JP2013208134A - Pet food with excellent antistress effect and palatability using peptide - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、抗ストレス作用と嗜好性向上効果を備え、熱安定性に優れたペットフード素
材、それを含有するペットフード、および愛玩動物用サプリメント、並びに愛玩動物のス
トレス軽減方法に関する。
The present invention relates to a pet food material that has an anti-stress action and a palatability improvement effect and is excellent in thermal stability, a pet food containing the pet food material, a supplement for pet animals, and a method for reducing stress in pet animals.
近年、犬や猫といった愛玩動物の社会的な存在意義が高まるにつれて飼育環境が著しく
変化しつつある。愛玩動物は家族同様に大切に扱われるようになる一方で、様々な新たな
ストレスにも曝されるようにもなってきている。たとえば、元来屋外で飼育されてきた動
物にとって室内で飼育されることは、それだけで非常に大きなストレスを受けることにな
る場合が多い。特に都会におけるマンションやアパートといった限られた室内空間は、多
くの動物にとっては厳しい生活環境である。散歩等で接する室外の環境も、都会では騒音
や大気汚染など多くのストレス要因が溢れている。さらに単身世帯の増加等により、愛玩
動物が飼い主と接する時間は限られ、散歩等の機会も少なくなりがちである。このような
ストレスの負荷は、犬や猫の食欲不振や自虐行為など健康を損ねる状態につながりやすく
、様々な疾病の誘因ともなっている。また、ストレスの蓄積により、無駄吠え、乱暴な行
動、不適切な排便など飼い主や周囲の人間を困らせる行動を起こす犬や猫も多く、飼い主
のストレス性疾患の発症などの健康問題や近隣住民との深刻なトラブルに発展する場合も
ある。
In recent years, the breeding environment has been changing remarkably as the social significance of pet animals such as dogs and cats has increased. While pets are treated as carefully as family members, they are also exposed to various new stresses. For example, for animals that were originally raised outdoors, raising them indoors often results in very great stress. In particular, limited indoor spaces such as apartments and apartments in urban areas are a severe living environment for many animals. There are many stress factors in the city, such as noise and air pollution, in the outdoor environment where you can walk. Furthermore, due to the increase in single-person households, the time for pets to contact their owners is limited, and opportunities for walking etc. tend to be reduced. Such stress load tends to lead to a state of health loss such as loss of appetite and masochism in dogs and cats, and is also an incentive to various diseases. There are also many dogs and cats that cause annoyance to their owners and surrounding people due to the accumulation of stress, such as wasteful barking, violent behavior, inappropriate defecation, etc. It can develop into serious troubles.
愛玩動物のストレスに係る問題に対処する方法の一つに、ストレスを軽減させる効果を
もつペットフードの給餌があげられる。たとえば、カゼイン（牛乳タンパク質）のトリプ
シン分解物にペットのストレスを改善する効果があることが示され、ペットのストレス軽
減用剤として提案されている〔特許文献１〕。しかし、この分解物には強い苦味や収斂味
があることから、ペットフードの素材として利用する場合には嗜好性を改善するために各
種エキス類や香料等を添加するなどの工夫が必須であるという欠点がある。その他、ペッ
トフードへのタンパク質分解物の添加では、大豆ペプチド分解物が知られているが、苦味
など嗜好性に問題がある〔特許文献２〕。
One of the methods for dealing with the problems related to the stress of pet animals is feeding of pet food having an effect of reducing stress. For example, a trypsin degradation product of casein (milk protein) has been shown to have an effect of improving pet stress, and has been proposed as an agent for reducing pet stress [Patent Document 1]. However, since this decomposed product has a strong bitter and astringent taste, in order to improve palatability when using it as a material for pet food, it is essential to add various extracts and fragrances. There is a drawback. In addition, soybean peptide degradation products are known in the addition of protein degradation products to pet food, but there are problems with palatability such as bitterness [Patent Document 2].
また、ギャバ（γ−アミノ酪酸）、ポリフェノール、カテキンなど人間の食品へ添加す
るために開発された抗ストレス食品素材がペットフードにも流用されているが、このよう
な素材の多くは犬や猫といった愛玩動物における抗ストレス作用のデータが欠如したまま
に利用されていたり、ペットフードに用いる素材としては嗜好性に問題があるものが多い
のが実情である。犬や猫は肉食動物を起源としており、マウス、ラット、ヒトといった雑
食性動物とは栄養生理特性や餌に対する嗜好が大きく異なる部分がある。特に猫は、現在
でも肉食動物としての特徴を明確に備えており、多量のタンパク質摂取に適した特有の消
化吸収機構を有している。また、犬や猫が曝されているストレス要因やストレス応答は、
他の動物（ヒト等）とは異質なものでもある。このようなことから、ペットフードに利用
する抗ストレス素材は、犬や猫の栄養生理特性や嗜好などを考慮して開発する必要がある
。特に嗜好性の低い素材をペットフード原料として配合した場合には、犬や猫の摂食量が
著しく少なくなってしまい、保健的機能の発現が期待できない以前に、ペットフードとし
ての市場価値が著しく損なわれてしまう。
In addition, anti-stress food materials developed for addition to human foods such as GABA (γ-aminobutyric acid), polyphenols, and catechins are also diverted to pet food, but many of these materials are dogs and cats. In fact, there are many materials that are used in the absence of data on anti-stress effects in pet animals, and that there are problems with palatability as materials used for pet food. Dogs and cats originate from carnivores, and there are parts that differ greatly in nutritional physiological characteristics and food preferences from omnivorous animals such as mice, rats, and humans. In particular, cats still have distinct characteristics as carnivores and have a unique digestion and absorption mechanism suitable for large amounts of protein intake. The stress factors and stress responses to which dogs and cats are exposed
It is also different from other animals (human etc.). For this reason, it is necessary to develop anti-stress materials used for pet food in consideration of nutritional physiological characteristics and preferences of dogs and cats. In particular, when ingredients with low palatability are formulated as pet food ingredients, the amount of food consumed by dogs and cats will be significantly reduced, and the market value of pet food will be significantly impaired before health functions can not be expected. It will be.
ところで、畜肉あるいは畜肉タンパク質をプロテアーゼ処理（分解）することにより、
生理活性ペプチドが生成することが、これまでに本発明者らにより報告されている〔非特
許文献１, ２，特許文献３、４〕。このようなペプチドとして、血圧降下ペプチド、抗酸
化ペプチド、抗疲労ペプチドなどがある。畜肉や魚肉中には非常に多くの種類のタンパク
質が存在するため、プロテアーゼ処理により様々なペプチドが生成することが期待される
が、抗ストレス作用を有するペプチドについての報告はない。
By the way, by processing (degrading) livestock meat or livestock protein,
It has been reported so far by the present inventors that a bioactive peptide is produced [
一方、本発明者らにより、豚肉ホモジネイトの乳酸菌発酵物やプロテアーゼ処理物のラ
ットへの経口投与が、ストレス性胃潰瘍の発症予防に有効であることが示され、ヒトの機
能性食品素材として利用する可能性が示唆されている〔特許文献５〕。しかし、愛玩動物
を対象とした抗ストレス作用の検討がこれまでに全く行われていないことや、肉食動物を
起源とする犬や猫に特有な栄養生理的な特性を鑑みた場合、その作用をマウスやラット等
の雑食性の実験動物を用いて得たデータからだけで予想することは非常に難しい。しかも
、上述のように犬や猫などのペットフードに利用する素材の開発には、犬や猫の嗜好を考
慮することが必要となる。また、魚肉タンパク質の分解物を検討対象とした報告例は見当
たらない。
On the other hand, the present inventors showed that oral administration of pork homogenate lactic acid bacteria fermented products and protease-treated products to rats is effective in preventing the development of stress gastric ulcer, and it is used as a functional food material for humans. The possibility is suggested [Patent Document 5]. However, the anti-stress effect on pet animals has not been studied so far, and in view of the nutritional and physiological characteristics peculiar to dogs and cats originating from carnivores, the effect is It is very difficult to predict from data obtained using omnivorous experimental animals such as mice and rats. In addition, as described above, it is necessary to consider the taste of dogs and cats in the development of materials used for pet food such as dogs and cats. In addition, there are no reports on the examination of fish protein degradation products.
さらに、ほとんどのペットフードの製造において実施されている高温加熱処理（１１０
〜１４０℃程度）は、ペットフードに利用する素材に高い熱安定性をも求めており、この
点からもヒトを対象とした食品素材とは異なるハードルが存在する。本発明者らによる検
討では、現在、食品やペットフードに利用されることが多いコラーゲンペプチドは、１２
０℃の加熱により著しく生理活性（スーパーオキシドイオン消去能など）が失われた（未
発表データ）。したがって、高温加熱処理を経て調製されるペットフードにペプチド性素
材を用いる場合、熱安定性に優れたものを選択する必要もある。
In addition, high temperature heat treatment (110
(About ~ 140 ° C) is also demanding high thermal stability for materials used for pet food, and there are hurdles different from food materials for humans. According to studies by the present inventors, collagen peptides that are often used in foods and pet foods are currently 12
Physiological activity (superoxide ion scavenging ability, etc.) was significantly lost by heating at 0 ° C. (unpublished data). Therefore, when using a peptide material in a pet food prepared through a high-temperature heat treatment, it is necessary to select one having excellent thermal stability.
かかる状況に鑑み、本発明の目的は、多くの犬や猫が苦しまされているストレスおよび
ストレスを原因とする疾病に係る諸問題の解決に有効であり、かつペットフードの価値を
決定する重要要因である嗜好性を損なわず（あるいは向上させ）、しかも高温加熱加工に
耐えうる熱安定性を備えたペットフード素材やペットフードを提供することにある。
In view of such circumstances, the object of the present invention is an important factor that determines the value of pet food, which is effective in solving various problems related to stress caused by many dogs and cats and diseases caused by stress. An object of the present invention is to provide a pet food material and pet food that do not impair (or improve) the palatability, and have heat stability that can withstand high-temperature heat processing.
上記の課題を解決すべく、本発明者らは、鋭意研究を進め、食肉や魚肉（タンパク質）
をプロテアーゼ（パパイン等）で処理（分解）して調製したペプチド含有物に、愛玩動物
における抗ストレス作用があることを見出した。さらに、このペプチド含有物はペットフ
ードの嗜好性を向上させる効果があると共に優れた熱安定性を有するため、ペットフード
素材として好適な特性を有することも見出し、本発明を完成するに至った。
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have conducted extensive research and have developed meat and fish meat (protein).
It was found that a peptide-containing product prepared by treating (degrading) with a protease (papain or the like) has an anti-stress effect in pet animals. Furthermore, since this peptide-containing substance has the effect of improving the palatability of pet food and has excellent thermal stability, it has also been found that it has characteristics suitable as a pet food material, and has completed the present invention.
すなわち、本発明は、畜肉または魚肉タンパク質を含む原料をプロテアーゼで処理する
ことにより得られ、アミノ酸残基２〜１０個からなるペプチドを主たる有効成分として含
有する、抗ストレス作用を示し、あわせて嗜好性向上効果をも備えた熱安定性に優れたペ
ットフード素材である。
That is, the present invention is obtained by treating a raw material containing animal meat or fish protein with a protease and contains a peptide consisting of 2 to 10 amino acid residues as a main active ingredient and exhibits an anti-stress effect and is also preferred. It is a pet food material with excellent heat stability and an effect of improving the performance.
このペットフード素材においては、上記アミノ酸残基２〜１０個からなるペプチドが疎
水性樹脂に吸着するものであるのが好ましい。また、使用するプロテアーゼとしてはパパ
インが好ましく、畜肉または魚肉が鶏肉または鰹肉であるのが好ましい。
In this pet food material, the peptide consisting of 2 to 10 amino acid residues is preferably adsorbed on a hydrophobic resin. Further, as the protease to be used, papain is preferable, and the livestock meat or fish meat is preferably chicken meat or salmon meat.
上記ペットフード素材は、ドッグフードまたはキャットフードに好適に使用できる。
また、本発明は、上記ペットフード素材を用いて製造したペットフードにも関する。こ
のペットフードとしてはドッグフードまたはキャットフードであるのが好ましい。これら
のペットフードは通常高温加熱処理を伴って製造される。
The pet food material can be suitably used for dog food or cat food.
Moreover, this invention relates also to the pet food manufactured using the said pet food raw material. The pet food is preferably dog food or cat food. These pet foods are usually manufactured with high temperature heat treatment.
さらに、本発明は、畜肉または魚肉タンパク質を含む原料をプロテアーゼで処理するこ
とにより得られ、アミノ酸残基２〜１０個からなるペプチドを主たる有効成分として含有
する、抗ストレス作用を示し、かつ嗜好性も向上した愛玩動物用サプリメントも提供する
。愛玩動物としてはイヌまたはネコであるのが好ましい。
Furthermore, the present invention is obtained by treating a raw material containing livestock meat or fish meat protein with a protease, contains a peptide consisting of 2 to 10 amino acid residues as a main active ingredient, exhibits an anti-stress action, and has palatability We also offer supplements for pet animals. The pet animal is preferably a dog or a cat.
また、本発明は、畜肉または魚肉タンパク質を含む原料をプロテアーゼで処理すること
により得られ、アミノ酸残基２〜１０個からなるペプチドを主たる有効成分として含有す
る組成物を投与することを特徴とする、愛玩動物のストレス軽減方法にも関する。
In addition, the present invention is characterized by administering a composition containing a peptide comprising 2 to 10 amino acid residues as a main active ingredient, which is obtained by treating a raw material containing animal meat or fish meat protein with a protease. It also relates to stress relief methods for pet animals.
本発明によると、犬や猫といった愛玩動物が曝されているストレスからの負担を軽減し
、ストレスに起因する疾病を予防あるいは治療する効果が大きく、かつペットフードの原
料として利用した場合に嗜好性を損なわず（あるいは向上させ）、高温加熱処理にも耐え
うる熱安定性を備えた安全なペットフード素材を提供することができる。この素材を用い
て製造したペットフードは、製造の際の高温加熱処理によっても、その抗ストレス性およ
び良好な嗜好性が損なわれることなく維持され、嗜好性についてはさらに向上する場合も
あるので、犬や猫といった愛玩動物に摂取させて抗ストレス作用を発揮させることができ
る。
According to the present invention, the burden from stress to which pet animals such as dogs and cats are exposed has a great effect of preventing or treating diseases caused by stress, and the palatability when used as a raw material for pet food. It is possible to provide a safe pet food material having thermal stability that can withstand high-temperature heat treatment without impairing (or improving). The pet food manufactured using this material is maintained without damaging its anti-stress property and good palatability even by high-temperature heat treatment during production, and the palatability may be further improved, It can be consumed by pets such as dogs and cats to exert anti-stress effects.
本発明のペットフード素材は、畜肉または魚肉を含む原料をプロテアーゼで処理して得
られるものであり、アミノ酸残基２〜１０個からなるペプチドを主たる有効成分とする熱
安定性に優れた素材である。
The pet food material of the present invention is obtained by treating a raw material containing livestock meat or fish meat with a protease, and is a material having excellent thermal stability with a peptide comprising 2 to 10 amino acid residues as a main active ingredient. is there.
上記畜肉や魚肉は、動物の筋肉を主要な構成成分とするもので、筋肉あるいは筋肉タン
パク質を含むものを調製用原料として用いることができる。用いる畜肉や魚肉は、入手の
しやすさなどから、鶏、豚、牛、鰹、鮪、鯵、鰯、鮭等が適しており、中でも安定した品
質の素材製品を調製しやすい鶏肉や鰹肉が好ましいが、これらの畜種や魚種に限定される
ものではない。さらに、本発明における畜肉は、鶏、鶉、鴨等の家禽類も含み、魚肉は、
筋肉を有する貝類等も含み、広く魚介類を指している。また、筋肉の部位や状態は、特に
限定されるものではなく、畜肉や魚肉の調製方法も、十分に筋肉タンパク質を含む材料が
得られるのであれば、任意の方法が使用できる。
The livestock meat and fish meat are mainly composed of animal muscles, and those containing muscles or muscle proteins can be used as raw materials for preparation. Chicken, pork, beef, salmon, salmon, salmon, salmon, salmon, etc. are suitable for livestock and fish to be used. Among them, chicken and salmon are easy to prepare stable quality products. However, it is not limited to these animal species and fish species. Furthermore, the livestock meat in the present invention includes poultry such as chickens, salmon and duck,
It includes shellfish with muscles, and refers to seafood widely. In addition, the muscle site and state are not particularly limited, and any method for preparing livestock meat or fish meat can be used as long as a material containing sufficient muscle protein can be obtained.
畜肉や魚肉の分解に用いるプロテアーゼは、特定のものに限定されるものではなく、筋
肉タンパク質を適度に分解するものであれば、種類は問わない。畜肉や魚肉のプロテアー
ゼ処理は、畜肉や魚肉を含む原料、例えば畜肉や魚肉を粉砕または磨砕したものにそのま
ま、あるいは加水して粉砕または磨砕により水懸濁液としたものに、プロテアーゼを添加
して行うことができる。プロテアーゼとしては、パパイン、ブロメライン、フィシン、α
‐キモトリプシン、サーモリシン、プロテイネースＫ、プロナーゼＥなどを好適に例示す
ることができるが、中でも、高い抗ストレス作用と嗜好性向上効果を兼ね備えた分解物を
得ることができる酵素としてパパインを用いることが特に好ましい。
The protease used for the decomposition of livestock meat and fish meat is not limited to a specific one, and any type can be used as long as it can decompose muscle protein appropriately. For protease treatment of livestock meat and fish meat, protease is added to raw materials containing livestock meat and fish meat, such as livestock meat or fish meat that has been crushed or ground, or added to water suspension by pulverization or grinding. Can be done. Proteases include papain, bromelain, ficin, α
-Chymotrypsin, thermolysin, proteinase K, pronase E and the like can be preferably exemplified, and among them, it is particularly preferable to use papain as an enzyme capable of obtaining a degradation product having both high anti-stress action and palatability improvement effect. preferable.
プロテアーゼを作用させる場合、温度、ｐＨ等を、それぞれのプロテアーゼの至適条件
に設定すると、速やかに分解物を得ることができるが、プロテアーゼの添加量や反応時間
によっても制御可能であるため、特定の条件に限定されるものではない。プロテアーゼに
より畜肉や魚肉を分解した後に、溶液を８５〜１００℃程度に加熱して、プロテアーゼ活
性を消失させることが好ましい。
When proteases are allowed to act, if the temperature, pH, etc. are set to the optimum conditions for each protease, degradation products can be obtained quickly, but it can also be controlled by the amount of protease added and the reaction time. It is not limited to the above conditions. After decomposing livestock meat or fish meat with a protease, it is preferable to heat the solution to about 85 to 100 ° C. to eliminate the protease activity.
プロテアーゼ活性消失後、懸濁液を、冷蔵・凍結など適切な保存方法を経た後にそのま
ま利用してもよいし、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥などの適当な方法により乾燥させ
、パウダー状に加工してもよい。乾燥・パウダー化させた素材は、長期間の貯蔵に適する
と共に、運搬・加工等においても扱いやすい形状である。
After disappearance of protease activity, the suspension may be used as it is after passing through an appropriate storage method such as refrigeration and freezing, or dried by a suitable method such as freeze drying, spray drying, drum drying, etc., and processed into a powder form May be. The dried and powdered material is suitable for long-term storage and is easy to handle in transportation and processing.
上記のようにして畜肉または魚肉をプロテアーゼで処理して得られる組成物（ペプチド
性素材）には、アミノ酸残基２〜１０個、好ましくはアミノ酸残基２〜５個からなるペプ
チドが主成分として含まれる。これらのペプチドは、オクタデシルシリルシリカゲルなど
の疎水性樹脂に吸着しうる、比較的疎水性の強いペプチドであるのが好ましい。
The composition (peptide material) obtained by treating livestock meat or fish meat with a protease as described above has a peptide comprising 2 to 10 amino acid residues, preferably 2 to 5 amino acid residues as a main component. included. These peptides are preferably relatively hydrophobic peptides that can be adsorbed to a hydrophobic resin such as octadecylsilyl silica gel.
このペプチド性素材より調製したペットフードは、犬および猫に対する抗ストレス作用
を示すことが実施例５において実証されている。具体的には、動物をストレス負荷環境に
おき、生体内のストレス指標を測定して、本発明ペットフード素材の抗ストレス性を確認
している。さらに、実施例７は本発明ペットフード素材の嗜好性向上効果を示している。
従って、この素材の抗ストレス作用および嗜好性は、高温加熱処理を経ても損なわれない
ことが明らかである。
It has been demonstrated in Example 5 that the pet food prepared from this peptide material exhibits an anti-stress effect on dogs and cats. Specifically, an animal is placed in a stress load environment, and a stress index in the living body is measured to confirm the anti-stress property of the pet food material of the present invention. Furthermore, Example 7 has shown the palatability improvement effect of this invention pet food material.
Therefore, it is clear that the anti-stress action and palatability of this material are not impaired even after high-temperature heat treatment.
畜肉や魚肉をプロテアーゼで処理して調製される、アミノ酸残基２〜１０個からなるペ
プチドを主成分とする組成物は、ペットフード素材としてペットフード（ドッグフード、
キャットフード）に添加し犬や猫などの愛玩動物に与えることができる。抗ストレス作用
や嗜好性向上効果を示すのに必要な添加量は、通常のペットフードの場合は０．１〜１０
重量％程度である。ただし、１回の摂取量が少ない特殊なペットフード、サプリメント、
医薬品の場合は、１０重量％以上の添加を行ってもよい。本発明の素材をペットフードに
添加する場合、本発明の効果が損なわれない範囲で、添加剤（ビタミン類、ミネラル類等
の栄養添加剤、甘味料、香料、色素等の呈味・矯臭剤・外観改善剤等）などを利用するこ
とができる。
A composition based on a peptide consisting of 2 to 10 amino acid residues, prepared by treating livestock meat or fish meat with a protease, is a pet food (dog food,
It can be added to cat food and given to pets such as dogs and cats. In the case of normal pet food, the addition amount necessary to show the anti-stress action and the palatability improvement effect is 0.1-10.
It is about wt%. However, special pet food, supplements,
In the case of a pharmaceutical product, 10% by weight or more may be added. When the material of the present invention is added to pet food, additives (nutritional additives such as vitamins and minerals, sweeteners, flavorings, pigments and other flavoring / flavoring agents are within the range where the effects of the present invention are not impaired.・ Appearance improving agents, etc.) can be used.
本発明のペプチド性ペットフード素材は、熱安定性に優れているため、適当なペットフ
ード等に添加・加工（混合、加熱等）する際に、生理活性や嗜好性に関して何ら問題を生
じない。この素材を利用してペットフードを製造する方法としては、ペットフード原料に
配合（添加あるいは混合）しても、また、製造されたペットフード表面に被覆してもよく
、特定の方法に限定されない。ペットフードを製造する場合に行われる加熱処理は、通常
高温で行われ、例えば、ドライフードの場合、エクスクルーダーでの加熱温度は１１０〜
１３５℃程度、その後の乾燥は１４０℃程度で行われる場合が多いが、このような処理に
よって本発明のペプチド性素材の生理作用を著しく損ねることはない。嗜好性向上効果の
観点からは、むしろ１２０℃前後の加熱処理を経ることにより、犬や猫にとって好ましい
香気がメイラード反応により形成される。このため、本発明の素材に嗜好性向上効果をよ
り多く期待する場合には、他の原料と混合した後の加熱時間を延長する等によりメイラー
ド反応を促進させる条件を設定することも推奨される。
Since the peptide-based pet food material of the present invention is excellent in thermal stability, there is no problem with respect to physiological activity and palatability when it is added and processed (mixed, heated, etc.) in an appropriate pet food or the like. As a method for producing a pet food using this material, it may be blended (added or mixed) with a pet food raw material or coated on the surface of the produced pet food, and is not limited to a specific method. . The heat treatment performed when producing pet food is usually performed at a high temperature. For example, in the case of dry food, the heating temperature in the excluder is 110 to 110.
In many cases, the drying is performed at about 135 ° C. and subsequent drying at about 140 ° C. However, such treatment does not significantly impair the physiological function of the peptide material of the present invention. From the viewpoint of improving palatability, rather, a fragrance preferable for dogs and cats is formed by the Maillard reaction through a heat treatment at around 120 ° C. For this reason, in the case of expecting more palatability improvement effects to the material of the present invention, it is also recommended to set conditions for promoting the Maillard reaction by extending the heating time after mixing with other raw materials. .
本発明のペットフード素材を利用するペットフードの種類としては特に制限されず、例
えば、現在市販のペットフードとして主流であるドライタイプやウェットタイプのドッグ
フードやキャットフード、ペット用各種飲料、ソーセージやペースト等のペット用練り製
品、ペット用スナック類などを挙げることができる。本発明におけるペットフードあるい
はペットフード素材は、各種ストレスによる問題の発生頻度や深刻さから、犬と猫に対し
て特に好適に使用できるが、犬猫以外のペット動物あるいは家畜や家禽に対して給餌する
こともできる。
The type of pet food using the pet food material of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include dry type and wet type dog food and cat food, pet beverages, sausages and pastes that are currently mainstream as commercially available pet food. Examples include pet kneaded products and pet snacks. The pet food or pet food material in the present invention can be used particularly preferably for dogs and cats due to the frequency and severity of problems caused by various stresses. You can also
さらに、畜肉や魚肉をプロテアーゼで処理して調製される、アミノ酸残基２〜１０個か
らなるペプチドを主成分とする組成物は、犬や猫などの愛玩動物のストレス軽減のための
サプリメントとして用いるのにも適している。サプリメントの場合でも、嗜好性が低いと
動物が十分に摂取せず効果が発揮できないため、嗜好性の向上が重要な要件となる。また
、この組成物は愛玩動物のストレス軽減のために医薬として使用することも期待できる。
Furthermore, a composition comprising as a main component a peptide consisting of 2 to 10 amino acid residues, which is prepared by treating livestock meat or fish meat with a protease, is used as a supplement for reducing stress in pets such as dogs and cats. Also suitable for. Even in the case of supplements, if the palatability is low, the animal is not sufficiently ingested and the effect cannot be exerted. Therefore, the improvement of palatability is an important requirement. Moreover, this composition can also be expected to be used as a medicament for reducing the stress of pet animals.
なお、本発明におけるストレスとは、特定のものに限定されるものではないが、具体的
な例として、運動不足、室内飼育、飼い主との接触不足、無理な躾、騒音、大気汚染、悪
臭、治療行為などのペットにとって不快な環境要因があげられる。また、このような環境
要因からのストレスは、生体内において活性酸素（あるいはフリーラジカル）の生成に伴
い酸化ストレスを生じさせる。酸化ストレスは細胞膜等の損傷をはじめとする生体防御シ
ステムの攪乱をもたらすことにより、精神的乱れや異常行動などを生じさせる。さらには
、数多くの疾病（たとえば、循環器疾患、消化器疾患、腎疾患、皮膚疾患、脳神経疾患、
糖尿病、呼吸器疾患、血液疾患、眼疾患）の誘因ともなる。従って、本発明におけるスト
レスとは、「酸化ストレス（フリーラジカル生成）の係る生体システムの攪乱を招くもの
」と言い換えることもできる。
The stress in the present invention is not limited to a specific one, but as specific examples, lack of exercise, indoor breeding, lack of contact with the owner, unreasonable drought, noise, air pollution, bad odor, Environmental factors that are uncomfortable for pets, such as treatment, are listed. In addition, stress from such environmental factors causes oxidative stress in association with the generation of active oxygen (or free radicals) in the living body. Oxidative stress causes mental disturbance and abnormal behavior by causing disturbance of the biological defense system including damage to cell membranes. In addition, many diseases (for example, cardiovascular diseases, gastrointestinal diseases, kidney diseases, skin diseases, cranial nerve diseases,
Diabetes, respiratory diseases, blood diseases, eye diseases). Therefore, the stress in the present invention can be rephrased as “what causes disturbance of a biological system related to oxidative stress (free radical generation)”.
以下、本発明を実施例で説明する。なお、以下の実施例は、本発明を説明するためにあ
げた例であり、これにより本発明を限定するものではない。
Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples. The following examples are given for the purpose of illustrating the present invention and are not intended to limit the present invention.
（畜肉あるいは魚肉を原料とするペプチド性素材の調製方法）
畜肉あるいは魚肉を原料として本発明のペプチド性素材を調製する際の過程の概略を図１
に示した。この実施例では、畜肉として鶏肉を、魚肉として鰹肉を利用した。鶏肉（ブロ
イラーのささみ肉）は脂肪や結合組織をできるだけ取り除いた後に細切し、ミンチを行い
やすいように加水した。ミンチによりほぼ均一になった肉懸濁液にプロテアーゼとしてパ
パイン（精製パパインＦＬ−３、アサヒフードアンドヘルスケア株式会社）を添加した（
０．２５〜１．５０重量％）。５０℃で１時間酵素反応を行った後、８５℃で１時間加熱
してパパインを失活させた。このときの加熱により生成した凝固塊を粉砕して、ある程度
均一な懸濁液とした後に、金属製メッシュで濾過することにより大きな粒子を除去した。
採取した濾液は、凍結乾燥（フリーズドライ）させた後に粉砕し、得られた粉末をペプチ
ド性素材とした。なお、乾燥工程はエアードライ法やドラムドライ法のような加熱乾燥法
によっても問題なく、特に大量に調製する場合には、コスト面において凍結乾燥法よりも
優れている。鰹肉を原料とした場合は、鰹節原料として利用される頭部や内臓等を除去し
た主として骨格筋よりなる部分（鰹節製造に利用される培燻前のもの、凍結貯蔵品）を用
いた。解凍後は、前述の鶏肉の場合と同様に処理を行った。
(Method for preparing peptidic material using livestock meat or fish meat)
The outline of the process when preparing the peptide material of the present invention using livestock meat or fish meat as a raw material is shown in FIG.
It was shown to. In this example, chicken meat was used as livestock meat and salmon meat as fish meat. Chicken (broiler fillet) was minced after removing as much fat and connective tissue as possible, and watered to facilitate mincing. Papain (purified papain FL-3, Asahi Food and Healthcare Co., Ltd.) was added as a protease to the meat suspension that became almost uniform by minced (
0.25 to 1.50% by weight). After the enzyme reaction at 50 ° C. for 1 hour, papain was inactivated by heating at 85 ° C. for 1 hour. The coagulated mass generated by heating at this time was pulverized into a uniform suspension to some extent, and then filtered through a metal mesh to remove large particles.
The collected filtrate was freeze-dried (freeze-dried) and then pulverized, and the resulting powder was used as a peptide material. In addition, the drying process has no problem even by a heat drying method such as an air drying method or a drum drying method, and is superior to the lyophilization method in terms of cost, particularly when a large amount is prepared. When bonito meat was used as a raw material, a portion mainly composed of skeletal muscles from which the head and internal organs used as raw materials for bonito were removed (before culturing used for bonito production, frozen storage) was used. After thawing, the treatment was performed in the same manner as the above chicken.
鶏肉および鰹肉を原料としてペプチド素材を前述の工程で調製する際に、プロテアーゼ
として用いたパパインの添加量とペプチド含量（生成量）の関係を検討した結果を表１に
示した。鶏肉の場合、パパイン添加量が０．５０〜１．００重量％程度でペプチド含量が
高く、鰹肉の場合、パパイン添加量が１．００〜１．２５％でペプチド含量が高かった。
この結果から、以下の検討（実施例）で用いるペプチド性素材の調製工程では、鶏肉原料
の場合はパパイン添加量を０．５０重量％とし、鰹肉原料の場合は１．００重量％とした
。なお、８５℃における１時間の加熱（パパイン失活条件）は、この素材の活性（スーパ
ーオキシドイオン消去能を指標とした抗酸化活性、測定方法は後述の実施例６に記載）に
ほとんど影響を及ぼさなかった。
Table 1 shows the results of examining the relationship between the added amount of papain used as a protease and the peptide content (production amount) when preparing a peptide material using chicken and salmon as raw materials in the above-described steps. In the case of chicken, the peptide content was high when the papain addition amount was about 0.50 to 1.00% by weight, and in the case of salmon meat, the peptide content was high when the papain addition amount was 1.00 to 1.25%.
From this result, in the preparation process of the peptidic material used in the following studies (Examples), the papain addition amount was 0.50% by weight in the case of chicken raw material, and 1.00% by weight in the case of raw meat raw material. . It should be noted that heating for 1 hour at 85 ° C. (papain deactivation conditions) has almost no effect on the activity of this material (antioxidant activity using superoxide ion scavenging ability as an index, measurement method described in Example 6 below). It did not reach.
（ペプチド性素材の経口投与によるラットのストレス性胃潰瘍の予防効果）
まず、ペプチド性素材の抗ストレス作用を実験動物レベルで検証するために、ラットを
用いたストレス性胃潰瘍発症試験を行った。供試動物にはＳＤ系７週齢雄ラット（日本ク
レア株式会社）を用いた。試験区のラットにはペプチド性素材（鶏肉あるいは鰹肉原料か
ら調製したもの、実施例１に記載した方法により調製）を経口投与し、対照区のラットに
は水あるいは未分解素材（パパイン無添加により調製した肉素材）を経口投与した。スト
レス性胃潰瘍発症試験は、１日１回、７日間、体重１００ｇあたり１ｍｌ（素材重量とし
て５ｍｇ）の試料をステンレス製胃ゾンデで強制的に経口投与し、最終投与後、２４時間
の絶食処理を行った。絶食後、それぞれのラットを水浸拘束ストレス試験用ケージに入れ
、ラットの首から上の部分が水面から出るように２０℃の水に浸した。この状態で２４時
間の水浸拘束ストレス負荷を行った後、それぞれのラットより胃を摘出・洗浄後、ホルマ
リンで固定した。水浸拘束ストレスを負荷することにより、ラットの胃にはストレス性胃
潰瘍が形成されるが、水浸拘束ストレスを負荷させていない健康なラットの胃には胃潰瘍
が観察されない。また、抗ストレス作用を有する試料を経口投与した場合には、ストレス
性胃潰瘍の形成が抑制される。
(Prevention of stressful gastric ulcer in rats by oral administration of peptide material)
First, in order to verify the anti-stress action of peptide materials at the experimental animal level, a stress gastric ulcer onset test using rats was conducted. SD test 7-week-old male rats (CLEA Japan, Inc.) were used as test animals. Rats in the test group were orally administered a peptide material (prepared from chicken or salmon raw material, prepared by the method described in Example 1), and water or undegraded material (without papain added) in the rats in the control group The meat material prepared by the above was orally administered. In the stress gastric ulcer onset test, a sample of 1 ml per 100 g of body weight (5 mg of material weight) is forcibly orally administered once a day for 7 days using a stainless steel gastric sonde, and then fasted for 24 hours after the final administration. went. After fasting, each rat was placed in a water immersion restraint stress test cage and immersed in water at 20 ° C. so that the upper part from the neck of the rat came out of the water surface. In this state, after 24 hours of water immersion restraint stress load, the stomach was removed from each rat, washed, and fixed with formalin. By applying water immersion restraint stress, a stressed gastric ulcer is formed in the stomach of the rat, but no gastric ulcer is observed in the stomach of a healthy rat not subjected to water immersion restraint stress. In addition, when a sample having an anti-stress action is orally administered, the formation of stress gastric ulcer is suppressed.
今回の試験で得られたホルマリン固定した胃壁に生じた潰瘍の総面積を測定した結果（
面積の相対比率）を図２（鶏肉を原料とするペプチド性素材）と図３（鰹肉を原料とする
ペプチド性素材）に示した。鶏肉あるいは鰹肉を原料として調製したペプチド性素材をラ
ットに経口投与することにより、ストレス性胃潰瘍形成の顕著な抑制が認められた。この
ことより、本発明で提案するペプチド性素材は、少なくともラットのような雑食性動物に
おいては抗ストレス作用を有するものと判断した。
Results of measuring the total area of ulcers in the formalin-fixed stomach wall obtained in this study (
The relative area ratios are shown in FIG. 2 (peptidic material using chicken meat as a raw material) and FIG. 3 (peptidic material using salmon meat as a raw material). A remarkable suppression of the formation of stress gastric ulcer was observed by orally administering to a rat a peptide material prepared from chicken or salmon. From this, it was judged that the peptide material proposed in the present invention has an anti-stress action in at least omnivorous animals such as rats.
（ペプチド性素材の経口投与がマウスの強制走行ストレス負荷に対して示す効果）
強制走行ストレス負荷に対して鶏肉を原料とするペプチド性素材の経口投与が示す効果
を検討した。ペプチド性素材を経口投与したマウスを強制走行させたときの走行時間の変
化（延長）により効果を判定した。マウスは５〜６週齢のＩＣＲ系雄（日本チャールズ・
リバー株式会社）を用いた。マウスの強制走行にはトレッドミルＭＫ−６８０Ｓ（室町機
械株式会社）を用い、走行面の傾斜を１５度とし、ベルト速度を２０ｍ／ｍｉｎとした。
ペプチド性素材等の試料を経口投与する前のマウスをトレッドミルで４時間強制走行させ
、ある程度の疲労状態にした後、ステンレス製胃ゾンデで試料溶液を経口投与した。経口
投与試料の容量は、マウス１匹あたり０．２ｍｌ（体重１００ｇあたり素材重量として５
ｍｇ）とした。試験区のマウスには鶏肉を原料とするペプチド性素材（実施例１に記載し
た方法により調製）を経口投与し、対照区のマウスには生理食塩水あるいは未分解素材（
パパイン無添加により調製した鶏肉素材）を経口投与した。経口投与の１５分後に強制走
行を再開し、マウスの走行時間を測定した。マウスが強制走行により疲労の限界に達して
走行を止め、５秒間以上トレッドミル走行面後部の電極に接触し続けた時点を走行終了と
みなした。なお、電極は電圧１００Ｖに設定し、マウスが疲労の限界まで走行し続けるよ
うにした。マウスは電極への接触（感電）を嫌うため、疲労程度が限界に達するまで走行
を続ける。
(Effect of oral administration of peptide material on forced running stress load in mice)
We examined the effects of oral administration of peptidic materials made from chicken on forced running stress. The effect was judged by the change (extension) of the running time when the mouse orally administered with the peptide material was forced to run. Mice are 5-6 weeks old ICR males (Nippon Charles
River Corporation) was used. A treadmill MK-680S (Muromachi Kikai Co., Ltd.) was used for forced running of the mouse, the inclination of the running surface was 15 degrees, and the belt speed was 20 m / min.
A mouse before oral administration of a sample such as a peptide material was forcibly run on a treadmill for 4 hours to bring it to a certain degree of fatigue, and then the sample solution was orally administered with a stainless gastric sonde. The volume of orally administered sample was 0.2 ml per mouse (5 material weight per 100 g body weight).
mg). Mice in the test group were orally administered with a peptide material made from chicken (prepared by the method described in Example 1), and mice in the control group were given saline or undegraded material (
Chicken material prepared without papain addition was orally administered. Forced running was resumed 15 minutes after oral administration, and the running time of the mice was measured. When the mouse reached the limit of fatigue due to forced running and stopped running, it was regarded as the end of running when the mouse continued to contact the electrode on the rear surface of the treadmill running for 5 seconds or more. The electrode was set at a voltage of 100 V so that the mouse continued to run to the limit of fatigue. Since the mouse dislikes contact with the electrode (electric shock), it keeps running until the fatigue level reaches its limit.
図４に示したように、鶏肉を原料とするペプチド性素材の経口投与は、マウスの走行時
間を顕著に延長させた。ペプチド性素材を経口投与されたマウスは、水を投与した対照群
の約２倍の時間を走行した。また、未分解素材には効果がなかったことから、ペプチド性
素材に含まれるペプチドによる効果であると考えられた。この実施例により、本発明のペ
プチド性素材は、少なくともマウスのような雑食性動物では強制走行ストレス負荷による
疲労発現を軽減する作用が、あるものと判断した。
As shown in FIG. 4, oral administration of a peptide material made from chicken as a raw material significantly extended the running time of mice. Mice that were orally administered the peptide material ran about twice as long as the control group that received water. Moreover, since there was no effect in the undegraded material, it was thought that it was an effect by the peptide contained in the peptide material. According to this example, it was determined that the peptide material of the present invention has an action of reducing fatigue caused by forced running stress load at least in omnivorous animals such as mice.
（ペプチド性素材の経口投与がラットに対して示す血圧調節作用）
ストレスの負荷により動物の血圧が上昇することが知られており、高血圧症の発症には
ストレスが密接な係りをもっている。そこで、自然発症高血圧ラットを用いて、本発明の
ペプチド性素材の経口投与が血圧調節作用を示すかを検討した。
(Blood pressure regulating effect of oral administration of peptide material on rats)
It is known that the blood pressure of animals increases due to stress, and stress is closely related to the development of hypertension. Thus, it was examined whether oral administration of the peptide material of the present invention exhibits blood pressure regulating action using spontaneously hypertensive rats.
鶏肉を原料とするペプチド性素材（実施例１に記載した方法により調製）を、自然発症
高血圧ラット（日本チャールズ・リバー株式会社、１群１０匹、１５〜２０週齢雄）にス
テンレス製胃ゾンデを用いて経口投与した。試料（ペプチド性素材および未分解素材）の
投与量は、ラット体重１００ｇあたり５ｍｇとし、投与容量は１匹あたり１ｍｌとした。
なお、同量（１ｍｌ）の水を経口投与したものを対照群とした。胃ゾンデによる経口投与
を行った後の尾動脈の血圧（収縮期圧）値を測定し、投与直前の最高血圧値を減じた値を
算出して、血圧変動値とした。血圧の測定は、非観血式血圧測定装置ＢＰ−９８Ａ（株式
会社ソフトロン）を用い、テイル・カフ（tail cuff ）法により行った。
Peptide material made from chicken as a raw material (prepared by the method described in Example 1) was applied to a spontaneously hypertensive rat (Nippon Charles River Co., Ltd., 10 animals per group, 15-20 week old male) with a stainless gastric sonde. Was administered orally. The dose of the sample (peptidic material and undegraded material) was 5 mg per 100 g of rat body weight, and the dose volume was 1 ml per animal.
A control group was orally administered with the same amount (1 ml) of water. The blood pressure (systolic pressure) value of the tail artery after oral administration with a gastric sonde was measured, and the value obtained by subtracting the maximum blood pressure value just before administration was calculated to obtain the blood pressure fluctuation value. The blood pressure was measured by a tail cuff method using a non-invasive blood pressure measuring device BP-98A (Softlon Co., Ltd.).
鶏肉を原料とするペプチド性素材を自然発症高血圧ラットに経口投与した後の、経時的
な血圧（収縮期圧）の変化を見た結果を図５に示した。ペプチド性素材を投与した群では
、２〜８時間後にかけての血圧降下が認められた。このような血圧変化は水投与群や未分
解素材投与群では認められなかったことから、ペプチド性素材に含まれるペプチドには、
少なくともラットのような雑食性動物においては血圧調節（降下）作用があるものと判断
した。なお、鰹肉を原料とするペプチド性素材にも同様の血圧降下作用が認められた。
FIG. 5 shows the results of changes in blood pressure (systolic pressure) over time after oral administration of a peptide material made from chicken as a raw material to spontaneously hypertensive rats. In the group to which the peptide material was administered, a decrease in blood pressure was observed after 2 to 8 hours. Since such a blood pressure change was not observed in the water administration group and the undegraded material administration group, the peptide contained in the peptide material includes
At least omnivorous animals such as rats were judged to have blood pressure regulating (lowering) effects. In addition, the same blood pressure lowering effect was recognized also in the peptide material which uses salmon meat as a raw material.
（ペプチド性素材を配合したペットフードの給餌の犬や猫に対する抗ストレス作用）
鶏肉を原料としたペプチド性素材あるいは未分解の鶏肉素材（それぞれ、実施例１に記
載した方法により調製）をペットフード基本原料に１０％配合した。なお、ドッグフード
の基本原料組成は、穀類（とうもろこし、小麦粉）６０．８０％、糟糠類（グルテンフィ
ード、ふすま、ビートパルプ）４．５０％、魚介類（フィッシュミール）５．００％、肉
類（チキンミール）１０．００％、豆類（脱脂大豆）５．５０％、植物性タンパク質（グ
ルテンミール）５．５０％、ビタミン類０．３０％、ミネラル類１．４０％、エキス類１
．５０％、油脂類（牛脂）５．５０％とした。また、キャットフードの基本原料組成は、
穀類（とうもろこし、小麦粉、米粉）５２．８５％、魚介類（フィッシュミール）１２．
４０％、肉類（チキンミール）１０．００％、植物性タンパク質（グルテンミール）１４
．００％、ビタミン類０．５０％、ミネラル類１．９０％、エキス類２．５０％、油脂類
（牛脂）５．００％、その他（ビール酵母、オリゴ糖、タウリン、メチオニン）０．８５
％とした。それぞれの素材（鶏肉を原料とするペプチド性素材あるいは未分解の鶏肉素材
）を基本原料に配合した後、粉砕・混合し、加水したものをエクスクルーダー（加熱加圧
押出機）により押出成形（１１０℃、３０秒間）し、乾燥（１４０℃、１５分間）してペ
レット（ドライタイプのペットフード）を調製した。
(Anti-stress effect on dogs and cats fed with pet food containing peptide materials)
Peptide material made from chicken as a raw material or undegraded chicken material (each prepared by the method described in Example 1) was blended in a pet food basic material by 10%. The basic ingredients of dog food are 60.80% cereals (corn, flour), 4.50% potatoes (gluten feed, bran, beet pulp), 5.00% seafood (fishmeal), meat (chicken) (Meal) 10.00%, beans (defatted soybean) 5.50%, vegetable protein (gluten meal) 5.50%, vitamins 0.30%, minerals 1.40%, extracts 1
. 50%, fats and oils (beef tallow) 5.50%. The basic raw material composition of cat food is
Cereals (corn, wheat flour, rice flour) 52.85%, seafood (fish meal) 12.
40%, meat (chicken meal) 10.00%, vegetable protein (gluten meal) 14
. 00%, vitamins 0.50%, minerals 1.90%, extracts 2.50%, fats and oils (beef tallow) 5.00%, others (beer yeast, oligosaccharides, taurine, methionine) 0.85
%. Each material (peptidic material made from chicken or undegraded chicken material) is blended into the basic material, then pulverized, mixed, and extruded with an excluder (heated pressure extruder) ( 110 ° C. for 30 seconds and dried (140 ° C. for 15 minutes) to prepare pellets (dry type pet food).
ペプチド性素材を配合したドッグフード（配合群）あるいは未分解の鶏肉素材を配合し
たドッグフード（無配合群）をケージ飼い（ストレス負荷環境）のビーグル犬に５日間給
餌（１日１頭あたり２８０ｇ）した。給餌期間終了後に血液を採取し、生体内におけるス
トレス指標として血清ヒドロペルオキシド値と血清乳酸値を測定した。ヒドロペルオキシ
ド値の測定にはフリーラジカル評価システムＦＲＥＥ（株式会社ウイスマー研究所）を用
い、乳酸値の測定には血中乳酸測定器ラクテートプロＬＴ−１７１０（アークレイ株式会
社）を用いた。その結果を図６と図７に示した。鶏肉を原料とするペプチド性素材を配合
したドッグフードを摂取した犬は、いずれのストレス指標も低下していた。このことから
、本発明の素材はラット（実施例２、４）やマウス（実施例３）とは異なる栄養生理特性
を有する肉食動物を起源とする犬に対しても抗ストレス作用を示すことが確認された。ま
た、押出成形と乾燥時の高温加熱処理（１１０℃、３０秒間 ＋ １４０℃、１５分間）
を経て調製したドッグフードを用いた結果であることから、本発明によるペプチド性素材
はドッグフード原料として配合した場合、熱安定性に優れていることも判明した。
Dog food mixed with peptidic material (mixed group) or dog food mixed with undegraded chicken material (non-mixed group) was fed to beagle dogs in caged (stressed environment) for 5 days (280 g per head per day) . Blood was collected after the feeding period, and serum hydroperoxide and serum lactic acid levels were measured as stress indicators in vivo. A free radical evaluation system FREE (Whismer Laboratories Inc.) was used for the measurement of hydroperoxide value, and a blood lactate measuring instrument lactate pro LT-1710 (Arkray Co., Ltd.) was used for the measurement of lactic acid level. The results are shown in FIG. 6 and FIG. Dogs that ingested a dog food containing a peptidic material made from chicken had lower stress indices. Therefore, the material of the present invention can exhibit an anti-stress effect even on dogs originating from carnivores having different nutritional physiological characteristics from rats (Examples 2 and 4) and mice (Example 3). confirmed. Also, high temperature heat treatment during extrusion and drying (110 ° C, 30 seconds + 140 ° C, 15 minutes)
It was also found that the peptide material according to the present invention was excellent in thermal stability when blended as a dog food material.
同様に、ペプチド性素材を配合したキャットフード（配合群）あるいは未分解の鶏肉素
材を配合したキャットフード（無配合群）をケージ飼い（ストレス負荷環境）の雑種猫に
５日間給餌（１日１頭あたり８０ｇ）した。給餌期間終了後に血液を採取し、血清ヒドロ
ペルオキシド値を測定した。その結果を図８に示した。鶏肉を原料とするペプチド性素材
を配合したキャットフードを摂取した猫は、ストレス指標が低下していた。このことから
、本発明の素材は肉食動物としての特性を強く示す猫に対しても抗ストレス作用を示すこ
とが確認された。また、ドッグフードと同様に、押出成形と乾燥時の高温加熱処理（１１
０℃、３０秒間 ＋ １４０℃、１５分間）を経て調製したキャットフードを用いた結果
であることから、本発明によるペプチド性素材はキャットフード原料として配合した場合
、熱安定性に優れていることも判明した。
Similarly, cat food mixed with peptide material (mixed group) or cat food mixed with undegraded chicken material (non-mixed group) was fed to caged cat (stressed environment) mixed cats for 5 days (per day per animal) 80 g). Blood was collected after the feeding period and serum hydroperoxide levels were measured. The results are shown in FIG. Cats that ingested cat food containing peptide ingredients made from chicken had lower stress indices. From this, it was confirmed that the material of the present invention exhibits an anti-stress effect even on cats that strongly show characteristics as carnivores. Similarly to dog food, high temperature heat treatment during extrusion and drying (11
From the results of using cat food prepared through 0 ° C., 30 seconds + 140 ° C., 15 minutes), the peptide material according to the present invention was also found to have excellent thermal stability when formulated as a cat food material. did.
（ペプチド性素材に含まれる有効成分の性質）
本発明のペプチド性素材に含まれる抗ストレス作用を示すペプチドには多様なものがあ
ると考えられるが、重要なものとして抗酸化ペプチドと血圧調節ペプチドがあげられる。
そこで、抗ストレス作用のin vitroの指標として抗酸化活性（スーパーオキシドイオン消
去能）と血圧降下作用（アンジオテンシンＩ変換酵素阻害活性、以下ＡＣＥ阻害活性とす
る）を採用して、検討を行った。
(Properties of active ingredients contained in peptidic materials)
It is considered that there are a variety of peptides exhibiting an anti-stress action contained in the peptide material of the present invention, and important ones include antioxidant peptides and blood pressure regulating peptides.
Therefore, studies were carried out by adopting antioxidant activity (superoxide ion scavenging ability) and blood pressure lowering action (angiotensin I converting enzyme inhibitory activity, hereinafter referred to as ACE inhibitory activity) as in vitro indicators of antistress action.
抗酸化活性の測定には、スーパーオキシドイオンを化学発光法によって定量する方法を
用いた。ペプチド等の測定試料の存在下でヒポキサンチンにキサンチンオキシダーゼを反
応させ、スーパーオキシドイオンを生成させ、これに発光試薬である２−メチル−６−ｐ
−メトキシフェニルエチニルイミダゾピラノジン（ＭＰＥＣ、アトー株式会社）を反応さ
せ、発光量をルミネッセンサーＡＢ−２２００（アトー株式会社）で測定した。以下の式
により、抗酸化活性を算出した。抗酸化活性（％）＝（対照の測定値−試料の測定値）÷
対照の測定値×１００
ＡＣＥ阻害活性の測定は、合成基質である馬尿酸−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシン（シ
グマ社）を用いてＡＣＥが基質の末端を選択的に切断することを利用し、遊離する馬尿酸
を比色定量して行った。以下の式により、ＡＣＥ阻害活性を算出した。ＡＣＥ阻害活性（
％）＝（対照の吸光度−試料の吸光度）÷（対照の吸光度−反応前の吸光度）×１００
ペプチド性素材を疎水性樹脂（ワコーシル４０Ｃ１８、和光純薬株式会社製）を用いて
分画（バッチ法）を行った。すなわち、ペプチド性素材を蒸留水に溶かし、不溶性部分を
遠心分離により除去したものを疎水性樹脂と激しく攪拌し、疎水性樹脂に吸着する画分と
吸着しない画分に分けた。両者のスーパーオキシドイオン消去能とＡＣＥ阻害活性を測定
したところ、樹脂に吸着した疎水性の比較的強いペプチドを含む画分に大部分の活性が回
収された。この画分を凍結乾燥し、５〜６週齢のＩＣＲ系雄マウス（日本チャールズ・リ
バー株式会社）にステンレス製胃ゾンデを用いて経口投与したところ、血清ヒドロペルオ
キシド（ストレスマーカー）値が低下したことから、この疎水性の比較的強いペプチドが
含まれる画分に抗ストレス作用を示すペプチドが回収されていることが確認された。
For the measurement of the antioxidant activity, a method of quantifying superoxide ions by a chemiluminescence method was used. In the presence of a measurement sample such as a peptide, hypoxanthine is reacted with xanthine oxidase to produce superoxide ions, which are then luminescent reagent 2-methyl-6-p.
-Methoxyphenylethynylimidazopyranodine (MPEC, Ato Co., Ltd.) was reacted, and the amount of luminescence was measured with a luminescence sensor AB-2200 (Ato Co., Ltd.). Antioxidant activity was calculated by the following formula. Antioxidant activity (%) = (control value-sample value) ÷
Control measurement x 100
The ACE inhibitory activity was measured by utilizing the synthetic substrate hippuric acid-L-histidyl-L-leucine (Sigma) to selectively cleave the ends of the substrate, and to compare the released hippuric acid. The color determination was performed. The ACE inhibitory activity was calculated according to the following formula. ACE inhibitory activity (
%) = (Absorbance of control−absorbance of sample) ÷ (absorbance of control−absorbance before reaction) × 100
The peptide material was fractionated (batch method) using a hydrophobic resin (Wakosil 40C18, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). That is, the peptide material was dissolved in distilled water and the insoluble part was removed by centrifugation, and the mixture was vigorously stirred with the hydrophobic resin to separate the fraction adsorbed on the hydrophobic resin and the fraction not adsorbed. When both superoxide ion scavenging ability and ACE inhibitory activity were measured, most of the activity was recovered in the fraction containing a relatively hydrophobic peptide adsorbed on the resin. When this fraction was freeze-dried and orally administered to 5-6 week-old ICR male mice (Nippon Charles River Co., Ltd.) using a stainless steel gastric sonde, the serum hydroperoxide (stress marker) level decreased. From this, it was confirmed that peptides exhibiting anti-stress action were recovered in the fraction containing the relatively strong hydrophobic peptides.
前述の疎水性樹脂により粗精製したペプチド画分を、さらにゲル濾過クロマトグラフィ
ー（Poly HYDROXYETHYL A 200 x 9.4mm カラム、Poly LC Inc 社）やエタノール沈殿法に
よる分画に供したところ、アミノ酸残基２〜１０個程度からなるペプチドを主要成分とす
る画分に大部分の抗酸化活性とＡＣＥ阻害活性が回収された。この画分をマウスに経口投
与したところ、血清ヒドロペルオキシド値が低下した。
The peptide fraction roughly purified by the hydrophobic resin described above was further subjected to fractionation by gel filtration chromatography (Poly HYDROXYETHYL A 200 x 9.4 mm column, Poly LC Inc) or ethanol precipitation. As a result,
前述の疎水性樹脂を用いて粗精製したペプチドを含む画分から、逆相高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）により、活性ペプチドの精製を試みた。装置には島津製作所社製
ＬＣ−ＶＰシステムを用い、逆相カラムにはXBridge C18 （4.6 x 150mm 、Waters社）お
よびAtlantis C18（4.6 x 150mm 、Waters社）を利用した。逆相ＨＰＬＣを組み合わせた
精製により、多くの抗酸化ペプチドおよびＡＣＥ阻害ペプチドの存在が示唆されたが、表
２に例示するようなアミノ酸残基２〜５個から成るペプチドが同定された。ペプチドの同
定には、プロテインシークエンサーＰＰＳＱ−３１Ａ（株式会社島津製作所）および質量
分析装置ＱＰ８０００α（株式会社島津製作所）を用いた。なお、ペプチド素材中には、
抗酸化ペプチドやＡＣＥ阻害ペプチドおよびその他の生理活性ペプチドが非常に多く存在
することが示唆されており、ペプチド性素材の有する抗ストレス作用は、表２にあげたも
のによってのみ発現するものではない。
From the fraction containing the peptide roughly purified using the above-mentioned hydrophobic resin, purification of the active peptide was attempted by reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC). An LC-VP system manufactured by Shimadzu Corporation was used for the apparatus, and XBridge C18 (4.6 × 150 mm, Waters) and Atlantis C18 (4.6 × 150 mm, Waters) were used for the reverse phase column. Purification combined with reverse phase HPLC suggested the presence of many antioxidant and ACE inhibitory peptides, but peptides consisting of 2-5 amino acid residues as illustrated in Table 2 were identified. For the peptide identification, a protein sequencer PPSQ-31A (Shimadzu Corporation) and a mass spectrometer QP8000α (Shimadzu Corporation) were used. In the peptide material,
It has been suggested that there are very many antioxidant peptides, ACE inhibitory peptides and other physiologically active peptides, and the antistress action of peptidic materials is not expressed only by those listed in Table 2.
（ペプチド性素材の配合によるペットフードの嗜好性向上効果）
ペットフードの品質を評価する因子として嗜好性はきわめて重要である。ペットが摂取
を拒めば、優れた保健的作用を備えたペットフードであっても、市場性はきわめて低くな
る。また、ペットが喜んでペットフードを摂取する姿に飼い主も強い満足感を示し、購入
行動に結びつく。代表的な愛玩動物である犬や猫のうち、特に猫は嗜好性にうるさい動物
であることが知られている。そこで、ここでは猫を用いて、ペプチド性素材を配合したペ
ットフードの嗜好性を検討した。
(Effect of improving the taste of pet food by blending peptide materials)
Preference is extremely important as a factor for evaluating the quality of pet food. If pets refuse to eat, even pet foods with excellent health benefits will be very poor in marketability. In addition, owners are very satisfied with their pets happily consuming pet food, leading to purchase behavior. Among dogs and cats that are typical pet animals, it is known that cats are particularly noisy animals. Therefore, here, cats were used to study the palatability of pet foods containing peptide materials.
鶏肉あるいは鰹肉を原料としたペプチド性素材あるいは未分解の鶏肉あるいは鰹肉素材
（それぞれ、実施例１に記載した方法により調製）をキャットフード基本原料（実施例５
に記載したもの）に１０％配合した。素材を基本原料に配合した後、粉砕・混合し、加水
したものをエクスクルーダー（加熱加圧押出機）により押出成形（１１０℃、３０秒間）
し、乾燥（１４０℃、１５分間）してペレット（ドライタイプのキャットフード）を調製
した。
Peptide material made from chicken or shark meat as raw material or undegraded chicken or shark meat material (prepared by the method described in Example 1 respectively) as a cat food basic material (Example 5)
10%). After blending the raw material with the basic material, pulverized and mixed, and then extruding it with an excluder (heated and pressurized extruder) (110 ° C, 30 seconds)
And dried (140 ° C., 15 minutes) to prepare pellets (dry type cat food).
嗜好性試験は２点比較法（採食量比較試験）により実施した。すなわち、２種類の試験
フードを１００ｇずつ別の給餌用容器に入れてケージ内に設置した後に猫に給餌を開始さ
せ、２４時間後のフード重量（食べ残し量）を計量することにより、採食量を求めた。図
９にその結果を示した。鶏肉あるいは鰹肉を原料とするペプチド性素材の配合は、いずれ
もキャットフードの嗜好性を損ねることはなかった。
The palatability test was carried out by a two-point comparison method (food intake comparison test). In other words, 100g each of the two types of test foods are placed in separate feeding containers and placed in a cage, then the cat is fed and weighs the food weight (leftover food) after 24 hours. Asked. The results are shown in FIG. None of the blending of the peptide material made from chicken or shark meat did not impair the palatability of the cat food.
また、ペットフードを与えた場合、「食い付き」の良さは飼い主に喜ばれる重要な特性
である。前述の採食量比較試験の実施と同様にして、２種類の試験フードを並べて猫に給
餌を開始した場合に、どちらのフードを最初に食べ始めるか（食い付きの良さ）を見た。
図１０にその結果を示した。ペプチド性素材を配合したキャットフードは、鶏肉原料と鰹
肉原料のいずれも対照フード（未分解素材配合フード）と比較して顕著に食い付きが良く
、大部分の猫はペプチド性素材を配合したフードから採食を開始した。この結果から、本
発明のペットフード素材は、嗜好性の面からも優れたペットフード素材となることが示さ
れた。また、押出成形と乾燥時の高温加熱処理（１１０℃、３０秒間 ＋ １４０℃、１
５分間）を経て調製したキャットフードを用いた結果であることから、本発明によるペプ
チド性素材はキャットフードに配合した場合、嗜好性向上効果を示すうえにおいても熱安
定性に優れていることが判明した。
In addition, when pet food is given, good eating is an important characteristic that is appreciated by the owner. In the same manner as in the above-mentioned foraging comparison test, when two kinds of test foods were arranged side by side and feeding of the cat was started, which food was first started to eat (good bite) was observed.
FIG. 10 shows the result. Cat food blended with peptidic material is significantly better than both control and non-degradable foods, and most cats are mixed with peptidic ingredients. I started foraging. From these results, it was shown that the pet food material of the present invention is an excellent pet food material from the viewpoint of palatability. Also, high temperature heat treatment during extrusion and drying (110 ° C, 30 seconds + 140 ° C, 1
It was found that the peptide-based material according to the present invention was excellent in thermal stability in showing the effect of improving palatability when blended in the cat food, because it was a result of using cat food prepared through 5 minutes). .
飼い主が新たなペットフードを購入し、それまでに給餌していたペットフードから切り
替える場合に、ペットが新しいフードをすぐに受け入れない場合がある。そこで、フード
を切り替えた場合の採食量の変化を観察し、フード切り替え時におけるペプチド性素材を
配合したフードが問題なく受け入れられるかを検討した。
When an owner purchases new pet food and switches from the pet food he was previously feeding, the pet may not immediately accept the new food. Therefore, the change in the amount of food intake when the food was switched was observed, and it was examined whether a food containing a peptide material at the time of switching the food could be accepted without any problem.
鶏肉を原料とするペプチド性素材を配合したキャットフードは、前述の嗜好性試験に用
いたものを利用した。実施例５に記載した基本原料のみからなるキャットフードを給餌し
て飼育を続けた猫１０匹のフードをペプチド性素材を１０％配合したフードに切り替え、
食べ残し量の変化を見た。給餌量は、１日１匹あたり８０ｇとした。切り替え前後それぞ
れ４日間の食べ残したフード量を測定した結果を表３に示した。切り替え前４日間の食べ
残し量の平均（１日あたり）は１２．６ｇであったのに対し、ペプチド性素材を配合した
フードに切り替えた後４日間の平均は３．０ｇとなった。すなわち、食べ残し量は、フー
ド切り替え後に減少しており、猫が切り替え後の新しいフードを問題なく受け入れたもの
と判断した。
The cat food blended with the peptide material made from chicken was used as the cat food used in the palatability test. Switching the food of 10 cats fed with cat food consisting only of the basic ingredients described in Example 5 and continued to breed to a food containing 10% peptide material,
I saw a change in the amount of leftovers. The amount of feeding was 80 g per animal per day. Table 3 shows the results of measuring the amount of food left over for 4 days before and after switching. The average amount of leftovers (per day) for 4 days before switching was 12.6 g, whereas the average for 4 days after switching to a food containing a peptide material was 3.0 g. That is, the amount of leftover food decreased after the food was switched, and it was determined that the cat accepted the new food after the switch without any problem.
なお、同様のフード切り替えによる影響を見る試験を犬においても実施したが、ドッグ
フード切り替え前後のいずれの時点においても、ほとんどの犬が給餌したフード（１日１
頭あたり２８０ｇ）を完食したため、食べ残し量に差を認めることはできなかった。しか
し、これにより、本発明のペプチド性素材をドッグフードに配合しても嗜好性が損なわれ
ることはないことが確認された。
In addition, although the test which sees the influence by the same food switching was implemented also in the dog, food which most dogs fed at any time before and after the dog food switching (1 day a day)
Since 280 g) per head was completed, no difference was observed in the amount of leftovers. However, this confirmed that palatability was not impaired even when the peptide material of the present invention was blended with dog food.
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