JP2014513555A - Salmonella detection article and method of use - Google Patents

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Abstract

サルモネラ微生物を検出するための物品が提供される。物品は、高度に選択的な栄養培地と、複数の指示薬系とを含む。サルモネラ微生物を検出するために物品を使用する方法も提供される。
【選択図】図１An article for detecting Salmonella microorganisms is provided. The article includes a highly selective nutrient medium and a plurality of indicator systems. Also provided is a method of using an article to detect Salmonella microorganisms.
[Selection] Figure 1

Description

発明の詳細な説明Detailed Description of the Invention

［背景］
［０００１］ サルモネラ微生物は、食中毒の有意な原因物質である。これらの微生物は、生肉、野菜、ピーナッツバター等の乳製品及び加工食品に見られる。サルモネラ感染は、熱、腹痛及び下痢等の腸炎の症状をもたらし、加えて、悪心及び嘔吐を引き起こし得る。大規模食品製造施設は、多数の消費者に流通され得る、汚染食品の源であり、消費者の多くは、細菌に感染する可能性がある。 [background]
[0001] Salmonella microorganisms are a significant causative agent of food poisoning. These microorganisms are found in dairy products and processed foods such as raw meat, vegetables and peanut butter. Salmonella infection can result in symptoms of enteritis such as fever, abdominal pain and diarrhea, and in addition can cause nausea and vomiting. Large food manufacturing facilities are a source of contaminated food that can be distributed to many consumers, and many consumers can be infected with bacteria.

［概要］
［０００２］ 概して、本発明は、微生物を検出するための物品、システム、及び方法に関する。具体的には、システム及び方法は、サルモネラ属に属する微生物を検出するために使用され得る。本発明の物品は、栄養培地と、ほとんどの微生物の増殖を実質的に妨げる一方で、サルモネラ微生物の増殖を可能にする、高度に選択的な薬剤の組み合わせとを含む。物品は更に、最大で３つの指示薬系を含み、各指示薬系は、サルモネラ微生物の存在可能性を示す固有の機能を果たす。本発明の物品がサルモネラ微生物の存在可能性を示す時に、サルモネラ微生物の存在を示すために、第４の固有の指示薬系が更に使用され得る。有利に、システム及び方法は、方法が開始された後に、数時間内のサルモネラ微生物の存在を示すために使用され得る。 [Overview]
[0002] In general, the present invention relates to articles, systems, and methods for detecting microorganisms. Specifically, the system and method can be used to detect microorganisms belonging to the genus Salmonella. The articles of the present invention comprise a nutrient medium and a highly selective drug combination that substantially inhibits the growth of most microorganisms while allowing the growth of Salmonella microorganisms. The article further includes up to three indicator systems, each indicator system performing a unique function that indicates the possible presence of Salmonella microorganisms. A fourth unique indicator system can further be used to indicate the presence of Salmonella microorganisms when the article of the invention indicates the presence of Salmonella microorganisms. Advantageously, the system and method can be used to indicate the presence of Salmonella microorganisms within hours after the method is initiated.

［０００３］ 一態様では、本開示は、標的微生物を検出するための培養デバイスを提供する。培養デバイスは、標的微生物の増殖を促進するための栄養素と、セフスロジン、ナリジクス酸、ストレプトマイシン、メチシリン、及び胆汁酸塩を含む複数の選択剤とを含む選択的増殖培地を含むことができる。培養デバイスは更に、第１の識別指示薬系及びゲル化剤を含むことができる。 [0003] In one aspect, the present disclosure provides a culture device for detecting a target microorganism. The culture device can include a selective growth medium that includes nutrients to promote the growth of the target microorganism and a plurality of selective agents including cefsulodin, nalidixic acid, streptomycin, methicillin, and bile salts. The culture device can further include a first identification indicator system and a gelling agent.

［０００４］ いずれかの実施形態において、培養デバイスは更に、標的微生物の存在を示すための非識別指示薬系を含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の識別指示薬系は、ｐＨ指示薬を含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、培養デバイスは更に、非標的微生物の存在を示すための第２の識別指示薬系を含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、第２の識別指示薬は、発色性β−ガラクトシダーゼ酵素基質を含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、選択的増殖培地は、乾燥、再水和可能選択的増殖培地を含むことができ、ゲル化剤は、乾燥、冷水可溶性ゲル化剤を含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、培養デバイスは、薄膜培養デバイスであってもよい。 [0004] In any embodiment, the culture device may further include a non-identifying indicator system for indicating the presence of the target microorganism. In any of the above embodiments, the first identification indicator system can include a pH indicator. In any of the above embodiments, the culture device can further include a second identification indicator system for indicating the presence of the non-target microorganism. In any of the above embodiments, the second identification indicator can include a chromogenic β-galactosidase enzyme substrate. In any of the above embodiments, the selective growth medium can comprise a dry, rehydratable selective growth medium, and the gelling agent comprises a dry, cold water soluble gelling agent. In any of the above embodiments, the culture device may be a thin film culture device.

［０００５］ 更に別の態様では、本開示は、サルモネラ微生物を検出する方法を提供する。方法は、液体試料、上記の培養デバイスのいずれか、及び第３の識別指示薬系を提供することを含むことができる。方法は更に、接種された培養デバイスを形成するために、培養デバイス中で、規定の体積の試料を、選択的増殖培地；第１の指示薬系；存在する場合、非識別指示薬系；存在する場合、第２の指示薬系；及びゲル化剤と接触させることを含むことができる。方法は更に、第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、増殖培地を観察することと、標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第３の識別を水和した増殖培地と接触させることと、標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第３の識別指示薬系を観察することと、を含むことができる。 [0005] In yet another aspect, the present disclosure provides a method of detecting Salmonella microorganisms. The method can include providing a liquid sample, any of the culture devices described above, and a third identification indicator system. The method further comprises, in the culture device, a defined volume of the sample in the culture device, a selective growth medium; a first indicator system; if present, a non-identifying indicator system; if present. A second indicator system; and contacting with a gelling agent. The method further includes incubating the inoculated culture device for a first period of time, observing the growth medium to detect an indication of the presence of the target microorganism in the sample, and the presence of the target microorganism. When there is an indication of likelihood, the third identification indicator system in the hydrated growth medium is observed for contacting the third identification with the hydrated growth medium and for indicating the presence of the target microorganism. Can be included.

［０００６］ 更に別の態様では、本開示は、サルモネラ微生物を検出する方法を提供する。方法は、試料、上記の薄膜培養デバイスのいずれか、及び第３の識別指示薬系を提供することを含むことができる。方法は更に、水和した増殖培地を形成するために、培養デバイス中で、規定の体積のサルモネラを含まない水性液体を、選択的増殖培地；第１の識別指示薬系；存在する場合、非識別指示薬系；存在する場合、第２の識別指示薬系；及びゲル化剤と接触させることを含むことができる。方法は更に、水和した増殖培地に試料を接種して、接種された培養デバイスを形成することと、第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、水和した増殖培地を観察することと、標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第３の識別を水和した増殖培地を接触させることと、標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第３の識別指示薬系を観察することと、を含むことができる。 [0006] In yet another aspect, the present disclosure provides a method of detecting Salmonella microorganisms. The method can include providing a sample, any of the thin film culture devices described above, and a third identification indicator system. The method further includes selecting a defined volume of Salmonella-free aqueous liquid in the culture device to form a hydrated growth medium, a selective growth medium; a first discriminating indicator system; An indicator system; if present, can include contacting with a second distinguishing indicator system; and a gelling agent. The method further includes inoculating the hydrated growth medium with the sample to form an inoculated culture device, incubating the inoculated culture device for a first period, and in the sample of the target microorganism. Observing the hydrated growth medium to detect an indication of possible presence, contacting the hydrated growth medium with a third identification when there is an indication of the presence of the target microorganism; Observing a third discriminating indicator system in the hydrated growth medium for an indication of the presence of the target microorganism.

［０００７］ 方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、標的微生物の存在可能性の指示を検出することは更に、非識別指示薬系及び第１の識別指示薬系と反応するが、第２の識別指示薬系と反応しないコロニーを観察することを含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、第２の構成成分を水和した増殖培地と接触させることの後に、方法は更に、第２の期間にわたって、培養デバイスをインキュベートすることを含むことができる。方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることは、約０．５時間〜約２４時間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることを含むことができる。方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、第２の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることは、約３０分〜約３６０分にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることを含むことができる。 [0007] In any of the above embodiments of the method, detecting an indication of the presence of the target microorganism further reacts with the non-identifying indicator system and the first identifying indicator system, but the second identifying indicator Observing colonies that do not react with the system can be included. In any of the above embodiments, after contacting the second component with the hydrated growth medium, the method can further include incubating the culture device for a second period of time. In any of the above embodiments of the method, incubating the inoculated culture device for a first period comprises incubating the inoculated culture device for about 0.5 hours to about 24 hours. be able to. In any of the above embodiments of the method, incubating the inoculated culture device for a second period comprises incubating the inoculated culture device for about 30 minutes to about 360 minutes. it can.

［０００８］ 別の態様において、本開示は、サルモネラ微生物を検出するためのシステムを提供する。システムは、サルモネラ微生物に対して高度に選択的である栄養培地と、少なくとも２つの識別指示薬系とを含む培養デバイスを含み、第１の識別指示薬系は、サルモネラ微生物の陽性指示薬であり、第２の識別指示薬系は、サルモネラ微生物の陰性指示薬である。システムは更に、第３の識別指示薬系を含む検出物品を含むことができ、第３の識別指示薬系は、サルモネラ微生物の陽性指示薬である。 [0008] In another aspect, the present disclosure provides a system for detecting Salmonella microorganisms. The system includes a culture device that includes a nutrient medium that is highly selective for Salmonella microorganisms and at least two identification indicator systems, wherein the first identification indicator system is a positive indicator for Salmonella microorganisms; This identification indicator system is a negative indicator for Salmonella microorganisms. The system can further include a detection article that includes a third identification indicator system, wherein the third identification indicator system is a positive indicator for Salmonella microorganisms.

［０００９］ システムのいずれかの実施形態において、第２及び第３の識別指示薬系のそれぞれは、発色性酵素基質を含むことができ、各発色性酵素基質は、炭水化物構成成分及び発色団を含む。システムのいずれかの実施形態において、第２及び第３の識別指示薬系のそれぞれは、同一の発色団を含むことができる。システムのいずれかの実施形態において、第２の識別指示薬系は、β−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含むことができる。システムのいずれかの実施形態において、第３の識別指示薬系は、α−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含むことができる。 [0009] In any embodiment of the system, each of the second and third distinguishing indicator systems can comprise a chromogenic enzyme substrate, each chromogenic enzyme substrate comprising a carbohydrate component and a chromophore. . In any embodiment of the system, each of the second and third identification indicator systems can include the same chromophore. In any embodiment of the system, the second discriminating indicator system can include a chromogenic indicator of β-galactosidase enzyme activity. In any embodiment of the system, the third discriminating indicator system can include a chromogenic indicator of α-galactosidase enzyme activity.

［００１０］ 用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態もまた、同じ状況又は他の状況下で、好ましい場合がある。更には、１つ以上の好ましい実施形態の詳細説明は、他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。 [0010] The terms "preferred" and "preferably" refer to embodiments of the invention that can provide certain benefits under certain circumstances. However, other embodiments may also be preferred under the same or other circumstances. Furthermore, the detailed description of one or more preferred embodiments does not imply that other embodiments are not useful, and is not intended to exclude other embodiments from the scope of the invention. .

［００１１］ 本明細書で使用するところの用語「非識別指示薬系」は、例えば、異なる種類の微生物を区別しない、指示染料等の一般的な指示薬系を指す。 [0011] As used herein, the term "non-identifying indicator system" refers to a general indicator system, such as an indicator dye, that does not distinguish between different types of microorganisms, for example.

［００１２］ 本明細書で使用するところの用語「識別指示薬系」は、２つ以上の種類の微生物を区別する指示薬系を指す。幾つかの実施形態では、識別指示薬系は、例えば、炭水化物及びｐＨ指示薬を含んでもよく、系は、炭水化物を酸性最終生成物に発酵させる微生物と、炭水化物を酸性最終生成物に発酵させない微生物との間で区別することができる。幾つかの実施形態では、識別指示薬系は、発色性又は蛍光酵素基質を含むことができ、系は、酵素基質と反応する酵素を含む微生物と、酵素基質と反応する酵素を含まない微生物との間で区別することができる。 [0012] As used herein, the term "identification indicator system" refers to an indicator system that distinguishes between two or more types of microorganisms. In some embodiments, the identification indicator system may include, for example, a carbohydrate and a pH indicator, the system comprising a microorganism that ferments carbohydrates to acidic end products and a microorganism that does not ferment carbohydrates to acidic end products. Can be distinguished between. In some embodiments, the identification indicator system can include a chromogenic or fluorescent enzyme substrate, the system comprising a microorganism comprising an enzyme that reacts with the enzyme substrate and a microorganism that does not comprise an enzyme that reacts with the enzyme substrate. Can be distinguished between.

［００１３］ 用語「含む」及びその変化形は、これらの用語が、本説明及び特許請求の範囲に現れる場合、限定する意味を有するものではない。 [0013] The terms "including" and variations thereof do not have a limiting meaning where these terms appear in the description and claims.

［００１４］ 本明細書で使用するところの「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」及び「１つ以上の」は、互換可能に使用される。したがって、例えば、微生物は、「１つ以上の」微生物を意味すると解釈され得る。 [0014] As used herein, "a", "an", "the", "at least one" and "one or more" are used interchangeably. Thus, for example, a microorganism can be taken to mean "one or more" microorganisms.

［００１５］ 用語「及び／又は」とは、列記される要素のうちの１つ若しくは全て、又は列記される要素のうちの任意の２つ以上の組み合わせを意味する。 [0015] The term "and / or" means one or all of the listed elements, or a combination of any two or more of the listed elements.

［００１６］ また本明細書では、終端点による数値範囲の詳細説明は、その範囲内に含まれる全ての数を包含する（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを包含する）。 [0016] Also herein, a detailed description of a numerical range by endpoints includes all numbers subsumed within that range (eg, 1 to 5 is 1, 1.5, 2, 2.75). 3, 3.80, 4, 5, etc.).

［００１７］ 上記の本発明の「課題を解決するための手段」は、開示される実施形態のそれぞれ、又は本発明のあらゆる実装を説明することを意図するものではない。以下の説明により、例示的実施形態を、より具体的に例示する。本出願の全体にわたる幾つかの箇所で、実施例のリストを通じて指針が提供され、それらの実施例は、様々な組み合わせで使用することができる。いずれの場合でも、記載されるリストは、代表的な群としての役割のみを果たすものであり、排他的なリストとして解釈するべきではない。 [0017] The above summary of the present invention is not intended to describe each disclosed embodiment or every implementation of the present invention. The following description illustrates an exemplary embodiment more specifically. In several places throughout the application, guidance is provided through lists of examples, which examples can be used in various combinations. In any case, the list described serves only as a representative group and should not be interpreted as an exclusive list.

［００１８］ これら及び他の実施形態の追加の詳細を添付図及び以下の説明にて提示する。他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面から、並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。 [0018] Additional details of these and other embodiments are presented in the accompanying drawings and the description below. Other features, objects, and advantages will be apparent from the description and drawings, and from the claims.

［００１９］ 本開示による、サルモネラ微生物を検出する培養デバイスの一実施形態の上面斜視図。[0019] FIG. 6 is a top perspective view of one embodiment of a culture device for detecting Salmonella microorganisms according to the present disclosure. ［００２０］ デバイスに接種するための「開放」位置にある培養デバイスを示す、図１の培養デバイスの平面図。[0020] FIG. 2 is a plan view of the culture device of FIG. 1 showing the culture device in an “open” position for inoculating the device.

［詳細な説明］
［００２１］ 食品試料中のサルモネラ微生物を検出するための現在の方法は、非標的微生物（例えば、非サルモネラエンテロバクテリアセエ：シトロバクター、大腸菌、プロテウス／モルガネラ／プロビデンシア、非エンテロバクテリアセエ（non-Enterobactericeae）：エロモナス等）に対して、標的（サルモネラ）微生物の数及び／又は濃度を増加させるために、選択増菌手順の使用を含む。典型的には１６〜４８時間続く増菌手順後に、得られた培養物は、例えば、めっき技術、免疫診断技術（例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫クロマトグラフィ）、及び遺伝学的技術（例えば、ＰＣＲ、ｒｔ−ＰＣＲ、ハイブリッド形成技術）等、当該技術分野において既知である種々の技術によって、サルモネラ微生物の存在に対して試験され得る。技術のそれぞれは、サルモネラ微生物を同定するために追加の時間を必要とし、技術を実施するために、及び／又は結果を解釈するために、高度な訓練を受けた操作者を必要とし、多くの場合、高価な試薬、デバイス、及び／又は装置を必要とする。 [Detailed description]
[0021] Current methods for detecting Salmonella microorganisms in food samples include non-target microorganisms (eg, non-Salmonella enterobacteriaceae: Citrobacter, E. coli, Proteus / Morganella / Providencia, non-Enterobactericeae ): Aeromonas, etc.) to include the use of selective enrichment procedures to increase the number and / or concentration of target (Salmonella) microorganisms. After an enrichment procedure that typically lasts 16-48 hours, the resulting culture can be used, for example, for plating techniques, immunodiagnostic techniques (eg, ELISA, immunochromatography), and genetic techniques (eg, PCR, rt- It can be tested for the presence of Salmonella microorganisms by various techniques known in the art, such as PCR, hybridization techniques). Each of the techniques requires additional time to identify Salmonella microorganisms, requires highly trained operators to perform the techniques and / or interpret the results, and many In some cases, expensive reagents, devices, and / or equipment are required.

［００２２］ 本開示は、サルモネラ微生物を検出するための培養デバイスを提供する。図１は、本開示による、部分的に開放した培養デバイス１１０の一実施形態の上面斜視図を示す。培養デバイス１１０は、米国特許第４，５６５，７８３号に開示される、乾燥フィルム培養デバイスと構造が似ており、それは、参照により全体として本明細書に組み込まれる。 [0022] The present disclosure provides a culture device for detecting Salmonella microorganisms. FIG. 1 shows a top perspective view of one embodiment of a partially open culture device 110 according to the present disclosure. The culture device 110 is similar in structure to the dry film culture device disclosed in US Pat. No. 4,565,783, which is hereby incorporated by reference in its entirety.

［００２３］ 培養デバイス１１０は、自己支持性防水基質１１２と、カバーシート１２４とを備える。閉鎖位置では、カバーシート１２４は、基質１１２に隣接する。 [0023] The culture device 110 includes a self-supporting waterproof substrate 112 and a cover sheet 124. In the closed position, the cover sheet 124 is adjacent to the substrate 112.

［００２４］ 基質１１２は好ましくは、水を吸着しないか又は他の方法で水による影響を受けないポリエステル、ポリプロピレン、又はポリスチレン等の材料の比較的剛性のフィルムである。厚さ約０．００４〜０．００７インチ（０．１０〜０．１８ｍｍ）のポリエステルフィルム、厚さ約０．００４〜０．００８インチ（０．１０〜０．２０ｍｍ）のポリプロピレンフィルム、及び厚さ約０．０１５インチ（０．３８ｍｍ）のポリスチレンフィルムは、良好に機能することがわかっている。他の好適な基材には、ポリエチレン又は他の耐水性コーティングを有する紙が挙げられる。基質１２は、使用者が細菌コロニーを基質を介して視察することを望むか否かによって、透明又は不透明のどちらかであり得る。細菌コロニーの集計を容易にするために、基質１２は好ましくは、その上に印刷される正方格子パターンを有する。 [0024] The substrate 112 is preferably a relatively rigid film of a material such as polyester, polypropylene, or polystyrene that does not adsorb water or otherwise be affected by water. A polyester film having a thickness of about 0.004 to 0.007 inches (0.10 to 0.18 mm), a polypropylene film having a thickness of about 0.004 to 0.008 inches (0.10 to 0.20 mm), and a thickness About 0.015 inch (0.38 mm) polystyrene film has been found to work well. Other suitable substrates include paper with polyethylene or other water resistant coatings. The substrate 12 can be either transparent or opaque, depending on whether the user wishes to view the bacterial colonies through the substrate. In order to facilitate counting of bacterial colonies, the substrate 12 preferably has a square lattice pattern printed thereon.

［００２５］ 基質１２は、その上面が接着剤１１６の層によってコーティングされ、その層は、粉末１１４を保持するのに役立ち、容易な水和のために、均一の単層中に乾燥ゲル化剤及び／又栄養素を含む。接着剤１１６は、非水溶性であり、微生物の増殖を阻害しないものでなければならない。好ましくは、接着剤１１６は、接着剤１１６でコーティングされたフィルムを通して細菌コロニーを見ることができるように濡れた時に、十分に透明である。接着剤１１６は、感圧性であることが好ましい。しかしながら、より融点の低い物質がより融点の高い基材上にコーティングされている熱活性化接着剤を用いてもよい。 [0025] The substrate 12 is coated on its top surface with a layer of adhesive 116, which serves to hold the powder 114 and, for easy hydration, a dry gelling agent in a uniform monolayer. And / or contains nutrients. The adhesive 116 must be water insoluble and not inhibit microbial growth. Preferably, the adhesive 116 is sufficiently transparent when wet so that bacterial colonies can be seen through the film coated with the adhesive 116. The adhesive 116 is preferably pressure sensitive. However, a heat activated adhesive in which a lower melting point material is coated on a higher melting point substrate may be used.

［００２６］ ゴム糊等の水活性化接着剤も有用である場合がある。接着剤１１６は、好ましくは粉末化されたゲル化剤及び／又は栄養素の粒子の直径未満の厚さで基質１１２上に被覆されるべきである。目的は、粒子を基質に接着させるために十分な接着剤１１６を塗布することであるが、あまり接着剤が多いと粒子が完全に接着剤１１６に埋め込まれてしまう。 [0026] Water activated adhesives such as rubber glue may also be useful. The adhesive 116 should preferably be coated on the substrate 112 with a thickness less than the diameter of the powdered gelling agent and / or nutrient particles. The objective is to apply enough adhesive 116 to adhere the particles to the substrate, but too much adhesive will cause the particles to be completely embedded in the adhesive 116.

［００２７］ 粉末１１４の均一な単層は、水和のために露出される十分な表面積を有することが所望される。概して、０．０００２〜０．０００５インチ（０．００５１〜０．０１３ｍｍ）の範囲の厚さの接着層が好適である。好ましい接着剤１１６は、イソオクチルアクリレート／アクリルアミドのコポリマー（９４／６のモル比で）である。使用されてもよい他の感圧性接着剤には、イソオクチルアクリレート／アクリル酸（９５／５又は９４／６のモル比で）及びシリコーンゴムが挙げられる。水への露出時に乳化する接着剤は、あまり好ましくないが、不透明基材と共に、又はコロニー可視化が必要とされない場合に、使用されてもよい。 [0027] A uniform monolayer of powder 114 is desired to have sufficient surface area to be exposed for hydration. In general, an adhesive layer having a thickness in the range of 0.0002 to 0.0005 inches (0.0051 to 0.013 mm) is preferred. A preferred adhesive 116 is an isooctyl acrylate / acrylamide copolymer (in a 94/6 molar ratio). Other pressure sensitive adhesives that may be used include isooctyl acrylate / acrylic acid (in a 95/5 or 94/6 molar ratio) and silicone rubber. Adhesives that emulsify upon exposure to water are less preferred, but may be used with opaque substrates or where colony visualization is not required.

［００２８］ 冷水可溶性粉末１１４の単層は、接着層１１６に均一に接着される。粉末１１４は、ゲル化剤、微生物を増殖させるための１つ以上の栄養素、及びゲル化剤と微生物を増殖させるための１つ以上の栄養素との混合物からなる群から選択される、少なくとも１つの成分を含む。本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、用語「粉末」は、４００マイクロメートル未満の平均直径を有する超微粒子状物質を指す。本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、用語「冷水に可溶」は、室温において水中で溶液を形成する物質を指す。 [0028] The single layer of cold water soluble powder 114 is uniformly bonded to the adhesive layer 116. The powder 114 is at least one selected from the group consisting of a gelling agent, one or more nutrients for growing microorganisms, and a mixture of the gelling agent and one or more nutrients for growing microorganisms. Contains ingredients. As used herein and in the claims, the term “powder” refers to an ultrafine particulate material having an average diameter of less than 400 micrometers. As used herein and in the claims, the term “soluble in cold water” refers to a substance that forms a solution in water at room temperature.

［００２９］ 本発明のデバイスで使用される粉末の「冷水可溶性」は、例えば、これら粉末に適切なゲル化剤が含まれることに起因する場合がある。粉末１１４中に含むのに好適なゲル化剤には、室温において水中で溶液を形成する、天然及び合成の両方のゲル化剤が挙げられる。ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム、及びアルギン等のゲル化剤は、室温で水溶液を形成し、「冷水可溶性」である粉末を提供するために好適なゲル化剤である。 [0029] The "cold water solubility" of the powders used in the devices of the present invention may be due, for example, to the inclusion of a suitable gelling agent in these powders. Suitable gelling agents for inclusion in powder 114 include both natural and synthetic gelling agents that form solutions in water at room temperature. Gelling agents such as hydroxyethylcellulose, carboxymethylcellulose, polyacrylamide, locust bean gum, and algin are suitable gelling agents to form an aqueous solution at room temperature and provide a powder that is “cold water soluble”.

［００３０］ 示されるように、粉末１１４は、ゲル化剤のみを含んでもよい。製造時、デバイスがゲル化剤のみを含む粉末を含有している場合、エンドユーザは、増殖させたい微生物の種類に「合わせられた」独自の特別な栄養素を添加する。例えば、乾燥粉末栄養素が、エタノール又は「フレオン」等の迅速に蒸発する液体に懸濁させられてもよい。他の例では、乾燥粉末栄養素は、水溶液に懸濁又は溶解していてもよい。液体のアリコートは、接着剤及びゲル化剤で既にコーティングされている基材１１２の表面に添加される。液体は蒸発させられ、ゲル化剤とともに十分な栄養素を残す。 [0030] As shown, the powder 114 may include only a gelling agent. At the time of manufacture, if the device contains a powder containing only a gelling agent, the end-user adds its own special nutrients “tuned” to the type of microorganism that they want to grow. For example, dry powder nutrients may be suspended in a rapidly evaporating liquid such as ethanol or “freon”. In other examples, the dry powder nutrient may be suspended or dissolved in an aqueous solution. A liquid aliquot is added to the surface of substrate 112 already coated with an adhesive and gelling agent. The liquid is evaporated, leaving enough nutrients with the gelling agent.

［００３１］ ゲル化剤が粉末１１４中に含まれる場合、基質上に配置される、例えば、１〜３ミリリットルの所定量の水又は水性試料が、２５℃で、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ Ｍｏｄｅｌ Ｌ ＶＦ粘度計を用いて、６０ｒｐｍで測定される時に、約１５００ｃｐｓ以上の粘度を有するゲルを形成するように、十分な量のゲル化剤が基質１１２に接着される。この粘度のゲルは、便利な取り扱い及び積層を可能にし、明確なコロニー同定を提供する。ほとんどの場合、３．１４平方インチ（２０．３ｃｍ２）の表面領域上の０．０２５〜０．０５０グラムのグアーガムが、１〜３ミリリットルの水性試料で水和される時に、十分な粘性ゲルを提供する。単位面積当たりのコーティング重量を制御するために、粉末粒径が使用され得る。例えば、約１００メッシュのグアーガムは、重量約０．０５グラム／直径２インチ（０．００９８ｇ／ｃｍ）のディスクに対してコーティングし、４００メッシュのグアーガムは、重量０．０２５グラム／直径２インチ（０．００４９ｇ／ｃｍ）のディスクに対してコーティングする。更なる量のゲル化剤及び／又は栄養素が必要とされる場合、この実施形態のカバーシート１２４もまた、本明細書に記載されるようにコーティングされてもよい。 [0031] When a gelling agent is included in the powder 114, a predetermined amount of water or an aqueous sample, eg, 1-3 milliliters, placed on the substrate is used at 25 ° C. using a Brookfield Model L VF viscometer. Thus, a sufficient amount of gelling agent is adhered to the substrate 112 so as to form a gel having a viscosity of about 1500 cps or greater when measured at 60 rpm. This viscosity gel allows for convenient handling and lamination and provides clear colony identification. In most cases, 0.025 to 0.050 grams of guar gum on a surface area of 3.14 square inches (20.3 cm 2 ) is sufficient for a viscous gel when hydrated with 1 to 3 milliliters of an aqueous sample. I will provide a. Powder particle size can be used to control the coating weight per unit area. For example, about 100 mesh guar gum is coated on a disc weighing about 0.05 grams / 2 inches in diameter (0.0098 g / cm), and 400 mesh guar gum is weight 0.025 grams / diameter 2 inches ( 0.0049 g / cm) disk. If additional amounts of gelling agent and / or nutrients are required, the cover sheet 124 of this embodiment may also be coated as described herein.

［００３２］ いずれの実施形態においても、本開示の培養デバイスは、例えば、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）等の非識別指示薬を含むことができる。幾つかの実施形態では、非識別指示薬系を粉末１１４に組み込むことが好ましい場合がある。あるいは、非識別指示薬系（例えば、染料）が、接着剤１１６に組み込まれてもよい。好適な染料は、任意の増殖微生物により代謝され、コロニーをより容易な可視化のために着色させるものである。このような染料の例には、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ベラトリルテトラゾリウムブルー、及び関連する染料が挙げられる。 [0032] In any embodiment, the culture devices of the present disclosure can include a non-identifying indicator such as, for example, triphenyltetrazolium chloride (TTC). In some embodiments, it may be preferable to incorporate a non-identifying indicator system into the powder 114. Alternatively, a non-identifying indicator system (eg, a dye) may be incorporated into the adhesive 116. Suitable dyes are those that are metabolized by any growing microorganism and color the colonies for easier visualization. Examples of such dyes include triphenyltetrazolium chloride (TTC), p-tolyltetrazolium red, tetrazolium violet, veratryl tetrazolium blue, and related dyes.

［００３３］ 幾つかの使用に対して、ストリーキングによって、微生物の接種を可能にするのに十分な剛性を有する培地を形成することが望ましく場合がある。ストリーキングが可能な培地を形成するために、粉末１１４中の少量の架橋剤を含むことが望ましい場合があり、ここで、粉末１１４は、ゲル化剤を含む。例えば、グアーガムの場合、四ホウ酸カリウム、アルミニウム、又はカルシウム塩等の架橋剤が、粉末１１４の１．０重量％未満の量で添加されてもよい。対象とする微生物の増殖に実質的に影響を及ぼさない架橋剤を慎重に選択しなければならない。 [0033] For some uses, it may be desirable to form a medium that is stiff enough to allow inoculation of microorganisms by streaking. It may be desirable to include a small amount of a cross-linking agent in powder 114 to form a streakable medium, where powder 114 includes a gelling agent. For example, in the case of guar gum, a cross-linking agent such as potassium tetraborate, aluminum, or calcium salt may be added in an amount of less than 1.0% by weight of the powder 114. Care must be taken to select a cross-linking agent that does not substantially affect the growth of the microorganism of interest.

［００３４］ カバーシート１２４は好ましくは、細菌コロニーの可視化、及び任意に、集計を容易にするために透明であり、細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性である。本明細書及び特許請求の範囲で使用される「細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性」は、デバイスの運送、保管、及び使用中に脱水培地の所望されない汚染を防止する、並びにインキュベーション期間の間に微生物の増殖を助ける環境を提供する、カバーシートを指す。概して、カバーシート１２４は、基質１１２と同一の特性を有するが、同じくらい剛性である必要はない。カバーシート１２４に好ましい材料は、１．６ミル（０．０４１ｍｍ）の２軸配向ポリプロピレンフィルムである。カバーシート１２４は、接着剤の任意の層でコーティングされてもよい（図示せず）。ある特定の好ましい実施形態では、カバーシート１２４は、例えば、両面接着テープ１２６、又は感圧接着剤のみによって、基質１１２に接着されてもよい。 [0034] The cover sheet 124 is preferably transparent to facilitate visualization and optional counting of bacterial colonies and is substantially impermeable to bacteria and water vapor. As used herein and in the claims, “substantially impermeable to bacteria and water vapor” prevents unwanted contamination of the dehydrated medium during transport, storage, and use of the device, as well as incubation. A cover sheet that provides an environment that helps the growth of microorganisms during a period of time. In general, cover sheet 124 has the same properties as substrate 112, but need not be as rigid. A preferred material for the cover sheet 124 is a 1.6 mil (0.041 mm) biaxially oriented polypropylene film. Cover sheet 124 may be coated with any layer of adhesive (not shown). In certain preferred embodiments, the cover sheet 124 may be adhered to the substrate 112 by, for example, double-sided adhesive tape 126 or pressure sensitive adhesive alone.

［００３５］ 実質的に水を含まず、かつゲル化剤、１つ以上の選択剤、微生物を増殖させるための１つ以上の栄養素、非識別指示薬系、１つ以上の識別指示薬系、及び上記の構成成分のうちのいずれか２つ以上の組み合わせからなる群から選択される構成成分を含む、冷水で再構成可能な材料から本質的になるコーティング１２０が、カバーシート１２４の表面の少なくとも一部分にコーティングされる。本明細書及び特許請求の範囲で使用されるフレーズ「実質的に水を含まない」は、いったんそれが周囲環境と平衡化できるようになると、およそ、脱水コーティングの含水量以下の含水量を有するコーティングを指す。 [0035] A substantially water free and gelling agent, one or more selective agents, one or more nutrients for growing microorganisms, a non-identifying indicator system, one or more identifying indicator systems, and the above A coating 120 consisting essentially of cold water reconfigurable material, comprising a component selected from the group consisting of combinations of any two or more of the components of at least a portion of the surface of the cover sheet 124 Coated. The phrase “substantially free of water” as used herein and in the claims has a water content approximately equal to or less than the water content of the dehydrated coating once it is allowed to equilibrate with the surrounding environment. Refers to the coating.

［００３６］ コーティング１２０で使用される材料は、冷水で再構成可能である。本明細書及び特許請求の範囲で使用される「冷水で再構成可能」は、室温において水中で溶液、ゾル、又はゲルを形成する材料を指す。この実施形態のコーティングの中に含むのに好適なゲル化剤（これらがコーティング中に含有されるならば）には、室温において水中で溶液を形成する、上記のゲル化剤が挙げられる。更に、寒天は、熱湯で溶解され、コーティングとして堆積された後に、「冷水で再構成可能」になる材料であることがわかっている。 [0036] The material used in the coating 120 can be reconstituted with cold water. As used herein and in the claims, “cold water reconstitutable” refers to a material that forms a solution, sol, or gel in water at room temperature. Gelling agents suitable for inclusion in the coating of this embodiment (if they are included in the coating) include those gelling agents described above that form a solution in water at room temperature. Furthermore, agar has been found to be a material that becomes “reconfigurable with cold water” after being dissolved in hot water and deposited as a coating.

［００３７］ 好ましいコーティング混合物は、以下の成分を混合することによって調製される。 [0037] A preferred coating mixture is prepared by mixing the following ingredients.

Figure 2014513555
Figure 2014513555

［００３８］ 上記の混合物が、少なくとも２つの選択剤（例えば、塩化ナトリウム及び胆汁酸塩Ｎｏ．３）を含むことが、当業者によって理解されるであろう。更に、上記の混合物が、識別指示薬として、又は識別指示薬系の一部分として機能し得る少なくとも２つの構成成分（例えば、フェノールレッド及び５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）を含むことが、当業者によって理解されるであろう。例えば、フェノールレッドは、例えば、サルモネラ微生物等の微生物の存在を示すための識別指示薬系を形成するために、代謝可能化合物（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース又は尿素）と剤形中で使用され得る。サルモネラ微生物は、２−デオキシ−Ｄ−リボースを酸副生成物に発酵させ、それにより、ｐＨ指示薬の存在下で視覚的に検出され得る酸領域を生成することができる。サルモネラ微生物は更に、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドと反応し、黒に着色されたコロニーを形成することができる。非サルモネラ微生物（例えば、コリフォーム微生物）は、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドと反応し、青緑色に着色されたコロニーを形成することができる。驚くべきことに、上記の発色性酵素基質の両方が、本開示の本発明の物品中で、同一の発色団（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−）を含む場合でさえ、それらは、微生物によって加水分解され、視覚的に区別できる着色生成物を生成する。指示薬系は、接着層、粉末層、及び／又は乾燥、再水和可能コーティングにおいて、培養デバイスに組み込まれてもよい。 [0038] It will be appreciated by those skilled in the art that the above mixture comprises at least two selective agents (eg, sodium chloride and bile salt No. 3). In addition, the mixture described above can function as an identification indicator or as part of an identification indicator system (eg, phenol red and 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galacto). It will be understood by those skilled in the art to include pyranosides). For example, phenol red is used in dosage forms with metabolizable compounds (eg, 2-deoxy-D-ribose or urea) to form an identification indicator system to indicate the presence of microorganisms such as, for example, Salmonella microorganisms. Can be done. Salmonella microorganisms can ferment 2-deoxy-D-ribose to an acid byproduct, thereby producing an acid region that can be visually detected in the presence of a pH indicator. Salmonella microorganisms can further react with 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside to form black colored colonies. Non-Salmonella microorganisms (eg, colliform microorganisms) can react with 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside to form blue-green colored colonies. . Surprisingly, even when both of the chromogenic enzyme substrates described above contain the same chromophore (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-) in the inventive article of the present disclosure. They are hydrolyzed by microorganisms to produce colored products that are visually distinguishable. The indicator system may be incorporated into the culture device in an adhesive layer, a powder layer, and / or a dry, rehydratable coating.

［００３９］ 上記の混合物に挙げられる選択的成分に加えて、コーティング混合物は更に、サルモネラ微生物の増殖を可能にする一方で、種々の他の（例えば、「非標的」）微生物の増殖を実質的に妨げる、高度に選択的な抗生物質の組み合わせを含むことができる。かかる組み合わせの非限定的な実施例としては、セフスロジンナトリウム塩（約１２ｍｇ／Ｌ）、ナリジクス酸ナトリウム塩（約４ｍｇ／Ｌ）、ストレプトマイシン硫酸塩（約４ｍｇ／Ｌ）、及びメチシリンナトリウム塩（約４５ｍｇ／Ｌ）の混合物が挙げられる。 [0039] In addition to the optional ingredients listed in the above mixture, the coating mixture further allows for the growth of various other (eg, "non-target") microorganisms while allowing growth of Salmonella microorganisms. Highly selective antibiotic combinations can be included. Non-limiting examples of such combinations include cefsulodin sodium salt (about 12 mg / L), nalidixic acid sodium salt (about 4 mg / L), streptomycin sulfate (about 4 mg / L), and methicillin sodium salt ( About 45 mg / L).

［００４０］ 図１を再び参照すると、カバーシート１２４は、基質１１２に面するカバーシート１２４の表面に適用されるスペーサ要素１１８を含む。スペーサ要素１１８は、カバーシート１２４上で、乾燥、再水和可能コーティング１２０を露出するために、中心を通過する円形穴１２２を含む。穴１２２の壁は、水和の後に培地を限定する所定の寸法及び形状のウェルを提供する。スペーサ要素１１８は、所望の体積、例えば、１、２、又は３ミリリットルのウェルを形成できるように十分厚くなければならない。独立気泡ポリエチレンフォーム又はポリスチレンフォームは、スペーサ要素１１８の好ましい材料であるが、疎水性（非濡れ性）であり、微生物に対して不活性、かつ滅菌に対して耐え得る任意の材料を用いることができる。 [0040] Referring back to FIG. 1, the cover sheet 124 includes spacer elements 118 that are applied to the surface of the cover sheet 124 that faces the substrate 112. The spacer element 118 includes a circular hole 122 passing through the center to expose a dry, rehydratable coating 120 on the cover sheet 124. The walls of the holes 122 provide wells of a predetermined size and shape that define the medium after hydration. The spacer element 118 must be thick enough to form a desired volume, eg, 1, 2, or 3 milliliters of well. Closed-cell polyethylene foam or polystyrene foam is the preferred material for spacer element 118, but any material that is hydrophobic (non-wetting), inert to microorganisms and capable of withstanding sterilization may be used. it can.

［００４１］ カバーシート１２４を横断する穿孔１２６もまた、図１に示される。穿孔１２６は、培養デバイス１１０の開放を容易にし、幾つかの実施形態では、図２に示されるように、培養デバイス１１０を開放した状態で保持することができる。 [0041] A perforation 126 across the cover sheet 124 is also shown in FIG. The perforations 126 facilitate the opening of the culture device 110, and in some embodiments can hold the culture device 110 open as shown in FIG.

［００４２］ 図２は、本開示の開放した培養デバイス１１０の平面図を示す。基質１１２、カバーシート１２４、スペーサ要素１１８、穴１２２、及び穿孔１２６が、図２に示される。この位置において、プレートに接種するために、液体試料（図示せず）が基質１１２上、又はスペーサ要素１１８によって形成されるウェル中に配置され得る。 [0042] FIG. 2 shows a top view of the open culture device 110 of the present disclosure. Substrate 112, cover sheet 124, spacer element 118, hole 122, and perforation 126 are shown in FIG. In this position, a liquid sample (not shown) can be placed on the substrate 112 or in a well formed by the spacer element 118 to inoculate the plate.

［００４３］ サルモネラ微生物の存在に対して試料を試験するために、本開示の薄膜培養デバイスが使用され得る。試料材料としては、サルモネラ微生物を含有することが疑われる試料材料が挙げられる。試料材料は、液体、固体、液体中で懸濁又は分散した固体、ヒドロゲルであってもよい。実施形態のいずれかにおいて、試料は、濃縮（例えば、濾過、沈殿、凝集、遠心分離、吸収、及び／又は吸着によって）、増菌（例えば、選択増殖増菌）、並びに精製（例えば、クロマトグラフィー精製）が挙げられるがこれらに限定されない、１つ以上の試料調製技術に供された微生物及び／又は材料（例えば、食品、飲料）を含んでもよい。 [0043] The thin film culture device of the present disclosure can be used to test a sample for the presence of Salmonella microorganisms. Sample materials include sample materials suspected of containing Salmonella microorganisms. The sample material may be a liquid, a solid, a solid suspended or dispersed in a liquid, a hydrogel. In any of the embodiments, the sample is concentrated (eg, by filtration, precipitation, aggregation, centrifugation, absorption, and / or adsorption), enrichment (eg, selective growth enrichment), and purification (eg, chromatography). May include, but is not limited to, microorganisms and / or materials (eg, food, beverages) that have been subjected to one or more sample preparation techniques.

［００４４］ 一実施形態において、培養デバイスを水和させ、接種された培養デバイスを形成するために、規定の体積の液体試料は、カバーシート上のコーティング及び基質上の粉末と接触させられ得る。代替実施形態では、培養デバイスの水で再構成可能なコーティングは、水性液体（例えば、滅菌水）で水和されてもよく、試料は、任意にストリークプレート技術を使用して、水和した培養デバイスに適用され得る（例えば、ピペット、綿棒、ループによって）。好ましくは、培養デバイス中のコーティングは、第１の指示薬系（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース、及びフェノールレッド等のｐＨ指示薬）、非識別指示薬系（例えば、ＴＴＣ）、並びに第２の指示薬系（例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、「Ｘ−ｇａｌ」）を含む。任意に、培養デバイスは、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド、β−ガラクトシダーゼ酵素活性の誘導物質等、指示薬系のうちの１つ以上と関連する微生物活性のための誘導物質を含んでもよい。サルモネラ微生物の存在を示すために使用される別の識別指示薬系は、例えば、尿素、及びフェノールレッド等のｐＨ指示薬を含む。 [0044] In one embodiment, a defined volume of liquid sample can be contacted with the coating on the cover sheet and the powder on the substrate to hydrate the culture device and form an inoculated culture device. In an alternative embodiment, the water reconstitutable coating of the culture device may be hydrated with an aqueous liquid (eg, sterile water) and the sample is optionally hydrated using streak plate technology. It can be applied to the device (eg by pipette, swab, loop). Preferably, the coating in the culture device includes a first indicator system (eg, pH indicators such as 2-deoxy-D-ribose and phenol red), a non-discriminating indicator system (eg, TTC), and a second indicator. Including systems such as 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside, “X-gal”. Optionally, the culture device may include an inducer for microbial activity associated with one or more of the indicator systems, such as isopropyl-β-D-thiogalactoside, an inducer of β-galactosidase enzyme activity. Another distinguishing indicator system used to indicate the presence of Salmonella microorganisms includes, for example, urea and pH indicators such as phenol red.

［００４５］ 培養デバイスの接種後に、サルモネラ微生物の増殖を促進するために、培養デバイスは、ある期間にわたってインキュベートされ得る。当業者は、サルモネラの増殖を促進するために最適な温度を認識するであろう。培養デバイスは、約０．５〜約４８時間、好ましくは約０．５〜約２４時間、より好ましくは約０．５時間〜約６時間にわたってインキュベートされ得る。 [0045] After inoculation of the culture device, the culture device may be incubated for a period of time to promote the growth of Salmonella microorganisms. One skilled in the art will recognize the optimal temperature to promote Salmonella growth. The culture device may be incubated for about 0.5 to about 48 hours, preferably about 0.5 to about 24 hours, more preferably about 0.5 hours to about 6 hours.

［００４６］ インキュベーション期間後に、接種された培養培地は、サルモネラ微生物の存在可能性の指示に対して観察され得る。１つの指示は、ＴＴＣからのホルマザン色素の形成による、赤色コロニーの出現である。更に、赤色コロニーを包囲する酸領域は、コロニーがサルモネラ微生物を含むことを示し得る反応である、コロニー中の細菌が、２−デオキシ−Ｄ−リボースを酸副生成物に発酵させたことを示す。コロニーがＸ−ｇａｌとの反応と関連する青緑色に着色された領域を有する場合、これは、コロニーがサルモネラ微生物ではない可能性があることを示す。 [0046] After the incubation period, the inoculated culture medium can be observed against an indication of the presence of Salmonella microorganisms. One indication is the appearance of red colonies due to the formation of formazan dye from TTC. In addition, the acid region surrounding the red colony indicates that the bacteria in the colony have fermented 2-deoxy-D-ribose to an acid byproduct, a reaction that can indicate that the colony contains Salmonella microorganisms. . If the colony has a blue-green colored area associated with reaction with X-gal, this indicates that the colony may not be a Salmonella microorganism.

［００４７］ 酸領域（例えば、ｐＨ指示薬がフェノールレッドである時、黄色領域）によって包囲される赤色コロニーの存在は、培養デバイス中のサルモネラ微生物の存在を示唆する。この推定的結果は更に、別の識別指示薬（例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）をコロニーと接触させることによって裏付けられ得る。幾つかの実施形態では、これは、プレートを開放し、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドの溶液を増殖培地に添加することによってなされ得る。あるいは、これは、プレートを開放し、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドを含むコーティングを含む、乾燥、再水和可能物品を添加することによってなされ得る。物品は、米国特許第６，０２２，６８２号に記載されるように製造され得、それは、参照によりその全体が組み込まれる。５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドは、例えば、約３０分〜約３６０分等の期間にわたって、培養デバイスの増殖領域と接触させられる。任意に、接触は、高温（例えば、３７℃）で生じ得る。 [0047] The presence of red colonies surrounded by an acid region (eg, the yellow region when the pH indicator is phenol red) suggests the presence of Salmonella microorganisms in the culture device. This putative result can be further supported by contacting another colony indicator (eg, 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside) with the colony. In some embodiments, this can be done by opening the plate and adding a solution of 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside to the growth medium. Alternatively, this is done by opening the plate and adding a dry, rehydratable article comprising a coating comprising 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside. obtain. The article can be manufactured as described in US Pat. No. 6,022,682, which is incorporated by reference in its entirety. 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside is contacted with the growth region of the culture device for a period of time, for example, from about 30 minutes to about 360 minutes. Optionally, the contact can occur at an elevated temperature (eg, 37 ° C.).

［００４８］ ５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドを増殖培地と接触させた後に、培養デバイスは、コロニーと関連する非常に暗い（例えば、ほぼ黒）色に対して観察され得る。酸領域と関連する任意の赤色コロニー、及び５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシドの加水分解からの非常に暗い（例えば、ほぼ黒）色は、サルモネラ微生物である可能性が非常に高い。 [0048] After contacting 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside with growth medium, the culture device is very dark (eg, nearly black) associated with the colony. Can be observed against color. Any red colonies associated with the acid region, and the very dark (eg, nearly black) color from hydrolysis of 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside is a salmonella Very likely a microorganism.

［実施形態］
［００４９］ 実施形態１は、標的微生物を検出するための培養デバイスであって、
標的微生物の増殖を促進するための栄養素と、セフスロジン、ナリジクス酸、ストレプトマイシン、メチシリン、及び胆汁酸塩を含む複数の選択剤とを含む選択的増殖培地と、
第１の識別指示薬系と、
ゲル化剤と、を含む、培養デバイスである。 [Embodiment]
[0049] Embodiment 1 is a culture device for detecting a target microorganism comprising:
A selective growth medium comprising a nutrient for promoting the growth of a target microorganism and a plurality of selective agents including cefsulodin, nalidixic acid, streptomycin, methicillin, and bile salts;
A first identification indicator system;
A culture device comprising a gelling agent.

［００５０］ 実施形態２は、標的微生物の存在を示すための非識別指示薬系を更に含む、実施形態１に記載の培養デバイスである。 [0050] Embodiment 2 is the culture device of embodiment 1, further comprising a non-identifying indicator system for indicating the presence of the target microorganism.

［００５１］ 実施形態３は、第１の識別指示薬系がｐＨ指示薬を含む、実施形態１及び２に記載の培養デバイスである。 [0051] Embodiment 3 is the culture device of embodiments 1 and 2, wherein the first identification indicator system comprises a pH indicator.

［００５２］ 実施形態４は、非標的微生物の存在を指すための第２の識別指示薬系を更に含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の培養デバイスである。 [0052] Embodiment 4 is the culture device of any one of embodiments 1-3, further comprising a second identification indicator system for indicating the presence of a non-target microorganism.

［００５３］ 実施形態５は、第２の識別指示薬系が発色性β−ガラクトシダーゼ酵素基質を含む、実施形態４に記載の培養デバイスである。 [0053] Embodiment 5 is the culture device of embodiment 4, wherein the second distinguishing indicator system comprises a chromogenic β-galactosidase enzyme substrate.

［００５４］ 実施形態６は、微生物β−ガラクトシダーゼ酵素活性の誘導物質を更に含む、実施形態４又は実施形態５に記載の培養デバイスである。 [0054] Embodiment 6 is the culture device of embodiment 4 or embodiment 5, further comprising an inducer of microbial β-galactosidase enzyme activity.

［００５５］ 実施形態７は、選択的増殖培地が、乾燥、再水和可能選択的増殖培地を含み、ゲル化剤が、乾燥、冷水可溶性ゲル化剤を含む、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の培養デバイスである。 [0055] Embodiment 7 is any of Embodiments 1-6, wherein the selective growth medium comprises a dry, rehydratable selective growth medium and the gelling agent comprises a dry, cold water soluble gelling agent. It is a culture | cultivation device as described in one.

［００５６］ 実施形態８は、培養デバイスが薄膜培養デバイスを含む、実施形態７に記載の培養デバイスである。 [0056] Embodiment 8 is the culture device of embodiment 7, wherein the culture device comprises a thin film culture device.

［００５７］ 実施形態９は、サルモネラ微生物を検出するためのシステムであって、
サルモネラ微生物に対して高度に選択的である栄養培地と、少なくとも２つの識別指示薬系とを含む培養デバイスであって、第１の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陽性指示薬であり、第２の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陰性指示薬である、培養デバイスと、
第３の識別指示薬系を含む検出物品であって、第３の識別指示薬系が、サルモネラ微生物の陽性指示薬である、検出物品と、を含む、システムである。 [0057] Embodiment 9 is a system for detecting Salmonella microorganisms, comprising:
A culture device comprising a nutrient medium that is highly selective for Salmonella microorganisms and at least two identification indicator systems, wherein the first identification indicator system is a positive indicator for Salmonella microorganisms and a second identification A culture device wherein the indicator system is a negative indicator for Salmonella microorganisms;
A detection article comprising a third identification indicator system, wherein the third identification indicator system comprises a detection article that is a positive indicator for Salmonella microorganisms.

［００５８］ 実施形態１０は、第２及び第３の識別指示薬系のそれぞれが、発色性酵素基質を含み、各発色性酵素基質が、炭水化物構成成分及び発色団を含む、実施形態９に記載のシステムである。 [0058] Embodiment 10 is according to embodiment 9, wherein each of the second and third distinguishing indicator systems comprises a chromogenic enzyme substrate, and each chromogenic enzyme substrate comprises a carbohydrate component and a chromophore. System.

［００５９］ 実施形態１１は、第２及び第３の識別指示薬系のそれぞれが、同一の発色団を含む、実施形態１０に記載のシステムである。 [0059] Embodiment 11 is the system of embodiment 10, wherein each of the second and third identification indicator systems comprises the same chromophore.

［００６０］ 実施形態１２は、第２の識別指示薬系が、β−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、実施形態９〜１１のいずれか１つに記載のシステム。 [0060] Embodiment 12 is the system of any one of Embodiments 9-11, wherein the second identification indicator system comprises a chromogenic indicator of β-galactosidase enzyme activity.

［００６１］ 実施形態１３は、第３の識別指示薬系が、α−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、実施形態９〜１１のいずれか１つに記載のシステム。 [0061] Embodiment 13 is the system of any one of Embodiments 9 to 11, wherein the third discriminating indicator system comprises a chromogenic indicator of α-galactosidase enzyme activity.

［００６２］ 実施形態１４は、サルモネラ微生物を検出する方法であって、
液体試料、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の培養デバイス、及び第３の識別指示薬系を提供することと、
接種された培養デバイスを形成するために、培養デバイス中で、規定の体積の試料を、選択的増殖培地；第１の指示薬系；存在する場合、非識別指示薬系；存在する場合、第２の指示薬系；及びゲル化剤と接触させることと、
第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、接種増殖培地を観察することと、
標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第３の識別を水和した増殖培地と接触させることと、
標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第３の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法である。 [0062] Embodiment 14 is a method of detecting a Salmonella microorganism comprising:
Providing a liquid sample, the culture device of any one of embodiments 1-8, and a third identification indicator system;
To form an inoculated culture device, a defined volume of sample is placed in the culture device in a selective growth medium; a first indicator system; a non-discriminating indicator system, if present; a second, if present. Contacting with an indicator system; and a gelling agent;
Incubating the inoculated culture device for a first period of time;
Observing the inoculation growth medium to detect an indication of the possible presence of the target microorganism in the sample;
Contacting the third identification with a hydrated growth medium when there is an indication of the possible presence of the target microorganism;
Observing a third discriminating indicator system in the hydrated growth medium for an indication of the presence of the target microorganism.

［００６３］ 実施形態１５は、サルモネラ微生物を検出する方法であって、
試料、実施形態８に記載の培養デバイス、及び第３の識別指示薬系を提供することと、
水和した増殖培地を形成するために、培養デバイス中で、規定の体積のサルモネラを含まない水性液体を、選択的増殖培地；第１の識別指示薬系；存在する場合、非識別指示薬系；存在する場合、第２の識別指示薬系；及びゲル化剤と接触させることと、
水和した増殖培地に試料を接種して、接種された培養デバイスを形成することと、
第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
標的微生物の試料中の存在可能性の指示を検出するために、水和した増殖培地を観察することと、
標的微生物の存在可能性の指示がある時に、第３の識別を水和した増殖培地と接触させることと、
標的微生物の存在の指示のために、水和した増殖培地中の第３の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法である。 [0063] Embodiment 15 is a method for detecting Salmonella microorganisms, comprising:
Providing a sample, the culture device of embodiment 8, and a third identification indicator system;
To form a hydrated growth medium, a defined volume of salmonella-free aqueous liquid is added to the selective growth medium; a first identification indicator system; if present, a non-identification indicator system; A second discriminating indicator system; and contacting with a gelling agent;
Inoculating a sample in a hydrated growth medium to form an inoculated culture device;
Incubating the inoculated culture device for a first period of time;
Observing a hydrated growth medium to detect an indication of the possible presence of the target microorganism in the sample;
Contacting the third identification with a hydrated growth medium when there is an indication of the possible presence of the target microorganism;
Observing a third discriminating indicator system in the hydrated growth medium for an indication of the presence of the target microorganism.

［００６４］ 実施形態１６は、標的微生物の存在可能性の指示を検出することが、非識別指示薬系及び第１の識別指示薬系と反応するが、第２の識別指示薬系とは反応しないコロニーを観察することを更に含む、実施形態１４又は実施形態１５に記載の方法である。 [0064] In embodiment 16, detecting an indication of the potential presence of a target microorganism reacts with a non-identification indicator system and a first identification indicator system, but does not react with a second identification indicator system. 16. The method of embodiment 14 or embodiment 15, further comprising observing.

［００６５］ 実施形態１７は、第２の構成成分を水和した増殖培地と接触させることの後に、方法が、第２の期間にわたって、培養デバイスをインキュベートすることを更に含む、実施形態１４〜１６のいずれか１つに記載の方法である。 [0065] Embodiment 17 is the embodiment 14-16, wherein the method further comprises incubating the culture device for a second period of time after contacting the second component with the hydrated growth medium. It is the method as described in any one of these.

［００６６］ 実施形態１８は、第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約０．５時間〜約２４時間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、実施形態１４〜１７のいずれか１つに記載の方法である。 [0066] Embodiment 18 is an embodiment where incubating the inoculated culture device for a first period comprises incubating the inoculated culture device for about 0.5 hours to about 24 hours. It is the method as described in any one of 14-17.

［００６７］ 実施形態１９は、第１の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約０．５時間〜約６時間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、実施形態１８に記載の方法である。 [0067] Embodiment 19 is an embodiment wherein incubating the inoculated culture device for a first period comprises incubating the inoculated culture device for about 0.5 hours to about 6 hours. 18. The method according to 18.

［００６８］ 実施形態２０は、第２の期間にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約３０分〜約３６０分にわたって、接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、実施形態１４〜１９のいずれか１つに記載の方法である。 [0068] Embodiment 20 is wherein the inoculated culture device is incubated for a second period of time comprising incubating the inoculated culture device for about 30 minutes to about 360 minutes. 19. The method according to any one of 19 above.

［００６９］ 本発明は、以下に記載される特定の実施例に限定されると考えられるべきではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に適正に明示されるように、本発明の全ての態様を保護するものであると理解されるべきである。様々な修正、同等の方法、及び、本発明を適用可能である多くの構造は、本発明が対象となる技術分野の当業者が本発明の明細書を検討することにより、容易に明らかになるであろう。特に明記しない限り、全ての割合及び部は重量である。特に明記しない限り、材料は、Ａｌｐｈａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤから市販されているものである。 [0069] The present invention should not be considered limited to the specific examples described below, but rather all aspects of the invention to be properly defined in the appended claims. It should be understood to protect. Various modifications, equivalent methods, and many structures to which the present invention can be applied will be readily apparent to those skilled in the art to which the present invention is directed by studying the specification of the invention. Will. Unless otherwise specified, all proportions and parts are by weight. Unless otherwise specified, materials are commercially available from Alpha Biosciences, Baltimore, MD.

［００７０］ 材料
［００７１］ 実施例１．サルモネラ検出物品の調製
［００７２］ 上に０．５インチ（１２．７ｍｍ）の正方格子線を有する防水のポリエチレンでコーティングされた紙上に、接着剤をコーティングしたことを除いて、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例４に従って、薄膜培養プレート用の基板部材を調製した。２重量部の２−デオキシ−Ｄ−リボース（２ＤＲ）と、９８重量部のグアーガム（Ｍ１５０グアーＭＥＹＰＲＯＧＡＴガム、Ｍｅｙｈａｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＡＧ）とを混合することによって、粉末組成物を調製した。少量（０．５％未満）のシリカ（ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬシリカ、Ｃａｂｏｔ Ｃｏｒｐ．，Ｂｏｓｔｏｎ ＭＡ）を、処理のために必要に応じて添加した。次いで、粉末混合物を接着剤コーティングされた紙上に振りかけ、過剰な粉末を除去するために、傾斜させ軽く叩いた。 [0070] Materials [0071] Example 1. Preparation of Salmonella Detecting Article [0072] US Patent No. 5, except that adhesive was coated on waterproof polyethylene coated paper having 0.5 inch (12.7 mm) square grid lines on it. A substrate member for a thin film culture plate was prepared according to Example 4 of No. 409,838. A powder composition was prepared by mixing 2 parts by weight of 2-deoxy-D-ribose (2DR) and 98 parts by weight of guar gum (M150 guar MEYPROGAT gum, Meyhall Chemical AG). A small amount (less than 0.5%) of silica (CAB-O-SIL silica, Cabot Corp., Boston MA) was added as needed for processing. The powder mixture was then sprinkled over the adhesive-coated paper and tilted and tapped to remove excess powder.

［００７３］ 容器中で、表１に列挙される材料を１リットルの脱イオン水に添加することによってブロス混合物を調製し、米国特許第６，０２２，６８２号の実施例１に記載される方法に従って混合した。 [0073] In a container, a broth mixture was prepared by adding the materials listed in Table 1 to 1 liter of deionized water and described in Example 1 of US Pat. No. 6,022,682. Mixed according to.

Figure 2014513555

＊Ｂｉｏｓｙｎｔｈ ＡＧ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから
Figure 2014513555
* From Biosynth AG, Switzerland

［００７４］ １２ｍｇのセフスロジンナトリウム塩（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、４ｍｇのナリジクス酸ナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯ）、４ｍｇのストレプトマイシン硫酸塩（Ｓｉｇｍａ）、４５ｍｇのメチシリンナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ）、０．４ｍｇのイソプロピル−Ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｓｉｇｍａ）、及び２ｇの尿素（ＥＭＤ）を、２０ｍＬの滅菌脱イオン水に添加することによって、選択剤混合物を調製し、完全に溶解するまでガラスフラスコ中でかき混ぜた。ブロスを約４０℃まで冷却し、選択的混合物を激しく混合しながら添加した。 [0074] 12 mg cefsulodin sodium salt (Research Products International, Chicago, IL), 4 mg nalidixic acid sodium salt (Sigma Aldrich, St. Louis MO), 4 mg streptomycin sulfate (Sigma), 45 mg methicillin sodium A selective agent mixture is prepared by adding (Sigma), 0.4 mg isopropyl-BD-galactopyranoside (Sigma), and 2 g urea (EMD) to 20 mL of sterile deionized water, Stir in a glass flask until completely dissolved. The broth was cooled to about 40 ° C. and the selective mixture was added with vigorous mixing.

［００７５］ カバーフィルム用の厚さ２．９ミル（０．０７４ｍｍ）のポリエステルフィルムのコロナ処理された面に、選択的ブロスをコーティングしたことを除いて、米国特許第６，０２２，６８２号の実施例ＶＩに記載されるように、カバーフィルム及び薄膜培養プレートを調製した。プレートは約７．６ｃｍ×１０．２ｃｍであり、直径５ｃｍの円をフォームから切り取り、プレートの中心の周りにウェルを提供した。 [0075] US Pat. No. 6,022,682, except that the corona-treated side of a 2.9 mil (0.074 mm) thick polyester film for the cover film was coated with selective broth. Cover films and thin film culture plates were prepared as described in Example VI. The plate was approximately 7.6 cm x 10.2 cm and a 5 cm diameter circle was cut from the foam to provide a well around the center of the plate.

［００７６］ 実施例２．サルモネラ微生物を検出する方法
［００７７］ サルモネラ細菌の純培養（肉混合物から単離された３Ｍの培養指定ＦＳＤＣＣ ＳＡＬ１４０）を緩衝ペプトン水（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に接種し、３７℃で一晩インキュベートした。得られたブロスは、約１×１０９コロニー形成単位／ｍＬ（ｃｆｕ／ｍＬ）の濃度を有した。ブロスを、滅菌緩衝ペプトン水中で、約１×１０６ｃｆｕ／ｍＬの最終濃度まで希釈した。 [0076] Example 2. Methods for detecting Salmonella microorganisms [0077] Pure cultures of Salmonella bacteria (3M culture-designated FSDCC SAL140 isolated from meat mixtures) are inoculated into buffered peptone water (Merck, Darmstadt, Germany) and incubated overnight at 37 ° C. did. The resulting broth had a concentration of about 1 × 10 9 colony forming units / mL (cfu / mL). Broth was diluted in sterile buffered peptone water to a final concentration of about 1 × 10 6 cfu / mL.

［００７８］ １．５ｍＬのバターフィールド緩衝液を、粉末コーティング上のウェルの位置のほぼ中央に添加することによって、実施例１の薄膜培養プレートをストリーキングのために調製した。カバーフィルムを閉鎖し、ゲルを約１時間にわたって水和させた。カバーフィルムを開放した時に、ブロスコーティングはゲル表面に移動していた。最終濃度の１０マイクロリットルのループを、ゲル上のブロス表面でストリークした。カバーを閉鎖し、プレートを３７℃で一晩インキュベートした。プレートをコロニー計数のために分析した。コロニーを示す赤色の点が見られた。 [0078] The thin film culture plate of Example 1 was prepared for streaking by adding 1.5 mL of butterfield buffer approximately in the middle of the well location on the powder coating. The cover film was closed and the gel was hydrated for about 1 hour. When the cover film was opened, the broth coating had migrated to the gel surface. A final concentration of 10 microliter loop was streaked on the surface of the broth on the gel. The cover was closed and the plate was incubated overnight at 37 ° C. Plates were analyzed for colony counting. A red dot indicating a colony was seen.

［００７９］ 実施例３．サルモネラ微生物を検出するための指示薬物品の使用
［００８０］ 参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第６１／４２８，７２２号の実施例１及び２に記載されるディスクを、コロニーの上に配置し、ディスクを３７℃でインキュベートする。３、４、及び５時間後に、ディスクを増殖に対して検査する。 [0079] Example 3. Use of an indicator drug product to detect Salmonella microorganisms [0080] The discs described in Examples 1 and 2 of US Patent Application No. 61 / 428,722, incorporated herein by reference in its entirety, are placed over the colony. And incubate the disc at 37 ° C. After 3, 4, and 5 hours, the disc is examined for growth.

［００８１］ 本明細書に引用するすべての特許、特許出願及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を援用する。本出願の開示内容と本明細書に援用されるいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が優先するものとする。上記の詳細な説明及び実施例はあくまで理解を助けるために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、図示及び説明された厳密な詳細に限定されるものではなく、当業者には明らかな変形例は特許請求の範囲によって定義される本発明に含まれるものとする。 [0081] The entire disclosures of all patents, patent applications and publications, and electronically available materials cited herein are incorporated by reference. In the event of any inconsistency between the disclosure content of this application and the disclosure content of any document incorporated herein, the disclosure content of this application shall prevail. The above detailed description and examples are given for the purpose of understanding only. These should not be construed as making unnecessary limitations. The present invention is not limited to the exact details shown and described, and variations obvious to one skilled in the art are intended to be included within the invention as defined by the claims.

［００８２］ 全ての見出しは、読者の利便性のためであり、指定のない限り、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用するべきではない。本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を行ってもよい。これらの及び他の実施形態は、以下の「特許請求の範囲」に含まれる。 [0082] All headings are for the convenience of the reader and should not be used to limit the meaning of the text that follows the heading, unless so specified. Various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. These and other embodiments are within the scope of the following claims.

Claims (20)

標的微生物を検出するための培養デバイスであって、
前記標的微生物の増殖を促進するための栄養素と、セフスロジン、ナリジクス酸、ストレプトマイシン、メチシリン、及び胆汁酸塩を含む複数の選択剤とを含む選択的増殖培地と、
第１の識別指示薬系と、
ゲル化剤と、を含む、培養デバイス。 A culture device for detecting a target microorganism,
A selective growth medium comprising a nutrient for promoting the growth of the target microorganism and a plurality of selective agents including cefsulodin, nalidixic acid, streptomycin, methicillin, and bile salt;
A first identification indicator system;
A culture device comprising a gelling agent. 前記標的微生物の存在を示すための非識別指示薬系を更に含む、請求項１に記載の培養デバイス。   The culture device of claim 1, further comprising a non-identifying indicator system for indicating the presence of the target microorganism. 前記第１の識別指示薬系が、ｐＨ指示薬を含む、請求項１又は２に記載の培養デバイス。   The culture device according to claim 1 or 2, wherein the first identification indicator system includes a pH indicator. 非標的微生物の存在を示すための第２の識別指示薬系を更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の培養デバイス。   The culture device according to any one of claims 1 to 3, further comprising a second identification indicator system for indicating the presence of a non-target microorganism. 前記第２の識別指示薬が、発色性β−ガラクトシダーゼ酵素基質を含む、請求項４に記載の培養デバイス。   The culture device according to claim 4, wherein the second identification indicator comprises a chromogenic β-galactosidase enzyme substrate. 微生物β−ガラクトシダーゼ酵素活性の誘導物質を更に含む、請求項４又は５に記載の培養デバイス。   The culture device according to claim 4 or 5, further comprising an inducer of microbial β-galactosidase enzyme activity. 前記選択的増殖培地が、乾燥、再水和可能選択的増殖培地を含み、前記ゲル化剤が、乾燥、冷水可溶性ゲル化剤を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の培養デバイス。   The culture according to any one of claims 1 to 6, wherein the selective growth medium comprises a dry, rehydratable selective growth medium, and the gelling agent comprises a dry, cold water soluble gelling agent. device. 前記培養デバイスが、薄膜培養デバイスを含む、請求項７に記載の培養デバイス。   The culture device according to claim 7, wherein the culture device includes a thin film culture device. サルモネラ微生物を検出するためのシステムであって、
サルモネラ微生物に対して高度に選択的である栄養培地と、少なくとも２つの識別指示薬系とを含む培養デバイスであって、第１の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陽性指示薬であり、第２の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陰性指示薬である、培養デバイスと、
第３の識別指示薬系を含む検出物品であって、前記第３の識別指示薬系が、前記サルモネラ微生物の陽性指示薬である、検出物品と、を含む、システム。 A system for detecting Salmonella microorganisms,
A culture device comprising a nutrient medium that is highly selective for Salmonella microorganisms and at least two identification indicator systems, wherein the first identification indicator system is a positive indicator for said Salmonella microorganisms, A culture device, wherein the identification indicator system is a negative indicator of the Salmonella microorganism;
A detection article comprising a third identification indicator system, wherein the third identification indicator system comprises a detection article that is a positive indicator for the Salmonella microorganism. 前記第２及び第３の識別指示薬系が、発色性酵素基質を含み、各発色性酵素基質が、炭水化物構成成分及び発色団を含む、請求項９に記載のシステム。   10. The system of claim 9, wherein the second and third distinguishing indicator systems comprise chromogenic enzyme substrates, each chromogenic enzyme substrate comprising a carbohydrate component and a chromophore. 前記第２及び第３の識別指示薬系のそれぞれが、同一の発色団を含む、請求項１０に記載のシステム。   11. The system of claim 10, wherein each of the second and third identification indicator systems includes the same chromophore. 前記第２の識別指示薬系が、β−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載のシステム。   The system according to any one of claims 9 to 11, wherein the second identification indicator system comprises a chromogenic indicator of β-galactosidase enzyme activity. 前記第３の識別指示薬系が、α−ガラクトシダーゼ酵素活性の発色性指示薬を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載のシステム。   12. The system according to any one of claims 9 to 11, wherein the third identification indicator system comprises a chromogenic indicator of [alpha] -galactosidase enzyme activity. サルモネラ微生物を検出する方法であって、
液体試料、請求項１〜８のいずれか一項に記載の培養デバイス、及び第３の識別指示薬系を提供することと、
接種された培養デバイスを形成するために、前記培養デバイス中で、規定の体積の前記試料を、前記選択的増殖培地；前記第１の指示薬系；存在する場合、前記非識別指示薬系；存在する場合、前記第２の指示薬系；及び前記ゲル化剤と接触させることと、
第１の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
前記標的微生物の前記試料中の存在可能性の指示を検出するために、前記接種増殖培地を観察することと、
前記標的微生物の前記存在可能性の指示がある時に、前記第３の識別を前記水和した増殖培地と接触させることと、
前記標的微生物の存在の指示のために、前記水和した増殖培地中の前記第３の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法。 A method for detecting Salmonella microorganisms, comprising:
Providing a liquid sample, the culture device according to any one of claims 1 to 8, and a third identification indicator system;
In order to form an inoculated culture device, a defined volume of the sample is added to the selective growth medium; the first indicator system; if present, the non-identifying indicator system; In contact with said second indicator system; and said gelling agent;
Incubating the inoculated culture device for a first period of time;
Observing the inoculum growth medium to detect an indication of the presence of the target microorganism in the sample;
Contacting the third identification with the hydrated growth medium when there is an indication of the possible presence of the target microorganism;
Observing the third discriminating indicator system in the hydrated growth medium for an indication of the presence of the target microorganism. サルモネラ微生物を検出する方法であって、
試料、請求項８に記載の培養デバイス、及び第３の識別指示薬系を提供することと、
水和した増殖培地を形成するために、前記培養デバイス中で、規定の体積のサルモネラを含まない水性液体を、前記選択的増殖培地；前記第１の識別指示薬系；存在する場合、前記非識別指示薬系；存在する場合、前記第２の識別指示薬系；及び前記ゲル化剤と接触させることと、
前記水和した増殖培地に前記試料を接種して、接種された培養デバイスを形成することと、
第１の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることと、
前記標的微生物の前記試料中の存在可能性の指示を検出するために、前記水和した増殖培地を観察することと、
前記標的微生物の前記存在可能性の指示がある時に、前記第３の識別を前記水和した増殖培地と接触させることと、
前記標的微生物の存在の指示のために、前記水和した増殖培地中の前記第３の識別指示薬系を観察することと、を含む、方法。 A method for detecting Salmonella microorganisms, comprising:
Providing a sample, the culture device of claim 8, and a third identification indicator system;
To form a hydrated growth medium, a defined volume of Salmonella-free aqueous liquid is added in the culture device to the selective growth medium; the first identification indicator system; if present, the non-identification An indicator system; if present, the second discriminating indicator system; and contacting with the gelling agent;
Inoculating the hydrated growth medium with the sample to form an inoculated culture device;
Incubating the inoculated culture device for a first period of time;
Observing the hydrated growth medium to detect an indication of the presence of the target microorganism in the sample;
Contacting the third identification with the hydrated growth medium when there is an indication of the possible presence of the target microorganism;
Observing the third discriminating indicator system in the hydrated growth medium for an indication of the presence of the target microorganism. 前記標的微生物の前記存在可能性の指示を検出することが、前記非識別指示薬系及び前記第１の識別指示薬系と反応するが、前記第２の識別指示薬系とは反応しないコロニーを観察することを更に含む、請求項１４又は１５に記載の方法。   Detecting an indication of the possible presence of the target microorganism reacts with the non-discriminating indicator system and the first discriminating indicator system, but observing colonies that do not react with the second discriminating indicator system The method according to claim 14 or 15, further comprising: 前記第２の構成成分を前記水和した増殖培地と接触させることの後に、前記方法が、第２の期間にわたって、前記培養デバイスをインキュベートすることを更に含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。   17. The method of any one of claims 14 to 16, wherein after contacting the second component with the hydrated growth medium, the method further comprises incubating the culture device for a second period of time. The method according to item. 第１の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約０．５時間〜約２４時間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。   Incubating the inoculated culture device over a first period comprises incubating the inoculated culture device for about 0.5 hours to about 24 hours. The method according to one item. 第１の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約０．５時間〜約６時間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項１８に記載の方法。   19. The method of claim 18, wherein incubating the inoculated culture device over a first period comprises incubating the inoculated culture device for about 0.5 hours to about 6 hours. 第２の期間にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることが、約３０分〜約３６０分にわたって、前記接種された培養デバイスをインキュベートすることを含む、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載の方法。   20. Incubating the inoculated culture device over a second period comprises incubating the inoculated culture device for about 30 minutes to about 360 minutes. The method described in 1.
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