JP2013510886A - キナーゼ阻害剤 - Google Patents
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Abstract
オレフィン部分を有するキナーゼ阻害剤を使用してキナーゼを阻害する方法が開示される。
Description
関連出願の相互参照
本願は、米国特許法1.119(e)の下での2009年11月16日に出願された米国出願第61/261,696号および2010年4月30日に出願された米国出願第61/330,271号の利益を主張し、これらの各々はすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
本願は、米国特許法1.119(e)の下での2009年11月16日に出願された米国出願第61/261,696号および2010年4月30日に出願された米国出願第61/330,271号の利益を主張し、これらの各々はすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
連邦政府によって資金援助された研究開発の下で行われた発明に対する権利に関する言及
本発明は、米国国立衛生研究所(the National Institutes of Health)によって贈られたGM071434の下で政府の援助を用いてなされた。政府は本発明において特定の権利を有する。
本発明は、米国国立衛生研究所(the National Institutes of Health)によって贈られたGM071434の下で政府の援助を用いてなされた。政府は本発明において特定の権利を有する。
発明の背景
ヒトゲノムは、プロテインキナーゼをコードしている少なくとも500個の遺伝子を含有する。実際、プロテインキナーゼ遺伝子は、すべてのヒトの遺伝子の約2%を構成する。プロテインキナーゼは、すべてのヒトタンパク質の30%までを修飾し、細胞経路、特に、シグナル伝達に関与する細胞経路の大部分を調節する。
ヒトゲノムは、プロテインキナーゼをコードしている少なくとも500個の遺伝子を含有する。実際、プロテインキナーゼ遺伝子は、すべてのヒトの遺伝子の約2%を構成する。プロテインキナーゼは、すべてのヒトタンパク質の30%までを修飾し、細胞経路、特に、シグナル伝達に関与する細胞経路の大部分を調節する。
細胞上の深刻な効果のため、プロテインキナーゼの活性は高度に調節されている。確かに、調節されていないプロテインキナーゼ活性は、細胞増殖、細胞移動、および細胞死の制御に関連する疾患、特に、癌を頻繁に引き起こしている。現在、多くの研究が、様々な疾患を治療するために特定のキナーゼを阻害することが可能な薬物を見い出すために行われている。グリベック(Gleevec)(イマチニブ)およびイレッサ(Iressa)(ゲフィチニブ)を含むこのような薬物のいくつかは、すでに臨床使用されている。効力および選択性を増加させるために、キナーゼ活性部位においてシステインとの共有結合を形成する不可逆的求電子性阻害剤が開発された。これらの不可逆的キナーゼ阻害剤のいくつかは現在臨床試験中である(例えば、ネラチニブ、トボック(tovok))。しかし、タンパク質への阻害剤の不可逆的な結合を通してのタンパク質の阻害は、疾患を治療するために使用されるときには、毒性および/または免疫原性の問題をしばしばもたらす。従って、毒性のリスクを最小化しながら、キナーゼを阻害するための可逆的キナーゼ阻害剤が必要とされている。本発明は、当該分野におけるこれらの必要性およびその他の必要性に取り組むものである。
第1の態様において、キナーゼ阻害剤が提供される。ある実施形態において、このキナーゼ阻害剤は化学式Iの構造を有する:
化学式Iにおいて、R1は置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
L1は結合、−C(O)−、−C(O)N(L3R2)−、−C(O)O−、−S(O)n−、−O−、−N(L3R2)−、−P(O)(OL3R2)O−、−SO2N(L3R2)−、−P(O)(NL3R2)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号nは0、1、または2である。
L2は結合、−C(O)−、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−N(L3AR2A)−、−P(O)(OL3AR2A)O−、−SO2N(L3AR2A)−、−P(O)(NL3AR2A)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号tは0、1、または2である。
L3およびL3Aは、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号wは、0、1、または2である。
R2およびR2Aは、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
Eは電子求引基であるか、またはL2と一緒になって電子求引基を形成する。
別の態様において、プロテインキナーゼを阻害する方法が提供される。これらの方法には、本発明で提供される有効量のキナーゼ阻害剤と、プロテインキナーゼを接触させることが含まれる。このキナーゼ阻害剤は、化学式Iまたは化学式IIの構造(または本明細書に記載されているその実施形態のいずれか)を有し得る。
別の態様において、キナーゼ活性に関連する疾患の治療が必要な被験体において、キナーゼ活性に関連する疾患を治療する方法。この方法は、本発明に提供される有効量のキナーゼ阻害剤を被験体に投与することを含む。このキナーゼ阻害剤は、化学式Iまたは化学式IIの構造(または本明細書に記載されているその実施形態のいずれか)を有し得る。
発明の詳細な説明
I.定義
本明細書で使用される略号は、化学分野および生物分野の中でそれらの慣用的な意味を有する。本明細書に示される化学構造および化学式は、化学分野において知られている化学原子価数の標準的な規則に従って解釈される。
I.定義
本明細書で使用される略号は、化学分野および生物分野の中でそれらの慣用的な意味を有する。本明細書に示される化学構造および化学式は、化学分野において知られている化学原子価数の標準的な規則に従って解釈される。
置換基が、左から右に向けて書かれたそれらの慣用的な化学式によって特定されるとき、これらは、右から左に向けて構造を書くことから生じる化学的に同一の置換基を等しく包含し、例えば、−CH2O−は−OCH2−と等価である。
他に言及されない場合、「アルキル」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、指定された数の炭素原子を有する(すなわち、C1−C10は1〜10個の炭素を意味する)、完全に飽和しているか、モノ不飽和またはポリ不飽和であってもよく、二価および多価基を含むことができる、直鎖(すなわち、分枝ではない)または分枝鎖、またはそれらの組み合わせを意味する。飽和炭化水素基の例には、メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、t−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、(シクロヘキシル)メチルなどの基、例えば、n−ペンチル、n−ヘキシル、n−ヘプチル、n−オクチルなどの同族体および異性体が挙げられるがこれらに限定されない。不飽和アルキル基は、1つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例には、ビニル、2−プロペニル、クロチル、2−イソペンテニル、2−(ブタジエニル)、2,4−ペンタジエニル、3−(1,4−ペンタジエニル)、エチニル、1−および3−プロピニル、3−ブチニル、およびより高級な同族体および異性体が挙げられるがこれらに限定されない。アルコキシは、酸素リンカー(−O−)を介して分子の残りに結合しているアルキルである。
「アルキレン」という用語は、それ自体、または別の置換基の一部として、−CH2CH2CH2CH2−によって例示されるがこれに限定されない、アルキルから誘導された二価の基を意味し、「ヘテロアルキレン」として以下に記載される基をさらに含む。典型的には、アルキル(またはアルキレン)基は1〜24個の炭素原子を有し、本発明においては、10個以下の炭素原子を有する基が好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般的には8個以下の炭素原子を有する、より短い鎖のアルキルまたはアルキレン基である。
「ヘテロアルキル」という用語は、他に言及されない限り、それ自体または別の用語と組み合わせて、少なくとも1個の炭素原子、ならびに、O、N、P、Si、およびSからなる群より選択される少なくとも1個のヘテロ原子からなる、安定な直鎖もしくは分枝鎖、または環状の炭化水素基、またはそれらの組み合わせを意味し、ここで、窒素原子および硫黄原子は任意に酸化されてもよく、窒素ヘテロ原子は任意に四級化され得る。ヘテロ原子O、N、PおよびSならびにSiは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置、またはアルキル基がその分子の残りに結合されている位置に配置され得る。例には、−CH2−CH2−O−CH3、−CH2−CH2−NH−CH3、−CH2−CH2−N(CH3)−CH3、−CH2−S−CH2−CH3、−CH2−CH2、−S(O)−CH3、−CH2−CH2−S(O)2−CH3、−CH=CH−O−CH3、−Si(CH3)3、−CH2−CH=N−OCH3、−CH=CH−N(CH3)−CH3、O−CH3、−O−CH2−CH3、および−CNが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、−CH2−NH−OCH3などのように2個までのヘテロ原子が連続し得る。同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、−CH2−CH2−S−CH2−CH2−および−CH2−S−CH2−CH2−NH−CH2−によって例示されるがこれらに限定されない、それ自体、または別の置換基の一部としての、ヘテロアルキルから誘導された二価の基を意味する。ヘテロアルキレン基については、ヘテロ原子はまた、鎖の末端のいずれかまたはその両方を占めることができる(例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど)。なおさらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基については、連結基の方向は、連結基の化学式が書かれている方向によって暗示されない。例えば、化学式−C(O)2R’−は、−C(O)2R’−と−R’C(O)2−の両方を表す。上記に記載されるように、ヘテロアルキル基は、本明細書で使用される場合、−C(O)R’、−C(O)NR’、−NR’R”、−OR’、−SR’、および/または−SO2R’などのヘテロ原子を通して分子の残りに結合される基を含む。「ヘテロアルキル」が列挙され、次に−NR’R”などのような特定のヘテロアルキル基の列挙が続く場合、ヘテロアルキルおよび−NR’R’’という用語は冗長ではなく、または相互に排他的であることが理解される。むしろ、特定のヘテロアルキル基は明確さを加えるために列挙される。従って、「ヘテロアルキル」という用語は、本明細書では、−NR’R”などのような特定のヘテロアルキル基を除外するものとして解釈されるべきではない。
「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」という用語は、それら自体、または他の用語と組み合わせて、他に言及されない限り、それぞれ、「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状バージョンを表す。加えて、ヘテロシクロアルキルについては、ヘテロ原子は、複素環が分子の残りに結合される位置を占めることができる。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、1−シクロヘキセニル、3−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられるがこれらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例には、1−(1,2,5,6−テトラヒドロピリジル)、1−ピペリジニル、2−ピペリジニル、3−ピペリジニル、4−モルホリニル、3−モルホリニル、テトラヒドロフラン−2−イル、テトラヒドロフラン−3−イル、テトラヒドロチエン−2−イル、テトラヒドロチエン−3−イル、1−ピペラジニル、2−ピペラジニルなどが挙げられるがこれらに限定されない。「シクロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、それぞれ、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから誘導された二価基を意味する。
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、他に言及されない限り、それ自体または別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。加えて、「ハロアルキル」のような用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことを意味し、例えば、「ハロ(C1−C4)アルキル」という用語は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、4−クロロブチル、3−ブロモプロピルなどを含むがこれらに限定されないことを意味する。
「アシル」という用語は、Rが置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、−C(O)Rを意味する。
「アリール」という用語は、他に言及されない限り、単環、または一緒に縮合しているか(すなわち、縮合環アリール)または共有結合的に連結している多環(好ましくは1〜3個の環)であり得る、多価不飽和、芳香族、炭化水素置換基を意味する。縮合環アリールは、縮合環の少なくとも1個がアリール環である、一緒に縮合した多環をいう。「ヘテロアリール」という用語は、N、O、およびSから選択される1〜4個のヘテロ原子を含有するアリール基(または環)をいい、ここで、窒素および硫黄原子は任意に酸化され、窒素原子(1個または複数)は任意に四級化される。従って、「ヘテロアリール」という用語は、縮合環ヘテロアリール基を含む(すなわち、縮合環の少なくとも1個がヘテロ芳香族環である、一緒に縮合した多環)。5,6−縮合環ヘテロアリーレンとは、1個の環が5個のメンバーを有し、他の環が6個のメンバーを有し、そして少なくとも1個の環がヘテロアリール環である、一緒に縮合した2個の環をいう。同様に、6,6−縮合環ヘテロアリーレンとは、1個の環が6個のメンバーを有し、他の環が6個のメンバーを有し、そして少なくとも1個の環が1個のヘテロアリール環である、一緒に縮合した2個の環をいう。そして6,5−縮合環ヘテロアリーレンとは、1個の環が6個のメンバーを有し、他の環は5個のメンバーを有し、そして少なくとも1個の環はヘテロアリール環である、一緒に縮合した2個の環をいう。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を通して分子の残りに結合できる。アリールおよびヘテロアリール基の非限定的な例には、フェニル、1−ナフチル、2−ナフチル、4−ビフェニル、1−ピロリル、2−ピロリル、3−ピロリル、3−ピラゾリル、2−イミダゾリル、4−イミダゾリル、ピラジニル、2−オキサゾリル、4−オキサゾリル、2−フェニル−4−オキサゾリル、5−オキサゾリル、3−イソオキサゾリル、4−イソオキサゾリル、5−イソオキサゾリル、2−チアゾリル、4−チアゾリル、5−チアゾリル、2−フリル、3−フリル、2−チエニル、3−チエニル、2−ピリジル、3−ピリジル、4−ピリジル、2−ピリミジル、4−ピリミジル、5−ベンゾチアゾリル、プリニル、2−ベンゾイミダゾリル、5−インドリル、1−イソキノリル、5−イソキノリル、2−キノキサリニル、5−キノキサリニル、3−キノリル、および6−キノリルが挙げられる。上記に記述されたアリールおよびヘテロアリール環系の各々についての置換基は、以下に記載される受容可能な置換基の群より選択される。「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、それぞれ、アリールおよびヘテロアリールから誘導される二価基を意味する。
簡潔さのために、「アリール」という用語は、他の用語と組み合わせて使用されるとき(例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル)、上記に定義されたようなアリール環とヘテロアリール環の両方を含む。従って、「アリールアルキル」という用語は、炭素原子(例えば、メチレン基)が、例えば、酸素原子によって置き換えられているアルキル基(例えば、フェノキシメチル、2−ピリジルオキシメチル、3−(1−ナフチルオキシ)プロピルなど)を含む、アリール基がアルキル基に結合されている基(例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど)を含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、炭素原子に二重結合で結合されている酸素を意味する。
本明細書で使用される場合、「アルキルスルホニル」という用語は、R’が上記に定義されたアルキル基である、化学式−S(O2)−R’を有する部分を意味する。R’は特定の数の炭素を有し得る(例えば、「C1−C4アルキルスルホニル」)。
上記の用語の各々は(例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」、および「ヘテロアリール」)、示された基の置換型と非置換型の両方を含むことを意味する。基の各型についての好ましい置換基は以下に提供される。
アルキル基およびヘテロアルキル基(アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルとしばしば呼ばれる基を含む)についての置換基は、0から(2m’+1)の範囲の数である、−OR’、=O、=NR’、=N−OR’、−NR’R”、−SR’、−ハロゲン、−SiR’R”R”’、−OC(O)R’、−C(O)R’、−CO2R’、−CONR’R”、−OC(O)NR’R”、−NR”C(O)R’、−NR’−C(O)NR”R”‘、−NR”C(O)2R’、−NR−C(NR’R”R’”)=NR””、−NR−C(NR’R”)=NR’”、−S(O)R’、−S(O)2R’、−S(O)2NR’R”、−NRSO2R’、−CN、および−NO2から選択される種々の基の1種以上であり得るがこれらに限定されず、ここで、m’はこのような基における炭素原子の総数である。R’、R”、R”‘、およびR”“は、各々好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール(例えば、1−3個のハロゲンで置換されたアリール)、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基をいう。本発明の化合物が複数のR基を含むとき、例えば、R基の各々はこれらの基が複数存在するときR’、R”、R’”、およびR””基であるように独立して選択される。R’およびR”が同じ窒素原子に結合されるとき、これらは、窒素原子と合わさって4−、5−、6−、または7−員環を形成することができる。例えば、−NR’R”は、1−ピロリジニルおよび4−モルホリニルを含むことを意味するがこれらに限定されない。上記の置換基の議論から、当業者は、「アルキル」という用語が、ハロアルキル(例えば、−CF3および−CH2CF3)およびアシル(例えば、−C(O)CH3、−C(O)CF3、−C(O)CH2OCH3など)などの、水素基以外の基に結合された炭素原子を含む基を含むことを意味する。
アルキル基について記載された置換基と同様に、アリール基およびヘテロアリール基についての置換基は、0から芳香族環系の空いている価数の合計までの範囲の数で、変化され、例えば、ハロゲン、−OR’、−NR’R”、−SR’、−ハロゲン、−SiR’R”R”‘、−OC(O)R’、−C(O)R’、−CO2R’、−CONR’R”、−OC(O)NR’R”、−NR”C(O)R’、−NR’−C(O)NR”R’”、−NR”C(O)2R’、−NR−C(NR’R”R’”)=NR””、−NR−C(NR’R”)=NR’”、−S(O)R’、−S(O)2R’、−S(O)2NR’R”、−NRSO2R’、−CN、および−NO2、−R’、−N3、−CH(Ph)2、フルオロ(C1−C4)アルコキシ、およびフルオロ(C1−C4)アルキルから選択され;ここで、R’、R”、R”‘、およびR””は、好ましくは、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから独立して選択される。本発明の化合物が複数のR基を含むとき、例えば、R基の各々は、これらの基が複数存在するときR’、R”、R’”、およびR”“基であるように独立して選択される。
アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の2個の置換基は化学式−T−C(O)−(CRR’)q−U−の環を任意に形成してもよく、ここで、TおよびUは、独立して、−NR−、−O−、−CRR’−、または単結合であり、そしてqは0〜3の整数である。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の2個の置換基は化学式−A−(CH2)r−B−の置換基で任意に置き換えられてもよく、ここで、AおよびBは、独立して、−CRR’−、−O−、−NR−、−S−、−S(O)−、−S(O)2−、−S(O)2NR’−、または単結合であり、そしてrは1〜4の整数である。このように形成された新たな環の1個の単結合は任意に二重結合で置き換えられ得る。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の2個の置換基は化学式−(CRR’)s−X’−(C’’R’’’)d−の置換基で任意に置き換えられてもよく、ここで、sおよびdは、独立して、0〜3の整数であり、そしてX’は−O−、−NR’−、−S−、−S(O)−、−S(O)2−、または−S(O)2NR’−である。置換基R、R’、R”、およびR’”は、好ましくは、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから独立して選択される。
本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」という用語は、酸素(O)、窒素(N)、硫黄(S)、リン(P)、およびケイ素(Si)を含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する:
(A)−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、オキソ、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(B)
(i)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(ii):
(a)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(b)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、および非置換ヘテロアリールから選択された少なくとも1個の置換基で置換された、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール
から選択される少なくとも1個の置換基で置換されるアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール
から選択される少なくとも1個の置換基で置換されているアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール。
(A)−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、オキソ、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(B)
(i)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(ii):
(a)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(b)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、および非置換ヘテロアリールから選択された少なくとも1個の置換基で置換された、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール
から選択される少なくとも1個の置換基で置換されるアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール
から選択される少なくとも1個の置換基で置換されているアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール。
本明細書で使用される場合、「サイズが限定された置換基(substituent)」または「サイズが限定された置換分基(substituent group)」という用語は、各置換もしくは非置換アルキルは置換もしくは非置換C1−C20アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは置換もしくは非置換2〜20員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは置換もしくは非置換C4−C8シクロアルキルであり、そして各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは置換もしくは非置換4−8員ヘテロシクロアルキルである、「置換基」について上記に記載されたすべての置換基から選択される基を意味する。
本明細書で使用される場合、「低級置換基(substituent)」または「低級置換分基(substituent group)」は、各置換もしくは非置換アルキルは置換もしくは非置換C1−C8アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは置換もしくは非置換は2−8員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは置換もしくは非置換C5−C7シクロアルキルであり、そして各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは置換もしくは非置換5−7員ヘテロシクロアルキルである、「置換基」について上記に記載されたすべての置換基から選択される基を意味する。
「薬学的に受容可能な塩」という用語は、本明細書に記載される化合物上で見い出される特定の置換基に依存して、比較的非毒性の酸または塩基ともに調製される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含有するとき、塩基付加塩は、混ぜものがないかまたは適切な不活性溶媒中にあるかのいずれかである、有効量の所望の塩基と、中性型のこのような化合物を接触させることによって得ることができる。薬学的に受容可能な塩基付加塩の例には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウムの塩、または同様の塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含有するとき、酸付加塩は、混ぜものがないかまたは適切な不活性溶媒中にあるかのいずれかである、有効量の所望の酸と、中性型のこのような化合物を接触させることによって得ることができる。薬学的に受容可能な酸付加塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などのような無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、p−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、シュウ酸、メタンスルホン酸などのような比較的無毒性の有機酸から誘導される塩が挙げられる。アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸(galactunoric acid)などのような有機酸の塩もまた含まれる(例えば、Berge et al.,“Pharmaceutical Salts”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1−19を参照のこと)。本発明のある特定の化合物は、化合物が塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに転換されることを許容する塩基性官能基と酸性官能基の両方を含有する。
従って、本発明の化合物は、塩として、例えば、薬学的に受容可能な酸とともに存在し得る。本発明はこのような塩を含む。このような塩の例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩(例えば、(+)−酒石酸、(−)−酒石酸、またはラセミ混合物を含むその混合物)、コハク酸塩、安息香酸塩、およびグルタミン酸などのアミノ酸との塩が挙げられる。これらの塩は当業者に公知の方法によって調製され得る。
中性型の化合物は、塩を塩基または酸と接触させること、および慣用的な様式で親の化合物を単離することによって好ましく再生される。親の型の化合物は、極性溶媒中での溶解度などの特定の物理的特性の点で、様々な塩型とは異なる。
塩型に加えて、本発明は、プロドラッグ型である化合物を提供する。本明細書に記載される化合物のプロドラッグは、本発明の化合物を提供するために生理学的条件下で化学変化を容易に受ける化合物である。加えて、プロドラッグは、エキソビボ環境において、化学的または生化学的方法によって本発明の化合物に転換できる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬を有する経皮パッチリザーバー中に配置されたときに、本発明の化合物にゆっくりと転換できる。
本発明の特定の化合物は、非溶媒和型ならびに水和物型を含む溶媒和型で存在できる。一般的には、溶媒和型は、非溶媒和型と等価であり、本発明の範囲内に包含される。本発明の特定の化合物は、複数の結晶型またはアモルファス型で存在し得る。一般的に、すべての物理型が本発明によって意図される用途のために等価であり、本発明の範囲内にあることが意図される。
本発明の特定の化合物は、不斉炭素原子(光学中心)または二重結合を保有し;ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、および個々の異性体は本発明の範囲内に包含される。本発明の化合物は、合成および/または単離するために不安定過ぎる、当該分野において公知であるものを含まない。
本発明の化合物はまた、このような化合物を構成する1個以上の原子に、原子の同位体の非天然的な比率を含有し得る。例えば、これらの化合物は、例えば、トリチウム(3H)、ヨウ素−125(125I)、または炭素−14(14C)などの放射性同位元素で放射性標識され得る。本発明の化合物のすべての同位体のバリエーションは、放射性であるか否かに関わらず、本発明の範囲内に包含される。
本明細書に提供される化合物の置換基が「R置換される」(例えば、R7置換される)場合、置換基は、1個以上のR基と名付けられた基(例えば、R7)で適切に置換されることを意味する。ある実施形態において、置換基は、1個のみのR基と名付けられた基で置換される。
「治療すること」または「治療」という用語は、軽減;寛解;徴候を減少するかまたは傷害、病理、もしくは状態を患者に対してより耐容性にすること;変性または衰退の速度を遅くすること;変性の最終点をより弱体化すること;患者の身体的または精神的な健康を改善することなどの任意の客観的または主観的パラメーターを含む、傷害、病理、または状態の治療または改善における任意の成功の指標をいう。徴候の治療または改善は、身体検査、神経精神病学的検査、および/または精神鑑定の結果を含む、客観的または主観的パラメーターに基づくことができる。例えば、本明細書に提示される特定の方法は、癌の発生を減少させることによって、その増殖を阻害する際に、およびまたは癌の緩解を引き起こす際に、首尾よく癌を治療する。
「有効量」は、疾患の徴候の治療、予防、もしくは減少に寄与するため、またはキナーゼ阻害剤の非存在と比較して、プロテインキナーゼの活性を阻害するために、十分なキナーゼ阻害剤の量である。疾患治療に関連して列挙される場合、「有効量」は「治療有効量」とも呼ばれ得る。徴候の減少(およびこの語句の文法的な等価物)は、これらの徴候の重篤度もしくは頻度の減少、またはこれらの徴候の除去を意味する。薬物の「予防有効量」は、被験体に投与されたときに、意図された予防効果を有する、例えば、疾患の発症(もしくは再発)を予防もしくは遅延し、または疾患もしくはその徴候の発症(もしくは再発)の可能性を減少させる薬物の量である。完全な予防効果は、必ずしも1用量の投与によって起こることではなく、一連の投薬後にのみ起こる可能性がある。従って、予防有効量は、1回以上の投与で投与され得る。本明細書で使用される場合、「活性減少量」とは、アンタゴニストの非存在下と比較して、酵素の活性を減少するために必要とされるアンタゴニストの量をいう。本明細書で使用される場合、「機能破壊量」とは、アンタゴニストの非存在下と比較して、破骨細胞または白血球の機能を破壊するために必要とされるアンタゴニストの量をいう。
「キナーゼ」、「プロテインキナーゼ」などの用語は、リン酸基をドナー分子(例えば、ATP)から基質に転移させる酵素をいう。リン酸基をドナーから基質に転移させるプロセスは、通常、リン酸化として知られている。タンパク質リン酸化との関連における「基質」という用語は、リン酸基を受容し、従って、リン酸化される化合物(例えば、タンパク質)をいう。
II.キナーゼ阻害剤
第1の態様において、キナーゼ阻害剤が提供される。これらのキナーゼ阻害剤は、典型的には、可逆的キナーゼ阻害剤である。ある実施形態において、これらのキナーゼ阻害剤は化学式Iの構造を有する:
第1の態様において、キナーゼ阻害剤が提供される。これらのキナーゼ阻害剤は、典型的には、可逆的キナーゼ阻害剤である。ある実施形態において、これらのキナーゼ阻害剤は化学式Iの構造を有する:
化学式Iにおいて、R1は、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L1A−R1Aである。R1Aは、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリールである。L1−R1および/またはR1は、キナーゼATP結合部位の中に適合するように、および/またはキナーゼATP結合部位の中のアミノ酸(例えば、キナーゼATP結合部位部分)に結合するように一般的に設計される。
L1は、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3R2)−、−C(O)O−、−S(O)n−、−O−、−N(L3R2)−、−P(O)(OL3R2)O−、−SO2N(L3R2)−、−P(O)(NL3R2)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号nは、0、1、または2である。ある実施形態において、L1は結合である。L1Aは、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3’R2’)−、−C(O)O−、−S(O)n’−、−O−、−N(L3’R2’)−、−P(O)(OL3’R2’)O−、−SO2N(L3’R2’)−、−P(O)(NL3’R2’)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号n’は、0、1、または2である。
L2は、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−N(L3AR2A)−、−P(O)(OL3AR2A)O−、−SO2N(L3AR2A)−、−P(O)(NL3AR2A)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号tは、0、1、または2である。
L3、L3’、およびL3Aは、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号wは、0、1、または2である。
R2、R2’、およびR2Aは、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
Eは電子求引基であるか、またはL2と一緒になって電子求引基を形成する(例えば、−L2−Eは電子求引基を形成し得る)。ある実施形態において、Eは、A環またはR4であり、ここで、R4およびA環は以下に定義される通りである。従って、Eは、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L5A−R4Aであり得る。Eはまた、水素、R23A−置換もしくは非置換アルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R23A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換アリール、またはR23A−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。ある実施形態において、Eは、置換もしくは非置換ヘテロアリール(例えば、R23A−置換もしくは非置換ヘテロアリール)または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル(例えば、R23A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル)である。
−L2−Eが電子求引基である、ある実施形態において、Eは単に水素であり得る。「電子求引基」という用語は、化学反応中心から負電荷を吸引することによって、すぐ近くの化学反応中心上で作用する静電力を修飾する化学置換基をいう。従って、電子求引基は、反応中心から離れるように電子を求引する。結果として、反応中心は、電子求引基の非存在におけるよりも、部分的により正に荷電する。ある実施形態において、化学反応中心は、炭素−炭素二重結合(オレフィン)を形成する2個の炭素の一方である。ある実施形態において、化学反応中心は、−L1−R1に結合されたオレフィン炭素である。電子求引基は、このオレフィン炭素から離れるように電荷または電子を求引するように機能し、それによって、オレフィン炭素電子を欠乏状態にする(電子求引基の非存在と比較して)。この電子欠乏性オレフィン炭素は、それによって、キナーゼ活性部位のシステインのスルフヒドリルなどの電子が豊富な化学基に向かってより反応性にされる。
Eおよび−L2−Eは、典型的には、キナーゼ活性部位のシステインのスルフヒドリルに可逆的に結合するように反応中心のオレフィン炭素からの電子を十分に求引する置換基である(例えば、キナーゼが完全に変性されるかまたは部分的に変性されるときに測定可能に可逆的に結合する)。反応中心のオレフィン炭素とキナーゼ活性部位のシステインのスルフヒドリル(またはチオール化合物代用物)の間の結合の可逆性を試験する方法は、以下に提供されるアッセイおよび実施例において提供される。
ある実施形態において、−L2−Eは、以下に示される化学式の1つに示される通りである。例えば、化学式IIにおいて、−L2−Eは−C(O)X(L4−R3)z(L5−R4)であり、化学式IIIcにおいて―L2−NR3R4であり、化学式IIIcにおいて、−L2−Eは−WNR3R4である、などである。従って、−L2−Eは、本明細書に提供される化学式に示される通りであってもよく、本明細書に提供される−L1−R1の定義および実施形態と組み合わせ得る。同様に、−L1−R1は、本明細書に提供される化学式に示される通りであってもよく(例えば、化学式IIIa〜IIIe、ここで、−L1−R1はピロロピリミジニルを含む)、本明細書に提供されるような−L2−Eの定義と組み合わせ得る。
反応中心から電子を求引することが可能である基のいくつかの非限定的な例には、−NO2、−N(R2)、−N(R3)+、−N(H3)+、−SO3H、−SO3R’、−S(O2)R’(スルホン)、−S(O)R’(スルホキシド)、−S(O2)NH2(スルホンアミド)、−SO2NHR’、−SO2NR’2、−PO(OR’)2、−PO3H2、−PO(NR’2)2、ピリジニル(2−、3−、4−)、ピラゾリル、インダゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾイソイソオキサゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、ピリミジニル、5または6員ヘテロアリールに任意に縮合された、C−N二重結合を有する、5または6−員ヘテロアリール、ピリジニル N−オキシド、−CM≡N、−CX’3、−C(O)X’、−COOH、−COOR’、−C(O)R’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)NR’2、−C(O)H、−P(O)(OR’)OR’’、およびX’が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、X’は、独立して、ハロゲン(例えば、クロロまたは(of)フルオロ)であり、R、R’、およびR’’は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または同様の置換基(例えば、置換基、サイズが限定された置換基、または低級置換基)である。「電子求引基」という用語は、当該分野で知られているような「電子供与基」から区別される。
従って、ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤(例えば、上記の化学式Iまたは以下に提供される化学式の化合物)は、可逆的キナーゼ阻害剤であり、プロテインキナーゼが、変性されていない、部分的に変性されている、または完全に変性されているときに、プロテインキナーゼから測定可能に解離し得る。ある実施形態において、共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤は、プロテインキナーゼが、完全に変性され、または部分的に変性されているときにのみ、プロテインキナーゼから測定可能に解離するが、プロテインキナーゼがインタクトであるときにはプロテインキナーゼから測定可能には解離せず、または、プロテインキナーゼがインタクトであるときには、プロテインキナーゼが完全にまたは部分的に変性されているときの解離と比較して、少なくとも10倍、1×102倍、1×103倍、1×104倍、1×105倍、1×106倍、1×107倍、1×108倍、1×109倍、1×1010倍、ゆっくりと解離する(本明細書では「共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤」と呼ばれる)。ある実施形態において、6N グアニジン、1% SDS、50% MeCN、または同様のタンパク質変性剤などの変性溶液中に、数秒間または数分間(例えば、30〜120秒間、60秒間など)置かれたときに、プロテインキナーゼは、変性されるかまたは完全に変性される(すなわち、インタクトではない)。ある実施形態において、本明細書に記載される可逆的キナーゼ阻害剤は、キナーゼ活性部位システイン残基への共有結合後、6N グアニジン、1% SDS、50% MeCN、または同様のタンパク質変性剤を用いるキナーゼの変性/アンフォールディングの数秒または数分以内にキナーゼから解離することが可能である。
本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤のある実施形態において、L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。他の実施形態において、L1が結合でありかつR1が置換4−アミノ ピロロピリミジニルである場合、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。他の実施形態において、L1が結合でありかつR1が置換ピロロピリミジニルである場合、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。特定の実施形態において、L1が結合でありかつR1が置換もしくは非置換ピロロピリミジニルである場合、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。他の実施形態において、R1が置換もしくは非置換ピロロピリミジニルである場合、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。
他の実施形態において、−L2−Eは−C(O)NH2ではない。他の実施形態において、−L2−Eは−C(O)OH、または−C(O)OR’’ではなく、ここで、R’’は、非置換C1−C10アルキル(例えば、メチルなどの非置換C1−C5アルキル)である。ある実施形態において、−L2−Eは−C(O)N(CH3)2または−C(O)NH(CH3)ではない。
上記の化学式Iまたは以下に提供される化学式のある実施形態において、R1およびR1Aは、独立して、R7−置換もしくは非置換アルキル、R7−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R7−置換もしくは非置換シクロアルキル、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R7は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aである。L6は、−O−、−NH−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)m−、または−S(O)mNH−であり、ここで、mは、0、1、または2である。
R7Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、またはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R8は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R9−置換もしくは非置換アルキル、R9−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R9−置換もしくは非置換シクロアルキル、R9−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R9−置換もしくは非置換アリール、R9−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L9−R9Aである。ある実施形態において、R8は、独立して、−OHまたは非置換アルキルである。L9は、−O−、−NH−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)m’−、または−S(O)m’NH−であり、ここで、m’は、0、1、または2である。
R9Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R10−置換もしくは非置換アルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R10−置換もしくは非置換シクロアルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R10−置換もしくは非置換アリール、またはR10−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R9は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R10−置換もしくは非置換アルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R10−置換もしくは非置換シクロアルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R10−置換もしくは非置換アリール、またはR10−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R10は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、R1およびR1Aは、独立して、少なくとも2個(例えば、2〜4個)の環窒素を有する、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、R7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリール、R7−置換もしくは非置換5,5縮合環ヘテロアリール、R7−置換もしくは非置換6,6縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5もしくは6員ヘテロアリールである。特定の実施形態において、R1およびR1Aは、独立して、R7−置換フェニル、R7−置換ピペリジニル、R7−置換6−員ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、R7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールである。R7は、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、またはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aであり得る。R7Aは、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、またはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。L6は、−O−、−NH−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)m−、または−S(O)mNH−であり得る。R8−OHまたはR9−置換もしくは非置換アルキルであり得る。ある関連する実施形態において、R7は、独立して、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aである。他の関連する実施形態において、R7は、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは−L6−R7Aである。L6は−C(O)−であり得る。R7AはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。
ある実施形態において、R1またはR1Aは、R7−置換もしくは非置換ヘテロアリールなどの置換もしくは非置換ヘテロアリールである。ヘテロアリールは、置換もしくは非置換ピロロピリミジニル、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換インダゾリル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換ベンゾチアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ベンゾイミダゾリル、置換もしくは非置換ベンゾオキサゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換ベンゾイソイソオキサゾリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換ベンゾトリアゾリル、置換もしくは非置換キノリニル、置換もしくは非置換イソキノリニル、置換もしくは非置換キナゾリニル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換ピリジニル N−オキシド、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換チオフェニル、置換もしくは非置換ベンゾフラニル、置換もしくは非置換ベンゾチオフェニル、置換もしくは非置換イミダゾ[1,2b]ピリダジニルであり得る。ある実施形態において、R1またはR1Aは、置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリール、置換もしくは非置換5,5縮合環ヘテロアリール、または置換もしくは非置換6,6縮合環ヘテロアリールである。他の実施形態において、R1またはR1Aは、少なくとも2個(例えば、2〜4個)の環窒素を有する、置換もしくは非置換5もしくは6員ヘテロアリールである。上記に議論されたように、任意のR1置換基は、この段落に列挙された置換基を含む、R7−置換されたものであり得る。
R1および/または−L1−R1は、キナーゼATP結合部位部分であるように一般的に設計される。R1および/または−L1−R1がsp2炭素を介して化合物の残りに結合されている、化学式Iの化合物において、この化合物の安定性が改善されていることもまた本発明において見い出された。本明細書で使用される場合、「キナーゼATP結合部位部分」は、キナーゼATP結合部位の中で適合可能であり、および/またはキナーゼATP結合部位の中でアミノ酸に結合可能である部分である。キナーゼATP結合部位は、幅広い種々のキナーゼについて周知であり、当該分野において一般的に利用されるコンピューターモデリング技術を使用してキナーゼの一次アミノ酸構造から容易に決定され得る。特定の実施形態において、−L1−R1は、キナーゼATP結合部位部分であり、電子欠乏オレフィン炭素は、キナーゼ活性部位システインのスルフヒドリルに結合する。従って、ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、プロテインキナーゼの少なくとも2個の点に結合する:ATP結合部位部分の中の少なくとも1個の残基およびキナーゼ活性部位システインのスルフヒドリルである。ある実施形態において、−L1−R1は化学式:
他の実施形態において、−L1−R1は、ヒドロキシルで置換されたフェニルではない。ある実施形態において、−L1−R1は、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリーレン基を含む。
ある実施形態において、L1−R1および/またはR1は、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の実施形態において、L1は結合でありかつR1は置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の実施形態において、L1は、置換もしくは非置換アリーレンまたは置換もしくは非置換ヘテロアリーレンでありかつR1またはR1Aは、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。例えば、L1は、置換もしくは非置換アリーレンであってもよく、そしてR1またはR1Aは、置換または非置換ヘテロアリールであり得る。関連する実施形態において、L1Aは、−C(O)−、−C(O)NH−、−C(O)O−、−S(O)−、−SO2−、−S−、−O−、−NH−、または−SO2NH−である。
ある実施形態において、L1は結合でありかつR1はR7−置換フェニルである。ある関連する実施形態において、R7は−L6−R7AまたはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここで、R7AはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。あるさらなる関連する実施形態において、L6は結合または−C(O)−である。他の関連する実施形態において、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールは、R8−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリールまたはR8−置換もしくは非置換5,6縮合環である。
他の実施形態において、L1は結合でありかつR1はR7−置換フェニル、R7−置換ピペリジニル、R7−置換ピペリジニル、R7−置換ピロリジニル、R7−置換ピペリジニル、R7−置換アゼパニル、またはR7−置換アゼチジニルである。ある関連する実施形態において、R7は、−L6−R7AまたはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここで、R7Aは、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。あるさらなる関連する実施形態において、L6は結合または−C(O)−である。他の関連する実施形態において、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールは、R8−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリールまたはR8−置換もしくは非置換5,6縮合環である。
ある実施形態において、L1は置換もしくは非置換アリーレン(例えば、フェニレン)でありかつR1またはR1Aは置換もしくは非置換ヘテロアリール(例えば、R7−置換)である。他の実施形態において、L1は置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。
上記の化学式Iまたは以下に提供される化学式のある実施形態において、L1は、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3R2)−、−C(O)O−、−S(O)n−、−O−、−S−、−N(L3R2)−、−P(O)(OL3R2)O−、−SO2N(L3R2)−、−P(O)(NL3R2)N−、R11−置換もしくは非置換アルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R11−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換アリーレン、またはR11−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。L1Aは結合、−C(O)−、−C(O)N(L3’R2’)−、−C(O)O−、−S(O)n’−、−O−、−N(L3’R2’)−、−P(O)(OL3’R2’)O−、−SO2N(L3’R2’)−、−P(O)(NL3’R2’)N−、R11−置換もしくは非置換アルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R11−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換アリーレン、またはR11−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり得る。
L1およびL1Aはまた、独立して、結合、R11−置換もしくは非置換アルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R11−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換アリーレン、またはR11−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり得る。
R11は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R12−置換もしくは非置換アルキル、R12−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R12−置換もしくは非置換シクロアルキル、R12−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R12−置換もしくは非置換アリール、またはR12−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R12は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R13−置換もしくは非置換アルキル、R13−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R13−置換もしくは非置換シクロアルキル、R13−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R13−置換もしくは非置換アリール、またはR13−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R13は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R14−置換もしくは非置換アルキル、R14−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R14−置換もしくは非置換シクロアルキル、R14−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R14−置換もしくは非置換アリール、またはR14−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R14は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
L2は、結合、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−S−、−N(L3AR2A)−、−C(O)−−P(O)(OL3R2))−、−SO2N(L3R2)−、−P(O)(NL3R2)N−、R19−置換もしくは非置換アルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R19−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換アリーレン、またはR19−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり得る。
R19は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R20−置換もしくは非置換アルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R20−置換もしくは非置換シクロアルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R20−置換もしくは非置換アリール、またはR20−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R20は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R21−置換もしくは非置換アルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R21−置換もしくは非置換シクロアルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R21−置換もしくは非置換アリール、またはR21−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R21は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R22−置換もしくは非置換アルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R22−置換もしくは非置換シクロアルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R22−置換もしくは非置換アリール、またはR22−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R22は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、L3、L3’、およびL3Aは、独立して、結合、R27−置換もしくは非置換アルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R27−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換アリーレン、またはR27−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。R27は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R28−置換もしくは非置換アルキル、R28−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R28−置換もしくは非置換シクロアルキル、R28−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R28−置換もしくは非置換アリール、またはR28−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R28は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R29−置換もしくは非置換アルキル、R29−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R29−置換もしくは非置換シクロアルキル、R29−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R29−置換もしくは非置換アリール、またはR29−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R29は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R30−置換もしくは非置換アルキル、R30−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R30−置換もしくは非置換シクロアルキル、R30−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R30−置換もしくは非置換アリール、またはR30−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R30は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、R2、R2’、およびR2Aは、独立して、水素、R15−置換もしくは非置換アルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R15−置換もしくは非置換シクロアルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R15−置換もしくは非置換アリール、またはR15−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R15は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R16−置換もしくは非置換アルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R16−置換もしくは非置換シクロアルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R16−置換もしくは非置換アリール、R16−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L7−R15Aである。L7は、独立して、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)y−、または−S(O)yNH−であり、ここで、yは、0、1、または2である。R15Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R16−置換もしくは非置換アルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R16−置換もしくは非置換シクロアルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R16−置換もしくは非置換アリール、R16−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R16は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R17−置換もしくは非置換アルキル、R17−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R17−置換もしくは非置換シクロアルキル、R17−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R17−置換もしくは非置換アリール、またはR17−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R17は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R18−置換もしくは非置換アルキル、R18−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R18−置換もしくは非置換シクロアルキル、R18−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R18−置換もしくは非置換アリール、またはR18−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R18は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式IIの構造を有する:
化学式IIに関して、Wは−C(O)−または−S(O)2−であり、XはOまたはNであり、かつzは0または1であり、しかし、XがOであるならば、zは0であるという条件である。L1およびR1は、化学式Iについて上記に開示されたのと同様に定義される。ある実施形態において、XはNである。他の実施形態において、XはOである。
R3は、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R4は、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L5A−R4Aである。R4Aは、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R3およびR4は、Xと一緒に結合されて、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成し得る。R3およびR4Aは、Xと一緒に結合されて、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成し得る。
L4およびL5は、独立して、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−N(L3AR2A)−、−P(O)(OL3AR2A)O−、−SO2N(L3AR2A)−、−P(O)(NL3AR2A)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。L3A、R2A、tは上記に定義されるのと同様である。L5Aは、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3A’R2A’)−、−C(O)O−、−S(O)t’−、−O−、−N(L3A’R2A’)−、−P(O)(OL3A’R2A’)O−、−SO2N(L3A’R2A’)−、−P(O)(NL3A’R2A’)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。記号t’は、0、1、または2である。
R2A’は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。ある実施形態において、R2A’は、独立して、水素、R15−置換もしくは非置換アルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R15−置換もしくは非置換シクロアルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R15−置換もしくは非置換アリール、またはR15−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R15は、上記に定義された通りである。
L3A’は、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。ある実施形態において、L3A’は、結合、R27−置換もしくは非置換アルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R27−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換アリーレン、またはR27−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。R27は、上記に定義された通りである。
ある実施形態において、L4およびL5は、独立して、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−N(L3AR2A)−、−P(O)(OL3AR2A)O−、−SO2N(L3AR2A)−、−P(O)(NL3AR2A)N−、R19−置換もしくは非置換アルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R19−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換アリーレン、またはR19−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。ある実施形態において、L5Aは、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3A’R2A’)−、−C(O)O−、−S(O)t’−、−O−、−N(L3A’R2A’)−、−P(O)(OL3A’R2A’)O−、−SO2N(L3A’R2A’)−、−P(O)(NL3A’R2A’)N−、R19−置換もしくは非置換アルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R19−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換アリーレン、またはR19−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。R19は、上記に定義された通りである。
ある実施形態において、L5−R4またはL4−R3の少なくとも一方は、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリーレンを含む。ある実施形態において、L5−R4またはL4−R3の一方は、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリーレンを含む。ある実施形態において、L5−R4またはL4−R3の一方は水素である。
ある実施形態において、L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、R3およびR4の少なくとも一方は水素ではない。
化学式Iまたは化学式IIのある実施形態において、R1またはR1Aは、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここで、R7は上記に定義された通りである。
ある実施形態において、R3は、水素、R23−置換もしくは非置換アルキル、R23−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R23−置換もしくは非置換シクロアルキル、R23−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R23−置換もしくは非置換アリール、またはR23−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R23は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24−置換もしくは非置換アルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24−置換もしくは非置換アリール、R24−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L8−R23A’である。L8は、独立して、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)p−、または−S(O)pNH−であり、ここで、pは、0、1、または2である。R23A’は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24−置換もしくは非置換アルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24−置換もしくは非置換アリール、R24−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R24は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R25−置換もしくは非置換アルキル、R25−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R25−置換もしくは非置換シクロアルキル、R25−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R25−置換もしくは非置換アリール、またはR25−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R25は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R26−置換もしくは非置換アルキル、R26−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R26−置換もしくは非置換シクロアルキル、R26−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R26−置換もしくは非置換アリール、またはR26−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R26は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、R3およびR4はXと一緒に結合されて、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル(例えば、R23−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはR23−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル)を形成する。ある実施形態において、R3およびR4はXと一緒に結合されて、4−8員置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは5−6員置換もしくは非置換ヘテロアリール(例えば、そのR23−置換種)を形成する。ある実施形態において、R3およびR4はXと一緒に結合されて、4−7員置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは5−6員置換もしくは非置換ヘテロアリール(例えば、そのR23−置換種)を形成する。ある実施形態において、R3およびR4はXと一緒に結合されて、5−7員置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは5−6員置換もしくは非置換ヘテロアリール(例えば、そのR23−置換種)を形成する。ある実施形態において、R3およびR4はXと一緒に結合されて、置換もしくは非置換モルホリノ、置換もしくは非置換チオモルホリノ(またはその酸化された環)、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピラジニル(pyrazyinyl)、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換アゼパニル、または置換もしくは非置換アゼチジニル(例えば、そのR23−置換された置換基)を形成する。
化学式IIに関するある実施形態において、R4およびR4Aは、水素、R23A−置換もしくは非置換アルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R23A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換アリール、またはR23A−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。ある実施形態において、R4およびR4Aは水素ではない。
R23Aは、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24A−置換もしくは非置換アルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換アリール、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L7A−R24Bである。L7Aは、独立して、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)y’−、または−S(O)y’NH−であり、ここで、y’は、0、1、または2である。R24Bは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24A−置換もしくは非置換アルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換アリール、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R24Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R25A−置換もしくは非置換アルキル、R25A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R25A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R25A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R25A−置換もしくは非置換アリール、またはR25A−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R25Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R26A−置換もしくは非置換アルキル、R26A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R26A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R26A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R26A−置換もしくは非置換アリール、またはR26A−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R26Aは、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、R4またはR4AはR23A−置換もしくは非置換アルキルである。ある実施形態において、R3は、置換もしくは非置換ピリジニル(2−、3−、4−)、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換インダゾリル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換ベンゾチアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ベンゾイミダゾリル、置換もしくは非置換ベンゾオキサゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換ベンゾイソイソオキサゾリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換ベンゾトリアゾリル、置換もしくは非置換キノリニル、置換もしくは非置換イソキノリニル、置換もしくは非置換キナゾリニル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換ピリジニル N−オキシド、または5もしくは6員ヘテロアリールに任意に縮合された、少なくとも1個の環窒素を有する置換もしくは非置換5もしくは6員ヘテロアリール(例えば、C−N二重結合)である。先行する文における置換基が置換されているある実施形態において、置換基はR15−置換されている。
さらに化学式IIの構造を有する化合物に関して、ある実施形態において、L1、L4、およびL5は、独立して、結合であり、そしてR1は、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。ある実施形態において、R7は、独立して、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aである。L6は−C(O)−であり得る。R7AはR8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。R8は−OHまたはR9−置換もしくは非置換アルキルであり得る。R4は水素またはR15−置換もしくは非置換アルキルであってもよく、そしてR3は水素またはR23−置換もしくは非置換アルキルであり得る。R3およびR4はXと一緒に任意に結合されて、4−7員(例えば、5−7員)ヘテロシクロアルキル(例えば、そのR23置換種)を形成し得る。
ある実施形態において、R7は、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aである。L4は、−C(O)−であってもよく、そしてR7Aは、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R7、R8、L6、R7Aは上記に定義されたものと同様である。
ある実施形態において、化学式IまたはIIの構造を有する化合物において、R1はR7−置換フェニルである。ある関連する実施形態において、R7は、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは−L6−R7Aである。L6は、−C(O)−であってもよく、R7AはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。化学式IIのさらなる実施形態において、R3およびR4は水素である。
ある実施形態において、R7は、R8−置換もしくは非置換プリニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換イミダゾリル、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換1H−インダゾリル、またはR8−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルである。R7はまた、R8−置換もしくは非置換ピロロピリミジニル、R8−置換もしくは非置換インドリル、R8−置換もしくは非置換ピラゾリル、R8−置換もしくは非置換インダゾリル、R8−置換もしくは非置換イミダゾリル、R8−置換もしくは非置換チアゾリル、R8−置換もしくは非置換ベンゾチアゾリル、R8−置換もしくは非置換オキサゾリル、R8−置換もしくは非置換ベンゾイミダゾリル、R8−置換もしくは非置換ベンゾオキサゾリル、R8−置換もしくは非置換イソオキサゾリル、R8−置換もしくは非置換ベンゾイソイソオキサゾリル、R8−置換もしくは非置換トリアゾリル、R8−置換もしくは非置換ベンゾトリアゾリル、R8−置換もしくは非置換キノリニル、R8−置換もしくは非置換イソキノリニル、R8−置換もしくは非置換キナゾリニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換ピリジニル N−オキシド、R8−置換もしくは非置換フラニル、R8−置換もしくは非置換チオフェニル、R8−置換もしくは非置換ベンゾフラニル、R8−置換もしくは非置換ベンゾチオフェニル、R8−置換もしくは非置換イミダゾ[1,2b]ピリダジニルであり得る。ある実施形態において、R1は、R8−置換もしくは非置換6,5 縮合環ヘテロアリール、R8−置換もしくは非置換5,6 縮合環ヘテロアリール、R8−置換もしくは非置換5,5 縮合環ヘテロアリール、またはR8−置換もしくは非置換6,6 縮合環ヘテロアリールである。他の実施形態において、R1は、少なくとも2個(例えば、2〜4個)の環窒素を有するR8−置換もしくは非置換5または6員ヘテロアリールである。
特定の実施形態において、R7は、−L4−R7AおよびR7Aは、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニルである。
特定の実施形態において、Xは、N、およびR1は、R7−置換6−員ヘテロシクロアルキルである。R7はR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。R1はR7−置換ピペリジニルであり得る。R7は、R8−置換もしくは非置換プリニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換イミダゾリル、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換1H−インダゾリル、またはR8−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルであり得る。特定の実施形態において、R3およびR4は水素である。
なおさらなる実施形態において、R1は、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールである。R7は、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリールであり、そしてR8は、独立して、−OHまたは非置換アルキルであり得る。他の実施形態において、R1は、R7−置換もしくは非置換インダゾリル、またはR7−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルである。特定の実施形態において、R3およびR4は水素である。
化学式IまたはIIの構造を有する化合物の特定の実施形態において、R1は、R7−置換もしくは非置換インダゾール、またはR7−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルであり、R3は非置換アルキルであり、そしてR4は水素である。さらなる実施形態において、R3はフェニルメチルであり、そしてR4は水素である。ある実施形態において、R3およびR4はNと結合してR23−置換もしくは非置換ピロリジニルを形成する。
化学式IまたはIIの構造を有する化合物を意図する特定の実施形態において、XはOであり、R1は、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールである。R7は−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、またはR8−置換もしくは非置換アリールであり得る。R8は−OHまたは非置換アルキルであり、そしてR3は非置換アルキルであり得る。特定のさらなる実施形態において、R1は、R7−置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンであり、そしてR7は、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、またはR8−置換もしくは非置換フェニルである。
ある実施形態において、化学式IIの−C(O)X(L4−R3)z(L5−R4)置換基は電子求引基である。従って、−C(O)X(L4−R3)z(L5−R4)は、それが結合されるオレフィン部分から負電荷を求引可能である。ある実施形態において、−C(O)X(L4−R3)z(L5−R4)は、オレフィン炭素と、本明細書で議論されるようなキナーゼ活性部位システインのスルフヒドリルとの間にチオール付加物が形成することを可能にするために、この置換基が結合されるオレフィン部分から負電荷を十分に求引することが可能である。
化学式Iおよび化学式IIの特定の実施形態において、R1は置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の実施形態において、R1は、置換もしくは非置換ピラゾロピリミジニル(例えば、R7−置換もしくは非置換ピラゾロピリミジニル)である。他の実施形態において、R1は、置換もしくは非置換ピロロピリミジニル(例えば、R7−置換もしくは非置換ピロロピリミジニル)である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤はこの構造を有する:
化学式IIIaにおいて、zは1〜4の整数である。L1、L2、およびR7は上記に定義したのと同様である。ある実施形態において、L1は結合である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の構造を有する:
化学式IIIbにおいて、zは1〜4の整数である。L1、L2、R3、R4、およびR7は、上記に記載されたのと同様である。ある実施形態において、L1は結合である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の構造を有する:
化学式IIIcにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、zは1〜4の整数である。L1、R3、R4、およびR7は上記に定義された通りである。ある実施形態において、L1は結合である。
化学式IIIdにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−であり、zは1〜4の整数である。L1、L2、R3、R4、およびR7は上記に定義された通りである。ある実施形態において、L1は結合である。ある実施形態において、ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、化合物43、44、45、46、47、48、49、および50である。
化学式IIIeにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−であり、wは、1〜5の整数(例えば、1)である。L1、L2、R3、R4、R7、およびR8は上記に定義された通りである。
化学式Iまたは化学式IIの別の実施形態において、L1は、置換もしくは非置換アリーレンである。ある実施形態において、L1は置換もしくは非置換フェニレンである。
化学式IVaにおいて、R1、L2、E、およびR11は上記に定義された通りである。記号qは1〜4の整数である。ある実施形態において、R11は水素である。ある実施形態において、R1は置換もしくは非置換ヘテロアリールである。さらなる実施形態において、R1は置換もしくは非置換ピロロピリミジンである。化学式IVaの特定の実施形態において、R1は置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、qは0であり、そしてL1は置換もしくは非置換フェニレンである。
化学式IVbにおいて、R7、L2、E、およびR11は上記に定義された通りである。記号qは0〜4の整数である。ある実施形態において、R11は水素である。記号zは1〜4の整数である。
化学式IVcにおいて、R7、L2、およびEは上記に定義された通りである。記号zは1〜4の整数である。さらなる実施形態において、Eは−NR3R4(上記に定義された通り)である。
化学式IVdにおいて、R7、L2、R3、およびR4は上記に定義された通りである。記号zは1〜4の整数である。さらなる実施形態において、L2は−C(O)−である。
化学式IVeにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、R7、R3、およびR4は上記に定義された通りである。記号zは1〜4の整数である。ある実施形態において、R7は、独立して、−NH2、または置換もしくは非置換アリールである。ある実施形態において、一方のR7は−NH2であり、そして他方のR7は置換アリールである。
化学式IVfにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、R7、R3、およびR4は上記に定義された通りである。特定のさらなる実施形態において、R3およびR4は、独立して、水素、非置換または置換アルキルであり、または一緒に結合して、置換もしくは非置換ヘテロアルキルを形成する。R7は置換もしくは非置換フェニルであり得る。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、化合物51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、または61である。
化学式(Va)において、R1、L2、およびEは上記に定義された通りである。特定の実施形態において、Eは−NR3R4である(上記に定義された通り)。L2−C(O)−であり得る。
化学式Vbにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、R1、R3、およびR4は上記に定義された通りである。特定の実施形態において、R1は置換アルキルである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の構造を有する:
化学式Vcにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−であり、R3およびR4は上記に定義された通りである。特定の実施形態において、キナーゼ阻害剤は化合物38または39である。
ある実施形態において、R1は置換もしくは非置換インダゾリルであり、そしてキナーゼ阻害剤は以下の化学式VIaの構造を有し、ここで、R7は、本明細書に定義された通りである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の化学式を有する:
化学式VIaにおいて、L2、EおよびR7は上記に定義された通りである。記号zは、1〜4の整数である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の化学式を有する:
化学式VIbにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、R3、R4、およびR7は上記に定義された通りである。記号zは1〜4の整数である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の化学式を有する:
化学式VIcにおいて、Wは、−C(O)−または−S(O)2−、R3、R4、およびR7は上記に定義された通りである。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、化合物37、40、41、または42である。
化学式Iの別の実施形態において、L1は置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレンであり、L2は−C(O)−である。さらなる実施形態において、R1は置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Eは−NR3R4である。ある実施形態において、L1はピペリジニルである。さらなる実施形態において、R1はプリニルである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は以下の化学式を有する:
化学式(VII)において、Wは−C(O)−または−S(O)2−であり、R3およびR4は上記に定義された通りである。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化合物36である。
キナーゼ阻害剤は(本明細書に議論されるような)可逆的キナーゼ阻害剤であり得る。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、(本明細書に議論されるような)可逆的変性キナーゼ阻害剤である。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、(本明細書に議論されるような)共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤である。他の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、(本明細書に議論されるような)共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤である。そして特定の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、(本明細書に議論されるような)チオール共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤である。
ある実施形態において、本明細書に提供される化学式の化合物、およびその実施形態は、pH 7.5で(例えば、37℃のリン酸緩衝化生理食塩水中で)安定である。化学式IまたはIIの化合物、およびその実施形態がpH 7.5で安定である、ある実施形態において、この化合物は、6時間、12時間、24時間、または48時間よりも長い半減期を有する。本明細書に提供される化学式の化合物、およびその実施形態がpH 7.5で安定である、ある実施形態において、化合物は12時間よりも長い半減期を有する。本明細書に提供される化学式の化合物、およびその実施形態がpH 7.5で安定である、ある実施形態において、化合物は24時間よりも長い半減期を有する。本明細書に提供される化学式の化合物、およびその実施形態がpH 7.5で安定である、ある実施形態において、化合物は48時間よりも長い半減期を有する。特定の実施形態において、本明細書に提供される化学式の化合物、およびその実施形態は、細胞内でキナーゼ阻害を示す。ある実施形態において、この細胞は、原核生物細胞または真核生物細胞である。この細胞は、真核生物細胞(例えば、原生動物細胞、真菌細胞、植物細胞、または動物細胞)であり得る。ある実施形態において、この細胞は、ヒト細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ウマ細胞、イヌ細胞およびネコ細胞、マウス細胞、またはラット細胞などの哺乳動物細胞である。ある実施形態において、この細胞はヒト細胞である。この細胞は、器官または生物体の一部を形成し得る。特定の実施形態において、この細胞は、器官または生物体の一部を形成しない。
ある実施形態において、本明細書に提供される化学式の化合物中で上記に記載される各置換基は、少なくとも1個の置換基で置換される。より具体的には、ある実施形態において、本明細書に提供される化学式の化合物中で上記に記載される、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンの各々は、少なくとも1個の置換基で置換される。他の実施形態において、これらの基の少なくとも1個またはすべてが、少なくとも1個のサイズが限定された置換基で置換される。あるいは、これらの基の少なくとも1個またはすべてが、少なくとも1個の低級置換基で置換される。
本明細書に提供される化学式の化合物の他の実施形態において、各置換もしくは非置換アルキルは置換もしくは非置換C1−C20アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは置換もしくは非置換2−20員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは置換もしくは非置換C4−C8シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは置換もしくは非置換4−8員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アルキレンは置換もしくは非置換C1−C20アルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキレンは置換もしくは非置換2−20員ヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換シクロアルキレンは置換もしくは非置換C4−C8シクロアルキレンであり、そして各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレンは置換もしくは非置換4−8員ヘテロシクロアルキレンである。
あるいは、各置換もしくは非置換アルキルは置換もしくは非置換C1−C8アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは置換もしくは非置換2−8員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは置換もしくは非置換C5−C7シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは置換もしくは非置換5−7員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アルキレンは置換もしくは非置換C1−C8アルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキレンは置換もしくは非置換2−8員ヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換シクロアルキレンは置換もしくは非置換C5−C6シクロアルキレンであり、そして各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレンは置換もしくは非置換5−7員ヘテロシクロアルキレンである。
ある実施形態において、本明細書に提供される化学式の化合物は、以下の表1およびまたは表2a−2eに示される1種以上の化合物である。他の実施形態において、化合物は、以下の1種以上である:
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式VIIIの構造を有する:
化学式VIIIおよび本明細書に提供される他の化学式において、A環は、R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールなどの置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R1およびL1は上記に定義された通りである。
R31は、上記に定義されたR23Aであるか、または水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R33−置換もしくは非置換アルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R33−置換もしくは非置換シクロアルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R33−置換もしくは非置換アリール、またはR33−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R33は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R34−置換もしくは非置換アルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R34−置換もしくは非置換シクロアルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R34−置換もしくは非置換アリール、またはR34−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R34は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R35−置換もしくは非置換アルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R35−置換もしくは非置換シクロアルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R35−置換もしくは非置換アリール、またはR35−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
R35は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式IXの構造を有する:
化学式IXにおいて、A環は、上記に示されるようなR31−置換もしくは非置換ヘテロアリールなどの置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R1およびL1は上記に定義された通りである。
上記の化学式VIIIおよびIXのある実施形態において、A環は、R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。上記の化学式VIIIおよびIXのある実施形態において、A環は、5員R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは6員R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xaの構造を有する:
化学式Xaにおいて、X1が結合の点ではないとき、X1は、−C(R31R32)−、−N(R31)−、−S−または−O−である。X1が結合の点であるとき、X1は、C(R31)またはNである。X2、X3、X4、およびX5は、結合の点ではないとき、独立して、−C(R31)=または−N=である。X2、X3、X4、またはX5が結合の点であるとき、結合の点であるX2、X3、X4、またはX5はCである。X1、X2、X3、X4、およびX5の少なくとも1個が炭素ではない(すなわち、適切に、−C(R31R32)−、C(R31)または−C(R31)=ではない)。例えば、ある実施形態において、X1、X2、X3、X4、およびX5の少なくとも1個が窒素である(すなわち、適切に、−N(R31)−または−N=)。典型的には、X1、X2、X3、X4、およびX5の少なくとも2個が炭素である(例えば、−C(R31R32)−、C(R31)、または−C(R31)=)。
R31は、上記に定義された通りである。R32は、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R33−置換もしくは非置換アルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R33−置換もしくは非置換シクロアルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R33−置換もしくは非置換アリール、またはR33−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R33は上記に開示されるように定義される。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xbの構造を有する:
化学式Xb’において、X1は、C(R31)またはNである。X2、X3、X4、およびX5は、独立して、−C(R31)=または−N=であり、しかし、X1、X2、X3、X4、およびX5の少なくとも1個がNであるという条件である。典型的には、X1、X2、X3、X4、およびX5の少なくとも2個が炭素である。化学式Xb’’において、X2はCである。X1は、−C(R31R32)−、−N(R31)−、−S−、または−O−である。X3、X4、およびX5は、独立して、−C(R31)=または−N=であり、しかし、X1、X3、X4、およびX5の少なくとも1個は炭素ではないという条件である。L1、R1、およびR31は上記に開示されるように定義される。典型的には、X1、X3、X4、およびX5の少なくとも1個が炭素である。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xcの構造を有する:
化学式Xcにおいて、X3およびX5は、独立して、−C(R31)=である。L1、R1、およびR31は上記に定義された通りである。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xdの構造を有する:
化学式Xdにおいて、X3、X4、およびX5は、独立して、−C(R31)=である。L1、R1、およびR31は上記に開示されるように定義される。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xeの構造を有する:
化学式Xeにおいて、X4およびX5は、独立して、−C(R31)=である。X2はCである。L1、R1、およびR31は上記に開示されるように定義される。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式Xfの構造を有する:
化学式Xfにおいて、X4およびX5は、独立して、−C(R31)=である。L1、R1、およびR31は上記に開示されるように定義される。
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式XIaの構造を有する:
化学式XIaにおいて、X6、X7、X8、X9、およびX10は、独立して、−C(R31)=、−N=、または
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式XIbの構造を有する:
化学式XIbにおいて、X6、X7、X9、およびX10は、独立して、−C(R31)=である。X8は、Nまたは
ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は化学式XIcの構造を有する:
化学式XIcにおいて、X6、X8、X9、およびX10は、独立して、−C(R31)=である。X7は、Nまたは
上記の化学式VIIIおよびIXのある実施形態において、A環は、R31−置換もしくは非置換フリル、R31−置換もしくは非置換チエニル、R31−置換もしくは非置換ピロリル、R31−置換もしくは非置換イミダゾリル、R31−置換もしくは非置換ピラゾリル、R31−置換もしくは非置換オキサゾリル、R31−置換もしくは非置換イソオキサゾリル、R31−置換もしくは非置換チアゾリル、R31−置換もしくは非置換イソチアゾリル、R31−置換もしくは非置換トリアゾリル、R31−置換もしくは非置換オキサジアゾリル、R31−置換もしくは非置換ピリジル、R31−置換もしくは非置換ピリミジル、R31−置換もしくは非置換ピリダジニル、R31−置換もしくは非置換ピロリニル、R31−置換もしくは非置換ピラジニル、R31−置換もしくは非置換テトラゾリル、R31−置換もしくは非置換フラニル、R31−置換もしくは非置換ジヒドロチエノ−ピラゾリル、R31−置換もしくは非置換チアナフテニル、R31−置換もしくは非置換カルバゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾチエニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾフラニル、R31−置換もしくは非置換インドリル、R31−置換もしくは非置換キノリニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾトリアゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾチアゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾオキサゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾイミダゾリル、R31−置換もしくは非置換イソキノリニル、R31−置換もしくは非置換イソインドリル、R31−置換もしくは非置換アクリジニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾイサゾリルである。R31は上記に開示されるように定義される。
上記の化学式VIII、IX、Xa−Xf、およびXIa−XIcのある実施形態において、R1は、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。L1は結合である。
ある実施形態において、化学式Iの化合物は、下記の表1、表2a−2eに示される1種以上の化合物、または以下の化合物である:
当該分野において一般的に知られている化学合成技術および実施例セクションに示されている合成技術を使用して、当業者は、化学式Iの化合物を合成することが可能である。別の態様において、可逆的キナーゼ阻害剤を作製する方法が提供される。この方法は、以下の化学式を有する置換基を含むために公知の非可逆的または不可逆的キナーゼ阻害剤を修飾する工程を含む:
W、L2、L4、L5、E、R3、R4、A環、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、およびzは上記に定義された通りである。記号
別の態様において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤に結合されたタンパク質を含むタンパク質付加物が提供される。ある実施形態において、付加物は以下の化学式を有する:
タンパク質付加物の化学式中の記号(例えば、W、E、R1、R3、R4、R7、R11、A環、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10など)は上記に定義された通りである。記号Qはタンパク質(例えば、ペプチド)を表す。典型的には、Qに結合された硫黄はシステインアミノ酸の一部を形成する。ある実施形態において、阻害剤化合物に連結されたシステインは、BTKのCys−481、JAK3のCys−909、またはRSK2のCys−436である。
III.プロテインキナーゼを阻害する方法
別の態様において、プロテインキナーゼを阻害する方法が提供される。これらの方法は、プロテインキナーゼを有効量の本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤と接触させることを含む。キナーゼ阻害剤は、本明細書に提供される化学式の構造(または上記のその任意の実施形態)を有し得る。ある実施形態において、プロテインキナーゼを阻害する方法は細胞の中で行われる。従って、特定の実施形態において、細胞の中でプロテインキナーゼを阻害する方法が提供される。この方法は、有効量の本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤と細胞を接触させることを含む。キナーゼ阻害剤は、本明細書に提供される化学式の構造(または上記のその任意の実施形態)を有し得る。ある実施形態において、この細胞は原核生物細胞または真核生物細胞である。この細胞は真核生物細胞(例えば、原生動物細胞、真菌細胞、植物細胞、または動物細胞)であり得る。ある実施形態において、この細胞は、ヒト細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ウマ細胞、イヌ細胞およびネコ細胞、マウス細胞、またはラット細胞などの哺乳動物細胞である。ある実施形態において、細胞はヒト細胞である。この細胞は、器官または生物体の一部を形成し得る。特定の実施形態において、この細胞は、器官または生物体の一部を形成しない。
別の態様において、プロテインキナーゼを阻害する方法が提供される。これらの方法は、プロテインキナーゼを有効量の本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤と接触させることを含む。キナーゼ阻害剤は、本明細書に提供される化学式の構造(または上記のその任意の実施形態)を有し得る。ある実施形態において、プロテインキナーゼを阻害する方法は細胞の中で行われる。従って、特定の実施形態において、細胞の中でプロテインキナーゼを阻害する方法が提供される。この方法は、有効量の本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤と細胞を接触させることを含む。キナーゼ阻害剤は、本明細書に提供される化学式の構造(または上記のその任意の実施形態)を有し得る。ある実施形態において、この細胞は原核生物細胞または真核生物細胞である。この細胞は真核生物細胞(例えば、原生動物細胞、真菌細胞、植物細胞、または動物細胞)であり得る。ある実施形態において、この細胞は、ヒト細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ウマ細胞、イヌ細胞およびネコ細胞、マウス細胞、またはラット細胞などの哺乳動物細胞である。ある実施形態において、細胞はヒト細胞である。この細胞は、器官または生物体の一部を形成し得る。特定の実施形態において、この細胞は、器官または生物体の一部を形成しない。
キナーゼ阻害剤は可逆的キナーゼ阻害剤であり得る。可逆的キナーゼ阻害剤はキナーゼ阻害剤であり、本明細書に開示されるように(例えば、本明細書に提供される化学式の化合物およびその実施形態)、プロテインキナーゼがインタクトであり(すなわち、変性されていない)または変性されるとき(例えば、部分的に変性され、または完全に変性されるとき)、プロテインキナーゼから測定可能に解離可能である。「変性」キナーゼは、キナーゼ活性を保持するために十分な三次構造または二次構造を有さないキナーゼである。「インタクトな」キナーゼは、キナーゼ活性を保持するために十分な三次構造または二次構造を有するキナーゼである。従って、ある実施形態において、プロテインキナーゼを阻害する方法はプロテインキナーゼを可逆的キナーゼ阻害剤と接触させて、可逆的キナーゼ阻害剤が活性部位システイン残基に可逆的に結合することを許容し、それによって、プロテインキナーゼを阻害することを含む。
ある実施形態において、可逆的キナーゼ阻害剤は、プロテインキナーゼが変性されたときのみに、測定可能にプロテインキナーゼから解離するが、プロテインキナーゼがインタクトであるときには、プロテインキナーゼから測定可能に解離しない(または、プロテインキナーゼが変性されたときの解離と比較して、少なくとも1倍、1×102倍、1×103倍、1×104倍、1×105倍、1×106倍、1×107倍、1×108倍、1×109倍、1×1010倍遅く解離する)。プロテインキナーゼが変性されたときのみに、プロテインキナーゼから測定可能に解離する(または、プロテインキナーゼが変性されたときの解離と比較して、少なくとも1倍、1×102倍、1×103倍、1×104倍、1×105倍、1×106倍、1×107倍、1×108倍、1×109倍、1×1010倍遅く解離する)が、プロテインキナーゼがインタクトであるときにはプロテインキナーゼから測定可能に解離しない可逆的キナーゼ阻害剤は、本明細書では「可逆的変性キナーゼ阻害剤」と呼ばれる。キナーゼからの解離後、可逆的変性キナーゼ阻害剤は同じかまたは別のキナーゼに結合できる。
特定の実施形態において、プロテインキナーゼを阻害する方法は、プロテインキナーゼをキナーゼ阻害剤と接触させることを含み、ここで、キナーゼ阻害剤は、100nM未満の阻害定数でプロテインキナーゼを阻害する。そして、プロテインキナーゼ阻害剤が可逆的プロテインキナーゼ阻害剤である場合、プロテインキナーゼを阻害する方法は、プロテインキナーゼを可逆的キナーゼ阻害剤と接触させることを含み、ここで、可逆的キナーゼ阻害剤は、100nM未満の阻害定数でプロテインキナーゼを阻害する。
キナーゼ(本明細書ではプロテインキナーゼとも呼ばれる)が本明細書に記載されるキナーゼ阻害剤を使用して阻害される場合、キナーゼ阻害剤の非存在下でのキナーゼの活性と比較して、キナーゼ阻害剤と接触させたときに、キナーゼ活性(すなわち、基質分子(例えば、タンパク質基質)のリン酸化)が減少されるという意味である。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、キナーゼ活性を、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍、5000倍、10,000倍、100,000倍、500,000倍、1,000,000倍、またはそれ以上減少させる。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、100μM、10μM、5μM、1μM、500nM、250nM、100nM、75nM、50nM、25nM、10nM、1nM、500pM、250pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、または1pM未満の阻害定数(Ki)でキナーゼの活性を阻害する。ある実施形態において、キナーゼ阻害剤は、実施例のセクションに示される条件下で測定されたときに、100μM、10μM、5μM、1μM、500nM、250nM、100nM、75nM、50nM、25nM、10nM、1nM、500pM、250pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、または1pM未満のIC50でキナーゼの活性を阻害する。
本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤が活性部位システイン残基に可逆的に結合する場合、可逆的結合は、活性部位システイン残基と可逆的キナーゼ阻害剤との間に形成される。典型的には、可逆的結合は共有結合である。本明細書で使用される場合、「共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤」とは、キナーゼと共有結合を形成する可逆的キナーゼ阻害剤である。共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤が活性部位システイン残基と可逆的結合を形成する場合、共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤は、本明細書では、「チオール共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤」といわれる。ある実施形態において、共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤は、プロテインキナーゼが変性されたときにのみプロテインキナーゼから測定可能に解離されるが、しかし、プロテインキナーゼがインタクトであるとき、プロテインキナーゼから測定可能に解離されない(またはプロテインキナーゼが完全にまたは部分的に変性されるときの解離と比較して、少なくとも1倍、1×102倍、1×103倍、1×104倍、1×105倍、1×106倍、1×107倍、1×108倍、1×109倍、1×1010倍遅く解離する)(本明細書では、「共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤」と呼ばれる)。ある実施形態において、プロテインキナーゼは、6N グアニジン、1% SDS、50% MeCN、または同様のタンパク質変性剤などの変性溶液中に、数秒間または数分間(例えば、30〜120秒間、例えば、60秒間)置かれるときに変性される(すなわち、インタクトではない)。活性部位システイン残基と可逆的結合を形成する共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤は、「チオール共有結合性可逆的変性キナーゼ阻害剤」と称される。
ある実施形態において、チオール共有結合性可逆的キナーゼ阻害剤は、システインスルフヒドリル基と、本明細書に提供される化学式の化合物の炭素−炭素二重結合(すなわち、オレフィン)の一部を形成する炭素原子の間で結合を形成する。従って、ある実施形態において、活性部位システインスルフヒドリル基の硫黄原子の電子は、炭素−炭素二重結合(オレフィン)の電子欠乏炭素原子を攻撃する。ある実施形態において、炭素−炭素二重結合の電子欠乏炭素原子は、本明細書に提供される化学式のキナーゼ阻害剤の電子求引シアノ基および電子求引−L2−E置換基またはその実施形態(すなわち、−L1−R1に結合された炭素)に対して末端である。このようにして、チオール付加物が形成される(例えば、システインとのマイケル反応)。従って、ある実施形態において、オレフィン部分に結合されたシアノ基および−L2−E電子求引基の組み合わせは、活性部位システイン残基とチオール付加物を形成するオレフィンの反応性を増加する。ある実施形態において、得られるチオール付加物は、約pH 2〜約pH 7(例えば、約pH 3)で安定である。ある実施形態において、本明細書に記載される可逆的キナーゼ阻害剤は、本明細書に記載されるようなキナーゼ活性部位システイン残基への共有結合性結合の後で、6N グアニジン、1% SDS、50% MeCN、または同様のタンパク質変性剤を用いてキナーゼを変性/アンフォールディングした後、数秒間または数分間以内にキナーゼから解離することが可能である。
ある実施形態において、活性部位システインスルフヒドリル基に向けたオレフィンの反応性を増加させることに加えて、シアノおよび−L2−E電子求引基は、形成されるチオール付加物の可逆性を増加するように機能する。従って、ある実施形態において、本明細書に示される可逆的キナーゼ阻害剤は完全に可逆的である。「完全に可逆的」という用語は、可逆的キナーゼ阻害剤は、キナーゼが変性されていない条件下で測定可能な解離速度を示すことを意味する。ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、完全には可逆的ではない(すなわち、キナーゼがインタクトである条件下で測定可能な解離速度を示さない)。解離は、透析および質量スペクトル分析を含む任意の適切な手段を使用して測定され得る。解離を測定する特定の方法は以下の実施例のセクションに示されている。
ある実施形態において、可逆的変性キナーゼ阻害剤は、可逆的変性キナーゼ阻害剤が阻害する(または特異的に阻害する)プロテインキナーゼ以外の細胞成分に可逆的に結合する。この細胞成分は、GSH、標的とされるキナーゼではないタンパク質またはタンパク質フラグメント(例えば、活性部位システインを含まないか、またはATP結合部位に十分に近接している活性部位システインを含まないキナーゼ)、標的とされるキナーゼのタンパク質フラグメント(例えば、可逆的変性キナーゼ阻害剤がキナーゼから解離するように、キナーゼと可逆的キナーゼ変性キナーゼ阻害剤の結合点の数が減少されるように消化されたキナーゼ)であり得る。従って、ある実施形態において、可逆的変性キナーゼ阻害剤は、キナーゼが部分的にまたは完全に消化されているキナーゼから測定可能に解離される。可逆的変性キナーゼ阻害剤が阻害するインタクトな全長プロテインキナーゼ以外の細胞成分から、可逆的変性キナーゼ阻害剤が測定可能に解離する能力は、免疫原性毒性の減少を含む、毒性の減少を提供し得る。特定の実施形態において、可逆的変性キナーゼ阻害剤の−L1−R1基は、キナーゼATP結合部位部分および電子欠乏オレフィン炭素であり、炭素はキナーゼ活性部位システインのスルフヒドリルに結合する。従って、ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、プロテインキナーゼの少なくとも2つの点に結合する:ATP結合部位部分の中の少なくとも1個の残基およびキナーゼ活性部位システインのスルフヒドリルである。
ある実施形態において、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)は、例えば、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤がプロテインキナーゼを阻害する能力に対して測定可能な効果がほとんどないか、または測定可能な効果が全くない(例えば、可逆的(eversible)変性キナーゼ阻害剤はGSHにのみ可逆的に結合し、それによって、標的キナーゼへの結合を増加することが可能である)。ある実施形態において、可逆的キナーゼ阻害剤のIC50またはKiは、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)の存在下で、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.01%または0.001%を超えずに増加される。他の実施形態において、可逆的キナーゼ阻害剤のIC50またはKiは、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)の存在によって、測定可能に増加されない。ある実施形態において、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)は、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤がプロテインキナーゼを阻害する能力に対して測定可能な効果がほとんどないか、または測定可能な効果が全くなく、ここで、可逆的キナーゼ阻害剤は低濃度で存在する(例えば、100nM、75nM、50nM、25nM、10nM、5nM、3nM、1nM、500pM、250pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、または1pM未満)。ある実施形態において、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)は、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤がプロテインキナーゼを阻害する能力に対して測定可能な効果がほとんどないか、または測定可能な効果が全くなく、ここで、可逆的キナーゼ阻害剤は、10nM、5nM、4nM 3nM、2nM、または1nM未満の濃度で存在する。特定の実施形態において、生理学的濃度のグルタチオン(例えば、5または10mM GSH)は、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤がタンパク質を阻害する能力に対して測定可能な効果がほとんどないか、または測定可能な効果が全くない。
ある実施形態において、生理学的濃度のアデノシン三リン酸(例えば、1mM ATP)は、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤がプロテインキナーゼを阻害する能力に対して測定可能な効果がほとんどないか、または測定可能な効果が全くない。ある実施形態において、可逆的キナーゼ阻害剤のIC50またはKiは、生理学的濃度のアデノシン三リン酸(例えば、1mM ATP)の存在下で、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.01%または0.001%を超えずに増加される。他の実施形態において、可逆的キナーゼ阻害剤のIC50またはKiは、生理学的濃度のアデノシン三リン酸(例えば、1mM ATP)の存在によって、測定可能に増加されない。
特定の実施形態において、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤は、GSHと可逆的に反応する。特定の実施形態において、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤は、迅速かつ可逆的にGSHと反応する。従って、特定の実施形態において、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤は、活性部位システイン残基に可逆的に結合しながら(例えば、10nM、5nM、4nM 3nM、2nMまたは1nM未満の濃度で)、GSHと可逆的に反応する(例えば、迅速かつ可逆的に)。GSHは生理学的濃度であり得る(例えば、5−10mM)。いかなる特定のメカニズムの理論によっても束縛されないが、本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤が、細胞のグルタチオンと迅速かつ可逆的に反応する能力は、可逆的キナーゼ阻害剤の求電子的性質から、大部分の標的とされていない細胞タンパク質を保護すると考えられている。
プロテインキナーゼは任意の適切なキナーゼであり得る。ある実施形態において、プロテインキナーゼは活性部位にシステイン残基を含む。プロテインキナーゼ活性部位は、プロテインキナーゼ基質がリン酸化されるプロテインキナーゼの部分である。キナーゼ活性部位は、典型的には、基質に結合するアミノ酸残基(本明細書では、キナーゼ活性部位結合残基とも呼ばれる)、および触媒性リン酸化反応に関与するアミノ酸残基(本明細書では、キナーゼ活性部位触媒残基とも呼ばれる)を含有するポケットまたは割れ目である。本明細書に提供される可逆的キナーゼ阻害剤は、キナーゼ活性部位に適合すること、およびキナーゼが基質をリン酸化する能力を破壊することによって、キナーゼ触媒作用を阻害することが可能である。多くのプロテインキナーゼの活性部位は、構造決定(例えば、X線結晶学技術または三次元NMR技術)を通して当該分野において公知である。三次元構造が決定されていない場合、プロテインキナーゼの活性部位の構造は、当該分野において一般的に知られているコンピューターソフトウェアモデリングプログラムを使用して一次アミノ酸配列によって決定され得る。
本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤を使用して阻害されるプロテインキナーゼには、当該分野において公知であるような、セリン/スレオニン特異的プロテインキナーゼ、チロシン特異的プロテインキナーゼ、受容体型チロシンキナーゼ、受容体結合型チロシンキナーゼ、ヒスチジン特異的プロテインキナーゼ、およびアスパラギン酸/グルタミン酸特異的プロテインキナーゼが挙げられるがこれらに限定されない。ある実施形態において、キナーゼは、チロシンプロテインキナーゼまたはセリン/スレオニンプロテインキナーゼである。キナーゼの例には、SRC、YES、FGR、CHK2、FGFR1−4、BTK、EGFR、HER2、HER4、HER3、JAK3、PLK1−3、MPS1、RON、MEK1/2、ERK1/2、VEGFR、KIT、KDR、PDGFR、FLT3、CDK8、MEK7、ROR1、RSK1−4、MSK1/2、MEKK1、NEK2、MEK5、MNK1/2、MEK4、TGFbR2、ZAP70、WNK1−4、BMX、TEC、TXK、ITK、BLK、MK2/3、LIMK1、TNK1、CDK11、p70S6Kb、EphB3、ZAK、およびNOKが挙げられる。
IV.疾患を治療する方法
別の態様において、キナーゼ活性に関連する疾患を、治療の必要がある被験体において治療する方法が提供される。この方法は、本明細書に提供される化学式の構造を有する有効量の(例えば、治療有効量の)化合物(または上記のようなその実施形態)を被験体に投与することを含む。
別の態様において、キナーゼ活性に関連する疾患を、治療の必要がある被験体において治療する方法が提供される。この方法は、本明細書に提供される化学式の構造を有する有効量の(例えば、治療有効量の)化合物(または上記のようなその実施形態)を被験体に投与することを含む。
ある実施形態において、キナーゼ活性と関連する疾患は慢性疾患である。この疾患は、癌、てんかん、HIV感染、自己免疫疾患(例えば、関節炎)、虚血性疾患(例えば、心臓発作または脳卒中)、脳卒中、神経変性疾患、代謝性または炎症性疾患であり得る。特定の実施形態において、疾患は、例えば、脳、胸部、子宮頸部、結腸、膵臓、頭頸部、肝臓、腎臓、肺、非小細胞肺、前立腺、黒色腫、中皮腫、卵巣、肉腫、胃、子宮、および髄芽腫の癌などの、白血病、癌腫、肉腫を含む癌である。さらなる例には、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前癌性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、泌尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、内分泌性膵臓および外分泌性膵臓の新生物が挙げられる。ある実施形態において、疾患は、肝臓癌、結腸癌、乳癌、黒色腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、または非小細胞肺癌である。ある実施形態において、疾患は、転移している癌である。ある実施形態において、疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、強皮症、または多発性筋炎である。ある実施形態において、疾患は、糖尿病、肥満、または脂質障害である。ある実施形態において、疾患は、感染性因子によって引き起こされ、例えば、細菌、寄生生物、またはウイルスによって引き起こされ得る。ある実施形態において、疾患は、心筋梗塞、脳卒中、またはぜんそくなどのように急性である。ある実施形態において、疾患は、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である。
V.アッセイ
当該分野において公知である技術および本明細書に提供される指針を使用して、候補キナーゼ阻害剤は、任意の公知のプロテインキナーゼを阻害する阻害剤の能力について容易にアッセイされ得る。例えば、本明細書に提供される化学式の構造を有する候補キナーゼ阻害剤またはその実施形態は、キナーゼ活性部位結合残基および/またはキナーゼ活性部位触媒残基の間の潜在的な結合接触を評価するために、コンピューターモデリング技術を使用して最初にアッセイされ得る。このようなコンピューターモデリング技術はまた、インシリコ技術と呼ばれる。上記に議論されたように、キナーゼ活性部位結合残基および/またはキナーゼ活性部位触媒残基は、一次アミノ酸構造が知られている任意のキナーゼについて、公知であるか、または容易に決定される。特に、コンピューターモデリング技術は、チオール付加物を形成するために、電子欠乏オレフィン炭素を用いて、キナーゼ活性部位システイン残基と反応する候補キナーゼ阻害剤の能力を評価するために利用され得る。例えば、キナーゼ阻害剤電子欠乏オレフィン炭素が、キナーゼ活性部位システインスルフヒドリルの10Å以内にある場合、キナーゼ阻害剤の効力および/または選択性は改善されるかもしれない(例えば、1000−10,000倍)。
当該分野において公知である技術および本明細書に提供される指針を使用して、候補キナーゼ阻害剤は、任意の公知のプロテインキナーゼを阻害する阻害剤の能力について容易にアッセイされ得る。例えば、本明細書に提供される化学式の構造を有する候補キナーゼ阻害剤またはその実施形態は、キナーゼ活性部位結合残基および/またはキナーゼ活性部位触媒残基の間の潜在的な結合接触を評価するために、コンピューターモデリング技術を使用して最初にアッセイされ得る。このようなコンピューターモデリング技術はまた、インシリコ技術と呼ばれる。上記に議論されたように、キナーゼ活性部位結合残基および/またはキナーゼ活性部位触媒残基は、一次アミノ酸構造が知られている任意のキナーゼについて、公知であるか、または容易に決定される。特に、コンピューターモデリング技術は、チオール付加物を形成するために、電子欠乏オレフィン炭素を用いて、キナーゼ活性部位システイン残基と反応する候補キナーゼ阻害剤の能力を評価するために利用され得る。例えば、キナーゼ阻害剤電子欠乏オレフィン炭素が、キナーゼ活性部位システインスルフヒドリルの10Å以内にある場合、キナーゼ阻害剤の効力および/または選択性は改善されるかもしれない(例えば、1000−10,000倍)。
同様に、コンピューターモデリング技術は、ステアリン酸の衝突を起こすことなく、候補キナーゼ阻害剤がキナーゼ活性部位に適合する能力を評価するために使用され得る。上記のように、ある実施形態において、−R1または−L−R1は、キナーゼATP結合部位の中に適合し、および/またはキナーゼATP結合部位の中のアミノ酸残基と接触する。それゆえに、コンピューターモデリング技術は、−R1または−L−R1がキナーゼATP結合部位の中に適合し、および/またはキナーゼATP結合部位の中でアミノ酸残基と接触する能力を評価するために使用され得る。上記のコンピューターモデリング技術は、本明細書に提供される化学式の構造またはその実施形態の中で様々な一般的な化学骨格を有する候補キナーゼ阻害剤のキナーゼ阻害能力を評価するために使用され得る。このようにして、新たなクラスの化学骨格が、インビトロ活性アッセイを実施する前に、コンピューターモデリングを使用して評価され得る。
インビトロアッセイもまた、本明細書に提供される化学式の構造またはその実施形態を有する候補キナーゼ阻害剤のキナーゼ阻害特性を評価するために使用され得る。インビトロキナーゼアッセイは当該分野において周知である。大量のキナーゼパネルについての結合アッセイを使用する、大量のキナーゼ阻害剤候補を迅速に評価するための高スループット技術が公知でありかつ有用である。例えば、Karaman et al.,Nat Biotechnol.2008 Jan;26(1):127−32を参照のこと。
キナーゼ触媒活性を減少させる化合物はまた、組換えまたは天然に存在するもののいずれかである、生物学的に活性なプロテインキナーゼを使用して同定および試験され得る。プロテインキナーゼは、ネイティブ細胞中に見い出され、インビトロで単離され、または細胞中で同時発現もしくは発現されることができる。特定のプロテインキナーゼが特定の基質を特異的にリン酸化する。特定の基質が公知である場合、候補キナーゼ阻害剤が特定の基質のリン酸化を減少させる能力がアッセイされ得る。一般的なまたは非特異的なキナーゼ基質が利用され得る。
本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤はまた、活性部位システインを含有しないキナーゼの変異体を阻害する阻害剤の能力についてインビトロで試験され得る。活性部位システインを含有しないキナーゼの変異体の触媒活性を減少させる能力を有さずに(または測定可能に減少させる能力を有さずに)、活性部位システインを有するキナーゼの触媒活性を減少させるキナーゼ阻害剤の能力は、活性部位システインに結合することによってキナーゼを阻害するキナーゼ阻害剤を示している。例えば、RSK2のC436V変異体は、野生型RSK2に対して強力な阻害活性を示す特定のキナーゼ阻害剤(IC50>10μM)に対して抵抗性であり得る。この結果は、RSK2阻害がCys436と阻害剤の間の共有結合性結合の形成を必要とするという結論を支持する。
上記のように、Eおよび−L2−Eは、典型的には、キナーゼ活性部位(cite)システインのスルフヒドリルに可逆的に結合するために、反応中心オレフィン炭素から電子を十分に求引する置換基である(例えば、キナーゼが部分的にまたは完全に変性されるとき)。本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤はまた、プロテインキナーゼから(例えば、部分的にまたは完全に変性)またはチオール化合物(例えば、2−メルカプトエタノール(BME))からのキナーゼ阻害剤の会合と解離を測定することによって、プロテインキナーゼの活性部位システインに可逆的に結合するキナーゼ阻害剤の能力についてインビトロで試験され得る。本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤の反応中心炭素がキナーゼ活性部位(cite)システインのスルフヒドリルに可逆的に結合する能力は、透析、質量スペクトル分析、NMR、およびUV検出を含む任意の適切な手段を使用して測定され得る(より詳細には実施例のセクションを参照のこと)。例えば、キナーゼ阻害剤は、BMEなどのチオール化合物の結合を検出することによってアッセイされ得る。結合は、典型的にはチオール化合物への結合の際によりUV活性でなくなる化合物のUV検出を使用して、またはプロトンNMRを使用して結合を検出することによって、評価され得る。典型的には、アッセイは、チオール化合物を滴定すること、および終点の結合検出パラメーター(例えば、UV活性またはプロトンNMR)の変化を調べることによって実施される。可逆性は希釈によって評価される。特定の例は、実施例のセクションにおいて以下に提供される(実施例82を参照のこと)。
本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤はまた、pH 7.5におけるそれらの安定性についてインビトロで試験され得る。任意の適切な方法が、pH 7.5において本明細書で示される阻害剤の安定性を測定するために使用されてよい。適切な方法には、例えば、LC−MS(例えば、HPLC−MS)、ならびに、キナーゼ阻害剤が発色団を有する場合には、UV吸収の変化を測定することが挙げられる。UV吸収は、高スループット技術(例えば、大量のキナーゼ阻害剤を同時にスキャンするためのマルチウェルプレート)を使用して測定され得る。安定性は、pH 7.5、37℃のリン酸緩衝化生理食塩水を使用して評価され得る。6時間、12時間、24時間、または48時間よりも長い半減期を有する化合物が選択され得る。
細胞アッセイもまた、本明細書に提供される化学式の構造またはその実施形態を有する候補キナーゼ阻害剤のキナーゼ阻害特性を評価するために使用され得る。細胞アッセイには、植物細胞および動物細胞(例えば、哺乳動物細胞)を含む、任意の適切な供給源からの細胞が含まれる。細胞アッセイはまた、ヒト細胞中で実施され得る。キナーゼ阻害の細胞アッセイは当該分野において周知であり、キナーゼ阻害剤が細胞に送達され(例えば、エレクトロポレーション、受動拡散、マイクロインジェクションなどによって)、キナーゼ活性の終点が測定され、例えば、細胞基質のリン酸化の量、細胞タンパク質の発現の量、または特定のキナーゼの触媒活性によって影響を受けることが知られている細胞表現型の何らかの他の変化が測定される方法が含まれる。例えば、特定の細胞基質のリン酸化は、特異的な検出抗体またはリン酸化された細胞基質、続いて、ウェスタンブロッティング技術および任意の適切な手段(例えば、蛍光標識された抗体の蛍光検出)を使用する可視化を使用して評価され得る。
阻害剤の非存在下での活性と比較して、本明細書に開示されるキナーゼ阻害剤の存在下でのプロテインキナーゼ触媒活性の減少を測定することは、以下の実施例のセクションに記載されるアッセイなどの、当該分野において公知である種々の方法を使用して実施され得る。キナーゼ活性の活性をアッセイするための他の方法は当該分野において公知である。適切なアッセイ方法の選択は、十分に当業者の能力の範囲内にある。
インビトロでおよび/または細胞中でキナーゼ触媒活性を減少させることが可能であるキナーゼ阻害剤が一旦同定されると、これらの化合物は、これらが動物モデル(例えば、動物全体または動物の器官)においてキナーゼ活性を選択的に阻害する能力についてさらに試験され得る。従って、キナーゼ阻害剤は、特定のキナーゼ活性に関連する表現型の検出可能な変化を引き起こす阻害剤の能力について、細胞モデルまたは動物モデルにおいてさらに試験され得る。細胞培養に加えて、動物モデルは、例えば、動物モデルにおける癌を治療する阻害剤の能力について、キナーゼの阻害剤を試験するために使用され得る。
VI.薬学的製剤
別の態様において、本発明は、本発明のキナーゼ阻害剤化合物、または薬学的に受容可能な賦形剤(例えば、担体)と組み合わせたキナーゼ阻害剤化合物を含む、薬学的組成物を提供する。
別の態様において、本発明は、本発明のキナーゼ阻害剤化合物、または薬学的に受容可能な賦形剤(例えば、担体)と組み合わせたキナーゼ阻害剤化合物を含む、薬学的組成物を提供する。
薬学的組成物には、本明細書に開示される阻害剤の光学異性体、ジアステレオマー、または薬学的に受容可能な塩が含まれる。例えば、ある実施形態において、薬学的組成物には、本発明の化合物および薬学的に受容可能な塩としてのクエン酸が含まれる。薬学的組成物に含まれるキナーゼ阻害剤は、上記に記載されるように、担体部分に共有結合され得る。あるいは、薬学的組成物に含まれるキナーゼ阻害剤は、担体部分に共有結合されなくてもよい。
本明細書で使用される場合、「薬学的に適切な担体」とは、抽出物と有害に反応しない、腸内または非経口的な適用のために適切な薬学的賦形剤、例えば、薬学的に、生理学的に、受容可能な、有機、または無機の担体物質をいう。適切な薬学的に受容可能な担体には、水、塩溶液(例えば、リンガー液)、アルコール、オイル、ゼラチンおよび炭水化物、例えば、ラクトース、アミロース、またはデンプン、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。このような調製物は滅菌でき、所望される場合、本発明の化合物と有害に反応しない、滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色料、および/または芳香物質などの補助剤と混合できる。
本発明の化合物は、患者に単独で投与でき、または同時投与できる。同時投与は、個別にまたは組み合わせて(1種より多くの化合物)の化合物の同時または連続的な投与を含むことを意味する。従って、調製物はまた、所望される場合、他の活性物質とともに合わせることができる(例えば、代謝性分解を減少させるため)。
A.製剤
本発明のキナーゼ阻害剤は、広範な種々の経口、非経口、および局所的剤形で調製および投与され得る。従って、本発明の化合物は、注射(例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内)によって投与できる。また、本明細書に記載される化合物は、吸入によって、例えば、鼻内に投与できる。加えて、本発明の化合物は、経皮的に投与できる。複数の投与の経路(例えば、筋肉内、経口、経皮的)が本発明の化合物を投与するために使用できることもまた想定される。従って、本発明は、薬学的に受容可能な担体または賦形剤、および1種以上の本発明の化合物を含む薬学的組成物もまた提供する。
本発明のキナーゼ阻害剤は、広範な種々の経口、非経口、および局所的剤形で調製および投与され得る。従って、本発明の化合物は、注射(例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内)によって投与できる。また、本明細書に記載される化合物は、吸入によって、例えば、鼻内に投与できる。加えて、本発明の化合物は、経皮的に投与できる。複数の投与の経路(例えば、筋肉内、経口、経皮的)が本発明の化合物を投与するために使用できることもまた想定される。従って、本発明は、薬学的に受容可能な担体または賦形剤、および1種以上の本発明の化合物を含む薬学的組成物もまた提供する。
本発明の化合物から薬学的組成物を調製するために、薬学的に受容可能な担体は固体または液体のいずれかであり得る。固体型調製物には、散剤、錠剤、丸薬、カプセル、カシェ剤、坐剤、および分散可能な顆粒が挙げられる。固体担体は、希釈剤、芳香剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としてもまた作用する、1種以上の物質であり得る。
散剤中では、担体は微細に分割された固体であり、これは、微細に分割された活性成分と混合されている。錠剤中では、活性成分は、適切な割合で必要な結合特性を有する担体と混合され、所望の形状およびサイズで詰め込まれている。
散剤および錠剤は、好ましくは、5%〜70%の活性化合物を含有している。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどである。「調製物」という用語は、カプセルを提供する担体としてのカプセル化材料を伴う活性化合物の製剤を含むことを意図し、このカプセルでは、活性成分が、他の担体を伴ってまたは伴わずに、担体によって囲まれており、従って、それと結合している。同様に、カシェ剤およびロゼンジが含まれる。錠剤、散剤、カプセル、丸薬、カシェ剤、およびロゼンジは、経口投与のために適切な固体剤形として使用できる。
坐剤を調製するために、脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物などの低融点ワックスは最初に融解され、撹拌しながらその中に活性成分が均質に分散される。次いで、融解した均質混合物は好都合なサイズの型に注がれ、冷却され、それによって固化する。
液体型調製物には、溶液、懸濁液、およびエマルジョン、例えば、水または水/プロピレングリコール溶液が挙げられる。非経口注射のために、液体調製物は、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液中で製剤化できる。
非経口適用が必要とされるかまたは所望されるとき、本発明の化合物のための特に適切な混合物は、注射用の滅菌溶液、好ましくは、油性または水性溶液、ならびに懸濁液、エマルジョン、または坐剤を含む移植物である。特に、非経口投与のための担体には、デキストロース、生理食塩水、純水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ピーナッツオイル、ゴマ油、ポリオキシエチレン−ブロックポリマーなどの水溶液が挙げられる。アンプルは好都合な単位剤形である。本発明の化合物はまた、リポソームに組み込むことができ、または経皮ポンプまたはパッチを経由して投与できる。本発明における使用のために適切な薬学的混合物には、例えば、Pharmaceutical Sciences(17th Ed.,Mack Pub.Co.,Easton、PA)およびWO 96/05309に記載されているものが挙げられ、これらの両方の教示は参照により組み込まれる。
経口使用のために適切な水溶液は、水の中に活性成分を溶解すること、および所望されるように適切な着色剤、香料、安定剤、および濃厚剤を加えることによって調製できる。経口使用のために適切な水性懸濁液は、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤などの粘性材料とともに、水中の微細に分割された活性成分を分散することによって作製できる。
経口投与のために、使用直前に液体剤形調製物に転換されることが意図されている固体型調製物もまた挙げられる。このような液体剤形には、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。これらの調製物は、活性成分に加えて、着色剤、香料、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、濃厚剤、溶解剤などを含有し得る。
薬学的調製物は、好ましくは、単位剤形である。このような剤形において、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に下位分割される。単位剤形はパッケージ化された調製物であり得、このパッケージは、個別の量の調製物を含有し、例えば、充填された錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル中の散剤である。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジであり得、またはこれは、パッケージ型の適切な数のこれらのいずれかであり得る。
単位用量調製物中の活性成分の量は、特定の適用および活性成分の効力に従って、0.1mg〜10000mg、より典型的には、1.0mg〜1000mg、最も典型的には、10mg〜500mgで変動または調整され得る。この組成物はまた、所望される場合、他の適合可能な治療剤も含有できる。
ある化合物は、水に限られた溶解性を有し得、それゆえに、組成物中に界面活性剤または他の適切な共溶媒を必要とする可能性がある。このような共溶媒には、Polysorbate 20、60、および80;Pluronic F−68、F−84、およびP−103;シクロデキストリン;およびポリオキシル 35 キャスターオイルが挙げられる。このような共溶媒は、典型的には、約0.01重量%から約2重量%までの間のレベルで利用される。
単純な水溶液よりも高い粘度は、製剤の懸濁液もしくはエマルジョンの成分の物理的分離を減少させるため、および/またはさもなくば製剤を改善するために、製剤を分散させる際に変動性を減少させるために所望され得る。このような粘度上昇剤には、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、前述の組み合わせが挙げられる。このような剤は、典型的には、約0.01重量%から約2重量%の間のレベルで利用される。
本発明の組成物は、持続放出および/または快適さを提供するための成分をさらに含んでもよい。このような成分には、高分子量の、アニオン性粘膜模倣ポリマー、ゲル化ポリサッカリド、および微細に分割された薬物担体物質が挙げられる。これらの成分は、米国特許第4,911,920号;同第5,403,841号;同第5,212,162号;および同第4,861,760号においてより詳細に議論されている。これらの特許の全体の内容は、すべての目的のために、それらの全体が参照により組み込まれる。
B.有効な投薬量
本発明によって提供される薬学的組成物には、活性成分が治療有効量、すなわち、その意図される目的を達成するために有効な量で含有される組成物が含まれる。特定の適用のために有効な実際の量は、とりわけ、治療される状態に依存する。例えば、癌を治療するための方法において投与されるとき、このような組成物は、所望の結果(例えば、被験体における癌細胞の数を減少させること)を達成するために有効な量の活性成分を含有する。
本発明によって提供される薬学的組成物には、活性成分が治療有効量、すなわち、その意図される目的を達成するために有効な量で含有される組成物が含まれる。特定の適用のために有効な実際の量は、とりわけ、治療される状態に依存する。例えば、癌を治療するための方法において投与されるとき、このような組成物は、所望の結果(例えば、被験体における癌細胞の数を減少させること)を達成するために有効な量の活性成分を含有する。
哺乳動物に投与される投薬量および頻度(単回または複数回用量)は、キナーゼの活性の増加を生じる疾患、哺乳動物が別の疾患に罹患しているか否か、および投与の経路;レシピエントのサイズ、齢、性別、健康、体重、肥満度指数、および食事;治療される疾患(例えば、癌)の徴候の性質および程度、同時治療の型、治療される疾患からの合併症、または他の健康関連の問題を含む種々の因子に依存して、変動できる。他の治療レジメンまたは薬剤は、本発明の方法および化合物と合わせて使用できる。
本明細書に記載される任意の化合物について、治療有効量は、細胞培養アッセイから最初に決定できる。標的濃度は、例えば、記載される方法を使用して測定されるような、キナーゼ触媒活性のレベルを減少可能である活性化合物の濃度である。
ヒトにおける使用のための治療有効量は、動物モデルから決定され得る。例えば、ヒトのための用量は、動物において有効であることが見い出された濃度を達成するように処方できる。ヒトにおける投薬量は、上記のように。キナーゼ阻害をモニターすること、および投薬量を上方または下方に調整することによって調整できる。
投薬量は、患者の要求および利用される化合物に依存して変動され得る。患者に投与される用量は、本発明の文脈においては、長期的に患者における有益な治療応答をもたらすために十分であるべきである。用量のサイズはまた、任意の有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。一般的に、治療は、化合物の最適用量よりも少ない、より少ない投薬量で開始される。その後、投薬量は、状況下で最適な効果に到達するまで、少量増分ずつ増加される。本発明の1つの実施形態において、投薬量範囲は、0.001%〜10% w/vである。別の実施形態において、投薬量範囲は0.1%〜5% w/vである。
投薬量および間隔は、治療される特定の臨床兆候のために有効である投与される化合物のレベルを提供するために個別に調整できる。このことは、個別の疾患状態の重篤度と釣り合っている治療レジメンを提供する。
本明細書に提供される教示を利用して、実質的な毒性を引き起こさず、さらに特定の患者によって実証される臨床徴候を治療するために完全に有効である、有効な予防的または治療的な治療レジメンが計画できる。この計画には、化合物の効力、相対的なバイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の存在および重篤度、好ましい投与の様式、ならびに選択された薬剤の毒性プロフィールなどの要因を考慮することにより、活性化合物の注意深い選択を包含するべきである。
C.毒性
特定の化合物についての毒性と治療効果の間の比率は、その治療指数であり、LD50(50%の集団において致死的である化合物の量)とED50(50%の集団において有効である化合物の量)の間の比率として表現できる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイおよび/または動物研究から得られた治療指数データは、ヒトにおける使用のために一定範囲の投薬量を処方する際に使用できる。このような化合物の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは全くないED50を含む一定範囲の血漿濃度中にある。投薬量は、利用される剤形および利用される投与の経路に依存して、この範囲内で変動し得る。例えば、Fingl et al.,In:Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch.1,p.l,1975を参照のこと。正確な処方、投与の経路、および投薬量は、患者の状態および化合物が使用される特定の方法を考慮して、個々の医師によって選択できる。
特定の化合物についての毒性と治療効果の間の比率は、その治療指数であり、LD50(50%の集団において致死的である化合物の量)とED50(50%の集団において有効である化合物の量)の間の比率として表現できる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイおよび/または動物研究から得られた治療指数データは、ヒトにおける使用のために一定範囲の投薬量を処方する際に使用できる。このような化合物の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは全くないED50を含む一定範囲の血漿濃度中にある。投薬量は、利用される剤形および利用される投与の経路に依存して、この範囲内で変動し得る。例えば、Fingl et al.,In:Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch.1,p.l,1975を参照のこと。正確な処方、投与の経路、および投薬量は、患者の状態および化合物が使用される特定の方法を考慮して、個々の医師によって選択できる。
D.さらなる薬剤および治療様式
ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、他の治療剤または治療様式と組み合わせて使用され得る。ある実施形態において、さらなる治療剤は抗癌剤である。治療剤は、化学療法剤、生物製剤、ホルモン療法剤、または本明細書に提供される化学式(またはその実施形態)のキナーゼ阻害剤ではないキナーゼ阻害剤であり得る。さらなる治療剤は、さらに、アルキル化剤、アントラサイクリン、モノクローナル抗体、サイトカイン、ヌクレオシドアナログ、プレドニゾン、タキサン、エストロゲン、プロゲステロン、ホルモンアンタゴニスト、ビンカアルカロイド、代謝拮抗物質などであり得る。
ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、他の治療剤または治療様式と組み合わせて使用され得る。ある実施形態において、さらなる治療剤は抗癌剤である。治療剤は、化学療法剤、生物製剤、ホルモン療法剤、または本明細書に提供される化学式(またはその実施形態)のキナーゼ阻害剤ではないキナーゼ阻害剤であり得る。さらなる治療剤は、さらに、アルキル化剤、アントラサイクリン、モノクローナル抗体、サイトカイン、ヌクレオシドアナログ、プレドニゾン、タキサン、エストロゲン、プロゲステロン、ホルモンアンタゴニスト、ビンカアルカロイド、代謝拮抗物質などであり得る。
ある実施形態において、本明細書に提供されるキナーゼ阻害剤は、放射線治療および外科手術などの他の治療様式と組み合わせて使用され得る。
VII.実施例
以下の実施例は、例証するために提供され、特許請求された発明を限定するためではない。
以下の実施例は、例証するために提供され、特許請求された発明を限定するためではない。
一般的な化学的方法。低分解能エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル(ESI+−MS)は、Waters Micromass ZQ 4000分光光度計上で記録された。LC/MS(MS:ESI+)は、Xterra MS C18カラム(Waters)を使用して、0.2ml 分−1の流速で(210nm、260nm、および/または350nmにてモニター)、Waters AllianceHT LC/MS上で実施された。空気および水感受性の反応について、ガラス器具は、使用前にオーブンまたは炎で乾燥させ、そして反応はアルゴン下で実施された。ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、メタノール、テトラヒドロフラン、トルエン、およびジイソプロピルアミンは、Glass Contour,Inc.(Laguna Beach,CA)によって製造された溶媒精製システムを使用して乾燥された。他のすべての溶媒はACS化学グレード(Fisher)のものであり、他に示されない限り、さらなる精製なしで使用された。分析用および調製用の薄層クロマトグラフィーが、シリカゲル60 F254 ガラスプレート(EM Science)を用いて実施された。フラッシュクロマトグラフィーは、230−400メッシュのシリカゲル(Selecto Scientific)とともに実施された。調製用高速液体クロマトグラフィー(HPLC)は、COMBI−A C18調製用カラム(Peeke Scientific)を使用して、10 ml 分−1の流速を用いて(210nmおよび260nmでモニターされる)、Prostar 210(Varian)上で実施された。
JAK2およびJAK3 キナーゼアッセイのための一般的手順。活性JAK2(ヒト、残基 808−末端)およびJAK3(ヒト、残基781−末端)はMilliporeから購入された。8mM HEPES、pH 7.0、200μM EDTA、10mM MgCl2、0.2mg/mL BSA、100μM ATP、および10mM GSH中の活性キナーゼ(3nM)は、室温で30分間、阻害剤(8または10通りの濃度、二連で)とともに前保温された。キナーゼ反応は、0.3μCi/μLのγ−32P−ATP(6000Ci/mmol、NEN)および100μM ペプチド基質(JAK3用にJAK3−tideまたはJAK2用にPDK−tide、Millipore)の添加によって開始され、そして室温で30分間温置された。キナーゼ活性は、ホスホセルロースのシートに各反応の5μLをスポットすることによって決定された。各ブロットは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4溶液で2回、そしてMeOHで1回洗浄された(各洗浄あたり5−10分間)。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはSPOTプログラム(Knight,Z.et al.Nature Protocols,2(10),2459−66)を使用して定量され、そしてGraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用してプロットされた。
Btk キナーゼアッセイのための一般的手順。Btk(ヒト、全長)は購入され(Invitrogen、カタログ番号PV3363)、製品の資料に特定されるように使用された。Btk(2nM 最終濃度)は、室温で30分間、阻害剤(6または10通りの濃度、二連で)とともに前保温された。キナーゼ反応は、0.16μCi/μLのγ−32P−ATP(6000Ci/mmol、NEN)および0.2mg/mL 基質(ポリ[Glu:Tyr]、4:1 Glu:Tyr)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。キナーゼ活性は、ホスホセルロースのシートに各反応の6μLをスポットすることによって決定された。各ブロットは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4溶液で2回、そしてMeOHで1回洗浄された(各洗浄あたり5−10分間)。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはImageQuant(v.5.2、Molecular Dynamics)を使用して定量され、そしてGraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用してプロットされた。
実施例1.3−(4−(9H−プリン−6−イル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド
6mL THF中の1−テトラヒドロピラン−1−イル−6−(p−ホルミルフェニル)プリン(Donald,A.et al.J.Med.Chem.2007,50、2289−2292)(170mg、0.55mmol)の溶液に、20滴の1N HCl水溶液が加えられた。この反応物は室温で一晩撹拌された。18時間後、白色沈殿が形成し、TLCによる測定では、すべての出発材料が消費された。この反応物はEtOAcで希釈され、飽和NaHCO3で洗浄され、そして有機層はNa2SO4で乾燥された。ロータリーエバポレーションは、100mg(81%)の2を明黄色固形物として与え、これは、さらなる精製なしで続行された。計算精密質量:224.07、M/z 実測値:225.3(M+H)+。
THF(0.5mL)中の脱保護された6−(p−ホルミルフェニル)−プリン(10.9mg、0.049mmol)、2−シアノアセトアミド(5.4mg、0.064mmol)、およびPPh3(13mg、0.049mmol)のスラリーが密封バイアル中で80℃に加熱された。この混合物は80℃で12時間撹拌され、そして真空中で濃縮された。残渣は9:1 CH2Cl2:MeOHを用いるシリカ上のクロマトグラフィーに供され、9.6mg(87%)の3−(4−(9H−プリン−6−イル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド(E/Z異性体の混合物)を明黄色固形物として与えた。計算精密質量:290.09、M/z 実測値:291.3(M+H)+。
実施例2.4−(1−トシル−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)ベンズアルデヒド
実施例3.4−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)ベンズアルデヒド
実施例4.3−(4−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド
実施例5.3−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−カルボニル)ベンズアルデヒド
実施例6.3−(3−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−カルボニル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド
実施例7.2−シアノ−3−(1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例8.3−(1H−インダゾール−5−イル)−2−(ピロリジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例9.2−シアノ−3−(1H−インダゾール−6−イル)アクリルアミド
mol)の溶液に、2−シアノアセトアミド(78.2mg、0.7mmol)およびピ
ペリジン(50μL、0.5mmol)が加えられた。この反応物は、白色沈殿の生成を伴いながら、室温で18時間撹拌された。この反応物は濾過され、固形物はTHFで洗浄され、そして真空中で乾燥されて、69mg(46%)の2−シアノ−3−(1H−インダゾール−6−イル)アクリルアミド(E/Z 異性体の混合物)を白色固形物として与えた。計算精密質量:212.07、M/z 実測値:213.4(M+H)+。
実施例10.2−シアノ−3−(1H−インダゾール−6−イル)−N−メチルアクリルアミド
実施例11.2−シアノ−3−(1H−インダゾール−6−イル)−N−イソプロピルアクリルアミド
実施例12.(1−(9H−プリン−6−イル)ピペリジン−4−イル)メタノール
実施例13.1−(9H−プリン−6−イル)ピペリジン−4−カルボアルデヒド
実施例14.3−(1−(9H−プリン−6−イル)ピペリジン−4−イル)−2−シアノアクリルアミド
実施例15.2−(2−オキソ−2−p−トリルエチル)イソインドリン−1,3−ジオン
実施例16.2−アミノ−4−p−トリル−1H−ピロール−3−カルボニトリル
実施例17.メチル N−3−シアノ−4−p−トリル−1H−ピロール−2−イルホルムイミダート
実施例18.N’−(3−シアノ−4−p−トリル−1H−ピロール−2−イル)ホルムイミドアミド
実施例19.5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例20.7−(3−(tert−ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例21.6−ブロモ−7−(3−(tert−ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例22.7−(3−(tert−ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)−5−p−トリル−6−ビニル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例23.4−アミノ−7−(3−(tert−ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−カルボアルデヒド
実施例24.メチル 3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノアクリラート
実施例25.tert−ブチル 3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノアクリラート
実施例26.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノアクリルアミド
実施例27.2−シアノ−N−ベンジルアセトアミド
実施例28.2−シアノ−N−イソプロピルアセトアミド.
実施例29.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−N−ベンジル−2−シアノアクリルアミド
実施例30.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−イソプロピルアクリルアミド
実施例31.6−ブロモ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例32.5−p−トリル−6−ビニル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン
実施例33.(E)−3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノアクリルアミド
実施例34.(E)−3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)アクリロニトリル
実施例35.3−(1−(9H−プリン−6−イル)ピペリジン−4−イル)−2−シアノ−N−メチルアクリルアミド
実施例36.2−シアノ−3−(1H−インダゾール−5−イル)−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例37.3−(3−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−カルボニル)フェニル)−2−シアノ−N−メチルアクリルアミド
実施例38.3−(3−(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−カルボニル)フェニル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例39.3−(3,4,5−トリメトキシフェニル)−1H−インダゾール−5−カルボアルデヒド
実施例40.2−シアノ−3−(3−(3,4,5−トリメトキシフェニル)−1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例41.2−シアノ−N−メチル−3−(3−(3,4,5−トリメトキシフェニル)−1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例42.2−シアノ−N,N−ジメチル−3−(3−(3,4,5−トリメトキシフェニル)−1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例43.4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−カルボアルデヒド
実施例44.アゼチジン(X=H)、および3−ヒドロキシアゼチジン(X=OH)シアノアセトアミド
実施例45.シアノアクリルアミドの合成
実施例45a.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例45b.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アクリルアミド
実施例45c.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N,N−ジエチルアクリルアミド
実施例45d.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(ピロリジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例45e.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(アゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例45f.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例45g.(E)−3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(4−メチルピペラジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例46.3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−シクロプロピルアクリルアミド
実施例47.1−(4−クロロフェニル)−2−(3−(ヒドロキシメチル)フェニルアミノ)エタノン
実施例48.2−アミノ−4−(4−クロロフェニル)−1−(3−(ヒドロキシメチル)フェニル)−1H−ピロール−3−カルボニトリル
実施例49.(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)メタノール
実施例50.3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)ベンズアルデヒド
実施例51(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド.
実施例52.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例53.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(アゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例54.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(ピロリジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例55.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例56.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−クロロフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(4−メチルピペラジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例57.2−(3−(ヒドロキシメチル)フェニルアミノ)−1−(4−フェノキシフェニル)エタノン
実施例58.2−アミノ−1−(3−(ヒドロキシメチル)フェニル)−4−(4−フェノキシフェニル)−1H−ピロール−3−カルボニトリル
実施例59.(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)メタノール
実施例60.3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)ベンズアルデヒド
実施例61.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−アクリルアミドの合成のための一般的方法
実施例61a.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例61a.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
実施例61b.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(4−メチルピペラジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例61c.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−(3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
実施例61d.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノアクリルアミド
実施例62.2−シアノ−N−(2−ヒドロキシエチル)アセトアミド
実施例63.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−N−(2−ヒドロキシエチル)アクリルアミド
実施例64.阻害定数の決定
方法。RSK2 CTDおよび His6−ERK2は記載されたように発現および精製された(Cohen et al.,Science,308:1318)。RSK2 CTDのC436V変異体はQuikchange mutagenesis(Stratagene)によって生成され、以前に記載されたようにキナーゼ活性アッセイにおいてWTRSK2 CTDを区別できなかった。WTおよびC436VRSK2 CTD(10μM)は、20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.2mg/mL BSA、および200μM ATP中で、22℃で30分間、His6−ERK2(10μM)によって活性化された。20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.25mg/mL BSA、および100μM ATP中の活性化RSK2 CTD(5nM)は、阻害剤とともに(10通りの濃度、二連で)、30分間前保温された。キナーゼ反応は5μCiの[γ−32P]ATP(6000 Ci/mmol、NEN)および167μM ペプチド基質(RRQLFRGFSFVAK)(配列番号1)の添加によって開始され、室温で30分間実施された。キナーゼ活性は、0.1% H3PO4中の1M NaClであらかじめ洗浄されたニトロセルロースの乾燥シートに5μLの各反応物をスポットすることによって決定された。このニトロセルロースシートは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4中の1M NaCl溶液で2回(洗浄あたり5−10分間)洗浄された。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはSPOTプログラム(Knight,Z.et al.Nature Protocols,2,2459−66)を使用して定量され、そしてIC50値はGraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用して決定された。
方法。RSK2 CTDおよび His6−ERK2は記載されたように発現および精製された(Cohen et al.,Science,308:1318)。RSK2 CTDのC436V変異体はQuikchange mutagenesis(Stratagene)によって生成され、以前に記載されたようにキナーゼ活性アッセイにおいてWTRSK2 CTDを区別できなかった。WTおよびC436VRSK2 CTD(10μM)は、20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.2mg/mL BSA、および200μM ATP中で、22℃で30分間、His6−ERK2(10μM)によって活性化された。20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.25mg/mL BSA、および100μM ATP中の活性化RSK2 CTD(5nM)は、阻害剤とともに(10通りの濃度、二連で)、30分間前保温された。キナーゼ反応は5μCiの[γ−32P]ATP(6000 Ci/mmol、NEN)および167μM ペプチド基質(RRQLFRGFSFVAK)(配列番号1)の添加によって開始され、室温で30分間実施された。キナーゼ活性は、0.1% H3PO4中の1M NaClであらかじめ洗浄されたニトロセルロースの乾燥シートに5μLの各反応物をスポットすることによって決定された。このニトロセルロースシートは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4中の1M NaCl溶液で2回(洗浄あたり5−10分間)洗浄された。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはSPOTプログラム(Knight,Z.et al.Nature Protocols,2,2459−66)を使用して定量され、そしてIC50値はGraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用して決定された。
結果。表1は、WTRSK2およびC436V RSK2 C末端キナーゼドメイン(CTD)に向けた求電子性ピロロ[2,3−d]ピリミジン1−8についての半数阻害濃度(IC50、μM)を提供する。化合物4−6は、10mM 還元型グルタチオン(GSH)の存在下で、RSK2 CTD阻害についてさらに試験された。シアノアクリラート/シアノアクリルアミド4−6と可逆的に反応すること(化合物4−6とのGSH反応は350−400nMにおいてUV/可視光分光学によってモニターされた)、およびRSK2 CTDの濃度の100万倍で存在することにも関わらず、グルタチオンは4−6の阻害効力に対して効果を有さなかった。Cys436と、4−8のシアノアクリラート部分およびシアノアクリルアミド部分の求電子性β−炭素との間の共有結合的な付加物の形成と一致して、システイン−436からバリンへの変異(C436V)は、阻害効力の>1000倍の損失を生じた。最後に、シアノアクリラートおよびシアノアクリルアミド4−8は、より慣用的なマイケルアクセプター(ビニルケトン、アクリラートエステル、アクリロニトリル)に基づく化合物1−3よりも有意に強力である。N/d、測定されず。
実施例65.化合物1−8とのRSK2 CTD反応の質量スペクトル測定
方法。RSK2 CTD(ヒトRSK2、399−740)はE.coli中でHis6−タグ化融合タンパク質として発現され、Ni/NTAアフィニティークロマトグラフィーによって精製され、続いてHis6−タグの切断およびサイズ排除クロマトグラフィーによるさらなる精製を行った。RSK2 CTD(5μM)は、緩衝液(20mM HEPES[pH 8.0]、100mM NaCl、10mM MgCl2)中、室温で1時間、示された化合物(25μM、5当量)とともに温置された。反応は等量の0.4% ギ酸を加えることによって停止され、サンプルは液体クロマトグラフィー(Microtrap C18 Proteinカラム[Michrom Bioresources]、5% MeCN、0.2% ギ酸、0.25mL/分;95% MeCN、0.2% ギ酸で溶出)およびインラインESI質量スペクトル測定(LCT Premier、Waters)によって分析された。RSK2 CTDの分子量および求電子性ピロロ[2,3−d]ピリミジン付加物はMassLynxデコンボリューションソフトウェアを用いて決定され、そしてヒストグラム形式で示された。
方法。RSK2 CTD(ヒトRSK2、399−740)はE.coli中でHis6−タグ化融合タンパク質として発現され、Ni/NTAアフィニティークロマトグラフィーによって精製され、続いてHis6−タグの切断およびサイズ排除クロマトグラフィーによるさらなる精製を行った。RSK2 CTD(5μM)は、緩衝液(20mM HEPES[pH 8.0]、100mM NaCl、10mM MgCl2)中、室温で1時間、示された化合物(25μM、5当量)とともに温置された。反応は等量の0.4% ギ酸を加えることによって停止され、サンプルは液体クロマトグラフィー(Microtrap C18 Proteinカラム[Michrom Bioresources]、5% MeCN、0.2% ギ酸、0.25mL/分;95% MeCN、0.2% ギ酸で溶出)およびインラインESI質量スペクトル測定(LCT Premier、Waters)によって分析された。RSK2 CTDの分子量および求電子性ピロロ[2,3−d]ピリミジン付加物はMassLynxデコンボリューションソフトウェアを用いて決定され、そしてヒストグラム形式で示された。
結果。図1Aおよび図1Bに示されるように、RSK2阻害剤としてのそれらのより高い効力にも関わらず、シアノアクリラートおよびシアノアクリルアミド4−8は、高解像度質量スペクトル分析によって示されるように、RSK2 C末端キナーゼドメイン(CTD)を不可逆的には修飾しない。ピロロ[2,3−d]ピリミジン1−3は従来的な求電子性「弾頭」を含有し、そして予測されるように、RSK2と不可逆的1:1付加物を形成した。この結論は、RSK2 CTDの分子量プラス求電子性化合物の分子量に対応する質量スペクトルにおける新たなピークの形成によって支持される(図1A)。アクリラート2およびアクリロニトリル3によるRSK2 CTDの修飾は、アクリラート/アクリロニトリル弾頭の固有のより低い求電子性に起因して、エノン1と比較していくぶん遅いことに注目のこと。
化合物1−3とは対照的に、シアノアクリラートおよびシアノアクリルアミド阻害剤4−8は、非修飾RSK2 CTDに対応する質量スペクトルにおける単一ピークの存在によって示されるように、RSK2 CTDとの不可逆的付加物を形成しなかった。不可逆的RSK2修飾の欠如にも関わらず、化合物4−8は、不可逆的阻害剤1−3よりも顕著により強力なRSK2キナーゼ活性の阻害剤である(表1)。RSK2のCys436Val変異体(C436V)は化合物4−8に対して〜1000倍感度が低く(表1)、強力な阻害はCys436を必要とすることを実証した。まとめると、これらのデータは、そのすべてがシアノアクリラートまたはシアノアクリルアミド求電子剤を含有する化合物4−8は、シアノアクリラート/シアノアクリルアミド部分の求電子性β炭素と、RSK2のCys436の間で可逆的共有結合を形成することによって、RSK2キナーゼ活性を阻害することを示唆する。このクラスの求電子剤(シアノアクリラートおよびシアノアクリルアミド)についての阻害の可逆的共有結合メカニズムについてのさらなる証拠は以下に提供される。
実施例66.透析に際してのRSK2 CTD活性の回復
方法。示されたピロロ[2,3−d]ピリミジン(1μM)は、20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.25mg/mL BSA、および100μM ATPを含有する緩衝液中のRSK2 CTD(50nM、1当量ののERK2で事前に活性化された)の溶液に加えられた。室温で60分後、反応物は透析カセット(0.1−0.5mL Slide−A−Lyzer,MWCO 10 kDa,Pierce)に移され、そして4℃で2Lの緩衝液(20mM Hepes[pH 8.0]、10mM MgCl2、1mM DTT)に対して透析された。透析緩衝液は2時間後に交換され、次いで実験の最後まで、24時間ごとに交換された。アリコートが透析カセットから24時間ごとに取り出され、液体窒素中ですばやく凍結され、そして引き続いて三連でRSK2キナーゼ活性について分析された。各サンプルのキナーゼ活性は、その時点についてのDMSO対照に標準化され、平均±SDで表現された。
方法。示されたピロロ[2,3−d]ピリミジン(1μM)は、20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、0.25mg/mL BSA、および100μM ATPを含有する緩衝液中のRSK2 CTD(50nM、1当量ののERK2で事前に活性化された)の溶液に加えられた。室温で60分後、反応物は透析カセット(0.1−0.5mL Slide−A−Lyzer,MWCO 10 kDa,Pierce)に移され、そして4℃で2Lの緩衝液(20mM Hepes[pH 8.0]、10mM MgCl2、1mM DTT)に対して透析された。透析緩衝液は2時間後に交換され、次いで実験の最後まで、24時間ごとに交換された。アリコートが透析カセットから24時間ごとに取り出され、液体窒素中ですばやく凍結され、そして引き続いて三連でRSK2キナーゼ活性について分析された。各サンプルのキナーゼ活性は、その時点についてのDMSO対照に標準化され、平均±SDで表現された。
結果。図2に示されるように、RSK2 CTDキナーゼ活性は、透析の際に、ピロロ[2,3−d]ピリミジン6および7による阻害から回復し、6および7が可逆的阻害剤であることを示す。図2におけるデータは、4℃における徹底的な透析の際に、RSK2キナーゼ活性が、過剰の(20当量、1.0μM)シアノアクリルアミド6(〜60%回復)および7(〜25%回復)による阻害から時間依存的な様式で回復することを示す。従って、シアノアクリルアミド6および7は、これらの条件下で(4℃における透析)、ゆっくりと解離するそれぞれ、〜3日間および>4日間の解離半減期を有するRSK2の可逆的阻害剤である。解離は室温ではより迅速であり、不可逆的競合因子の存在下で完了まで進行することに注目のこと(図3を参照のこと)。シアノアクリルアミド6および7で観察されるキナーゼ活性の部分的な回復とは対照的に、RSK2 CTDは、4日間の透析の間、エノン1およびフルオロメチルケトン9によって完全に阻害されたままであり、これらの化合物が不可逆的阻害剤であることをさらに実証する。これらの結果はLCMSデータと一貫しており、これは、エノン1(図1A)およびフルオロメチルケトン9(図3)がRSK2と不可逆的に反応するのに対し、シアノアクリラートおよびシアノアクリルアミドは不可逆的RSK2付加物を形成しないことを示す。シアノアクリラート−およびシアノアクリルアミド−置換ピロロ[2,3−d]ピリミジンが、ゆっくりと解離する、完全に可逆的なRSK2との複合体を形成するという、さらなる証拠が図3に提供されている。
実施例67.可逆的共有結合性阻害剤の解離反応速度論
方法。20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、100mM NaCl、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、および0.2mg/mL BSA中のRSK2 CTD(5μM)は、室温で60分間、10μM 阻害剤 1、4−7(またはDMSO対照)とともに前保温された。次いで、FMK9(100μM)が加えられ、アリコートが異なる時点で取り出され(0.5−1500分)そしてすぐに等量の0.4% ギ酸と混合することによってクエンチされた。図1に示されるように、サンプルはLCT Premier質量分析装置およびMassLynxデコンボリューションソフトウェアを用いてLCMSによって分析された。空のRSK2 CTD(4−7との前処理の場合;エノン1との前処理は予測された質量シフトを生じ、これはFMK付加後に変化しなかった)およびFMK−修飾RSK2 CTDに対応するピークは各時点で積分され、パーセントFMK付加物が時間の関数としてプロットされた(図3の左側のグラフに示される「解離%」)。図3の右側のグラフは、任意の競合因子の非存在下におけるFMK標識反応速度論を示す。反応速度論データ(FMK付加物%対時間)は単一指数関数に適合され(PRISM 4.0)、表に示される解離半減期を得た。対照実験は、C436V RSK2が、これらの条件下でFMK9によって修飾されなかったことを示した。
方法。20mM HEPES[pH 8.0]、10mM MgCl2、100mM NaCl、2.5mM Tris(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、および0.2mg/mL BSA中のRSK2 CTD(5μM)は、室温で60分間、10μM 阻害剤 1、4−7(またはDMSO対照)とともに前保温された。次いで、FMK9(100μM)が加えられ、アリコートが異なる時点で取り出され(0.5−1500分)そしてすぐに等量の0.4% ギ酸と混合することによってクエンチされた。図1に示されるように、サンプルはLCT Premier質量分析装置およびMassLynxデコンボリューションソフトウェアを用いてLCMSによって分析された。空のRSK2 CTD(4−7との前処理の場合;エノン1との前処理は予測された質量シフトを生じ、これはFMK付加後に変化しなかった)およびFMK−修飾RSK2 CTDに対応するピークは各時点で積分され、パーセントFMK付加物が時間の関数としてプロットされた(図3の左側のグラフに示される「解離%」)。図3の右側のグラフは、任意の競合因子の非存在下におけるFMK標識反応速度論を示す。反応速度論データ(FMK付加物%対時間)は単一指数関数に適合され(PRISM 4.0)、表に示される解離半減期を得た。対照実験は、C436V RSK2が、これらの条件下でFMK9によって修飾されなかったことを示した。
結果。図3に示されるように、シアノアクリラート/シアノアクリルアミド4−7は、フルオロメチルケトン9を用いる競合標識によって測定されるように、インタクトなフォールディングされたRSK2 CTDから数時間の半減期で解離する。多くのモル濃度過剰のフルオロメチルケトン9(100μM、20当量;図3における「FMK」)は、RSK2 CTDのLCMS分析によって明らかにされるように(図3、左上のグラフ)、迅速かつ不可逆的にRSK2 CTDを修飾した(t1/2<2分間)。対照的に、RSK2 CTDがシアノアクリラート/シアノアクリルアミド4−7(2.0当量)と最初に処理されたとき、引き続くFMK9(100μM、20当量)との処理から得られた修飾ははるかに遅く、42−245分の半減期(t1/2)を生じた(図3、右上のグラフ)。FMK9によるアポ−RSK2 CTDの修飾は2分未満で起こるので、化合物4−7にあらかじめ結合したRSK2の観察されたFMK修飾速度は、あらかじめ結合したシアノアクリラート/シアノアクリルアミドの解離速度にほぼ等しい。慣用的なマイケルアクセプターであるメチルビニルケトン1は、これらの条件下では解離せず、そしてFMK標識は24時間後でさえ観察されなかった(図3)。これらのデータは図2における透析実験と一致しており、シアノアクリラートs/シアノアクリルアミド4−7が、1−4時間の解離半減期で、インタクトな機能的RSK2 CTDから、ゆっくりと、しかし完全に解離することを明らかにする。これらのデータは、シアノアクリラート/シアノアクリルアミド阻害剤の「オフレート」がエステル置換基およびアミド置換基を修飾することによって調整できることをさらに明らかにする。N−イソプロピルシアノアクリルアミドは最も遅いオフレートを有し、これは、インビトロおよび細胞ベースのアッセイにおける強力なRSK2阻害活性と一致する(表1および図6を参照のこと)。
実施例68.Cys436と化合物7の間の共有結合形成
方法。リン酸緩衝化生理食塩水(PBS)中のシアノアクリルアミド7(1.0当量、100−200μM)の溶液に、WTRSK2 CTD、C436VRSK2 CTD(1.5当量)、または緩衝液単独が加えられた。室温で10分後、UV/可視光吸収スペクトルが取得された(NanoDrop 1000 Spectrophotometer)。SDS(最終濃度2%)、グアニジン(最終濃度3M、pH 8)、またはプロテイナーゼK(RSK2 CTDに基づき0.02当量)が加えられ、そしてUV/可視光吸収スペクトルは室温で1分後(SDS、グアニジニウムHCl)または37℃で3時間後(プロテイナーゼK)に記録された。プロテイナーゼKおよびSDS添加実験からのスペクトルは、中および下のパネルに示される。各実験において、400nmにおける吸収値は、緩衝液単独におけるシアノアクリルアミド7の値に標準化され、棒グラフ上にプロットされた。対照実験は、SDS、グアニジン、またはプロテイナーゼKのいずれも、400nmにおいてシアノアクリルアミド7の吸収スペクトルに影響を与えなかったことを示した。
方法。リン酸緩衝化生理食塩水(PBS)中のシアノアクリルアミド7(1.0当量、100−200μM)の溶液に、WTRSK2 CTD、C436VRSK2 CTD(1.5当量)、または緩衝液単独が加えられた。室温で10分後、UV/可視光吸収スペクトルが取得された(NanoDrop 1000 Spectrophotometer)。SDS(最終濃度2%)、グアニジン(最終濃度3M、pH 8)、またはプロテイナーゼK(RSK2 CTDに基づき0.02当量)が加えられ、そしてUV/可視光吸収スペクトルは室温で1分後(SDS、グアニジニウムHCl)または37℃で3時間後(プロテイナーゼK)に記録された。プロテイナーゼKおよびSDS添加実験からのスペクトルは、中および下のパネルに示される。各実験において、400nmにおける吸収値は、緩衝液単独におけるシアノアクリルアミド7の値に標準化され、棒グラフ上にプロットされた。対照実験は、SDS、グアニジン、またはプロテイナーゼKのいずれも、400nmにおいてシアノアクリルアミド7の吸収スペクトルに影響を与えなかったことを示した。
結果。図4において示されるように、Cys436とシアノアクリルアミド7の間の共有結合は、RSK2の変性またはタンパク質消化の際に数秒以内に逆転する。本発明者らは、UV/可視光吸収スペクトル測定によって、RSK2とシアノアクリルアミド7の間の共有結合の形成および逆転をモニターした。シアノアクリルアミド7は、ヘテロ芳香族系に結合体化されたシアノアクリルアミド部分について予測されるように、〜400nM(図4、中および下のパネル)のピークを伴って、可視光を吸収する。シアノアクリルアミド7への過剰のRSK2 CTD(1.5当量)の添加は、400nMピークの完全な消失を生じ、Cys436の求核攻撃によるシアノアクリルアミド発色団の破壊を示す。対照的に、C436V変異を有するRSK2 CTDの添加は、シアノアクリルアミド7の吸収スペクトルに効果を有さなかった(図4、棒グラフ)。この対照はさらに、RSK2のCys436と、化合物7のシアノアクリルアミド部分の求電子性β炭素との間の共有結合の形成から400nmピークの喪失が生じるという本発明者らの解釈を実証する。
本発明者らは、シアノアクリルアミド7に結合されたRSK2 キナーゼドメインのフォールディング状態を破壊する3つの独立した方法を使用した:(1)0.02当量のプロテイナーゼK(「Prot K」)、フォールディングしたタンパク質を小さなペプチドに消化する非特異的プロテイナーゼ、(2)2% ドデシル硫酸ナトリウム(「SDS」)、十分に特徴付けられているタンパク質変性界面活性剤、および(3)3M グアニジンHCl(「Guan」)、多くのタンパク質のネイティブ三次元フォールディングを破壊するカオトロープ。3つすべてのタンパク質変性剤は400nm吸収ピークの再出現を生じ、このことはCys436とシアノアクリルアミド7の間の共有結合が破壊されたことを示す。RSK2変性(SDSおよびグアニジンHClによる)またはタンパク質分解性消化(〜3時間にわたって0.02当量のプロテイナーゼKを用いる完全消化)と同時に、共有結合の逆転が数秒以内に起こった。プロテイナーゼKおよびSDSを用いる実験について、吸収スペクトルは、それぞれ、中のパネルおよび下のパネルに示される(異なる濃度のシアノアクリルアミド7が使用されたので、絶対吸収値は2つの実験で異なる)。3つすべての条件についての吸収値は緩衝液単独中でのシアノアクリルアミド7の吸収に標準化され、そして棒グラフの中で示される。図5は同様の実験から誘導されたLCMSクロマトグラムを示し、シアノアクリルアミド7とRSK2 CTDの間で形成された共有結合性複合体へのタンパク質変性剤の添加が、シアノアクリルアミド7の定量的な遊離を生じることを立証する。
本発明者らのデータは、一旦、タンパク質がアンフォールドし、および/またはタンパク質分解的に消化されると(おそらく、免疫反応の遅延を誘発するための前提条件である)、共有結合が反応速度論的および熱力学的に不安定になり、急速に解離するので、シアノアクリルアミド阻害剤が細胞タンパク質との永続的な共有結合性付加物を形成しそうにないことを示唆する。本発明者らは、シアノアクリルアミド7とRSK2 CTDの間の高親和性(ナノモル濃度〜ピコモル濃度)複合体を伴うこの挙動を実証し、ここでは、解離半減期が、フォールディング状態の〜3時間から、キナーゼドメインの変性の際の1分間未満まで変化した。これらの観察と一致して、豊富なシステイン含有ペプチドであるグルタチオンは、(1)希釈の際のシアノアクリラート/シアノアクリルアミド発色団の急速な回復、および(2)10mM グルタチオンの存在下の摂動していないRSK2阻害効力(表1)によって示されるような、迅速に解離される化合物4−8との共有結合性付加物を形成する(UV/可視光分光学によって示される)。タンパク質のフォールディング状態に対するタンパク質チオール/求電子付加物の共有結合的解離の速度の依存性は、本発明者らの知見によれば、記載されていなかった。
実施例69.RSK2 CTD/化合物7複合体の変性後の化合物7の回復
方法。シアノアクリルアミド7(250μM)は、RSK2 CTD(300μM)の非存在下または存在下で、総量50μlで、10分間温置された。塩酸グアニジン(50μL、6M、pH 8)が加えられ、内容物はおだやかに1分間混合され、その後アセトニトリルが最終濃度50%まで加えられた。溶液は濾過され(0.2μm孔径)、そしてLCMS(20μL 注入、Waters XTerra MS C18カラム、20分間にわたる5−70% MeCN/水+0.1% ギ酸;Waters 2695 Alliance Separations Module,Waters Micromass ZQ mass spectrometer)によって分析された。
方法。シアノアクリルアミド7(250μM)は、RSK2 CTD(300μM)の非存在下または存在下で、総量50μlで、10分間温置された。塩酸グアニジン(50μL、6M、pH 8)が加えられ、内容物はおだやかに1分間混合され、その後アセトニトリルが最終濃度50%まで加えられた。溶液は濾過され(0.2μm孔径)、そしてLCMS(20μL 注入、Waters XTerra MS C18カラム、20分間にわたる5−70% MeCN/水+0.1% ギ酸;Waters 2695 Alliance Separations Module,Waters Micromass ZQ mass spectrometer)によって分析された。
結果。図5Aおよび図5Bに描かれるように、図4に示されるスペクトル測定データと一致して、LCMS分析は、3M グアニジンとのRSK2 CTD/シアノアクリルアミド7複合体の変性後にシアノアクリルアミド7の定量的回復を明らかにした。第1のクロマトグラム(図5A)(λ=350nM)は、3M グアニジンHClを有する緩衝液に溶解されたシアノアクリルアミド7を示す。第2のクロマトグラム(図5B)(λ=350nM)は、RSK2 CTD/シアノアクリルアミド7複合体の3M グアニジンHClでの処理後に純粋なシアノアクリルアミド7の回復を示す。それぞれ、シアノアクリルアミド7のE−およびZ−異性体に対応する2つの主要なピークが両方のサンプルにおいて観察された。ピーク面積は対照サンプルとRSK2 CTD処理サンプルで同様であり、グアニジンを用いる変性後にシアノアクリルアミド7の定量的回復を示す。各ピークのMS分析は、E−またはZ−シアノアクリルアミド7としてその同一性を確認した(計算MW,418.2;実測値[M+H],419.1)。
実施例70.RSK2のSer386自己リン酸化の阻害
方法。75cm2フラスコ(〜80%コンフルエント)中のHEK−293細胞は、製造業者のプロトコールに従ってLipofectamine 2000(Invitrogen)を使用して、HA−タグ化RSK2をコードするpMT2発現ベクターでトランスフェクトされた。12時間後、細胞はトリプシン処理され、10%血清を有するDMEM中で、ウェルあたり600,000細胞で、6ウェルプレートに播種された。さらに16時間後、細胞は4時間血清枯渇にされ、次いで、無血清DMEM中で2時間、示された濃度の阻害剤で処理された。阻害剤処理後、細胞はホルボールミリスチン酸アセタート(PMA)(100ng/ml)で30分間刺激され、次いで、2mL 冷PBSで洗浄され、そして−80℃でプレート上に凍結された。細胞は融解され、そしてプロテアーゼ阻害剤(Complete,Roche)およびホスファターゼ(Cocktail 1および2、Sigma−Aldrich)阻害剤を有する、80μLの溶解緩衝液(20mM Hepes pH 7.9、450mM NaCl、25%グリセロール、3mM MgCl2、0.5mM EDTA)にこすり取られた。溶解物は遠心分離によって清澄化され、Bradfordアッセイ定量を介して標準化された。Laemmliサンプル緩衝液が溶解物に加えられ、そしてタンパク質は10% SDS−PAGEによって分離され、ホスホ−Ser386RSK2抗体(1:500希釈、ウサギmAb、Cell Signaling #9335)および抗HA抗体(1:1000希釈、12CA5マウスモノクローナル、Roche)を用いるウェスタンブロットによって分析された。画像はLI−COR Odyssey画像化システム(LI−COR Biosciences)上で記録され、バンド強度はLI−CORソフトウェアを使用して積分された。各条件について、ホスホ−Ser386シグナル対HA−RSK2シグナルの比率が計算され、DMSO対照値のパーセンテージ(+PMA)として表現された。これらのデータはグラフ中に提示されている。
方法。75cm2フラスコ(〜80%コンフルエント)中のHEK−293細胞は、製造業者のプロトコールに従ってLipofectamine 2000(Invitrogen)を使用して、HA−タグ化RSK2をコードするpMT2発現ベクターでトランスフェクトされた。12時間後、細胞はトリプシン処理され、10%血清を有するDMEM中で、ウェルあたり600,000細胞で、6ウェルプレートに播種された。さらに16時間後、細胞は4時間血清枯渇にされ、次いで、無血清DMEM中で2時間、示された濃度の阻害剤で処理された。阻害剤処理後、細胞はホルボールミリスチン酸アセタート(PMA)(100ng/ml)で30分間刺激され、次いで、2mL 冷PBSで洗浄され、そして−80℃でプレート上に凍結された。細胞は融解され、そしてプロテアーゼ阻害剤(Complete,Roche)およびホスファターゼ(Cocktail 1および2、Sigma−Aldrich)阻害剤を有する、80μLの溶解緩衝液(20mM Hepes pH 7.9、450mM NaCl、25%グリセロール、3mM MgCl2、0.5mM EDTA)にこすり取られた。溶解物は遠心分離によって清澄化され、Bradfordアッセイ定量を介して標準化された。Laemmliサンプル緩衝液が溶解物に加えられ、そしてタンパク質は10% SDS−PAGEによって分離され、ホスホ−Ser386RSK2抗体(1:500希釈、ウサギmAb、Cell Signaling #9335)および抗HA抗体(1:1000希釈、12CA5マウスモノクローナル、Roche)を用いるウェスタンブロットによって分析された。画像はLI−COR Odyssey画像化システム(LI−COR Biosciences)上で記録され、バンド強度はLI−CORソフトウェアを使用して積分された。各条件について、ホスホ−Ser386シグナル対HA−RSK2シグナルの比率が計算され、DMSO対照値のパーセンテージ(+PMA)として表現された。これらのデータはグラフ中に提示されている。
結果。図6に描かれるように、シアノアクリラート5ならびにシアノアクリルアミド6および7は、哺乳動物細胞におけるRSK2のSer386自己リン酸化を阻害する。N−イソプロピルシアノアクリルアミド7が試験されたすべての阻害剤の中で最も強力であったのに対して(IC50<30nM)、シアノアクリルアミド6は弱い活性を有した(IC50〜1000nM)ことに注目のこと。データは、シアノアクリラート阻害剤およびシアノアクリルアミド阻害剤が細胞透過性であり、高い細胞内濃度のATPおよびグルタチオンと競合するために十分に強力であることを示す。
実施例71.治療的に関連するタンパク質の阻害のための活性化オレフィンの一般的な有用性の決定
方法。RSK2 キナーゼアッセイについては、上記の実施例64を参照のこと。全長ヒトT175A NEK2(「NEK2」と呼ばれる)は、以前に記載されたように(Knapp S.et al.J.Biol Chem.,2007,282:6833−6842)発現および精製された。NEK2のC22V変異体はQuikchange mutagenesis(Stratagene)によって生成され、キナーゼ活性アッセイにおいてNEK2とは区別できなかった。20mM Hepes、pH 7.6、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.2mg/mL BSA、および100μM ATP中のNEK2キナーゼ(60nM)は、室温で30分間、阻害剤(8−10通りの濃度、二連)と前保温された。キナーゼ反応は、0.4μCi/μLのγ−32P−ATP(6000Ci/mmol、NEN)および2.37mg/mL β−カゼイン(Sigma)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。
方法。RSK2 キナーゼアッセイについては、上記の実施例64を参照のこと。全長ヒトT175A NEK2(「NEK2」と呼ばれる)は、以前に記載されたように(Knapp S.et al.J.Biol Chem.,2007,282:6833−6842)発現および精製された。NEK2のC22V変異体はQuikchange mutagenesis(Stratagene)によって生成され、キナーゼ活性アッセイにおいてNEK2とは区別できなかった。20mM Hepes、pH 7.6、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.2mg/mL BSA、および100μM ATP中のNEK2キナーゼ(60nM)は、室温で30分間、阻害剤(8−10通りの濃度、二連)と前保温された。キナーゼ反応は、0.4μCi/μLのγ−32P−ATP(6000Ci/mmol、NEN)および2.37mg/mL β−カゼイン(Sigma)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。
20mM Hepes、pH 7.6、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.2mg/mL BSA、および100μM ATP中のヒトPLK1(Millipore,カタログ番号14−777M)(7.2nM)は、室温で30分間、阻害剤(8−10通りの濃度、二連)と前保温された。キナーゼ反応は、0.4μCi/μLのγ−32P−ATP(6000Ci/mmol、NEN)および0.5mg/mL 脱リン酸化α−カゼイン(Sigma)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。キナーゼ活性は、0.1% H3PO4中の1M NaClであらかじめ洗浄されたニトロセルロースの乾燥シートに5μLの各反応物をスポットすることによって決定された。各キナーゼ反応をブロットした後、このニトロセルロースシートは、1% AcOH溶液で1回洗浄された。キナーゼ活性は、0.1% H3PO4中の1M NaClであらかじめ洗浄されたニトロセルロースの乾燥シートに5μLの各反応物をスポットすることによって決定された。このニトロセルロースシートは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4中の1M NaCl溶液で2回(洗浄あたり5−10分間)洗浄された。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはSPOTプログラム(Knight,Z.et al.Nature Protocols,2,2459−66)を使用して定量され、そしてIC50値はGraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用して決定された。
結果。治療関連タンパク質の阻害のためのシステイン標的化部分としての、シアノアクリルアミドを含む活性化オレフィン(「マイケルアクセプター」)の一般的有用性を試験するために、本発明者らは、キナーゼ阻害薬物(例えば、アザインドール、インダゾール、ピリジン、ピラゾール、ビアリール)において共通して見い出される複素環で置換されたシアノアクリルアミドのパネルを合成した。本発明者らはまた、ニトリルを有する炭素上で置換されてなかったか(表2a、エントリー28および30)またはニトリルを有する炭素上で非カルボキサミド電子求引基で置換されたか(表2a、エントリー19−21、31、32)のいずれかであった、アクリロニトリルを合成した。これらの新規化合物は、以下のキナーゼ:WTRSK2、C436V RSK2、WT NEK2、C22V NEK2、および/またはPLK1をインビトロで阻害するそれらの能力について評価された。これらのキナーゼの野生型バージョンのすべてが、「グリシンリッチ」ループに対してすぐC末端である、ATP結合部位の類似の位置においてシステインを有することに注目のこと。
これらのデータから、本発明者らは、(1)複素環の構造を変化させることが、シアノアクリルアミドおよびアクリロニトリルのキナーゼ阻害強度および選択性に劇的に影響を与えると結論付ける。従って、これらの比較的単純な「フラグメント」(MW<300)さえ険しい構造−活性相関を示す。(2)ニトリルを有する炭素上の第2の電子求引基で置換されたアクリロニトリルは(例えば、カルボキサミド)、ニトリルを有する炭素上の水素を含有する単純なアクリロニトリルよりもより強力である(表2aにおけるエントリー30対31および22;表1におけるエントリー3対4−8を比較のこと)。(3)試験では、RSK2およびNEK2のCysからValへの変異体はWT酵素よりも10−100倍感受性が低く、これは、それぞれ、RSK2およびNEK2のCys436およびCys22の共有結合的修飾を含む阻害メカニズムと一致する。この概念は、表2aからの2種の異なるシアノアクリルアミドフラグメントに結合したRSK2のx線共結晶構造によってさらに支持された。この構造は、RSK2のCys436がシアノアクリルアミド部分の求電子性β−炭素と共有結合を形成することを明白に示す(図7を参照のこと)。
実施例72.RSK2 CTD ATP部位におけるX線結晶学および結合モデル
方法。RSK2 CTDは上記のように発現および精製され(図1Aおよび図1Bについての説明を参照のこと)、20mM HEPES pH 8.0、50mM NaCl中で20mg/mlまで濃縮された。次いで、シアノアクリルアミド6、12、または15(100% DMSO中の10mM ストック溶液1μl)が19μlのRSK2 CTDに加えられて、5% DMSO中の19mg/mlタンパク質および0.5mM 阻害剤を得た。次いで、1μlのタンパク質/阻害剤複合体を0.1M HEPES pH 7.0、10% PEG3350、50mM 硫酸アンモニウムから構成される1μlの沈殿溶液と20℃で混合することにより、複合体の結晶が懸滴中で成長された。典型的には、結晶は、1−2日間で最大寸法まで成長した。次いで、結晶は凍結防止溶液(LV Cryo Oil,Mitegen LLC,Ithaca,NY)に移され、100°Kの液体窒素の流れの中で凍結された。これらの結晶は空間群P41212に属し、単位セルパラメーターはa=47.5Å;b=47.5Å;c=291.5Åであった。すべてのデータセットは、Lawrence Berkeley National LaboratoryにおけるAdvanced Light Sourceの8.2.1ビームライン上で収集された。回折データは積分され、プログラムXDS(Kabsh、W.1993)でスケールが合わされた。RSK2 CTD/阻害剤複合体の構造は、2.4Å(シアノアクリルアミド6)、2.1Å(シアノアクリルアミド12)、および2.1Å(シアノアクリルアミド15)までのデータ、ならびにProtein Data Bank構造2qr8を、プログラムMolRep(Vagin et al.,1997)における検索モデルとして使用する分子置換によって解決し、続いて、数回ラウンドの手動の再構築と、プログラムCOOT(Emsley P、Cowtan K.,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.2004)およびREFMAC5(GN,Vagin AA,Dodson EJ.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.1997)を用いる拘束リファインメントを行った。
方法。RSK2 CTDは上記のように発現および精製され(図1Aおよび図1Bについての説明を参照のこと)、20mM HEPES pH 8.0、50mM NaCl中で20mg/mlまで濃縮された。次いで、シアノアクリルアミド6、12、または15(100% DMSO中の10mM ストック溶液1μl)が19μlのRSK2 CTDに加えられて、5% DMSO中の19mg/mlタンパク質および0.5mM 阻害剤を得た。次いで、1μlのタンパク質/阻害剤複合体を0.1M HEPES pH 7.0、10% PEG3350、50mM 硫酸アンモニウムから構成される1μlの沈殿溶液と20℃で混合することにより、複合体の結晶が懸滴中で成長された。典型的には、結晶は、1−2日間で最大寸法まで成長した。次いで、結晶は凍結防止溶液(LV Cryo Oil,Mitegen LLC,Ithaca,NY)に移され、100°Kの液体窒素の流れの中で凍結された。これらの結晶は空間群P41212に属し、単位セルパラメーターはa=47.5Å;b=47.5Å;c=291.5Åであった。すべてのデータセットは、Lawrence Berkeley National LaboratoryにおけるAdvanced Light Sourceの8.2.1ビームライン上で収集された。回折データは積分され、プログラムXDS(Kabsh、W.1993)でスケールが合わされた。RSK2 CTD/阻害剤複合体の構造は、2.4Å(シアノアクリルアミド6)、2.1Å(シアノアクリルアミド12)、および2.1Å(シアノアクリルアミド15)までのデータ、ならびにProtein Data Bank構造2qr8を、プログラムMolRep(Vagin et al.,1997)における検索モデルとして使用する分子置換によって解決し、続いて、数回ラウンドの手動の再構築と、プログラムCOOT(Emsley P、Cowtan K.,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.2004)およびREFMAC5(GN,Vagin AA,Dodson EJ.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.1997)を用いる拘束リファインメントを行った。
シアノアクリルアミドは、3つの異なるキナーゼ阻害剤骨格に付け足されたときに、RSK2 CTDのATP結合ポケットに結合し、Cys−436と共有結合を形成する。本発明者らは、3種のシアノアクリルアミド阻害剤:ピロロ−ピリミジン6(表1)、アザインドール12(表2)、およびインダゾール15(表2)に結合したRSK2 CTDの共結晶構造を解決した。これらの化合物は、RSK2キナーゼ活性の強力な阻害剤であり、そしてCys−436からValへの変異は、顕著な抵抗性を付与する(表1および表2)。6、12、および15の共結晶構造は、キナーゼ/阻害剤共結晶構造において典型的に観察される非共有結合性相互作用;例えば、阻害剤におけるヘテロ原子と、RSK2 Met−496のバックボーンNHの間の水素結合を明らかにする。各シアノアクリルアミド阻害剤について、Cys−436のチオールとシアノアクリルアミド部分のβ−炭素の間の共有結合は明確に見ることができる(図7、PyMolとの構造配位ファイルから作製)。表2に提示されたデータに加えて、図7に示される共結晶構造は、ニトリルを有する炭素上で電子求引基(例えば、カルボキサミド)で置換されるとき、アクリロニトリルが、活性部位システインとの可逆的共有結合を作る強力な阻害剤(ナノモル濃度親和性)を達成するために多様なキナーゼ結合骨格に付加できる、「ポータブル」システイン−標的化部分であるという概念を支持する。インダゾール化合物40の、RSK2のCys−436への結合は、図8の上のパネルに描かれている。
実施例73.cSrcのクローニング、タンパク質発現、精製、および結晶化
ニワトリcSrc(S345C変異体)のキナーゼドメインは、記載されたように発現および精製され(Blair et al.,Nat.Chem.Biol.,2007)、そして20mM Tris pH 7.5、100mM NaCl、1mM DTT、5%グリセロール中で3mg/mlまで濃縮された。タンパク質(3mg/mL)は、氷上で、2% DMSOを有する阻害剤(200μM)とともに10分間温置された。次いで、複合体の結晶は、1μlのタンパク質/阻害剤−複合体を、100mM MES、50mM NaOAc、2% PEG(4000)、pH 6.5から構成される1μlの沈殿溶液と20℃で混合することによって、懸滴中で成長された。典型的には、結晶は、薄層として、1−2日の間に最大寸法まで成長した。次いで、結晶は、25%グリセロールを補充した母液からなる凍結防止溶液に移され、100Kで液体窒素の流れの中で凍結された。
ニワトリcSrc(S345C変異体)のキナーゼドメインは、記載されたように発現および精製され(Blair et al.,Nat.Chem.Biol.,2007)、そして20mM Tris pH 7.5、100mM NaCl、1mM DTT、5%グリセロール中で3mg/mlまで濃縮された。タンパク質(3mg/mL)は、氷上で、2% DMSOを有する阻害剤(200μM)とともに10分間温置された。次いで、複合体の結晶は、1μlのタンパク質/阻害剤−複合体を、100mM MES、50mM NaOAc、2% PEG(4000)、pH 6.5から構成される1μlの沈殿溶液と20℃で混合することによって、懸滴中で成長された。典型的には、結晶は、薄層として、1−2日の間に最大寸法まで成長した。次いで、結晶は、25%グリセロールを補充した母液からなる凍結防止溶液に移され、100Kで液体窒素の流れの中で凍結された。
データ収集および構造解決。結晶は空間群P1に属し、単位セルパラメーターa=42.0Å;b=63.2Å;c=73.1Å;α=100.9o;β=90.8o;γ=90.0oを有した。すべてのデータセットは、Berkeley National LaboratoryにおけるAdvanced Light Sourceの8.2.1.beamline上で収集された。回折データは積分され、プログラムXDS(Kabsh、W.1993)でスケールを合わせた。cSRC/阻害剤複合体の構造は、2.3Åまでのデータおよび構造3en4をプログラムMolRepにおける検索モデルとして使用する分子置換によって解決され、続いて、数回の手動の再構築と、プログラムCOOTおよびREFMAC5を用いる拘束リファインメントを行った。ピロロピリミジン(pyrimdine)化合物55からcSrcのCys−345への結合は、図8の下のパネルに描かれている。
実施例74.cSrcキナーゼアッセイの一般的手順
野生型およびS345C変異体cSrcキナーゼドメインは、記載されたように発現および精製された(Blair et al.,Nat.Chem.Biol.,2007)。精製されたcSrcキナーゼ(2nM 最終濃度)は、200μM ATP、および1mg/mL BSAを有するキナーゼ反応緩衝液(20mM HEPES pH 7.4、10mM MgCl2 0.2mM EDTA)中で、阻害剤とともに(6または10通りの濃度、二連で)、室温で30分間、前保温された。キナーゼ反応は0.05μCi/μLのγ−32P−ATP(6000 Ci/mmol、NEN)および0.1mM 基質ペプチド(LEIYGEFKKK)(配列番号2)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。キナーゼ活性は、ホスホセルロースのシートに6μLの各反応物をスポットすることによって決定された。各ブロットは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4溶液で2回、そしてMeOHで1回洗浄された(洗浄あたり5−10分間)。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはImageQuant(v.5.2、Molecular Dynamics)を使用して定量され、GraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用してプロットされた。
野生型およびS345C変異体cSrcキナーゼドメインは、記載されたように発現および精製された(Blair et al.,Nat.Chem.Biol.,2007)。精製されたcSrcキナーゼ(2nM 最終濃度)は、200μM ATP、および1mg/mL BSAを有するキナーゼ反応緩衝液(20mM HEPES pH 7.4、10mM MgCl2 0.2mM EDTA)中で、阻害剤とともに(6または10通りの濃度、二連で)、室温で30分間、前保温された。キナーゼ反応は0.05μCi/μLのγ−32P−ATP(6000 Ci/mmol、NEN)および0.1mM 基質ペプチド(LEIYGEFKKK)(配列番号2)の添加によって開始され、室温で30分間温置された。キナーゼ活性は、ホスホセルロースのシートに6μLの各反応物をスポットすることによって決定された。各ブロットは、1% AcOH溶液で1回、0.1% H3PO4溶液で2回、そしてMeOHで1回洗浄された(洗浄あたり5−10分間)。乾燥されたブロットは、ストレージ蛍光スクリーンに30分間曝露され、そしてTyphoon imager(GE Life Sciences)によってスキャンされた。データはImageQuant(v.5.2、Molecular Dynamics)を使用して定量され、GraphPad Prism 4.0ソフトウェアを使用してプロットされた。
実施例75.2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)−3−(3−(3,4,5−トリメトキシフェニル)−1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例76.3−(ピリジン−3−イル)−1H−インダゾール−5−カルボアルデヒド
実施例77.2−シアノ−3−(3−(ピリジン−3−イル)−1H−インダゾール−5−イル)アクリルアミド
実施例78.(E)−3−(3−(4−アミノ−5−(4−フェノキシフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)フェニル)−2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アクリルアミド
実施例79.4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−カルボアルデヒド
実施例80.シアノアセトアミドおよびヘテロアリールアセトニトリルの合成
3−モルホリノ−3−オキソプロパンニトリル、2−シアノ−N−(2−(ジメチルアミノ)エチル)−N−メチルアセトアミド(Wang、K.;Nguyen、K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11、920−927)および2−シアノ−N−(1,3−ジヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アセトアミド(Santilli,A.A.;Osdene,T.S.J.Org.Chem.1964、29,2066−2068)は先に記載されたように合成された。
3−モルホリノ−3−オキソプロパンニトリル、2−シアノ−N−(2−(ジメチルアミノ)エチル)−N−メチルアセトアミド(Wang、K.;Nguyen、K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11、920−927)および2−シアノ−N−(1,3−ジヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アセトアミド(Santilli,A.A.;Osdene,T.S.J.Org.Chem.1964、29,2066−2068)は先に記載されたように合成された。
1.4−シアノメチルピリジン−1−オキシド
2.2−シアノ−N−(2−ヒドロキシエチル)−N−メチルアセトアミド
3.N−tert−ブチル−2−シアノアセトアミド
4.N−1−アダマンチル−2−シアノアセトアミド
5.1−シアノ−N−イソプロピルメタンスルホンアミド
6.アリル−2−(2−シアノアセトアミド)−2−メチルプロパノアート
0−5℃に冷却されたCH2Cl2(8mL)中のシアノ酢酸(500mg、5.88mmol、1.0当量)、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(3.1mL、17.6mmol、3.0当量)およびAib−アリルエステル(1.26g、8.82mmol、1.5当量)の溶液に、3分間にわたって、CH2Cl2(7mL)中のN,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(1.82g、8.82mmol、1.5当量)の溶液が加えられた。この反応混合物は0−5℃で40分間撹拌され、次いで大気温度まであたためられた。24時間後、この反応混合物はEtOAc(100mL)で希釈され、0.5M HCl(50mL)で洗浄され、そして有機相はセライトを通して濾過されて、沈殿された固形物を除去した。濾液はブライン(50mL)で洗浄され、乾燥され(Na2SO4)、そして濃縮されて、茶色固形物を与え、これはシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中50% EtOAc)によって精製されて、648mg(53%収率)のアリル−2−(2−シアノアセトアミド)−2−メチルプロパノアートを白色固形物として与えた。
7.2−シアノ−N’,N’−ジメチルアセトヒドラジド
8.2−シアノ−N−メトキシアセトアミド
9.2−(1H−ピラゾール−1−イル)アセトニトリル
10.2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)アセトニトリル
11.アゼチジン(X=H)シアノアセトアミド、および3−ヒドロキシアゼチジン(X=OH)シアノアセトアミド
エチルシアノアセタート(550mg、4.86mmol)およびアゼチジン塩酸塩(500mg)は196.5mg(33%収率)のアゼチジンシアノアセトアミドを与えた。
エチルシアノアセタート(469.4mg、4.15mmol)および3−ヒドロキシアゼチジン塩酸塩(500mg)は89mg(15%収率)のアゼチジンシアノアセトアミドを与えた。
実施例81.シアノアクリルアミドまたはヘテロアリールアクリロニトリルの合成
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(モルホリン−4−カルボニル)アクリロニトリル
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(ピリジン−4−イル)アクリロニトリル
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−N−tert−ブチル−2−シアノアクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−(2−(ジメチルアミノ)エチル)−N−メチルアクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−(2−ヒドロキシエチル)−N−メチルアクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−(1,3−ジヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(1H−1,2,4−トリアゾール−1−イル)アクリロニトリル
2−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−1−シアノ−N−イソプロピルエタンスルホンアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−N−(1−アダマンチル)−2−シアノアクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(4−メチルチアゾール−2−イル)アクリロニトリル
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(1H−ピラゾール−1−イル)アクリロニトリル
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)アクリロニトリル
アリル−2−(3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノアクリルアミド)−2−メチルプロパノアート
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(ピリジン−3−イル)アクリロニトリル
4−(2−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−1−シアノビニル)ピリジン 1−オキシド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N’,N’−ジメチルアクリロヒドラジド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−メトキシアクリルアミド
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N,N−ジメチルアクリルアミド
N,N−ジメチルシアノアセトアミド(Basheer,A.;Yamataka,H.;Ammal,S.C.;Rappoport,Z.J.Org.Chem.2007,72、5297−5312)から調製された。
N,N−ジメチルシアノアセトアミド(Basheer,A.;Yamataka,H.;Ammal,S.C.;Rappoport,Z.J.Org.Chem.2007,72、5297−5312)から調製された。
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アクリルアミド
2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アセトアミド(Santilli,A.A.;Osdene,T.S.J.Org.Chem.1964,29,2066−2068)から調製された。
2−シアノ−N−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)アセトアミド(Santilli,A.A.;Osdene,T.S.J.Org.Chem.1964,29,2066−2068)から調製された。
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N,N−ジエチルアクリルアミド
N,N−ジエチルシアノアセトアミド(Wang,K.;Nguyen,K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11,920−927)から調製された。
N,N−ジエチルシアノアセトアミド(Wang,K.;Nguyen,K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11,920−927)から調製された。
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(ピロリジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
N−(2−シアノアセチル)ピロリジン(Wang,K.;Nguyen,K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11,920−927)から調製された。
N−(2−シアノアセチル)ピロリジン(Wang,K.;Nguyen,K.;Huang,Y.;Domling,A.J.Comb.Chem.2009,11,920−927)から調製された。
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(アゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
(E)−3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−(4−メチルピペラジン−1−カルボニル)アクリロニトリル
N−(2−シアノアセチル)−N’−メチルピペラジン(Proenca,F.;Costa,M.Green Chem.2008,10,995−998)から調製された。
N−(2−シアノアセチル)−N’−メチルピペラジン(Proenca,F.;Costa,M.Green Chem.2008,10,995−998)から調製された。
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−シクロプロピルアクリルアミド
1−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2,2−ジフルオロエタノン
3−(4−アミノ−7−(3−ヒドロキシプロピル)−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−6−イル)−2−シアノ−N−イソプロピルプロパンアミド
実施例82.求電子性ニトリル−置換オレフィンへの可逆的チオール付加のためのアッセイ
0.75mLのDMSO−d6中のシアノアクリラートA(5.1mg、27.3μmol)の溶液に、PBS−d(0.25mL)中の400mM 2−メルカプトエタノール(BME)の溶液が加えられた。1H NMRによるこの反応混合物の分析は、チオール付加物Bへの>95%転換を示した。
出発シアノアクリラート対付加物の比率は、シアノアクリラートAの8.30ppmの診断ピークおよびチオエーテルBの4.52ppmの診断ピークの積分によって容易に決定できる。
シアノアクリラートA:
1H NMR (400 MHz, 3:1 v/v DMSO−d6:PBS−d):δ8.30(s, 1H)、7.91(m, 2H)、7.60−7.49(m, 3H)、3.78(s, 3H)。
1H NMR (400 MHz, 3:1 v/v DMSO−d6:PBS−d):δ8.30(s, 1H)、7.91(m, 2H)、7.60−7.49(m, 3H)、3.78(s, 3H)。
BMEの付加は以下の共鳴を有する付加物B(のジアステレオマーの約61:39混合物)の形成を引き起こす:
1H NMR (400 MHz, 3:1 v/v DMSO−d6:PBS−d): 7.41 (m, 1H), 7.35−7.28 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 3.64 (s, 3H, メジャーなジアステレオマー), 3.56 (s, 3H, マイナーなジアステレオマー), 3.46 (t, J = 6.3Hz, 2H, メジャーなジアステレオマー, 過剰なBMEについてのシグナルと重複), 3.38 (t, J = 6.7Hz, 2H, マイナーなジアステレオマー), 2.58−2.40 (m, 2H, 過剰なBMEについてのシグナルと重複)。チオール付加物の形成は、以下の実験によって実証されるように、可逆的であることが見い出された。
1H NMR (400 MHz, 3:1 v/v DMSO−d6:PBS−d): 7.41 (m, 1H), 7.35−7.28 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 3.64 (s, 3H, メジャーなジアステレオマー), 3.56 (s, 3H, マイナーなジアステレオマー), 3.46 (t, J = 6.3Hz, 2H, メジャーなジアステレオマー, 過剰なBMEについてのシグナルと重複), 3.38 (t, J = 6.7Hz, 2H, マイナーなジアステレオマー), 2.58−2.40 (m, 2H, 過剰なBMEについてのシグナルと重複)。チオール付加物の形成は、以下の実験によって実証されるように、可逆的であることが見い出された。
0.75mLのDMSO−d6中のシアノアクリラートA(17.1mg、91.4μmol)の溶液に、PBS−d(0.25mL)中の400mM BMEの溶液が加えられた。1H NMRによる反応混合物の分析は、85:15比率のチオール付加物B対出発シアノアクリラートAを示した。次いで、反応混合物は、900μLの3:1 v/v DMSO−d6:重水素置換PBSへの100μLの反応混合物の添加によって10倍希釈された。1H NMRによる溶液の分析は、53:47比率のチオール付加物B対出発シアノアクリラートAを示した;シアノアクリラートA対付加物Bの比率は、シアノアクリラートAについての診断ピーク8.30ppmおよびチオエーテルBについての診断ピーク4.52ppmの積分によって決定された(図9)。
実施例83.UV/可視光分光光度法によるチオール可逆性アッセイ
溶液C(PBS pH 7.4中200μM シアノアクリルアミド、対照)およびD(200μM シアノアクリルアミドプラスPBS pH 7.4中50mM BME)は、400nmにおけるシアノアクリルアミド吸収ピークをモニターすることにより、分光光度学的に分析された(Costar透明平底96ウェルプレート、各反応についてウェルあたり100μL)。このピークの消失(溶液D、図2)はBMEとの反応を示す。次いで、溶液Dは、10μLのアリコートを90μLのPBS(pH 7.4)またはPBS(pH 7.4)中50mM BMEのいずれかと混合することにより、10倍希釈された。溶液Cもまた、PBS(pH 7.4)中で10倍希釈され、これは吸収シグナルについての参照として使用された。PBSへの溶液Dの希釈は、400nmにおけるシアノアクリルアミド吸収の急速な回復(数秒以内)を生じ、BME−シアノアクリルアミド付加物の急速な逆転を示した。これらのデータは、上記のNMRアッセイと一貫している。300nmより上の波長において光を吸収する求電子剤(例えば、シアノアクリルアミド)については、NMRよりも分光光度学的アッセイが便利であり、高スループット形式(例えば、96ウェルプレート)でより容易に実施される。
上記の実施例は本発明を例証するために提供されるが、その範囲を限定するためではない。本発明の他の変形は当業者に容易に明白であり、添付の特許請求の範囲によって包含される。本明細書に引用されるすべての刊行物、データベース、Genbank配列、特許、および特許出願は参照により組み込まれる。
Claims (46)
- プロテインキナーゼを阻害する方法であって、前記プロテインキナーゼを、有効量の可逆的キナーゼ阻害剤と接触させること、および前記可逆的キナーゼ阻害剤を活性部位システイン残基に可逆的に結合させることによって、前記プロテインキナーゼを阻害することを含み、
ここで、前記可逆的キナーゼ阻害剤が化学式I:
ここで
R1は、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
L1は、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3R2)−、−C(O)O−、−S(O)n−、−O−、−N(L3R2)−、−P(O)(OL3R2)O−、−SO2N(L3R2)−、−P(O)(NL3R2)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
L2は、結合、−C(O)−、−C(O)N(L3AR2A)−、−C(O)O−、−S(O)t−、−O−、−N(L3AR2A)−、−P(O)(OL3AR2A)O−、−SO2N(L3AR2A)−、−P(O)(NL3AR2A)N−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
nおよびtは、独立して、0、1または2であり;
L3およびL3Aは、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、ここで、wは、0、1または2であり;
R2およびR2Aは、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
Eは電子求引基であり;
ここで、前記プロテインキナーゼが、変性されておらず、部分的に変性されており、または完全に変性されているときに、前記可逆的キナーゼ阻害剤は、前記プロテインキナーゼから測定可能に解離し;ならびに
L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、−L2−Eが−C(O)NH2ではない、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記可逆的キナーゼ阻害剤が化学式:
ここで、
Wは、−C(O)−または−S(O)2−であり;
zは0または1であり;
XはOまたはNであり、ここで、XがOであるならば、zは0であり;
R3およびR4は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここで、R3およびR4は、任意にXと一緒に結合されて、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成し;
L1、L4、およびL5は、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;ならびに
L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、R3およびR4の少なくとも1つが水素ではない、
方法。 - 請求項3に記載の方法であって、前記A環は5員環R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは6員環R31−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
R31は、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R33−置換もしくは非置換アルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R33−置換もしくは非置換シクロアルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R33−置換もしくは非置換アリール、またはR33−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R33は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R34−置換もしくは非置換アルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R34−置換もしくは非置換シクロアルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R34−置換もしくは非置換アリール、またはR34−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R34は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R35−置換もしくは非置換アルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R35−置換もしくは非置換シクロアルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R35−置換もしくは非置換アリール、またはR35−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R35は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項3に記載の方法であって、A環が、R31−置換もしくは非置換フリル、R31−置換もしくは非置換チエニル、R31−置換もしくは非置換ピロリル、R31−置換もしくは非置換イミダゾリル、R31−置換もしくは非置換ピラゾリル、R31−置換もしくは非置換オキサゾリル、R31−置換もしくは非置換イソオキサゾリル、R31−置換もしくは非置換チアゾリル、R31−置換もしくは非置換イソチアゾリル、R31−置換もしくは非置換トリアゾリル、R31−置換もしくは非置換オキサジアゾリル、R31−置換もしくは非置換ピリジル、R31−置換もしくは非置換ピリミジル、R31−置換もしくは非置換ピリダジニル、R31−置換もしくは非置換ピロリニル、R31−置換もしくは非置換ピラジニル、R31−置換もしくは非置換テトラゾリル、R31−置換もしくは非置換フラニル、R31−置換もしくは非置換ジヒドロチエノ−ピラゾリル、R31−置換もしくは非置換チアナフテニル、R31−置換もしくは非置換カルバゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾチエニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾフラニル、R31−置換もしくは非置換インドリル、R31−置換もしくは非置換キノリニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾトリアゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾチアゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾオキサゾリル、R31−置換もしくは非置換ベンゾイミダゾリル、R31−置換もしくは非置換イソキノリニル、R31−置換もしくは非置換イソインドリル、R31−置換もしくは非置換アクリジニル、R31−置換もしくは非置換ベンゾイサゾリルであり、
R31は、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R33−置換もしくは非置換アルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R33−置換もしくは非置換シクロアルキル、R33−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R33−置換もしくは非置換アリール、またはR33−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R33は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R34−置換もしくは非置換アルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R34−置換もしくは非置換シクロアルキル、R34−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R34−置換もしくは非置換アリール、またはR34−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R34は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R35−置換もしくは非置換アルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R35−置換もしくは非置換シクロアルキル、R35−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R35−置換もしくは非置換アリール、またはR35−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R35は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ここで
R1は、R7−置換もしくは非置換アルキル、R7−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R7−置換もしくは非置換シクロアルキル、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R7は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aであり;
L6は、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)m−、または−S(O)mNH−であり;
mは0、1、または2であり;
R7Aは、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R8は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R9−置換もしくは非置換アルキル、R9−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R9−置換もしくは非置換シクロアルキル、R9−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R9−置換もしくは非置換アリール、またはR9−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R9は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R10−置換もしくは非置換アルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R10−置換もしくは非置換シクロアルキル、R10−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R10−置換もしくは非置換アリール、またはR10−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R10は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ここで
L1は、結合、R11−置換もしくは非置換アルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R11−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R11−置換もしくは非置換アリーレン、またはR11−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
R11は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R12−置換もしくは非置換アルキル、R12−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R12−置換もしくは非置換シクロアルキル、R12−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R12−置換もしくは非置換アリール、またはR12−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R12は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R13−置換もしくは非置換アルキル、R13−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R13−置換もしくは非置換シクロアルキル、R13−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R13−置換もしくは非置換アリール、またはR13−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R13は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R14−置換もしくは非置換アルキル、R14−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R14−置換もしくは非置換シクロアルキル、R14−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R14−置換もしくは非置換アリール、またはR14−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R14は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ここで
R2は、水素、R15−置換もしくは非置換アルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R15−置換もしくは非置換シクロアルキル、R15−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R15−置換もしくは非置換アリール、またはR15−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R15は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R16−置換もしくは非置換アルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R16−置換もしくは非置換シクロアルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R16−置換もしくは非置換アリール、R16−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L7−R15Aであり;
L7は、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)y−、または−S(O)yNH−であり;
yは、0、1、または2であり;
R15Aは、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R16−置換もしくは非置換アルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R16−置換もしくは非置換シクロアルキル、R16−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R16−置換もしくは非置換アリール、R16−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R16は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R17−置換もしくは非置換アルキル、R17−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R17−置換もしくは非置換シクロアルキル、R17−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R17−置換もしくは非置換アリール、またはR17−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R17は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R18−置換もしくは非置換アルキル、R18−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R18−置換もしくは非置換シクロアルキル、R18−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R18−置換もしくは非置換アリール、またはR18−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R18は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項2に記載の方法であって、ここで
R4は、水素、R23A−置換もしくは非置換アルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R23A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R23A−置換もしくは非置換アリール、またはR23A−置換もしくは非置換ヘテロアリールである。ある実施形態において、R4およびR4Aは水素ではなく;
R23Aは、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24A−置換もしくは非置換アルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換アリール、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L7A−R24Bであり;
L7Aは、独立して、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)y’−、または−S(O)y’NH−であり;
y’は、0、1、または2であり;
R24Bは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24A−置換もしくは非置換アルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24A−置換もしくは非置換アリール、R24A−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R24Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R25A−置換もしくは非置換アルキル、R25A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R25A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R25A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R25A−置換もしくは非置換アリール、またはR25A−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R25Aは、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R26A−置換もしくは非置換アルキル、R26A−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R26A−置換もしくは非置換シクロアルキル、R26A−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R26A−置換もしくは非置換アリール、またはR26A−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R26Aは、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ここで
L2は、結合、R19−置換もしくは非置換アルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R19−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換アリーレン、またはR19−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
R19は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R20−置換もしくは非置換アルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R20−置換もしくは非置換シクロアルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R20−置換もしくは非置換アリール、またはR20−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R20は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R21−置換もしくは非置換アルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R21−置換もしくは非置換シクロアルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R21−置換もしくは非置換アリール、またはR21−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R21は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R22−置換もしくは非置換アルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R22−置換もしくは非置換シクロアルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R22−置換もしくは非置換アリール、またはR22−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R22は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項2に記載の方法であって、ここで
L5は、結合、R19−置換もしくは非置換アルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R19−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R19−置換もしくは非置換アリーレン、またはR19−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
R19は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R20−置換もしくは非置換アルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R20−置換もしくは非置換シクロアルキル、R20−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R20−置換もしくは非置換アリール、またはR20−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R20は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R21−置換もしくは非置換アルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R21−置換もしくは非置換シクロアルキル、R21−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R21−置換もしくは非置換アリール、またはR21−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R21は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R22−置換もしくは非置換アルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R22−置換もしくは非置換シクロアルキル、R22−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R22−置換もしくは非置換アリール、またはR22−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R22は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項2に記載の方法であって、ここで
R3は、水素、R23−置換もしくは非置換アルキル、R23−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R23−置換もしくは非置換シクロアルキル、R23−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R23−置換もしくは非置換アリール、またはR23−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R23は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24−置換もしくは非置換アルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24−置換もしくは非置換アリール、R24−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L8−R23A’であり;
L8は、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)p−、または−S(O)pNH−であり;
pは、0、1、または2であり;
R23A’は、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R24−置換もしくは非置換アルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R24−置換もしくは非置換シクロアルキル、R24−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R24−置換もしくは非置換アリール、R24−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R24は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R25−置換もしくは非置換アルキル、R25−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R25−置換もしくは非置換シクロアルキル、R25−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R25−置換もしくは非置換アリール、またはR25−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R25は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R26−置換もしくは非置換アルキル、R26−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R26−置換もしくは非置換シクロアルキル、R26−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R26−置換もしくは非置換アリール、またはR26−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R26は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ここで
L3は、結合、R27−置換もしくは非置換アルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、R27−置換もしくは非置換シクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、R27−置換もしくは非置換アリーレン、またはR27−置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
R27は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R28−置換もしくは非置換アルキル、R28−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R28−置換もしくは非置換シクロアルキル、R28−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R28−置換もしくは非置換アリール、またはR28−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R28は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R29−置換もしくは非置換アルキル、R29−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R29−置換もしくは非置換シクロアルキル、R29−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R29−置換もしくは非置換アリール、またはR29−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R29は、独立して、水素、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、R30−置換もしくは非置換アルキル、R30−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R30−置換もしくは非置換シクロアルキル、R30−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R30−置換もしくは非置換アリール、またはR30−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;および
R30は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、−CF3、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 請求項2に記載の方法であって、
ここで
R1は、R7−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換アリール、またはR7−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
L1、L4、およびL5は、独立して、結合であり;
R7は、独立して、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L4−R7Aであり;
L4は−C(O)−であり;
R7Aは、独立して、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R8は、独立して、−OHまたはR9−置換もしくは非置換アルキルであり;
R4は、水素またはR15−置換もしくは非置換アルキルであり;
R3は、水素またはR23−置換もしくは非置換アルキルであり;あるいは
R3およびR4は、任意に、Xと一緒に結合して4−7員ヘテロシクロアルキルを形成する
方法。 - R8が、独立して、−OHまたは非置換アルキルである、請求項15に記載の方法。
- XがNである、請求項15に記載の方法。
- XがOである、請求項15に記載の方法。
- R4がR15−置換もしくは非置換アルキルである、請求項18に記載の方法。
- 請求項9に記載の方法であって、
ここで
R1は、R7−置換フェニル、R7−置換6員ヘテロシクロアルキル、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールであり;
R7は、独立して、ハロゲン、−CN、−OH、−NH2、−COOH、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、またはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aであり;
R7Aは、独立して、R8−置換もしくは非置換シクロアルキル、R8−置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R8−置換もしくは非置換アリール、またはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
L6は、−O−、−C(O)−、−C(O)NH−、−S(O)m−、または−S(O)mNH−であり;
R8は、独立して、−OH、またはR9−置換もしくは非置換アルキルであり;および
mは、0、1、または2である、
方法。 - 請求項20に記載の方法であって、
ここで
R7は、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−L6−R7Aであり;
L6は−C(O)−であり;および
R7AはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
方法。 - 前記可逆的キナーゼ阻害剤が100nM未満の阻害定数で前記プロテインキナーゼを阻害する、請求項1から21の一項に記載の方法。
- 前記プロテインキナーゼが、Rsk、Nek、Mekk1、MSK1、またはPlkである、請求項1または22のいずれかに記載の方法。
- キナーゼ活性と関連する疾患を、処置の必要がある被験体において処置する方法であって、治療有効量の化学式(I):
ここで
R1は、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
L1およびL2は、独立して、結合、−C(O)N(L3R2)−、−C(O)O−、−S(O)n−、−O−、−S−、−N(L3R2)−、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
L3は、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;
R2は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
Eは電子求引基であり;
ここで、L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、R2およびR3の少なくとも1つは水素ではない、
方法。 - 前記疾患または障害が、癌、自己免疫、HIV感染、または炎症である、請求項24に記載の方法。
- 化学式:
ここで
Wは−C(O)−または−S(O)2−であり;
zは0または1であり;
XはOまたはNであり、ここで、XがOであるならば、zは0であり;
R1は、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり;
R3およびR4は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここで、R3およびR4は、Xと一緒に任意に結合されて、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成し;
L1、L4、およびL5は、独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり;および
ここで、L1が結合でありかつR1が(3−(4−アミノ−5−p−トリル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)プロパン−1−オール)−6−イルであるならば、R3およびR4の少なくとも1つは水素ではない、
化合物。 - XがNである、請求項26の化合物。
- 請求項27に記載の化合物であって、ここで
R1はR7−置換フェニルであり;
R7はR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは−L6−R7Aであり、ここで、L6は、−C(O)−であり、ならびにR7AはR8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
化合物。 - R3およびR4が水素である、請求項28に記載の化合物。
- R7が、R8−置換もしくは非置換プリニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換イミダゾリル、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換1H−インダゾリル、またはR8−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルである、請求項28に記載の化合物。
- 請求項28に記載の化合物であって、ここで
R7は、−L4−R7Aであり;および
R7Aは、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニルである、
化合物。 - 請求項27に記載の化合物であって、ここで
R1は、R7−置換6員ヘテロシクロアルキルであり;および
R7は、R8−置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
化合物。 - 請求項32に記載の化合物であって、ここで
R1は、R7−置換ピペリジンであり;および
R7は、R8−置換もしくは非置換プリニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換イミダゾリル、R8−置換もしくは非置換1H−ピロロ[2,3−b]ピリジニル、R8−置換もしくは非置換ピリミジニル、R8−置換もしくは非置換1H−インダゾリル、またはR8−置換もしくは非置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルである、
化合物。 - R3およびR4が水素である、請求項33に記載の化合物。
- 請求項27に記載の化合物であって、ここで
R1は、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールであり;
R7は、独立して、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリールであり;および
R8は、独立して、−OHまたは非置換アルキルである、
化合物。 - R1が、R7−置換もしくは非置換インダゾリル、またはR7−置換もしくは非置換7Hピロロ[2,3−d]ピリミジニルである、請求項35に記載の化合物。
- R3およびR4が水素である、請求項36に記載の化合物。
- 請求項36に記載の化合物であって、
ここで
R3が非置換アルキルであり;および
R4が水素である、
化合物。 - 請求項36に記載の化合物であって、
ここで、
R3がフェニルメチルであり;および
R4が水素である、
化合物。 - R3およびR4がNと結合されてR23−置換もしくは非置換ピロリジニルを形成する、請求項36に記載の化合物。
- XがOである、請求項26に記載の化合物。
- 請求項41に記載の化合物であって、ここで
R1は、R7−置換もしくは非置換6,5縮合環ヘテロアリール、またはR7−置換もしくは非置換5,6縮合環ヘテロアリールであり;
R7は、独立して、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、R8−置換もしくは非置換アリールであり;および
R8は、独立して、−OHまたは非置換アルキルであり;および
R3は、非置換アルキルである、
化合物。 - 請求項42に記載の化合物であって、
ここで
R1は、R7−置換7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジニルであって;および
R7は、−NH2、R8−置換もしくは非置換アルキル、またはR8−置換もしくは非置換フェニルである、
化合物。
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