JP2014507373A - 抗原結合タンパク質 - Google Patents
抗原結合タンパク質 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014507373A JP2014507373A JP2013539295A JP2013539295A JP2014507373A JP 2014507373 A JP2014507373 A JP 2014507373A JP 2013539295 A JP2013539295 A JP 2013539295A JP 2013539295 A JP2013539295 A JP 2013539295A JP 2014507373 A JP2014507373 A JP 2014507373A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- binding protein
- human
- osm
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/248—IL-6
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/522—CH1 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Volume Flow (AREA)
Abstract
【選択図】 図1
Description
配列番号1または配列番号77のCDRH1
配列番号2のCDRH2
配列番号3のCDRH3。
配列番号4のCDRL1
配列番号5または配列番号78のCDRL2
配列番号6のCDRL3。
本発明は、OSMと特異的に結合し、例えば、ヒトOSM(hOSM)と特異的に結合しかつOSMのgp130受容体との結合を阻害するが部位II残基と直接相互作用しない抗原結合タンパク質を提供する。
位置95がAla、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Gln、Ser、Thr、またはValに置換された、
位置96がAla、Cys、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Ser、Thr、TrpまたはTyrに置換された、
位置97がAla、Cys、Phe、MetまたはSerに置換された、
位置98がAla、Asp、Phe、Gly、Leu、Pro、GlnまたはTrpに置換された、
位置99がAla、Cys、Pro、Ser、ValまたはTyrに置換された、
位置100BがGluに置換された、
位置100CがAla、Glu、Phe、Gly、ValまたはTrpに置換された、
位置100DがAla、Cys、Asp、Glu、Gly、Leu、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrに置換された、
位置101がGlu、Gly、Ser、ThrまたはValに置換された、
位置102がAla、Phe、Gly、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Tyr、His、Ile、AspまたはTrpに置換された変異体]
のCDRH3を含む抗原結合タンパク質を提供する。
i)配列番号3または配列番号3の変異体[配列中、Val 102がTyr、His、Ile、Ser、AspまたはGlyに置換された変異体]に設定されたCDRH3;
ii)配列番号2または配列番号2の変異体[配列中、Thr50がGly、Tyr、Phe、Ile、GluまたはValに置換された、および/またはIle51がLeu、Val、Thr、SerまたはAsnに置換された、および/またはSer52がPhe、TrpまたはHisに置換された、および/またはGly53がAsp、SerまたはAsnに置換された、および/またはGly54がSerに置換された、および/またはPhe56がSer、Tyr、Thr、Asn、AspまたはArgに置換された、および/またはTyr58がGly、His、Phe、AspまたはAsnに置換された変異体]に設定されたCDRH2;
iii)配列番号4または配列番号4の変異体[配列中、Ser27AがAsn、Asp、ThrまたはGluに置換された、および/またはSer27CがAsp、Leu、Tyr、Val、Ile、Asn、Phe、His、GlyまたはThrに置換された、および/またはAsn31がSer、Thr、LysまたはGlyに置換された、および/またはPhe32がTyr、Asn、Ala、His、SerまたはArgに置換された、および/またはMet33がLeu、Val、IleまたはPheに置換された変異体]に設定されたCDRL1;
iv)配列番号6または配列番号6の変異体[配列中、Leu89がGln、Ser、GlyまたはPheに置換された、および/またはHis90がGlnまたはAsn、Ser91がAsn、Phe、Gly、Arg、Asp、His、Thr、TyrまたはValに置換された、および/またはArg92がAsn、Tyr、Trp、Thr、Ser、Gln、His、AlaまたはAspに置換された、および/またはGlu93がAsn、Gly、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに置換された、および/またはPhe96がPro、Leu、Tyr、Arg、Ile、またはTrpに置換された変異体]に設定されたCDRL3。
v)配列番号5または配列番号78に設定されたCDRL2を含む。
vi)配列番号1もしくは配列番号77または配列番号1もしくは配列番号77の変異体[配列中、Tyr32がIle、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに置換された、および/またはAla33がTyr、Trp、Gly、Thr、LeuまたはValに置換された、および/またはMet34がIle、ValまたはTrpに置換された、および/またはSer35がHis、Glu、Asn、Gln、TyrまたはThrに置換された変異体]に設定されたCDRH1を含む。
i)配列番号3または配列番号3の変異体[配列中、CDRH3が1以上の次の位置(Kabat番号付けを用いて)で下記の代わりのアミノ酸により置換された:
位置95がAla、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Gln、Ser、Thr、またはValに置換された、
位置96がAla、Cys、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Ser、Thr、TrpまたはTyrに置換された、
位置97がAla、Cys、Phe、MetまたはSerに置換された、
位置98がAla、Asp、Phe、Gly、Leu、Pro、GlnまたはTrp位置に置換された、
位置99がAla、Cys、Pro、Ser、ValまたはTyrに置換された、
位置100BがGluに置換された、
位置100CがAla、Glu、Phe、Gly、ValまたはTrpに置換された、
位置100DがAla、Cys、Asp、Glu、Gly、Leu、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrに置換された、
位置101がGlu、Gly、Ser、ThrまたはValに置換された、
位置102がAla、Phe、Gly、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Tyr、His、Ile、AspまたはTrpに置換された変異体]に設定されたCDRH3、
ii)配列番号1もしくは配列番号77または配列番号1もしくは配列番号77の変異体[配列中、Tyr32がIle、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに置換された、および/またはAla33がTyr、Trp、Gly、Thr、LeuまたはValに置換された、および/またはMet34がIle、ValまたはTrpに置換された、および/またはSer35がHis、Glu、Asn、Gln、TyrまたはThrに置換された変異体]に設定されたCDRH1、
iii)配列番号2または配列番号2の変異体[配列中、Thr50がGly、Tyr、Phe、Ile、GluまたはValに置換された、および/またはIle51がLeu、Val、Thr、SerまたはAsnに置換された、および/またはSer52がPhe、TrpまたはHisに置換された、および/またはGly53がAsp、SerまたはAsnに置換された、および/またはGly54がSerに置換された、および/またはPhe56がSer、Tyr、Thr、Asn、AspまたはArgに置換された、および/またはTyr58がGly、His、Phe、AspまたはAsnに置換された変異体]に設定されたCDRH2、
iv)配列番号4または配列番号4の変異体[配列中、Ser27AがAsn、Asp、ThrまたはGluに置換された、および/またはSer27CがAsp、Leu、Tyr、Val、Ile、Asn、Phe、His、GlyまたはThrに置換された、および/またはAsn31がSer、Thr、LysまたはGlyに置換された、および/またはPhe32がTyr、Asn、Ala、His、SerまたはArgに置換された、および/またはMet33がLeu、Val、IleまたはPheに置換された変異体]に設定されたCDRL1、
v)配列番号5または配列番号78に設定されたCDRL2、
vi)配列番号6または配列番号6の変異体[配列中、Leu89がGln、Ser、GlyまたはPheに置換された、および/またはHis90がGlnまたはAsn、Ser91がAsn、Phe、Gly、Arg、Asp、His、Thr、TyrまたはValに置換された、および/またはArg92がAsn、Tyr、Trp、Thr、Ser、Gln、His、AlaまたはAspに置換された、および/またはGlu93がAsn、Gly、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに置換された、および/またはPhe96がPro、Leu、Tyr、Arg、Ile、またはTrpに置換された変異体]に設定されたCDRL3;ならびに
vii)次の残基:
位置2にVal、IleまたはGly、
位置4にLeuまたはVal、
位置20にLeu、Ile、MetまたはVal、
位置22にCys、
位置24にThr、Ala、Val、GlyまたはSer、
位置26にGly
位置29にIle、Phe、LeuまたはSer、
位置36にTrp、
位置47にTrp、
位置48にIle、met、ValまたはLeu、
位置69にIle、Leu、Phe、MetまたはVal、
位置71にArg、
位置78にAla、Leu、Val、TyrまたはPhe、
位置80にLeu、Met、
位置90にTyrまたはPhe、
位置92にCys、
位置94にArg、Lys、Gly、Ser、HisまたはAsnを含む重鎖フレームワーク
を含むものである。
i)配列番号3に設定されたCDRH3、
ii)配列番号1または配列番号77に設定されたCDRH1、
iii)配列番号2に設定されたCDRH2、
iv)配列番号4に設定されたCDRL1、
v)配列番号5または配列番号78に設定されたCDRL2、
vi)配列番号6に設定されたCDRL3、ならびに
vii)次の残基:
位置2にVal、IleまたはGly、
位置4にLeuまたはVal、
位置20にLeu、Ile、MetまたはVal、
位置22にCys、
位置24にThr、Ala、Val、GlyまたはSer、
位置26にGly、
位置29にIle、Phe、LeuまたはSer、
位置36にTrp、
位置47にTrp、
位置48にIle、met、ValまたはLeu、
位置69にIle、Leu、Phe、MetまたはVal、
位置71にArg、
位置78にAla、Leu、Val、TyrまたはPhe、
位置80にLeu、Met、
位置90にTyrまたはPhe、
位置92にCys、
位置94にArg、Lys、Gly、Ser、HisまたはAsnを含む重鎖フレームワーク
を含むものである。
i)配列番号3に設定されたCDRH3、
ii)配列番号1または配列番号77に設定されたCDRH1、
iii)配列番号2に設定されたCDRH2、
iv)配列番号4に設定されたCDRL1、
v)配列番号5または配列番号78に設定されたCDRL2、
vi)配列番号6に設定されたCDRL3、ならびに
vii)次の残基:
位置2にVal、
位置4にLeu、
位置20にLeu、
位置22にCys、
位置24にAla、
位置26にGly、
位置29にPhe、
位置36にTrp、
位置47にTrp、
位置48にVal、
位置69にIle、
位置71にArg、
位置78にLeu、
位置80にLeu、
位置90にTyr、
位置92にCys、
位置94にArgを含む重鎖フレームワーク
を含むものである。
i)配列番号3に設定されたCDRH3、
ii)配列番号1または配列番号77に設定されたCDRH1、
iii)配列番号2に設定されたCDRH2、
iv)配列番号4に設定されたCDRL1、
v)配列番号5または配列番号78に設定されたCDRL2、
vi)配列番号6に設定されたCDRL3、ならびに
vii)次の残基:
位置2にVal、
位置4にLeu、
位置20にLeu、
位置22にCys、
位置24にAla、
位置26にGly、
位置29にPhe、
位置36にTrp、
位置47にTrp、
位置48にLeu、
位置69にIle、Leu、Phe、MetまたはVal、
位置71にArg、
位置78にAla、
位置80にLeu、Met、
位置90にTyrまたはPhe
位置92にCys、
位置94にArg、Lys、Gly、Ser、HisまたはAsnを含む重鎖フレームワーク;
を含むものである。
(a) 抗体の重鎖をコードする第1ベクターを提供するステップ;
(b) 抗体の軽鎖をコードする第2ベクターを提供するステップ;
(c) 哺乳動物の宿主細胞(例えばCHO)を前記第1および第2ベクターを用いて形質転換するステップ;
(d) 前記宿主細胞から前記培地中への抗体の分泌を誘導する条件下でステップ(c)の宿主細胞を培養するステップ;および
(e) ステップ(d)の分泌された抗体を回収するステップ;
を含むものである前記方法が提供される。
a)1以上の非ヒトCDRをヒトアクセプターフレームワークに組込んで、キメラまたはヒト化抗体を作製するステップ;
b)キメラまたはヒト化抗体をその抗原と結合するステップ;
c)抗原との結合に直接関わる抗体の残基を決定するステップ;
d)ステップc)に関わらない1以上の残基をヒト生殖系配列へ突然変異させるステップ;
e)前記抗体を回収するステップ
を含むものである前記方法が提供される。
a)標的抗原と結合する非ヒト抗体を得るステップ;
b)抗体-抗原共結晶の結晶学的構造を得るステップ;
c)結晶構造から約2〜5Å迄を抗原との結合に直接関わる非ヒト抗体の残基と判定するステップ;
e)ステップ(c)で結合に関わらない1以上の残基をヒト配列由来の残基に突然変異させるステップ;
f)前記抗体を回収するステップ
を含むものである前記方法が提供される。
本明細書で使用する用語「抗原結合タンパク質」は、ヒトOSMと結合しかつこれを中和することができる抗体、抗体フラグメントおよび他のタンパク質構築物を意味する。
(1)ポリヌクレオチドに対する同一性は、所与の配列中のヌクレオチドの総数に、100で除した%同一性を規定する整数を乗じ、次いでその積を前記配列中の前記総数から減ずること、または:
により計算される。
本明細書を通して、抗体配列中のアミノ酸残基はKabatスキームで番号を付けた。同様に、用語「CDR」、「CDRL1」、「CDRL2」、「CDRL3」、「CDRH1」、「CDRH2」、「CDRH3」は、Kabat et al; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987に記載のKabat番号系に従う。
a)本明細書に記載の単離された核酸を含む発現ベクターを含む組換え宿主細胞を培養するステップであって、組換え宿主細胞中のα-1,6-フコシルトランスフェラーゼをコードするFUT8遺伝子が不活化されている前記ステップ;および
b)抗原結合タンパク質を回収するステップ
を含むものである前記方法を提供する。
a)本明細書に記載の単離された核酸を含む発現ベクター(ここで、発現ベクターはIgG1とIgG3両方のFcドメインのアミノ酸残基を有するFcドメインをコードする核酸配列を含む)を含む組換え宿主細胞を培養するステップ;および
b)抗原結合タンパク質を回収するステップ
を含むものである前記方法が提供される。
b)抗原結合タンパク質を回収するステップ
を含むものである前記方法が提供される。
1.1 免疫化計画
抗ヒトOSM mAb S168110G08(1)1A09(「10G8」)を組換えグリコシル化ヒトOSM(K598)で免疫化したマウス由来のハイブリドーマから特定した。雌SJLマウス(n=2、Harlan、UK、宿主 SP06-06031)を通常のように合計10μgタンパク質を腹腔内にAS02様アジュバントと共に用いて免疫化した。追加免疫は5μgタンパク質を用いた。各追加免疫後に試験採血を行い、最良の応答をしたマウス(168#4)をハイブリドーマ融合用に選んだ(R16092/177-198)。脾臓を切除し、破壊し、そしてPEG1500誘導による体細胞融合をマウス骨髄腫細胞X63 AG8 653.GFP.Bcl-2.11(BioCat 112754;R17209/58)を用いて実施した。融合体をメチルセルロースを含有する半固体培地中の10 x 96ウエルプレートおよび5 Nuncオムニトレイ中にまいた。コロニーを半固体培地から5 x 96ウエルプレート中に拾った。
1.2.1 一次スクリーニング
抗OSMバックアップ抗体に対する一次スクリーニングは、ヒトOSMと結合することができ、そして、抗部位II分子を選択する目的で、ヒトおよびカニクイザル両方のOSMのgp130受容体との結合を阻害するハイブリドーマ材料の選択に基づいた。これらのスクリーニングから得たポジティブハイブリドーマ上清をBIACore脱離速度動力学により分析してトップ結合ハイブリドーマを選択した。
4つの娘クローン、10G8/A9、9G2/C1、2B7/A6および3E3/A1をランク付けする二次スクリーニングには、ヒト/カニクイザルOSMに対するBIACore動力学分析;ヒト/カニクイザルOSMによるヒトgp130 ELISA;ヒト/カニクイザルOSMによるKB細胞中和アッセイが含まれる。これに加えて、内因性好中球由来のヒトOSMを中和する能力、25%ヒトAB血清中の中和能力の保持およびヒトLIFに対する反応性を評価した。
BIACore分析は10G8、9G2、3E3および2B7が代わりの非競合抗OSMマウス抗体(15E10)より高いアフィニティを有することを示した(表1)。10G8はヒト(〜550pM)とカニクイザル(〜310pM)の両方のOSMに対して最高のアフィニティを示した。10G8は15E10と比較して、ヒトOSMに対して8倍/0.9対数増加したアフィニティを有し、そしてカニクイザルOSMに対して11倍/1対数増加したアフィニティを有した。10G8と9G2の両方はカニクイザルOSMに対してヒトOSMを超える増加したアフィニティを示した。
[表1]
ヒトgp130 ELISA:
ヒトgp130 ELISAは比較的高いレベルのOSM(25ng/ml)を用い、リガンドが過剰に存在するので、高アフィニティ抗体を低アフィニティ抗体から分離する能力は低下する。このアッセイを4回反復した後、10G8がヒトとカニクイザル両方のOSMをgp130受容体との結合からブロックする最強の抗体であることが示された(図1;表2)。
ヒトgp130アッセイを25%ヒトAB血清の存在のもとで反復した。このアッセイの2回反復は全ての4つのリード抗体10G8、9G2、3E3および2B7、ならびに15E10がヒトおよびカニクイザルOSMのgp130との結合をブロックする能力を保持することを示した(データは示してない)。
OSMはKB細胞(gp130およびOSM受容体に対するmRNAを発現するヒト上皮細胞株)からのIL-6放出を誘導する。概要を述べると、KB細胞を1ng/ml OSM+/-の色々な抗体濃度で16〜18時間、37℃にて刺激し、IL-6放出をELISAによりモニターする。KB細胞中和アッセイはgp130アッセイと比較して少ない量のOSMを用いる(1ng/ml対25ng/ml)。このアッセイは高アフィニティ中和剤を低アフィニティ中和剤からより明確に識別するアッセイである。抗体15E10と比較して、10G8はKB細胞中和アッセイにおいてヒトOSMに対して15倍/1.2対数さらに強力であった。このアッセイの3回反復から、10G8は全ての反復において第1位にランク付けされ、ヒトOSMに対して8ng/mlおよびカニクイザルOSMに対して6ngの平均IC50値を与えた(図2;表3)。9G2はこのアッセイで第2位にランク付けされ、ヒトとカニクイザルOSMに対してそれぞれ18ng/mlおよび15ng/mlのIC50であった。
25%ヒトAB血清の存在のもとで、10G8、9G2および3E3はヒトおよびカニクイザル両方のOSMを中和する能力を保持した(図3)。15E10および2B7はIC50値を計算するのに十分な品質の適合曲線を生じなかった。非ヒト血清KB細胞アッセイのように、最強の抗体は10G8であり、9G2が第2位であった。25%AB血清の存在のもとでは活性のいくらかの低下が見られた。これはある程度、このアッセイ読出値に干渉するAB血清によるものであろう。非ヒト血清中におけるより高いIL-6バックグランドレベルがこのアッセイにおいて観察された。
全てのリード抗体10G8、9G2、3E3および2B7、ならびに抗体15E10は4つの別のドナーからの内因性ヒトOSMを阻害した(図4)。この生来のOSMは健康なヒト好中球のGM-CSF-刺激から作製された。
ヒトLIFはヒトOSMに対するIL-6ファミリーの最も近い関係にあるメンバーである。最初の研究は、10G8、9G2、3E3および2B7とヒトLIFとの間に反応性が存在しないことを示し、これらの抗体がOSM特異的であることを示した(図5)。
全ての4種のリード分子10G8、9G2、3E3および2B7はKB細胞中和アッセイにおいてキヌザルOSMを中和することを示した(図6)。15E10および3つの抗ヒトOSM抗体追加パネル、10D3DLE、OM4.11.17およびOM4.11.31はキヌザルOSMを中和しなかった。 2回反復のアッセイから、10G8はキヌザルOSMの最強中和剤であり、9G2は第2位にランク付けされた。
上記アッセイの全てにおける第1のランク付けに基づいて、4つの抗体から10G8をキメラ化のリード抗体として選んだ。9G2もヒト化が困難な場合のバックアップ分子としてキメラ化用に選択した。
1.3.2 可変域配列
4つの選択したモノクローナル、2B7、3E3、9G2および10G8に対する可変遺伝子を単離し、平行して、対応するキメラ抗体の作製を可能にするために配列を決定した。全RNAをハイブリドーマ細胞ペレットから抽出した。重鎖および軽鎖のV遺伝子をコードする配列をRT-PCRまたは5'RACEにより増幅し、次いでTAクローニングにより配列分析をした。V遺伝子増幅を各抗体について二重に行い、2つの独立反応から配列を矯正した。全ての4つのハイブリドーマクローンについて可変重鎖および可変軽鎖の配列を得た。タンパク質配列のアラインメントは、抗体が可変重鎖および可変軽鎖領域の両方で高度の配列同一性を有することを示した(図7および8)。これらの抗体の重鎖および軽鎖の可変域の配列を配列番号26〜48に記載する。表Aを参照されたい。
1.3.3.1 キメラの構築
上記のマウスVHおよびVL領域をコドン最適化ヒトγ1 Fc野生型およびヒトκ定常域にそれぞれグラフトすることにより、10G8と9G2の両方のキメラ抗体を作製した。このキメラ抗体を用いてクローニングしたマウスV域の機能を確認し、精製し、そしてヒト化構築物を試験する場合の参照として用いた。PCRプライマーは、RIxおよび10G8哺乳動物の発現ベクター中へのクローニングに必要な制限部位を含むことが2.3.1で確認された5'および3'DNA配列に基づいて設計した。プライマーはまた、生来のシグナル配列をCampathシグナル配列で置き換えるように設計した。Hind IIIおよびSpe I部位はVHドメインを挟むように設計し、ヒトγ1C領域を含有する改変RIxまたはpTT5ベクター中へのクローニングを可能にした。Spe I部位のフレームワーク4配列中への導入はFR4の位置108における単一アミノ酸変化をもたらした。9G2 VH領域については、内部Spel部位がDNA配列の5'末端に存在し、9G2キメラに対するPCRプライマーはこの内部Spel部位を除くように設計した。Hind IIIおよびBsiWI部位はVLドメインを挟み、そしてヒトκC領域を含有する改変RInまたはpTT5ベクター中へのクローニングが可能になるよう設計した。
キメラ10G8および9G2のVHおよびVLドメインをコードするRIdおよびRInプラスミドをそれぞれ、CHOE1A細胞中にエレクトロポレーションにより共トランスフェクトし、ポリクローナル細胞培養において発現した。キメラ10G8および9G2のVHおよびVLドメインをコードするpTTプラスミドを、脂質形質移入技法を用いてHEK293細胞中に共トランスフェクトして、一過性エピソーム発現を可能にした。エピソーム発現系における形質移入はmg量の抗体を生じうる可能性がある。産生したキメラ抗体(10G8cおよび9G2c)を細胞培養上清からプロテインAセファロース上のアフィニティクロマトグラフィにより精製した。精製した抗体をSDS-PAGE分析およびサイズ排除クロマトグラフィにより品質を管理した。
ヒトOSM結合ELISA:
10G8および9G2の両方のキメラは、15E10キメラ(15E10c)より大きい程度で首尾よくヒトOSMと結合する(図11)。これはヒトOSMを1μg/mlでコーティングし、結合した抗体を抗ヒトIgGを用いて検出した直接ELISAであった。
BIACore分析は、マウス親抗体と比較して、キメラ10G8および9G2分子中のヒトまたはカニクイザルOSM結合には少ししかまたは全くロスがなかったことを示した(表 4)。10G8キメラ(654pM)は第1にランク付けされ、続いて9G2キメラ(1.33nM)である。全ての抗体がカニクイザルOSMに対して、ヒトOSMを超えるアフィニティ増加を示した。
[表4]
1.3.3.4 機能アッセイデータ
ヒトgp130 ELISA:
ヒトgp130 ELISAは比較的高いレベルのOSM(25ng/ml)を用い、リガンドが過剰に存在するので、高アフィニティ抗体を低アフィニティ抗体から分離する能力は低下する。このアッセイを3回反復した後、10G8キメラがヒトとカニクイザル両方のOSMをgp130受容体との結合から阻害する最も有効な抗体であった。10G8マウス親と10G8キメラに対する値はこのアッセイにおいて非常に類似した(図12;表5)。9G2とそのキメラの間に有意差はなかった。
ヒトgp130アッセイを、ヒトおよびカニクイザル両方のOSMに対するヒトAB血清の存在のもとで繰り返した。全ての分子は25%血清中でその活性を保持した。ヒトおよびカニクイザルOSMに対して、10G8キメラおよび10G8マウス親が第1および第2にランク付けされた。これらの2つの抗体に対するIC50値は類似した。第3にランク付けされた9G2キメラとそのマウス親の間に有意差は観察されなかった(データは示してない)。
10G8マウス親はそのキメラと類似した挙動であった(図13;表6)。このアッセイにおいて、9G2マウス親とキメラはそれぞれ第3と第4にランク付けされた。
[表6]
25%ヒトAB血清の存在のもとで、10G8、10G8キメラ、9G2、および9G2キメラはヒトおよびカニクイザル両方のOSMを中和するその能力を保持した(図14)。25%AB血清の存在のもとで、いくつかの活性の低下が見られた。IC50値は1μg/ml抗体開始濃度で計算できなかったものの、明白な力価中和効果は、無関係なネガティブ対照を除いて全ての抗体に対して見られた。活性のこの低下は、ある程度、このアッセイ読出値を妨害するAB血清によるものでありうる。このアッセイにおいて、非ヒト血清におけるより高いIL-6バックグランドレベルが観察された。
10G8、10G8キメラ、9G2、および9G2キメラは2つの別のドナーからの内因性ヒトOSMを阻害した(図15)。これらの2つのドナーに対して、10G8と10G8キメラは共通して第1でランク付けされる一方、9G2とそのキメラはそれぞれ第3および第4にランク付けされた(表7)。この生来のOSMは健康なヒト好中球のGM-CSF-刺激から作製された。
[表7]
ヒトLIF反応性(KB細胞中和アッセイ):
ヒトLIFはヒトOSMに対するIL-6ファミリーの最も近い関係にあるメンバーである。ヒトLIF KB細胞アッセイの3回反復は、10G8、10G8キメラ、9G2、および9G2キメラがヒトLIFを中和しないことを示した。市販の抗ヒトLIF抗体はこのアッセイでLIFを中和した(図16)。このことは、これらの抗体がOSM特異的であることを証明した。
2.1.1 重鎖ヒト化計画
ヒトV遺伝子生殖系列データベースのBLAST分析の後、ヒト生殖系列IGHV3_7)(マウス10G8可変重鎖配列と74%同一性(CDRを含む)を有する)をヒト化用に好ましいアクセプターフレームワークとして選択した。生殖系列V領域をin silicoで好適なFR4、(この場合、配列類似性に基づいてJH2ミニ遺伝子(Kabat Vol.II))と組み合わせた。JH2ミニ遺伝子残基の最初の6残基はCDR3域内にあり、ドナー抗体から入るCDRにより置換えられる。3つのヒト化重鎖変異体を、配列比較および抗体機能への影響の可能性に基づいて作製した。構築物HOは、10G8(Kabat定義による)からのマウスCDRの、先に選択したヒトアクセプターフレームワーク中へのストレート移植片であった。構築物H1およびH2はHOに基づくものであって、両方とも、各構築物中に異なる1つのさらなるフレームワーク突然変異を位置2および105にそれぞれ組み込んでいる。
ヒトV遺伝子生殖系列データベースのBLAST分析の後、ヒト生殖系列IGKV4_1)(マウス10G8可変軽鎖配列と64%同一性(CDRを含む)を有する)をヒト化用に好ましいアクセプターフレームワークとして選択した。生殖系列V領域をin silicoで好適なFR4(この場合、配列類似性に基づいてJ域κ4ミニ遺伝子(Kabat Vol.II))と組み合わせた。JK-4ミニ遺伝子残基の最初の2つの残基はCDR3域内にあり、マウス10G8軽鎖CDR3中の最後の2つの残基と同一である。5つのヒト化軽鎖変異体を、配列比較および抗体機能への影響の可能性に基づいて作製した。構築物LOは10G8(Kabat定義による)からのマウスCDRの、先に選択したヒトアクセプターフレームワーク中へのストレート移植片であった。構築物L1、L2およびL3はLOに基づくものであって、各構築物で異なった1つのさらなるフレームワーク突然変異が位置46、84および103にそれぞれ組み込まれている。構築物L4には上記戻し変異の3つ全てが組み込まれている。
ヒト化可変域のDNA配列を、LETO 1.0ソフトウエア(Entelechon GmbH)を用いて配列の最適化を行い、重複オリゴヌクレオチドの構築とPCR増幅によりde novo合成した。プライマーは哺乳動物発現ベクター中へのクローニングおよび分泌のための制限部位ならびに分泌のためのヒト免疫グロブリンシグナル配列を含んだ。ヒト化可変重鎖領域H0〜H2をHindIIIおよびSpelを用いてヒトγ1定常域を含有する哺乳動物発現ベクター中へクローニングした。平行して、ヒト化可変軽鎖領域L0〜L4をHindIIIおよびBsiWIを用いてヒトκ定常域を含有する哺乳動物発現ベクター中へクローニングした。
ヒト化変異体(3つの重鎖 x 5つの軽鎖=15種)のパネルをスクリーニングして絞るために、抗体をHEX細胞に発現させ、BIACore、ELISAおよび機能アッセイにより評価した。
2.2.1 二次スクリーニング
表9に掲げたヒト化10G8抗体をランク付けする二次スクリーニングには、ヒトOSMに対するBIACore動力学分析;ヒト/カニクイザルOSMによるヒトgp130 ELISA;ヒト/カニクイザルOSMによるKB細胞中和アッセイが含まれる。これに加えて、25%ヒトAB血清中のgp130結合をブロックする能力を評価した。
形質移入上清についての最初のBIACore分析は、ヒトOSMに対してL1およびL4ヒト化変異体がL0、L2およびL3ヒト化変異体より高いアフィニティを有することを示した(表8)。これらの軽鎖突然変異は、ストレート移植片単独(HOLO)および10G8キメラと比較してアフィニティを改善した。重鎖変異体、H1およびH2はストレート移植片、HOに対する抗体のアフィニティに小さい影響しか与えなかった。
[表8]
表9:BIACore動力学−10G8キメラと比較した、抗OSMヒト化10G8 L1およびL4変異体抗体の精製バッチのカニクイザルおよびヒトOSM結合動力学
[表9]
KB細胞中和アッセイ:
KB細胞中和アッセイは、gp130アッセイと比較して少量のOSMを用いる(1ng/ml対25ng/ml)。このアッセイは高アフィニティ中和剤を低アフィニティ中和剤からより明確に識別するアッセイである。最初のHO、H1、H2、L0、L1、L2、L3およびL4変異体構築物のKB細胞アッセイスクリーニングはL1構築物が優れることを示した(データは示してない)。これらをBIACore分析で良い結果を示したL4変異体と共に、より大きいバッチで産生し、さらなるアッセイを行った。このアッセイの3回反復から、ヒト化10G8 L1変異体は第1位にランク付けされ、ヒトOSMに対して14ng/mlおよびカニクイザルOSMに対して10ngの平均IC50値を与えた(図17;表10)。
ヒト化10G8 L1変異体はL4変異体と比較してKB細胞アッセイにおいてより大きい生物学的活性を示したので、これらを選択してさらなる試験を行った。L4変異体はCHO-E1a系で非常に低い産生収率しか得られなかったので、これはさらなる進行から除外した。
ヒトgp130 ELISAは比較的高いレベルのOSM(25ng/ml)を用い、リガンドが過剰に存在するので、高アフィニティ抗体を低アフィニティ抗体から分離する能力は低下する。ヒト化10G8 L1変異体によるこのアッセイの2回反復後、全ての3つの変異体はヒトおよびカニクイザル両方のOSMをgp130受容体との結合からブロックする上で等能力であることがこのアッセイで示された(図18)。ヒトgp130アッセイはまた、25%ヒトAB血清の存在のもとでも行った。このアッセイの2回反復は、全ての抗体、ヒト化10G8 H0L1、H1L1およびH2L1変異体がヒトおよびカニクイザルOSMをgp130との結合からブロックする能力を保持することを示した(データは示してない)。
2.3.2 Fabフラグメントの作製
10G8親抗体からのFabフラグメントを、ビーズに固定したパパイン(Pierce 20341)による、20時間、37℃にて20mMリン酸バッファーpH 7、10mM EDTAおよび10mM L-システインを含有するバッファー中での消化により作製した。消化後、使い捨てプラスチックカラムを用いてビーズを取出し、混入するFcフラグメントと未消化の抗体を次いでFabフラグメントからプロテインA型クロマトグラフィを用いて除去した(MabSelect, GE Healthcare 17-5438-03)。Fabフラグメントを含有する無結合画分はさらにSuperdex 200pgサイズ排除クロマトグラフィ(SEC)(GE Healthcare 17-1069-01)を用い、移動相として25mM HEPES pH 7.7、150mM NaClバッファーを用いて精製した。11.5mgの精製Fab(GRITS30249)を5.75mgの組換えOSM(GRITS23122)と1:1のモル比で、1.5時間4℃にて混合することにより複合体を作った。次いで複合体をSuperdex 200pg SECを用いて非複合化材料から精製した。分解した複合体をlOkmwco膜(Vivaspin VS2002)を備えた遠心濃縮デバイスを用いて、44mg/ml全タンパク質(収量9.2mg)まで濃縮した。複合体成分はN-末端配列決定、質量分析およびSDS-PAGEを用いて確証した。FabフラグメントのOSM機能結合活性をgp130阻害アッセイを用いて確認した(データは示してない)。
10G8 OSM FabフラグメントをOSMと複合化し、これを20℃にてPEG3500を沈降剤として用いて結晶化した。結晶化を最適化し、これを欧州シンクロトン放射施設(ESRF)に送って分析し、その構造を3.5Åにて解析した。10G8 mAbは良い表面相補性をもつOSMのヘリックスBおよびCと結合し、OSM部位IIをgp130受容体との結合から純粋に立体障害によりブロックして部位IIからの残基との直接相互作用はなかった。3.5Åで解像したときに結合に直接関わるわずかな残基(5Å未満の距離)を表11および図19に記載した。このブロック効果のほとんどには軽鎖が関わった。4つのCDR(CDRH2、H3およびCDRL1およびL3)が直接または水が介在する相互作用を通してOSMのヘリックスBおよびCと結合した。10G8mAbとの結合時に、OSM分子の有意な歪はなかった。CDRの2つ(CDRH1およびL2)は非結合であったので、抗体の変異体はこれらの1つまたは両方がヒト配列に戻された場合に作られたのかも知れない。これは、ストレートヒト化移植片より免疫原性の小さい分子をもたらしうる。
[表11]
2.3.3
2.3.4 ヒト化10G8抗体:ヒトCDR置換体
自社で解明したOSMと複合した抗OSM 10G8の結晶構造は、CDRH1とCDRL2が抗原結合に直接関わらないことを確認した。好適なヒト生殖系列CDRを選択してこれらのマウス生殖系列CDRと置換えた。2つのCDRH1と2つのCDRL2ヒト生殖系列配列を、抗原結合に与えるそれらの効果について試験した。重鎖および軽鎖両方のCDRに対して元来のヒト生殖系列アクセプターフレームワーク(それぞれIGHV3_7およびIGKV4_1)を試験し、そしてまた、CDRと隣接するフレームワーク相同性(IGHV3_23およびIGKV1_5)に基づいて選択した2つのさらなるヒト生殖系列配列も試験した。ヒト生殖系列CDRH1およびCDRL2配列を、ヒト化HOおよびL1 V-領域中のそれぞれのマウスCDRと交換した。新しいV-領域を、重複オリゴヌクレオチドの構築と、節1.1.4に記載のPCR増幅によりde novo合成した。
2.4.1 二次スクリーニング
BIACore分析:
様々なヒト化10G8 H0L1 CDRH1およびCDRL2構築物からの形質移入上清についてのBIACore分析は、予備候補mAbのヒトOSMアフィニティをそっくり保持する唯一の抗体はH0(IGHV3_23)L1分子であることを示した(表12)。この構築物、ならびに次いで最良のKD値をもつ2つのさらなる分子、H0L1(IGKV4_1)およびH0(IGHV3_23)L1(IGK4_1)をスケールアップし、精製してさらに研究を進めた。
[表12]
KB細胞中和アッセイ:
KB細胞中和アッセイは、ヒト化10G8 H0(IGHV3_23)L1構築物(H0(‘CDRH1)L1と表示)が親ヒト化10G8 H0L1(H0L1と表示)mAbに非常によく似た効力を示すことを実証した。非結合CDRL2のヒト配列への復帰は、H0L1(IGKV4_1)(H0L1(huCDRL2)と表示)およびH0(IGHV3_23)L1(IGK4_1)(H0(huCDRH1)L1(huCDRL2)と表示)抗体に対するデータから見られるように中和活性の減少を示した(図20、表13)。
2.5.1 二次スクリーニング
BIACore分析
BIACore分析を精製H0(IGHV3_23)L1 mAbについて行い、10G8キメラおよびヒト化10G8 H0L1親mAbに対してランク付けした。H0(IGHV3_23)L1 mAbと親H0L1 mAbの間には、ヒトとcyno両方のOSMに対するアフィニティに少ししかまたは全く差がなかった(表6)。H0(IGHV3_23)L1 mAbは、ヒトOSMに対して、代わりの非競合性抗OSMヒト化抗体15E10hと比較して6.5倍(0.8対数)増加したアフィニティを有した。この研究については、新しいバッチのOSMを用いて、より低いKD値を得たが、ヒト化変異体と非競合性抗体との間の差は同じのままであった。
Kinexa 分析
Kinexa(Sapidyne Instruments 3200)溶液相アフィニティ測定器を用いて、抗OSM抗体H0(huCDRH1)L1およびヒト化15E10(無関係のOSM抗体)のヒト、カニクイザル、アカゲザルおよびキヌザルOSMに対する総アフィニティを決定した(表15)。ヒト化15E10を比較のために加えた。
ヒトgp130 ELISAは過剰のOSM(25ng/ml)を用い、その結果、その高アフィニティ抗体を低いアフィニティ抗体から分離する能力が低下する。gp130アッセイの3回反復の後、10G8マウス親、10G8キメラ、ヒト化10G8 H0L1親(H0L1)およびH0(huCDRH1)L1は全て、このアッセイにおいて、ヒトとカニクイザル両方のOSMをgp130受容体との結合からブロックする能力があることを立証した(図21)。このアッセイにおける抗原のレベルが高いので、明確なランク付けは識別できなかった。
KB細胞中和アッセイは、使用するOSMのレベルが低い(1ng/ml)ので、gp130アッセイよりも、高アフィニティを低アフィニティ中和剤から分離する識別能力のあるアッセイである。このアッセイの3回反復から、H0(huCDRH1)L1はヒトOSMに対して30ng/ml、カニクイザルOSMに対して41ng/mlおよびキヌザルOSに対して36ng/mlの平均IC50値を与えた(図22;表17)。
25%ヒトAB血清または25%プールしたヒト滑液の存在のもとで、H0(huCDRH1)L1および15E10hはヒトおよびカニクイザル両方のOSMを中和する能力を保持した(図23)。活性のいくらかの低下が25%AB血清または25%プールした滑液の存在のもとで見られた。これは恐らくこのアッセイ読出値を妨害するこれらのマトリックスによる。通常のアッセイより高いIL-6バックグランドレベルがこのアッセイで観察された。
10G8マウス親、10G8キメラ、ヒト化10G8 H0L1親(H0L1)およびH0(huCDRH1)L1ならびに15E10hは別の4ドナーからの内因性ヒトOSMを阻害した(図24)。これらの4ドナーの結果から、H0L1親とH0(huCDRH1)L1mAbsの間の相違は非常に小さかった;これらは10G8マウス親およびそのキメラより高くランク付けされた(表18)。H0(huCDRH1)L1は15E10hと比較して効力のおよそ12倍(1.09対数)増加を有した。生来のOSMは健康なヒト好中球のGM-CSF-刺激から作製された。
ヒトLIF反応性(KB細胞中和アッセイ):
ヒトLIFはヒトOSMに対するIL-6ファミリーの最も近い関係にあるメンバーである。ヒトLIFKB細胞アッセイの3回反復は、10G8マウス親、10G8キメラ、ヒト化10G8H0L1親(H0L1)およびH0(huCDRH1)L1または15E10hがヒトLIFを中和しないことを示した。15E10hは比較のために加えた。市販の抗ヒトLIF抗体はこのアッセイでLIFを中和しなかった(図25)。これは、これらの抗体がOSM特異的であることを証明した。
ヒト一次肝細胞はOSMに感受性があり、OSM刺激に対して放出急性期タンパク質、例えば、SAAおよびCRPを放出する。H0(huCDRH1)L1は、肝細胞のヒトOSM誘発性(図26)およびCRP(図27)放出を、別の3ドナーから用量に依存する方式で放出する。ヒト化15E10を比較のために加えた。
H0(huCDRH1)L1ならびにヒト化10G8 H0L1親mAbの基本的生物物理学的なプロファイルを試験した。抗体を環境ストレス、例えば:
・温度(14日間、4℃または30℃にて);
・5回の凍結-解凍サイクル;
・1%炭酸水素アンモニウムでの37℃、48時間インキュベーションによる強制脱アミド化
に曝した。
2.6.1 CDRH3変異体ヒト化抗体の構築
CDRH3(配列番号3)の各残基の、代わりのアミノ酸残基への置換を、pTTプラスミド(National Research Council Canada、改変マルチクローニング部位(MCS)をもつ)上の重鎖HO(IGHV3_23)全長配列配列番号75(可変配列:配列番号74)を基本分子として用いて行った。部位特異的突然変異誘発技法(SDM)を用い、その際、オリゴヌクレオチドはアミノ酸置換位置において配列NNK(N=A/T/G/C;K=GまたはT)を持つように設計した。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いて、この変化を含有する新しいプラスミドを作製し、DNA配列を決定し、これを用いてアミノ酸変化をもつクローンを特定した。このやり方で、10〜17種の色々なアミノ酸を12のCDRH3位置のそれぞれに有する変異体を単離した。L1軽鎖(配列番号72)をもつHO(IGHV3_23)変異体を含むpTTベクターを共形質移入しかつ上清を結合について試験することにより、CDRH3変異体抗体を産生した。
重鎖(HO(IGHV3_23))CDRH3変異体および軽鎖L1をコードするpTTプラスミドを一過的にHEK 293 6E細胞中に共形質移入し、小規模で発現して抗体を発現した。組織培養上清からの抗体を直接評価した。
CDRH3スクリーニングに対する最初の動力学分析をProteOn XPR36(Biorad Laboratories)で行い、特定の上清をBiaCore T100でのより正確な動力学分析で選択した。
Claims (29)
- OSMと特異的に結合しかつOSMのgp130受容体との結合を阻害するが部位II残基と直接相互作用しない抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が残基Q20、G120、Q16、N124のいずれか1つと直接結合しない、請求項1に記載の抗原結合タンパク質。
- ヒトOSMの残基82、83、84、90、94、112、115、122、123、152の1以上と相互作用する、請求項1に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が配列番号3または配列番号3の変異体
[ここで配列番号3の変異体は、位置95がAla、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Gln、Ser、Thr、またはValに置換された;
位置96がAla、Cys、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Ser、Thr、TrpまたはTyrに置換された;
位置97がAla、Cys、Phe、MetまたはSerに置換された;
位置98がAla、Asp、Phe、Gly、Leu、Pro、GlnまたはTrpに置換された;
位置99がAla、Cys、Pro、Ser、ValまたはTyrに置換された;
位置100BがGluに置換された;
位置100CがAla、Glu、Phe、Gly、ValまたはTrpに置換された;
位置100DがAla、Cys、Asp、Glu、Gly、Leu、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrに置換された;
位置101がGlu、Gly、Ser、ThrまたはValに置換された;
位置102がAla、Phe、Gly、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Tyr、His、Ile、AspまたはTrpに置換された置換体の1以上を含む]
のCDRH3を含むものである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。 - 抗原結合タンパク質が
i)配列番号3または配列番号3の変異体(Val 102がTyr、His、Ile、Ser、AspまたはGlyに置換された変異体)に設定されたCDRH3;
ii)配列番号2または配列番号2の変異体(Thr50がGly、Tyr、Phe、Ile、GluまたはValに置換されたおよび/またはIle51がLeu、Val、Thr、SerまたはAsnに置換されたおよび/またはSer52がPhe、TrpまたはHisに置換されたおよび/またはGly53がAsp、SerまたはAsnに置換されたおよび/またはGly54がSerに置換されたおよび/またはPhe56がSer、Tyr、Thr、Asn、AspまたはArgに置換されたおよび/またはTyr58がGly、His、Phe、AspまたはAsnに置換された変異体)に設定されたCDRH2;
iii)配列番号4または配列番号4の変異体(Ser27AがAsn、Asp、ThrまたはGluに置換されたおよび/またはSer27CがAsp、Leu、Tyr、Val、Ile、Asn、Phe、His、GlyまたはThrに置換されたおよび/またはAsn31がSer、Thr、LysまたはGlyに置換されたおよび/またはPhe32がTyr、Asn、Ala、His、SerまたはArgに置換されたおよび/またはMet33がLeu、Val、IleまたはPheに置換された変異体)に設定されたCDRL1;
iv)配列番号6または配列番号6の変異体(Leu89がGln、Ser、GlyまたはPheに置換されたおよび/またはHis90がGlnまたはAsnに置換されたおよび/またはSer91がAsn、Phe、Gly、Arg、Asp、His、Thr、TyrまたはValに置換されたおよび/またはArg92がAsn、Tyr、Trp、Thr、Ser、Gln、His、AlaまたはAspに置換されたおよび/またはGlu93がAsn、Gly、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに置換されたおよび/またはPhe96がPro、Leu、Tyr、Arg、Ile、またはTrpに置換された変異体)に設定されたCDRL3
を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。 - 抗原結合タンパク質がさらに
i)配列番号1または配列番号1の変異体(Tyr32がIle、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに置換されたおよび/またはAla33がTyr、Trp、Gly、Thr、LeuまたはValに置換されたおよび/またはMet34がIle、ValまたはTrpに置換されたおよび/またはSer35がHis、Glu、Asn、Gln、TyrまたはThrに置換された変異体)に設定されたCDRH1;
ii)配列番号5に設定されたCDRL2を含む、請求項5に記載の抗原結合タンパク質。 - 抗原結合タンパク質がCDRH3(配列番号3):CDRH2(配列番号2):CDRL1(配列番号4)およびCDRL3(配列番号6)を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質がさらにCDRH1(配列番号1)およびCDRL2(配列番号5)を含む、請求項7に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が
i)配列番号3に設定されたCDRH3、
ii)配列番号1に設定されたCDRH1、
iii)配列番号2に設定されたCDRH2、
iv)配列番号4に設定されたCDRL1、
v)配列番号5に設定されたCDRL2、
vi)配列番号6に設定されたCDRL3、ならびに
vii)重鎖フレームワーク[ここで、重鎖フレームワークは次の残基:
位置2にVal、IleまたはGly、
位置4にLeuまたはVal、
位置20にLeu、Ile、MetまたはVal、
位置22にCys、
位置24にThr、Ala、Val、GlyまたはSer、
位置26にGly、
位置29にIle、Phe、LeuまたはSer、
位置36にTrp、
位置47にTrp、
位置48にIle、met、ValまたはLeu、
位置69にIle、Leu、Phe、MetまたはVal、
位置71にArg、
位置78にAla、Leu、Val、TyrまたはPhe、
位置80にLeu、Met、
位置90にTyrまたはPhe、
位置92にCys、
位置94にArg、Lys、Gly、Ser、HisまたはAsnを含む]
を含むものである、請求項8に記載の抗原結合タンパク質。 - 抗原結合タンパク質がCDRH1またはCDRL2を介してOSMと直接相互作用しない、請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- さらに配列番号73によりコードされた重鎖可変域および配列番号71によりコードされた軽鎖可変域を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- さらに配列番号74の重鎖可変域および配列番号72の軽鎖可変域を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質がヒト化抗体である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗体がIgG1である、請求項13に記載の抗原結合タンパク質。
- OSMと結合した場合、共結晶が約a=168.525Å、b=81.614Å、c=55.540Åおよびβ=106.60度の次元を有する単位セルを含むものである、請求項13〜15のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、ミニボディ、単離VHまたは単離VLのフラグメントである、請求項1〜10のいずれか1項に設定されたCDRを含む抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質がさらに非ヒト霊長類OSMと結合する、請求項1〜16のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が40pm未満のアフィニティでOSMと結合する、請求項1〜17のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質が競合ELISAアッセイで配列番号79の重鎖および配列番号80の軽鎖を有する抗体と競合しない、請求項1〜18のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質。
- 請求項1〜19のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質。
- BIACoreまたはkinexaにより測定した場合、1nMより強いアフィニティでキヌザルおよびヒトOSMの両方と結合する抗原結合タンパク質。
- 少なくとも1つの発現カセットを含む組換え形質転換、形質移入または形質導入をした宿主細胞であって、前記発現カセットが請求項12に記載の抗原結合タンパク質の重鎖をコードするポリヌクレオチドおよびさらに請求項12に記載の抗原結合タンパク質の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む前記宿主細胞。
- 細胞が哺乳動物である、請求項22に記載の宿主細胞。
- 細胞がCHOまたはNSOである、請求項23に記載の宿主細胞。
- 請求項1〜24のいずれか1項に記載の抗原結合タンパク質および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
- 請求項25に記載の組成物を投与するステップを含む、炎症性障害または疾患を患うヒト患者を治療する方法。
- 炎症性関節症、慢性関節リウマチ、骨関節炎、特発性肺線維症(IPF)、全身硬化症、シェーグレン症候、強皮症および/または乾癬を患うヒト患者の治療における請求項25に記載の組成物の使用。
- 非ヒト抗体またはその抗体フラグメントをヒト化する方法であって、次のステップ:
a)1以上の非ヒトCDRをヒトアクセプターフレームワークに組み込んでキメラまたはヒト化抗体を作製するステップ;
b)キメラまたはヒト化抗体をその抗原と結合するステップ;
c)抗原と結合した抗体のエピトープ/パラトープ構造を確認するステップ;
d)抗原との結合に直接関わる抗体の残基を確認するステップ;
e)ステップd)においてヒト生殖系列配列に関わらない1以上の残基を突然変異させるステップ;
f)前記抗体を回収するステップ
を含むものである前記方法。 - 請求項28の方法により得られる抗体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US41649510P | 2010-11-23 | 2010-11-23 | |
US61/416,495 | 2010-11-23 | ||
PCT/EP2011/070604 WO2012069433A2 (en) | 2010-11-23 | 2011-11-21 | Antigen binding proteins |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016220093A Division JP2017078072A (ja) | 2010-11-23 | 2016-11-11 | 抗原結合タンパク質 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014507373A true JP2014507373A (ja) | 2014-03-27 |
JP6351973B2 JP6351973B2 (ja) | 2018-07-04 |
Family
ID=45001764
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013539295A Active JP6351973B2 (ja) | 2010-11-23 | 2011-11-21 | 抗原結合タンパク質 |
JP2016220093A Pending JP2017078072A (ja) | 2010-11-23 | 2016-11-11 | 抗原結合タンパク質 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016220093A Pending JP2017078072A (ja) | 2010-11-23 | 2016-11-11 | 抗原結合タンパク質 |
Country Status (38)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US8916695B2 (ja) |
EP (3) | EP3211009A1 (ja) |
JP (2) | JP6351973B2 (ja) |
KR (2) | KR101947356B1 (ja) |
CN (1) | CN103328508B (ja) |
AR (1) | AR083937A1 (ja) |
AU (1) | AU2011333878B2 (ja) |
BR (1) | BR112013012627A2 (ja) |
CA (1) | CA2818534A1 (ja) |
CL (1) | CL2013001466A1 (ja) |
CO (1) | CO6801627A2 (ja) |
CY (1) | CY1120448T1 (ja) |
DK (1) | DK2643352T3 (ja) |
DO (1) | DOP2013000113A (ja) |
EA (1) | EA027256B1 (ja) |
ES (1) | ES2681949T3 (ja) |
HR (1) | HRP20181092T1 (ja) |
HU (1) | HUE039412T2 (ja) |
IL (1) | IL226157B (ja) |
JO (1) | JO3455B1 (ja) |
LT (1) | LT2643352T (ja) |
MA (1) | MA34742B1 (ja) |
ME (1) | ME03069B (ja) |
MX (1) | MX351887B (ja) |
MY (1) | MY170404A (ja) |
NZ (1) | NZ610464A (ja) |
PE (1) | PE20140519A1 (ja) |
PL (1) | PL2643352T3 (ja) |
PT (1) | PT2643352T (ja) |
RS (1) | RS57502B1 (ja) |
SG (2) | SG190232A1 (ja) |
SI (1) | SI2643352T1 (ja) |
TR (1) | TR201810773T4 (ja) |
TW (1) | TWI504609B (ja) |
UA (1) | UA111954C2 (ja) |
UY (1) | UY33743A (ja) |
WO (1) | WO2012069433A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201303541B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018506528A (ja) * | 2015-01-29 | 2018-03-08 | オックスフォード ユニヴァーシティ イノヴェーション リミテッド | Ibdにおける治療標的及びバイオマーカー |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6216917B2 (ja) | 2010-10-13 | 2017-10-25 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒトオンコスタチンm抗体及び使用方法 |
SG190232A1 (en) | 2010-11-23 | 2013-06-28 | Glaxo Group Ltd | Antigen binding proteins to oncostatin m (osm) |
US9550828B2 (en) | 2013-09-05 | 2017-01-24 | Boise State University | Oncostatin M (OSM) antagonists for preventing cancer metastasis and IL-6 related disorders |
EP3197480A1 (en) | 2014-09-24 | 2017-08-02 | Universita' Degli Studi Di Padova | Composition to induce bone marrow stem cell mobilization |
GB201614627D0 (en) * | 2016-08-30 | 2016-10-12 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Antigen binding proteins |
FR3090637A1 (fr) * | 2018-12-21 | 2020-06-26 | Universite De Poitiers | Protéine de liaison spécifique capable de se lier spécifiquement à l’oncostatine M humaine (hOSM) et ses utilisations. |
US11633457B2 (en) | 2019-04-11 | 2023-04-25 | Boise State University | Pharmaceutical compositions comprising oncostatin m (OSM) antagonist derivatives and methods of use |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007530068A (ja) * | 2004-03-30 | 2007-11-01 | グラクソ グループ リミテッド | 免疫グロブリン |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS57106673A (en) | 1980-12-24 | 1982-07-02 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Dibenzo(b,f)(1,4)oxazepin derivative |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4666884A (en) | 1984-04-10 | 1987-05-19 | New England Deaconess Hospital | Method of inhibiting binding of von Willebrand factor to human platelets and inducing interaction of platelets with vessel walls |
GB8422238D0 (en) | 1984-09-03 | 1984-10-10 | Neuberger M S | Chimeric proteins |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
EP0307434B2 (en) | 1987-03-18 | 1998-07-29 | Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. | Altered antibodies |
US4873316A (en) | 1987-06-23 | 1989-10-10 | Biogen, Inc. | Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals |
WO1991014438A1 (en) | 1990-03-20 | 1991-10-03 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region |
AU4116793A (en) | 1992-04-24 | 1993-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
US5783672A (en) * | 1994-05-26 | 1998-07-21 | Immunex Corporation | Receptor for oncostatin M |
GB9424449D0 (en) | 1994-12-02 | 1995-01-18 | Wellcome Found | Antibodies |
US5747035A (en) | 1995-04-14 | 1998-05-05 | Genentech, Inc. | Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
WO1997043316A1 (en) | 1996-05-10 | 1997-11-20 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Physiologically active molecules with extended half-lives and methods of using same |
DE19742706B4 (de) | 1997-09-26 | 2013-07-25 | Pieris Proteolab Ag | Lipocalinmuteine |
US5958442A (en) * | 1997-10-24 | 1999-09-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Oncostatin M for treating inflammation |
WO1999043713A1 (en) | 1998-02-25 | 1999-09-02 | Lexigen Pharmaceuticals Corporation | Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins |
GB9806530D0 (en) * | 1998-03-26 | 1998-05-27 | Glaxo Group Ltd | Inflammatory mediator |
GB9809839D0 (en) | 1998-05-09 | 1998-07-08 | Glaxo Group Ltd | Antibody |
EP1105427A2 (en) | 1998-08-17 | 2001-06-13 | Abgenix, Inc. | Generation of modified molecules with increased serum half-lives |
IL127127A0 (en) | 1998-11-18 | 1999-09-22 | Peptor Ltd | Small functional units of antibody heavy chain variable regions |
US6818418B1 (en) | 1998-12-10 | 2004-11-16 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
US7115396B2 (en) | 1998-12-10 | 2006-10-03 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
PL209786B1 (pl) | 1999-01-15 | 2011-10-31 | Genentech Inc | Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna |
DK2275540T3 (en) | 1999-04-09 | 2016-05-09 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule. |
US7504256B1 (en) | 1999-10-19 | 2009-03-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing polypeptide |
ES2298106T3 (es) * | 2000-04-21 | 2008-05-16 | Conaris Research Institute Ag | Proteinas de fusion que comprenden dos moleculas gp130 solubles. |
DK1332209T3 (da) | 2000-09-08 | 2010-03-29 | Univ Zuerich | Samlinger af repeatproteiner indeholdende repeatmoduler |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US6374470B1 (en) | 2000-10-06 | 2002-04-23 | Milliken & Company | Face plate for spun-like textured yarn |
ATE489395T1 (de) | 2000-12-12 | 2010-12-15 | Medimmune Llc | Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung |
MXPA05000511A (es) * | 2001-07-12 | 2005-09-30 | Jefferson Foote | Anticuepros super humanizados. |
KR20040054669A (ko) | 2001-08-03 | 2004-06-25 | 글리카트 바이오테크놀로지 아게 | 항체 의존적 세포 독성이 증가된 항체 글리코실화 변이체 |
US20050043519A1 (en) | 2001-08-10 | 2005-02-24 | Helen Dooley | Antigen binding domains |
ATE416190T1 (de) | 2003-07-04 | 2008-12-15 | Affibody Ab | Polypeptide mit bindungsaffinität für her2 |
WO2005019255A1 (en) | 2003-08-25 | 2005-03-03 | Pieris Proteolab Ag | Muteins of tear lipocalin |
PE20090046A1 (es) * | 2003-11-10 | 2009-01-26 | Schering Corp | Anticuerpo recombinante humanizado anti-interleuquina 10 |
BRPI0417302A (pt) | 2003-12-05 | 2007-03-06 | Compound Therapeutics Inc | inibidores de receptores de fator de crescimento endotelial vascular do tipo 2 |
GB0407197D0 (en) * | 2004-03-30 | 2004-05-05 | Glaxo Group Ltd | Immunoglobulins |
CA2573745A1 (en) | 2004-07-21 | 2007-01-12 | Glycofi, Inc. | Immunoglobulins comprising predominantly a glcnac2man3glcnac2 glycoform |
US7923538B2 (en) | 2005-07-22 | 2011-04-12 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Recombinant antibody composition |
AU2006270718B2 (en) | 2005-07-22 | 2011-07-21 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | Genetically modified antibody composition |
PE20080262A1 (es) * | 2006-05-25 | 2008-04-30 | Glaxo Group Ltd | Anticuerpo humanizado contra interleuquina-18 |
EP1958957A1 (en) | 2007-02-16 | 2008-08-20 | NascaCell Technologies AG | Polypeptide comprising a knottin protein moiety |
WO2010056893A1 (en) * | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Imclone Llc | Humanization and affinity-optimization of antibodies |
JP6216917B2 (ja) * | 2010-10-13 | 2017-10-25 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒトオンコスタチンm抗体及び使用方法 |
SG190232A1 (en) | 2010-11-23 | 2013-06-28 | Glaxo Group Ltd | Antigen binding proteins to oncostatin m (osm) |
-
2011
- 2011-11-21 SG SG2013035951A patent/SG190232A1/en unknown
- 2011-11-21 WO PCT/EP2011/070604 patent/WO2012069433A2/en active Application Filing
- 2011-11-21 MY MYPI2013700832A patent/MY170404A/en unknown
- 2011-11-21 SG SG10201500388PA patent/SG10201500388PA/en unknown
- 2011-11-21 CA CA2818534A patent/CA2818534A1/en not_active Abandoned
- 2011-11-21 TR TR2018/10773T patent/TR201810773T4/tr unknown
- 2011-11-21 BR BR112013012627A patent/BR112013012627A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-11-21 PE PE2013001238A patent/PE20140519A1/es active IP Right Grant
- 2011-11-21 PT PT117854240T patent/PT2643352T/pt unknown
- 2011-11-21 PL PL11785424T patent/PL2643352T3/pl unknown
- 2011-11-21 NZ NZ610464A patent/NZ610464A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-11-21 DK DK11785424.0T patent/DK2643352T3/en active
- 2011-11-21 ME MEP-2018-182A patent/ME03069B/me unknown
- 2011-11-21 JO JOP/2011/0353A patent/JO3455B1/ar active
- 2011-11-21 UY UY0001033743A patent/UY33743A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-11-21 EP EP17166131.7A patent/EP3211009A1/en not_active Withdrawn
- 2011-11-21 RS RS20180819A patent/RS57502B1/sr unknown
- 2011-11-21 AU AU2011333878A patent/AU2011333878B2/en active Active
- 2011-11-21 EA EA201390537A patent/EA027256B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-11-21 UA UAA201305873A patent/UA111954C2/uk unknown
- 2011-11-21 LT LTEP11785424.0T patent/LT2643352T/lt unknown
- 2011-11-21 SI SI201131537T patent/SI2643352T1/sl unknown
- 2011-11-21 EP EP18163940.2A patent/EP3369744A1/en not_active Withdrawn
- 2011-11-21 CN CN201180065512.0A patent/CN103328508B/zh active Active
- 2011-11-21 ES ES11785424.0T patent/ES2681949T3/es active Active
- 2011-11-21 KR KR1020187027871A patent/KR101947356B1/ko active IP Right Grant
- 2011-11-21 US US13/989,191 patent/US8916695B2/en active Active
- 2011-11-21 HU HUE11785424A patent/HUE039412T2/hu unknown
- 2011-11-21 AR ARP110104328A patent/AR083937A1/es unknown
- 2011-11-21 MX MX2013005843A patent/MX351887B/es active IP Right Grant
- 2011-11-21 KR KR1020137016213A patent/KR20130119948A/ko active Application Filing
- 2011-11-21 JP JP2013539295A patent/JP6351973B2/ja active Active
- 2011-11-21 TW TW100142577A patent/TWI504609B/zh not_active IP Right Cessation
- 2011-11-21 EP EP11785424.0A patent/EP2643352B1/en active Active
-
2013
- 2013-05-05 IL IL226157A patent/IL226157B/en active IP Right Grant
- 2013-05-15 ZA ZA2013/03541A patent/ZA201303541B/en unknown
- 2013-05-17 CO CO13122422A patent/CO6801627A2/es unknown
- 2013-05-21 DO DO2013000113A patent/DOP2013000113A/es unknown
- 2013-05-23 CL CL2013001466A patent/CL2013001466A1/es unknown
- 2013-06-19 MA MA36018A patent/MA34742B1/fr unknown
-
2014
- 2014-11-13 US US14/540,247 patent/US9605063B2/en active Active
-
2016
- 2016-11-11 JP JP2016220093A patent/JP2017078072A/ja active Pending
-
2017
- 2017-02-09 US US15/428,528 patent/US10808029B2/en active Active
-
2018
- 2018-07-11 HR HRP20181092TT patent/HRP20181092T1/hr unknown
- 2018-07-24 CY CY20181100770T patent/CY1120448T1/el unknown
-
2020
- 2020-07-09 US US16/924,628 patent/US20210017270A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007530068A (ja) * | 2004-03-30 | 2007-11-01 | グラクソ グループ リミテッド | 免疫グロブリン |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018506528A (ja) * | 2015-01-29 | 2018-03-08 | オックスフォード ユニヴァーシティ イノヴェーション リミテッド | Ibdにおける治療標的及びバイオマーカー |
JP6999417B2 (ja) | 2015-01-29 | 2022-02-04 | オックスフォード ユニヴァーシティ イノヴェーション リミテッド | Ibdにおける治療標的及びバイオマーカー |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6833798B2 (ja) | 抗lag−3結合タンパク質 | |
US20210017270A1 (en) | Antigen binding proteins to oncostatin m (osm) | |
JP5420399B2 (ja) | 改変型ヒト化抗インターロイキン−18抗体 | |
JP2011501738A (ja) | Il−23抗体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20141119 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160314 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160712 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161111 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20161118 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20170127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180316 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180606 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6351973 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |