JP2014518063A - リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 - Google Patents
リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014518063A JP2014518063A JP2014513625A JP2014513625A JP2014518063A JP 2014518063 A JP2014518063 A JP 2014518063A JP 2014513625 A JP2014513625 A JP 2014513625A JP 2014513625 A JP2014513625 A JP 2014513625A JP 2014518063 A JP2014518063 A JP 2014518063A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- modified
- peptide
- lysosomal enzyme
- igf
- recombinant human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 271
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 271
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 title claims abstract description 256
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 114
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 35
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 title claims description 22
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 title description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 11
- 230000008878 coupling Effects 0.000 title description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 title description 9
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 claims abstract description 157
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 40
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 38
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 16
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 claims abstract 59
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 claims abstract 10
- 101001018026 Homo sapiens Lysosomal alpha-glucosidase Proteins 0.000 claims description 99
- 102000045921 human GAA Human genes 0.000 claims description 99
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 80
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 69
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 55
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 claims description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 37
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 37
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 36
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 32
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000002641 enzyme replacement therapy Methods 0.000 claims description 28
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 22
- LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoate Chemical compound C=1C=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 108010090665 Mannosyl-Glycoprotein Endo-beta-N-Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 claims description 19
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 19
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 19
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 19
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 16
- 108010045758 lysosomal proteins Proteins 0.000 claims description 15
- IELMMGIVWJNLEX-UHFFFAOYSA-N 3,3-difluorocyclooctyne Chemical compound FC1(F)CCCCCC#C1 IELMMGIVWJNLEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 13
- 208000022018 mucopolysaccharidosis type 2 Diseases 0.000 claims description 13
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ZUHQCDZJPTXVCU-UHFFFAOYSA-N C1#CCCC2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 Chemical compound C1#CCCC2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZUHQCDZJPTXVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 208000025919 mucopolysaccharidosis type 7 Diseases 0.000 claims description 12
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims description 12
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 11
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 claims description 11
- 201000008333 alpha-mannosidosis Diseases 0.000 claims description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 10
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims description 10
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 101000895926 Streptomyces plicatus Endo-beta-N-acetylglucosaminidase H Proteins 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 9
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 9
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 9
- 208000032007 Glycogen storage disease due to acid maltase deficiency Diseases 0.000 claims description 8
- 206010053185 Glycogen storage disease type II Diseases 0.000 claims description 8
- 102100033448 Lysosomal alpha-glucosidase Human genes 0.000 claims description 8
- 208000026589 Wolman disease Diseases 0.000 claims description 8
- 201000004502 glycogen storage disease II Diseases 0.000 claims description 8
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 claims description 7
- 101710124976 Beta-hexosaminidase A Proteins 0.000 claims description 6
- 101710124978 Beta-hexosaminidase B Proteins 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 6
- 108010017544 Glucosylceramidase Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004547 Glucosylceramidase Human genes 0.000 claims description 6
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims description 6
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 5
- 102100022548 Beta-hexosaminidase subunit alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 208000001905 GM2 Gangliosidoses Diseases 0.000 claims description 4
- 201000008905 GM2 gangliosidosis Diseases 0.000 claims description 4
- 101001045440 Homo sapiens Beta-hexosaminidase subunit alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 4
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 claims description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 4
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 4
- VDVAKFCNFMDCPL-UHFFFAOYSA-N 1-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)-6-hydrazinyl-2H-pyridine-3-carboxylic acid propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.NNC1=CC=C(CN1N1C(=O)CCC1=O)C(O)=O VDVAKFCNFMDCPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 2
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 2
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 claims 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FDIMUIWBMRZNCG-UHFFFAOYSA-N C(=O)C1=CC=C(C(=O)O)C=C1.FC=1C(=C(C(=C(C1)F)F)F)F Chemical compound C(=O)C1=CC=C(C(=O)O)C=C1.FC=1C(=C(C(=C(C1)F)F)F)F FDIMUIWBMRZNCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000027933 Mannosidase Deficiency disease Diseases 0.000 claims 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 102100037182 Cation-independent mannose-6-phosphate receptor Human genes 0.000 abstract description 39
- 101710145225 Cation-independent mannose-6-phosphate receptor Proteins 0.000 abstract description 39
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 abstract description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 6
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 291
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 194
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 111
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 54
- 229940068935 insulin-like growth factor 2 Drugs 0.000 description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 29
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 29
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 27
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 23
- NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N D-Mannose-6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- -1 succinimidyl Chemical group 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 14
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 12
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 12
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 12
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 12
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 12
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical group OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000028416 insulin-like growth factor binding Human genes 0.000 description 10
- 108091022911 insulin-like growth factor binding Proteins 0.000 description 10
- 230000018883 protein targeting Effects 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101000585728 Homo sapiens Protein O-GlcNAcase Proteins 0.000 description 8
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 7
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 6
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- MSMWPOJJYXSZOE-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)-4-formylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C=O)C=C1N1C(=O)CCC1=O MSMWPOJJYXSZOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JYHIQJZRAUFBQS-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)-6-hydrazinylpyridine-3-carboxylic acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.NNC1=CC=C(C(O)=O)C(N2C(CCC2=O)=O)=N1 JYHIQJZRAUFBQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 5
- 101100491597 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) arg-6 gene Proteins 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N cyclooctyne Chemical group C1CCCC#CCC1 ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 5
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000962729 Dictyostelium discoideum Lysosomal alpha-mannosidase Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000997662 Homo sapiens Lysosomal acid glucosylceramidase Proteins 0.000 description 4
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 4
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 4
- IBTWUVRCFHJPKN-UHFFFAOYSA-N hydron;pyridine-3-carboxylic acid;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C1=CC=CN=C1 IBTWUVRCFHJPKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 4
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- GFKSKVCFBACPGK-UHFFFAOYSA-N terephthalic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 GFKSKVCFBACPGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SYGQYQGDQAUORG-UHFFFAOYSA-N 3-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]-1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1N(O)C(=O)CC1(S(O)(=O)=O)C(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 SYGQYQGDQAUORG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 3
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 3
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 3
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005597 hydrazone group Chemical group 0.000 description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 3
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 101100342815 Caenorhabditis elegans lec-1 gene Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010076818 TEV protease Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 241000723792 Tobacco etch virus Species 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 2
- MBOBEQIPNVBHFP-UHFFFAOYSA-N azidophosphane Chemical compound PN=[N+]=[N-] MBOBEQIPNVBHFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 150000003587 threonine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical class [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- YXYNQBMRGUWGKO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-hydrazinylpyridine-3-carboxylate;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.C1=NC(NN)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O YXYNQBMRGUWGKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYODNFCNVXOLKR-UHFFFAOYSA-N 1-(6-hydrazinylpyridine-3-carbonyl)oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.C1=NC(NN)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O UYODNFCNVXOLKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLDBMPMWBVTYGW-AIDJSRAFSA-N 2-aminoacetic acid (2S)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(O)=O.NCC(O)=O.NCC(O)=O.NCC(O)=O.OC[C@H](N)C(O)=O KLDBMPMWBVTYGW-AIDJSRAFSA-N 0.000 description 1
- DYNFCHNNOHNJFG-UHFFFAOYSA-N 2-formylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C=O DYNFCHNNOHNJFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOUZWQLNUJWNIA-UHFFFAOYSA-N 2-hydrazinylpyridine-3-carboxamide Chemical compound NNC1=NC=CC=C1C(N)=O KOUZWQLNUJWNIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical class C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022622 Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- YHTYEFFNNDGFED-UHFFFAOYSA-N CC(=O)CN(C(=O)C1=CN=C(C=C1)NN)N2C(=O)CCC2=O Chemical compound CC(=O)CN(C(=O)C1=CN=C(C=C1)NN)N2C(=O)CCC2=O YHTYEFFNNDGFED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000972916 Homo sapiens Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 208000002678 Mucopolysaccharidoses Diseases 0.000 description 1
- 102100039267 N-acetylglucosamine-1-phosphodiester alpha-N-acetylglucosaminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010040066 N-acetylglucosamine-1-phosphodiester alpha-N-acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 208000010577 Niemann-Pick disease type C Diseases 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000007930 Type C Niemann-Pick Disease Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 108010056760 agalsidase beta Proteins 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- HUMNYLRZRPPJDN-KWCOIAHCSA-N benzaldehyde Chemical group O=[11CH]C1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-KWCOIAHCSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 208000020450 carbohydrate metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229940014516 fabrazyme Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000007345 glycogen storage disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 206010028093 mucopolysaccharidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940103023 myozyme Drugs 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 1
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000004844 protein turnover Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 150000003679 valine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6847—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a hormone or a hormone-releasing or -inhibiting factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
- C07K1/306—Extraction; Separation; Purification by precipitation by crystallization
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/65—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
【選択図】図1
Description
[0001]本出願は、その全てが参考文献として本明細書中に援用される2011年5月27日に出願された米国特許仮出願61/490,957の利益を主張するものである。
[0002]技術の分野は、ペプチド化学に関連する。技術分野は、更にリソソーム蓄積症の治療におけるリソソームへの組換えリソソーム酵素のターゲティングに関する。
[0010]本明細書中で提供されるものは、組換えヒトリソソーム酵素上のアミノ(N)末端及び一つ又はそれより多いリシン残基を、第1の架橋剤を使用して修飾して、第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を得ること、変異型IGF−2ペプチド上のアミノ(N)末端における短い伸長リンカーの第1アミノ酸を、第2の架橋剤を使用して修飾して、第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを得ること、そして次いで第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドに結合させること、を含んでなる、組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法である。
[0015]組換えヒトリソソーム酵素に結合されたヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを含んでなる複合体も、提供される。
[0021]更に本明細書中に提供されるものは、配列番号:2を含んでなる、変異型IGF−2ペプチドを表すアミノ酸配列である。
図面の簡単な説明
[0023]前記の及び他の本発明の側面は、付属する図面と関連して考慮される場合、本発明の以下の詳細な説明から明白である。本発明を例示する目的で、現時点で好ましい態様が図面に示されているが、然しながら、本発明が、特定の開示された手段に制約されるものではないことは理解されるものである。図面は、必ずしも寸法通りではない。図中:
[0045]第1の架橋剤(NHS−PEG4−アセチレン)で修飾された組換えヒトリソソーム酵素の、第2の架橋剤(NHS−PEG4−アジド)で修飾された短いリンカーを含有する変異型IGF−2ペプチドへの、pH約5.0の酸性緩衝液中での結合は、銅(Cu+1)の存在下で行うことができる。この結合工程後、組換えヒトリソソーム酵素で修飾された短いリンカーを含有する変異型IGF−2ペプチド複合体の精製工程を、サイズ排除クロマトグラフィー又は透析を使用して行うことができる。
[0058]化学的架橋法を、各種のリソソーム蓄積症(LSD)の治療のための新規な、そして優れたERTを開発するために、変異型ヒトIGF−2ペプチドをリソソーム酵素に結合させるために使用する。この戦略は、IGF−2/CI−MPRに対するIGF−2ペプチド結合ERTの結合親和性を増加させ、そしてこれらの組換え酵素の細胞取込み及びリソソームへの送達を改善することが期待される。このようにすることによって、これらのIGF−2ペプチド結合ERTは、影響された細胞中に蓄積された物質の排除において、より有効であることが期待される。
[0062]殆どの哺乳動物細胞製造系から誘導される組換えヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)は、主として複合型N−グリカンを伴う非常に低い量のM6Pを含有し、これは、IGF−2/CI−MPRへのrhGAAの高い親和性結合のために十分ではない。このN−グリカンプロファイルは、血清タンパク質のそれに類似し、そして従って、rhGAAが、血液循環中で好ましい薬物動態学的プロファイル(即ち、遅いクリアランス)を有することを可能にする。従って、rhGAAは、修飾されたIGF−2ペプチドへの結合のために使用することができ、優れたrhGAAのERTを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのためにIGF−2/CI−MPRに対するその親和性を増加させることができる。具体的には、rhGAAを、8−10mg/mlのタンパク質濃度まで濃縮し、そして第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム、pH7.3/100mM NaCl)中に交換し、そしてその後、12ないし20倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤スクシンイミジル6−ヒドラジノニコチン酸アセトン(S−Hynic)で、室温で約30分間で修飾することができる。この反応において、S−Hynicからの化学的に反応性のN−ヒドロキシスクシンイミドエステル(NHS)基は、アミノ(N)末端の第1アミノ酸残基のα−アミノ基及びrhGAA上のリシンのε−アミノ基と反応して、新規な化学的に活性なヒドラジド基をこれらの修飾されたアミノ酸残基に導入する。次いでS−Hynicで修飾されたrhGAAは、過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去し、そして酵素活性を保存するために、サイズ排除クロマトグラフィー又は透析により、酸性の緩衝液(例えば、50mM NaOAc、pH4.8/100mM NaCl/0.05% ポリソルベート−80)中に急速に交換される。この化学反応は、S−HynicとrhGAAの比を理解するために、様々な量のHynic(例えば、5−40倍のモル過剰)で滴定し、これは、rhGAA上に1−4個の化学的に活性なヒドラジド基を再現性良く得ることができる。次いで最適条件をrhGAAのS−Hynic修飾反応をスケールアップするために使用する。
[0064]哺乳動物製造系から誘導された組換えヒト酸性αグルコシダーゼ(rhGAA)を、変異型IGF−2ペプチドに結合するために使用し、優れたrhGAAのERTを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのためにIGF−2/CI−MPRに対する親和性を増加させる。具体的には、シュタウジンガーライゲーション(アジド−ホスフィン)反応化学を使用して、改善された薬物ターゲティングのためのIGF2ペプチド−rhGAA複合体を産生するために、IGF2ペプチドをrhGAAにカップリングする。この実施例において、rhGAA(5−10mg/mlにおいて)を、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム(pH7.3)/100mM NaCl)中に交換し、そしてその後、10ないし20倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤スルホ−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン(スルホ−NHS−ホスフィン)で、約30分間室温で修飾する。この化学反応において、スルホ−NHS−ホスフィンからの化学的に反応性のNHS基は、rhGAA上のN−末端の第1アミノ酸残基のα−アミノ基及びリシンのε−アミノ基と反応して、新規な化学的に活性なホスフィン基を、これらの修飾されたアミノ酸残基に導入する。次いでホスフィン含有rhGAAを、僅かに酸性の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム、pH6.5/100mM NaCl)中に、サイズ排除クロマトグラフィー又は透析により急速に交換して、過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去し、そして酵素活性を保存する。この化学反応は、スルホ−NHS−ホスフィンのrhGAAに対する比を理解するために、様々な量のスルホ−NHS−ホスフィン(例えば、5−40倍モル過剰)で滴定することができ、これは、rhGAA上の1−4個の化学的に活性なホスフィン基を再現性良く得る。最適な条件は、rhGAAのスルホ−NHS−ホスフィン修飾反応をスケールアップするために使用することができる。
[0067]哺乳動物製造系から誘導された組換えヒト酸性イズロニデート2−スルファターゼ(I2S)を、変異型IGF−2ペプチドへの結合のために使用し、優れたI2SのERTを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのために、IGF−2/CI−MPRに対する酵素親和性を増加させる。具体的には、シュタウジンガーライゲーション(アジド−ホスフィン)反応化学を使用して、改善された薬物ターゲティングのためのIGF−2ペプチド−I2S複合体を産生するために、変異型IGF2ペプチドをI2Sにカップリングする。この実施例において、I2S(概略3mg/mlにおいて)を、20倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤スルホ−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン(スルホ−NHS−ホスフィン)で、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム/100mM NaCl、pH7.3)中で、約30分間室温で修飾する。この化学反応において、スルホ−NHS−ホスフィンからの化学的に反応性のNHS基は、I2S上のN−末端における第1アミノ酸残基のα−アミノ基及びリシンのε−アミノ基と反応して、新規な化学的に活性なホスフィン基をこれらの修飾されたアミノ酸残基に導入する。次いでホスフィン含有I2Sは、サイズ排除クロマトグラフィー又は透析により、僅かに酸性の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム、pH6.5/100mM NaCl)中に急速に交換されて、過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去し、そして酵素活性を保存する。この化学反応は、I2Sに対するスルホ−NHS−ホスフィンの比を理解するために、様々な量のスルホ−NHS−ホスフィン(例えば、5−40倍のモル過剰)で滴定することができ、これは、I2S上に1−4個の化学的に活性なホスフィン基を再現性良く得る。最適な条件は、I2Sのスルホ−NHS−ホスフィン修飾反応をスケールアップするために使用することができる。
[0070]哺乳動物製造系から誘導された組換えヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)を、修飾IGF−2ペプチドへの結合のために使用して、優れたrhGAAのERTを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのために、IGF−2/CI−MPRに対する親和性を増加させる。この実施例において、N−末端にシステイン残基を伴う短い伸長リンカー領域を含有する[del(1−4)、Arg6、Leu27、Arg65]IGF−2のような変異型IGF−2ペプチドを、ヘテロ二官能性架橋剤m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル(MBS)で、pH約6で、30−60分間室温で修飾する。この反応において、MBSからの化学的に反応性のマレイミド基は、N−末端システインからの遊離のスルフヒドリル基と反応し、一方、rhGAAにカップリングするためにN−ヒドロキシスクシンイミドエステル反応性基を保存する。MBS修飾IGF−2ペプチドを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって急速に精製して、過剰のMBSを除去する。次いでrhGAAを、MBS修飾IGF−2ペプチドへのカップリングのために、pH7.3のアミン非含有緩衝液中で30分間室温で加える。この化学反応において、化学的に反応性のN−ヒドロキシスクシンイミドエステル基(MBS修飾IGF−2ペプチドから)は、rhGAA上のN−末端の第1アミノ酸残基のα−アミノ基及びリシンのε−アミノ基と反応して、安定な共有結合を形成する。この反応を、様々な量のMBS修飾IGF−2ペプチド(例えば、1−20倍のモル過剰)を使用して滴定し、rhGAA上に1−4個のIGF−2ペプチドをカップリングさせるための、MBS修飾IGF−2ペプチドのモル過剰を決定する。次いで最適なカップリング条件を、この方法をスケールアップするために使用する。IGF−2結合rhGAAを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって精製して、過剰のIGF−2ペプチドを除去し、そして酸性のpHの緩衝液(0.1Mクエン酸ナトリウム、pH5.5緩衝液)中で保存する。
[0071]高マンノース型N−グリカン構造を伴うrhGAAのような組換えヒトリソソーム酵素(酵母、GNT−1欠失Lec1哺乳動物細胞、等に由来する)を変異型IGF−2ペプチドへの結合のために使用して、優れたrhGAAのERTを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのために、IGF−2/CI−MPRに対する親和性を増加させることができる。この実施例において、rhGAA(8−10mg/mlにおいて)を、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム(pH7.3)/100mM NaCl)中に交換し、そしてその後、N−スクシンイミジル6−ヒドラジノニコチン酸アセトン(S−Hynic)のようなヘテロ二官能性架橋剤で、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液(例えば、50mMリン酸ナトリウム/0.1M NaCl、pH7.3)中で、30分間室温で修飾する。次いでヒドラジド修飾rhGAAを、酸性の緩衝液(例えば、50mM NaOAc、pH4.8/100mM NaCl/0.05%ポリソルベート−80)中に、サイズ排除クロマトグラフィー又は透析により急速に交換して、過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去し、そして酵素活性を保存する。
[0077]IGF−2/CI−MPR受容体結合アッセイを、リソソーム酵素rhGAA及びI2Sに対する受容体親和性に対するIGF−2ペプチドの化学結合の影響を評価するために使用した。このアッセイは、未結合のリソソーム酵素が処理中に洗い流されるため、IGF−2/CI−MPRに対する高い結合親和性を伴うリソソーム酵素を、低ないし中程度の結合を伴うものと区別するために設計される。更に、リソソーム酵素の様々なタンパク質濃度が結合を評価するために使用されるために、このアッセイは、それぞれのリソソーム酵素調製物に対する結合親和性を推定するために使用することができる結合性受容体のために必要なタンパク質濃度を決定することができる。具体的には、非修飾リソソーム酵素及びIGF2ペプチド結合リソソーム酵素を、40mM HEPES(pH6.7)/150mM NaCl/10mM EDTA中に段階希釈し、そして次いでIGF2/CI−MPR受容体で被覆された96ウェルのELISAプレート(ウェル当たり50μlのリン酸緩衝生理食塩水中の6μg/mlの受容体;次いでリン酸緩衝生理食塩水中の2%BSAでブロッキング)中で、1時間30℃でインキュベートした。その後、プレートを、0.1%のTween−20を含有する同じ緩衝液で3回洗浄して、未結合のタンパク質を除去した。次いで結合したリソソーム酵素を、酵素活性によって、アッセイ緩衝液(50mM NaOAc、pH4.8/2% BSA/0.02% TritonX−100)中の適当な蛍光発生基質(例えば、rhGAAに対して、4−メチルウンベリフェリル−α−D−グルコピラノシド(4−MU−α−Glc))を使用して、37℃で1時間測定した。次いで試料を新しい96ウェルプレートに移し、0.1M NaOHを加えて、溶液のpHを概略10.5に上げ、そしてプレートを、適当な励起及び放射波長(即ち、4−MUに対して370nm励起及び460nm放射)で蛍光プレートリーダーで読取った。本発明者等の結果は、図6Aに示すように、試験された全てのタンパク質濃度において、非結合のrhGAAよりはるかに高い量の結合した酵素活性がvIGF−2rhGAAについて観察されたことを示す。vIGF2−rhGAAのIGF2/CI−MPRプレートに対する結合は、遊離のWTヒトIGF2ペプチドの包含によって有意に減少し、この結合がIGF2ペプチドに依存性であったことを示した。はるかに高い量の遊離のWTヒトIGF2ペプチドが、IGF2/CI−MPRに対するvIGF2−rhGAAの完全な遮断のために必要である可能性がある。I2Sに対するIGF2ペプチドの化学的結合も、IGF2/CI−MPRに対するこの酵素の結合親和性を実質的に増加させることが示された(図7A)。更に、同様な量の結合したI2S活性が、IGF2ペプチド結合I2S(vIGF2−I2S)に対して1及び3μg/mlで観察され、これは、受容体結合が飽和したことを示す。
[0080]外因性リソソーム酵素の細胞取込みに対するIGF2ペプチドの機能的影響を評価するために、IGF2結合rhGAA(vIGF2−rhGAA)の内部移行を、L6ラットの骨格筋筋芽細胞中で評価した。簡単には、L6筋芽細胞を、T−75フラスコ中でコンフルエンスまで、10%の胎児ウシ血清(FBS)を含有するDMEM培地中で、37℃、5%CO2の環境で増やした。細胞をトリプシン/EDTAにより回収し、そして6ウェルの組織培養プレートにウェル当たり3×105細胞の細胞密度で播き、そしてDMEM/10%FBS培地中でインキュベートした。リソソーム酵素の添加の2時間前に、使用済DMEM/10%FBS培地を2.5mlの取込み培地(Ham’s F−12/10%FBS/2mM PIPES、pH6.7)で置換した。非結合rhGAA及びvIGF2−rhGAAを、50mMリン酸ナトリウム、pH6.5/100mM NaCl/0.05%ポリソルベート−80で0.5mg/mlに希釈し、そして0.2μmのスピンフィルターデバイス(Costar)を通して滅菌した。非結合rhGAAを、10−200nMの最終タンパク質濃度で個々のウェルに加え、一方、vIGF2−rhGAAは2−25nMで加えた。全てのウェルが同じ体積及び正しいタンパク質濃度を有することを確実にするために、50mMリン酸ナトリウム、pH6.5/100mM NaCl/0.05%ポリソルベート−80緩衝液を、酵素及び緩衝液の全体積がそれぞれの試料について0.2mlであるように加えた。図6Bに示すように、vIGF2−rhGAAの内部移行は、試験された全てのタンパク質濃度において非結合rhGAAより有意に良好であった。これらの結果は、vIGF2−rhGAAについて幾つかの重要な側面を明らかにした:(1)変異型IGF2ペプチドのタンパク質構造は、細胞表面のIGF2/CI−MPR受容体に対する高親和性結合のために十分である;(2)vIGF2−rhGAAは、細胞内小器官がこのプロトコルで単離されたため、L6筋芽細胞中に効率よく内部移行され、そしてリソソームに送達された;(3)変異型IGF2ペプチドは、vIGF2−rhGAAが、培地中のIGBPに結合されるよりむしろL6筋芽細胞中に内部移行されたことから、予想されたように血清IGF結合タンパク質(IGFBP)に対する低い結合親和性を有する;(4)変異型IGF2ペプチドの化学的カップリングは、rhGAA酵素活性を変更しなかった。
[0082]多数のIGF2ペプチドが、リソソーム酵素に化学的に結合されるか否かを決定するために、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドタンパク質ゲル電気泳動(SDS−PAGE)を使用して、タンパク質をそのサイズに基づき分離し、そしてゲルを、その後、タンパク質バンドの可視化のために、改良クマシーブルー染色で染色した。図7Bに示すように、組換え野生型ヒトイズロニデート2−スルファターゼ(I2S)の分子量は、変異型IGF2ペプチドの化学的結合後、約80kDaから概略120kDaに有意に増加した。これらのデータは、変異型IGF2ペプチドの分子量がわずか概略8kDaであることから、多数の変異型IGF2ペプチドがI2Sにカップリングした筈であることを明確に示す。染色されたSDS−PAGEゲルは、様々な量の付加された変異型IGF2ペプチドを伴うvIGF2−I2S種の分布が存在し、I2Sの分子当たり平均で5個の付加されたペプチドを伴うことを示す(ゲル上の概略120kDaの分子量を得るための約40kDaの増加に相当する)。重要なことには、これらのデータは、多数の異なったペプチドを同じリソソーム酵素にカップリングするためのこの方法の潜在性も強調する。例えば、変異型IGF2ペプチド及び他のターゲティングペプチド(例えば、血液脳関門(BBB)を通って輸送されることが知られているペプチド)を、内臓組織(IGF2ペプチドにより)並びに脳及び中枢神経系(BBB透過性ペプチドにより)へのリソソーム酵素のターゲティングのために、同じリソソーム酵素に化学的にカップリングすることができる。従ってこの方法は、現時点のERTの主要な制約を克服するための潜在性を有する。
[0083]配列番号:1は、N−末端伸長リンカー領域及びTEVプロテアーゼ認識部位を伴う、8XHis−標識された[(del1−4)−Arg6−Leu27−Arg65]IGF−2ペプチドに対するcDNA配列を表す(E.coli中の発現のために最適化)。
配列番号:1:
atgggcagccaccaccaccatcatcaccaccacactagtgccggcgagaatctgtactttcagggcggtggtggtagcggcggtggtggtagccgtaccctgtgtggtggcgaattggttgatacgctgcaattcgtctgtggtgaccgcggtttcctgttctctcgtccggcgtcccgcgtgagccgtcgcagccgtggtatcgttgaagagtgctgttttcgtagctgcgacctggctctgctggaaacctattgcgcgaccccggcacgtagcgagtga
[0084]配列番号:2は、伸長配列を伴う変異型IGF2ペプチドに対するアミノ酸配列を表す。
配列番号:2:
NH2−GGGGSGGGGSRTLCGGELVDTLQFVCGDRGFLFSRPASRVSRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPARSE−COOH
[0085]配列番号:2は、TEVプロテアーゼによるN−末端の8XHis標識の除去後の変異型IGF2ペプチドに対応する。この変異型IGF2ペプチドは、N−末端のセリン残基が、WT IGF2の残基5に対応するように、残基1−4を欠く。6位においてグルタミン酸で置換されたアルギニンは、血清IGF結合性タンパク質(IGFBP)に対するIGF2ペプチドの結合親和性を実質的に低下させることが知られている。27位におけるチロシンへのロイシンの置換は、インスリン及びIGF1受容体に対するIGF2ペプチドの結合親和性を実質的に低下させることが知られている。65位におけるリシンへのアルギニンの保存的置換は、リソソーム酵素への結合のためのN−末端の伸長リンカー領域のみの化学的修飾を可能にするために使用された。N−末端の伸長領域は、配列番号:3によって表される。
GGGGSGGG
配列番号:3のN−末端のグリシン残基は、リソソーム酵素へのカップリングのための化学的修飾のために使用される。
Claims (114)
- 組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法であって:
組換えヒトリソソーム酵素上のアミノ(N)末端及び一つ又はそれより多いリシン残基を、第1の架橋剤を使用して修飾して、第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を得ること;
変異型IGF−2ペプチド上のアミノ(N)末端の短い伸長リンカーの第1アミノ酸を、第2の架橋剤を使用して修飾して、第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを得ること;及び
第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドに結合させること;
を含んでなる、前記方法。 - 組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法であって:
第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、一つ又はそれより多い第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドに結合させること;
を含んでなり、ここで
第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素は、化学的に修飾されたN−末端及び一つ又はそれより多い修飾されたリシン残基を有するとして特徴付けられる組換えリソソーム酵素を含んでなり;そして
一つ又はそれより多い第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドは、アミノ(N)末端の短い伸長リンカー内の修飾されたアミノ酸を含んでなる一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチドを含んでなる、前記方法。 - 前記短い伸長リンカーが、5ないし20個のアミノ酸残基を含んでなる、請求項1又は2に記載の方法。
- 請求項2に記載の組換えリソソーム酵素に結合されたターゲティングペプチドを製造する方法であって、ここで、前記第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素は、第1の架橋剤を使用して修飾された、化学的に修飾されたN−末端及び一つ又はそれより多い修飾されたリシン残基を有するとして特徴付けられる組換えリソソーム酵素を含んでなる、前記方法。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)を含んでなる、請求項1−4のいずれか1項に記載の方法。
- 二つのリシン残基が、前記組換えヒトリソソーム酵素上で修飾される、請求項1−5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤が、N−スクシンイミジル6−ヒドラジノニコチン酸アセトン(S−Hynic)を含んでなる、請求項1−6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第2の架橋剤が、PEG4−ペンタフルオロベンゼン−4−ホルミル安息香酸(PEG4−PFB)を含んでなる、請求項1−7のいずれか1項に記載の方法。
- 組換えヒトリソソーム酵素上のN−末端及び一つ又はそれより多いリシン残基が、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液中で、約30分間概略室温で修飾される、請求項1−8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、前記組換えヒトリソソーム酵素上のN−末端及びリシン残基が修飾された後、酸性の緩衝液中に急速に交換される、請求項9に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液が、50mM酢酸ナトリウムを、pH約5.0で含んでなる、請求項10に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液が、0.1M酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、クエン酸ナトリウム、MES、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを、pH約5.0で含んでなる、請求項10に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液中への交換が、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項10に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液中への交換が、透析を使用して行われる、請求項10に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドに結合させる前に、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを精製することを更に含んでなる、請求項1−14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記修飾されたIGF−2ペプチド上の短い伸長リンカー内のN−末端アミノ酸残基が、pH約7.5の緩衝液中で修飾される、請求項8に記載の方法。
- 前記短いリンカーを含有する第2の架橋剤で修飾されたIGF−2ペプチドを精製することが、ゲル濾過を使用して行われる、請求項15に記載の方法。
- 前記短いリンカーを含有する第2の架橋剤で修飾されたIGF−2ペプチドを精製することが、透析を使用して行われる、請求項15に記載の方法。
- アニリンの存在下pH約5.0の酸性の緩衝液中での、第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素の、短いリンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドへの結合を更に含んでなる、請求項1−18のいずれか1項に記載の方法。
- 組換えヒトリソソーム酵素で修飾された短い伸長リンカーを含有するIGF−2ペプチドの複合体を精製することを更に含んでなる、請求項1に記載の方法。
- 前記精製することが、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項20に記載の方法。
- 前記精製することが、透析を使用して行われる、請求項20に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤が、スルホ−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン(スルホ−NHS−ホスフィン)を含んでなる、請求項1−6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤が、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン(NHS−PEG4−アセチレン)を含んでなる、請求項1−6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤が、ジフルオロシクロオクチン(DIFO)及びジベンゾシクロオクチン(DIBO)のようなシクロオクチンを含有するヘテロ二官能性架橋剤を含んでなる、請求項1−6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第2の架橋剤が、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG4−アジド(NHS−PEG4−アジド)を含んでなる、請求項1−6及び23−25のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素上のN−末端及び一つ又はそれより多いリシン残基が、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液中で、約30分間概略室温で修飾される、請求項23−26のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、前記組換えヒトリソソーム酵素上のN−末端及びリシン残基が修飾された後に、酸性の緩衝液中に急速に交換される、請求項27に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液が、50mM酢酸ナトリウムを、pH約5.0で含んでなる、請求項28に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液が、0.1M酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、クエン酸ナトリウム、MES、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを、pH約5.0で含んでなる、請求項28に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液中への交換が、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項28に記載の方法。
- 前記酸性の緩衝液中への交換が、透析を使用して行われる、請求項28に記載の方法。
- 前記第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドに結合させる前に、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを精製することを更に含んでなる、請求項23−32のいずれか1項に記載の方法。
- 前記修飾されたIGF−2ペプチド上の短い伸長リンカー内のN−末端アミノ酸残基が、pH約7.5の緩衝液中で修飾される、請求項26に記載の方法。
- 短い伸長リンカーを含有する前記第2の架橋剤で修飾されたIGF−2ペプチドを精製することが、ゲル濾過を使用して行われる、請求項33に記載の方法。
- 短い伸長リンカーを含有する前記第2の架橋剤で修飾されたIGF−2ペプチドを精製することが、透析を使用して行われる、請求項33に記載の方法。
- pH約5.0の酸性の緩衝液中での、前記第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素の、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドへの結合を更に含んでなる、請求項23−36のいずれか1項に記載の方法。
- 前記修飾されたIGF−2ペプチド上の短いリンカー内のN−末端アミノ酸残基が、pH約7.5の緩衝液中で修飾される、請求項26に記載の方法。
- 銅(Cu+1)の存在下、pH約5.0の酸性の緩衝液中での、前記第1の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素の、前記短い伸長リンカーを含有する第2の架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドへの結合を更に含んでなる、請求項1に記載の方法。
- 組換えヒトリソソーム酵素で修飾された短いリンカーを含有するIGF−2ペプチドの複合体を精製することを更に含んでなる、請求項39に記載の方法。
- 前記精製することが、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項40に記載の方法。
- 前記精製することが、透析を使用して行われる、請求項40に記載の方法。
- 酵素置換療法のための分子を製造する方法であって:
ヘテロ二官能性架橋剤を変異型IGF−2ペプチドに結合させること;及び
ヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを、組換えヒトリソソーム酵素に結合させること;
を含んでなる、前記方法。 - 酵素置換療法のための分子を製造する方法であって:
ヘテロ二官能性架橋剤を組換えヒトリソソーム酵素に結合させること;及び
ヘテロ二官能性架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、変異型IGF−2ペプチドに結合させること;
を含んでなる、前記方法。 - 前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)である、請求項43又は44に記載の方法。
- 前記二官能性架橋剤が、m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル(MBS)を含んでなる、請求項43−45のいずれか1項に記載の方法。
- 変異型IGF−2ペプチド−組換えヒトリソソーム酵素複合体を精製することを更に含んでなる、請求項1−46のいずれか1項に記載の方法。
- 前記精製することが、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項47に記載の方法。
- 前記精製することが、透析を使用して行われる、請求項47に記載の方法。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、酵母、昆虫細胞、植物細胞、真菌、遺伝子導入動物及びin vitro翻訳系を使用して製造される、請求項1に記載の方法。
- 酵母又は他の系から製造される高マンノース型N−グリカンを含有する前記組換えヒトリソソーム酵素が、エンドグリコシダーゼF(EndoF)又はエンドグリコシダーゼH(EndoH)を使用して処理される、請求項50に記載の方法。
- 前記処理が、酸性のpHの緩衝液中で起こる、請求項51に記載の方法。
- 前記酸性のpHの緩衝液が、pH5.0の0.1Mクエン酸ナトリウムである、請求項52に記載の方法。
- 前記反応が、概略室温で行われる、請求項52に記載の方法。
- エンドグリコシダーゼF(EndoF)又はエンドグリコシダーゼH(EndoH)を使用する処理の後、組換えヒトリソソーム酵素を精製することを更に含んでなる、請求項51に記載の方法。
- 前記精製することが、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項55に記載の方法。
- 前記精製することが、イオン交換クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項55に記載の方法。
- 前記精製することが、疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項55に記載の方法。
- 組換えヒトリソソーム酵素に化学的に結合した一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチドを含んでなる、複合体。
- 前記第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、組換えヒトリソソーム酵素を含んでなり、前記組換えヒトリソソーム酵素は、一つ又はそれより多い修飾されたリシン残基を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 化学的に修飾されたN−末端を更に含んでなる、請求項60に記載の方法。
- 前記変異型IGF−2ペプチドが、IGF−2ペプチド類似体及びN−末端に修飾されたアミノ酸残基を伴う短い伸長リンカーを含んでなる、請求項61に記載の複合体。
- 少なくとも一つの前記変異型IGF−2ペプチドが、短い伸長リンカー内に修飾されたN−末端アミノ酸を含んでなるIGF−2ペプチドを含んでなる、請求項62に記載の複合体。
- 前記変異型IGF−2ペプチド上の短いリンカー内の修飾されたN−末端アミノ酸残基が、pH約7.5の緩衝液中で修飾されることが可能であるとして特徴付けられる、請求項63に記載の複合体。
- 前記変異型IGF−2ペプチドが、IGF−2ペプチド類似体を含んでなり、C−末端の修飾されたリシン残基を有する短い伸長リンカーは、合成化学によって産生される、請求項59に記載の複合体。
- 前記変異型IGF−2ペプチドが、IGF−2ペプチド類似体を含んでなり、C−末端のリシン残基を有する短いリンカーは、組換えタンパク質として産生され、そしてC−末端のリシンは、その後二官能性架橋剤で化学的に修飾される、請求項59に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、修飾されたN−末端及び少なくとも一つの修飾されたリシン残基を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、アミノ反応性二官能性架橋剤から誘導される架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、N−スクシンイミジル6−ヒドラジノニコチン酸アセトン(S−Hynic)から誘導される架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、スルホ−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン(スルホ−NHS−ホスフィン)から誘導される架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン(NHS−PEG4−アセチレン)から誘導される架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 第1の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、ジフルオロシクロオクチン(DIFO)及びジベンゾシクロオクチン(DIBO)のようなシクロオクチンを含有するヘテロ二官能性架橋剤から誘導される架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素上の修飾されたN−末端及びリシン残基が、第一アミンを欠くpH約7.3の緩衝液中で、約30分間概略室温で修飾された第1(N−末端)アミノ酸及びリシン残基上の第一アミンから誘導されるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- IGF−2ペプチド及び修飾されたN−末端アミノ酸を伴う短い伸長リンカーを含んでなる前記異型IGF−2ペプチドが、第2の架橋剤を含んでなるとして特徴付けられる、請求項59に記載の複合体。
- 架橋剤が、ヒドラジド修飾リソソーム酵素への結合のためのペンタフルオロベンゼン−4−ホルミル安息香酸(PEG4−PFB)を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 架橋剤が、ホスフィン修飾リソソーム酵素への結合のためのN−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG4−アジド(NHS−PEG4−アジド)を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 架橋剤が、アセチレン修飾リソソーム酵素への結合のためのN−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG4−アジド(NHS−PEG4−アジド)を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 架橋剤が、シクロオクチン修飾リソソーム酵素への結合のためのN−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG4−アジド(NHS−PEG4−アジド)を含んでなる、請求項59に記載の複合体。
- 組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを含んでなる、複合体。
- 前記ヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドが、修飾されたIGF−2ペプチドに結合したヘテロ二官能性架橋剤から誘導されるとして特徴付けられる、請求項80に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ(rhGAA)を含んでなる、請求項80に記載の複合体。
- 前記ヘテロ二官能性架橋剤が、m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル(MBS)を含んでなる、請求項80に記載の複合体。
- 前記複合体が、10パーセントより少ない遊離の非結合IGF−2ペプチドを伴い実質的に純粋である、請求項80に記載の複合体。
- 前記複合体の純度が、サイズ排除クロマトグラフィーからの画分中の、280nmにおけるリソソームタンパク質及び215nmにおける遊離のIGF−2ペプチドの吸光度によって測定される、請求項80に記載の複合体。
- 前記複合体の純度が、染色されたSDS−PAGEタンパク質ゲルによって測定される、請求項80に記載の複合体。
- 前記複合体が、0.1パーセントより少ない遊離の非結合IGF−2ペプチド又は他の汚染物質を伴い実質的に純粋である、請求項80に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、酵母から誘導される、請求項80に記載の複合体。
- 前記組換えヒトリソソーム酵素が、エンドグリコシダーゼF(EndoF)又はエンドグリコシダーゼH(EndoH)を使用して処理されるとして特徴付けられる、請求項88に記載の複合体。
- リソソーム蓄積症に罹った対象を治療するための方法であって、修飾された組換えヒトリソソーム酵素に化学的に結合された一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチドを含んでなる複合体を対象に投与する工程を含んでなる、前記方法。
- 前記リソソーム蓄積症が、以下の:ポンペ病、ファブリー病、及びゴーシェ病、MPS I、MPS II、MPS VII、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、並びにウォルマンの少なくとも一つである、請求項90に記載の方法。
- リソソーム蓄積症に罹った対象を治療するための方法であって、組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドを含んでなる複合体を対象に投与する工程を含んでなる、前記方法。
- 前記リソソーム蓄積症が、以下の:ポンペ病、ファブリー病、及びゴーシェ病、MPS I、MPS II、MPS VII、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、並びにウォルマンの少なくとも一つである、請求項92に記載の方法。
- ポンペ、ファブリー、ゴーシェ、MPS I、MPS II、MPS VII、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、又はウォルマン病に罹った患者を治療する方法であって、
組換えリソソーム酵素に化学的に結合された一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチド、及び医薬的に受容可能な担体を含んでなる組成物を、前記疾病を治療するために十分な量で、それを必要とする患者に投与することを含んでなる、前記方法。 - 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ポンペ病の治療のための酸性α−グルコシダーゼである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ファブリー病の治療のための酸性α−ガラクトシダーゼAである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ゴーシェ病の治療のための酸性β−グルコセレブロシダーゼである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ムコポリサッカリドーシスI(MPS I)の治療のための酸性α−イズロニダーゼである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ムコポリサッカリドーシスII(MPS II)の治療のための酸性イズロニデート2−スルファターゼ(I2S)である、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ムコポリサッカリドーシスVII(MPS VII)の治療のための酸性β−グルクロニダーゼである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、GM2ガングリオシドーシス(テイ−サックス)の治療のためのβ−ヘキソサミニダーゼAである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、GM2ガングリオシドーシス(サンドホフ)の治療のためのβ−ヘキソサミニダーゼBである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、ウォルマン病の治療のための酸性リパーゼである、請求項94に記載の方法。
- 修飾された組換えヒトリソソーム酵素が、α−マンノシドーシスの治療のための酸性α−マンノシダーゼである、請求項94に記載の方法。
- 前記組成物が、一月当たり患者の1キログラム当たり、組換えリソソーム酵素に化学的に結合された一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチドで約0.1から約1000ミリグラムまでの量で投与される、請求項94に記載の方法。
- 前記組成物が、一月当たり患者の1キログラム当たり、組換えリソソーム酵素に化学的に結合された一つ又はそれより多い変異型IGF−2ペプチドで約1から約500ミリグラムまでの量で投与される、請求項94に記載の方法。
- ポンペ、ファブリー、ゴーシェ、MPS I、MPS II、MPS VII、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、又はウォルマン病に罹った患者を治療する方法であって、
組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチド、及び医薬的に受容可能な担体を含んでなる組成物を、前記疾病を治療するために十分な量で、それを必要とする患者に投与すること
を含んでなる、前記方法。 - 前記組成物が、一月当たり患者の50キログラム当たり、組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドで約0.1から約1000ミリグラムまでの量で投与される、請求項107に記載の方法。
- 前記組成物が、一月当たり患者の50キログラム当たり、組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型IGF−2ペプチドで、約1から約500ミリグラムまでの量で投与される、請求項107に記載の方法。
- 配列番号:1を含んでなる、E.coli中の発現のために最適化された変異型IGF−2ペプチドをコードするDNA配列。
- 配列番号:2を含んでなる、変異型IGF−2ペプチドを表すアミノ酸配列。
- 配列番号:3を含んでなる、伸長リンカーを表すアミノ酸配列。
- 前記変異型IGF−2ペプチドが、配列番号:2のアミノ酸配列を含んでなる、請求項1ないし112のいずれか1項に記載の方法。
- 前記変異型IGF−2ペプチドが、配列番号:2のアミノ酸配列を含んでなる、請求項59又は請求項80に記載の複合体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161490957P | 2011-05-27 | 2011-05-27 | |
US61/490,957 | 2011-05-27 | ||
PCT/US2012/039705 WO2012166653A2 (en) | 2011-05-27 | 2012-05-25 | Methods for coupling targeting peptides onto recombinant lysosomal enzymes for improved treatments of lysosomal storage diseases |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017133655A Division JP2017225444A (ja) | 2011-05-27 | 2017-07-07 | リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014518063A true JP2014518063A (ja) | 2014-07-28 |
JP2014518063A5 JP2014518063A5 (ja) | 2018-02-15 |
JP6300720B2 JP6300720B2 (ja) | 2018-03-28 |
Family
ID=47260229
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014513625A Active JP6300720B2 (ja) | 2011-05-27 | 2012-05-25 | リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 |
JP2017133655A Pending JP2017225444A (ja) | 2011-05-27 | 2017-07-07 | リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017133655A Pending JP2017225444A (ja) | 2011-05-27 | 2017-07-07 | リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9545450B2 (ja) |
EP (1) | EP2714752B1 (ja) |
JP (2) | JP6300720B2 (ja) |
KR (2) | KR20190022943A (ja) |
CN (2) | CN108586621A (ja) |
BR (1) | BR112013030432A2 (ja) |
CA (1) | CA2836318C (ja) |
CY (1) | CY1120485T1 (ja) |
DK (1) | DK2714752T3 (ja) |
ES (1) | ES2660185T3 (ja) |
HR (1) | HRP20180291T1 (ja) |
HU (1) | HUE038172T2 (ja) |
LT (1) | LT2714752T (ja) |
NO (1) | NO2820016T3 (ja) |
PL (1) | PL2714752T3 (ja) |
PT (1) | PT2714752T (ja) |
RS (1) | RS56913B1 (ja) |
SI (1) | SI2714752T1 (ja) |
TR (1) | TR201802230T4 (ja) |
WO (1) | WO2012166653A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018509556A (ja) * | 2015-03-11 | 2018-04-05 | オーシーヴィー インテレクチュアル キャピタル リミテッド ライアビリティ カンパニー | 繊維材料でマフラーを充填する方法及びシステム |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9925303B2 (en) * | 2012-11-13 | 2018-03-27 | Edwards Lifesciences Corporation | Methods for cross-linking bioprosthetic tissue using bio-orthogonal binding pairs |
ES2804594T3 (es) | 2013-03-15 | 2021-02-08 | Amicus Therapeutics Inc | Reticuladores químicos |
CN106414485A (zh) * | 2014-04-04 | 2017-02-15 | 韦斯塔隆公司 | 人工活化的毒性肽 |
JP6623213B2 (ja) * | 2014-08-11 | 2019-12-18 | シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド | リソソーム酵素に融合したマンノース−6−リン酸含有ペプチド |
SI3201320T1 (sl) * | 2014-09-30 | 2024-02-29 | Amicus Therapeutics, Inc. | Zelo močna kislinska alfa-glukozidaza z okrepljenimi ogljikovimi hidrati |
CN104356238B (zh) * | 2014-10-15 | 2018-01-09 | 大连理工大学 | 一种重组蛋白a亲和配基的定点固定化方法 |
WO2017079729A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Cell-based assays for detection of antibodies or other factors that neutralize uptake of lysosomal enzymes |
ES2833937T3 (es) * | 2015-12-08 | 2021-06-16 | Regeneron Pharma | Composiciones y métodos para internalizar enzimas |
WO2018226861A1 (en) | 2017-06-07 | 2018-12-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for internalizing enzymes |
CA3066026A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Virometix Ag | Cyclic peptides for protection against respiratory syncytial virus |
JP2021500857A (ja) | 2017-10-02 | 2021-01-14 | デナリ セラピューティクス インコーポレイテッドDenali Therapeutics Inc. | 酵素補充療法用酵素を含む融合タンパク質 |
US11492610B2 (en) | 2018-03-08 | 2022-11-08 | California Institute Of Technology | Sample multiplexing for single-cell RNA sequencing |
SG11202010533WA (en) | 2018-04-30 | 2020-11-27 | Amicus Therapeutics Inc | Gene therapy constructs and methods of use |
CN113631182A (zh) | 2018-10-10 | 2021-11-09 | 阿米库斯治疗学公司 | 二硫键稳定的多肽组合物和使用方法 |
CN113301925A (zh) | 2018-12-19 | 2021-08-24 | 小利兰·斯坦福大学理事会 | 用于溶酶体靶向的双官能分子以及相关的组合物和方法 |
US20220054619A1 (en) | 2018-12-20 | 2022-02-24 | Virometix Ag | Lipopeptide building blocks and synthetic virus-like particles |
KR20220008280A (ko) * | 2019-04-30 | 2022-01-20 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 | 폼페병의 치료에 유용한 조성물 |
CN110373405B (zh) * | 2019-07-24 | 2023-12-15 | 杭州恩和生物科技有限公司 | 一种接枝聚合物的生物酶及其制备方法和固定方法 |
CA3154189A1 (en) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Hung Do | Variant igf2 constructs |
US20230355737A1 (en) | 2020-09-28 | 2023-11-09 | Dbv Technologies | Particle comprising an rsv-f protein for use in rsv vaccination |
AR124216A1 (es) | 2020-12-01 | 2023-03-01 | Univ Pennsylvania | Composiciones nuevas con motivos selectivos específicos del tejido y composiciones que las contienen |
EP4334334A1 (en) | 2021-04-23 | 2024-03-13 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Novel compositions with brain-specific targeting motifs and compositions containing same |
WO2024130067A2 (en) | 2022-12-17 | 2024-06-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav mutant vectors with cardiac and skeletal muscle-specific targeting motifs and compositions containing same |
WO2024130070A2 (en) | 2022-12-17 | 2024-06-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030072761A1 (en) * | 2001-10-16 | 2003-04-17 | Lebowitz Jonathan | Methods and compositions for targeting proteins across the blood brain barrier |
US20090203575A1 (en) * | 2001-04-30 | 2009-08-13 | Zystor Therapeutics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
US20100104589A1 (en) * | 2002-12-13 | 2010-04-29 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an Intracellularly-Cleavable Linkage |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1118334A1 (en) * | 2000-01-11 | 2001-07-25 | Aventis Behring Gesellschaft mit beschränkter Haftung | Method for the production of conjugates and uses thereof for the prevention and treatment of allergic reactions and autoimmune diseases |
WO2005033134A2 (en) | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Secreted protein therapeutics and uses thereof |
HUE034850T2 (en) | 2008-05-07 | 2018-03-28 | Biomarin Pharm Inc | Lysosomal targeting peptides and their use |
-
2012
- 2012-05-25 DK DK12793015.4T patent/DK2714752T3/en active
- 2012-05-25 WO PCT/US2012/039705 patent/WO2012166653A2/en active Application Filing
- 2012-05-25 KR KR1020197005833A patent/KR20190022943A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-05-25 CN CN201810440498.1A patent/CN108586621A/zh not_active Withdrawn
- 2012-05-25 EP EP12793015.4A patent/EP2714752B1/en active Active
- 2012-05-25 ES ES12793015.4T patent/ES2660185T3/es active Active
- 2012-05-25 LT LTEP12793015.4T patent/LT2714752T/lt unknown
- 2012-05-25 BR BR112013030432A patent/BR112013030432A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-05-25 TR TR2018/02230T patent/TR201802230T4/tr unknown
- 2012-05-25 CN CN201280037051.0A patent/CN104160033B/zh active Active
- 2012-05-25 US US14/122,858 patent/US9545450B2/en active Active
- 2012-05-25 KR KR1020137034111A patent/KR101955054B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-25 RS RS20180188A patent/RS56913B1/sr unknown
- 2012-05-25 HU HUE12793015A patent/HUE038172T2/hu unknown
- 2012-05-25 JP JP2014513625A patent/JP6300720B2/ja active Active
- 2012-05-25 SI SI201231229T patent/SI2714752T1/en unknown
- 2012-05-25 PT PT127930154T patent/PT2714752T/pt unknown
- 2012-05-25 CA CA2836318A patent/CA2836318C/en active Active
- 2012-05-25 PL PL12793015T patent/PL2714752T3/pl unknown
-
2013
- 2013-02-25 NO NO13708603A patent/NO2820016T3/no unknown
-
2016
- 2016-11-09 US US15/347,006 patent/US10660972B2/en active Active
-
2017
- 2017-07-07 JP JP2017133655A patent/JP2017225444A/ja active Pending
-
2018
- 2018-02-16 HR HRP20180291TT patent/HRP20180291T1/hr unknown
- 2018-02-22 CY CY20181100212T patent/CY1120485T1/el unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090203575A1 (en) * | 2001-04-30 | 2009-08-13 | Zystor Therapeutics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
US20030072761A1 (en) * | 2001-10-16 | 2003-04-17 | Lebowitz Jonathan | Methods and compositions for targeting proteins across the blood brain barrier |
US20100104589A1 (en) * | 2002-12-13 | 2010-04-29 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an Intracellularly-Cleavable Linkage |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018509556A (ja) * | 2015-03-11 | 2018-04-05 | オーシーヴィー インテレクチュアル キャピタル リミテッド ライアビリティ カンパニー | 繊維材料でマフラーを充填する方法及びシステム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2836318C (en) | 2018-11-27 |
KR101955054B1 (ko) | 2019-03-07 |
US10660972B2 (en) | 2020-05-26 |
TR201802230T4 (tr) | 2018-03-21 |
CN104160033B (zh) | 2018-06-01 |
CA2836318A1 (en) | 2012-12-06 |
CN104160033A (zh) | 2014-11-19 |
JP2017225444A (ja) | 2017-12-28 |
NO2820016T3 (ja) | 2017-12-30 |
ES2660185T3 (es) | 2018-03-21 |
RS56913B1 (sr) | 2018-05-31 |
KR20190022943A (ko) | 2019-03-06 |
HRP20180291T1 (hr) | 2018-03-23 |
US9545450B2 (en) | 2017-01-17 |
EP2714752A2 (en) | 2014-04-09 |
WO2012166653A2 (en) | 2012-12-06 |
JP6300720B2 (ja) | 2018-03-28 |
PT2714752T (pt) | 2018-02-26 |
SI2714752T1 (en) | 2018-03-30 |
EP2714752B1 (en) | 2017-11-22 |
BR112013030432A2 (pt) | 2016-12-13 |
WO2012166653A3 (en) | 2014-05-01 |
PL2714752T3 (pl) | 2018-04-30 |
KR20140033155A (ko) | 2014-03-17 |
US20140302001A1 (en) | 2014-10-09 |
CN108586621A (zh) | 2018-09-28 |
HUE038172T2 (hu) | 2018-09-28 |
US20170319710A1 (en) | 2017-11-09 |
EP2714752A4 (en) | 2015-08-26 |
LT2714752T (lt) | 2018-03-12 |
DK2714752T3 (en) | 2018-02-26 |
CY1120485T1 (el) | 2019-07-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6300720B2 (ja) | リソソーム蓄積症の改善された治療のための組換えリソソーム酵素にターゲティングペプチドをカップリングするための方法 | |
US10814008B2 (en) | Chemical crosslinkers | |
US10907142B2 (en) | Oligosaccharides comprising an aminooxy group and conjugates thereof | |
US8580922B2 (en) | Peptide linkers for polypeptide compositions and methods for using same | |
KR102385392B1 (ko) | 표적화된 치료적 리소좀 효소 융합 단백질들 및 그들의 용도들 | |
US20090022702A1 (en) | Methods for introducing mannose 6-phosphate and other oligosacharides onto glycoproteins | |
KR101928403B1 (ko) | 안정화 알파-갈락토시다제 및 이의 용도 | |
WO2014082080A2 (en) | Methods for coupling targeting peptides onto recombinant lysosomal enzymes for improved treatments of lysosomal storage diseases |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20140612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150525 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150525 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160426 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160725 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20161025 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170307 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170707 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170714 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171003 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20171228 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180130 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180227 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6300720 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |