JP2013525788A - より速い泳動、分解の改善、および保存期間の延長を目的とした電気泳動バッファー - Google Patents
より速い泳動、分解の改善、および保存期間の延長を目的とした電気泳動バッファー Download PDFInfo
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Abstract
【選択図】なし
Description
・トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)、
・2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、また3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、3−[N−ビス(ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(DIPSO)、N−(2−(ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、4−(N−モルホリノ)ブタンスルホン酸(MOBS)、3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(POPSO)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−4−アミノブタンスルホン酸(TABS)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびピペラジン−N,N’−ビス(3−プロパンスルホン酸)(PIPPS)から選択され得る少なくとも一つの双性イオン、ならびに
・水
を含む電解液が開示される。
MOPSベースのゲルおよび他のゲルの分離速度を加速し、また分解を増す、タンパク質電気泳動ランニングバッファー。このバッファーは、ACES、MOPS、およびPIPES双性イオンと組み合わされた、トリス−EPPS−SDSバッファーに基づくものである。このバッファーは、Laemmli法とは異なる化学に基づくゲル、例えばInvitroge社のNuPage(商標)およびAmresco社が化学的所有者であるThermoFisher社のEZ−Run(商標)のようなMOPSベースのゲルに対して有利となる。
この研究は、Amresco(商標)社によって開発された製品である、ThermoFisher(商標)社の液体ゲルマトリクスEZ−Run(商標)を用いて行った。この液体ゲルマトリックスは、室温で一年を超えて安定しているという利点を有し、また電気泳動ゲルを迅速に成形することを可能にする。ゲルマトリクスには、それと共に利用されるべき、その特定のランニングバッファーが付随する。推奨されるラン条件は、150Vである。
長いゲル 150V
EZ−Run 110分
EPPS混合物 80分 27% より速い
長いゲル 200V
EZ−Run 80分
EPPS混合物 50分 38% より速い
短いゲル 150V
EZ−Run 65分
EPPS混合物 45分 31% より速い
短いゲル 200V
EZ−Run 50分
EPPS混合物 pH7.4 35分 30% より速い
EPPS混合物2 pH8 30分 40% より速い
Laemmliゲル(短いゲル 200V)とも混合可能
EZ−Run 50分
EPPSのみのバッファー 35分
EPPS混合物 29分 17% より速い
EPPS混合物 pH7.4 29分
本発明による電解液は、ゲル上で分離されるタンパク質バンドの分解にプラスの影響を与えることが確認されている。電解液は、分離されるタンパク質バンドの明確さ(鮮明さ)および分離の両方を改善する。ここで図7A、B、およびCを参照するが、三つのポリアクリルアミドゲルを調製した。ゲルAは、10%のアクリルアミドを有するプレキャストIDGel(商標)トリス−グリシンゲルであり、ゲルBは、4%から20%のアクリルアミドの勾配を有するIDGel(商標)トリス−グリシンゲルであり、ゲルCは、本発明による、10%のアクリルアミドを有する50mMのEPPSを含むゲルである。全てのゲルを、50mMのEPPSおよび50mMのトリスを含む本発明によるバッファー(IDFast)内でランした。図7は、トリス−グリシンゲルに比べて、EPPSの分解が大きく改善されていることを示している。線によって繋がれたバンドは、25kDaに相当する。
Claims (43)
- ゲル電気泳動の、加速もしくは分解改善、または転写効率改善、または加速および分解改善、または加速および転写効率改善のための電解液であって、
・トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)、
・2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、また3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、3−[N−ビス(ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(DIPSO)、N−(2−(ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、4−(N−モルホリノ)ブタンスルホン酸(MOBS)、3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(POPSO)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−4−アミノブタンスルホン酸(TABS)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびピペラジン−N,N’−ビス(3−プロパンスルホン酸)(PIPPS)から選択される少なくとも一つの双性イオン、ならびに
・水
を含む電解液。 - 双性イオンが、ゲル電気泳動を加速するための、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびN−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)から選択される、請求項1に記載の電解液。
- 双性イオンが、ゲル電気泳動の分解改善のための、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびN−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)から選択される、請求項1に記載の電解液。
- 双性イオンが、ゲル電気泳動の加速および分解改善のための、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびN−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)から選択される、請求項1に記載の電解液。
- 双性イオンが、ゲル電気泳動の加速および転写効率改善のための、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、および3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)から選択される、請求項1に記載の電解液。
- 双性イオンが、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)である、請求項1から4のいずれか一つに記載の電解液。
- 電解液のpHが、およそ8.0からおよそ8.8までである、請求項1から5のいずれか一つに記載の電解液。
- さらにメタノールを有する、請求項5に記載の電解液。
- 前記メタノールが最大で20%までである、請求項8に記載の電解液。
- さらにドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を有する、請求項1に記載の電解液。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ニトリロ三酢酸三ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン酢酸三ナトリウム(HEDTA三ナトリウム)、ジエチレントリアミノ酢酸五ナトリウム、またはウラミル酢酸二ナトリウムという名称のキレート剤をさらに有する、請求項1から10のいずれか一つに記載の電解液。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)の濃度が、およそ10mMからおよそ500mMまでである、請求項1から11のいずれか一つに記載の電解液。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)の濃度が、およそ50mMからおよそ150mMまでである、請求項12に記載の電解液。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)の濃度が、およそ50mMからおよそ250mMまでである、請求項12に記載の電解液。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)の濃度が、150mMである、請求項13に記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、およそ1mMからおよそ500mMまでである、請求項1から15のいずれか一つに記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、およそ10mMからおよそ500mMまでである、請求項16に記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、およそ25mMからおよそ50mMまでである、請求項16に記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、およそ50mMからおよそ100mMまでである、請求項16に記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、50mMである、請求項19に記載の電解液。
- 双性イオンの濃度が、100mMである、請求項19に記載の電解液。
- ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の濃度が、0.5%(質量/体積)以下である、請求項10から20のいずれか一つに記載の電解液。
- ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の濃度が、0.1%(質量/体積)以下である、請求項22に記載の電解液。
- ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の濃度が、0.1%(質量/体積)である、請求項22に記載の電解液。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の濃度が、0.5%(質量/体積)以下である、請求項11から20のいずれか一つに記載の電解液。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の濃度が、0.05%(質量/体積)以下である、請求項25に記載の電解液。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の濃度が、0.03%(質量/体積)である、請求項26に記載の電解液。
- 前記双性イオンが、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、および(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)の組み合わせである、請求項1から4のいずれか一つに記載の電解液。
- 請求項1から28のいずれか一つに記載の電解液を有する、電気泳動ゲル。
- ゲルがアクリルアミドゲルである、請求項29に記載の電気泳動ゲル。
- アクリルアミドの濃度が、およそ4%(質量/体積)からおよそ25%(質量/体積)までである、請求項30に記載の電気泳動ゲル。
- ゲルがアガロースゲルである、請求項29に記載の電気泳動ゲル。
- アガロースの濃度が、およそ0.5%(質量/体積)からおよそ3%(質量/体積)までである、請求項32に記載の電気泳動ゲル。
- ゲルがアクリルアミドおよびアガロースのゲルである、請求項29に記載の電気泳動ゲル。
- アクリルアミドの濃度が、およそ1%未満(質量/体積)からおよそ25%(質量/体積)までであり、またアガロースの濃度が、およそ0.5%(重さ/体積)からおよそ3%(質量/体積)までである、請求項34に記載の電気泳動ゲル。
- さらにドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を有する、請求項30、31、34、および35のいずれか一つに記載の電気泳動ゲル。
- 双性イオンが、ゲルの保存期間改善のための、2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、および3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(POPSO)から選択される、請求項29から36のいずれか一つに記載の電気泳動ゲル。
- pHが、およそ8.0からおよそ8.8までである、請求項29から37のいずれか一つに記載の電気泳動ゲル。
- 少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の、加速もしくは分解改善の方法、または転写効率改善の方法、または加速および分解改善の方法、または加速および転写効率改善の方法であって、
・少なくとも一つのサンプルをその中に含む電気泳動ゲルと接触している請求項1から28のいずれか一つに記載の電解液に電圧をかける段階
を含む方法。 - 電気泳動ゲルが、請求項29から38のいずれか一つに記載のゲルである、請求項39に記載の方法。
- 少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の、加速もしくは分解改善の方法、または転写効率改善の方法、または加速および分解改善の方法、または加速および転写効率改善の方法であって、
・少なくとも一つのサンプルをその中に含む請求項29から38のいずれか一つに記載の電気泳動ゲルと接触させてゲル電気泳動を行うことに適した電解液に電圧をかける段階
を含む方法。 - 少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の分解改善のための方法であって、
・2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、また3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、3−[N−ビス(ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(DIPSO)、N−(2−(ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、4−(N−モルホリノ)ブタンスルホン酸(MOBS)、3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(POPSO)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−4−アミノブタンスルホン酸(TABS)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、(2−[2−アセトアミノ]−2−アミノエタンスルホン酸)(ACES)、(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)(PIPES)、(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸)(MOPS)、およびピペラジン−N,N’−ビス(3−プロパンスルホン酸)(PIPPS)から選択される少なくとも一つの双性イオンを、電気泳動バッファーもしくは電気泳動ゲル、または電気泳動バッファーおよび電気泳動ゲルの両方に添加することを含む方法。 - 前記双性イオンが、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)である、請求項42に記載の方法。
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