JP2013538039A - 植物防御活性化物質のための方法、植物防御活性化物質及び免疫応答亢進方法 - Google Patents
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Abstract
Description
上記に鑑みて、本発明の目的は、植物の免疫応答を亢進させる植物防御活性化物質を求めて短時間でスクリーニングする正確かつ簡便な方法の提供である。
本発明の各態様は、以下のスクリーニング方法および植物の免疫応答を亢進させる方法を提供する。
植物防御システムのジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路とが互いに独立して作用可能な植物細胞を、候補物質と接触させること、
前記植物細胞を、免疫応答を誘導する誘引物質と接触させること、および、
免疫応答を示す指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記植物の免疫応答を亢進させる標的物質を選別すること、
を含む、方法。
[2] 前記植物細胞が、前記免疫応答が誘導される場合に、前記ジャスモン酸依存性防御経路を阻害するのに不充分な量のサリチル酸を産生するかまたはサリチル酸を産生しない、[1]に記載のスクリーニング方法。
[3] 前記植物細胞がタバコBY−2細胞である、[1]または[2]に記載のスクリーニング方法。
[4] 前記誘引物質が、生存可能微生物、微生物由来材料および毒素からなる群より選択される少なくとも1つの生物学的エリシターである、[1]〜[3]のうちのいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[5] 前記誘引物質が、微生物抽出物、分子パターンおよびエリシチンからなる群より選択される少なくとも1つを含む、[1]〜[4]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[6] 前記誘引物質がクリプトゲインである、[1]〜[5]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[7] 前記指標が、サリチル酸選択的応答指標、ジャスモン酸選択的応答指標およびサリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも1つである、[1]〜[6]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[8] 前記指標が、サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標を含み、かつ、前記サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標が前記植物細胞内のROS(活性酸素種)レベルである、[1]〜[7]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[9] 前記指標が、サリチル酸選択的応答指標を含み、前記サリチル酸選択的応答指標がPR−1遺伝子の発現レベルである、[1]〜[8]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[10] 前記指標がジャスモン酸選択的応答指標を含み、前記ジャスモン酸選択的応答指標がPDF1.2遺伝子、PR−4遺伝子、PR−1b遺伝子およびVSP2遺伝子からなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現レベルである、[1]〜[9]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[11] 前記アッセイが、ジャスモン酸選択的応答指標、サリチル酸選択的応答指標およびサリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも2つの指標に基づく少なくとも2つのアッセイを含む、[1]〜[10]のいずれか1つに記載のスクリーニング方法。
[12] 前記アッセイが、
サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路のうちの少なくとも一方を活性化する一次候補物質を特定すること、ならびに、
前記一次候補物質を、ジャスモン酸選択的応答指標およびサリチル酸選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも1つの指標を用いる少なくとも1つのアッセイに供して、前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する標的物質、または、前記サリチル酸依存性防御経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、[11]に記載のスクリーニング方法。
[13] 前記アッセイが、
サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちのいずれか一方に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、用いられる指標に対応した前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する一次候補物質を特定すること、および、
前記一次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちの他方を用いるアッセイに供して、用いられる指標に応じた他方の経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、[11]に記載のスクリーニング方法。
[14] 前記アッセイが、
サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路のうちの少なくとも一方を活性化する一次候補物質を特定すること、
前記一次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちのいずれか一方に基づくアッセイに供して、用いられる指標に応じた前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する二次候補物質を特定すること、および、
前記二次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標の他方に基づくアッセイに供して、用いられる指標に応じた他方の経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、[11]または[12]に記載のスクリーニング方法。
[15] 以下の化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む液体製剤または前記化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む固体製剤で植物材料を処理することを含む、植物の免疫応答を亢進させる方法。
本明細書で用いられる場合、感染に対する植物の防御とは、病原体によって引き起こされる病害に対する植物の自己防御機構を指し、植物が病原体に接触した場合に、この自己防御機構は、病原体の感染および増殖を阻害する。この自己防御機構の詳細は、仲下英雄ら、植物の生長調節(Regulation of Plant Growth & Development)、39(2)、203頁〜213頁(2004)に記載されており、この文献は、参照により本明細書に組み入れられるものとする。本明細書で用いられる場合、植物の「免疫応答」とは、植物の自己防御機構に寄与するかまたは関与する応答を包含する一般用語である。本明細書で用いられる場合、免疫応答の亢進とは、免疫応答の程度(強度)、期間等における亢進を指す。したがって、免疫応答の亢進は、特定の時点で観察される、いっそう強い免疫応答に限定されるものではなく、より長い時間にわたり免疫応答が持続する場合をも包含する。
さらに、本発明によれば、上記の化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む液体製剤、または上記の化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む固体製剤を用いて、植物細胞を処理することを含む、植物の免疫応答を亢進させる方法が提供される。この方法によれば、植物の防御力を、簡便なやり方で高めることができる。
更に、本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後の数値を含む。
本発明を以下にて説明する。
植物防御システムのジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路とが互いに独立して作用可能な植物細胞は、本明細書において、便宜上、「一次スクリーニング用植物細胞」と称される。
そのような一次スクリーニング用植物細胞におけるサリチル酸依存性防御経路活性は、分類学的に同じ種の一般的な植物細胞におけるサリチル酸依存性防御経路活性よりも低い。サリチル酸依存性防御経路活性は、サリチル酸合成のレベル、あるいは、サリチル酸依存性防御経路に属する遺伝子の発現レベルによって決定されてもよい。
複数のアッセイを複数の指標に基づいて行う場合、それらアッセイの順番は制限されず、いずれの指標が最初のアッセイで用いられてもよい。
本スクリーニング方法が複数の誘導工程を含む場合には、各誘導工程において使用される誘引物質は、互いに同じであっても異なっていてもよい。
本発明におけるスクリーニング工程またはプロセスは、得られる標的物質である植物防御活性化物質に要求される種々の性質に従って適宜選択されてもよい。当該種々の性質としては、例えば、植物防御活性の亢進の程度、植物防御活性によって対処されるべき植物病害の種類および重篤度、ならびに、防御活性化経路の選択性(ジャスモン酸依存性防御経路またはサリチル酸依存性防御経路のうちの一方のみが作用するのか、それとも、ジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路の両方が作用するのか)が挙げられる。これらの要因を考慮して適宜選択され得るスクリーニング工程またはプロセスの例としては、以下に記載のものが挙げられる。
この二段階スクリーニング工程においては、一次スクリーニングプロセスにて、サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標(二重応答性指標)に基づくアッセイが行われ、その後、二次スクリーニングプロセスにて、ジャスモン酸選択的応答指標またはサリチル酸選択的応答指標についてアッセイが行なわれ、この二次スクリーニングプロセスは、一次候補物質に対してのみ行なわれてもよい。したがって、この二段階スクリーニング工程は、これらアッセイにおいて使用される試料の数を減らすことによって標的物質の効率的な選別を可能にする。
このスクリーニング工程においては、一次スクリーニングプロセスと二次スクリーニングプロセスとは相互に異なる指標に基づいて行われ、それにより、これらアッセイにおいて使用される試料の数を減らして、標的物質の効率的な選別が可能となり、また、サリチル酸依存性防御経路およびジャスモン酸依存性防御経路のそれぞれを活性化する能力を有する標的物質を選別することができる。
このスクリーニング工程においては、相互に異なる指標が使用される第一、第二および第三スクリーニングプロセスにてアッセイが行なわれる。したがって、これらアッセイにおいて使用される試料の数を減らして、標的物質の効率的な選別が可能となり、サリチル酸依存性防御経路およびジャスモン酸依存性防御経路のそれぞれを活性化する能力を有する標的物質を確実に選別することができる。
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第一植物細胞を候補物質と接触させること、
前記第一植物細胞を、免疫応答を誘導する第一誘引物質と接触させること、ならびに、
免疫応答を示す第一指標について、前記第一植物細胞をアッセイすること、
を含み、ここで、前記第一指標の上昇は、前記候補物質が免疫応答を亢進させる物質であることが示される、第一スクリーニングプロセスと、
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第二植物細胞を、前記第一スクリーニングプロセスにおいて免疫応答を亢進させた候補物質と接触させること、
前記第二植物細胞を、免疫応答を誘導する第二誘引物質と接触させること、ならびに、
ジャスモン酸依存性防御経路の活性を示す第二指標について、前記第二植物細胞をアッセイすること、
を含み、ここで、前記第二指標の上昇は、前記候補物質がジャスモン酸依存性防御経路を活性化する物質であることを示す、第二スクリーニングプロセスと、
を含む方法である。
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第一植物細胞を、候補物質と接触させること、
前記第一植物細胞を、免疫応答を誘導する第一誘引物質と接触させること、並びに、
免疫応答を示す第一指標について、前記第一植物細胞をアッセイすること、
を含み、ここで、前記第一指標の上昇は、前記候補物質が免疫応答を亢進させる物質であることを示す、第一スクリーニングプロセスと、
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第二植物細胞を、前記第一スクリーニングプロセスにおいて免疫応答を亢進させた候補物質と接触させること、
前記第二植物細胞を、免疫応答を誘導する第二誘引物質と接触させること、ならびに、
ジャスモン酸依存性防御経路の活性を示す第二指標について、前記第二植物細胞をアッセイすること、を含む第二スクリーニングプロセスと、
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第三植物細胞を、前記第一スクリーニングプロセスにおいて免疫応答を亢進させた前記候補物質と接触させること、
前記第三植物細胞を、免疫応答を誘導する第三誘引物質と接触させること、並びに、
サリチル酸依存性防御経路の活性を示す第三指標について、前記第三植物細胞をアッセイすること、を含む第三スクリーニングプロセスと、
を含み、ここで、前記第二指標と前記第三指標の両方の上昇は、前記候補物質がジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路の両方を活性化する物質であることを示すものである方法である。
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第一植物細胞を、候補物質と接触させること、
前記第一植物細胞を、免疫応答を誘導する第一誘引物質と接触させること、並びに、
免疫応答を示す第一指標について、前記第一植物細胞をアッセイすること、
を含み、ここで、前記第一指標の上昇は、前記候補物質が免疫応答を亢進させる物質であることを示す第一スクリーニングプロセスと、
サリチル酸依存性防御経路活性が低い第二植物細胞を、前記第一スクリーニングプロセスにおいて免疫応答を亢進させた候補物質と接触させること、
前記第二植物細胞を、免疫応答を誘導する第二誘引物質と接触させること、ならびに、
ジャスモン酸依存性防御経路の活性を示す第二指標とサリチル酸依存性防御経路の活性を示す第三指標とについて、前記第二植物細胞をアッセイすること、を含み、ここで、前記第二指標と前記第三指標の両方の上昇は、前記候補物質がジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路の両方を活性化する物質であることを示す第二スクリーニングプロセスと、
を含む方法である。
植物の免疫応答を亢進させる物質をスクリーニングする方法であって、サリチル酸依存性防御経路活性が低い植物細胞を、候補物質と接触させること、前記植物細胞を、免疫応答を誘導する誘引物質と接触させること、ならびに、免疫応答を示す指標について、前記植物細胞をアッセイすること、を含み、ここで、前記指標の上昇が、前記候補物質が免疫応答を亢進させる物質であることを示す当該方法。
前記固体担体の例としては、植物学的材料(例えば小麦粉、タバコ茎粉末、ダイズ粉末、クルミ殻粉末、野菜粉末、おがくず、ぬか、樹皮粉末、セルロース粉末および野菜抽出物残渣等)、繊維性材料(例えば紙、段ボール紙および古布(old rags)等)、人工的プラスチック粉末、粘土(例えばカオリン、ベントナイトおよびフラー土等)、タルク、他の無機材料(例えばパイロフィライト、セリサイト、軽石、硫黄粉末および活性炭等)、ならびに化学肥料(例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素および塩化アンモニウム等)が挙げられる。
別の実施形態では、前記活性成分を生育した植物に向かって散布するか、または、前記活性成分を生育した植物と接触させることによって、前記活性成分を、生育した植物に適用してもよく、この場合には、当該活性成分は、液体製剤の形態であっても粉末製剤の形態であってもよい。さらに別の実施形態では、前記活性成分は、前記活性成分を含有する液体製剤の土への灌注によって、または、耕すことにより前記活性成分を含有する粉末製剤を土と混ぜることによって、生育した植物に適用してもよい。
タバコBY−2細胞を試験用植物として選択し、植物防御活性化物質をスクリーニングする以下の方法に使用した。以下の6つの化合物を候補物質として用いた。
RNA単離およびリアルタイムRT−PCR定量化
全RNAを、製造業者のプロトコルに従ってトリゾール(インビトロジェン社、米国カリフォルニア州カールズバッド)試薬を用いて植物細胞から単離し、分光光度計を用いて定量化した。オリゴdTプライマーと逆転写酵素とを用いて、3μgの全RNAから第一の一本鎖cDNAを合成した。
ABI PRISM 7300配列検出システム(アプライドバイオシステムズ社、米国カリフォルニア州フォスターシティ)を用い、SYBR Green リアルタイムPCR Master Mix(東洋紡社、日本大阪府)と遺伝子特異的プライマーとを用いて、リアルタイムPCRを行った。PCR増幅は、95℃で10分間の初期変性と、その後に続く、95℃で15秒間、60℃で15秒間および72℃で45秒間の40サイクルのインキュベーションによって行った。相対的なmRNA存在量は、比較Ct法を用いて算出した。アクチンまたはチューブリンを内部対照として使用した。本実験では、以下のプライマーを使用した。
シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)チューブリン
フォワードプライマー 5’-ATTCCCCCGTCTTCACTTCT-3’
リバースプライマー 5’-CACATTCAGCATCTGCTCGT-3’
シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)PR1
フォワードプライマー 5’-TTCTTCCCTCGAAAGCTCAA-3’
リバースプライマー 5’-AAGGCCCACCAGAGTGTATG-3’
シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)PDF1.2
フォワードプライマー 5’-TCATGGCTAAGTTTGCTTCC-3’
リバースプライマー 5’-AATACACACGATTTAGCACC-3’
タバコ(Nicotiana tabacum)アクチン
フォワードプライマー 5’-GGGTTTGCTGGAGATGATGCT-3’
リバースプライマー 5’-GCTTCATCACCAACATATGCAT-3’
タバコ(Nicotiana tabacum)PR1a
フォワードプライマー 5’-GTCCATACTAATTGAAACGACCTAC-3’
リバースプライマー 5’-CCACTTCAGAGGATTACATATATAGTAC-3’
タバコ(Nicotiana tabacum)PR1b
フォワードプライマー 5’-TTTTGGTGGTATTATGGAGGTGTG-3’
リバースプライマー 5’-ACAATTAACTGCCGTTGACTCATC-3’
イネ(Oryza sativa)アクチン
フォワードプライマー 5’-TGCACAGGAAATGCTTCTAATTCTT-3’
リバースプライマー 5’-ACGGCGATAACAGCTCCTCTT-3’
イネ(Oryza sativa)PBZ1
フォワードプライマー 5’-CGCCGCAAGTCATGTCCTA-3’
リバースプライマー 5’-CTTCCCCACCTTGCTTGCTTTCTG-3’
イネ(Oryza sativa)WRKY45
フォワードプライマー 5’-GACACGGGCCGGGTAAA-3’
リバースプライマー 5’-TTTCTGTACACACGCGTGGAA-3’
シロイヌナズナの実生をMSプレート上で12日間生育させ、次いで、それらの実生を、前記化合物を含有するMSプレートへと移した。3日間または6日間生育させた後に、RNA抽出のための試料を回収した。その結果を図2に示す。
タバコの実生をMSプレート上で7日間生育させ、次いで、それらの実生を、前記化合物を含有するMSプレートへと移した。6日間成長させた後に、その培地にクリプトゲイン(2000nM)を加え、RNA抽出のための試料を、指定の時間(0時間、1時間および24時間)に回収した。その結果を図4に示す。
イネの実生を水上で5日間生育させ、次いで、それらの実生を、前記化合物を含有する水培地へと移した。2日間生育させた後に、その水培地にエリシターとしてのN−アセチルキトヘプタオース([GlcNAc]7)(10μM)を加え、RNA抽出のための試料を、指定の時間(0時間、1時間および24時間)に回収した。その結果を図5に示す。
図5において、プロベナゾール(PBZ)およびベンゾチアジアゾール(BTH)は、主要な植物防御活性化物質であり、サリチル酸依存性防御経路を活性化することによって、植物を病害から守る。PBZ1は、プロベナゾール誘導性遺伝子1(PBZ1)/PR10aであり、PBZ1の発現レベルは、イネ自然免疫における応答性マーカーとして使用される。OsWRKY45は、BTH処理後3時間以内にアップレギュレートされたイネにおけるBTH誘導性およびサリチル酸誘導性のWRKY転写因子遺伝子である。OsWRKY45の過剰発現によって、イネイモチ病菌に対する抵抗性が著しく亢進された。この実験において、我々は、PBZ1の発現レベルだけでなく、OsWRKY45の発現レベルもイネ自然免疫における応答性マーカーとして使用した。
化合物の処理、病原体感染アッセイ
シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)(Col−0)を、生育箱内のプラスチック製の鉢(5cm×5cm×5cm)中、滅菌した鉢植え用の土(クレハ社)にて、16時間−8時間の明暗周期で、湿度60%、22℃にて生育させた。3週間生育させた後に、植物を化合物で5日間灌漑した。
シュードモナス・シリンゲ・パソバー・トマト(Pseudomonas syringae pv tomato)(Pst)DC3000を、栄養素ブイヨン培地(栄研化学社)中で28℃にて24時間培養し、10mMのMgCl2中に細菌懸濁液を調製した(1mLあたり2×105コロニー形成単位)。前記植物を細菌溶液中に浸すことによって、チャレンジ接種を行った。22℃で3日間のインキュベーション後、その接種を受けた植物から葉を採取した。別々の植物からの3〜4枚の葉を混合し、秤量し、次いで、10mMのMgCl2中でホモジナイズした。次いで、そのホモジネートを、適切に希釈して、リファンピシン(50mg/L)を含有する栄養素ブイヨン寒天上に蒔いた。28℃で2日間のインキュベーション後、リファンピシン耐性コロニーの数をカウントした。各実験に対して6つを超えるホモジナイズ試料を調製した。
図3に示されているように、化合物3は、植物病害に対する抵抗性を亢進させるのに効果的であると示されている。
本明細書に記載されたすべての参考文献、特許出願および技術標準は、個々の参考文献、特許出願または技術標準が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個々に記載された場合と同程度に、本明細書においてその全体が参照により本明細書中へと組み入れられるものとする。
Claims (16)
- 少なくとも1つの候補物質から、植物の免疫応答を亢進させる植物防御活性化物質のためのスクリーニング方法であって、
植物防御システムのジャスモン酸依存性防御経路とサリチル酸依存性防御経路とが互いに独立して作用可能な植物細胞を、候補物質と接触させること、
前記植物細胞を、免疫応答を誘導する誘引物質と接触させること、および
免疫応答を示す指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記植物の免疫応答を亢進させる標的物質を選別すること、
を含む、方法。 - 前記植物細胞が、前記免疫応答が誘導される場合に、前記ジャスモン酸依存性防御経路を阻害するのに不充分な量のサリチル酸を産生するかまたはサリチル酸を産生しない、請求項1に記載の方法。
- 前記植物細胞がタバコBY−2細胞である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記誘引物質が、生存可能微生物、微生物由来材料および毒素からなる群より選択される少なくとも1つの生物学的エリシターである、請求項1〜請求項3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記誘引物質が、微生物抽出物、分子パターンおよびエリシチンからなる群より選択される少なくとも1つを含む、請求項1〜請求項4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記誘引物質がクリプトゲインである、請求項1〜請求項5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記指標が、サリチル酸選択的応答指標、ジャスモン酸選択的応答指標およびサリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも1つである、請求項1〜請求項6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記指標がサリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標を含み、前記サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標が前記植物細胞内のROS(活性酸素種)レベルである、請求項1〜請求項7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記指標がサリチル酸選択的応答指標を含み、前記サリチル酸選択的応答指標がPR−1遺伝子の発現レベルである、請求項1〜請求項8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記指標がジャスモン酸選択的応答指標を含み、前記ジャスモン酸選択的応答指標が、PDF1.2遺伝子、PR−4遺伝子、PR−1b遺伝子およびVSP2遺伝子からなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現レベルである、請求項1〜請求項9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アッセイが、ジャスモン酸選択的応答指標、サリチル酸選択的応答指標およびサリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも2つの指標に基づく少なくとも2つのアッセイを含む、請求項1〜請求項10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アッセイすることが、
サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路のうちの少なくとも一方を活性化する一次候補物質を特定すること、ならびに
前記一次候補物質を、ジャスモン酸選択的応答指標およびサリチル酸選択的応答指標からなる群より選択される少なくとも1つの指標を用いる少なくとも1つのアッセイに供して、前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する標的物質、または、前記サリチル酸依存性防御経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、請求項11に記載の方法。 - 前記アッセイすることが、
サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちのいずれか一方に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、用いられる指標に応じた前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する一次候補物質を特定すること、および
前記一次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちの他方を用いるアッセイに供して、用いられる指標に応じた他方の経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、請求項11に記載の方法。 - 前記アッセイすることが、
サリチル酸/ジャスモン酸非選択的応答指標に基づいて、前記誘引物質と接触させた後の前記植物細胞をアッセイして、前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路のうちの少なくとも一方を活性化する一次候補物質を特定すること、
前記一次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちのいずれか一方に基づくアッセイに供して、用いられる指標に応じた前記サリチル酸依存性防御経路または前記ジャスモン酸依存性防御経路を活性化する二次候補物質を特定すること、および
前記二次候補物質を、サリチル酸選択的応答指標またはジャスモン酸選択的応答指標のうちの他方に基づくアッセイに供して、用いられる指標に応じた他方の経路を活性化する標的物質を特定すること、
を含む、請求項11または請求項12に記載の方法。 - 以下の化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む液体製剤または前記化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む固体製剤で植物材料を処理することを含む、植物の免疫応答を亢進させる方法。
- 以下の化合物1〜5のうちの少なくとも1つを含む、植物免疫応答亢進剤。
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