JP2013153736A - ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子 - Google Patents

Abstract

【課題】 本発明は、容易且つ効率よく製造方法が可能であり、遺伝子の発現を抑制可能な新たな核酸分子の提供を目的とする。
【解決手段】 標的遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含む一本鎖核酸分子であって、領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結され、前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的であり、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、前記発現抑制配列を含み、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ペプチド構造を含むことを特徴とする分子とする。この一本鎖核酸分子によれば、前記標的遺伝子の発現を抑制できる。
【選択図】 図１

Description

本発明は、遺伝子発現を抑制する一本鎖核酸分子に関し、より詳細には、ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子、それを含む組成物およびその用途に関する。

遺伝子の発現を抑制する技術として、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）が知られている（非特許文献１）。ＲＮＡ干渉による遺伝子の発現抑制は、例えば、短い二本鎖のＲＮＡ分子を細胞等に投与することによって、実施されるのが一般的である。前記二本鎖のＲＮＡ分子は、通常、ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）と呼ばれる。この他に、環状のＲＮＡ分子であって、分子内アニールにより、部分的に二重鎖を形成したＲＮＡ分子によっても、遺伝子の発現が抑制できることが報告されている（特許文献１）。

Ｆｉｒｅら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９８ Ｆｅｂ １９；３９１（６６６９）：８０６−１１

米国公開公報２００４−０５８８８６

しかしながら、前記各手法では、遺伝子の発現抑制を誘導するＲＮＡ分子は、以下のような問題がある。

まず、前記ｓｉＲＮＡを製造する場合、センス鎖およびアンチセンス鎖を別々に合成した上で、最後にこれらの鎖をハイブリダイズする工程が必要である。このため、製造効率が悪いという問題がある。また、前記ｓｉＲＮＡを細胞に投与する際、一本鎖ＲＮＡへの解離を抑制した状態で、細胞に投与する必要があるため、その取り扱い条件の設定にも労力を要する。つぎに、環状のＲＮＡ分子の場合、その合成が困難という問題がある。

また、これらのＲＮＡ分子は、基本的にヌクレオチド残基から構成されている。そして、前記ＲＮＡ分子に、なんらかの機能や標識を付与する場合、例えば、ヌクレオチド残基の構成要素である、塩基、糖残基またはリン酸基に修飾を施すしかないのが現状である。このため、ＲＮＡ干渉を利用した医薬品等の開発において、遺伝子発現の抑制機能を維持した状態で、さらなる機能や標識を付与するための改変が、極めて困難である。

そこで、本発明は、容易且つ効率よく製造方法が可能であり、遺伝子の発現を抑制可能な新たな核酸分子の提供を目的とする。

前記目的を達成するために、本発明の核酸分子は、標的遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含む一本鎖核酸分子であって、領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結され、前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的であり、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、前記発現抑制配列を含み、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ペプチド構造を含むことを特徴とする。

本発明の第１の組成物は、標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする。

本発明の第２の組成物は、薬学的組成物であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする。

本発明の発現抑制方法は、標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする。

本発明の発現誘導方法は、標的遺伝子の発現を抑制するＲＮＡ干渉を誘導する方法であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする。

本発明の疾患の治療方法は、前記本発明の一本鎖核酸分子を、患者に投与する工程を含み、前記一本鎖核酸分子が、前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。

本発明の一本鎖核酸分子は、遺伝子の発現抑制が可能であり、かつ、環状ではないため、その合成が容易であり、また、一本鎖であるため、二本鎖のアニール工程が無く、効率良く製造可能である。また、前記リンカー領域が前記非ヌクレオチド残基を含むため、例えば、従来のようなヌクレオチド残基の改変に限られず、例えば、前記リンカー領域における修飾等の改変も可能となる。

なお、本発明の一本鎖核酸分子の構造が、遺伝子の発現を抑制可能であることを見出したのは、本発明者が初めてである。本発明の一本鎖核酸分子の遺伝子の発現抑制効果は、ＲＮＡ干渉と同様の現象によるものと推測されるが、本発明における遺伝子発現抑制は、ＲＮＡ干渉に制限および限定されない。

本発明の一本鎖核酸分子の一例を示す模式図である。 本発明の一本鎖核酸分子のその他の例を示す模式図である。 本発明の一本鎖核酸分子のその他の例を示す模式図である。 図４は、本発明の実施例におけるＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。 図５は、参考例で使用したｓｓＲＮＡを示す図である。 図６は、参考例におけるＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。 図７は、参考例におけるＴＧＦ−β１遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。 図８は、参考例におけるＬＡＭＡ遺伝子の発現量の相対値を示すグラフである。 図９は、参考例におけるＬＭＮＡ遺伝子の発現量の相対値を示すグラフである。 図１０は、参考例で使用したｓｓＲＮＡを示す図である。 図１１は、参考例におけるＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。

本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。

１．ｓｓＰＮ分子
本発明の一本鎖核酸分子は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含む一本鎖核酸分子であって、領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結され、前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的であり、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、前記発現抑制配列を含み、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ペプチド構造を含むことを特徴とする。

本発明において、「標的遺伝子の発現抑制」は、例えば、前記標的遺伝子の発現を阻害することを意味する。前記抑制のメカニズムは、特に制限されず、例えば、ダウンレギュレーションまたはサイレンシングでもよい。前記標的遺伝子の発現抑制は、例えば、前記標的遺伝子からの転写産物の生成量の減少、前記転写産物の活性の減少、前記標的遺伝子からの翻訳産物の生成量の減少、または前記翻訳産物の活性の減少等によって確認できる。前記タンパク質は、例えば、成熟タンパク質、または、プロセシングもしくは翻訳後修飾を受ける前の前駆体タンパク質等があげられる。

本発明の一本鎖核酸分子は、以下、本発明の「ｓｓＰＮ分子」ともいう。本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、標的遺伝子の発現抑制に使用できることから、「標的遺伝子の発現抑制用ｓｓＰＮ分子」または「標的遺伝子の発現抑制剤」ともいう。また、本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、ＲＮＡ干渉により、前記標的遺伝子の発現を抑制できることから、「ＲＮＡ干渉用ｓｓＮＰ分子」、「ＲＮＡ干渉誘導用ｓｓＰＮ分子」または「ＲＮＡ干渉剤もしくはＲＮＡ干渉誘導剤」ともいう。また、本発明は、例えば、インターフェロン誘導等の副作用を抑制できる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、その５’末端と３’末端とが未連結であり、線状一本鎖核酸分子ということもできる。

本発明のｓｓＰＮ分子において、前記発現抑制配列は、例えば、本発明のｓｓＰＮ分子が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞内に導入された場合に、前記標的遺伝子の発現を抑制する活性を示す配列である。前記発現抑制配列は、特に制限されず、目的の標的遺伝子の種類に応じて、適宜設定できる。前記発現抑制配列は、例えば、ｓｉＲＮＡによるＲＮＡ干渉に関与する配列を適宜適用できる。ＲＮＡ干渉は、一般に、長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が、細胞内において、Ｄｉｃｅｒにより、３’末端が突出した１９〜２１塩基対程度の二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ：ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）に切断され、その一方の一本鎖ＲＮＡが標的ｍＲＮＡに結合して、前記ｍＲＮＡ分解することにより、前記ｍＲＮＡの翻訳を抑制する現象である。前記標的ｍＲＮＡに結合する前記ｓｉＲＮＡにおける一本鎖ＲＮＡの配列は、例えば、標的遺伝子の種類に応じて様々な種類が報告されている。本発明は、例えば、前記ｓｉＲＮＡの一本鎖ＲＮＡの配列を、前記発現抑制配列として使用できる。

なお、本発明は、前記標的遺伝子に対する前記発現抑制配列の配列情報がポイントではなく、前記発現抑制配列による前記標的遺伝子の発現抑制活性を、例えば、細胞内で機能させるための核酸分子の構造に関する。したがって、本発明においては、例えば、出願時において公知となっている前記ｓｉＲＮＡの一本鎖ＲＮＡ配列の他、将来的に明らかとなる配列に関しても、前記発現抑制配列として利用できる。

前記発現抑制配列は、例えば、前記標的遺伝子の所定領域に対して、９０％以上の相補性を有していることが好ましく、より好ましくは９５％であり、さらに好ましくは９８％であり、特に好ましくは１００％である。このような相補性を満たすことにより、例えば、オフターゲットを十分に軽減できる。

具体例として、標的遺伝子がＧＡＰＤＨ遺伝子の場合、前記発現抑制配列は、例えば、配列番号５に示す１９塩基長の配列が使用できる。標的遺伝子がＴＧＦ−β１の場合、前記発現抑制配列は、例えば、配列番号１７に示す２１塩基長の配列が使用でき、標的遺伝子がＬＡＭＡ１遺伝子の場合、前記発現抑制配列は、例えば、配列番号１８に示す１９塩基長の配列が使用でき、標的遺伝子がＬＭＮＡ遺伝子の場合、例えば、配列番号１９に示す１９塩基長の配列が使用できる。
５’−GUUGUCAUACUUCUCAUGG−３’ （配列番号５）
５’−AAAGUCAAUGUACAGCUGCUU−３’ （配列番号１７）
５’−AUUGUAACGAGACAAACAC−３’ （配列番号１８）
５’−UUGCGCUUUUUGGUGACGC−３’ （配列番号１９）

本発明のｓｓＰＮ分子による前記標的遺伝子の発現の抑制は、例えば、ＲＮＡ干渉が生じることによると推測される。なお、本発明は、このメカニズムにより限定されない。本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、いわゆるｓｉＲＮＡのように、二本の一本鎖ＲＮＡからなるｄｓＲＮＡとして、細胞等へ導入するものではなく、また、細胞内において、前記発現抑制配列の切り出しは、必ずしも必須ではない。このため、本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、ＲＮＡ干渉様の機能を有するということもできる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、生体内におけるインターフェロン誘導等の副作用を抑制でき、ヌクレアーゼ耐性に優れる。

前記リンカー領域は、例えば、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基のみを含んでもよいし、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基と、ヌクレオチド残基とを含んでもよい。

前記リンカー領域において、前記「ペプチド構造」は、特に限定されないが、例えば、下記式（ＩＡ）で表される原子団である。

前記式（ＩＡ）中、例えば、
Ｘ^１は、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり、
原子団Ａは、任意であり、ただし、ペプチド結合を含むものとする。前記ペプチド結合は、１でも複数でも良く、各ペプチド結合は、それぞれ、酸アミド結合でも、酸イミド結合でも良い。

本発明のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる。

前記式（Ｉ）中、例えば、
Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、それぞれ、−ＯＲ^１−または−ＯＲ^２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合し、
ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
Ｐｅは、ペプチド結合を含む任意の原子団であり、ただし、下記式（Ｉａ）は、ペプチドである。

前記式（Ｉ）中、Ｘ^１およびＸ^２は、例えば、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨである。前記式（Ｉ）中において、Ｘ^１がＨ_２であるとは、Ｘ^１が、Ｘ^１の結合する炭素原子とともに、ＣＨ_２（メチレン基）を形成することを意味する。Ｘ^２についても同様である。

前記式（Ｉ）中、Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳである。

前記式（Ｉ）中、Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。前記ポリエーテル鎖は、例えば、ポリエチレングリコールである。なお、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^１がＯの場合、その酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^１の酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接しない。

前記式（Ｉ）中、Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。なお、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^２がＯの場合、その酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^２の酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接しない。

Ｌ^１のｎおよびＬ^２のｍは、特に制限されず、それぞれ、下限は、例えば、０であり、上限も、特に制限されない。ｎおよびｍは、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）の所望の長さに応じて、適宜設定できる。ｎおよびｍは、例えば、製造コストおよび収率等の点から、それぞれ、０〜３０が好ましく、より好ましくは０〜２０であり、さらに好ましくは０〜１５である。ｎとｍは、同じでもよいし（ｎ＝ｍ）、異なってもよい。ｎ＋ｍは、例えば、０〜３０であり、好ましくは０〜２０であり、より好ましくは０〜１５である。

Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよい。前記置換基は、例えば、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル（ハロアルキル、例：ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＣｌ_３）、ニトロ、ニトロソ、シアノ、アルキル（例：メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル）、アルケニル（例：ビニル）、アルキニル（例：エチニル）、シクロアルキル（例：シクロプロピル、アダマンチル）、シクロアルキルアルキル（例：シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル）、シクロアルケニル（例：シクロプロペニル）、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル（例：ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル）、アルコキシアルキル（例：メトキシメチル、エトキシメチル、エトキシエチル）、アリール（例：フェニル、ナフチル）、アリールアルキル（例：ベンジル、フェネチル）、アルキルアリール（例、ｐ−メチルフェニル）、ヘテロアリール（例：ピリジル、フリル）、ヘテロアリールアルキル（例：ピリジルメチル）、ヘテロシクリル（例：ピペリジル）、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル（例：モルホリルメチル）、アルコキシ（例：メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ）、ハロゲン化アルコキシ（例：ＯＣＦ_３）、アルケニルオキシ（例：ビニルオキシ、アリルオキシ）、アリールオキシ（例：フェニルオキシ）、アルキルオキシカルボニル（例：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、アリールアルキルオキシ（例：ベンジルオキシ）、アミノ［アルキルアミノ（例：メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ）、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ）、アリールアルキルアミノ（例：ベンジルアミノ、トリチルアミノ）、ヒドロキシアミノ］、アミノアルキル（例：アミノメチル）、アルキルアミノアルキル（例：ジエチルアミノメチル）、カルバモイル、スルファモイル、オキソ、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。これらの置換基は、１または複数のさらなる置換基またはさらなる保護基で置換されていても良い。前記さらなる置換基は、特に限定されないが、例えば、上記例示に係る置換基でも良い。前記さらなる保護基は、特に限定されないが、例えば、下記例示に係る保護基でも良い。以下において同様である。

前記保護基（または、前記さらなる保護基）は、例えば、反応性の高い官能基を不活性に変換する官能基であり、公知の保護基等があげられる。前記保護基は、例えば、文献（J. F. W. McOmie, 「Protecting Groups in Organic Chemistry」 Prenum Press, London and New York, 1973）の記載を援用できる。前記保護基は、特に制限されず、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ビス（２−アセトキシエチルオキシ）メチル基（ＡＣＥ）、トリイソプロピルシリルオキシメチル基（ＴＯＭ）、１−（２−シアノエトキシ）エチル基（ＣＥＥ）、２−シアノエトキシメチル基（ＣＥＭ）およびトリルスルフォニルエトキシメチル基（ＴＥＭ）、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）等があげられる。Ｒ^３がＯＲ^４の場合、前記保護基は、特に制限されず、例えば、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基およびＴＥＭ基等があげられる。この他にも、後述する化学式（Ｐ１）および（Ｐ２）のシリル含有基もあげられる。以下において同様である。

前記式（Ｉ）において、水素原子は、例えば、それぞれ独立して、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩ等のハロゲンに置換されてもよい。

前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、例えば、それぞれ、−ＯＲ^１−または−ＯＲ^２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合する。ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよい。Ｒ^１およびＲ^２が存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記式（Ｉ)の構造である。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記ヌクレオチド残基の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、ヌクレオチド残基Ｒ^１および／またはＲ^２を除く前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基と、前記ヌクレオチド残基とから形成される。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記式（Ｉ）の構造の場合、前記リンカー領域（Ｘｃ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基が、２つ以上連結された構造となる。前記式（Ｉ）の構造は、例えば、１個、２個、３個または４個含んでもよい。このように、前記構造を複数含む場合、前記（Ｉ）の構造は、例えば、直接連結されてもよいし、前記ヌクレオチド残基を介して結合してもよい。他方、Ｒ^１およびＲ^２が存在しない場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基のみから形成される。

前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）と、−ＯＲ^１−および−ＯＲ^２−との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。

本発明のｓｓＰＮ分子において、前記式（Ｉ）中の原子団Ｐｅは、ペプチド結合を含む以外は特に限定されず、任意であり、ただし、前述のとおり、下記式（Ｉａ）が、ペプチドである。

前記式（Ｉ）、（ＩＡ）または（Ｉａ）中の原子団Ｐｅは、例えば、鎖式原子団、脂環式原子団、芳香族性原子団、ヘテロ芳香族性原子団、およびヘテロ脂環式原子団からなる群から選択される少なくとも一つを含んでいても含んでいなくても良い。前記鎖式原子団は、特に限定されないが、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等が挙げられる。前記脂環式原子団は、特に限定されないが、例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、等が挙げられる。前記芳香族性原子団は、特に限定されないが、例えば、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、縮環系アリール、縮環系アリールアルキル、縮環系アルキルアリール等が挙げられる。前記ヘテロ芳香族性原子団、は、特に限定されないが、例えば、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリール、縮環系ヘテロアリール、縮環系ヘテロアリールアルキル、縮環系アルキルヘテロアリール等が挙げられる。また、前記式（Ｉ）、（ＩＡ）または（Ｉａ）中の原子団Ｐｅにおいて、前記各原子団は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基または保護基は、複数の場合は同一でも異なってもよい。前記置換基は、特に限定されないが、例えば、前記Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄについて例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄで例示した保護基と同様である。

本発明において、「アミノ酸」は、分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む任意の有機化合物をいう。ただし、アミノ基に代えてイミノ基を有する化合物（プロリン、ヒドロキシプロリン等）も、アミノ酸に含まれるものとする。また、「ペプチド」は、２分子以上のアミノ酸がペプチド結合により結合した構造の有機化合物をいう。前記ペプチド結合は、酸アミド結合でも良いし、酸イミド結合でも良い。前記式（Ｉ−ａ）で表すペプチド分子中にアミノ基が複数存在する場合は、前記式（Ｉ−ａ）中に明示しているアミノ基は、いずれのアミノ基であっても良い。また、前記式（Ｉ−ａ）で表すペプチド分子中にカルボキシ基が複数存在する場合は、前記式（Ｉ−ａ）中に明示しているカルボキシ基は、いずれのカルボキシ基であっても良い。

本発明の一本鎖核酸分子の前記リンカー領域において、前記ペプチドを構成するアミノ酸の分子数は、特に限定されないが、例えば、２〜２０、好ましくは２〜１０、より好ましくは２〜５である。また、前記ペプチドを構成するアミノ酸は、１種類でも複数種類でも良い。前記ペプチドを構成するアミノ酸は、例えば、天然アミノ酸でも良いし、人工アミノ酸であっても良い。なお、本発明において、「天然アミノ酸」は、天然に存在する構造のアミノ酸またはその光学異性体をいう。前記天然アミノ酸の製造方法は特に限定されず、例えば、天然から抽出しても良いし、合成しても良い。また、本発明において、「人工アミノ酸」は、天然に存在しない構造のアミノ酸をいう。すなわち、前記人工アミノ酸は、アミノ酸すなわちアミノ基を含むカルボン酸誘導体（分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む有機化合物）であって、天然に存在しない構造のカルボン酸誘導体をいう。前記ペプチドを構成するアミノ酸は、例えば、タンパク質を構成するアミノ酸（タンパク質構成アミノ酸）の全種類、およびその他のアミノ酸（アミノ基を含むカルボン酸誘導体）から選択される少なくとも一種類であっても良い。前記タンパク質構成アミノ酸としては、例えば、グリシン、α−アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒドロキシリシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、およびトリプトファンが挙げられ、それ以外のアミノ酸としては、例えば、β−アラニン、１−アミノ−２−カルボキシシクロペンタン、アミノ安息香酸およびアミノピリジンカルボン酸が挙げられ、これらタンパク質構成アミノ酸およびそれ以外のアミノ酸は、それぞれ、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基は、特に限定されないが、例えば、前記Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄについて例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄと同様である。また、前記のペプチドを構成するアミノ酸に、光学異性体、幾何異性体、立体異性体等の異性体が存在する場合は、いずれの異性体でも良い。

前記式（Ｉ）の構造は、例えば、下記式（Ｉ−１）および（Ｉ−２）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（Ｉ）と同じである。

前記式（Ｉ−１）および（Ｉ−２）において、ｎおよびｍは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（Ｉ−１）において、ｎ＝５およびｍ＝４があげられる。その構造を、下記式（Ｉ−１ａ）に示す。

本発明のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）と相補的である。このため、本発明のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）が前記領域（Ｘ）に向かって折り返し、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能である。本発明のｓｓＰＮ分子は、このように、分子内で二重鎖を形成可能であり、例えば、従来のＲＮＡ干渉に使用するｓｉＲＮＡのように、分離した２本の一本鎖ＲＮＡがアニーリングによって二本鎖ＲＮＡを形成するものとは、明らかに異なる構造である。

本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘｃ）のみが折り返して前記領域（Ｘ）と二重鎖を形成してもよいし、さらに、他の領域において新たな二重鎖を形成してもよい。以下、前者のｓｓＰＮ分子、すなわち、二重鎖形成が１カ所である分子を「第１のｓｓＰＮ分子」といい、後者のｓｓＰＮ分子、すなわち、二重鎖形成が２カ所である分子を「第２のｓｓＰＮ分子」という。以下に、前記第１のｓｓＰＮ分子および前記第２のｓｓＰＮ分子について、例示するが、本発明は、これには制限されない。

（１）第１のｓｓＰＮ分子
前記第１のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｘｃ）および前記リンカー領域（Ｌｘ）からなる分子である。

前記第１のｓｓＰＮ分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよいし、３’側から５’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよい。

前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。

前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記発現抑制配列は、前述のように、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）の少なくとも一方に含まれる。前記第１のｓｓＰＮ分子は、前記発現抑制配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。

後者の場合、前記１のｓｓＰＮ分子は、例えば、同じ標的遺伝子に対する同じ発現抑制配列を２つ以上有してもよいし、同じ標的に対する異なる発現抑制配列を２つ以上有してもよいし、異なる標的遺伝子に対する異なる発現抑制配列を２つ以上有してもよい。前記第１のｓｓＰＮ分子が、２つ以上の前記発現抑制配列を有する場合、各発現抑制配列の配置箇所は、特に制限されず、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一領域でもよいし、異なる領域であってもよい。前記第１のｓｓＰＮ分子が、異なる標的遺伝子に対する前記発現抑制配列を２つ以上有する場合、例えば、前記第１のｓｓＰＮ分子によって、２種類以上の異なる標的遺伝子の発現を抑制可能である。

前記第１のｓｓＰＮ分子の一例を、図１の模式図に示す。図１（Ａ）は、一例として、前記ｓｓＰＮ分子について、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図１（Ｂ）は、前記ｓｓＰＮ分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図１（Ｂ）に示すように、前記ｓｓＰＮ分子は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間で、二重鎖が形成され、前記Ｌｘ領域が、その長さに応じてループ構造をとる。図１は、あくまでも、前記領域の連結順序および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ、前記リンカー領域（Ｌｘ）の形状等は、これに制限されない。

前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。以下に各領域の長さを例示するが、本発明は、これには制限されない。本発明において、「塩基数」は、例えば、「長さ」を意味し、「塩基長」ということもできる。本発明において、塩基数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、具体例として、「１〜４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。

前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域に完全に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることを意味し、すなわち、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的であることを意味する。

また、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に完全に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に相補的な塩基配列からなることを意味し、すなわち、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなり、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的であることを意味する。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、前記領域（Ｘｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。

前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記（３）または（５）の条件を満たし、前者の場合、具体的には、例えば、下記（１１）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ ・・・（３）
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは１、２または３、
より好ましくは１または２ ・・・（１１）
Ｘ＝Ｘｃ ・・・（５）

前記領域（Ｘ）および／または前記領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記領域は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の塩基数は、例えば、１９〜３０塩基であり、好ましくは、１９、２０または２１塩基である。前記発現抑制配列を含む領域は、例えば、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜３１塩基であり、好ましくは、１〜２１塩基であり、より好ましくは、１〜１１塩基である。

前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｘ）が、前記発現抑制配列を含む場合、その下限は、例えば、１９塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは３０塩基であり、より好ましくは２５塩基である。前記領域（Ｘ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基〜５０塩基であり、好ましくは、１９塩基〜３０塩基、より好ましくは１９塩基〜２５塩基である。

前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、特に制限されない。その下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、より好ましくは４０塩基であり、さらに好ましくは３０塩基である。

前記ｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記非ヌクレオチド残基の他に、前記ヌクレオチド残基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。

前記第１のｓｓＰＮ分子の全長は、特に制限されない。前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記第１のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１ 塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。

（２）第２のｓｓＰＮ分子
前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘｃ）の他に、さらに、領域（Ｙ）および前記領域（Ｙ）に相補的な領域（Ｙｃ）を有する分子である。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが連結して、内部領域（Ｚ）を形成している。なお、特に示さない限り、前記第２のｓｓＰＮ分子は、前記第１のｓｓＰＮ分子の記載を援用できる。

前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）を、前記順序で有してもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）を、５’側領域（Ｘｃ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｘ）を、内部５’側領域（Ｘ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｙ）を、内部３’領域（Ｙ）、前記領域（Ｙｃ）を、３’側領域（Ｙｃ）ともいう。また、前記第２のｓｓＰＮ分子は、例えば、３’側から５’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）を、前記順序で有してもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）を、３’側領域（Ｘｃ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｘ）を、内部３’側領域（Ｘ）、前記内部領域（Ｚ）中の前記領域（Ｙ）を、内部５’領域（Ｙ）、前記領域（Ｙｃ）を、５’側領域（Ｙｃ）ともいう。

前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）との配列関係を示すために、「前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）が連結して構成される」と定義するものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが、前記ｓｓＰＮ分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現抑制配列が配置されてもよい。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を有していればよく、好ましくは、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなる。前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的であってもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１〜３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記発現抑制配列は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とから形成される前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一つに含まれ、さらに、前記領域（Ｙｃ）に含まれてもよい。前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を有する場合、例えば、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｙ）のいずれに前記発現抑制配列を有してもよく、また、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現抑制配列を有してもよい。前記第２のｓｓＰＮ分子は、前記発現抑制配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。

前記第２のｓｓＰＮ分子が、２つ以上の前記発現抑制配列を有する場合、各発現抑制配列の配置箇所は、特に制限されず、前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一方でもよいし、前記内部領域（Ｚ）および前記領域（Ｘｃ）のいずれか一方と、さらに他の異なる領域であってもよい。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結等があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが連結している形態等があげられる。

前記第２のｓｓＰＮ分子が前記リンカー領域（Ｌｙ）を有する場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記ヌクレオチド残基からなるリンカーでもよいし、前述した、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有するリンカーでもよい。後者の場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記式（Ｉ）で表わすことができ、前記リンカー領域（Ｌｘ）における前記式（Ｉ）の説明を全て援用できる。

前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、例えば、それぞれ、−ＯＲ^１−または−ＯＲ^２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合する。ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、前述のリンカー領域（Ｌｘ）と同様に、存在しても存在しなくてもよい。

前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）、ならびに、前記領域（Ｙｃ）および前記（Ｙ）と、前記−ＯＲ^１−および−ＯＲ^２−との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（３）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（４）
前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。

前記第２のｓｓＰＮ分子について、前記リンカー領域（Ｌｙ）を有するｓｓＰＮ分子の一例を、図２の模式図に示す。図２（Ａ）は、一例として、前記ｓｓＰＮ分子について、５’側から３’側に向かって、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図２（Ｂ）は、前記ｓｓＰＮ分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図２（Ｂ）に示すように、前記ｓｓＰＮ分子は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間、前記領域（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）との間で、二重鎖が形成され、前記Ｌｘ領域および前記Ｌｙ領域が、その長さに応じてループ構造をとる。図２は、あくまでも、各領域の連結順番および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ、リンカー領域の形状等は、これに制限されない。また、図２は、前記領域（Ｘｃ）を５’側に示したが、これには制限されず、前記領域（Ｘｃ）が、３’側に位置してもよい。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、特に制限されない。各領域の長さを以下に例示するが、本発明は、これには制限されない。

前記領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｘ）の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的である。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的であってもよい。

また、前記領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的である。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、前記領域（Ｘｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。

前記領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｙ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｙ）の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補である。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的であってもよい。

また、前記領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｙ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補である。前記領域（Ｙ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｙ）における、前記領域（Ｙｃ）側の末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域であることが好ましい。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）との関係、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記式（１）および（２）の条件を満たす。
Ｚ＝Ｘ＋Ｙ ・・・（１）
Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ ・・・（２）

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）の関係は、特に制限されず、例えば、下記式のいずれの条件を満たす。
Ｘ＝Ｙ ・・・（１９）
Ｘ＜Ｙ ・・・（２０）
Ｘ＞Ｙ ・・・（２１）

第２のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の関係は、例えば、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかの条件を満たす。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ ・・・（３）
Ｙ＝Ｙｃ ・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ ・・・（５）
Ｙ＞Ｙｃ ・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ ・・・（７）
Ｙ＞Ｙｃ ・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ ・・・（９）
Ｙ＝Ｙｃ ・・・（１０）

前記（ａ）〜（ｄ）において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差は、例えば、下記条件を満たすことが好ましい。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３ ・・・（１１）
Ｙ−Ｙｃ＝０ ・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０ ・・・（１３）
Ｙ−Ｙｃ＝１〜１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３ ・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１〜１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２ ・・・（１５）
Ｙ−Ｙｃ＝１〜１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２ ・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０ ・・・（１７）
Ｙ−Ｙｃ＝０ ・・・（１８）

前記（ａ）〜（ｄ）の第２のｓｓＰＮ分子について、それぞれの構造の一例を、図３の模式図に示す。図３は、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）を含むｓｓＰＮであり、（Ａ）は、前記（ａ）のｓｓＰＮ分子、（Ｂ）は、前記（ｂ）のｓｓＰＮ分子、（Ｃ）は、前記（ｃ）のｓｓＰＮ分子、（Ｄ）は、前記（ｄ）のｓｓＰＮ分子の例である。図３において、点線は、自己アニーリングにより二重鎖を形成している状態を示す。図３のｓｓＰＮ分子は、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）を、前記式（２０）の「Ｘ＜Ｙ」と表わしたが、これには制限されず、前述のように、前記式（１９）の「Ｘ＝Ｙ」でも、前記式（２１）の「Ｘ＞Ｙ」でもよい。また、図３は、あくまでも前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との関係、前記領域（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）との関係を示す模式図であり、例えば、各領域の長さ、形状、リンカー領域（Ｌｙ）の有無等は、これには制限されない。

前記（ａ）〜（ｃ）のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）、および、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）が、それぞれ二重鎖を形成することによって、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）のいずれともアライメントしない塩基を有する構造であり、二重鎖を形成しない塩基を有する構造ともいえる。前記内部領域（Ｚ）において、前記アライメントしない塩基（二重鎖を形成しない塩基ともいう）を、以下、「フリー塩基」という。図３において、前記フリー塩基の領域を、「Ｆ」で示す。前記領域（Ｆ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）は、例えば、前記（ａ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｘ−Ｘｃ」の塩基数であり、前記（ｂ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｙ−Ｙｃ」の塩基数であり、前記（ｃ）のｓｓＰＮ分子の場合、「Ｘ−Ｘｃ」の塩基数と「Ｙ−Ｙｃ」の塩基数との合計数である。

他方、前記(ｄ)のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記内部領域（Ｚ）の全領域が、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）とアライメントする構造であり、前記内部領域（Ｚ）の全領域が二重鎖を形成する構造ともいえる。なお、前記（ｄ）のｓｓＰＮ分子において、前記領域（Ｘｃ）の５’末端と前記領域（Ｙｃ）の３’末端は、未連結である。

前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｙｃ）、および前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基（Ｆ）の塩基数の合計は、前記内部領域（Ｚ）の塩基数となる。このため、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の長さは、例えば、前記内部領域（Ｚ）の長さ、前記フリー塩基の数およびその位置に応じて、適宜決定できる。

前記内部領域（Ｚ）の塩基数は、例えば、１９塩基以上である。前記塩基数の下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。前記塩基数の上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは４０塩基であり、より好ましくは３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基、２０塩基、２１塩基、２２塩基、２３塩基、２４塩基、２５塩基、２６塩基、２７塩基、２８塩基、２９塩基、または、３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を有する場合、例えば、この条件が好ましい。

前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記内部領域（Ｚ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の塩基数は、例えば、１９〜３０塩基であり、好ましくは、１９、２０または２１塩基である。前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜３１塩基であり、好ましくは、１〜２１塩基であり、より好ましくは、１〜１１塩基であり、さらに好ましくは、１〜７塩基である。

前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１〜２９塩基であり、好ましくは１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９〜３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

前記領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは、１〜７塩基である。

前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１〜２９塩基であり、好ましくは１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１〜４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９〜３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは１〜７塩基であり、より好ましくは１塩基、２塩基、３塩基または４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

前記領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１〜１１塩基であり、好ましくは、１〜７塩基である。

前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、前記式（２）の「Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ」で表わすことができる。具体例として、「Ｘｃ＋Ｙｃ」の塩基数は、例えば、前記内部領域（Ｚ）と同じ、または、前記内部領域（Ｚ）より小さい。後者の場合、「Ｚ−（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、１〜１０、好ましくは１〜４、より好ましくは１、２または３である。前記「Ｚ−（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、前記内部領域（Ｚ）におけるフリーの領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）に相当する。

前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、前述の通りである。前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位が塩基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｙ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。前記各リンカー領域の塩基数は、具体例として、例えば、１〜５０塩基、１〜３０塩基、１〜２０塩基、１〜１０塩基、１〜７塩基、１〜４塩基等が例示できるが、これには制限されない。

前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）と同じでもよいし、異なってもよい。

前記第２のｓｓＰＮ分子の全長は、特に制限されない。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記第２のｓｓＰＮ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。

本発明のｓｓＰＮ分子は、前述のように、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記非ヌクレオチド構造を有していればよく、その他の構成単位は、特に制限されない。前記構成単位は、例えば、ヌクレオチド残基等があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基等があげられる。本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。

前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の構成単位は、それぞれ、前記ヌクレオチド残基が好ましい。前記各領域は、例えば、下記（１）〜（３）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチドと前記ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、下記（４）〜（７）の残基で構成される。
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位は、特に制限されず、例えば、前述のように、前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基等があげられる。前記リンカー領域は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記ヌクレオチド残基と前記非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域は、例えば、下記（１）〜（７）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除き、前記ヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記ヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。本発明のｓｓＰＮ分子において、前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾ヌクレオチド残基および前記修飾ヌクレオチド残基の両方であってもよい。前記ｓｓＰＮ分子が、前記非修飾ヌクレオチド残基と前記修飾ヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。本発明のｓｓＰＮ分子が、前記非ヌクレオチド残基を含む場合、前記非ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１または２個である。

本発明のｓｓＰＮ分子において、前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基が好ましい。この場合、本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、「ｓｓＲＮＡ分子」、または「Ｐ−ｓｓＲＮＡ分子」ともいう。前記ｓｓＲＮＡ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除き、前記リボヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記リボヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子において、前記リボヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾リボヌクレオチド残基および前記修飾リボヌクレオチド残基の両方を含んでもよい。

前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。前記非修飾リボヌクレオチド残基に対する前記修飾リボヌクレオチド残基は、例えば、リボース残基がデオキシリボース残基に置換された前記デオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記デオキシリボヌクレオチド残基を含む場合、前記デオキシリボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１〜５個、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個、最も好ましくは１または２個である。

本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体等があげられる。前記標識物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記同位体は、例えば、安定同位体および放射性同位体があげられ、好ましくは安定同位体である。前記安定同位体は、例えば、被ばくの危険性が少なく、専用の施設も不要であることから取り扱い性に優れ、また、コストも低減できる。また、前記安定同位体は、例えば、標識した化合物の物性変化がなく、トレーサーとしての性質にも優れる。前記安定同位体は、特に制限されず、例えば、^２Ｈ、^１３Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３３Ｓ、^３４Ｓおよび^３６Ｓ等があげられる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、前述のように、例えば、前記非ヌクレオチド構造に前記標識物質を導入することが好ましく、前記リンカー領域（Ｌｘ）の前記非ヌクレオチド残基に前記標識物質を導入することが好ましい。前記非ヌクレオチド残基への標識物質の導入は、例えば、簡便かつ安価に行うことができる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、前述のように、前記標的遺伝子の発現を抑制ができる。このため、本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、遺伝子が原因となる疾患の治療剤として使用できる。前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を含む前記ｓｓＰＮ分子であれば、例えば、前記標的遺伝子の発現抑制により、前記疾患を治療できる。本発明において、「治療」は、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。

本発明のｓｓＰＮ分子の使用方法は、特に制限されず、例えば、前記標的遺伝子を有する投与対象に、前記ｓｓＰＮ分子を投与すればよい。

前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官等があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物等があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。

本発明において、発現抑制の対象となる前記標的遺伝子は、特に制限されず、所望の遺伝子を設定でき、前記遺伝子に応じて、前記発現抑制配列を適宜設計すればよい。

本発明のｓｓＰＮ分子の具体例を以下に示すが、本発明はこれには何ら制限されない。前記ｓｓＰＮ分子の塩基配列は、例えば、前記標的遺伝子がＧＡＰＤＨ遺伝子の場合、配列番号４および２０の塩基配列が例示でき、前記塩基配列において、例えば、１もしくは数個の欠失、置換および／または付加された塩基配列でもよく、また、前記標的遺伝子がＴＧＦ−β１の場合、例えば、配列番号２１〜２５の塩基配列が例示でき、前記塩基配列において、例えば、１もしくは数個の欠失、置換および／または付加された塩基配列でもよい。なお、下記配列番号４および２０の配列において、下線部GUUGUCAUACUUCUCAUGG（配列番号５）が、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制に関する領域である。また、下記配列番号２１〜２５において、「＊」は、フリー塩基を表す。また、下記配列番号４および２０〜２５において、ＬｘおよびＬｙの構造は、特に限定されないが、例えば、後述の実施例に示す構造（Ｌｇｇ）でもよい。

（配列番号２０）
5’-CCAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-Lx-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUU-3’

本発明のｓｓＰＮ分子の使用に関しては、後述する本発明の組成物、発現抑制方法および治療方法等の記載を援用できる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、前述のように標的遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、診断薬および農薬、ならびに、農薬、医学、生命科学等の研究ツールとして有用である。

本発明において、「アルキル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキル基を含む。前記アルキルの炭素数は、特に制限されず、例えば、１〜３０であり、好ましくは、１〜６または１〜４である。前記アルキル基は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等があげられる。好ましくは、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ-ヘキシル、イソヘキシル等があげられる。

本発明において、「アルケニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルケニルを含む。前記アルケニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の二重結合を有するもの等があげられる。前記アルケニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２〜８である。前記アルケニルは、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，３−ブタジエニル、３−メチル−２−ブテニル等があげられる。

本発明において、「アルキニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキニルを含む。前記アルキニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の三重結合を有するもの等があげられる。前記アルキニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２〜８である。前記アルキニルは、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル等があげられる。前記アルキニルは、例えば、さらに、１個または複数の二重結合を有してもよい。

本発明において、「アリール」は、例えば、単環芳香族炭化水素基および多環芳香族炭化水素基を含む。前記単環芳香族炭化水素基は、例えば、フェニル等があげられる。前記多環芳香族炭化水素基は、例えば、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、２−フェナントリル、３−フェナントリル、４−フェナントリル、９−フェナントリル等があげられる。好ましくは、例えば、フェニル、１−ナフチルおよび２−ナフチル等のナフチル等があげられる。

本発明において、「ヘテロアリール」は、例えば、単環芳香族複素環式基および縮合芳香族複素環式基を含む。前記ヘテロアリールは、例えば、フリル（例：２−フリル、３−フリル）、チエニル（例：２−チエニル、３−チエニル）、ピロリル（例：１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、イミダゾリル（例：１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４−トリアゾール−１−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル、１，２，４−トリアゾール−４−イル）、テトラゾリル（例：１−テトラゾリル、２−テトラゾリル、５−テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３−イソチアゾリル、４−イソチアゾリル、５−イソチアゾリル）、ピリジル（例：２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリダジニル（例：３−ピリダジニル、４−ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、フラザニル（例：３−フラザニル）、ピラジニル（例：２−ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）、ベンゾフリル（例：２−ベンゾ［ｂ］フリル、−ベンゾ［ｂ］フリル、４−ベンゾ［ｂ］フリル、５−ベンゾ［ｂ］フリル、６−ベンゾ［ｂ］フリル、７−ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２−ベンゾ［ｂ］チエニル、３−ベンゾ［ｂ］チエニル、４−ベンゾ［ｂ］チエニル、５−ベンゾ［ｂ］チエニル、６−ベンゾ［ｂ］チエニル、７−ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１−ベンゾイミダゾリル、２−ベンゾイミダゾリル、４−ベンゾイミダゾリル、５−ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリル（例：２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、６−キノキサリニル）、シンノリニル（例：３−シンノリニル、４−シンノリニル、５−シンノリニル、６−シンノリニル、７−シンノリニル、８−シンノリニル）、キナゾリル（例：２−キナゾリニル、４−キナゾリニル、５−キナゾリニル、６−キナゾリニル、７−キナゾリニル、８−キナゾリニル）、キノリル（例：２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、フタラジニル（例：１−フタラジニル、５−フタラジニル、６−フタラジニル）、イソキノリル（例：１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２−プテリジニル、４−プテリジニル、６−プテリジニル、７−プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１−アクリジニル、２−アクリジニル、３−アクリジニル、４−アクリジニル、９−アクリジニル）、インドリル（例：１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、イソインドリル、フェナジニル（例：１−フェナジニル、２−フェナジニル）またはフェノチアジニル（例：１−フェノチアジニル、２−フェノチアジニル、３−フェノチアジニル、４−フェノチアジニル）等があげられる。

本発明において、「シクロアルキル」は、例えば、環状飽和炭化水素基であり、炭素数は、例えば、３〜１５である。前記シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基等があげられ、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、橋かけ環式炭化水素基等があげられる。

本発明において、「橋かけ環式炭化水素基」は、例えば、ビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．３．１］ノナン、１−アダマンチル、２−アダマンチル等があげられる。

本発明において、「スピロ炭化水素基」は、例えば、スピロ［３．４］オクチル等があげられる。

本発明において、「シクロアルケニル」は、例えば、環状の不飽和脂肪族炭化水素基を包み、炭素数は、例えば、３〜７個である。前記基は、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル等があげられ、好ましくは、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等である。前記シクロアルケニルは、例えば、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。

本発明において、「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル、２−フェネチル、およびナフタレニルメチル等があげられ、「シクロアルキルアルキル」または「シクリルアルキル」は、例えば、シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル等があげられ、「ヒドロキシアルキル」は、例えば、例えば、ヒドロキシメチルおよび２−ヒドロキシエチル等があげられる。

本発明において、「アルコキシ」は、例えば、前記アルキル−Ｏ−基を含み、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、およびｎ−ブトキシ等があげられ、「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチル等があげられ、「アミノアルキル」は、例えば、２−アミノエチル等があげられる。

本発明において、「ヘテロシクリル」は、例えば、１−ピロリニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、ピロリジノン、１−イミダゾリニル、２−イミダゾリニル、４−イミダゾリニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、イミダゾリジノン、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、１−ピラゾリジニル、３−ピラゾリジニル、４−ピラゾリジニル、ピペリジノン、ピペリジノ、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル、ピペラジノン、２−モルホリニル、３−モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル等があげられる。

本発明において、「ヘテロシクリルアルキル」は、例えば、ピペリジニルメチル、ピペラジニルメチル等があげられ、「ヘテロシクリルアルケニル」は、例えば、２−ピペリジニルエテニル等があげられ、「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、ピリジルメチルおよびキノリン−３−イルメチル等があげられる。

本発明において、「シリル」は、式Ｒ_３Ｓｉ−で表される基を含み、Ｒは、独立して、前記アルキル、アリールおよびシクロアルキルから選択でき、例えば、トリメチルシリル基、tert-ブチルジメチルシリル基等があげられ、「シリルオキシ」は、例えば、トリメチルシリルオキシ基等があげられ、「シリルオキシアルキル」は、例えば、トリメチルシリルオキシメチル等があげられる。

本発明において、「アルキレン」は、例えば、メチレン、エチレン、およびプロピレン等があげられる。

本発明において、前述した各種基は、置換されてもよい。前記置換基は、例えば、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル（ハロアルキル、例：ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＣｌ_３）、ニトロ、ニトロソ、シアノ、アルキル（例：メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル）、アルケニル（例：ビニル）、アルキニル（例：エチニル）、シクロアルキル（例：シクロプロピル、アダマンチル）、シクロアルキルアルキル（例：シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル）、シクロアルケニル（例：シクロプロペニル）、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル（例：ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル）、アルコキシアルキル（例：メトキシメチル、エトキシメチル、エトキシエチル）、アリール（例：フェニル、ナフチル）、アリールアルキル（例：ベンジル、フェネチル）、アルキルアリール（例、ｐ−メチルフェニル）、ヘテロアリール（例：ピリジル、フリル）、ヘテロアリールアルキル（例：ピリジルメチル）、ヘテロシクリル（例：ピペリジル）、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル（例：モルホリルメチル）、アルコキシ（例：メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ）、ハロゲン化アルコキシ（例：ＯＣＦ_３）、アルケニルオキシ（例：ビニルオキシ、アリルオキシ）、アリールオキシ（例：フェニルオキシ）、アルキルオキシカルボニル（例：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、アリールアルキルオキシ（例：ベンジルオキシ）、アミノ［アルキルアミノ（例：メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ）、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ）、アリールアルキルアミノ（例：ベンジルアミノ、トリチルアミノ）、ヒドロキシアミノ］、アミノアルキル（例：アミノメチル）、アルキルアミノアルキル（例：ジエチルアミノメチル）、カルバモイル、スルファモイル、オキソ、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。

２．ヌクレオチド残基
前記ヌクレオチド残基は、例えば、構成要素として、糖、塩基およびリン酸を含む。前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基等があげられる。前記リボヌクレオチド残基は、例えば、糖としてリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびＵ（ウラシル）を有し、前記デオキシリボース残基は、例えば、糖としてデオキシリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）を有る。

前記ヌクレオチド残基は、未修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基等があげられる。前記未修飾ヌクレオチド残基は、前記各構成要素が、例えば、天然に存在するものと同一または実質的に同一であり、好ましくは、人体において天然に存在するものと同一または実質的に同一である。

前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基を修飾したヌクレオチド残基である。前記修飾ヌクレオチドは、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基の構成要素のいずれが修飾されてもよい。本発明において、「修飾」は、例えば、前記構成要素の置換、付加および／または欠失、前記構成要素における原子および／または官能基の置換、付加および／または欠失であり、「改変」ということができる。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、天然に存在するヌクレオチド残基、人工的に修飾したヌクレオチド残基等があげられる。前記天然由来の修飾ヌクレオチド残基は、例えば、リンバックら（Ｌｉｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．、１９９４、Ｓｕｍｍａｒｙ：ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ＲＮＡ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：２１８３〜２１９６）を参照できる。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記ヌクレオチドの代替物の残基であってもよい。

前記ヌクレオチド残基の修飾は、例えば、リボース−リン酸骨格（以下、リボリン酸骨格）の修飾等があげられる。

前記リボリン酸骨格において、例えば、リボース残基を修飾できる。前記リボース残基は、例えば、２’位炭素を修飾でき、具体的には、例えば、２’位炭素に結合する水酸基を、水素またはフルオロ等に置換できる。前記２’位炭素の水酸基を水素に置換することで、リボース残基をデオキシリボースに置換できる。前記リボース残基は、例えば、立体異性体に置換でき、例えば、アラビノース残基に置換してもよい。

前記リボリン酸骨格は、例えば、非リボース残基および／または非リン酸を有する非リボリン酸骨格に置換してもよい。前記非リボリン酸骨格は、例えば、前記リボリン酸骨格の非荷電体等があげられる。前記非リボリン酸骨格に置換された、前記ヌクレオチドの代替物は、例えば、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジン等があげられる。前記代替物は、この他に、例えば、人工核酸モノマー残基等があげられる。具体例として、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）、ＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−Ｅｔｈｙｌｅｎｅｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ）等があげられ、好ましくはＰＮＡである。

前記リボリン酸骨格において、例えば、リン酸基を修飾できる。前記リボリン酸骨格において、糖残基に最も近いリン酸基は、αリン酸基と呼ばれる。前記αリン酸基は、負に荷電し、その電荷は、糖残基に非結合の２つの酸素原子にわたって、均一に分布している。前記αリン酸基における４つの酸素原子のうち、ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と非結合である２つの酸素原子は、以下、「非結合（ｎｏｎ−ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」ともいう。他方、前記ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と結合している２つの酸素原子は、以下、「結合（ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」という。前記αリン酸基は、例えば、非荷電となる修飾、または、前記非結合原子における電荷分布が非対称型となる修飾を行うことが好ましい。

前記リン酸基は、例えば、前記非結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｅ（セレン）、Ｂ（ホウ素）、Ｃ（炭素）、Ｈ（水素）、Ｎ（窒素）およびＯＲ（Ｒは、例えば、アルキル基またはアリール基）のいずれかの原子で置換でき、好ましくは、Ｓで置換される。前記非結合酸素は、例えば、両方が置換されていることが好ましく、より好ましくは、両方がＳで置換される。前記修飾リン酸基は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ホスホネート水素、ホスホロアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、およびホスホトリエステル等があげられ、中でも、前記２つの非結合酸素が両方ともＳで置換されているホスホロジチオエートが好ましい。

前記リン酸基は、例えば、前記結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｃ（炭素）およびＮ（窒素）のいずれかの原子で置換されても良い。前記修飾リン酸基は、例えば、Ｎで置換した架橋ホスホロアミデート、Ｓで置換した架橋ホスホロチオエート、およびＣで置換した架橋メチレンホスホネート等があげられる。前記結合酸素の置換は、例えば、本発明のｓｓＰＮ分子の５’末端ヌクレオチド残基および３’末端ヌクレオチド残基の少なくとも一方において行うことが好ましく、５’側の場合、Ｃによる置換が好ましく、３’側の場合、Ｎによる置換が好ましい。

前記リン酸基は、例えば、前記リン非含有のリンカーに置換してもよい。前記リンカーは、例えば、シロキサン、カーボネート、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキサイドリンカー、スルホネート、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、およびメチレンオキシメチルイミノ等を含み、好ましくは、メチレンカルボニルアミノ基およびメチレンメチルイミノ基を含む。

本発明のｓｓＰＮ分子は、例えば、３’末端および５’末端の少なくとも一方のヌクレオチド残基が修飾されてもよい。前記修飾は、例えば、３’末端および５’末端のいずれか一方でもよいし、両方でもよい。前記修飾は、例えば、前述の通りであり、好ましくは、末端のリン酸基に行うことが好ましい。前記リン酸基は、例えば、全体を修飾してもよいし、前記リン酸基における１つ以上の原子を修飾してもよい。前者の場合、例えば、リン酸基全体の置換でもよいし、欠失でもよい。

前記末端のヌクレオチド残基の修飾は、例えば、他の分子の付加等があげられる。前記他の分子は、例えば、前述のような標識物質、保護基等の機能性分子等があげられる。前記保護基は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｉ（ケイ素）、Ｂ（ホウ素）、エステル含有基等があげられる。前記標識物質等の機能性分子は、例えば、本発明のｓｓＰＮ分子の検出等に利用できる。

前記他の分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のリン酸基に付加してもよいし、スペーサーを介して、前記リン酸基または前記糖残基に付加してもよい。前記スペーサーの末端原子は、例えば、前記リン酸基の前記結合酸素、または、糖残基のＯ、Ｎ、ＳもしくはＣに、付加または置換できる。前記糖残基の結合部位は、例えば、３’位のＣもしくは５’位のＣ、またはこれらに結合する原子が好ましい。前記スペーサーは、例えば、前記ＰＮＡ等のヌクレオチド代替物の末端原子に、付加または置換することもできる。

前記スペーサーは、特に制限されず、例えば、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｎＮ−、−（ＣＨ_２）_ｎＯ−、−（ＣＨ_２）_ｎＳ−、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、無塩基糖、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミド、およびモルホリノ等、ならびに、ビオチン試薬およびフルオレセイン試薬等を含んでもよい。前記式において、ｎは、正の整数であり、ｎ＝３または６が好ましい。

前記末端に付加する分子は、これらの他に、例えば、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性担体（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コール酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）およびペプチド複合体（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射線標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン−イミダゾール複合体、テトラアザマクロ環のＥｕ^３＋複合体）等があげられる。

本発明のｓｓＰＮ分子は、前記５’末端が、例えば、リン酸基またはリン酸基アナログで修飾されてもよい。前記リン酸化は、例えば、５’一リン酸（(HO)₂(O)P-O-5’）、５’二リン酸（(HO)₂(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’三リン酸（(HO)₂(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’−グアノシンキャップ（７−メチル化または非メチル化、7m-G-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’−アデノシンキャップ（Ａｐｐｐ）、任意の修飾または非修飾ヌクレオチドキャップ構造（N-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’一チオリン酸（ホスホロチオエート：(HO)₂(S)P-O-5’）、５’一ジチオリン酸（ホスホロジチオエート：(HO)(HS)(S)P-O-5’）、５’−ホスホロチオール酸（(HO)₂(O)P-S-5’）、硫黄置換の一リン酸、二リン酸および三リン酸（例えば、５’−α−チオ三リン酸、５’−γ−チオ三リン酸等）、５’−ホスホルアミデート（(HO)₂(O)P-NH-5’、(HO)(NH₂)(O)P-O-5’）、５’−アルキルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、(OH)₂(O)P-5’-CH₂、Ｒはアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル等））、５’−アルキルエーテルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、Ｒはアルキルエーテル（例えば、メトキシメチル、エトキシメチル等））等があげられる。

前記ヌクレオチド残基において、前記塩基は、特に制限されない。前記塩基は、例えば、天然の塩基でもよいし、非天然の塩基でもよい。前記塩基は、例えば、天然由来でもよいし、合成品でもよい。前記塩基は、例えば、一般的な塩基、その修飾アナログ等が使用できる。

前記塩基は、例えば、アデニンおよびグアニン等のプリン塩基、シトシン、ウラシルおよびチミン等のピリミジン塩基等があげられる。前記塩基は、この他に、イノシン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌバラリン（ｎｕｂｕｌａｒｉｎｅ）、イソグアニシン（ｉｓｏｇｕａｎｉｓｉｎｅ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎｅ）等があげられる。前記塩基は、例えば、２−アミノアデニン、６−メチル化プリン等のアルキル誘導体；２−プロピル化プリン等のアルキル誘導体；５−ハロウラシルおよび５−ハロシトシン；５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン；６−アゾウラシル、６−アゾシトシンおよび６−アゾチミン；５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、５−ハロウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−アミノアリルウラシル；８−ハロ化、アミノ化、チオール化、チオアルキル化、ヒドロキシル化および他の８−置換プリン；５−トリフルオロメチル化および他の５−置換ピリミジン；７−メチルグアニン；５−置換ピリミジン；６−アザピリミジン；Ｎ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニンを含む）；５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン；ジヒドロウラシル；３−デアザ−５−アザシトシン；２−アミノプリン；５−アルキルウラシル；７−アルキルグアニン；５−アルキルシトシン；７−デアザアデニン；Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニン；２，６−ジアミノプリン；５−アミノ−アリル−ウラシル；Ｎ３−メチルウラシル；置換１，２，４−トリアゾール；２−ピリジノン；５−ニトロインドール；３−ニトロピロール；５−メトキシウラシル；ウラシル−５−オキシ酢酸；５−メトキシカルボニルメチルウラシル；５−メチル−２−チオウラシル；５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシル；５−メチルアミノメチル−２−チオウラシル；３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウラシル；３−メチルシトシン；５−メチルシトシン；Ｎ^４−アセチルシトシン；２−チオシトシン；Ｎ６−メチルアデニン；Ｎ６−イソペンチルアデニン；２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン；Ｎ−メチルグアニン；Ｏ−アルキル化塩基等があげられる。また、プリンおよびピリミジンは、例えば、米国特許第３，６８７，８０８号、「Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、８５８〜８５９頁、クロシュビッツ ジェー アイ（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ Ｊ．Ｉ．）編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９０、およびイングリッシュら（Ｅｎｇｌｉｓｃｈら）、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１、３０巻、ｐ．６１３に開示されるものが含まれる。

前記修飾ヌクレオチド残基は、これらの他に、例えば、塩基を欠失する残基、すなわち、無塩基のリボリン酸骨格を含んでもよい。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、米国仮出願第６０／４６５，６６５号（出願日：２００３年４月２５日）、および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／０７０７０号（出願日：２００４年３月８日）に記載される残基が使用でき、本発明は、これらの文献を援用できる。

３．本発明のｓｓＰＮ分子の合成方法
本発明のｓｓＰＮ分子の合成方法は、特に制限されず、従来公知の方法が採用できる。前記合成方法は、例えば、遺伝子工学的手法による合成法、化学合成法等があげられる。遺伝子工学的手法は、例えば、インビトロ転写合成法、ベクターを用いる方法、ＰＣＲカセットによる方法等があげられる。前記ベクターは、特に制限されず、プラスミド等の非ウイルスベクター、ウイルスベクター等があげられる。これに限定されない。前記化学合成法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法およびＨ−ホスホネート法等があげられる。前記化学合成法は、例えば、市販の自動核酸合成機を使用可能である。前記化学合成法は、一般に、アミダイトが使用される。前記アミダイトは、特に制限されず、市販のアミダイトとして、例えば、ＲＮＡ Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）、ＡＣＥアミダイト、ＴＯＭアミダイト、ＣＥＥアミダイト、ＣＥＭアミダイト、ＴＥＭアミダイト等があげられる。本発明のｓｓＰＮ分子については、例えば、前記式（Ｉ）で表わされるリンカー領域の合成の際、後述する本発明のモノマーを使用することが好ましい。

４．組成物
本発明の発現抑制用組成物は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であり、前記本発明のｓｓＰＮ分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明のｓｓＰＮ分子を含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現抑制用組成物は、例えば、発現抑制用試薬ということもできる。

本発明によれば、例えば、前記標的遺伝子が存在する対象に投与することで、前記標的遺伝子の発現抑制を行うことができる。

また、本発明の薬学的組成物は、前述のように、前記本発明のｓｓＰＮ分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明のｓｓＰＮ分子を含むことが特徴であり、その他の構成は何ら制限されない。本発明の薬学的組成物は、例えば、医薬品ということもできる。本発明の薬学的組成物は、例えば、医薬品ということもできる。

本発明によれば、例えば、遺伝子が原因となる疾患の患者に投与することで、前記遺伝子の発現を抑制し、前記疾患を治療することができる。本発明において、「治療」は、前述のように、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。

本発明において、治療の対象となる疾患は、特に制限されず、例えば、遺伝子の発現が原因となる疾患等があげられる。前記疾患の種類に応じて、その疾患の原因となる遺伝子を前記標的遺伝子に設定し、さらに、前記標的遺伝子に応じて、前記発現抑制配列を適宜設定すればよい。

具体例として、前記標的遺伝子を前記ＴＧＦ−β１遺伝子に設定し、前記遺伝子に対する発現抑制配列を前記ｓｓＰＮ分子に配置すれば、例えば、炎症性疾患、具体的には、急性肺傷害等の治療に使用できる。

本発明の発現抑制用組成物および薬学的組成物（以下、組成物という）の使用方法は、特に制限されず、例えば、前記標的遺伝子を有する投与対象に、前記ｓｓＰＮ分子を投与すればよい。

前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官等があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物等があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。

前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与対象が培養細胞の場合、例えば、トランスフェクション試薬を使用する方法、エレクトロポレーション法等があげられる。前記投与がｉｎ ｖｉｖｏの場合、例えば、経口投与でもよいし、非経口投与でもよい。前記非経口投与は、例えば、注射、皮下投与、局所投与等があげられる。

本発明の組成物は、例えば、本発明のｓｓＰＮ分子のみを含んでもよいし、さらにその他の添加物を含んでもよい。前記添加物は、特に制限されず、例えば、薬学的に許容された添加物が好ましい。前記添加物の種類は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。

本発明の組成物において、前記ｓｓＰＮは、例えば、前記添加物と複合体を形成してもよい。前記添加物は、例えば、複合化剤ということもできる。前記複合体により、例えば、前記ｓｓＰＮ分子を効率よくデリバリーできる。前記ｓｓＰＮ分子と前記複合化剤との結合は、特に制限されず、例えば、非共有結合等があげられる。前記複合体は、例えば、包接複合体等があげられる。

前記複合化剤は、特に制限されず、ポリマー、シクロデキストリン、アダマンチン等があげられる。前記シクロデキストリンは、例えば、線状シクロデキストリンコポリマー、線状酸化シクロデキストリンコポリマー等があげられる。

前記添加剤は、この他に、例えば、担体、標的細胞への結合物質、縮合剤、融合剤等があげられる。

前記担体は、例えば、高分子が好ましく、より好ましくは、生体高分子である。前記担体は、例えば、生分解性が好ましい。前記担体は、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、グロブリン等のタンパク質；例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸等の糖質；脂質等があげられる。前記担体は、例えば、合成ポリアミノ酸等の合成ポリマーも使用できる。前記ポリアミノ酸は、例えば、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル−マレイン酸無水物コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマー、又はポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ)等があげられる。

前記結合物質は、例えば、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントプロテインＡ、ムチン糖質、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビオチン、ネプロキシン（Ｎｅｐｒｏｘｉｎ)、ＲＧＤペプチド、ＲＤＧペプチド擬似体等があげられる。

前記融合剤および縮合剤は、例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）等のポリアミノ鎖等があげられる。ＰＥＩは、例えば、直鎖状および分岐状のいずれでもよく、また、合成物および天然物のいずれでもよい。前記ＰＥＩは、例えば、アルキル置換されてもよいし、脂質置換されてもよい。また、前記融合剤は、この他に、例えば、ポリヒスチジン、ポリイミダゾール、ポリピリジン、ポリプロピレンイミン、メリチン、ポリアセタール物質（例えば、カチオン性ポリアセタール等）等が使用できる。前記融合剤は、例えば、αらせん構造を有してもよい。前記融合剤は、例えば、メリチン等の膜崩壊剤でもよい。

本発明の組成物は、例えば、前記複合体の形成等について、米国特許第６，５０９，３２３号、米国特許公報第２００３／０００８８１８号、ＰＣＴ／ＵＳ０４／０７０７０号等を援用できる。

前記添加剤は、この他に、例えば、両親媒性分子等があげられる。前記両親媒性分子は、例えば、疎水性領域および親水性領域を有する分子である。前記分子は、例えば、ポリマーが好ましい。前記ポリマーは、例えば、二次構造を有するポリマーであり、反復性の二次構造を有するポリマーが好ましい。具体例としては、例えば、ポリペプチドが好ましく、より好ましくは、αらせん状ポリペプチド等である。

前記両親媒性ポリマーは、例えば、２つ以上の両親媒性サブユニットを有するポリマーでもよい。前記サブユニットは、例えば、少なくとも１つの親水性基および１つの疎水性基を有する環状構造を有するサブユニット等があげられる。前記サブユニットは、例えば、コール酸等のステロイド、芳香族構造等を有してもよい。前記ポリマーは、例えば、芳香族サブユニット等の環状構造サブユニットとアミノ酸の両方を有してもよい。

５．発現抑制方法
本発明の発現抑制方法は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明のｓｓＰＮ分子を使用することを特徴とする。本発明の発現抑制方法は、前記本発明のｓｓＰＮ分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。

本発明の発現抑制方法において、前記遺伝子の発現抑制のメカニズムは、特に制限されず、例えば、ＲＮＡ干渉による発現抑制等があげられる。ここで、本発明の発現抑制方法は、例えば、前記標的遺伝子の発現を抑制するＲＮＡ干渉を誘導する方法であり、前記本発明のｓｓＰＮ分子を使用することを特徴とする発現誘導方法ともいえる。

本発明の発現抑制方法は、例えば、前記標的遺伝子が存在する対象に、前記ｓｓＰＮ分子を投与する工程を含む。前記投与工程により、例えば、前記投与対象に前記ｓｓＰＮ分子を接触させる。前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官等があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物等があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｔｒｏでもよい。

本発明の発現抑制方法は、例えば、前記ｓｓＰＮ分子を単独で投与してもよいし、前記ｓｓＰＮ分子を含む前記本発明の組成物を投与してもよい。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類の種類に応じて適宜選択できる。

６．治療方法
本発明の疾患の治療方法は、前述のように、前記本発明のｓｓＰＮ分子を、患者に投与する工程を含み、前記ｓｓＰＮ分子が、前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明のｓｓＰＮ分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の発現抑制方法を援用できる。

７．ｓｓＰＮ分子の使用
本発明の使用は、前記標的遺伝子の発現抑制のための、前記本発明のｓｓＰＮ分子の使用である。また、本発明の使用は、ＲＮＡ干渉の誘導のための、前記本発明のｓｓＰＮ分子の使用である。

本発明の核酸分子は、疾患の治療に使用するための核酸分子であって、前記核酸分子は、前記本発明のｓｓＰＮ分子であり、前記ｓｓＰＮ分子が、前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。

８．モノマー
本発明のモノマーは、核酸合成用のモノマーであって、下記式（ＩＩ）の構造を有することを特徴とする。本発明のモノマーは、特に示さない限り、前記本発明のｓｓＰＮ分子の説明を援用できる。

本発明のモノマーを用いれば、例えば、前記本発明のｓｓＰＮ分子の合成において、前記式（Ｉ）で表わされるリンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を容易に合成できる。本発明のモノマーは、例えば、自動核酸合成用のアミダイトとして使用でき、例えば、一般的な核酸自動合成装置に適用可能である。前記合成方法は、例えば、ホスホロアミダイト法、および、Ｈ−ホスホネート法等があげられる。

前記式中、
Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ^１１およびＲ^２１は、それぞれ独立して、Ｈ、保護基またはリン酸保護基であり；
Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１1に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２1に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
Ｐｅは、ペプチド結合を含む任意の原子団であり、ただし、下記式（Ｉａ）は、ペプチドである。

前記式（ＩＩ）において、前記式（Ｉ）と同一箇所は、前記式（Ｉ）の説明を援用できる。具体的に、前記式（ＩＩ）において、例えば、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｌ^１、Ｌ^２、ｍ、ｎおよび環Ａは、前記式（Ｉ）の説明を全て援用できる。

前記式（ＩＩ）において、Ｒ^１およびＲ^２は、前述のように、それぞれ独立して、Ｈ、保護基またはリン酸保護基である。

前記保護基は、例えば、前記式（Ｉ）における説明と同様であり、具体例として、例えば、群Ｉから選択できる。前記群Ｉは、例えば、ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）基、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基、ＴＥＭ基、および、下記式（Ｐ１）または（Ｐ２）に示すシリル含有基があげられ、中でも、ＤＭｔｒ基および前記シリル含有基のいずれかであることが好ましい。

前記リン酸保護基は、例えば、下記式で表わすことができる。
−Ｐ（ＯＲ^６）（ＮＲ^７Ｒ^８）
前記式において、Ｒ^６は、水素原子または任意の置換基である。置換基Ｒ^６は、例えば、炭化水素基が好ましく、前記炭化水素基は、電子吸引基で置換されていてもよいし、置換されていなくてもよい。置換基Ｒ^６は、例えば、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、および、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル等の炭化水素等があげられ、さらに、電子吸引基で置換されていてもよいし、置換されていなくてもよい。置換基Ｒ^６は、具体的には、例えば、β−シアノエチル基、ニトロフェニルエチル基、メチル基等があげられる。

Ｒ^７およびＲ^８は、それぞれ、水素原子または任意の置換基であり、同一でも異なっていてもよい。置換基Ｒ^７およびＲ^８は、例えば、炭化水素基が好ましく、前記炭化水素基は、さらに任意の置換基で置換されていてもよいし、置換されていなくてもよい。前記炭化水素基は、例えば、前述した前記Ｒ^６での列挙と同様であり、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロピル基である。この場合、−ＮＲ^７Ｒ^８は、具体的には、例えば、ジイソプロピルアミノ基、ジエチルアミノ基、エチルメチルアミノ基等があげられる。または、置換基Ｒ^７およびＲ^８が一体となって、それらが結合する窒素原子とともに（すなわち、−ＮＲ^７Ｒ^８が一体となって）、窒素含有環（例えば、ピペリジル基、モルホリノ基等）を形成してもよい。

前記リン酸保護基の具体例としては、例えば、下記群ＩＩから選択できる。群ＩＩは、例えば、−P(OCH₂CH₂CN)(N(i-Pr)₂)、−P(OCH₃)(N(i-Pr)₂)等があげられる。前記式において、i-Prは、イソプロピルを示す。

前記式（ＩＩ）において、例えば、Ｒ^１１およびＲ^１２は、いずれか一方が、Ｈまたは保護基であり、他方が、Ｈまたはリン酸保護基である。好ましくは、例えば、Ｒ^１１が、前記保護基の場合、Ｒ^１２は、Ｈまたは前記リン酸保護基が好ましく、具体的には、Ｒ^１１が、前記群Ｉから選択される場合、Ｒ^１２は、Ｈまたは前記群ＩＩから選択されることが好ましい。また、好ましくは、例えば、Ｒ^１１が、前記リン酸保護基の場合、Ｒ^１２は、Ｈまたは前記保護基が好ましく、具体的には、Ｒ^１１が、前記群ＩＩから選択される場合、Ｒ^１２は、Ｈまたは前記群Ｉから選択されることが好ましい。

前記式（ＩＩ）の構造は、例えば、下記式（ＩＩ−１）および（ＩＩ−２）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（ＩＩ）と同じである。

前記式（ＩＩ−１）および（ＩＩ−２）において、ｎおよびｍは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（ＩＩ−１）において、ｎ＝５およびｍ＝４２があげられる。その構造を、下記式（ＩＩ−１ａ）に示す。

本発明のモノマーの製造方法は特に限定されないが、例えば、下記スキーム１のように、前記ペプチド（Ｉａ）のアミノ基が保護基Ｒ^３１で保護された化合物（Ｉｂ）から、縮合反応により下記化合物（Ｉｃ）を製造し、さらに（Ｉｃ）から（ＩＩａ）を製造し、（ＩＩａ）を（ＩＩ）に変換しても良い。ただし、下記スキーム１は例示であって、本発明は、これに制限されない。なお、下記化学式（Ｉｂ）および（Ｉｃ）において、保護基Ｒ^３１は、例えば、Ｆｍｏｃ（９-フルオレニルメチルオキシカルボニル基）、またはＺ（ベンジルオキシカルボニル）、ＢＯＣ（ｔ-ブトキシカルボニル）等が挙げられる。下記化学式（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（ＩＩａ）において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１１およびＲ^２１は、前記式（ＩＩ）と同様である。なお、下記化合物（ＩＩａ）は、前記式（ＩＩ）において、Ｘ^１がＯ、Ｘ^２がＯの化合物である。下記式（ＩＩ）におけるカルボニル酸素は、適宜、前記式（ＩＩ）におけるＸ^１およびＸ^２に変換しても良いし、変換する必要がなければ、下記化合物（ＩＩａ）を、そのまま化合物（ＩＩ）として用いても良い。

本発明のモノマーおよびその製造方法を、下記スキーム２にさらに具体的に例示する。ただし、下記スキーム２は例示であり、本発明は、これに限定されない。なお、下記スキーム２中、「Ｆｍｏｃ」は、９-フルオレニルメチルオキシカルボニル基を表し、「ｉＰｒ」は、イソプロピル基を表し、「Ｔｒ」は、トリチル基すなわちトリフェニルメチル基を表し、「ＯＤＭＴｒ」は、４，４’−ジメトキシトリチルオキシ基を表す。以下において同様である。

本発明のモノマーは、例えば、前記標識物質を含むことが好ましく、中でも、前記安定同位体を含むことが好ましい。前記標識物質は、前述の通りである。

本発明のモノマーが、前記安定同位体等の同位体を含む場合、例えば、簡便に、前記本発明のｓｓＰＮ分子に前記同位体を導入できる。同位体を有する前記モノマーは、例えば、前記同位体を導入したペプチド（Ｉａ）の原料から、合成可能である。本発明において、同位体を導入したペプチド（Ｉａ）の入手方法は特に限定されず、例えば、適宜な方法で製造しても良いし、市販品を入手可能であればそれを用いても良い。

安定同位体が導入されたペプチドとして、例えば、重水素（Ｄ）が導入されたペプチドは、例えば、下記スキーム３に示すように、ペプチド結合をＬｉＡｌＤ_４で処理することで製造できる。

安定同位体が導入されたペプチドとして、例えば、重酸素（^１８Ｏ）が導入されたペプチドは、例えば、下記式に示すように、塩基性条件下で、カルボン酸のメチルエステルをＨ_２ ^１８Ｏと反応させ、その後、下記式中のカルボン酸を、アミノ基またはイミノ基と縮合させてペプチド結合とすることにより製造できる。

その他、重窒素（^１５Ｎ）または重炭素（^１３Ｃ）導入等が導入されたペプチドの製造方法も、特に限定されず、適宜な方法で製造することができる。

このようにして、安定同位体が導入されたモノマーが合成可能であり、また、前記モノマーを合成用アミダイトとして使用することによって、安定同位体が前記リンカー領域に導入された核酸分子を合成可能である。

以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

（実施例Ａ１）
下記スキーム５に従い、へキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミドホスホロアミダイト（６）を合成した。なお、化合物（６）は、前記本発明のモノマーの一例である。また、下記スキーム５中の「Ｇｌｙ」は、下記式で表される構造を表し、すなわち、グリシンから、アミノ基の水素１原子およびカルボキシ基のＯＨを除いた構造の原子団である。以下、「Ｇｌｙ」は、特に断らない限り、下記式の構造を表す。また、下記スキーム５において、ＧｌｙのＮＨ側は、Ｆｍｏｃまたはカルボニル炭素に結合し、Ｇｌｙのカルボニル炭素（ＣＯ）側は、ＯＨまたはＮ原子に結合している。なお、「ＧｌｙＧｌｙ」は、Ｇｌｙが二つ連結してペプチド結合を形成した構造（下記）を表す。

（Ｇｌｙ）
―ＨＮ−ＣＨ_２−ＣＯ−

（ＧｌｙＧｌｙ）
―ＨＮ−ＣＨ_２−ＣＯ−ＨＮ−ＣＨ_２−ＣＯ−

（１）４−トリフルオロアセトアミドブタノール（化合物１）
４−アミノブタノール（２．５０ｇ， ２８．０５ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸エチル（１９．９２ｇ， １４０．２６ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１００ｍｌ）を室温下に終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮することにより、無色シロップ状の４−トリフルオロアセトアミドブタノール（１）（５．４４ｇ， ｑ．）を得た。

（２）４−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ブチルアミン（化合物２）
化合物１（４．１５ｇ， ２２．４０ｍｍｏｌ）に対し無水ピリジンを用いて３回共沸乾燥した。その共沸残渣に４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（９．６０ｇ， ２８．３ｍｍｏｌ）及び無水ピリジン（１００ｍｌ）を加え、室温下に終夜撹拌した。得られた反応混合物にメタノール（１０ｍｌ）を加え室温で３０分撹拌した後、減圧下に室温で溶媒を約２０ｍｌになるまで留去した。その後、ジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、飽和重曹水で３回洗浄し、更に飽和食塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。このようにして得られた未精製の残渣（９．００ｇ）のテトラヒドロフラン溶液（５０ｍｌ）に対し、水酸化ナトリウム（３．７１ｇ， ９２．７ｍｍｏｌ）の水溶液（７０ｍｌ）を加えた。この混合物を室温下で激しく撹拌しながら、テトラブチルアンモニウムフロリド３水和物（１８０ｍｇ）を加え、更に激しく室温で終夜撹拌した。得られた反応混合物に対し酢酸エチル（２００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）を加え有機層を分取した。水層は更に酢酸エチルで抽出し、抽出液は先に分取した有機層と併せて硫酸ナトリウムで乾燥した。その後、乾燥剤（硫酸ナトリウム）をろ別し溶媒を減圧下に留去した。生成した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９：１）＋０．０５％ピリジン）に付し、４−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ブチルアミン（２）（６．３６ｇ， ８７％）を得た。以下に、４−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ブチルアミン（２）の機器分析値を示す。

４−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ブチルアミン（２）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝７．４２−７．４５（ｍ， ２Ｈ）， ７．２６−７．３４（ｍ， １２Ｈ）， ７．１７−７．２０（ｍ，１Ｈ）， ６．８０−６．８４（ｍ， ４Ｈ）， ３．７９（ｓ， ６Ｈ）， ３．４８（ｓ， ２Ｈ， ＮＨ_２）， ３．０６（ｔ， ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．６７（ｔ， ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， １．６０−１．６５（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， １．４９−１．５５（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）

（３）Ｆｍｏｃ−グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（化合物３）
Ｆｍｏｃ−グリシルグリシン（Ｆｍｏｃ−ＧｌｙＧｌｙ−ＯＨ、Ｃｈｉｎａ Ｌａｎｇｃｈｅｍ社より購入）（２．５０ｇ， ７．０５ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．７５ｇ， ８．４６ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（２．５９ｇ， １６．９２ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（７０ｍｌ）に化合物２（３．３１ｇ， ８．４６ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（５０ｍｌ）をアルゴン雰囲気下に氷冷下で加えた。氷浴を除去した後、前記混合液をアルゴン雰囲気下に室温で終夜撹拌した。生成した沈殿をろ別し、ろ液を減圧下に３５℃で濃縮した。得られた残渣にジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、飽和食塩水で２回洗浄した。有機層を分取し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９５：５）＋０．０５％ピリジン、次いで、ジクロロメタン−メタノール（９：１）＋０．０５％ピリジン）に付し、無色シロップ状のＦｍｏｃ−グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（３）（３．４９ｇ， ６８％）を得た。

（４）グリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミド（化合物４）
化合物３（３．００ｇ， ４．１２ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（５ｍｌ）及びピペリジン（２．４ｍｌ）を室温で加え、室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９：１）＋０．０５％ピリジン）に付し、グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（４）（１．１３ｇ， ５４％）を得た。以下に、グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（４）の機器分析値を示す。

グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（４）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝７．４０−７．４２（ｍ， ２Ｈ）， ７．２５−７．３１（ｍ， １２Ｈ）， ７．１９−７．２１（ｍ，１Ｈ）， ６．８０−６．８４（ｍ， ４Ｈ）， ３．８９（ｄ， Ｊ＝５．９Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７９（ｓ， ６Ｈ）， ３．３７（ｓ， ２Ｈ）， ３．２５（ｔ， Ｊ＝５．８Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．６７（ｔ， Ｊ＝５．８Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， １．５７−１．６５（ｍ， ４Ｈ， ＣＨ_２）．

（５）ヒドロキシへキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（化合物５）
化合物４（１．０７ｇ， ２．１１ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリルで３回共沸乾燥後、アルゴン雰囲気下に６−ヒドロキシヘキサン酸（３３６ｍｇ， ２．５４ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（４８７ｍｇ， ２．５４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（７７８ｍｇ， ５．０８ｍｍｏｌ）、及び無水ジクロロメタン（２０ｍｌ）を室温で加え、１０分間撹拌した。このようにして得た混合物にトリエチルアミン（７７８ｍｇ， ５．０８ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下に室温で終夜撹拌した。得られた反応混合物にジクロロメタン（１５０ｍｌ）を加え飽和重曹水で３回、更に飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を分取し硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９５：５）＋０．０５％ピリジン）に付し、無色シロップ状のヒドロキシへキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（５）（８９０ｍｇ，６８％）を得た。以下に、ヒドロキシへキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（５）の機器分析値を示す。

ヒドロキシへキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルアミド（５）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝７．４１−７．４２（ｍ， ２Ｈ）， ７．２７−７．３４（ｍ， １２Ｈ）， ７．１８−７．２１（ｍ，１Ｈ）， ６．８１−６．８３（ｍ， ４Ｈ）， ３．９２（ｄ， Ｊ＝５．４３Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ３．８４（ｄ， Ｊ＝５．９Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７９（ｓ， ６Ｈ）， ３．６０（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ３．２３−３．２８（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ３．０５−３．１０（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．５６（ｔ， Ｊ＝７．３Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， １．５０−１．７２（ｍ， ８Ｈ）， １．３０−１．４５（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）．

（６）へキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミドホスホロアミダイト（化合物６）
化合物５（８２４ｍｇ， １．３３ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで３回共沸乾燥した。つぎに、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２７４ｍｇ， １．６０ｍｍｏｌ）を加え、減圧下に脱気してアルゴンガスを充填し、無水アセトニトリル（１ｍｌ）を加えた。さらに、２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（４８２ｍｇ， １．６０ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル溶液（１ｍｌ）を加え、混合物をアルゴン雰囲気下、室温で４時間撹拌した。得られた反応混合物にジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、飽和重曹水で２回、更に飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を分取し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残渣をアミノシリカを用いたカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−アセトン（７：３）＋０．０５％ピリジン）に付し、へキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミドホスホロアミダイト（６）（９３８ｍｇ， ８６％， ＨＰＬＣ ９８．２％）を得た。以下に、へキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミドホスホロアミダイト（６）の機器分析値を示す。

へキサン酸アミドグリシルグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシブチルアミドホスホロアミダイト（６）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝７．３６−７．４７（ｍ， ３Ｈ）， ７．２４−７．３０（ｍ， ５Ｈ）， ７．１８−７．１９（ｍ，１Ｈ）， ６．８０−６．８２（ｍ， ４Ｈ）， ３．９２（ｄ， Ｊ＝４．９ Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ３．８４（ｄ， Ｊ＝５．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７６（ｓ， ６Ｈ）， ３．７３−３．８５ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５４−３．６４（ｍ， ４Ｈ）， ３．１８−３．２５ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ３．０５−３．１０（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．６０（ｔ， Ｊ＝６．３ Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．２３（ｔ， ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， １．５５−１．６８（ｍ， ８Ｈ）， １．３０−１．４５（ｍ， ２Ｈ， ＣＨ_２）． １．１５−１．１８（ｍ， １２Ｈ）：
Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝１４６．５７．
ＨＰＬＣ：Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ６．２５ｍｉｎ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ−１０ＡＶ（ＸＢｒｉｄｇｅ ＯＳＴ Ｃ１８， ４．６ｍｍ×５０ｍｍ））

（実施例Ｂ１）ＲＮＡの固相合成
本発明のリンカーを有するＲＮＡ（本発明の一本鎖核酸分子）を合成した。ＲＮＡは、ホスホロアミダイト法に基づき、核酸合成機（商品名ＡＢＩ Ｅｘｐｅｄｉｔｅ（登録商標） ８９０９ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、アプライドバイオシステムズ）により、３’側から５’側に向かって合成した。前記合成には、ＲＮＡアミダイトとして、ＲＮＡ Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）を用いた（以下、同様）。前記アミダイトの脱保護は、定法に従い、合成したＲＮＡは、ＨＰＬＣにより精製した。以下の実施例において、ＲＮＡの合成は、特に示さない限り、同様に行った。

具体的には、前記スキーム５の前記化合物（６）を本発明のモノマーとして用い、本実施例のＲＮＡ（Ｅｘ）として、リンカー領域（Ｌｘ）および（Ｌｙ）の構造が、それぞれ下記化学式Ｌｇｇで表される一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を合成した。

（Ｌｇｇ［ＬｘまたはＬｙの構造］）
−Ｏ（ＣＨ_２）_５ＣＯ−ＧｌｙＧｌｙ−ＮＨ（ＣＨ_２）_４Ｏ−

まず、下記配列番号１に示す配列のＲＮＡを合成した。そして、前記ＲＮＡの５’末端に、前記化合物６を連結した。つぎに、前記配列番号１に示すＲＮＡの５’側に、前記化合物６を介して、下記配列番号２に示す配列のＲＮＡを連結した。さらに、前記配列番号２に示すＲＮＡの５’末端に、前記化合物６を連結した。さらに、前記配列番号２に示すＲＮＡの５’側に、前記化合物６を介して、下記配列番号３に示す配列のＲＮＡを連結し、実施例のｓｓＲＮＡを合成した。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUUC-3’（配列番号２）
5’-CAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-3’（配列番号３）

上記のようにして合成した実施例のｓｓＲＮＡを、以下、ＰＫ−００５２という。前記ＰＫ−００５２は、下記配列番号４に示すように、５’側から、前記配列番号３のＲＮＡ、前記配列番号２のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、前記配列番号３のＲＮＡ（Ｘｃに該当する）と前記配列番号２のＲＮＡ（内部領域Ｚに該当する）とがリンカーＬｘ（前記構造Ｌｇｇ）を介して連結され、前記配列番号２のＲＮＡ（内部領域Ｚに該当する）と前記配列番号１のＲＮＡ（Ｙｃに該当する）とがリンカーＬｙ（前記構造Ｌｇｇ）を介して連結されている構造である。また、下記配列に示すように、前記配列番号２のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および３のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−００５２は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。なお、下記配列において、下線部GUUGUCAUACUUCUCAUGG（配列番号５）が、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制に関与する領域である。

ＰＫ−００５２の発現抑制領域（配列番号５）
5’-GUUGUCAUACUUCUCAUGG-3’

一方、前記配列番号２のＲＮＡに代えて、下記配列番号６のＲＮＡを用い、前記配列番号３のＲＮＡに代えて、下記配列番号７のＲＮＡを用いること以外はＰＫ−００５２と同様にして、実施例の他のｓｓＲＮＡを合成した。これを、以下、ＰＫ−００５３という。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUUUCACUUAUCGUUGAUGGCUUC-3’（配列番号６）
5’-CCAUCAACGAUAAGUGAAAGCC-3’（配列番号７）

前記ＰＫ−００５３は、下記配列番号８に示すように、５’側から、前記配列番号７のＲＮＡ、前記配列番号６のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、前記配列番号７のＲＮＡ（Ｘｃに該当する）と前記配列番号６のＲＮＡ（内部領域Ｚに該当する）とがリンカーＬｘ（前記構造Ｌｇ）を介して連結され、前記配列番号６のＲＮＡ（内部領域Ｚに該当する）と前記配列番号１のＲＮＡ（Ｙｃに該当する）とがリンカーＬｙ（前記構造Ｌｇｇ）を介して連結されている構造である。また、下記配列に示すように、前記配列番号６のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および７のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−００５３は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。

（参考例Ａ１）
下記スキーム６に従い、ドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミドホスホロアミダイト（６）を合成した。なお、下記スキーム６中の「Ｇｌｙ」の構造は、前記スキーム５で説明したとおりである。下記スキーム６において、ＧｌｙのＮＨ側は、Ｆｍｏｃまたはカルボニル炭素に結合し、Ｇｌｙのカルボニル炭素（ＣＯ）側は、ＯＨまたはＮ原子に結合している。

（Ｇｌｙ）
―ＨＮ−ＣＨ_２−ＣＯ−

（１）１２−トリフルオロアセトアミドドデカノール（化合物１１）
１２−アミノドデカノール（４．８１ｇ， ２３．９ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸エチル（６．７９ｇ， ４７．８ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１００ｍｌ）を室温下に終夜撹拌した。その反応混合物を減圧下に濃縮することにより、無色シロップ状の４−トリフルオロアセトアミドブタノール（１１）（６．９８ｇ， ｑ．）を得た。

（２）１２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ドデカンアミン（化合物１２）
化合物１１（３．００ｇ， １０．０８ｍｍｏｌ）に対し無水ピリジンを用いて３回共沸乾燥した。その共沸残渣に４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（４．３２ｇ， １２．１ｍｍｏｌ）及び無水ピリジン（５０ｍｌ）を加え、室温下に終夜撹拌した。得られた反応混合物にメタノール（１０ｍｌ）を加え室温で３０分撹拌した後、減圧下に室温で溶媒を約３０ｍｌになるまで留去した。その後、ジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、飽和重曹水で３回洗浄し、更に飽和食塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。このようにして得られた未精製の残渣のメタノール溶液（１００ｍｌ）に、水酸化ナトリウム（２．０２ｇ， ５０．４０ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。その反応混合物を、減圧下に約３０ｍｌまで濃縮し、水（１００ｍｌ）及びジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、有機層を分取した。分取した有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。その後、乾燥剤（硫酸ナトリウム）をろ別し溶媒を減圧下に留去した。生成した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９５：５）＋０．０５％ピリジン）に付し、１２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ドデカンアミン（１２）（５．１９ｇ， ｑ．）を得た。

（３）Ｆｍｏｃ−グリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミド（化合物１３）
Ｆｍｏｃ−グリシン（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、和光純薬工業株式会社から購入）（２．００ｇ， ６．７３ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．６６ｇ， ８．０７ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（２．３１ｇ， １６．１４ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（７０ｍｌ）に化合物１２（４．０７ｇ， ８．０７ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（３０ｍｌ）をアルゴン雰囲気下に室温で加え、アルゴン雰囲気下に室温で終夜撹拌した。生成した沈殿をろ別し、ろ液を減圧下に３５℃で濃縮した。得られた残渣にジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、飽和重曹水で３回洗浄した。有機層を分取し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９５：５）＋０．０５％ピリジン）に付し、無色シロップ状のＦｍｏｃ−グリシルグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシブチルドデカンアミド（１３）（５．８８ｇ， ｑ．）を得た。

（４）グリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミド（化合物４）
化合物１３（５．８８ｇ， ６．７３ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）及びピペリジン（４．８ｍｌ）を室温で加え、室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９：１）＋０．０５％ピリジン）に付し、グリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミド（１４）（３．４４ｇ， ９１％）を得た。

（５）ヒドロキシドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミド（化合物１５）
化合物１４（３．１５ｇ， ５．６２ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで３回共沸乾燥後、アルゴン雰囲気下に１２−ヒドロキシドデカン酸（３．４１ｇ， ６．７４ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．２９ｇ， ６．７４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（２．０６ｇ， １３．４８ｍｍｏｌ）、及び無水ジクロロメタン（５０ｍｌ）を室温で加え、１０分間撹拌した。このようにして得た混合物にトリエチルアミン（２．０５ｇ， ２０．２２ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下に室温で終夜撹拌した。得られた反応混合物にジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え飽和重曹水で３回、更に飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を分取し硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（９５：５）＋０．０５％ピリジン）に付し、無色シロップ状のヒドロキシドデカンアミドグリシン−４，４’−ジメトキキシトリチルオキシドデカンアミド（１５）（２．９７ｇ， ７０％）を得た。

（６）ドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミドホスホロアミダイト（化合物１６）
化合物１５（２．７８ｇ， ３．７６ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで３回共沸乾燥した。つぎに、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（７７２ｍｇ， ４．５１ｍｍｏｌ）を加え、減圧下に脱気してアルゴンガスを充填し、無水アセトニトリル（３ｍｌ）を加えた。さらに、２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１．３６ｇ， ４．５１ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリルジクロロメタン溶液（３ｍｌ）を加え、混合物をアルゴン雰囲気下、室温で４時間撹拌した。得られた反応混合物にジクロロメタン（１５０ｍｌ）を加え、飽和重曹水で２回、更に飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を分取し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残渣をアミノシリカを用いたカラムクロマトグラフ（展開溶媒：ｎ−ヘキサン−アセトン（７：３）＋０．０５％ピリジン）に付し、ドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミドホスホロアミダイト（１６）（２．７２ｇ， ７７％， ＨＰＬＣ９８．５％）を得た。以下に、ドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミドホスホロアミダイト（１６）の機器分析値を示す。

ドデカン酸アミドグリシン−４，４’−ジメトキシトリチルオキシドデカンアミドホスホロアミダイト（１６）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝７．４１−７．４９（ｍ， ２Ｈ）， ７．２６−７．３０（ｍ， ６Ｈ）， ７．１７−７．１９（ｍ， １Ｈ）， ６．８０−６，８３（ｍ， ４Ｈ）， ６．４６−６．６２（ｍ， ２Ｈ）， ４．０７−４．２９（ｍ， ２Ｈ）， ３．８９（ｄ， Ｊ＝５．４Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７５−３．８７（ｍ， ４Ｈ）， ３．６７ （ｓ， ６Ｈ）， ３．４７−３．７０（ｍ， ４Ｈ）， ３．２０−３．２６（ｍ， ２Ｈ）， ３．０２（ｔ， Ｊ＝６．４Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_２）， ２．６３（ｔ， ６．４Ｈｚ， ２Ｈ， ＣＨ_３）， １．５６−１．６３（ｍ， ６Ｈ）， １．４７−１．５１（ｍ， ２Ｈ）， １．２４−１．３３（ｍ， ２６Ｈ）， １．１３−１．２０（ｍ， １２Ｈ）：
Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ＝１４６．６２．
ＨＰＬＣ：Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ５．３７ｍｉｎ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ−１０ＡＶ（ＸＢｒｉｄｇｅ ＯＳＴ Ｃ１８， ４．６ｍｍ×５０ｍｍ））

（参考例Ｂ１）ＲＮＡの固相合成
前記スキーム５の前記化合物６（本発明のモノマー）に代えて前記スキーム６の化合物１６を用い、リンカー領域（Ｌｘ）および（Ｌｙ）に相当する部分の構造を、前記Ｌｇｇに代えて下記Ｌｇとする以外は前記実施例Ｂ１のＰＫ−００５２と同様にして、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を合成した。

（Ｌｇ）
−Ｏ（ＣＨ_２）_１１ＣＯ−Ｇｌｙ−ＮＨ（ＣＨ_２）_１２Ｏ−

上記のようにして合成したｓｓＲＮＡを、以下、ＰＫ−００５４という。前記ＰＫ−００５４は、下記配列番号９に示すように、５’側から、前記配列番号３のＲＮＡ、前記配列番号２のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、各ＲＮＡが、前記構造Ｌｇを介して連結されている構造である。また、下記配列に示すように、前記配列番号２のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および３のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−００５４は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。なお、下記配列において、下線部GUUGUCAUACUUCUCAUGG（配列番号５）が、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制に関与する領域である。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUUC-3’（配列番号２）
5’-CAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-3’（配列番号３）

ＰＫ−００５４（配列番号９）
5’-CAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-Lg-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUUC-Lg-GAA-3’

ＰＫ−００５４の発現抑制領域（配列番号５）
5’-GUUGUCAUACUUCUCAUGG-3’

一方、前記配列番号２のＲＮＡに代えて、下記配列番号６のＲＮＡを用い、前記配列番号３のＲＮＡに代えて、下記配列番号７のＲＮＡを用いること以外はＰＫ−００５４と同様にして、ｓｓＲＮＡを合成した。これを、以下、ＰＫ−００５５という。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUUUCACUUAUCGUUGAUGGCUUC-3’（配列番号６）
5’-CCAUCAACGAUAAGUGAAAGCC-3’（配列番号７）

前記ＰＫ−００５５は、下記配列番号１０に示すように、５’側から、前記配列番号７のＲＮＡ、前記配列番号６のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、各ＲＮＡが、前記構造Ｌｇを介して連結されている構造である。また、下記配列に示すように、前記配列番号６のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および７のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−００５５は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。

ＰＫ−００５５（配列番号１０）
5’-CCAUCAACGAUAAGUGAAAGCC-Lg-GGCUUUCACUUAUCGUUGAUGGCUUC-Lg-GAA-3’

（参考例Ａ２）
下記スキーム７に従い、プロリン骨格を含む一本鎖核酸の合成原料であるモノマーを製造した。

（１）Ｆｍｏｃ−ヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１０４）
前記スキーム６の開始原料である化合物１０２（Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン）は、東京化成工業株式会社から購入した。この化合物１０２（１０．００ｇ、２９．６４ｍｍｏｌ）、４−アミノ−１−ブタノール（３．１８ｇ、３５.５６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０．９０ｇ、７０．７２ｍｍｏｌ）を混合し、前記混合物に対し、減圧下で脱気し、アルゴンガスを充填した。前記混合物に、無水アセトニトリル（１４０ｍＬ）を室温で加え、さらに、ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．３４ｇ、３５.５６ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル溶液（７０ｍＬ）を添加した後、アルゴン雰囲気下、室温で１５時間撹拌した。反応終了後、生成した沈殿をろ別し、回収したろ液について、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣にジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、飽和重曹水（２００ｍＬ）で洗浄した。そして、有機層を回収し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去し、その残渣にジエチルエーテル（２００ｍＬ）を加え、粉末化した。生じた粉末を濾取することにより、無色粉末状の化合物１０４（１０．３４ｇ、収率８４％）を得た。以下に、前記化合物１０４の機器分析結果を示す。

Ｆｍｏｃ−ヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（１０４）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ７．７６−７．８３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．５０−７．６３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．３８−７．４３ （ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２８−７．３３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．４０−４．４６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），４．１５−４．３１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），３．６７−３．７３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、３．３５−３．５２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、３．１８−３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．２０−２．５０（ｍ，４Ｈ）、１．８１−２．０３（ｍ，３Ｈ）、１．４７−１．５４（ｍ，２Ｈ）；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）： ｍ／ｚ４０９（Ｍ＋Ｈ^＋）．

（２）Ｆｍｏｃ−ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１１８）
Ｆｍｏｃ−ヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１０４）（２．００ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド（１．１１ｇ、３５ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（１０．９０ｇ、７１ｍｍｏｌ）を混合した。前記混合物に対し、減圧下に脱気し、アルゴンガスを充填した。前記混合物に、無水アセトニトリル（２０ｍＬ）を室温で加え、アルゴン雰囲気下、室温で終夜撹拌した。反応終了後、前記混合物にジクロロメタン（１５０ｍＬ）を加え、水で３回洗浄し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を回収し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去し、その残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＯＨ＝９５：５）に供し、無色シロップ状の化合物１１８（２．３５ｇ、収率９２％）を得た。以下に、前記化合物１１８の機器分析結果を示す。

Ｆｍｏｃ−ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（１１８）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ７．７６−７．７８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．５０−７．６３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．３８−７．４２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２９−７．３４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１０−４．４６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），３．４７−３．５９（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２）、３．２０−３．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ）、１．８５−１．９５（ｍ，２Ｈ）、１．４２−１．５５（ｍ，６Ｈ）、０．９６（ｓ，９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）、０．０２（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ_３）；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）： ｍ／ｚ ５２３（Ｍ＋Ｈ^＋）．

（３）ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１１９）
上記により得られた前記Ｆｍｏｃ−ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１１８）（１．１８ｇ、２．５ｍｍｏｌ）に対し、無水アセトニトリル（５ｍＬ）およびピペリジン（２．４ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応終了後、前記混合物にアセトニトリル（５０ｍＬ）を加え、不溶物をろ別した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＯＨ＝９：１）に供し、無色シロップ状の化合物１９（０．６１ｇ、収率９０％）を得た。以下に、前記化合物１１９の機器分析結果を示す。

ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（１１９）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ３．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，５．２Ｈｚ，ＣＨ）、３．６１−３．６４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、３．２２−３．２８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．９８−３．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、２．８６−２．９１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、２．０８−２．１７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．８６−１．９３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．６６−１．７５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、１．５２−１．５７（ｍ，４Ｈ）、０．８９（ｓ，９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）、０．０５（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ_３）；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）； ｍ／ｚ ３０１（Ｍ＋Ｈ^＋）．

（４）ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミドヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１２０）
上記により得られた前記ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１１９）（５５０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、６−ヒドロキシヘキサン酸（３００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４３４ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）、および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（６９５ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を混合した。前記混合物に、アルゴン雰囲気下、室温で、トリエチルアミン（６８９ｍｇ、６．８ｍｍｏｌ）を加え、その後、アルゴン雰囲気下、室温で、終夜撹拌した。前記混合液を飽和食塩水で洗浄した。有機層を回収し、前記を硫酸ナトリウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＯＨ＝９：１）に供し、無色シロップ状の化合物１２０（６９６ｍｇ、収率９２％）を得た。以下に、前記化合物１２０の機器分析結果を示す。

ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミドヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（１２０）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ４．５４（ｄ，１Ｈ，ＣＨ）、３．５８−３．６７（ｍ，５Ｈ）、３．５２−３．５６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），３．３２−３．３９（ｍ，１Ｈ），３．２０−３．２５（ｍ，２Ｈ）、２．４０−２．４３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、２．３３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．０５−２．２５（ｍ，２Ｈ）、１．９３−２．０３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．７５−１．８５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．５０−１．７３（ｍ，８Ｈ）、１．３７−１．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、０．８７（ｓ，９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）、０．０４（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ_３）；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）： ｍ／ｚ ４１５（Ｍ^＋＋１）．

（５）ＤＭＴｒ−ヒドロキシジアミド−Ｌ−プロリン（化合物１２１）
上記により得られた前記ｔ−ブチル−ジメチルシロキシアミドヒドロキシアミド−Ｌ−プロリン（化合物１２０）（６４０ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍＬ）と混合し、室温で共沸乾燥した。得られた残留物に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（６５７ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２ｍｇ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した後、メタノール（１ｍＬ）を加え、３０分室温で撹拌した。前記混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和重曹水で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣に、無水アセトニトリル（５ｍＬ）および１ｍｏｌ／Ｌテトラブチルアンモニウムフルオリド含有テトラヒドロフラン溶液（１．４２ｍＬ、テトラブチルアンモニウムフルオリド１．４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応終了後、前記混合物に酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、水で洗浄した後、飽和食塩水で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＯＨ＝９５：５、０．０５％ピリジン含有）に供し、無色シロップ状の化合物１２１（６８０ｍｇ、収率７３％）を得た。以下に、前記化合物１２１の機器分析結果を示す。

ＤＭＴｒ−ヒドロキシジアミド−Ｌ−プロリン（１２１）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ７．４１−７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２６−７．３３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．１８−７．２１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．１７−７．２１（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．８０−６．８４（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、４．５１−４．５３（ｄ，６．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）、３．７９（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ_３）、３．６１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１Ｈｚ，５．４Ｈｚ，ＣＨ_２）、３．５０−３．５４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、３．３６−３．４３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），３．２０−３．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．３８−２．４５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、２．３０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．０５−２．２５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．９２−２．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．７５−１．８３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．５２−１．６７（ｍ，８Ｈ）、１．３５−１．４５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）： ｍ／ｚ ６０２（Ｍ^＋）、３０３（ＤＭＴｒ^＋）．

（６）ＤＭＴｒ−ジアミド−Ｌ−プロリンアミダイトタイプＢ（化合物１２２）
上記により得られた前記ＤＭＴｒ−ヒドロキシジアミド−Ｌ−プロリン（化合物１２１）（６３７ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリルと混合し、室温で共沸乾燥した。得られた残留物に、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２０１ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加え、減圧下で脱気し、アルゴンガスを充填した。前記混合物に対し、無水アセトニトリル（１ｍＬ）を加え、さらに、２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３５０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル溶液（１ｍＬ）を加えた。この混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で４時間撹拌した。前記混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、前記有機層をろ過した。得られたろ液について、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣を、充填剤としてアミノシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ヘキサン：アセトン＝７：３）に供し、無色シロップ状の化合物１２２（６８０ｍｇ、純度９５％、収率７６％）を得た。以下に、前記化合物１２２の機器分析結果を示す。

ＤＭＴｒ−ジアミド−Ｌ−プロリンアミダイト（１２２）；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： δ７．４１−７．４３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２５−７．３２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．１７−７．２２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．８０−６．８３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、４．５３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）、３．７５−３．９３（ｍ，３Ｈ）、３．７９（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ_３）、３．４６−３．６８（ｍ，５Ｈ）、３．３４−３．４１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、３．１０−３．３１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、３．０５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．６２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．３９−２．４６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、２．２９（ｔ，７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２）、２．０３−２．１９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．９０−２．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．７０−１．８３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、１．５１−１．７１（ｍ，８Ｈ）、１．３５−１．４５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，６Ｈ， ＣＨ_３）、１．１６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ_３）；
Ｐ−ＮＭＲ （ＣＨ_３ＣＮ） δ１４６．９０；
ＭＳ（ＦＡＢ＋）： ｍ／ｚ ８０３（Ｍ^＋＋１）、３０３（ＤＭＴｒ^＋）．

（参考例Ｂ２）ＲＮＡの固相合成
前記スキーム５の前記化合物６（本発明のモノマー）に代えて前記化合物２２を用い、リンカー領域（Ｌｘ）および（Ｌｙ）に相当する部分の構造を、前記Ｌｇｇに代えて下記Ｌｐとする以外は前記実施例Ｂ１のＰＫ―００５２と同様にして、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を合成した。

上記のようにして合成したｓｓＲＮＡを、以下、ＰＫ−０００４という。前記ＰＫ−０００４は、下記配列番号１１に示すように、５’側から、前記配列番号３のＲＮＡ、前記配列番号２のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、各ＲＮＡが、前記構造Ｌｐを介して連結されている構造である。また、前記実施例Ｂ１でも説明したように、前記配列番号２のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および３のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−０００４は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。なお、前記ＰＫ−００５２と同じく、下線部GUUGUCAUACUUCUCAUGG（配列番号５）が、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制に関与する領域である。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUUC-3’（配列番号２）
5’-CAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-3’（配列番号３）

ＰＫ−０００４（配列番号１１）
5’-CAUGAGAAGUAUGACAACAGCC-Lp-GGCUGUUGUCAUACUUCUCAUGGUUC-Lp-GAA-3’

ＰＫ−０００４の発現抑制領域（配列番号５）
5’-GUUGUCAUACUUCUCAUGG-3’

一方、前記配列番号２のＲＮＡに代えて、下記配列番号６のＲＮＡを用い、前記配列番号３のＲＮＡに代えて、下記配列番号７のＲＮＡを用いること以外はＰＫ−０００４と同様にして、参考例の他のｓｓＲＮＡを合成した。これを、以下、ＰＫ−０００３という。

5’-GAA-3’（配列番号１）
5’-GGCUUUCACUUAUCGUUGAUGGCUUC-3’（配列番号６）
5’-CCAUCAACGAUAAGUGAAAGCC-3’（配列番号７）

前記ＰＫ−０００３は、下記配列番号１０に示すように、５’側から、前記配列番号７のＲＮＡ、前記配列番号６のＲＮＡ、および前記配列番号１のＲＮＡが前記順序で配列され、各ＲＮＡが、前記構造Ｌｐを介して連結されている構造である。また、前記実施例Ｂ１のＰＫ−００５３と同様に、前記配列番号６のＲＮＡ配列と、前記配列番号１および７のＲＮＡ配列は、相補的な配列を有している。このため、前記ＰＫ−０００３は、下記式に示すように、自己アニーリングしてステム構造をとっている。

ＰＫ−０００３（配列番号１２）
5’-CCAUCAACGAUAAGUGAAAGCC-Lp-GGCUUUCACUUAUCGUUGAUGGCUUC-Lp-GAA-3’

（実施例Ｂ２）ＨＣＴ１１６細胞におけるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制効果
本発明のＲＮＡを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制を確認した。

（１）材料および方法
実施例のＲＮＡ（Ｅｘ）として、前記実施例Ｂ１のｓｓＲＮＡ（ＰＫ−００５２およびＰＫ−００５３）を使用した。また、参考例のＲＮＡとして、前記参考例Ｂ１のｓｓＲＮＡ（ＰＫ−００５４およびＰＫ−００５５）および前記参考例Ｂ２のｓｓＲＮＡ（ＰＫ−０００４およびＰＫ−０００３）も使用した。前記各ＲＮＡを、所望の濃度（１０μｍｏｌ／Ｌ）となるように、注射用蒸留水（大塚製薬、以下同様）に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。

細胞は、ＨＣＴ１１６細胞（ＤＳファーマバイオメディカル）を使用し、培地は、１０ ％ＦＢＳを含むＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）培地を使用し、培養条件は、３７℃、５％ ＣＯ_２下とした。

まず、ＨＣＴ１１６細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、４００μｌずつ、２×１０^４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、前記ＲＮＡを、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、前記トランスフェクション試薬の添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。具体的には、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定し、トランスフェクションを行った。なお、前記ウェルにおいて、前記ＲＮＡの最終濃度は、１ｎｍｏｌ／Ｌ、５ｎｍｏｌ／Ｌ、２５ｎｍｏｌ／Ｌとした。

トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を４８時間培養した後、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、オランダ）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。次に、逆転写酵素（商品名ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ III、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、以下に示すように、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量および内部標準であるβ−アクチン遺伝子の発現量を測定した。前記ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量は、前記β−アクチン遺伝子の発現量により補正した。

前記ＰＣＲは、試薬としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ＦａｓｔＳｔａｒｔ ＤＮＡ Ｍａｓｔｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、機器としてＬｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ＤＸ４００（商品名、Ｒｏｃｈｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＧＡＰＤＨ遺伝子およびβ−アクチン遺伝子の増幅には、それぞれ、以下のプライマーセットを使用した。
ＧＡＰＤＨ遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
5’-GGAGAAGGCTGGGGCTCATTTGC-3’（配列番号１３）
5’-TGGCCAGGGGTGCTAAGCAGTTG-3’（配列番号１４）
β−アクチン遺伝子用プライマーセット
5’-GCCACGGCTGCTTCCAGCTCCTC-3’（配列番号１５）
5’-AGGTCTTTGCGGATGTCCACGTCAC-3’（配列番号１６）

なお、コントロール１として、前記（Ｂ）液１００μLのみを添加した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（−）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記ＲＮＡ溶液を未添加とし、前記（Ａ）１．５μｌと前記（Ｂ）とを合計１００μｌ添加した以外は、同様にして処理した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（ｍｏｃｋ）。

補正後のＧＡＰＤＨ遺伝子発現量について、コントロール（−）の細胞の発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞の発現量の相対値を求めた。

（２）結果
これらの結果を、図４に示す。図４は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフであり、縦軸は、相対遺伝子発現量である。

図４に示すように、ＰＫ−０００４、ＰＫ−００５２およびＰＫ−００５４は、ヒトＧＡＰＤＨを標的とした配列を組み込んでいるために、発現抑制効果を示した。これに対し、ＰＫ−０００３、ＰＫ−００５３およびＰＫ−００５５は、配列が異なるために、ＰＫ−０００４およびＰＫ−００５４と比較して発現抑制効果が低かった。すなわち、これらのＲＮＡは、標的塩基配列に対する反応特異性に優れていた。

また、実施例のｓｓＲＮＡであるＰＫ−００５２は、ｓｓＲＮＡ（一本鎖ＲＮＡ）であるために、ｓｉＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）と比較して、容易にかつ効率良く製造が可能であり、かつ、取り扱い易さにも優れていた。

さらに、実施例のｓｓＲＮＡであるＰＫ−００５２は、参考例のｓｓＲＮＡであるＰＫ−００５４およびＰＫ−０００４よりも優れた発現抑制効果を示した。また、合成の出発原料が、ＰＫ−０００４ではＬ−プロリンであるのに対し、ＰＫ−００５２ではグリシルグリシンであり、ＰＫ−００５２の方が原料がはるかに安価で入手しやすいため、製造の簡便さとコストにおいて圧倒的に有利である。

（参考例１）
フリー塩基の位置が異なるｓｓＲＮＡを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制を確認した。

（１）材料および方法
ＲＮＡとして、図５に示すｓｓＲＮＡを使用した。図５において、右端の番号は、配列番号を示す。図５において、５’側から、小文字下線の領域は、前記領域（Ｘｃ）、大文字下線の領域は、前記内部領域（Ｚ）、小文字下線の領域は、前記領域（Ｙｃ）を示す。前記Ｘｃと前記Ｚとの間が、リンカー領域（Ｌｘ）であり、前記Ｚと前記Ｙｃとの間が、リンカー領域（Ｌｙ）である。また、「Ｘｃ／Ｙｃ」は、前記領域（Ｘｃ）の塩基長（Ｘｃ）と、前記領域（Ｙｃ）の塩基長（Ｙｃ）との比を示す。図５において、「＊」は、フリー塩基を示す。

各ｓｓＲＮＡは、いずれも、内部領域（Ｚ）の塩基長を２６塩基、リンカー領域（Ｌｘ）の塩基長を７塩基、リンカー領域（Ｌｙ）の塩基長を４塩基とした。また、ＮＫ−００３６およびＮＫ−００４０は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｙｃ）との合計塩基数（Ｘｃ＋Ｙｃ）を２６塩基とし、それ以外は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｙｃ）との合計塩基数（Ｘｃ＋Ｙｃ）を２５塩基とした。そして、この条件の下、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基長を変化させた。これによって、ＮＫ−００３６およびＮＫ−００４０は、フリー塩基を有さない分子とした。また、これら以外の各ｓｓＲＮＡは、前記内部領域（Ｚ）における、二重鎖を形成しないフリー塩基を全て１塩基とし、且つ、前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基の位置を３’側から５’側に変動させた。

前記ＲＮＡを使用した以外は、前記実施例Ｂ２と同様にして、ＨＣＴ１１６細胞へのトランスフェクション、培養、ＲＮＡ回収、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲを行い、ＧＡＰＤＨ遺伝子の相対的発現量を測定した。トランスフェクション時のＲＮＡ濃度は、１０ｎｍｏｌ／Ｌとした。

（２）結果および考察
これらの結果を、図６に示す。図６は、終濃度１０ｎｍｏｌ／ＬのＲＮＡを使用した場合におけるＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。図６に示すように、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の長さを変化させたいずれのｓｓＲＮＡについても、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制が確認できた。

特に、前記領域（Ｘｃ）の塩基長と前記領域（Ｙｃ）の塩基長の差が大きくなるに従って、相対的に遺伝子の発現量が低下し、発現抑制活性が増加したことが確認された。すなわち、前記内部領域（Ｚ）におけるフリー塩基の位置を、前記内部領域の中央よりも、５’側または３’側に配置するほど、前記発現抑制活性を向上できることがわかった。

（参考例２）
フリー塩基の位置が異なるｓｓＲＮＡを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴＧＦ−β１遺伝子の発現抑制効果を確認した。

（１）材料および方法
ＲＮＡとして、以下に示すｓｓＲＮＡを使用した。下記配列において、「＊」は、フリー塩基を示す。

（１．２）遺伝子の発現抑制
凍結保存した前記ＲＮＡを、２０μｍｏｌ／Ｌとなるように、注射用蒸留水に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。そして、前記ＲＮＡ溶液を使用した以外は、前記実施例Ｂ９と同様にして、Ｈｅｐａｌ−６細胞への前記ｓｓＲＮＡのトランスフェクション、ＲＮＡ回収、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲを行い。ＴＧＦ−β１遺伝子の相対的発現量を測定した。トランスフェクション時のＲＮＡ濃度は、１ｎｍｏｌ／Ｌとした。

（２）結果
これらの結果を、図７に示す。図７は、ＴＧＦ−β１遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。図７に示すように、いずれのｓｓＲＮＡも、遺伝子発現抑制活性を示した。また、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から２番目および３番目としたＮＫ−００５５およびＮＫ−００６２は、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から４番目および５番目としたＮＫ−００３３およびＮＫ−００６１よりも、高い発現抑制活性を示した。この結果は、異なる遺伝子をターゲットとする前記参考例１と同様の挙動であった。

（参考例３）
フリー塩基の位置が異なるｓｓＲＮＡを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＬＡＭＡ１遺伝子の発現抑制を確認した。

（１）材料および方法
ＲＮＡとして、以下に示すｓｓＲＮＡを使用した。下記配列において、「＊」は、フリー塩基を示す。

前記ＲＮＡを使用した以外は、前記実施例Ｂ６と同様にして、２９３細胞へのトランスフェクションを行い、前記細胞を４８時間培養した。トランスフェクション時のＲＮＡ濃度は、１０ｎｍｏｌ／Ｌとした。そして、プライマーとして、以下のＬＡＭＡ１遺伝子用プライマーセットを使用した以外は、前記実施例Ｂ２と同様にして、ＲＮＡ回収、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲを行い、ＬＡＭＡ１遺伝子の発現量および内部標準であるβ−アクチン遺伝子の発現量を測定した。前記ＬＡＭＡ１遺伝子の発現量は、内部標準であるβ−アクチン遺伝子の発現量により補正した。
ＬＡＭＡ１遺伝子用プライマーセット
5’-AAAGCTGCCAATGCCCCTCGACC-3’（配列番号５０）
5’-TAGGTGGGTGGCCCTCGTCTTG-3’（配列番号５１）

また、前記実施例Ｂ２と同様にして、コントロール１（−）およびコントロール２（ｍｏｃｋ）に関しても、発現量を測定した。そして、補正後のＬＡＭＡ１遺伝子発現量について、コントロール（−）の細胞の発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞の発現量の相対値を求めた。

（２）結果
これらの結果を、図８に示す。図８は、２９３細胞におけるＬＡＭＡ１遺伝子の発現量の相対値を示すグラフである。図８に示すように、いずれのｓｓＲＮＡも、遺伝子発現抑制活性を示した。また、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から２番目としたＮＫ−００６４は、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から４番目としたＮＫ−００４３よりも、高い発現抑制活性を示した。この結果は、異なる遺伝子をターゲットとする前記参考例１および参考例２と同様の挙動であった。

（参考例４）
フリー塩基の位置が異なるｓｓＲＮＡを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＬＭＮＡ遺伝子の発現抑制を確認した。

（１）材料および方法
ＲＮＡとして、以下に示すｓｓＲＮＡを使用した。下記配列において、「＊」は、フリー塩基を示す。

前記ＲＮＡを使用した以外は、前記実施例Ｂ６と同様にして、Ａ５４９細胞へのトランスフェクションを行い、前記細胞を４８時間培養した。トランスフェクション時のＲＮＡ濃度は、３ｎｍｏｌ／Ｌとした。そして、プライマーとして、以下のＬＭＮＡ遺伝子用プライマーセットを使用した以外は、前記実施例Ｂ２と同様にして、ＲＮＡ回収、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲを行い、ＬＭＮＡ遺伝子の発現量および内部標準であるβ−アクチン遺伝子の発現量を測定した。前記ＬＭＮＡ遺伝子の発現量は、内部標準であるβ−アクチン遺伝子の発現量により補正した。
ＬＭＮＡ遺伝子用プライマーセット
5’-CTGGACATCAAGCTGGCCCTGGAC-3’（配列番号５４）
5’-CACCAGCTTGCGCATGGCCACTTC-3’（配列番号５５）

また、前記実施例Ｂ２と同様にして、コントロール１（−）およびコントロール２（ｍｏｃｋ）に関しても、発現量を測定した。そして、補正後のＬＭＮＡ遺伝子発現量について、コントロール（−）の細胞の発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞の発現量の相対値を求めた。

（２）結果
これらの結果を、図９に示す。図９は、Ａ５４９細胞におけるＬＭＮＡ遺伝子の発現量の相対値を示すグラフである。図９に示すように、いずれのｓｓＲＮＡも、遺伝子発現抑制活性を示した。また、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から２番目としたＮＫ−００６６は、フリー塩基の位置を、前記内部領域（Ｚ）における３’末端から４番目としたＮＫ−００６３よりも、高い発現抑制活性を示した。この結果は、異なる遺伝子をターゲットとする前記参考例１〜参考例３と同様の挙動であった。

参考例１〜参考例４の結果から、例えば、フリー塩基の位置に関しては、標的遺伝子の種類ならびにそれに対する発現抑制配列にかかわらず、同様の挙動を示すことは明らかである。そして、前記実施例Ｂ９においては、これらの参考例と同様の挙動を示していることは、前述の通りである。

（参考例５）
前記内部５’側領域（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の各長さを変化させたｓｓＲＮＡを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制を確認した。

（１）材料および方法
ＲＮＡとして、図１０に示すｓｓＲＮＡを使用した。図２２において、右端の番号は、配列番号を示す。図１０において、５’側から、小文字下線の領域は、前記領域（Ｘｃ）、大文字下線の領域は、前記内部領域（Ｚ）、小文字下線の領域は、前記領域（Ｙｃ）を示す。また、「Ｘｃ＋Ｙｃ／Ｘ＋Ｙ」は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｙｃ）の塩基長の合計と、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）の塩基長の合計との比を示す。図１０において、「＊」は、フリー塩基を示す。

各ｓｓＲＮＡは、いずれも、リンカー領域（Ｌｘ）の塩基長を７塩基、リンカー領域（Ｌｙ）の塩基長を４塩基、前記領域（Ｙｃ）の塩基長を１塩基とし、前記内部領域（Ｚ）の３’側から２番目の塩基を、フリー塩基とした。そして、前記内部領域（Ｚ）の塩基長と前記領域（Ｘｃ）の塩基長を変動させた。

特に示さない限りは、前記実施例Ｂ２と同様にして、前記ＲＮＡについて、ＨＣＴ１１６細胞へのトランスフェクション、培養、ＲＮＡ回収、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲを行い、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量の相対値を算出した。前記トランスフェクションの条件は、前記ウェルあたりの組成を下記表２と同様とした。

（２）結果および考察
これらの結果を、図１１に示す。図１１は、終濃度１ｎｍｏｌ／ＬのＲＮＡを使用した場合におけるＧＡＰＤＨ遺伝子発現量の相対値を示すグラフである。図１１に示すように、前記領域（Ｘ）、前記領域（Ｘｃ）、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の長さを変化させたいずれのｓｓＲＮＡについても、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現抑制が確認できた。

以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。

本発明のｓｓＰＮ分子によれば、遺伝子の発現抑制が可能であり、かつ、環状ではないため、その合成が容易であり、また、一本鎖であるため、二本鎖のアニール工程が無く、効率良く製造可能である。また、前記リンカー領域が前記非ヌクレオチド残基を含むため、例えば、従来のようなヌクレオチド残基の改変に限られず、例えば、前記リンカー領域における修飾等の改変も可能となる。このように、本発明のｓｓＰＮ分子は、前述のように標的遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、診断薬および農薬、ならびに、農薬、医学、生命科学等の研究ツールとして有用である。

Claims (53)

1. 標的遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含む一本鎖核酸分子であって、
   領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、
   前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結され、
   前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的であり、
   前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、前記発現抑制配列を含み、
   前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ペプチド構造を含むことを特徴とする一本鎖核酸分子。
2. 前記リンカー領域（Ｌｘ）が、下記式（Ｉ）で表わされる、請求項１記載の一本鎖核酸分子。
   

   

   前記式（Ｉ）中、
   Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
   Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
   Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
   Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
   ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
   Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
   Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
   ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
   Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
   ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
   ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
   前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、それぞれ、−ＯＲ^１−または−ＯＲ^２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合し、
   ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
   Ｐｅは、ペプチド結合を含む任意の原子団であり、ただし、下記式（Ｉａ）は、ペプチドである。
   

   
3. 前記式（Ｉ）中、
   Ｐｅが、鎖式原子団、脂環式原子団、芳香族性原子団、ヘテロ芳香族性原子団、およびヘテロ脂環式原子団からなる群から選択される少なくとも一つを含み、前記各原子団は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い、請求項２記載の一本鎖核酸分子。
4. 前記ペプチドを構成するアミノ酸が、天然アミノ酸および人工アミノ酸の少なくとも一方である請求項１から３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
5. 前記ペプチドを構成するアミノ酸が、タンパク質を構成するアミノ酸である請求項１から３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
6. 前記ペプチドを構成するアミノ酸が、グリシン、α−アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒドロキシリシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、トリプトファン、β−アラニン、１−アミノ−２−カルボキシシクロペンタン、アミノ安息香酸およびアミノピリジンカルボン酸からなる群から選択される少なくとも１種類であり、前記アミノ酸は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い、請求項１から３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
7. 前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、下記式（３）または式（５）の条件を満たす、請求項１から６のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
   Ｘ＞Ｘｃ ・・・（３）
   Ｘ＝Ｘｃ ・・・（５）
8. 前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、下記式（１１）の条件を満たす、請求項７記載の一本鎖核酸分子。
   Ｘ−Ｘｃ＝１、２または３ ・・・（１１）
9. 前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１９塩基〜３０塩基である、請求項１から８のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
10. さらに、領域（Ｙ）および領域（Ｙｃ）を有し、
    前記領域（Ｙｃ）が、前記領域（Ｙ）と相補的であり、
    前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とが連結して、内部領域（Ｚ）を形成している、請求項１から９のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
11. さらに、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、
    前記領域（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）との間に、前記リンカー（Ｌｙ）が連結している、請求項１０記載の一本鎖核酸分子。
12. 前記リンカー領域（Ｌｙ）が、下記式（Ｉ）で表わされる、請求項１１記載の一本鎖核酸分子。
    

    

    前記式（Ｉ）中、
    Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
    Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
    Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
    ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
    ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
    前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、それぞれ、−ＯＲ^１−または−ＯＲ^２−を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合し、
    ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
    Ｐｅは、ペプチド結合を含む任意の原子団であり、ただし、下記式（Ｉａ）は、ペプチドであり、
    

    

    前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記式（Ｉ）で表される場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）中のＸ^１、Ｘ^２、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ、同一でも異なっていても良い。
13. 前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）と、前記リンカー領域（Ｌｘ）の前記式（Ｉ）の構造との結合、ならびに、
    前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）と、前記リンカー領域（Ｌｙ）の前記式（Ｉ）の構造との結合が、それぞれ、下記（１）〜（４）のいずれか一つの条件を満たす、請求項１２記載の一本鎖核酸分子。
    条件（１）
    前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
    前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
    条件（２）
    前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
    前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
    条件（３）
    前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
    前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
    条件（４）
    前記領域（Ｘｃ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記領域（Ｘ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
    前記領域（Ｙｃ）は、−ＯＲ^２−を介して、前記領域（Ｙ）は、−ＯＲ^１−を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
14. 前記式（Ｉ）において、Ｌ^１は、前記ポリエーテル鎖であり、前記ポリエーテル鎖が、ポリエチレングリコールである、請求項２から１３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
15. 前記式（Ｉ）において、Ｌ^１の原子個数（ｎ）とＬ^２の原子個数（ｍ）との合計（ｍ＋ｎ）が、０〜３０の範囲である、請求項２から１４のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
16. 前記式（Ｉ）の構造が、下記式（Ｉ−１）または（Ｉ−２）であり、下記式において、ｎは、０〜３０の整数、ｍは、０〜３０の整数である、請求項２から１５のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
    

    

    
17. 前記式（Ｉ−１）において、ｎ＝５およびｍ＝４である、請求項１６記載の一本鎖核酸分子。
18. 前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）、前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記式（２）の条件を満たす、請求項７から１７のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
    Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ ・・・（２）
19. 前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかの条件を満たす、請求項７から１８のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
    （ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
    Ｘ＞Ｘｃ ・・・（３）
    Ｙ＝Ｙｃ ・・・（４）
    （ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
    Ｘ＝Ｘｃ ・・・（５）
    Ｙ＞Ｙｃ ・・・（６）
    （ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
    Ｘ＞Ｘｃ ・・・（７）
    Ｙ＞Ｙｃ ・・・（８）
    （ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
    Ｘ＝Ｘｃ ・・・（９）
    Ｙ＝Ｙｃ ・・・（１０）
20. 前記（ａ）〜（ｄ）において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差が、下記条件を満たす、請求項１９記載の一本鎖核酸分子。
    （ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
    Ｘ−Ｘｃ＝１、２または３ ・・・（１１）
    Ｙ−Ｙｃ＝０ ・・・（１２）
    （ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
    Ｘ−Ｘｃ＝０ ・・・（１３）
    Ｙ−Ｙｃ＝１、２または３ ・・・（１４）
    （ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
    Ｘ−Ｘｃ＝１、２または３ ・・・（１５）
    Ｙ−Ｙｃ＝１、２または３ ・・・（１６）
    （ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
    Ｘ−Ｘｃ＝０ ・・・（１７）
    Ｙ−Ｙｃ＝０ ・・・（１８）
21. 前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１〜１１塩基である、請求項７から２０のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
22. 前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１〜７塩基である、請求項２１記載の一本鎖核酸分子。
23. 前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１〜３塩基である、請求項２１記載の一本鎖核酸分子。
24. 前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１〜１１塩基である、請求項７から２３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
25. 前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１〜７塩基である、請求項２４記載の一本鎖核酸分子。
26. 前記領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１〜３塩基である、請求項２４記載の一本鎖核酸分子。
27. 少なくとも１つの修飾された残基を含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
28. 標識物質を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
29. 安定同位体を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
30. ＲＮＡ分子である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
31. 前記一本鎖核酸分子において、塩基数の合計が、５０塩基以上である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
32. 前記遺伝子の発現抑制が、ＲＮＡ干渉による発現抑制である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
33. 標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
    請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする、発現抑制用組成物。
34. 請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする、薬学的組成物。
35. 炎症治療用である、請求項３４記載の薬学組成物。
36. 標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、
    請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする発現抑制方法。
37. 前記一本鎖核酸分子を、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項３６記載の発現抑制方法。
38. 前記一本鎖核酸分子を、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで投与する、請求項３７記載の発現抑制方法。
39. 前記遺伝子の発現抑制が、ＲＮＡ干渉による発現抑制である、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の発現抑制方法。
40. 標的遺伝子の発現を抑制するＲＮＡ干渉を誘導する方法であって、
    請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする発現誘導方法。
41. 標的遺伝子の発現抑制のための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子の使用。
42. ＲＮＡ干渉の誘導のための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子の使用。
43. 疾患の治療に使用するための核酸分子であって、
    前記核酸分子は、請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子であり、
    前記一本鎖核酸分子が、前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする一本鎖核酸分子。
44. 核酸分子合成用のモノマーであって、
    下記式（ＩＩ）の構造を有することを特徴とするモノマー。
    

    

    前記式中、
    Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
    Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
    Ｒ^１１およびＲ^２１は、それぞれ独立して、Ｈ、保護基またはリン酸保護基であり；
    Ｌ^１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１1に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｌ^２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２1に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
    ｍは、０〜３０の範囲の整数であり；
    ｎは、０〜３０の範囲の整数であり；
    Ｐｅは、ペプチド結合を含む任意の原子団であり、ただし、下記式（Ｉａ）は、ペプチドである。
    

    
45. 前記式（ＩＩ）の構造が、下記式（ＩＩ−１）または（ＩＩ−２）であり、下記式において、ｎは、０〜３０の整数、ｍは、０〜３０の整数である、請求項４４記載のモノマー。
    

    

    
46. 前記式（ＩＩ−１）において、ｎ＝５およびｍ＝４である、請求項４５記載のモノマー。
47. 前記式（ＩＩ）において、Ｌ^１は、前記ポリエーテル鎖であり、前記ポリエーテル鎖が、ポリエチレングリコールである、請求項４４から４６のいずれか一項に記載のモノマー。
48. 前記式（ＩＩ）において、Ｌ^１の原子個数（ｎ）とＬ^２の原子個数（ｍ）との合計（ｍ＋ｎ）が、０〜３０の範囲である、請求項４４から４７のいずれか一項に記載のモノマー。
49. 標識物質を含む、請求項４４から４８のいずれか一項に記載のモノマー。
50. 安定同位体を含む、請求項４４から４９のいずれか一項に記載のモノマー。
51. 自動核酸合成用である、請求項４４から５０のいずれか一項に記載のモノマー。
52. 核酸分子の製造方法であって、
    請求項４４から５１のいずれか一項に記載のモノマーを使用することを特徴とする製造方法。
53. 前記核酸分子が、請求項１から３２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子である請求項５２記載の製造方法。

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