子や化学ＰＡＭＰ実体が、少なくとも５０％の純度、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、実質１００％の純度であってよい。
重要な態様において、本発明のＰＡＭＰは、ＴＬＲアゴニストである。現在ほとんどの哺乳動物種には、約１０から１５の異なるタイプのＴＬＲがあると考えられている。異なるＴＬＲは、ある範囲の天然および合成リガンドと結合し活性化される。異なるＴＬＲは、異なるシグナル伝達分子を介しシグナルを伝達し、共通の特徴は、これらがすべての炎症性転写因子ＮＦκＢを活性化することである。
ある実施形態では、本発明のＰＡＭＰは、トリアシルリポペプチドとＰａｍ３ＣＳＫ４の群から選ばれるＴＬＲ１アゴニストなどのＴＬＲ１アゴニストである。最も好ましくは、Ｐａｍ３ＣＳＫ４である。
ある実施形態では、本発明のＰＡＭＰは、糖脂質、リポテイコ酸、ペプチドグリカン、ＨＳＰ７０、ザイモサン、およびＰａｍ３ＣＳＫ４の群から選ばれるＴＬＲ２アゴニストなどのＴＬＲ２アゴニストである。
ある実施形態では、本発明のＰＡＭＰは、二本鎖ＲＮＡ、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ−ＬＣ）（ＨｉｌｔｏｎｏｌＴＭ）、およびＰｏｌｙＩ：ＰｏｌｙＣ１２Ｕ（ＡｍｐｌｉｇｅｎＴＭ）の群から選ばれるＴＬＲ３アゴニストなどのＴＬＲ３アゴニストである。最も好ましくは、（Ｉ：Ｃ）である。
別の実施形態においては、本発明のＰＡＭＰは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、熱ショック淡白質、フィブリノーゲン、ヘパラン硫酸断片、ヒアルロン酸断片、およびＥ６０２０、ＧＬＡおよびＬＰＳペプチドミモトープなどの合成ＴＬＲ４アゴニストの群から選ばれるＴＬＲ４アゴニストなどのＴＬＲ４アゴニストである。最も好ましくは、ＮＦκＢ経路ではなく優先的にインターフェロン−β誘導アダプター含有ＴＩＲドメイン（ＴＲＩＦ）を介して信号伝達する合成ＴＬＲ４アゴニストである。
毒性および規制要件により、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）ＴＬＲ４アゴニストおよび（エンドトキシンなどの）ＬＰＳを含む物質は本発明においては避けるべきである。本発明の態様で使用される物質および組成物におけるＬＰＳおよび／またはエンドトキシンの量は、用量当たり１００ＥＵ未満で、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ未満のＥＵであってよい。本発明の態様で使用される物質および組成物におけるＬＰＳおよび／またはエンドトキシンの濃度は、２００ＥＵ／ｍ３未満で、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、１あるいはそれ未満のＥＵ／ｍ３未満であってよい。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、細菌由来または合成フラジェリンの群から選ばれるＴＬＲ５アゴニストなどのＴＬＲ５アゴニストである。最も好ましくは、合成フラジェリンである。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ジアシルリポペプチドの群から選ばれるＴＬＲ６アゴニストなどのＴＬＲ６アゴニストである。最も好ましくは、ジアシルリポペプチドである。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ウイルスの一本鎖ＲＮＡ、イミダゾキノリン、ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ、ロキソリビン、ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ、ＣＬ２６４、Ｒ８４８およびＣＬ０７５の群から選ばれるＴＬＲ７アゴニストなどのＴＬＲ７アゴニストである。最も好ましくは、Ｒ８４８である。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、一本鎖ＲＮＡ、ＰｏｌｙＵ、イミキモド、レシキモド、ｓｓＰｏｌｙＵ／ＬｙｏＶｅｃおよびｓｓＲＮＡ４０／ＬｙｏＶｅｃの群から選ばれるＴＬＲ８アゴニストなどのＴＬＲ８アゴニストである。
重要な好ましい実施形態では、本発明のＰＡＭＰは、ＴＬＲ９アゴニストである。より好ましくは、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧ ＯＤＮである。
本明細書で使用される「ＣｐＧ」または「ＣｐＧ ＯＤＮ分子」と言う用語は、ポリヌクレオチド配列（即ち「ＣｐＧモチーフ」）に見られる通常の方法でリン酸分子によって結合されたシトシンヌクレオシドの後にグアニンヌクレオシドが続いているモチーフから成り、シトシンヌクレオシドはメチル化であるＯＤＮ分子を指すものとして理解されるべきである。
ＣｐＧモチーフは、細菌やウイルスのゲノム中に一般的であるが、脊椎動物のゲノムではまれである。さらに、ＣｐＧモチーフは、一般的に原核生物でメチル化されず、一方真核生物では、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼが一般的に存在するＣｐＧモチーフの７０−８０％をメチル化する。また、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧモチーフを含む合成オリゴヌクレオチド分子をもまた指す。多くの場合、複数のＣｐＧモチーフが存在する。様々なＣｐＧオリゴヌクレオチド分子が市販されている。これらは典型的に１８から２４ヌクレオチドの間の長さであるが、当業者であれば、他の長さのＣｐＧオリゴヌクレオチド分子もまた好適であることが理解されよう。
異なる塩基配列が様々な程度ＴＬＲ９を刺激することが示されており、ＣｐＧオリゴヌクレオチド分子は、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを取り巻く様々な塩基配列を含むことができる。クラスＢ ＯＤＮは、ヒトＢ細胞と単球の成熟の強力な刺激剤である。これらはまた、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の成熟を刺激するが、クラスＡ ＯＤＮより少ない程度にＩＦＮαのごく少量を誘導する。クラスＣ ＯＤＮは、クラスＡとクラスＢのＯＤＮの両方の機能を備えている。
好ましくは、クラスＢまたはクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮが本発明で使用される。当業者に知られているように、ＣｐＧのバックボーンは、ＯＤＮの安定性を高めるために天然のホスホジエステルバックボーンから合成フォスフォロチオエートバックボーンまたは２つのタイプのバックボーンの混合物に変化させることができる。
本発明の好ましい実施形態においては、ＣｐＧ ＰＡＭＰは天然フォスフォロチオエートバックボーンを持っており、長さは１８から２８ヌクレオチドである。本発明の別の好ましい実施形態では、ＴＬＲ９アゴニストは、合成フォスフォロチオエートバックボーンを持つクラスＢまたはＣ ＣｐＧ ＯＤＮはあり、長さは１８から２８ヌクレオチドである。好ましい実施形態では、ＰＡＭＰはＣｐＧ２００６、ＣｐＧ１８２６のグループと、最も好ましくは、ＣｐＧ７９０９から選ばれる。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ＮＯＤ様受容体アゴニストである。好ましくは、アゴニストはＮＯＤ１受容体に対するものでありｉＥ−ＤＡＰのアシル化誘導体（Ｃ１２−ｉＥ−ＤＡＰ）、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（ｉＥ−ＤＡＰ）、Ｌ−Ａｌａ−γ Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（Ｔｒｉ−ＤＡＰ）のグループから選ばれる。より好ましくは、アゴニストはＮＯＤ２の受容体に対するものであり、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、ムラミルトリペプチド、Ｌ１８−ＭＤＰ、Ｍ−ＴｒｉＤＡＰ、ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ、ＰＧＮ−ＥＣｎｄｉ、ＰＧＮ−ＥＣｎｄｓｓ、Ｎ−ｇｌｙｃｏｌｙｌａｔｅｄムラミルジペプチドおよびＰＧＮ−Ｓａｎｄｉの群から選ばれる。最も好ましくは、ＮＯＤ２アゴニストはｍｕｒａｂｕｔｉｄｅである。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、Ｃ型レクチン受容体のアゴニストである。より好ましくは、Ｃ型レクチン受容体アゴニストは、マクロファージマンノース受容体、ＣＬＥＣ−２、ＤＥＣ２０５／ＣＤ２０５、ＤＣ−ＳＩＧＮ−様、ＤＣ−ＡＳＧＰＲ（ＭＧＬ）／ＣＤ３０１、デクチン−１、ランゲリン／ＣＤ２０７、ＭｉｎｃｌｅおよびＣＬＲ ＢＤＣＡ−２／ＣＤ３０３のグループの一つと結合する。最も好ましくは、Ｃ型レクチン受容体アゴニストは、β−１、３−グルカン、ザイモサン、熱殺菌されたＣ．アルビカンス、臍帯因子、トレハロース−６，６−ジベヘネートのグループから選ばれる。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ＲＩＧ−１とＭＤＡ−５含むレチノイン酸誘導性遺伝子ベース−１様ヘリカーゼ受容体ファミリーを含むヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン−様受容体ファミリー（ＮＬＲ）淡白質のアゴニストである。好ましくは、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）、Ｐｏｌｙ（ｄＧ：ｄＣ）および５’ｐｐｐ−ｄｓＲＮＡのグループから選ばれる。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ＤＮＡ依存性インターフェロン調節因子の活性化因子（ＤＡＩ）とａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ２（ＡＩＭ２）の群から選ばれたＤＮＡ探知淡白質のアゴニストである。好ましくは、Ｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）である。
別の重要な態様において、本発明のＰＡＭＰは、例えば、ＳＣＡＲＡ１、ＳＣＡＲＡ２、ＳＣＡＲＡ３、ＳＣＡＲＡ４、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＡＲＢ３、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＳＲ−Ｂ１、ＣＤ６８、およびＬＯＸ−１のグループから選ばれる、自然免疫細胞に発現される、クラスＡ、ＢまたはＣのスカベンジャー受容体のアゴニストである。好ましくは、低密度リポ淡白質（ＬＤＬ）、酸化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬまたは化学的に修飾されたＬＤＬである。
別の実施形態において、本発明のＰＡＭＰは、ＮＬＲＰ１またはＮＡＬＰ３のアゴニストである。好ましくは、ｈｅｍｏｚｏｉｎまたはＡＴＰである。
本発明で選択されたＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、免疫学的組成物で処置される動物やヒトの種、系統、年齢、体重、性別に応じて異なることが当業者に知られている「免疫学的に有効」な免疫賦活化量を本発明の局面で使用される物質及び組成物に添加され得る。
「免疫賦活化量」と言う用語は、当業者に知られている標準的なアッセイによって測定る免疫反応の増加を達成するために必要な免疫学的製剤の量を指す。理解されるように、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）を含むそれぞれの免疫学的製剤は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤および特定イヌリン多形体（または他の同等の抗炎症成分）に応じて異なる場合がある有効量の範囲を有してもよい。
したがって、単一の用量範囲は、本発明の範囲内で可能な各イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の組み合わせに性格に適応するように規定できない。しかし、当業者によって免疫賦活化量は容易に決定され得る。免疫活性化の効果は、免疫細胞増殖アッセイまたは例えばフローサイトメトリーや蛍光顕微鏡法のような細胞表面の活性化マーカーの発現レベルの変化を測定するアッセイ、または細胞溶解アッセイにより、またはサイトカインやケモカインの分泌を測定することにより、または活性化された免疫細胞によって分泌される他の物質、または例えばリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応や遺伝子発現アレイなどの免疫細胞の遺伝子発現の活性化による変化を測定することによって測定され得る。
免疫学的に有効な量を提供するために必要な免疫学的製剤の各成分の量は当業者に公知の手段により容易に決定され得る。すなわちＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤とイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の濃度を変化させて、本発明の一連の免疫学的製剤を準備し、これらの製剤を免疫細胞の培養に添加し、ここに詳述したアッセイを含む当業者公知の免疫細胞の活性化アッセイによる。
同様に、ワクチン抗原に対する免疫反応の増強を提供するために必要な各成分の量は、例えばＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤およびイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）に加えワクチン抗原の様々な濃度の本発明の免疫学的製剤のシリーズを用意し、適切な実験動物（例えば、マウスまたはモルモット）にワクチンと一緒にイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）を投与し、血清または粘膜の抗原特異的抗体価の測定、抗原誘発皮膚浮腫（ＤＴＨ）または抗原誘発Ｔ細胞増殖やサイトカイン産生の測定などの抗原特異的免疫反応の測定により、当業者に通常の技術で容易に決定され得る。
本発明で使用されるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、任意の動物で有効であり得、好ましくは哺乳類に、より好ましくはヒトに有効であり得る。異なるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、種に応じて最適な免疫刺激を引き起こし得る。
したがって、ヒトＴＬＲ９に結合することにより、ヒトに最適な刺激を提供する特定のＣｐＧ ＯＤＮのようなＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、マウスＴＬＲ９を発現しているマウスに最適な刺激を引き起こさないかもしれず、逆もまた真であり得る。当業者は、当該技術分野の通常の技術で、本明細書に記載されているか公知の通常の免疫アッセイを用い、関心のある特定の種に有用な最適ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤を決定し得る。
本発明の態様の組成物および物質の水性部分は、等張の生理食塩水に緩衝されてよい。組成物および物質は、非経口または経粘膜投与を意図され得るので、組成物と体液間のイオン濃度の差に起因する投与後の腫れや組成物の急速な吸収を防ぐために浸透圧は基本的に通常の生理的液体と同じになるように組成することが適切であり得る。また、通常の生理的条件と互換性のｐＨを維持するために、生理食塩水を緩衝化することが適切であり得る。
例えば、緩衝化されたｐＨは適切に４から１０までの範囲、５から９の範囲、６から８．５の範囲、または７から８．５の範囲することが適切であり得る。また、特定の事例では、製剤中のイヌリン粒子、ＰＡＭＰまたは淡白質抗原などの特定の組成物の成分の安定性を確実にするために、特定のｐＨレベルを維持する必要があってよい。
任意の生理学的に許容される緩衝液が、本明細書で使用され得るが、ｐＨ６から８．５の重炭酸塩緩衝生理食塩水（１％）を使用するのが最も便利であることが見出されている。適切な防腐剤は、塩化ベンザルコニウムを（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）、クロロブタノール（０．３から０９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１から０．２５％ｗ／ｖ）およびチメロサール（０．００４から０．０２％ｗ／ｖ）を含む。
他の側面において本発明は、非抗原特異的免疫反応の誘導または抑制を含む変調、を含む。一つの態様において、本発明は、病原体に対する防御を強化するための方法を提供し、この方法は、被験体に本発明の組成物または物質の治療有効量を投与することを含む。
これは、ウイルス、細菌、寄生虫、真菌および原虫などの様々な病原体に対する一時的な防御、癌の治療、または自己免疫疾患、喘息またはアレルギーの予防または治療を提供し得る。その方法は、個体に免疫学的有効量の本発明の免疫学的組成物を投与する段階を含む。より長期的な防御には、免疫学的組成物を複数回投与し得る。
様々な実施形態において、本発明の免疫学的組成物は、種々の疾患の治療または予防を目的とする。よって様々な実施形態で免疫学的組成物は、感染症、癌、またはアレルギーの治療または予防するのに効果的な量で提供される。従って本明細書で提供される方法は、感染症にかかっているか、または発症するリスクがある個体に用いることができ、その方法は、感染症を治療または予防するための手段である方法である。
この方法はまた、喘息を持っているか、または喘息を発症するリスクがある個体にも用いることができ、その方法は、喘息を治療または予防するための手段である方法である。
この方法はまた、アレルギーを持っているか、またはアレルギーを発症するリスクがある個体にも用いることができ、その方法は、アレルギーを治療または予防するための手段である方法である。
この方法はまた、癌を持っているか、または癌を発症するリスクがある個体にも用いることができ、その方法は、癌を治療または予防するための手段である方法である。
本発明の態様で使用される組成物および物質は、同時に投与される抗原に一つのオプションで免疫反応のタイプや規模を変更するいくつかの実施形態で使用されてよい。従って、組成物および物質は、例えば予防または治療ワクチンを形成するために１つまたは複数の関連する抗原とそれらを組み合わせることにより、広くワクチンアジュバントとして使用がすることができることが提案されている。
よって、重要な態様において、本発明の態様の組成物および物質はさらにワクチン抗原を含んでよい。あるいは、治療される対象は、免疫学的有効量の免疫学的組成物の投与と同時にまたは投与に引き続きワクチン抗原を投与され得る。抗原は微生物抗原、自己抗原、癌抗原、アレルゲンからなる群から選択されるが、それは、そのように限定されない。
一つの実施形態では、微生物抗原は細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原および寄生虫抗原からなる群から選択される。別の実施形態では、抗原はペプチド抗原であってもよい。別の実施形態では、抗原は、核酸ベクターによってコードされてもよい。別の実施形態では、組成物はさらに、サイトカインを含んでよく、あるいは個体は、さらにサイトカインを投与されてもよい。
「抗原」と言う用語は任意の物質を指し、通常の投与の際に特異的な抗体またはメモリーＴ細胞の形成を刺激する淡白質や糖淡白質、リポ淡白質、糖類、多糖類またはリポ多糖である。抗原は、抗原に対する受容体と供にＴリンパ球の増殖を刺激することができ、さらに細胞性免疫と称する一連の反応を開始するためにリンパ球と反応することができる。
本発明での使用に適した抗原は、特異的な免疫反応を生成することができる、微生物（細菌、真菌、原虫、またはウイルス）または内因性物質由来の物質が含まれる。抗原は不活性化された生物から調製されるか、または組換え淡白質技術によって生成されるか、または直接合成されてもよい。この説明の目的のために、抗原は免疫反応が望まれている任意の淡白質、炭水化物、脂質、核酸、またはこれらの混合物、またはこれらの複数の組み合わせと定義される。
本明細書で用いられる抗原と言う用語は、キャリアとハプテンの組み合わせもまた含む。ハプテンは抗原分子またはその免疫学的特異性を決定する抗原複合体の一部であるが、キャリアの非存在下で免疫反応を刺激するには十分ではない。一般的に、ハプテンは比較的小さなペプチドまたは多糖類であり、天然に存在する抗原の断片であってもよい。。ハプテンは、同種抗体またはＴリンパ球とｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏで特異的に反応してよい。ハプテンは、通常ワクチンとして製剤の前に破傷風トキソイドまたはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などの大型担体分子に共有または非共有結合により結合している。
抗原は、疾患を治療または予防するためのワクチンに使用することができる。それらはまた、診断テストまたはキットで使用することができる抗体のような特異的な免疫物質を生成するために使用することができる。
抗原を含むワクチンの被験体は、一般的に脊椎動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトである。抗原は分子的に識別される必要は常には無いことに注意することが重要である。例えば、腫瘍に対する免疫反応は、どの分子に対して免疫反応が起こるか事前または事後に知らなくても生成することができる。これらのケースでは、抗原と言う用語は、特異的免疫反応が起こるか知られているか、または知られていない物質を指す。
免疫反応の特異性は、あるタイプの腫瘍に対して生成された免疫は、そのタイプの腫瘍に特異的であるが、別のタイプの腫瘍にはそうでないような、抗原の操作上の定義を提供する。
本発明の局面の一つの重要な態様において、符号化された抗原は、不活化インフルエンザウイルスまたはインフルエンザヘマグルチニン、ノイラミニダーゼまたはＭ２淡白質またはインフルエンザウイルスの他のコンポーネントを含む、インフルエンザなどのウイルスに由来してもよい。
脊椎動物における抗原である他のＲＮＡウイルスの例としては、以下に限定されないが、Ｏｒｔｈｏｒｅｏｖｉｒｕｓ属（哺乳類と鳥類の両方のレトロウイルスの複数の血清型）を含む、レオウイルス科の以下のメンバーを含む。オルビウイルス属（ブルータングウイルス、Ｅｕｇｅｎａｎｇｅｅウイルス、ケメロボウイルス、アフリカ馬疫ウイルス、およびコロラドダニ熱ウイルス）、ロタウイルス属（ヒトロタウイルス、ネブラスカ子牛下痢症ウイルス、マウスロタウイルス、サルロタウイルス、ウシまたはヒツジロタウイルス、鳥ロタウイルス）、エンテロウイルス属（ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡおよびＢ、腸細胞変性ヒトオーファン（ＥＣＨＯ）ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、サルエンテロウイルス、マウス脳脊髄炎（ＭＥ）ウイルス、ネズミポリオウイルス、ウシエンテロウイルス、ブタエンテロウイルスを含むピコルナウイルス科、カルディオウイルス属（脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、メンゴウイルス）、ライノウイルス属、Ａｐｔｈｏｖｉｒｕｓ属（***）、豚水疱性発疹ウイルス、サンミゲルアシカウイルス、ネコピコルナウイルス、ノーウォークウイルス含むカリシウイルス科、アルファウイルス属（東部ウマ脳炎ウイルス、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニヤウイルス、Ｏ’Ｎｙｏｎｇ−Ｎｙｏｎｇウイルス、ロスリバーウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス）を含むトガウイルス科、Ｆｌａｖｉｒｉｕｓ属（蚊が媒介する黄熱病ウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、クンジンウイルス、中央ヨーロッパダニ媒介性ウイルス、極東ダニ媒介性ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、Ｌｏｕｐｉｎｇ ＩＩＩウイルス、Ｐｏｗａｓｓａｎウイルス、オムスク出血熱ウイルス）、ルビウイルス属属（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（粘膜病ウイルス、豚コレラウイルス、ボーダー病ウイルス）、Ｂｕｎｙｖｉｒｕｓ属（Ｂｕｎｙａｍｗｅｒａおよび関連ウイルス、カリフォルニア脳炎群ウイルス）を含むブニヤウイルス科、Ｐｈｌｅｂｏｖｉｒｕｓ属（サシチョウバエ熱シチリアウイルス、リフトバレー熱ウイルス）、Ｎａｉｒｏｖｉｒｕｓ属（クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス）、およびＵｕｋｕｖｉｒｕｓ属（Ｕｕｋｕｎｉｅｍｉおよび関連ウイルス）、インフルエンザウイルス属（インフルエンザウイルスＡ型、多くのヒトサブタイプ）、豚インフルエンザウイルス、トリおよびウマインフルエンザウイルス、インフルエンザＢ型（多くのヒト亜型）、およびインフルエンザＣ型（独立し得る属）を含むオルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス属（パラインフルエンザウイルス１型、センダイウイルス、血球吸着ウイルス、パラインフルエンザウイルス２から５型、ニューカッスル病ウイルス、ムンプスウイルス）を含むパラミクソウイルス科、モルビリウイルス属（麻疹ウイルス、亜急性硬化性全脳炎ウイルス、ジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、肺炎ウイルス属（呼吸合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルスおよびマウス肺炎ウイルス）、Ｖｅｓｉｃｕｌｏｖｉｒｕｓ属（ＶＳＶ）、Ｃｈａｎｄｉｐｕｒａウイルス、フランダース−ハートパークウイルス）、リッサウイルス属（狂犬病ウイルス）、ウオラブドウイルス、および二つのおそらくラブドウイルス（マールブルグウイルスおよびエボラウイルス）を含むラブドウイルス科、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭ）、タカリベウイルス群、およびラッサウイルスを含むアレナウイルス科、伝染性気管支炎ウイルスを含む（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス、ヒト腸コロナウイルス、およびネコ伝染性腹膜炎（ネココロナウイルス）を含むＣｏｒｏｎｏａｖｉｒｉｄａｅ科。
脊椎動物における抗原である例示的ＤＮＡウイルス以下のものを含みが、これらに限定されるものではなく、オルソポックス属（大痘瘡、小痘瘡、サル痘ワクシニア、牛痘、Ｂｕｆｆａｌｏｐｏｘ、家兎痘、エクトロメリア）、Ｌｅｐｏｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ属（粘液腫、線維腫）、アビポックスウイルス属（鶏痘、他のトリポックスウイルス）、Ｃａｐｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ属（ヒツジ痘瘡、ヤギ痘瘡）、Ｓｕｉｐｏｘｖｉｒｕｓ属（豚痘）、パラポックスウイルス属（伝染性ｐｏｓｔｕｌａｒ皮膚炎ウイルス、偽牛痘、ウシ丘疹性口内炎ウイルス）を含むポックスウイルス科、イリドウイルス科（アフリカ豚コレラウイルス、カエルウイルス２および３、魚のＬｙｍｐｈｏｃｙｓｔｉｓウイルス）、アルファヘルペスウイルス（単純ヘルペス１型および２型、水痘帯状疱疹、ウマ流産ウイルス、ウマヘルペスウイルス２および３、仮性狂犬病ウイルス、伝染性ウシ角結膜炎ウイルス、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、ネコ鼻気管炎ウイルス、伝染性喉頭気管炎ウイルス）、ベータヘルペスウイルス（ヒトサイトメガロウイルスおよびブタ、サルおよびげっ歯類のサイトメガロウイルス）、ガンマヘルペスウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）、マレック病ウイルス、ヘルペス・サイミリ、ヘルペス・アテレス、ヘルペス・シルビラガス、モルモットヘルペスウイルス、リュッケ腫瘍ウイルス）を含むヘルペスウイルス科、マストアデノウイルス属（ヒトサブグループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびグループ化されていないもの、サルアデノウイルス（少なくとも２３の血清型）、イヌ伝染性肝炎、およびウシ、ブタ、ヒツジ、カエルや他の多くの種のアデノウイルス、アビアデノウイルス属（トリ・アデノウイルス）、および培養不能アデノウイルスを含むアデノウイルス科、パピローマウイルス属（ヒトパピローマウイルス、ウシパピローマウイルス、ショープウサギパピローマウイルス、および他の種の様々な病原性パピローマウイルス）、ポリオーマウイルス属（ポリオーマウイルス、シミアン空胞化エージェント（ＳＶ−４０）、ウサギ空胞化エージェント（ＲＫＶ）、Ｋウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、およびリンパ球向性パピローマウイルスなどの他の霊長類ポリオーマウイルス）を含むパポウイルス科、アデノ随伴ウイルス属、パルボウイルス属（ネコ汎白血球減少症ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、アリューシャンミンク病ウイルスなど）を含むパルボウイルス科。ＤＮＡウイルスは、クールーとクロイツフェルト・ヤコブ病ウイルスと慢性感染性神経因性薬剤（ＣＨＩＮＡウイルス）もまた含む。
上記の各リストは、例示であり限定することを意図するものでは無い。
本発明に適した抗原の他の例としては、これらに限定されろものでは無く、防御免疫反応が所望される可能性のある感染症抗原があり、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ｇａｇ、ｅｎｖ、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、逆転写酵素、および他のＨＩＶコンポーネントまたはその一部、ヒトパピローマウイルスＥ６およびＥ７淡白質、単純ヘルペスウイルスのＥＢＮＡ１抗原、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、ＭおよびＬ淡白質などの肝炎ウイルス抗原、Ｂ型肝炎ウイルスのプリＳ抗原、およびＣ型肝炎ウイルスＲＮＡなどの他の肝炎、例えばＡ型肝炎、Ｂ型、およびＣ型ウイルス成分、ヘマグルチニン、ノイラミニダーゼ、核淡白質、Ｍ２、および他のインフルエンザウイルス成分などのインフルエンザウイルス抗原、麻疹ウイルス融合淡白質や他の麻疹ウイルス成分などの麻疹ウイルス抗原、Ｅ１およびＥ２淡白質や他の風疹ウイルス成分などの風疹ウイルス抗原、ＶＰ７ｓｃや他のロタウイルス成分などのロタウイルス抗原、エンベロープ糖淡白質Ｂや他のサイトメガロウイルス抗原成分などのサイトメガロウイルス抗原、ＲＳＶの融合タンパク質、Ｍ２タンパク質および他の呼吸器合胞体ウイルス抗原成分などの呼吸器合胞体ウイルス抗原、極初期淡白質、糖淡白質Ｄ、および他の単純ヘルペス抗原成分などの単純ヘルペスウイルス抗原、ｇｐＩ、ｇｐＩＩおよび他の水痘帯状疱疹ウイルス抗原成分などの水痘帯状疱疹ウイルス抗原、Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１−ＮＳ２Ａ蛋白質のような日本脳炎ウイルス抗原、狂犬病糖淡白質、狂犬病核淡白質および他の狂犬病ウイルス抗原成分などの狂犬病ウイルス抗原、ウエストナイルウイルスｐｒＭおよびＥ蛋白質およびエボラエンベロープ淡白質。さらなるウイルス抗原の例は、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄｓ．Ｋｎｉｐｅ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ，Ｈｏｗｌｅｙ Ｐ．Ｍ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１）を参照されたい。
さらに細菌抗原もまた開示される。本発明の組成物および方法で使用することができる細菌抗原としては、これらに限定されるものでは無く、百日咳毒素、糸状赤血球凝集素、ペルタクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３、アデニル酸シクラーゼおよび他の百日咳菌抗原成分などの百日咳菌抗原、ジフテリア毒素またはトキソイドおよび他のジフテリア菌抗原成分などのジフテリア菌抗原、破傷風毒素またはトキソイドおよび他の破傷風菌抗原成分などの破傷風菌抗原、Ｍ淡白質および他の連鎖球菌の細菌抗原成分などの連鎖球菌細菌抗原、ＩｓｄＡ，ＩｓｄＢ，ＳｄｒＤ，ａｎｄ ＳｄｒＥなどのブドウ球菌細菌抗原、リポ多糖、フラジェリン、および他のグラム陰性細菌抗原成分などのグラム陰性桿菌の細菌抗原、ミコール酸、熱ショック淡白質６５（ＨＳＰ６５）、３０ｋＤａ主要分泌淡白質、８５Ａ抗原、ＥＳＡＴ−６、及び他のマイコバクテリア抗原成分などの結核菌抗原、ヘリコバクターピロリ菌抗原成分、ニューモリシン、肺炎球菌莢膜多糖および他の肺炎球菌の細菌抗原成分などの肺炎球菌細菌抗原、莢膜多糖類および他のインフルエンザ菌抗原成分などのインフルエンザ菌抗原、炭疽菌防御抗原、炭疽菌致死因子、および他の炭疽菌抗原成分などの炭疽菌抗原、ペスト菌のＦ１およびＶ淡白質、ロンプスおよび他のリケッチア細菌抗原成分などのリケッチア細菌抗原。また、いかなる他の細菌、マイコバクテリア、マイコプラズマ、リケッチア、またはクラミジア抗原もまた本明細書に記載される細菌抗原に含まれて良い。原生動物や他の寄生抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、メロゾイト表面抗原、スポロゾイト表面抗原、サーカムスポロゾイト抗原、配偶子／生殖母細胞表面抗原、血液段階の抗原ｐｆ１ ５５／ＲＥＳＡおよび他のプラスモヂウム抗原成分などの熱帯熱マラリア原虫抗原、ＳＡＧ−１、Ｐ３０および他のトキソプラズマ抗原成分などのトキソプラズマ抗原、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、パラミオシン、および他の住血吸虫抗原成分などの住血吸虫抗原、ｇｐ６３、ｌｉｐｏｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃａｎやその関連淡白質および他のリーシュマニア抗原成分などのリーシュマニアメジャーおよび他のリーシュマニア抗原、および７５−７７ｋＤａ抗原、５６ｋＤａ抗原および他のトリパノソーマ抗原成分などのトリパノソーマ抗原である。真菌抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、カンジダ属、アスペルギルス属、ブラストミセス属、ヒストプラスマ種、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｏｍｙｃｏｓｉｓ種、癜風菌や他の種、エクソフィアラｗｅｒｎｅｃｋｉｉや他の種、Ｐｉｅｄｒａｉａ ｈｏｒｔａｉや他の種、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｕｍ ｂｅｉｇｅｌｉｉや他の種、胞子種、白癬菌属、表皮菌種、スポロトリクス属ｓｃｈｅｎｃｋｉｉや他の種、Ｆｏｎｓｅｃａｅａｐｅｄｒｏｓｏｉや他の種、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓや他の種、Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉや他の種、Ｍａｄｕｒｅｌｌａ病菌および他の種、リゾプス種、アブシディア種、及びムコール種でを含む。
プリオン病抗原の例は、ＰｒＰ、β−アミロイド、および他のプリオン関連淡白質を含む。
ヒトに抗原特異的な免疫反応を誘導する本発明の態様の組成物および物質の使用に加えて、好ましい実施形態の方法は、特にウマや他の動物の治療に適している。
本発明の方法は、ウシ、ラクダ、ウマ、ブタ、ヒツジおよびヤギなどの家畜を感染症から守るために使用することができる。ウマは日本脳炎やウエストナイルウイルスを含むフラビウイルスに感受性である。好ましい実施形態において、本発明の免疫学的組成物は、日本脳炎および関連フラビウイルスに対してそれらを護るために、不活化日本脳炎ウイルス抗原と共にウマに投与され得る。
上記の感染症及び寄生虫剤に加え、非感染性病原体に対する望ましい増強された免疫原性についての別の領域は癌の領域であり、癌抗原を発現する細胞が身体から望ましく排除される。本明細書で使用する「癌抗原」は、腫瘍または癌細胞に存在するペプチドまたは淡白質などであり、ＭＨＣ分子と共に抗原提示細胞の表面に発現した時、免疫反応を誘導できる。
癌抗原は、例えば、コーエンら、１９９４年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５４：１０５５、に記載した方法により癌細胞の粗抽出液を調製することによって、組換え技術によって、または既知の抗原のデノボの合成により癌細胞から調製することができる。癌抗原は、組換えで発現しているものに限定されないが、抗原の免疫原性部分、または腫瘍または癌全体を含む。このような抗原は、単離または組換えＤＮＡ発現技術により、または当技術分野で公知の任意の他の手段によって調製することができる。一実施形態では、癌は胆道癌、骨癌；、脳や中枢神経系の癌、乳癌、子宮頸がん、絨毛癌、結腸癌、結合組織の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胃癌、ホジキンリンパ腫、上皮内新生物、喉頭癌、リンパ腫、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞と非小細胞）、黒色腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、および腎癌からなる群から選択される。
本発明の組成物および方法で使用することができる癌抗原は、これらに限定されるものではないが、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、***、卵巣、精巣、メラノーマ、テロメラーゼ、Ｐ−糟蛋白質などの多剤耐性淡白質、ＭＡＧＥ−１、アルファフェトプロテイン、癌胎児性抗原、変異ｐ５３、パピローマウイルス抗原、メラノーマまたは他の癌細胞のガングリオシドや他の炭水化物含有成分を含む。任意の癌細胞の抗原が本明細書に記載する組成物に使用される物および方法を本発明によって企図される。抗原は、癌細胞、またはｓｕｒｖｉｖｉｎおよびテロメラーゼ普遍抗原と癌精巣抗原のＭＡＧＥファミリーを含む膜淡白質などの癌細胞から単離された免疫原性材料であっても良い。
別の好ましい実施形態においては、本発明の組成物および方法は、免疫寛容を誘導するために使用することができる自己免疫に関与する抗原が含まれる。このような抗原としては、これらに限定されないが、ミエリン塩基性淡白質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖蛋白質および多発性硬化症のプロテオリピド淡白質、慢性関節リウマチのＣｌｌコラーゲン淡白質、グルタミン酸脱炭酸酵素、インスリンおよび１型糖尿病のチロシンホスファターゼ淡白質、セリアック病のグリアジン蛋白質を含む。
別の好ましい実施形態では、本発明の態様の組成物、物質および方法は「アレルゲン」として知られている抗原と共に寛容を誘導し、アレルゲン特異的ＩｇＥを抑制する為に使用でき得る。「アレルゲン」は、感受性被験者のアレルギーや喘息反応を誘発することができる任意の物質である。アレルゲンは、花粉、昆虫毒、動物の鱗屑ダスト、真菌胞子および薬物（例えばペニシリン）を含む。
天然、動物および植物アレルゲンの例としては、限定するものでは無いが、以下の属に特異的な淡白質を含み、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（例えばコナヒョウヒダニ）、ネコ（Ｆｅｌｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、アンブロシア（Ａｍｂｒｏｓｉａ ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ）、Ｌｏｌｉｕｍ（例えばＬｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅ ｏｒ Ｌｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、スギ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、アルダー、ハンノキ（Ａｌｎｕｓ ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ）、ダケカンバ（Ｂｅｔｕｌａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、ミズナラ（Ｑｕｅｒｃｕｓ ａｌｂａ）、オレア（Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａ）、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オオバコ（例えばＰｌａｎｔａｇｏ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ（例えばＰａｒｉｅｔａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓまたはＰａｒｉｅｔａｒｉａ ｊｕｄａｉｃａ）、チャバネゴキブリ属（例えばＢｌａｔｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、アピス（例えばＡｐｉｓ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、イトスギ（例えばＣｕｐｒｅｓｓｕｓ ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ，Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ ａｒｉｚｏｎｉｃａおよびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）、ビャクシン属（例えばＪｕｎｉｐｅｒｕｓ ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ，Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ，Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓおよびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ ａｓｈｅｉ）、Ｔｈｕｙａ（例えばＴｈｕｙａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、ヒノキ（例えばＣｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ ｏｂｔｕｓａ）、ゴキブリ（例えばＰｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ（例えばＡｇｒｏｐｙｒｏｎ ｒｅｐｅｎｓ）、ライムギ（例えばＳｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ）、コムギ（例えばＴｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ）、Ｄａｃｔｙｌｉｓ（例えばＤａｃｔｙｌｉｓ ｇｌｏｍｅｒａｔａ）、ウシノケグサ（例えばＦｅｓｔｕｃａ ｅｌａｔｉｏｒ）、Ｐｏａ（例えばＰｏａ ｐｒａｔｅｎｓｉｓまたはＰｏａ ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）、カラスムギ属（例えばＡｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ）、Ｈｏｌｃｕｓ（例えばＨｏｌｃｕｓ ｌａｎａｔｕｓ）、ハルガヤ（例えばＡｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ ｏｄｏｒａｔｕｍ）、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ（例えばＰＡｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍｅｌａｔｉｕｓ）、Ａｇｒｏｓｔｉｓ（例えばＡｇｒｏｓｔｉｓ ａｌｂａ）、チモシー（例えばＰｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）、Ｐｈａｌａｒｉｓ（例えばＰｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ、スズメノヒエ（例えばＰａｓｐａｌｕｍ ｎｏｔａｔｕｍ）、ソルガム（例えばＳｏｒｇｈｕｍ ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）、およびＢｒｏｍｕｓ（例えばＢｒｏｍｕｓ ｉｎｅｒｍｉｓ）。本発明に最も好ましいものは、昆虫毒アレルゲンである。
別の好ましい実施形態では、本発明の態様の組成物、物質とおよび方法は、喘息に関与する抗原に対して免疫するために使用することができる。このような抗原としては、限定されるものではないが、ｌｇＥとヒスタミンを含む。
本明細書において使用される「治療」と言う用語は、鳥、魚、哺乳動物、特にヒトの疾患の任意の治療をカバーしており、以下のものを含む：
（ｉ）病気にかかりやすいが、まだそれを有すると診断されていないかもしれない個体において病気の発生から予防する；
（ｉｉ）疾患を阻止すること、すなわち、その進展を減速または凍結する、または
（ｉｉｉ）病気を軽減すること、すなわち、疾患の退行を引き起こす（個体の免疫系が効果のない抗原を認識することにより持続している疾患において、ワクチンが効果的に抗原を提示することにより病気の回帰に影響を与える可能性があることに留意すべきである。）
「必要に応じて」と言う用語は、続いて記載される事象または状況が発生してもあるいはしなくてもよいことを意味し、記載はある事象または状況が発生する場合と発生しない場合を含む。
「免疫反応の調節」と言う用語は、当業者に公知の方法で測定することができる免疫細胞における任意の誘発された変化を誘導するものとして理解されるべきである。
好ましくは、免疫細胞の動作や機能の変化を示すために、測定されたパラメータは、遺伝子発現の変化、淡白質発現、細胞形態、分化、細胞***、細胞表面淡白質の発現、走化性、貪食、エキソサイトーシス、オートファジー、ケモカイン分泌、サイトカイン分泌とアポトーシスの変化群から選択されるであろう。
本発明のさらなる実施形態においては、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤との同時投与は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の用量を低減することを可能にし得る。したがってイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の存在下では、より低用量のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤を同じレベル免疫活性化を得るために使用することができる。
イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の異なる作用により、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の用量低減効果は、所望の免疫反応またはアジュバント効果を達成するためにより低用量のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤を使用することを可能にし、それにより所望の免疫反応を達成しながら、用量に関連する副作用またはＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の毒性を低減するための手段が提供する。過剰なＰＡＭＰ病原体関連分子パターンにと炎症に起因する用量依存性の毒性は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤主たる用量制限副作用であり、本発明は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の用量に関連した副作用を軽減する新規な手段を提供する。
本発明の態様の組成物および物質は、必要に応じて同時または順次にそれらの個別のコンポーネントで投与してもよいが、好ましくはイヌリン粒子成分（または、他の同等の抗炎症成分）は、抗原に続いて投与されるよりむしろ抗原と一緒にあるいは前に投与される。本発明の態様の組成物または物質の成分が同時に投与される場合、それらはワクチンと同じか、または別々の製剤で投与されて良く、後者の場合には、ワクチン抗原と同時に同じまたは別の注射部位に投与して良い。
ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤成分は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）および抗原成分の前後あるいは同時に投与して良い。例えば、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤成分は、抗原のプライミング用量とイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の投与の前または後に投与して良い。
その後抗原のブースト用量は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤とイヌリン粒子成分（または他の同等の抗炎症成分）のいずれか、または両方と共に投与して良い。「プライム用量」とは、個体に投与された抗原の最初の用量である。「ブースト用量」とは、すでに抗原にさらされていた個体に投与された２番目、３番目、またはその後に投与されるの抗原の用量である。成分が逐次的に投与される場合には、成分の投与間の時間の間隔は、ほんの数分であってもよいし、あるいはそれより長くても良い。時間の間隔は、好ましく７日未満、３日、または２日、最も好ましくは１日未満で良い。
本発明の態様の組成物または物質は、ＤＮＡワクチンの使用と関連して、ワクチン応答を増強するために用いても良い。好ましい実施形態では、一つまたは複数抗原をコードするＤＮＡワクチンの効果的な免疫原量の一回または複数回のプライムに続き、本発明の態様の組成物または物質と淡白質または他の物理的な抗原は、ブースト用量として投与されて良い。さらなる態様において、本発明の態様の組成物または物質と淡白質または他の物理的な抗原は、一つまたは複数抗原をコードするＤＮＡワクチンと同時に、別の注射部位または混合のいずれかで同じ注射部位に投与されて良い。
物理的な抗原と共にあるいは添加せずに、本発明の態様の組成物または物質は、抗原をコードするベクターと一緒に投与しても良い。その最も広い意味で、「ベクター」は、コードされた、または封入された抗原を感染細胞に伝達し発現を可能にする能力がある任意のベヒクルである。
一般に、本発明において有用なベクターは、これらに限定されるものではないが、プラスミド、ファージ、ウイルス、および抗原核酸配列の挿入または組み込みによって操作されたウイルスや細菌由来する他のベヒクルを含む。
ウイルスベクターは、ベクターの好ましいタイプであり、これらに限定されるものではないが、以下のウイルスからの核酸配列を含む。モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳腺腫瘍ウイルスおよびラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＳＶ−４０型ウイルス、ポリオーマウイルス、エプスタイン−バールウイルス、パピローマウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、センダイウイルス。当技術分野では、容易に同様の方法で細胞に抗原を運搬する他のベクターを用いることができると知られている。例えば、．，Ｓａｎｂｒｏｏｋ等著「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照されたい。
本発明の態様の組成物質の調整物の１つあるいは複数が抗原結合担体材料やアレルゲン結合担体材料を含んでもよい。抗原結合担体材料やアレルゲン結合担体材料は、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、鉄およびリン酸第二鉄、鉄および硫酸第二鉄、クロム、リン酸およびクロム硫酸からなる群などの一つあるいは複数の金属塩で構成されて良い。
他の適切な抗原結合担体材料とアレルゲン結合担体材料は、当業者に知られているように、淡白質、脂質、炭水化物（例えば、ヘパリン、デキストラン、セルロース誘導体）、およびキチン（ポリＮ−アセチルグルコサミン）及びその脱アセチル化誘導体などの有機塩基えお含んで良い。
重要な態様において、免疫学的組成物におけるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、物理的にイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）結合されるかまたはイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症性）に取り込まれた抗原結合担体材料に結合されて良い。
好ましい実施形態では、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、共有結合、静水結合、静電結合からなる群から選択される結合によるイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）に結合されて良い。あるいは、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、立体的にイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の内部に閉じ込めることができる。更なる実施態様では、リンカー配列は、イヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）にＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤を結合するために使用できる。
さらに、本発明の一態様の組成物または物質が抗原結合材料を含む場合、好ましくは、イヌリンの粒子（または他の同等の抗炎症成分）は、抗原結合性担体材料と組み合わせてまたはそのに結合される。イヌリン粒子と抗原結合担体材料の共結晶は、例えば、以下の方法により調製することができる：
（ａ）イヌリン粒子の懸濁液を調製する；
（ｂ）イヌリン粒子が溶解するまで懸濁液を加熱する；
（ｃ）抗原結合担体材料を前記溶液に添加する；
（ｄ）前記懸濁液からイヌリン粒子を再沈殿させる、そして
（ｅ）イヌリン粒子と１つまたは複数の抗原結合担体材料から成る形成された粒子を分離する
本発明の開発においては、イヌリン粒子は特に、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（以下、総称して「アラム」と言う）ゲルなどの抗原結合担体材料と調整されて良い。アラムゲルはワクチンのアジュバントとして広く使用されており、それが強力な抗体（Ｔｈ２）免疫反応を誘導するが、ほんの僅かの細胞（Ｔｈ１）免疫反応しか誘導しないことが知られている。また、ｇＩＮ、ｄＩＮまたはｅＩＮと一緒にアルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム用）を共結晶させ、それぞれｇＩＮ／アラム（「アルガムリン」とも呼ばれる）（ＷＯ ９０／０１９４９、ＷＯ ２００６／０２４１００を参照されたい）、ｄＩＮ／アラム（「アルデルティン」とも呼ばれる）あるいはｅＩＮ／アラム（「アレプシリン」とも呼ばれる）粒子を形成できることが見出されている。
ｉｎ ｖｉｖｏ試験においてイヌリン粒子とアルミニウム塩の複合体を含むワクチンがよく許容され、同時投与抗原に対する抗体反応をイヌリン粒子またはアラムアジュバント単独製剤より増加させるが、一般的に軽微で相乗的ではなく相加的で、そしてアラムアジュバント単独のように、イヌリンとアラムの製剤は、免疫反応をＴｈ１反応よりむしろＴｈ２に向かわせる。これは、同時投与される抗原に対するＴｈ１免疫を誘導することが求められている特定のワクチンにとって望ましくないかもしれない。
具体的には、理論によって制限されることを望むものではないが、Ｔｈ１免疫を高めるアジュバントは、Ｔｈ２版反応の増大を抑制し、そして逆もまた真であり、これはＴｈ２反応を抑制するＴｈ１サイトカインＩＦＮ−γとＴｈ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１０がＴｈ１応答を阻害するなどの要因が関与するフィードバック経路の複雑な配列を介している。
Ｔｈ２反応に向かうバイアスは、もしそれが、より少ないＴｈ１反応しか得られないという意味、そしてその逆の場合の意味ならば望ましくない場合があり得る。
本発明の一実施形態では、アルガムリン、アルデルティンまたはアレプシリン、あるいはフォスガムリン、フォスデルティンまたはフォスエプシリンなどの場合のようにイヌリンがアルミニウム塩と共結晶化された時に見られるＴｈ２へのバイアスが、イヌリン粒子−アラム粒子とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤と組み合わされた場合、低減または、もはや顕著でなくなることが見出されている。
逆に、例えばＴＬＲ９アゴニストなどいくつかの病原体関連分子パターン剤単独の場合しばしば観察される強力なＴｈ１バイアスは、ＴＬＲ９アゴニストが抗原結合アラムの有無に関わらずイヌリン粒子と調整された時に低減または、もはや顕著でなくなることが見出されている。イヌリン粒子の存在下では、Ｔｈ１およびＴｈ２免疫反応の両方が並行して発達し、同時投与される抗原に対する、個々のコンポーネントの使用のみでは達成できない改善された免疫反応を得る結果となる。
抗原結合担体材料とイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）の組み合わせの相対的重量比は、イヌリン（または他の同等の抗炎症成分）と抗原結合担体材料が１：２０から２００：１の範囲で１：５から５０：１あるいは１：２から２０：１で良い。
別の実施形態において、本発明の態様による組成物または物質は、さらに抗微生物剤、抗がん剤およびアレルギーや喘息の薬剤から成る群から選択される治療剤と組成されて良く、または個体はさらに、同グループから選択される治療剤を投与されて良い。関連する実施態様において、抗微生物剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤からなる群から選択される。
関連する実施形態では、免疫学的組成物に含まれる抗がん剤は、化学療法剤、癌ワクチン、および免疫療法剤からなる群から選択される。
関連する実施形態では、免疫学的組成物に含まれるアレルギーや喘息医薬は、ＰＤＥ−４阻害剤、ｂｒｏｎｃｈｏｄｉｌａｔｏｒ／ｂｅｔａ−２アゴニスト、Ｋ＋チャネルオープナー、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ｎｅｕｒｏｋｉｎアンタゴニスト、ＴＸＡ２合成阻害剤、ｘａｎｔｈａｎｉｎｅ、アラキドン酸アンタゴニスト、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ｔｈｒｏｍｂｏｘｉｎ Ａ２受容体アンタゴニスト、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、５ｌｉｐｏｘ活性化淡白質の阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤からなる群から選択される。
本発明の態様の組成物または物質は、非経口投与のために処方され得るか、または持続放出装置で処方されて良い。持続放出装置は、微粒子、マトリックスまたは植込み型ポンプであってもよいが、それはそのように限定されない。
別の実施形態では、本発明の態様の組成物および物質は、粘膜表面への送達のために処方される。関連する実施形態において、本発明の態様の組成物および物質は、粘膜免疫応答を刺激するのに有効な量で提供される。粘膜表面は、口、鼻、直腸、膣、および眼表面からなる群から選択され得るが、そのように限定されない。一実施形態では、本発明の態様の組成物および物質は、経口投与のために処方される。本発明の態様の組成物および物質は、栄養補助剤として製剤されても良い。関連する実施態様においては、栄養補助食品は、カプセル、錠剤、または舌下錠として処方される。別の実施形態では、免疫学的組成物は、局所投与のために処方される。
個体の治療に関連した実施形態では、方法または使用は、さらに個体から免疫細胞を単離し、免疫細胞を免疫学的有効量の本発明の態様の組成物および物質と接触させ、それによってｅｘ ｖｉｖｏ活性化免疫細胞を生成し、そして必要に応じてその後個体に活性化された免疫細胞を再投与することを含むことができる。一実施形態では、免疫細胞は、単球であり、別の実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞である。別の実施形態では、方法または使用は、さらに本発明の態様の組成物または物質の免疫学的有効量を添加する前または後に、で抗原と免疫細胞を接触させることを含んでも良い。
さらに別の態様において、本発明は、本発明の態様の組成物または物質と免疫細胞集団を接触させコントロール・レベルを測定し、その後これと試験組成物と接触させた時の免疫細胞集団の活性化レベルを比較することにより、最適な免疫学的組成物を同定するための方法を提供し、テストレベルがコントロール・レベルと等しいか、または超えている場合適切な免疫学的組成の指標となる。
免疫反応は、遺伝子発現や、サイトカインまたはケモカイン産生または分泌の誘導などの淡白質の生産の変化、表現型の変化、増殖または生存能力または免疫エフェクター特性の変調などの免疫活性化を含んで良い。免疫反応は、さらに抗体産生の誘導や内因性または外因性抗原に対するＴ細胞のエフェクターまたはメモリー反応の誘導を伴う獲得免疫反応の誘導、増強または調節を含んでも良い。
さらなる態様において、本発明は、免疫応答を調節するための方法を提供し、前記方法は、個体に、本発明の態様の組成物または物質の治療有効量を投与することを含む。
本明細書において用いられる場合、「有効量」と言う用語は、所望の効果を提供する本発明の態様の組成物および物質の無毒だが十分な量を指す。正確な必要量は、治療される種、個体の年齢および全身状態、本発明の態様の特定の組成物または物質がある投与され、そして投与の様式などの要因に応じて、個体毎に異なる。従って、正確な「有効量」を指定することはできない。しかしながら、どんな場合でも、適切な「有効量」は、当業者によって日常的に決定することができる。
本発明はさらに、ワクチンに反応して産生されたサイトカインのパターンを変調する方法を提供する。「変調」と言う用語は、より低いレベルが望まれる特定のサイトカインの発現の抑制、またはより高いレベルが要求される特定のサイトカインの発現の増強を想定している。特定のサイトカインの変調は、局所的または全身的に起こり得る。ワクチンのアジュバントとして使用されるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、直接マクロファージや樹状細胞を活性化することができ、例えばＴＮＦ−αおよびＩＬ−１などのサイトカインを分泌せしめる。病原体関連分子パターン剤により誘導されたサイトカインプロファイルは、免疫応答におけるＴ細胞の調節およびエフェクター機能を決定し、ワクチンの副作用に関与することもあり得る。
一般的に、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、ＴＮＦおよびＩＬ−１などの炎症や発熱に関連付けられているサイトカインを誘導するだけでなく、例えば、ＩＬ−１０などの抑制性サイトカインを誘導することもあり、それによって抑制性フィードバックを提供し、ドン時に投与された抗原に対する獲得免疫反応を制限あるいは抑制するかもしれない。本発明の態様の組成物および物質は、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤により誘導されるサイトカインを変調することができ、それにより、より良好な免疫反応を引き起こす。
他の態様において、本発明は、ＴＬＲアゴニストなどＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤と抗原の組み合わせを個体に投与することによって引き起こされる免疫反応の過剰偏向を防止するための方法を含む。例えば、ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ ＯＤＮなどのＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の組合せが、Ｔｈ１バイアスとなり反応のＴｈ２アームを抑制することが以前に示されている。イヌリン粒子がＴｈ１バイアスなＣｐＧ ＯＤＮなどのＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤と組み合わされると、同時投与された抗原に対する強いＴｈ２反応を維持しながら同時にＴｈ１免疫もまた誘導し、抗原に対するＴｈ２とＴｈ１両方の反応をイヌリン粒子の不在の組成物では産生しえない程度に相乗的に誘導することは、驚くべき発見であった。
本発明の態様の組成物および物質は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤注射に適した形で、または経口、経直腸、経膣、局所、経鼻、経皮または経眼投与に適した形態で製剤化されて良い。本発明の態様の組成物および物質は、また、例えば、さらなる活性成分、ワクチン抗原（組換え抗原を含む）、抗原性ペプチド配列、または免疫グロブリンを含んでも良い。あるいは、活性成分は、マクロファージ刺激剤、ポリヌクレオチド分子（例えばワクチン物質をコードする）または組換えウイルスベクターであっても良い。
本発明のワクチンとアジュバント組成物の成分は、市販のソースを介して取得してもよいし、または当業者によって調製されて良い。イヌリン粒子製剤は、米国仮特許出願Ｎｏ６１／２４３９７５および国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ８６／００３１１（ＷＯ８７／０２６７９）、ＰＣＴ／ＡＵ８９／００３４９（ＷＯ９０／０１９４９）およびＰＣＴ／ＡＵ２００５／００１３２８（ＷＯ２００６／０２４１００）あるいは、オーストラリアのアデレードにあるＶａｘｉｎｅ Ｐｔｙ Ｌｔｄから商業的に入手して良い。
本発明で使用するＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、市販のものを入手、または、当技術分野で周知の方法を用いて作製して良い。例えば、現在の発明で使用した合成ｔｒｉａｃｙｌａｔｅｄリポ淡白質、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（０．２５μｇ／マウス）、熱不活化リステリア・モノサイトゲネス（２．５ｘ１０ｅ７細胞／マウス）、Ｍ．．ｓｍｅｇｍａｔｉｓのリポアラビノマンナン（０．２５μｇ／マウス）、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＬＰＳ−ＰＧ高純度リポポリサッカライド（２．５μｇ／マウス）、黄色ブドウ球菌の標準リポテイコ酸（ＬＴＡ−ＳＡ）（２μｇ／マウス）、黄色ブドウ球菌のペプチドグリカン（ＰＧＮ−ＳＡ）（２μｇ／マウス）、合成ジアシル化リポ淡白質（０．２５μｇ／マウス）、ザイモサン（１ｍｇ／マウス）、およびＣｐＧ２００６（２０μｇ／マウス）は、すべて米国サンディエゴのＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入した。ネイティブまたはホスホロチオエート修飾されたバックボーンで合成された合成ＣｐＧ ＯＤＮはオーストラリアのＧｅｎｅｗｏｒｋｓから購入し、他の商業的供給者から入手することもができる。ＭＰＬＡは米国のＳｉｇｍａまたは米国サンディエゴのＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入して良い。プラスミドＤＮＡはまた、当技術分野で周知の方法を用いて調製して良く、例えば、キアゲン手順（米国キアゲン社）により、公知の方法を用いてＤＮＡを精製しても良い。免疫に用いた不活化または組換え抗原は、米国のＳｉｇｍａなどの試薬や蛋白質の商業的サプライヤーを介して取得するかまたは、当技術分野で周知の方法を用いて調製して良い。
ワクチンの生物学的活性は、標準実験技術を用いて測定して良く、例えば試験免疫学的製剤を使用し、標準的な実験動物（例えば、マウスまたはモルモット）を標準抗原（例えば、破傷風トキソイド）を免疫することによる。ワクチン効果を高めるための時間、および予防接種の効果が発生するまでの時間の余裕をおいた後、動物から採血するか、脾臓を摘出し、ワクチンに対する反応を測定する。反応は、当技術分野で認められた任意の免疫反応測定法例えば、血清、唾液、膣、糞便抗体価を測定するための（液性免疫測定用）標準抗原および（Ｔ細胞免疫測定用）Ｔ細胞の増殖、サイトカインＥＬＩＳＰＯＴまたはサイトカインＥＬＩＳＡ法による測定で定量化して良い。
淡白質抗原とある効果を生じさせるのに必要な免疫学的組成の正確な量は、特定の化合物と抗原、処置対象の大きさ、年齢、種、および体調によって異なることは、当業者にとって自明である。したがって、必要な量を正確に述べることは不可能である。しかしながら、これらの量は当業者に周知の方法を用いて容易に決定することができる。
一般的には、初めに免疫反応をプライミングするために所望の抗原を一回あるいはそれ以上筋注、皮下または皮内注射により投与する。ワクチン接種は、その後間隔（通常１−１２ヶ月、例えば６ヶ月）をあけた後、本発明の免疫学的組成物を用い、好ましくは一回あるいはそれ以上免疫学的組成物と組み合わせた抗原を非経口に投与することにより、全身性の免疫を増強するために「追加」する。一般的に成人に用いる抗原投与量は、容量あたり０．００１−０．１ｍｇの範囲で、最も一般的には、０．００１−０．１ｍｇ、または０．００５−０．０５ミリグラムである。
一般的に、０．１から５．０ｍＬの範囲ワクチン本発明の実施に投与され、ヒトに対して好ましくは、０．１から１ミリリットルにの範囲である。
本発明の態様による組成物および物質は、好ましくは筋肉内又は皮内注射、または他の非経口手段によって、または表皮にｂａｌｉｓｔｉｃアプリケーションによって投与される。これらはまた、鼻腔内投与、吸入、局所投与、静脈内投与、経口、またはインプラントとして、さらに経直腸や経膣での使用も可能である。適当な液体または固体の医薬製剤形態は、例えば、液体または注射用あるいは吸入用生理食塩水、マイクロカプセル化、コクリート化、微細な金粒子上にコーティング、リポソームに封入、噴霧化、エアロゾル化、皮膚移植用ペレット化、または皮膚を傷付けるための鋭利なものに乾燥させ付着させることである。医薬組成物はまた、顆粒剤、散剤、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、乳剤、懸濁液、クリーム、ドロップまたは活性化合物を持続的に放出を有する製剤を含み、その調製賦形剤および添加剤および／または崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、潤滑剤、香料、甘味料または可溶化剤などの助剤などで上記のように習慣的に使用されている。医薬組成物は、様々な薬物送達システムので使用するのに適している。
今日の薬物送達方法の簡単な総説は、本明細に文献として引用されているＬａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３，１９９０を参照されたい。免疫学的組成物は、好ましくは、投与単位で調製され投与される。液体投与単位は、注射または他の非経口投与用のバイアルまたはアンプルである。固体投与単位は、錠剤、カプセル剤、坐剤である。各用量の投与は、個々の用量単位で単回の形で、または他のいくつかの小さな用量単位の両方で投与されて良い。特定の週または月間隔での複数回投与は、抗原特異的免疫反応を通常増強する。
本発明の態様の組成物および物質、または本発明で有用な抗原は、二つ以上の成分の混合物で送達されて良い。混合物は、一つあるいは複数のタイプのイヌリン粒子（または他の同等の抗炎症成分）と共に一つあるいは複数のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤および一つあるいは複数の抗原を含む免疫学的組成物から成って良い。
本発明の本質がより明確に理解されるために、好ましい形態は、その以下の非限定的な実施例を参照しながら説明する。本出願を通じて引用（参考文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属特許出願を含む）のすべての参照の内容全体が本明細書に明確に参照される。
実施例
ワクチンにおけるイヌリン粒子の使用は、単独で、または他の免疫賦活剤との組み合わせにより評価した。組換えＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）とインフルエンザウイルス抗原を以下に記載する例で模範的なモデル系として用いた。
材料と方法
実施例１：
アジュバント組成物の調製
後述する実施例で参照されるイヌリン粒子製剤は以下のように調製した。
Ｇａｍｍｕｌｉｎ（ガンマイヌリン、ｇＩＮ）、Ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ（ＡＧ）およびＰｈｏｓｇａｍｍｕｌｉｎ（ＰＧ）：ガンマイヌリン（ｇＩＮ）およびＡｌｇａｍｍｕｌｉｎは、「免疫治療」と言うタイトルでＰＣＴ／ＡＵ８６／００３１１（ＷＯ８７／０２６７９）および「ガンマイヌリン組成物」というタイトルのＰＣＴ／ＡＵ８９／００３４９（ＷＯ９０／０１９４９）に以前記載されたように調製され、これらはここに明示的に参照により援用される。Ｐｈｏｓｇａｍｍｕｌｉｎ（ＰＧ）を調製しるため、水中で５％のｇＩＮ懸濁液がまず８０−８５℃に加熱し溶解した後、イヌリン：Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭ重量／重量比２から２００の比率でリン酸アルミニウムゲルの微細な懸濁液（Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭリン酸アルミニウムゲルアジュバント０．４４％ Ｂｒｅｎｎｔａｇ Ｂｉｏｓｅｃｔｏｒ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｓｕｎｄ、デンマーク）と混合した。次いで、この懸濁液を５℃で結晶化後、Ｐｈｏｓｇａｍｍｕｌｉｎハイブリッド粒子を得るために、ガンマフォームに変換（４５℃で１時間）した後、洗浄し、適切に調整した。
Ｄｅｌｔｉｎ（デルタイヌリンｄＩＮ）：Ｄｅｌｔｉｎ（ｄＩＮ）はここに明示的に参照により援用されるＷＯ２００６／０２４１００に以前記載されたようにｇＩＮから調製した。簡潔には、水中のｇＩＮの標準製剤（５０ｍｇ／ｍｌで２００ミリリットル）を５５℃のウォーターバスで１時間インキュベートし、その後６０℃に上げた中で３０分間インキュベートした。粒子をその後、遠心分離し５５℃の水に再懸濁後、５５℃で再インキュベートし同様の方法で再度洗浄し、最終的に５０ミリリットルの冷たい水に再懸濁した。この処理は、多くのアルファおよびガンマ形態で存在するイヌリンを除去するのに十分である。ｄＩＮ−濃縮懸濁液のサンプルは、８０−８５℃で完全に溶解した。屈折率は、４８ｍｇ／ｍｌの濃度を示した。これらの実験で使用したＤｅｌｔｉｎ懸濁液は、５％重量／水の体積の濃度であった。
Ｐｈｏｓｄｅｌｔｉｎ（ｄＩＮ／リン酸アルミニウム製剤（ＰＤ））：Ｐｈｏｓｄｅｌｔｉｎ（ＰＤ）生成するため、前述したようにまずＤｅｌｔｉｎの５％水懸濁液を、８０−８５℃で加熱することにより、水に溶解した後、イヌリン：Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭ重量／重量比２から２００の比率でリン酸アルミニウムの微細な懸濁液（Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭリン酸アルミニウムゲルアジュバント０．４４％ ＢｒｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｓｕｎｄ、デンマーク）と混合した。次いで、この懸濁液を５℃で結晶化後、Ｐｈｏｓｄｅｌｔｉｎハイブリッド粒子を得るために、ｇＩＮに変換（４５℃で１時間）した後、ｄＩＮ（５５℃で１時間）変換し、洗浄し、適切に調整した。
Ａｌｄｅｌｔｉｎ（ｄＩＮ／水酸化アルミニウム製剤）：Ａｌｄｅｌｔｉｎ（ＡＤ）を生成するため、リン酸アルミニウムゲルの代わりに水酸化アルミニウムゲルの微細な懸濁液（ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌＴＭアルミニウム水酸化物ゲルアジュバント、ＡＬ（ｃａｌｃ）３．０％、ＢｒｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｓｕｎｄ、デンマーク）を用いる以外は上記のＰｈｏｓｄｅｌｔｉｎと同じ手順を踏んだ。簡潔には、上記のようにまずＤｅｌｔｉｎｉｎの５％水懸濁液８０−８５℃で加熱溶解した後、ｄＩＮ：ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌＴＭ重量／重量比２から２００の比率でＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌＴＭの微細な懸濁液と混合した。次いで、この懸濁液を５℃で結晶化後、Ａｌｄｅｌｔｉｎハイブリッド粒子を得るためにｇＩＮに変換（４５℃で１時間）した後、ｄＩＮ（５５℃で１時間）変換し、洗浄し、適切に調整した。
Ｅｐｓｉｌｉｎ（ｅＩＮ）：Ｅｐｓｉｌｉｎは「イヌリンの新たな多形形態エプシロン・イヌリンおよびその組成物」と言うタイトルのＰＣＴ／ＡＵ２０１０／００１２２１記載したようにｄＩＮから調製した。簡潔には、ＥＩは５０ｍｇ／ｍｌ以上の濃縮懸濁液のｄＩＮを６０℃で１時間加熱して調製した。
Ｐｈｏｓｅｐｓｉｌｉｎ（ＰＥ）：Ｐｈｏｓｅｐｓｉｌｉｎ（ＰＥ）を調製するため、前述のようにまずｅＩＮの５％水懸濁液を８０−８５℃で加熱溶解した後、ｅＩＮ：Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭ重量／重量比２から２００の比率でリン酸アルミニウムの微細な懸濁液（Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭリン酸アルミニウムゲルアジュバント０．４４％ＢｒｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｓｕｎｄ、デンマーク）と混合した。次いで、この懸濁液を５℃で結晶化後、Ｐｈｏｓｅｐｓｉｌｉｎハイブリッド粒子を得るためにｇＩＮに変換（４５℃で１時間）した後、ｄＩＮ（５５℃で１時間）変換し、ｅＩＮに変換後、洗浄し、適切に調整した。Ａｌｅｐｓｉｌｉｎ（ＡＥ）は、ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌＴＭの代わりにＡｄｊｕ−ＰｈｏｓＴＭに変え上記のＰｈｏｓｅｐｓｉｌｉｎを作るプロセスと同様に作成した。
ＰＧｍｉｘ、ＰＤｍｉｘおよびＰＥｍｉｘ：上記のＰｈｏｓｄｅｌｔｉｎ（ｄＩＮ／リン酸アルミニウム）およびｄＩＮ製剤を、一部が純粋なイヌリンで他がリン酸アルミニウムを含むイヌリンから成る粒子の混合懸濁液（ＰＤｍｉｘ）を形成するために混合した。本明細書に記載の実験では、ＰＤｍｉｘ Ｐｈｏｓｄｅｌｔｉｎ：Ｄｅｌｔｉｎコンビネーションアジュバントは、イヌリンアラムアマルガム粒子とイヌリン粒子のイヌリン含有量の重量で１：１から１：３６の範囲の様々な比率で調製し、以下それぞれＰＤｍｉｘ１：１からＰＤｍｉｘ１：３６と呼ぶ。これにより、非アルミニウム塩含有ｄＩＮ粒子数に対し、リン酸アルミニウム含有粒子の相対量を変化できる。ＰＧｍｉｘとＰＥｍｉｘは、同様の方法で調製した。ＰｈｏｓｄｅｌｔｉｎのＤｅｌｔｉｎ粒子に対する比率は、ｘ：ｙ ＰＤ：Ｄと表記される。これは、イヌリンの含有量に基づいてＰＤのｘ量がＰＤｍｉｘｘ：ｙを形成するために、ｄＩＮのｙ量と混合したことを意味する。
ＡＧｍｉｘ、ＡＤｍｉｘおよびＡＥｍｉｘ：ＡＤｍｉｘを作るために、上述したようにＡｌｄｅｌｔｉｎとＤｅｌｔｉｎ製剤を混合懸濁液を形成するために混合した。本明細書に記載の実験では、Ａｌｄｅｌｔｉｎ：Ｄｅｌｔｉｎコンビネーションアジュバントは、イヌリン含有量の重量で１：１から１：３６の範囲の様々な比率で調製し、それによって非アルミニウム塩含有ｄＩＮ粒子数に対し、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ含有粒子の相対量を変化できる。ＡＧおよびＡＥは、同様に調製した。
ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤：合成ｔｒｉａｃｙｌａｔｅｄリポ蛋白（Ｐａｍ３ＣＳＫ４）（０．２５μｇ／マウス）、熱殺菌されたＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（２．５ｘ１０ｅ７細胞／マウス）、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓのリポアラビノマンナン（０．２５μｇ／マウス）、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのＬＰＳ−ＰＧ高純度リポポリサッカライド（２．５μｇ／マウス）、黄色ブドウ球菌の標準リポテイコ酸（ＬＴＡ−ＳＡ）（２μｇ／マウス）、黄色ブドウ球菌のペプチドグリカン（ＰＧＮ−ＳＡ）（２μｇ／マウス）、合成ジアシル化リポ淡白質（０．２５μｇ／マウス）、ザイモサン（１ｍｇ／マウス）、ＣｐＧ２００６（２０μｇ／マウス）およびｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａを含むＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、すべてＩｎｖｉｖｏｇｅｎ、サンディエゴ、米国から購入し、製造者の指示に従って使用した。さらに、合成オリゴヌクレオチド（例えばホスホロチオエートバックボーンで合成したＯＤＮ１８２６塩基配列ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ）は、Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓオーストラリアから購入した。ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤は、メーカーの指示に従って使用前に生理食塩水で希釈溶解した。
ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤とイヌリン粒子の製剤：ｇＩＮ、ｄＩＮ、ｅＩＮ、ＡＧ、ＡＤ、ＡＥ、ＰＧ、ＰＤ、ＰＥ、ＰＧｍｉｘ、ＰＤｍｉｘ、ＰＥｍｉｘ、ＡＧｍｉｘ、ＡＤｍｉｘまたはＡＥｍｉｘ（以下総称して「イヌリン粒子」と呼ぶ）の水懸濁液は、上述の様に調製した。個々のＴＬＲアゴニストおよび上記に詳細した他のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤を、所望の最終濃度となるように、関連するイヌリン粒子懸濁液中に分注した。同様に、ワクチン抗原の溶液を、例えば、インフルエンザ赤血球凝集素またはＨＢｓＡｇは、単純に、所望の最終ワクチン濃度と成る様に、関連する免疫学的製剤に分注した。抗原、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤およびイヌリン粒子の混合物は、注射できるように免疫の直前にシリンジに吸い上げた。
マウスの免疫：一群５−１０匹の様々な年齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを生理食塩水をベヒクルとしたワクチン５０μｌで後肢に筋肉内免疫した。注射は２９Ｇ針が結合した０．３ｍｌのインスリン注射器（ベクトン・ディッキンソン、フランクリンレイクス、ニュージャージー州）を用いて行った。
抗原に対する液性反応の評価：ヘパリン添加血液は他で説明されている（Ｍｉｃｈｅｌら、１９９５）ように軽く麻酔したマウスの眼窩静脈叢穿刺により採取した。血漿を遠心分離（１３，０００ｒｐｍで７分）により回収した。血漿中の抗原特異的な抗体は、標準的なプロトコルを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって検出し、定量化した。血漿の希釈液をまず、抗原で室温（ＲＴ）で一晩コーティングした９６ウェルマイクロタイタープレートに添加した。次いで結合した抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗マウスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａ抗体（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１０％ＦＣＳで１：２０００希釈、１００μｌ／ウェル）３７℃で１時間インキュベートし、室温で３０分間ＴＭＢ溶液（１００μｌ／ウェル、Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）とインキュベーションすることにより検出した。反応は、１Ｍ硫酸の添加により止め、ＥＬＩＳＡプレートリーダーで吸光度を記録した。
ＴＬＲ９アゴニスト（ＣｐＧ２００６ ＯＤＮ）とイヌリン粒子製剤（ＰＤｍｉｘ）の間に良好な用量反応関係があるかどうかを判断するため、雌の６−８週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（一群あたりｎ＝５−８）を２、７、２０または６０μｇのＣｐＧ２００６単独あるいは１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：５）と混合した用量あたり１００ｎｇのヘマグルチニンを含むヒトの三価不活化インフルエンザワクチン（ＴＩＶ）（Ｆｌｕｖａｘ▲Ｒ▼２００７）の５０ｕｌで、１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。マウスは二回目の免疫の４２日後に採血し、ＥＬＩＳＡ法で抗インフルエンザ抗体を測定した（図１）。
２から６０ｕｇのＣｐＧの増加は、抗インフルエンザＩｇＧ１反応を抑制し同時に抗インフルエンザＩｇＧ２ａ反応を増強した。しかしながら、このＣｐＧによるＩｇＧ１の抑制により、たとえ最高のＣｐＧ用量６０μｇによっても、アジュバントなしで投与したＴＩＶが達成するものと抗インフルエンザ総ＩｇＧ反応に有意差はなかった。しかし、ＰＤｍｉｘイヌリン粒子とＣｐＧ２００６を投与したマウスは、特にＣｐＧの２と７μｇ用量で抗インフルエンザＩｇＧ１反応の相乗的増強が認められ、同じ用量のＣｐＧがイヌリン粒子なしで単独で与えられた時に見られる抗インフルエンザＩｇＧ１反応の阻害とは対照的であった。
組み合わせによる総ＩｇＧの増強は、イヌリン粒子がＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の用量節約効果を提供することを確認し、もしイヌリンと一緒に投与されたときＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の免疫反応における利点をより低用量で得られるようのする。同時に、ＩｇＧ２ａ反応を増強するというＣｐＧの利点は、イヌリン粒子の存在下で保持されあるいはむしろ増強された。抗インフルエンザ総ＩｇＧ反応は、ＴＩＶにＰＤｍｉｘイヌリン粒子とＰＡＭＰ ＣｐＧ ６０μｇをプラスした群で最も高かった。同様に、抗インフルエンザＩｇＭ反応もまた、ＣｐＧおよびＰＤｍｉｘ併用群で最大程度に増強された。
実施例２：
ＰＤｍｉｘとＣｐＧの相乗効果は、年齢に関連するかどうかを判断するため、実施例１と同様の実験を１４日齢（新生仔モデル）または２００−３００日齢（高齢モデル）の雌のＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）で行った。まず、１４日齢の新生児の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（一群ｎ＝５−７）を動物あたり１００ｎｇのＨＡとなる三価不活化インフルエンザワクチン（ＴＩＶ）（ＦＩｕｖａｘ▲Ｒ▼２００７は、ＣＳＬオーストラリア）の５０μｌで後肢に筋肉内に免疫した。ＴＩＶは、単独で投与するか、または１ｍｇのｄＩＮ、１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３６ ＰＤ：Ｄｗ／ｗ）、２０ｕｇのＣｐＧ１６６８、１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３６ ＰＤ：Ｄ ｗ／ｗ）＋２０ｕｇのＣｐＧ１６６８と混合した。マウスは９日間隔で２回免疫し、ＥＬＩＳＡ法で抗インフルエンザ抗体反応を測定するために２回目の免疫の１４日に血液サンプルを採取した（図２）。
ＣｐＧ１６６８のＴＩＶへの添加は、ＴＬＲ９アゴニストが免疫反応をＴｈ２からＴｈ１への転換を引き起こすことと合致して、ＩｇＧ１の優位型からＩｇＧ２ａで優位型抗体反応に添加する結果にはならなかったが、インフルエンザ抗原単独で見られた抗インフルエンザ総ＩｇＧを超えては増強しなかった。ＴＩＶがＣｐＧ１６６８プラスＰＤｍｉｘで調製された時、ＴＩＶとＣｐＧ１６６８またはＰＤｍｉｘのいづれかとで見られたもの以上のレベルの抗インフルエンザ総１ｇＧおよびＩｇＭの著しい増強を反映した相乗効果により、抗インフルエンザ総ＩｇＧレベルの最大の増強が見られた。ＴＩＶを単独で投与したマウスと比較した場合、ＰＤｍｉｘとＣｐＧを共に投与されたマウスのみにインフルエンザ赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体価が有意に上昇した。
二回目の免疫の５２日後にマウスを屠殺し、インフルエンザ特異的Ｔ細胞のリコール反応をＣＳＦＥベースのＴ細胞増殖アッセイを用いて測定した。ＰＤｍｉｘプラスＣｐＧ１６６８を投与したマウスがインフルエンザ抗原に対し、最も高いＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞増殖応答を示した。したがってＰＤｍｉｘ、イヌリン粒子製剤およびＣｐＧ、ＴＬＲ９を活性化するＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の組み合わせが、新生仔マウスに最高の全体的な抗インフルエンザ総ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体を生成し、高いレベルのＩｇＧ２ａを誘導し、そして防御的赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体価を増加する唯一のグループである。同様に、インフルエンザ抗原に対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖リコール反応もまた併用群で最も高かった。このことは、イヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストの組み合わせが、新生仔の液性および細胞性免疫反応の誘導に特に有益であることを示す。
２００から３００日齢の高齢マウス（ｎ＝６／群）をＴＩＶ（１００ｎｇのＨＡ）のみまたは１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３６）、２０ｕｇＣｐＧ１６６８あるいはその２つの混合物で１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。マウスは、１４日間隔で、２回免疫し二回目の免疫の１４日後にＥＬＩＳＡ法で抗インフルエンザ抗体を測定するためのに血液サンプルを採取した（図３）。
ＰＤｍｉｘとＣｐＧ１６６８の同時投与による獲得免疫反応に対する相乗効果が、再び高齢マウスで観察され、ＴＩＶプラスＰＤｍｉｘイヌリン粒子プラスＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２００６同時投与群が最も高いインフルエンザ特異的総ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭを獲得し、イヌリン粒子は、ＣｐＧ単独投与で見られるＩｇＧ１生産の抑制を減少させた。
実施例３
ＰＤｍｉｘとＣｐＧの相乗効果は、ＣｐＧの配列に依存しているかどうかを判断するために、６−８週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウス（一群ｎ＝５−７）を１４日間隔で二回筋肉内に免疫し実施例１の実験を繰り返した。マウスはＴＩＶ１００ｎｇＨＡプラス１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３）のみまたはＣｐＧ１６６８（ＢクラスＯＤＮ）、ＣｐＧ２２１６（ＡクラスＯＤＮ）、ＣｐＧ２００６（ＢクラスＯＤＮ）、ＣｐＧ２３９５（ＣクラスＯＤＮ）あるいはコントロールの非ＣｐＧ配列ＣｐＧ２２３７をすべてのマウス当たり１０ナノモルの用量でを筋肉内に免疫した。配列は以下のとおりである。
ＣｐＧ１６６８−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｔｇｃｔ、ＣｐＧ２２１６−ｇｇＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇＧ、ＣｐＧ２００６−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ、ＣｐＧ２３９５−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ、ＣｐＧ２２３７−ｔｇｃｔｇｃｔｔｔｔｇｔｇｃｔｔｔｔｇｔｇｃｔｔ、小文字はホスホジエステル結合を表し、大文字はｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｒａｔｅ結合を表す。抗インフルエンザ抗体レベルは、二回目の免疫の２８日後に採取した血液についてＥＬＩＳＡにより決定した（図４）。
ＰＤｍｉｘとＣｐＧ１６６８、ＣｐＧ２００６またはＣｐＧ２３９５のいづれかの同時投与は、抗インフルエンザ総ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗体価を高めることに個々のコンポーネントより勝り相乗効果を示し、ＣｐＧ２２１６およびＣｐＧ２２３７は抗体反応に影響を及ぼさなかった。このことは、イヌリン粒子とＯＤＮの相乗効果が、好ましくはＢクラスまたはＣクラスＯＤＮの配列に属する、ＴＬＲ９結合ＣｐＧモチーフを含むＯＤＮの配列に一般化であることを確認した。
実施例４
イヌリン粒子（ｄＩＮまたはＰＤｍｉｘ）およびＣｐＧ ＯＤＮの相乗効果が使用される抗原に依存しているかどうかを判断するために、不活化狂犬病ワクチン（Ｍｅｒｉｅｕｘ不活化狂犬病ワクチン（ＭＩＲＶ）で繰り返し免疫した。６−８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（一群ｎ＝５−７）を１０ｕｌのＭＩＲＶ単独または１ｍｇのｄＩＮか１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：５）単独、あるいはＣｐＧ１６６８（５μｇ）と一緒に混合し１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。
抗ＭＩＲＶ抗体レベルは、二回目の免疫の１４日後に採取した血液につきＥＬＩＳＡで決定した（図５）。ｄＩＮまたはＰＤｍｉｘとＣｐＧ１６６８プラスＭＩＲＶの組み合わせが、最高の抗狂犬病総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭをもたらし、相乗効果がアラムを含むか含まない両形態のイヌリン粒子に一般化できることを確認し、そしてイヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストの病原体関連分子パターン剤の好ましい相乗的組み合わせは、インフルエンザ以外の抗原に一般化できた。
同様に、前述の実験と同様にして行う研究により、イヌリン粒子とＣｐＧ ＯＤＮの相乗的な免疫増強効果が、一貫した総ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭの増強およびＴＬＲ９アゴニストによる典型的なＩｇＧ１の抑制の減弱する知見で、マラリアＭＳＰ４またはＭＳＰ淡白質、組換えまたは不活化ＳＡＲＳコロナウイルス抗原、パンデミックインフルエンザＨ５Ｎ１抗原、日本脳炎抗原を含むワクチン抗原に広く拡張できることを確認できた。
実施例５
イヌリン粒子の好ましい相乗効果が、他のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤に一般化できるか否かを判断するために、６−８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（一群ｎ＝５−１０）をＴＩＶ２００７（合計ＨＡ ４５ｎｇ／マウス）で０日目と１４日目に１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。各群は、ＴＩＶプラスＰＤｍｉｘ（１：５）のみまたは一緒に２０ｕｇ ＣｐＧ２００６あるいは１ｍｇのザイモサン、２ｕｇリポタイコ酸（ＬＴＡ）、０．２５ｕｇ Ｌｉｐｏｍａｎｎｎａｎまたは０．２５ｕｇＰａｍ３ＣＳＫ４含む一連のＴＬＲ２アゴニストで免疫された。ＥＬＩＳＡによる抗インフルエンザ抗体の測定のため二回目の接種の二週間後に血清を採取した（図６）。
イヌリン粒子−ＴＩＶ製剤への個々のＰＡＭＰｓのそれぞれの添加は、ＴＬＲ９アゴニストのＣｐＧまたはＴＬＲ２アゴニストのザイモサンいずれかの組み合わせが最大の効果で、抗インフルエンザ総ＩｇＧの増加をもたらした。ＣｐＧとの組み合わせはＩｇＧ１反応を抑制したが、ザイモサンとの組み合わせはＩｇＧ１反応を増強し、ＣｐＧとザイモサンがイヌリン粒子に添加されると著しくＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ反応が強化され、ＬＴＡとＰａｍＣＳＫとｌｉｐｏｍａｎｎａｎもまた抗インフルエンザＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ反応を増強したが、程度は低かった。このことは、ＴＬＲ９アゴニストとイヌリン粒子の免疫相乗効果が、一連のＴＬＲ２アゴニストを含む他のＰＡＭＰｓに拡張することを示した。
実施例６
イヌリン粒子の好ましい相乗効果がさらに他のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤に一般化できるか否かを判断するために、６−８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（一群ｎ＝５−１０）を１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３）含有あるいは不含の１μｇの組換え酵母Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）と０．１μｇ／マウスのＰａｍＣＳＫ４、２５μｇ／マウスのＴＬＲ３アゴニストのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、合成ＴＬＲ４アゴニストのＭＰＬＡ、ＴＬＲ５アゴニストのフラジェリン、０．０４μｇ／マウスのＴＬＲ６アゴニストのＭＡＬＰ−２、２．５μｇ／マウスのＴＬＲ７アゴニストのＰｏｌｙＵ、または２０μｇ／マウスのＴＬＲ９アゴニストのＣｐＧ２００６のいづれかで１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。マウスは二回目の免疫の４２日後に採血し、ＥＬＩＳＡによって抗ＨＢｓＡｇ抗体を測定した（図７）。
ＨＢｓ抗原プラスＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤単独の各投与群は、低いまたは測定不能な抗ＨＢｓＡｇ総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗体を持っていた。これとは対照的に、ＰＡＭＰ免疫活性化剤プラスＰＤｍｉｘの各投与群は、イヌリン粒子とテストしたＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤との一貫した相乗効果に一致した抗ＨＢｓＡｇ総ＩｇＧ反応の顕著な増強が認められた。
実施例７
６−８週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（一群ｎ＝５−８）を３ｎｇから３μｇのＨ５血清型換えインフルエンザ赤血球凝集素淡白質（ｒＨ５））（プロテイン・サイエンス・コーポレーション、メリデン、ＵＳＡ）と１ｍｇのｄＩＮまたは１ｍｇのｄＩＮと５μｇのＣｐＧ２００６を含むワクチン製剤５０μｌで、２１日間隔で２回筋肉内に免疫した。マウスは二回目の免疫の１４日後に採血し、ＥＬＩＳＡで抗組換えＨ５型抗体を測定した（図８）。
結果は、１ｍｇのｄＩＮのプラス５μｇのＣｐＧ２００６のとわずか１０ｎｇのｒＨ５のと組み合わせが３μｇのｒＨ５単独より高いＩｇＧ反応を誘導し、３００倍以上の抗原節約効果を示した。抗原節約効果は、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＭ反応でさらに顕著であり、３μｇのｒＨ５が１ｍｇのｄＩＮのプラス５μｇのＣｐＧ２００６と組み合わされると、３μｇのｒＨ５単独より高いＩｇＧ２ａ応答を誘導し、３０００倍以上の抗原節約効果と同等かそれ以上であった。
実施例８
２２ヶ月齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを０．１ｕｇ不活ＰＲ８ Ｈ１Ｎ１インフルエンザワクチン単独で、または１ｍｇのｄＩＮとあるいは１ｍｇのｄＩＮ＋１０ｕｇのＣｐＧ２００６と組み合わせで２週間間隔で２回免疫した。別の対照群には生理食塩水のみで、またはｄＩＮのみであるいはｄＩＮ＋ＣｐＧ２００６のみ接種した。その後すべてのマウスは、二回目の免疫の５週間後にＰＲ８ウイルス（２０ｘＬＤ５０）の致死量で経鼻的に攻撃した（図９Ａ）。
生理食塩水またはアジュバントのみで免疫したすべての対照群およびアジュバントなしのＰＲ８ワクチンで免疫した高齢マウスは体重を減少し死亡した。ＰＲ８ワクチンプラスｄＩＮで免疫されたマウスは、病気になり重量を減少したが、その後回復した。対照的に、ＰＲ８ワクチンプラスｄＩＮ粒子とＣｐＧ２００６の組み合わせを接種した高齢マウスは、イヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストの組み合わせが持つ老化した免疫システムがワクチンに反応できるよう回復する相乗効果を持ちそれにより臨床インフルエンザ感染に対する完全な保護を得ることに一致して、病気にならず、体重を失わずあるいは死亡しなかった。
ＰＲ８ウイルス攻撃実験で見られる防御が、ＣｐＧ成分によるものではないことを証明する為に、６−８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスを不活化ＰＲ８インフルエンザと食塩水、ＣｐＧ２００６、または１ｍｇのｄＩＮおよび１０ｕｇのＣｐＧの組み合わせで０週と３週に筋肉内に免疫し、７週に致死量のＰＲ８Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスで攻撃した（図９Ｂ）。
ＰＲ８プラスイヌリン粒子およびＴＬＲ９アゴニストの組み合わせで免疫されたマウスのみが生存し、一方ＰＲ８プラスＣｐＧで免疫されたマウスは死亡し、免疫時にイヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストが同時に存在することによってのみもたらされる防御と一意した。
実施例９
１１−１４週齢で体重０．７−１．９ｋｇの去勢フェレット（Ｍｕｓｔｅｌａｐｕｔｏｒｉｏｕｓｆｕｒｏ、トリプルＦファーム、サンガー、ペンシルバニア州）を環境順応と検疫のため１４日間飼育した。フェレットは現在循環しているインフルエンザＡ型Ｈ１とＨ３、Ｂ型インフルエンザウイルス、およびＨ５抗原に血清陰性であった。Ｈ５Ｎ１型Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４一価インフルエンザサブビリオンワクチン：フィッシャーリポジトリストック番−ＣＬＡＧ−１１７０（ロット＃Ｕ００７８２７）は、ＮＩＡＩＤのリポジトリから入手し、２から８℃で保存した。
ワクチンは、０．５ｍＬの容量で太ももに筋肉内（ＩＭ）接種し、２回目のワクチンは反対のももに接種した。対照動物はアジュバントのみまたは等量の緩衝生理食塩水を接種した。ロット番号、ＶＡＸ−ＳＰＬ−０９１０−０３（重炭酸塩緩衝液で５０ｍｇ／ｍｌのｄＩＮイヌリン、以後Ａｄ１と呼ぶ）と、ロット番号、ＶＡＸ−ＳＰＬ−０９１０−０４（０．３ｍｇ／ｍｌのＣｐＧ２００６と重炭酸塩緩衝液で５０ｍｇ／ｍｌのｄＩＮイヌリンの混合物、以後Ａｄ２と呼ぶ）二種類のイヌリンアジュバント製剤を使用した。これらの製剤のそれぞれのフェレット当たり２５０ｕＬの用量を、各フェレットの免疫前にＨ５Ｎ１型抗原と混合した。こうしてもしフェレットが無作為にＡｄ１で免疫されることになると１０ｍｇのｄＩＮのアジュバント用量を、もし無作為にＡｄ２で免疫されることになると１０ｍｇのｄＩＮ＋７５μｇのＣｐＧ２００６のアジュバント用量を接種した。ＣｐＧ２００６は、完全ホスホロチオエートバックボーンを有する５−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴの配列であり、Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ Ｐｔｙ Ｌｔｄ、アデレード、オーストラリアから購入した。
アジュバントは、２−８℃で保存し、使用直前にワクチンと混合した。インフルエンザウイルスＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４Ａ（Ｈ５Ｎ１）（ＶＮ／１２０３）は、疾病管理予防センター（ＣＤＣ）から入手した。動物は、コンピュータ化されたデータ収集システム（例えば、Ｐａｔｈ−ＴｏｘＸｙｂｉｏｎ、Ｃｅｄａｒ Ｋｎｏｌｌｓ、ニュージャージー）により層別（体重）ランダム化の手順を用いて、グループに割り当てられた。合計４９匹のフェレットが、１０のグループのいずれかに割り当てられ、７匹づつの４群のフェレットは、２１日間隔で二回、７．５μｇのワクチン＋Ａｄ１、７．５μｇのワクチン＋Ａｄ２、２２．５μｇ＋Ａｄ１、２２．５μｇのワクチン＋Ａｄ２で免疫した。３匹づつの２群のフェレットは、それぞれ２２．５μｇ＋Ｎｏ Ａｄ；と７．５μｇ＋Ｎｏ Ａｄ．のアジュバント不含ワクチンを二回接種した。
３匹づつの三つの対照群は、それぞれｓａｌｉｎｅ＋Ａｄ１、ｓａｌｉｎｅ＋Ａｄ２、ｓａｌｉｎｅ＋Ｓａｌｉｎｅを接種した。６匹のもう一つの群は、他の群のプライミング時に２２．５μｇ ｖａｃｃｉｎｅ＋Ａｄ２を接種した。フェレットは、ワクチン追加接種の３週間後または一回免疫群では６週間後、感染させた。攻撃手順は、ケタミン（２０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（４ｍｇ／ｋｇ）を筋注し麻酔後、５００μＬの１０６ＥＩＤ５０のＶＮ／１２０３を各鼻孔に注入し、攻撃用希釈は、一貫性のある感染症を確実にするために培養した。鼻洗浄は、１％ウシ血清アルブミン、１００単位／ｍＬのペニシリンで、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および０．２５μｇアムホテリシンＢ／ｍＬを含む生理食塩水の１．０ｍＬ各鼻孔に注入し回収した。完全な血球計算のために全血を攻撃後４日目に上大静脈穿刺によって得た。眼漏、鼻汁、くしゃみ、咳、便の特性、活動スコアを毎日二度の観察で記録した。瀕死の動物は、次の基準のいずれかによって判定した。体温３３．３℃未満、２５％を超えた体重減少、触れることに無反応、自傷、麻痺、運動障害、または呼吸窮迫。
生存中に得られた上気道のサンプルは、鼻洗浄をウイルス攻撃２日および４日後に、そして咽頭スワブを攻撃１、２、３、４、および６日後に採取した。剖検時に採取した組織では、インフルエンザウイルスを尾肺葉の肺胞洗浄液および４つの２５０ｍｇ片の肺、脳、脾臓、気管気管支リンパ節、２つの気管輪のホモジネート（ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ、ＱＩＡＧＥＮ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を培養した。血清は最初のワクチン接種日と最初のワクチン接種後１４日、２１日、および２８日に大静脈穿刺により採取し、ワクチン接種後１４日目は攻撃−２８日に対応し、そしてワクチン接種後２８日目は攻撃−１４日に対応する。血清検体は、ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｓｔｒｏｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ（デンカ生研、東京、日本）により３７℃で１６−２０時間処理し不活化し、続いて５６℃で３０分間熱不活した。赤血球凝集抑制（ＨＩ）は、ウマ赤血球を用いて実施した。中和抗体の力価は、マイクロ中和アッセイ（ＭＮ）を用いて測定した。
１００ ５０％培養細胞感染単位（１００ ＴＣＩＤ５０）のＶＮ／１２０３ウイルスと四重の血清の連続段階希釈液を等量混合し３７℃で１時間インキュベートし、混合物１００μＬを９６ウェルプレート中の洗浄したＭＤＣＫ細胞の単層に加えた。プレートを３日間インキュベートし、細胞変性効果（ＣＰＥ）を視覚的に倒立顕微鏡を用いて評価した。ウェルの半分以上を防御する最高血清希釈を抗体価とした。幾何平均力価を報告し、陰性の力価は１０と表記した。
肺組織および嗅球と脳を感染後６から８後の瀕死のフェレットと感染１４日目に症状がなく生き残ったフェレットから剖検時に採取した。緩衝ホルマリンで固定した後、左前葉、右中葉と右後葉から組織病理学のために標準的な切片を作成した。統計的分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５．０３、グラフパッドソフトウェア社、ラホーヤ、カリフォルニア州）使って行った。血清抗体反応は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの事後テスト訂正を使用して、分散分析（ＡＮＯＶＡ）により分析した。生存割合は、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定を用いて試験した。累積活動スコアによる罹患率は、フィッシャーの正確確率検定により検討した。
ウイルス量は、反復測定ＡＮＯＶＡによって異なるか否かを決定した。アジュバント不含スプリットビリオンＨ５Ｎ１ワクチンで免疫したフェレットは、ワクチン量に係わらずチャレンジ前に検出可能なＨ５Ｎ１中和抗体を持っていなかった。Ａｄ１またはＡｄ２と含むＨ５Ｎ１ワクチンの２回投与を受けたフェレットすべてチャレンジ前に中和抗体を示し、そしてプライミング投与２１日後には、イヌリン粒子とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤（ＣｐＧ）の組み合わせが免疫反応を増強することに一致して、Ａｄ２−アジュバントワクチンレシピエントはＡｄ１群よりも有意に高い血清中和抗体を持っていた（Ｐ＜０．０３、Ｌｏｇ Ｒａｎｋ−ｓｕｍテスト）（図１０）。
対照動物は、すべての攻撃後に死亡し、抗原のみで２回ワクチン接種した動物は約３０％の死亡率であり、Ａｄ１またはＡｄ２のいずれかと抗原の組み合わせで免疫した動物は死亡しなかった（図１１）。アジュバントなしのワクチンを２回のレシピエントは、免疫後５日目（ｐｉ）までに体重の１５％以上を失い、４匹の生存者は体重を回復できなかった。Ｈ５Ｎ１抗原をイヌリン粒子プラスＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の組み合わせと製剤した時の増強された免疫防御と一致して、Ａｄ１と抗原の２回投与で免疫した群は、体重の５％を失いその後回復し、抗原とＡｄ２の２回投与で免疫した群は、体重をまったく失わなかった（図１２）。
同様に、イヌリン粒子とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤相乗防御効果に一致して、Ａｄ１−アジュバントワクチン群の４匹のフェレットが発熱を示した一方、Ａｄ２−アジュバント群のいかなるフェレットも発熱しなかった（図１３）。Ａｄ２ワクチン接種動物の２、３、および４日ｐｉにおける咽頭スワブのインフルエンザウイルス力価は、抗原単独接種動物より有意に低く（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定、ｐ＝０．００１８）、Ａｄ１ワクチン接種動物は、抗原単独接種動物と有意な差は認められなかった。
Ａｄ２を含むワクチンの単回投与接種動物は、抗原単独二回接種動物に比べ２−４日ｐｉにおいてウイルス量に有意差はなかった。したがってイヌリン粒子製剤（ｄＩＮ）とＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤（ＣｐＧ２００６）の組み合わせが相乗的に同時に投与した抗原に対する抗体反応を増強し、単回免疫後でさえ致死的なＨ５Ｎ１の攻撃に対して増強された防御を示した。同様のＰＲ８抗原の単回投与のマウスでの実験は、致死ＰＲ８攻撃に対するマウスの完全な防御がｄＩＮとＣｐＧ２００６（１０ｕｇ）と組み合わせた５ｕｇＰＲ８の単回投与でそれらを免疫することにより得られ、ＰＲ８といづれかの成分による免疫は、それぞれ部分的防御または無防御に終わった。
実施例１０
ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤と組み合わせるイヌリン粒子の相乗効果が、純粋にｄＩＮの特性であるか、あるいは他のイヌリン粒子の多形形態によって共有されるかどうかをテストする為に、成熟Ｂａｌｂ／ｃマウスをＨＢｓ抗原と一緒にｇＩＮ、ｄＩＮまたはｅＩＮイヌリン粒子とＴＬＲ９ ＰＡＭＰ、ＣｐＧ２００６と共に、２１日間隔で二回筋肉内に免疫した。マウスは、ＥＬＩＳＡによって抗インフルエンザ抗体を測定するために二回目の免疫の１４日後に採血した（図１４）。ｇＩＮ、ｄＩＮまたはｅＩＮは、抗ＨＢｓＡｇは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭの誘導においてイヌリン粒子の異なる多形形態の共有財産であるＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤との相乗免疫増強効果を持っていた。
実施例１１
イヌリン粒子とＰＡＭＰの相乗効果が、小動物モデルから大型哺乳類にも適用可能か否かを決定する為に、ＪＥＶに対し血清陰性の４−８歳の標準血統の雌馬（一群ｎ＝３）を、日本脳炎（ＪＥ）ワクチンで頸部に皮下注射により免疫した。Ｖｅｒｏ細胞培養で増殖させた不活化日本脳炎ワクチン（ｃｃＪＥ、北京−１株）（Ｔｏｒｉｎｉｗａ＆小宮、２００８）は、日本の北里研究所から入手し、６μｇの用量で単独で、またはｄＩＮイヌリン粒子製剤（２０ｍｇ／ｄｏｓｅ）またはｄＩＮイヌリン粒子製剤（４０ｍｇ／ｄｏｓｅ）プラスＣｐＧ７９０９（２００ｕｇ／ｄｏｓｅ）の両方と一緒に１ｍｌの総注射量で投与した。
馬は、５週間後に同じワクチンの２回目の投与でブーストし、血清を第一と第二回の免疫の５週後に採取した。５０％プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ５０）は、１１０μｌのＨＢＳＳ−ＢＳＡ中の〜４００ＰＦＵのＪＥＶ（中山株）、ＭＶＥＶ（ＭＶＥ−１−５１株）またはＷＮＶ（Ｋｕｎｊｉｎ ＭＲＭ６１Ｃ株）と同じ緩衝液で連続二倍段階希釈した抗血清と共に９６ウェルトレイ中で３７℃で１時間インキュベートした。二重の０．１ｍｌ中の感染性ウイルスは、６ウェル組織培養トレーのＶｅｒｏ細胞におけるプラークアッセイにより測定した。
パーセンテージプラーク減少は、同じ系統の無処置マウスの血清と共にインキュベ
Figure 2014523873
減少した血清希釈の逆数として与えられる。ワクチンの２回接種後のＪＥＶに対するＰＲＮＴ５０価の比較は、ｃｃＪＥがイヌリン粒子のみと処方されたとき、中和抗体反応は標準ｃｃＪＥ群と比較して約４倍増強されたことを示した。
しかし、ｃｃＪＥ抗原とイヌリン粒子およびＣｐＧ７９０９両方の同時投与は、ＪＥＶ中和抗体を更に２−３倍に増強した（表１）。明白に、イヌリン粒子プラスのＣｐＧとｃｃＪＥで免疫されたすべての馬が、わずか一回投与後に血清防御レベルの抗体価（ＰＲＮＴ５０＞１０）を達成した。イヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストの組み合わせはまた、ＭＶＥＶおよびＷＮＶに対し最高レベルの交差中和抗体を誘導し、この組み合わせが、他のウイルス株、あるいは他のウイルスに対する交差中和抗体を誘導のために特に有利な条件であることを示した。
Figure 2014523873
実施例１２
イヌリン粒子の抗炎症作用は、ヒト全血または精製したたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用い、または別の方法でもしマウスまたは他の小さな種を好む場合は、精製脾細胞を使用し、あるいは例えばウサギのようなより大きな動物の場合は、同様にそれらの全血を使用するか、精製した末梢血単核細胞を使用した簡便なアッセイによって測定できる。要約すると、イヌリン粒子の１ｍｇ／ｍｌから１ｎｇ／ｍｌまでの連続希釈タイトレーションシリーズを、マルチウェルプレート内の細胞に添加し、その後３７Ｃまたは細胞が得られた種の関連体温でインキュベートする。
リードアウトは、ＩＬ−１が特に好ましいとサイトカインの測定による。リードアウトは、もしサイトカイン遺伝子発現をリアルタイムＰＣＲで測定する場合は４から２４時間後に、もしサイトカイン淡白質産生を例えばＥＬＩＳＡによって測定する場合は、約２４から７２時間後で測定され得る。この実施例では、３名の健康な成人被験者からヒトＰＢＭＣを調製し、１００ｕｇ／ｍｌのｄＩＮ粒子と５時間インキュベートし、その後ＲＮＡをＴＲＩＺＯＬで抽出した後、遺伝子発現アレイシステム（イルミナ）上で実行した。
対照比較の為に、同じ被験者のＰＢＭＣを、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）およびＬＰＳを含む炎症誘発性ＰＡＭＰＳと共にインキュベートした。予想されたように、３人の被験者のＰＢＭＣをＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）やＬＰＳとインキュベーション後、それぞれＰＡＭＰアゴニストの非存在下でインキュベートしたＰＢＭＣと比較した場合、平均で４．１および４．４倍ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの平均遺伝子発現がアップレギュレートされた。これとは対照的に、ＰＢＭＣｓを１００ｕｇ／ｍｌのｄＩＮ粒子と培養すると、ＰＢＭＣ単独で培養した場合に比べＩＬ１α遺伝子発現は２．８８倍そしてＩＬ１β遺伝子発現は２．１７倍減少した。
ｄＩＮ粒子は、ＩＬ１受容体遺伝子すなわちＩＬ１ＲＡＰの発現もまたダウンレギュレートし、それはイヌリン粒子の存在下で１．４６倍のダウンレギュレートであった。その上さらに、抗炎症作用を強調する為に、ｄＩＮ粒子はＩＬ１Ｆ５（１．４９倍アップレギュレート）、ＩＬ１Ｒ２（１．１１倍アップレギュレート）およびＩＬ１ＲＮ（２．９倍アップレギュレート）を含むＩＬ−１の炎症作用を拮抗する遺伝子のアップレギュレーションをもたらした。
次にｄＩＮ粒子とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰ、ＣｐＧの組み合わせの効果を検討した。ｄＩＮ粒子プラスＣｐＧの存在下で、ＩＬ１αとＩＬ１βの遺伝子発現は、無刺激ＰＢＭＣ単独における発現と比較した場合、ダウンレギュレートされたままであったが、興味深いことに、ｄＩＮとＣｐＧの組み合わせの存在下では、ｄＩＮ単独の存在下でよりＩＬ１アンタゴニストの遺伝子発現はさらに大幅にアップレギュレートされていた。したがって、組み合わせ刺激はＩＬ１の抗炎症作用を拮抗する遺伝子に対する効果は、ＩＬ１Ｆ５（ｄＩＮ単独対ｄＩＮ＋ＣＰＧ）が（１．９対１．４９倍アップレギュレート）、ＩＬ１Ｒ２（１．３５倍対１．１１倍アップレギュレート）、およびＩＬ１ＲＮ（３．４７倍対２．９４倍アップレギュレート）であった。
さらにより驚くべきことに、イヌリン粒子とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰの組み合わせは、イヌリン粒子単独の抗炎症特性の一層の向上をもたらした。逆に、同じアッセイで、抗炎症作用に関連付けられている遺伝子は、一貫して上昇していた。したがって、抗炎症性遺伝子、ＰＰＡＲｇは、ＰＡＭＣＳＫ、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、ＬＰＳおよび他の試験したすべてのＴＬＲアゴニストととインキュベートしたＰＢＭＣにおいて一貫してダウンレギュレートされていたが、３人のヒト被験者のＰＢＭＣをｄＩＮ粒子とインキュベートすると平均で１．２４倍のアップレギュレートされた。
ヒトＰＢＭＣをＰＡＭＰ、またはイヌリン粒子と２４−４８時間インキュベーションした後、淡白レベルをサイトカインＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロット法で測定すると、同じおよび関連する炎症誘発性マーカーの蛋白レベルを測定すると一致する結果が得られた。
結果は、全粒子の生または不活化ウイルス（ＪＥＶ）または精製ＰＡＭＰｓと共にインキュベートしたヒトＰＢＭＣによるＩＬ−１を含むＰＡＭＰに刺激された炎症性サイトカインの発現がＰＢＭＣ培養にイヌリン粒子の存在下で減少することを示した。ｇＩＮおよびｅＩＮ粒子は、ＩＬ−１遺伝子および蛋白質の発現を阻害しＩＬ１およびＰＰＡＲγ経路の抗炎症メンバーの発現をアップレギュレートする能力においてｄＩＮに同一の効果を示し、試験したすべてのイヌリン粒子に一般化可能な特性と判明した。
ヒトＨ１Ｎ１２００９パンデミックインフルエンザワクチンの研究の一環として、ｄＩＮを組換えＨ１Ｎ１２００９ヘマグルチニン抗原（ｒＨＡ）と組み合わせ予防接種あたり２０ｍｇ用量でヒト被験者に投与した。頭痛の頻度は、ｒＨＡ単独（１５／１３７：１０．９％）に比べ、ＡｄｖａｘＴＭアジュバントを接種した被験者（４／１３７：２．９％）では有意に低かった（ｐ＜０．０５フィッシャーズ正確検定による）。二回目の免疫後もまた、ｒＨＡ単独（８／１３７：５．８％）に比べ、ＡｄｖａｘＴＭアジュバントを接種した被験者（２／１３５：１．５％）は、免疫後の頭痛の減少傾向（ｐ＝０．０６）があった。
頭痛の減少は、ＩＬ−１の血清レベルが頭痛群で上昇し、ＩＬ−１遺伝子多型（３９５３Ｃ／Ｔ）が片頭痛に関連付けられている（Ｍａｒｔｅｌｌｅｔｔｉ等、１９９３；Ｒａｉｎｅｒｏ等、２００２）から、イヌリン粒子が誘導したＩＬ−１産生阻害と一致するものであろう。このことは、ヒトでアジュバント効果が実証済みの用量でイヌリン粒子はまた抗炎症作用を持っていることを示す。
実施例１３
イヌリン粒子の良好な相乗効果はさらに他のＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤に一般化可能か否かを判断する為に、６−８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（一群ｎ＝５−１０）を、０．１μｇ／マウスのＴＬＲ２アゴニストＰａｍＣＳＫ４、２５μｇ／マウスのＴＬＲ３アゴニストＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、合成ＴＬＲ４アゴニストＭＰＬＡ、ＴＬＲ５アゴニストフラジェリン、０．０４μｇ／マウスのＴＬＲ６アゴニストＭＡＬＰ−２、２．５μｇ／マウスのＴＬＲ７アゴニストＰｏｌｙＵ、または２０μｇ／マウスのＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２００６のいずれかと混合した１μｇの組換え酵母Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）のみあるいは１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：３）と共に、１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。
マウスは、二回目の免疫の４２日後に採血し、抗ＨＢｓＡｇ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。ＨＢｓ抗原プラス各ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤のみの投与群は、低い抗ＨＢｓＡｇ総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗体を持っていた。これとは対照的に、各ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤プラスＰＤｍｉｘ投与群は、イヌリン粒子と試験したＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤の相乗効果と一貫した、抗ＨＢｓＡｇ総ＩｇＧ応答の顕著な向上を示した。
本明細書全体を通じて「含む」または「含むの複数形」や「含んでいる」などの派生用語は、記載の要素、整数またはステップまたはグループの要素、整数またはステップを含むだけでなく、任意の他の要素、整数もしくはステップまたはグループの要素、整数またはステップを排除するものではないことを理解されるべきである。
本明細書において言及された出版物は、引用により組み込まれる。任意の文書の議論、行為、材料、装置、物品、または本明細書に含まれているものは、本発明の文脈を提供する目的のためにのみ使用される。これらの事項のいずれかまたはすべてが、従来技術の基盤の一部を形成することを認めるものと解釈するか、各クレームの優先日前に、アメリカや他の場所に存在していたように、本発明に関連する分野で一般的な知識であったとされるべきではない。
広く記載された本発明の精神および範囲から逸脱することなく、具体的な実施形態に多数の変化および／または変更を加えることができることは当業者には理解されるであろう。本実施形態は、例示であり、限定的ではないようにすべての点で考慮されるべきである。
図１は、ＡからＤの４つのグラフからなりＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰＣｐＧ２００６が添加された三価のインフルエンザ・ワクチン（ＴＩＶ）のマウスにおける免疫原性を示し、ＣｐＧ含有ＴＩＶにイヌリン粒子が加えられた場合の相乗効果を浮き彫りにしている。６−８週齢（ｎ＝５−８／群）の雌のＢａｌｂ／ｃマウスを２、７、２０または６０μｇのＣｐＧ２００６単独または１ｍｇのＰＤｍｉｘ（１：５）との組み合わせと投与量当たり１００ｎｇのＨＡの市販のヒトＴＩＶの混合物５０ｕＬで、１４日間隔で二回筋肉内に免疫した。Ａ図はＥＬＩＳＡで測定した二回目の免疫の４２日後の抗インフルエンザ総ＩｇＧ抗体レベルを示し、Ｂ図は抗インフルエンザＩｇＭ抗体レベルを示し、Ｃ図は抗インフルエンザＩｇＧ１抗体レベルを示し、そしてＤ図は抗インフルエンザＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤとＳＤを示す。
図２は、ＡからＦの６つのグラフからなり新生児マウスのＴＩＶワクチンに対する免疫反応におよぼすＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰＣｐＧ１６６８とイヌリン粒子（ＰＤｍｉｘ１：３６）の相乗効果を示す。新生児ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５−７／群）は、１４日齢と２３日齢のときＴＩＶ（総ＨＡ淡白量１００ｎｇ）で筋肉内に免疫された。最後の接種の１４日後にＥＬＩＳＡで抗体を測定するために血清を収集した。
各群は、それぞれＴＩＶのみあるいはＰＤｍｉｘ１：３６（１ｍｇ）添加、ＣｐＧ１６６８（２０ｕｇ）添加、またはＰＤｍｉｘ（１ｍｇ）＋ＣｐＧ１６６８（２０ｕｇ）添加ＴＩＶで免疫された。図Ａは、ＴＩＶ＋ＰＤｍｉｘ＋ＣｐＧ（各図の最後のカラム）で免疫された群が、有意に高い抗インフルエンザ総ＩｇＧを得たことを示し、図Ｂはより高いＩｇＭを、図Ｃはより低いＩｇＧ１を、図Ｄはより高いＩｇＧ２ａを、図Ｅは、より高い抗インフルエンザＣＤ４＋Ｔ細胞をそして図Ｆは、より高い抗インフルエンザＣＤ８＋Ｔ細胞免疫反応を示す。
図３は、ＡからＤの４つのグラフからなり３価の不活化インフルエンザ・ワクチンで１４日間隔で二度筋注で免疫された２００−３００日齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）から得た血清中の抗インフルエンザＩｇＭ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ１、および総ＩｇＧをＥＬＩＳＡで測定した抗体反応を示す。図Ａは、二回目の免疫の４２日後にＥＬＩＳＡで測定した抗インフルエンザ総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗インフルエンザＩｇＭ抗体レベルを、図Ｃは抗インフルエンザＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｄは抗インフルエンザＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。イヌリン粒子（ＰＤｍｉｘ）とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰ（ＣｐＧ２００６）を添加した群が最も高い抗インフルエンザ抗体価を達成した。
図４は、ＡからＤの４つのグラフからなりイヌリン粒子ＰＤｍｉｘのみまたは様々はＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰｓとで組成された３価のインフルエンザ・ワクチン（ＴＩＶ）のマウスにおける免疫原性を示す。図Ａは、二回目の免疫の２８日後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗インフルエンザ総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗インフルエンザＩｇＭ抗体レベルを、図Ｃは抗インフルエンザＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｄは抗インフルエンザＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。ＴＩＶとＰＤｍｉｘおよびＣｐＧ１６６８、ＣｐＧ２００６またはＣｐＧ２３９５の同時投与はすべて相乗効果を示し、ここに投与した場合に比べより高い抗インフルエンザ総ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗体価を示した。ＣｐＧ２２１６およびＣｐＧ２２３７は抗体反応に効果がなかった。
図５は、ＡからＤの４つのグラフからなり二種類のイヌリン粒子（ｄＩＮまたはＰＤｍｉｘ）のいづれかとＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ１６６８で組成された狂犬病ワクチン（ＭＩＲＶ）のマウスにおける免疫原性を示す。図Ａは、二回目の免疫の１４日後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗狂犬病総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗狂犬病ＩｇＭ抗体レベルを、図Ｃは抗狂犬病ＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｄは抗狂犬病ＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。ｄＩＮまたはＰＤｍｉｘおよびＣｐＧ１６６８を添加したＭＩＲＶが最も高い抗狂犬病総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗体をもたらした。
図６は、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの４つのグラフからなりイヌリン粒子組成ＰＤｍｉｘのみあるいはＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰ ＣｐＧ２００６との比較で様々なＴＬＲ２アゴニストＰＡＭＰｓ（ｚｙｍｏｓａｎ，ＬＴＡ，Ｌｉｐｏｍａｎｎａｎ ａｎｄ ＰａｍＣＳＫ４）で組成された３価のインフルエンザ・ワクチン（ＴＩＶ）のマウスにおける免疫原性を示す。図Ａは、二回目の免疫の１４日後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗インフルエンザ総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗インフルエンザＩｇＭ抗体レベルを、図Ｃは抗インフルエンザＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｄは抗インフルエンザＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。
図７は、Ａ、Ｂ、Ｃの３つのグラフからなりＴＩＶワクチンのマウスにおける免疫原性に対するイヌリン粒子と様々なＰＡＭＰｓの望ましい免疫増強効果を示す。図Ａは、二回目の免疫の４２日後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗インフルエンザ総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗インフルエンザＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｃは抗インフルエンザＩｇＧ２ａ抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。
図８は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ，Ｆの６つのグラフからなり組換えパンデミック・インフルエンザ・ワクチンｒＨ５のマウスにおける免疫原性に対するイヌリン粒子（ｄＩＮ）とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰ ＣｐＧ２００６の組み合わせによる望ましい免疫増強と抗原節約に対する効果を示す。
６−８週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝５−８）は、３ｎｇから３μｇの組換えインフルエンザＨ５（ｒＨ５）血清型のＨＡ蛋白質（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＵＳＡ）と１ｍｇのｄＩＮあるいは１ｍｇのｄＩＮと５μｇのＣｐＧ２００６で組成したワクチン５０μｌで２１日間隔で二度筋注で免疫された。図Ａは、二回目の免疫の１４日後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗Ｈ５総ＩｇＧ抗体レベルを、図Ｂは抗Ｈ５ＩｇＭ抗体レベルを、図Ｃは抗Ｈ５ＩｇＧ１抗体レベルを、図Ｄは抗Ｈ５ＩｇＧ２ａ抗体レベルを、図Ｅは、抗Ｈ５ＩｇＧ２ｂ抗体レベルを、図Ｆは、抗Ｈ５ＩｇＧ３抗体レベルを示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。
図９は、ＡおよびＢの２つのグラフからなりイヌリン粒子（ｄＩＮ）とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰ ＣｐＧ２００６の組み合わせがＨ１Ｎ１ ＰＲ８ワクチンと共に致死量のＰＲ８ウイルス感染に対するマウスの生存に対する望ましい免疫増強効果を示す。図Ａは、Ｈ１Ｎ１ ＰＲ８ワクチンと共にイヌリン粒子（ｄＩＮ）とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰＣｐＧ２００６の組み合わせで免疫されたマウスが体重減少と臨床症状無く完璧に防御され、Ｃｐｇを含まないＰＲ８＋ｄＩＮは部分的防御のみを得たことを示す。図Ｂもまた、別の実験でＨ１Ｎ１ ＰＲ８ワクチンと共にイヌリン粒子（ｄＩＮ）とＴＬＲ９アゴニストＰＡＭＰＣｐＧ２００６の組み合わせで免疫されたマウスは死を逃れ、ＰＲ８＋ＣｐＧ群は防御しなかったことを示す。
図１０は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄの４つのグラフからなり、追加免疫時（攻撃の２１日前）および追加免疫後１４日（攻撃の７日前）の時点の赤血球凝集阻止（ＨＩ）抗体価とマイクロ中和（ＭＮＴ）抗体価を示す。Ｈ５Ｎ１抗原がインリン粒子プラスＴＬＲ９アゴニストで組成されたときの反応と一致し、二回のＡｄ２添加Ｈ５Ｎ１で免疫されたフェレットは、最も高い中和抗体価を示した。
図１１は、Ａｄ１またはＡｄ２アジュバント添加Ｈ５Ｎ１ワクチンで免疫されたフェレットがＨ５Ｎ１の致死的攻撃後の増大した（１００％）生存率を、Ａｄ２＋２２．５μｇＨ５Ｎ１ワクチンで一回目免疫された群と共に示す。１０群は、それぞれ生存率：ワクチン量（または生理食塩水）＋アジュバント組成（または生理食塩水）で表される。５つのアジュバント添加群の生存率は、２つのアジュバント非添加ワクチン群（Ｌｏｇ−Ｒａｎｋテストｐ＝０．０５）および３つの非ワクチン対照群（Ｌｏｇ−Ｒａｎｋテストｐ＜０．００１）より統計学的に有意に高かった。
図１２は、７つのグラフでＨ５Ｎ１ウイルスで攻撃された免疫されたフェレットの各群の平均体重変化を示す。Ａｄ２添加Ｈ５Ｎ１の２回接種で免疫されたフェレットは、Ｈ５Ｎ１抗原がインリン粒子プラスＴＬＲ９アゴニストで組成されたときの増大した防御と一致し、まったく体重を減少しなかった。
図１３は、７つのグラフでＨ５Ｎ１ウイルスで致死的に攻撃された免疫されたフェレットの各群の平均体温変化を示す。Ａｄ１（イヌリン粒子のみ）添加ワクチン群の４匹のフェレットが発熱を示したが、Ｈ５Ｎ１抗原がインリン粒子プラスＴＬＲ９アゴニストで組成されたときの増大した防御と一致し、Ａｄ２（イヌリン粒子＋ＣｐＧ）添加ワクチン群のすべてのフェレットが発熱しなかった。
図１４は、３つのグラフで、ｇＩＮ、ｄＩＮあるいはｅＩＮのすべてが、異なる多形形態のイヌリン粒子の共通特性として、ＰＡＭＰ病原体関連分子パターン剤と相乗効果を持つことと一致して、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＭ抗ＨＢｓＡｇ抗体の誘導にＣｐＧとの相乗増強効果を持つことを示す。成体Ｂａｌｂ／ｃマウスは、ＨＢｓ抗原とｇＩＮ、ｄＩＮあるいはｅＩＮイヌリン粒子単独あるいはＴＬＲ９ ＰＡＭＰ、ＣｐＧ２００６と共に筋注で２１日間隔で２回免疫された。図Ａは、２度目の免疫後にＥＬＩＳＡで測定した血清中の抗ＨＢｓＡｇ ＩｇＧ１抗体価を、図Ｂは、血清中の抗ＨＢｓＡｇ ＩｇＧ２ａ抗体価を、図Ｃは、血清中の抗ＨＢｓＡｇ ＩｇＧＭ抗体価を示す。各群の平均ＯＤ＋ＳＤを示す。

Claims (31)

  1. 個体の炎症反応の軽減または阻止および／または炎症性疾患の治療または予防に用いるイヌリン粒子で構成されるまたはイヌリン粒子からなる組成物。
  2. 請求項１記載の組成物であって、イヌリン粒子と別々に、同時にまたは順次投与され、個体はまた炎症促進物質または組成物も投与された場合、個体の炎症促進物質または組成物に対する炎症反応の軽減または抑制に用いるイヌリン粒子で構成されるまたはイヌリン粒子からなる組成物。
  3. 請求項２記載の組成物であって、炎症促進物質または組成物が病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）で構成あるいは組成される物質とイヌリン粒子から成り、個体のＰＡＭＰに対する炎症反応を軽減または阻止するために用いられる組成物。
  4. 請求項２または３記載の組成物であって、イヌリン粒子と炎症促進物質からなる組成物が両者の混合物として個体に単回投与される組成物。
  5. 請求項１〜４のいずれか一項記載の組成物であって、イヌリン粒子で構成またはイヌリン粒子からなる組成物が炎症促進物質または請求項２または３記載の組成物さらに抗原またはアレルゲンから成る組成物。
  6. 薬理学的に許容される下記で構成される組成物。
    （ａ）イヌリン粒子
    （ｂ）一つあるいはそれ以上であって１０種類を超えない病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）
    （ｃ）抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、蛋白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、遺伝子組換えウイルスベクター、微生物またはウイルス粒子のうち一つ以上
  7. （ａ）イヌリン粒子で構成されるまたはイヌリン粒子からなる組成物を含む容器および
    （ｂ）病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）で構成あるいは組成される物質を含む第２の容器で構成されるキット。
  8. 病原体関連分子パターンＰＡＭＰが、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＲＩＧ−Ｉ様受容体、ＮＯＤ様受容体、Ｃ型レクチン受容体、補体受容体、Ｆｃ受容体、スカベンジャー受容体、ＲＮＡヘリケース受容体またはＮＡＬＰの内一つまたはそれ以上のアゴニストからなる請求項１〜６に記載の組成物または請求項７記載のキット。
  9. 病原体関連分子パターンＰＡＭＰが、リポテイコ酸、リボ核酸、デオキシリボ核酸、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、あるいは非メチル化ポリヌクレオチドの内一つまたはそれ以上からなる請求項１〜６または８に記載の組成物または請求項７または８記載のキット。
  10. イヌリン粒子がガンマ・イヌリン、デルタ・イヌリンおよびエプシロン・イヌリンまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含むこれらのイヌリンにより構成あるいは組成される請求項１〜６、８または９に記載の組成物または請求項７〜９に記載のキット。
  11. イヌリン粒子および／または請求項４あるいはそれに付随する項に記載の炎症促進物質および／または請求項７あるいはそれに付随する項に記載の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）更には抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、蛋白質、抗原、アレルゲン、ポリヌクレオチド分子、遺伝子組換えウイルスベクター、微生物またはウイルス粒子のうち一つ以上からなる請求項１〜６または８〜１０に記載の組成物または請求項７〜１０記載のキット。
  12. イヌリン粒子が異なる２種類以上の多形態粒子および／または抗原結合担体を含む粒子で構成または組成される請求項１〜６、８〜１１に記載の組成物または請求項７〜１１に記載のキット。
  13. 請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物の治療的有効量を個体に投与し個体に免疫反応を誘導または調整する方法。
  14. 個体に免疫反応を誘導または調整するために使用する請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物。
  15. イヌリン粒子を含まない同等の組成物と比較して、産生速度、特異性、強度および／または獲得免疫反応の持続性および／または免疫反応の型について免疫反応を調整する請求項１３に記載の方法または請求項１４に記載の組成物。
  16. 例えば自然免疫と獲得免疫のバランスの調整、免疫記憶反応の増強、他の反応と比較してＴｈ１、Ｔｈ２またはＴｈ１７反応のいずれか一つ以上を増強、ＩｇＥの抑制あるいはＩｇＭ、ＩｇＡまたはＩｇＧのいずれか一つ以上を増強することによる免疫反応の型を修飾する請求項１５に記載の方法あるいは組成物。
  17. 請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物および抗原更には抗原結合担体を含む組成物の治療的有効量を個体に投与し抗原に対する免疫反応を調整する方法。
  18. 組成物が抗原更には抗原結合担体を含む請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物。
  19. 請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物および抗原更には抗原結合担体を含む組成物の治療的有効量を個体に投与し個体を免疫する方法。
  20. ワクチンとして使用する抗原更には抗原結合担体を含む請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物。
  21. 請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物および抗原更には抗原結合担体を含む組成物の治療的有効量を個体に投与する個体のアレルゲン減感作法。
  22. 個体のアレルゲン減感作療法に使用する請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物およびアレルゲン更にはアレルゲン結合担体を含む組成物。
  23. 抗原と更には抗原結合担体と請求項６またはそれに付随するすべての請求項に記載の組成物（ａ）および（ｂ）を混合する段階を含むワクチンの製造方法。
  24. 請求項６またはそれに付随するすべての請求項に記載の組成物を用いたワクチンアジュバント。
  25. 請求項６またはそれに付随する請求項８〜１２に記載の組成物および抗原更には抗原結合担体を含む組成物からなる単回投与ワクチン。
  26. 請求項２５に記載の個体を単回投与ワクチンで免疫する方法。
  27. 請求項２５に記載の個体に単回投与するワクチン。
  28. 個体がヒトである請求項１〜５、１４、１６、１８、２０、２２に記載の組成物、請求項２７に記載の単回投与ワクチンあるいは請求項１３、１５、１６、１７、１９、２１または２６いづれかに記載の方法。
  29. 個体がヒトの子供、たとえば１８歳以下、１０歳以下、８歳以下、６歳以下、４歳以下、２歳以下、１歳以下、１０ヶ月以下、８ヶ月以下、６ヶ月以下、４ヶ月以下、２ヶ月以下あるいは１ヶ月以下である請求項２８に記載の組成物、単回投与ワクチンあるいは方法。
  30. 個体がヒト、少なくとも４０歳、５０歳、６０歳、７０歳、８０歳または９０歳である請求項２８に記載の組成物、単回投与ワクチンあるいは方法。
  31. 個体が妊婦である請求項２８に記載の組成物、単回投与ワクチンあるいは方法。
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