JP2013047259A - Method of treating pain and inflammation in neuronal tissue using il-31 antagonist - Google Patents

Method of treating pain and inflammation in neuronal tissue using il-31 antagonist Download PDF

Info

Publication number
JP2013047259A
JP2013047259A JP2012240592A JP2012240592A JP2013047259A JP 2013047259 A JP2013047259 A JP 2013047259A JP 2012240592 A JP2012240592 A JP 2012240592A JP 2012240592 A JP2012240592 A JP 2012240592A JP 2013047259 A JP2013047259 A JP 2013047259A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
antagonist
pain
cells
inflammation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2012240592A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
Yue Yao
ヤオ，ユエ
Janine Bilsborough
ビルスボロー，ジャニーン
Cecile Krejsa
クレイサ，セシル
Linda Zuckerman
ズッカーマン，リンダ
Mark Rogge
ローゲ，マーク
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zymogenetics Inc
Original Assignee
Zymogenetics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zymogenetics Inc filed Critical Zymogenetics Inc
Publication of JP2013047259A publication Critical patent/JP2013047259A/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To treat inflammation and pain and to ameliorate pain, tingle, sensitization, and tickle associated with neuropathies.SOLUTION: IL-31 antagonists inhibits, prevents, reduces, minimizes, limits or minimizes stimulation in neuronal tissues. Such antagonists include antibodies and fragments, derivatives or variants thereof.

Description

炎症過程は神経系を活性化して炎症性疼痛及び運動機能の破壊をもたらす。感覚神経の刺激は血管拡張及び血漿漏出を引き起こし、感覚刺激、過敏症及び疼痛をおこす神経因性炎症及び刺激に導く。   The inflammatory process activates the nervous system resulting in inflammatory pain and disruption of motor function. Sensory nerve stimulation causes vasodilation and plasma leakage, leading to neurogenic inflammation and stimulation causing sensory stimulation, hypersensitivity and pain.

神経因性炎症は、組織中の侵害受容性及び温度感受性の末端の活性化によって引き起こされ、そして、アレルギーを含む自己免疫疾患などの生まれつきの状態により、ウイルス感染により、並びに傷害により引き起こされることができる。これらの状態に由来する神経因性炎症は、圧力、接触、温度、疼痛、かゆみ、くすぐったさ、うずき及び無感覚などの感覚に関与する様々な感覚受容体からなる体性感覚系に影響しうる。活性化された神経はサイトカイン分泌の誘導、単球の活性化及び化学走性によって慢性の炎症を永続化させることができる。   Neurogenic inflammation is caused by activation of nociceptive and temperature-sensitive terminals in tissues and can be caused by natural conditions such as autoimmune diseases including allergies, by viral infections, and by injury. it can. Neurogenic inflammation resulting from these conditions can affect the somatosensory system consisting of various sensory receptors involved in sensations such as pressure, contact, temperature, pain, itching, tickle, tingling and numbness . Activated nerves can perpetuate chronic inflammation by inducing cytokine secretion, monocyte activation and chemotaxis.

神経因性炎症において活性のタンパク質は、病気の診断及び治療への治療的アプローチの標的となることができる。   Proteins active in neurogenic inflammation can be targets for therapeutic approaches to disease diagnosis and treatment.

疼痛の治療に使用される薬物の例はニューロンチン（Neurontin）（ガバペンチン）であり、これは、ヘルペス後神経痛としての糖尿病性末梢神経障害の治療に使用される。したがって、神経障害性疼痛を治療するためのさらなる医薬が必要である。   An example of a drug used to treat pain is Neurontin (gabapentin), which is used to treat diabetic peripheral neuropathy as postherpetic neuralgia. Therefore, there is a need for additional medicaments for treating neuropathic pain.

以下の定義は、本明細書に記載の発明の理解を容易にするために提供される。   The following definitions are provided to facilitate understanding of the invention described herein.

「抗体」又は「抗体ペプチド」という用語は、無傷の抗体又は特定の結合について無傷の抗体と競合するその結合断片をさし、そして、キメラ、ヒト化、完全にヒトの、及び二重特異性抗体を含む。ある実施態様においては、結合断片は組換えＤＮＡ技術によって作られる。さらなる実施態様においては、結合断片は無傷の抗体の酵素的又は化学的切断によって作られる。結合断片は、Fab、Fab’、F(ab').sub.2、Fv、及び単鎖抗体を含むが、これらに限定されない。   The term “antibody” or “antibody peptide” refers to an intact antibody or a binding fragment thereof that competes with the intact antibody for specific binding and is chimeric, humanized, fully human, and bispecific. Contains antibodies. In some embodiments, the binding fragment is made by recombinant DNA technology. In a further embodiment, the binding fragment is made by enzymatic or chemical cleavage of an intact antibody. Binding fragments include, but are not limited to, Fab, Fab ', F (ab'). Sub.2, Fv, and single chain antibodies.

「単離された抗体」という用語は、その自然の環境の成分から同定され、かつ分離及び／又は回収された抗体をさす。その自然の環境の混入成分は、抗体の診断的又は治療的用途を妨害するであろう物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク性又は非タンパク性溶質を含みうる。実施態様においては、抗体は、（１）ローリー法によって測定して、抗体の９９重量％超を含む、９５重量％超まで精製され、（２）スピニングカップ配列決定装置を用いてN-末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで精製され、又は（３）クマシーブルー又は好ましくは銀染色を用いる、還元条件又は非還元条件下でのSDS-PAGEによって均一となるまで精製される。単離された抗体は、インサイチュの組換え細胞内の抗体を含み、これは、抗体の自然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないからである。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも１つの精製ステップによって調製されるだろう。   The term “isolated antibody” refers to an antibody that has been identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. Contaminating components of its natural environment are substances that will interfere with the diagnostic or therapeutic use of the antibody and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. In embodiments, the antibody is (1) purified to greater than 95% by weight, as measured by the Raleigh method, including greater than 99% by weight of the antibody, and (2) N-terminal or Purified to an extent sufficient to obtain at least 15 residues of the internal amino acid sequence, or (3) until homogenous by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or preferably silver staining Purified. Isolated antibody includes the antibody in situ within recombinant cells since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. Ordinarily, however, isolated antibody will be prepared by at least one purification step.

「変異形」抗−IL-31抗体は、本明細書中で、「親」抗−IL-31抗体アミノ酸配列中での1つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失及び／又は置換によって、親抗体配列とはアミノ酸配列において異なる分子をさす。ある実施態様においては、変異形は、親抗体の１つ以上の超可変領域中に１つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、変異形は少なくとも１つ、例えば、約１〜約１０、そして約２〜約５の置換を親抗体の１つ以上の超可変領域中に含んでよい。通常、変異形は、親抗体重鎖又は軽鎖可変ドメイン配列と少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、そして最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有する。この配列に関する同一性又は相同性は、配列を整列化し、そして必要に応じてギャップを導入して最大の配列同一性パーセントを達成した後の、親抗体残基と同一の候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書中で定義される。抗体配列のN-末端、C-末端又は内部での伸長、欠失又は挿入のいずれも、配列同一性又は相同性に影響を与えるものと解してはならない。変異形は、ヒトIL-31に結合する能力を保持し、そして好ましくは親抗体のものよりも優れた性質を有する。例えば、変異形は、より強力な結合親和性、IL-31誘導性の免疫細胞の刺激を阻害するための亢進された能力を有する。かかる性質を分析するためには、例えば、変異形のFab形態を親抗体のFab形態に対して、又は変異形の完全長形態を親抗体の完全長形態に対して比較しなければならない、それは、抗-IL-31抗体のフォーマットが本明細書中に開示された生理活性アッセイにおいてその活性に影響を与えることがわかったからである。本明細書中で特に着目の変異形抗体は、親抗体に比較して、少なくとも約１０倍、好ましくは少なくとも約２０倍、そして最も好ましくは少なくとも約５０倍の生理活性の亢進を示すものである。   A “variant” anti-IL-31 antibody is herein defined by the addition, deletion and / or substitution of one or more amino acid residues in the “parent” anti-IL-31 antibody amino acid sequence. A molecule that differs in amino acid sequence from a parent antibody sequence. In certain embodiments, the variant comprises one or more amino acid substitutions in one or more hypervariable regions of the parent antibody. For example, a variant may contain at least one, for example from about 1 to about 10, and from about 2 to about 5 substitutions in one or more hypervariable regions of the parent antibody. Usually, variants are at least 75% of the parent antibody heavy or light chain variable domain sequence, more preferably at least 80%, more preferably at least 85%, more preferably at least 90%, and most preferably at least 95%. Has amino acid sequence identity. Identity or homology for this sequence is defined as the number of amino acid residues in the candidate sequence that are identical to the parent antibody residue after aligning the sequences and introducing gaps as necessary to achieve the maximum percent sequence identity. Defined herein as a percentage of groups. Neither N-terminal, C-terminal or internal extensions, deletions or insertions in the antibody sequence shall be construed as affecting sequence identity or homology. The variant retains the ability to bind human IL-31 and preferably has properties superior to those of the parent antibody. For example, the variants have a stronger binding affinity, an enhanced ability to inhibit IL-31 induced immune cell stimulation. In order to analyze such properties, for example, the variant Fab form must be compared to the Fab form of the parent antibody, or the full-length form of the variant to the full-length form of the parent antibody. This is because it was found that the format of the anti-IL-31 antibody affects its activity in the bioactivity assay disclosed herein. Variant antibodies of particular interest herein are those that exhibit an increase in physiological activity of at least about 10 times, preferably at least about 20 times, and most preferably at least about 50 times compared to the parent antibody. .

本明細書中で使用される「親抗体」という用語は、変異形の調製に使用されるアミノ酸配列によってコードされる抗体をさす。好ましくは、親抗体は、ヒトフレームワーク領域を有し、存在する場合にはヒト抗体定常領域を有する。例えば、親抗体はヒト化されているか又はヒト抗体であってよい。   As used herein, the term “parent antibody” refers to an antibody encoded by an amino acid sequence used to prepare a variant. Preferably, the parent antibody has a human framework region and, if present, a human antibody constant region. For example, the parent antibody can be humanized or a human antibody.

「アゴニスト」は、他の分子の活性、活性化又は機能を増加させる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子、又は小分子（１０ｋD未満）を含む任意の化合物である。例えば、IL-31アゴニストは、NK細胞、T細胞サブセット、及びB細胞サブセット及び樹状細胞の刺激を引き起こす。   An “agonist” is any compound, including proteins, polypeptides, peptides, antibodies, antibody fragments, large molecules, or small molecules (less than 10 kD) that increases the activity, activation or function of other molecules. For example, IL-31 agonists cause stimulation of NK cells, T cell subsets, and B cell subsets and dendritic cells.

「アンタゴニスト」という用語は、他の分子の活性、活性化又は機能を減少させるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子、又は小分子（１０ｋD未満）を含む任意の化合物をさす。IL-31アンタゴニストは、NK細胞、T細胞サブセット及びB細胞サブセット及び樹状細胞の免疫機能の低下；IL-31タンパク質の相互作用がブロックされ、阻害され、低下させられ、アンタゴナイズされ又は中和されるようなIL-31との結合をもたらす。   The term “antagonist” refers to any compound, including proteins, polypeptides, peptides, antibodies, antibody fragments, large molecules, or small molecules (less than 10 kD) that reduce the activity, activation or function of other molecules. IL-31 antagonists reduce immune function of NK cells, T cell subsets and B cell subsets and dendritic cells; IL-31 protein interactions are blocked, inhibited, reduced, antagonized or neutralized Resulting in binding to IL-31.

「多重特異性」又は「多機能性」抗体以外の「二価抗体」は、ある実施態様においては、同一の抗原特異性を有する結合部位を含むと理解される。   A “bivalent antibody” other than a “multispecific” or “multifunctional” antibody is understood to include, in certain embodiments, binding sites having the same antigen specificity.

「二重特異性」又は「二機能性」抗体は、2つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有するハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合又はFab'断片の連結を含むがこれらに限定されない様々な方法によって作られてよい。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)；Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)を参照のこと。   A “bispecific” or “bifunctional” antibody is a hybrid antibody having two different heavy / light chain pairs and two different binding sites. Bispecific antibodies may be made by a variety of methods including, but not limited to, fusion of hybridomas or linking of Fab ′ fragments. See, for example, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148: 1547-1553 (1992).

「キメラ抗体」（単数及び複数）という用語は、その軽鎖及び重鎖遺伝子が、異なる種に属するイムノグロブリン可変領域及び定常領域遺伝子から、典型的には遺伝子工学によって構築された抗体をさす。例えば、マウスモノクローナル抗体の遺伝子からの様々なセグメントが、ガンマ１及びガンマ３などのヒト定常セグメントに結合されてよい。したがって、典型的な治療用キメラ抗体は、マウス抗体からの可変ドメイン又は抗原結合ドメインとヒト抗体からの定常ドメインからなるが、他の哺乳動物種も使用されてよい。   The term “chimeric antibody” (s) refers to an antibody whose light and heavy chain genes are typically constructed by genetic engineering from immunoglobulin variable and constant region genes belonging to different species. For example, various segments from the gene of a mouse monoclonal antibody may be linked to human constant segments such as gamma 1 and gamma 3. Thus, a typical therapeutic chimeric antibody consists of a variable or antigen binding domain from a murine antibody and a constant domain from a human antibody, although other mammalian species may also be used.

「エピトープ」という用語は、イムノグロブリン又はT細胞受容体に特異的に結合することのできる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性を有する表面の基からなり、そして通常は特異的な三次元構造特性並びに特異的な電荷特性を有する。より特別には、本明細書中で使用される「IL-31」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはマウス又はヒトにおいて抗原性又は免疫原性の活性を有するIL-31ポリペプチドの部分をさす。免疫原性の活性を有するエピトープは、動物において抗体反応を誘発するIL-31ポリペプチドの部分である。免疫原性の活性を有するエピトープは、抗体が免疫特異的にそれに結合する、と、イムノアッセイなどの本分野で周知の任意の方法によって決定されたIL-31ポリペプチドの部分である。抗原エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。   The term “epitope” includes any protein determinant capable of specific binding to an immunoglobulin or T cell receptor. Epitopic determinants usually consist of chemically active surface groupings of molecules such as amino acids or sugar side chains and usually have specific three dimensional structural characteristics as well as specific charge characteristics. More specifically, the term “IL-31” as used herein refers to an IL-31 poly having an antigenic or immunogenic activity in an animal, preferably a mammal, most preferably a mouse or a human. Refers to the peptide part. An epitope having immunogenic activity is that portion of an IL-31 polypeptide that elicits an antibody response in an animal. An epitope having immunogenic activity is a portion of an IL-31 polypeptide determined by any method known in the art, such as an immunoassay, to which an antibody binds immunospecifically. An antigenic epitope need not necessarily be immunogenic.

本明細書中で使用される場合、「エピトープタグをつけた」という用語は、「エピトープタグ」に融合された抗−IL-31抗体をさす。エピトープタグポリペプチドは、それに対して抗体が作製可能であるエピトープを提供するために十分な残基を有するが、IL-31抗体の活性を妨害しないように十分に短いものである。エピトープタグは、抗体が実質的に他のエピトープと交差反応しないように十分にユニークであることが好ましい。好適なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６アミノ酸残基、そして通常は約８〜５０アミノ酸残基（好ましくは約９〜３０残基）を有する。例は、flu HAタグポリペプチド及びその抗体12CA5（Field et al. Mol. Cell. Biol. 8:2159-2165 (1988)）；c-mycタグ及びそれに対する8F9、3C7、6E10、G4、B7及び9E10抗体（Evan et al., Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616 (1985)）；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質D（gD）タグ及びその抗体（Paborsky et al., Protein Engineering 3(6):547-553 (1990)）を含む。ある実施態様においては、エピトープタグは、「サルベージ受容体結合エピトープ」である。本明細書中で使用される「サルベージ受容体結合エピトープ」は、IgG分子のインビボでの血清半減期を増加させることに関与する、IgG分子のFc領域のエピトープをさす（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4）。 As used herein, the term “epitope tagged” refers to an anti-IL-31 antibody fused to an “epitope tag”. An epitope tag polypeptide has sufficient residues to provide an epitope against which an antibody can be made, but is short enough so as not to interfere with the activity of the IL-31 antibody. The epitope tag is preferably sufficiently unique so that the antibody does not substantially cross-react with other epitopes. Suitable tag polypeptides generally have at least 6 amino acid residues, and usually about 8-50 amino acid residues (preferably about 9-30 residues). Examples include the flu HA tag polypeptide and its antibody 12CA5 (Field et al. Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165 (1988)); c-myc tag and 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 and 9E10 antibody (Evan et al., Mol. Cell. Biol. 5 (12): 3610-3616 (1985)); and herpes simplex virus glycoprotein D (gD) tag and its antibody (Paborsky et al., Protein Engineering 3 (6): 547-553 (1990)). In some embodiments, the epitope tag is a “salvage receptor binding epitope”. As used herein, “salvage receptor binding epitope” refers to an epitope of the Fc region of an IgG molecule that is involved in increasing the in vivo serum half-life of the IgG molecule (eg, IgG 1 , IgG 2, IgG 3, or IgG 4).

本明細書中で使用される用語「断片」は、IL-31ポリペプチドのアミノ酸配列又はIL-31ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体の少なくとも５つの連続したアミノ酸残基、少なくとも１０の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０の連続したアミノ酸残基、少なくとも７０の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０の連続したアミノ酸残基、少なくとも１００の連続したアミノ酸残基、少なくとも１２５の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチド又はポリペプチドをさす。   The term “fragment” as used herein refers to the amino acid sequence of an IL-31 polypeptide or at least 5 consecutive amino acid residues of an antibody that immunospecifically binds to an IL-31 polypeptide, at least 10 consecutive At least 15 consecutive amino acid residues, at least 20 consecutive amino acid residues, at least 25 consecutive amino acid residues, at least 40 consecutive amino acid residues, at least 50 consecutive amino acid residues, At least 60 contiguous amino acid residues, at least 70 contiguous amino acid residues, at least 80 contiguous amino acid residues, at least 90 contiguous amino acid residues, at least 100 contiguous amino acid residues, at least 125 contiguous amino acid residues Amino acid residue, an amino acid sequence of at least 150 consecutive amino acid residues A peptide or polypeptide containing.

本明細書中で使用される用語「イムノグロブリン」は、イムノグロブリン遺伝子によって実質的にコードされた１つ以上のポリペプチドから成るタンパク質をさす。イムノグロブリンの１つの形態は、抗体の基本的構造単位を構成する。この形態はテトラマーであり、それぞれが１つの軽鎖と１つの重鎖を有する、2つの同一のイムノグロブリン鎖の対から成る。各対においては、軽鎖と重鎖の可変領域が一緒になって抗原への結合に関与し、そして定常領域は抗体エフェクター機能に関与する。   The term “immunoglobulin” as used herein refers to a protein consisting of one or more polypeptides substantially encoded by immunoglobulin genes. One form of immunoglobulin constitutes the basic structural unit of an antibody. This form is a tetramer and consists of two identical pairs of immunoglobulin chains, each with one light chain and one heavy chain. In each pair, the light and heavy chain variable regions are together responsible for binding to the antigen, and the constant region is responsible for antibody effector function.

完全長イムノグロブリン「軽鎖」は、NH2末端における可変領域遺伝子及びCOOH末端におけるカッパ又はラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長イムノグロブリン「重鎖」は、可変領域遺伝子及び上記の定常領域遺伝子のうちの他の1つによって同様にコードされる（約３３０アミノ酸）。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ又はイプシロンに分類され、そして、抗体アイソタイプを（IgG1、IgG4を含む）IgG、IgM、IgA、IgD及びIgEとそれぞれ定義する。軽鎖及び重鎖内では、可変領域と定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「J」領域によって結合され、重鎖は約１０アミノ酸以上の「D」領域も含む（一般的には、その全体が参考文献として組み込まれるFundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. 1989), Ch.7を参照のこと）。   A full-length immunoglobulin “light chain” is encoded by a variable region gene at the NH 2 terminus and a kappa or lambda constant region gene at the COOH terminus. A full-length immunoglobulin “heavy chain” is similarly encoded by the variable region gene and the other one of the constant region genes described above (approximately 330 amino acids). Heavy chains are classified as gamma, mu, alpha, delta, or epsilon, and define antibody isotypes as IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE (including IgG1, IgG4), respectively. Within the light and heavy chains, the variable and constant regions are joined by a “J” region of about 12 or more amino acids, and the heavy chain also includes a “D” region of about 10 or more amino acids (typically its Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, NY 1989), Ch. 7, incorporated by reference in its entirety).

イムノグロブリン軽鎖又は重鎖の可変領域は、3つの超可変領域によって中断された「フレームワーク」領域から成る。したがって、「超可変領域」は、抗原との結合に関与する抗体のアミノ酸残基をさす。超可変領域は、「相補性決定領域」又は「CDR」由来のアミノ酸残基を含む（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md, (1991)及びChothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917を参照のこと）（どちらも参考文献として本明細書中に援用されている）。「フレームワーク領域」又は「FR」残基は、本明細書中で定義される超可変領域以外の可変ドメイン残基である。異なる軽鎖又は重鎖のフレームワーク領域の配列は、種の中で比較的保存されている。したがって、「ヒトフレームワーク領域」は、天然のヒトイムノグロブリンのフレームワーク領域に実質的に同一（約８５％以上、通常は９０〜９５％以上）であるフレームワーク領域である。構成要素である重鎖および軽鎖フレームワーク領域の組み合わせである、抗体のフレームワーク領域は、CDRを位置決めし、そして整列化させる働きをする。CDRは、主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。   The variable region of an immunoglobulin light or heavy chain consists of a “framework” region interrupted by three hypervariable regions. Thus, a “hypervariable region” refers to the amino acid residues of an antibody that are involved in binding to an antigen. The hypervariable region contains amino acid residues from the “complementarity determining region” or “CDR” (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md (1991) and Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917) (both incorporated herein by reference). “Framework Region” or “FR” residues are those variable domain residues other than the hypervariable regions defined herein. The sequences of the different light or heavy chain framework regions are relatively conserved among species. Thus, a “human framework region” is a framework region that is substantially identical (about 85% or more, usually 90 to 95% or more) to the framework region of natural human immunoglobulin. The framework region of an antibody, which is a combination of the constituent heavy and light chain framework regions, serves to position and align the CDRs. CDRs are primarily responsible for binding antigens to epitopes.

したがって、「ヒト化」イムノグロブリンという用語は、ヒトフレームワーク領域および（通常はマウス又はラットである）非ヒトイムノグロブリン由来の１つ以上のCDRを含むイムノグロブリンをさす。CDRを提供する非ヒトイムノグロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒトイムノグロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。定常領域がある必要はないが、もしそれらがある場合には、それらはヒトイムノグロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％以上同一でなければならない。したがって、おそらくCDR以外の全てのヒト化イムノグロブリンの部分が、天然のヒトイムノグロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖イムノグロブリンを含む抗体である。例えば、ヒト化抗体は上で定義された典型的なキメラ抗体を包含せず、それは例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトだからである。   Thus, the term “humanized” immunoglobulin refers to an immunoglobulin comprising a human framework region and one or more CDRs from a non-human immunoglobulin (usually a mouse or rat). The non-human immunoglobulin that provides the CDRs is called the “donor” and the human immunoglobulin that provides the framework is called the “acceptor”. There need not be constant regions, but if they are, they must be substantially identical to human immunoglobulin constant regions, ie at least about 85-90%, preferably about 95% or more identical. . Thus, probably all parts of the humanized immunoglobulin other than the CDR are substantially identical to the corresponding parts of the natural human immunoglobulin sequence. A “humanized antibody” is an antibody comprising a humanized light chain and a humanized heavy chain immunoglobulin. For example, a humanized antibody does not include the typical chimeric antibody defined above, for example because the entire variable region of the chimeric antibody is non-human.

本明細書中で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、そしてヒトイムノグロブリンライブラリーから単離された、又はKucherlapatiらによって米国特許第５，９３９，５９８号に記載された、１つ以上のヒトイムノグロブリンに関してトランスジェニックであり、内因性のイムノグロブリンを発現しない動物から単離された抗体を含む。   The term “human antibody” as used herein includes antibodies having the amino acid sequence of human immunoglobulins and has been isolated from human immunoglobulin libraries or by Kucherlapati et al. US Pat. No. 5,939. 598, which are transgenic for one or more human immunoglobulins and which are isolated from animals that do not express endogenous immunoglobulins.

「遺伝子組換え抗体」という用語は、アミノ酸配列が未処理の抗体のものから変更されている抗体を意味する。抗体生成における組換えDNA技術の関連性により、自然の抗体中に見出されるアミノ酸配列に限定される必要はなく；抗体は所望の特性を有するように再設計されることができる。可能な変異形は、数多く、そしてわずか１又は数個のアミノ酸の変更から可変領域又は定常領域などの完全な再設計にまでわたる。定常領域中の変更は、一般に、補体結合反応、膜との相互作用および他のエフェクター機能などの特性を改善又は変更するために行われるであろう。可変領域中の変更は、抗原結合特性を改善するために行われるであろう。   The term “genetically modified antibody” refers to an antibody in which the amino acid sequence has been changed from that of an untreated antibody. Due to the relevance of recombinant DNA technology in antibody production, it need not be limited to amino acid sequences found in natural antibodies; antibodies can be redesigned to have the desired properties. The possible variants are numerous and range from as few as one or a few amino acid changes to complete redesigns such as variable or constant regions. Changes in the constant region will generally be made to improve or alter properties such as complement binding reactions, membrane interactions and other effector functions. Changes in the variable region will be made to improve antigen binding properties.

抗体に加えて、イムノグロブリンは、単鎖又はFv、Fabおよび（Fab')2、並びに二重特異性抗体、線状抗体、（上記のような、そしてLanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105(1987)に詳細に記載された）多価又は多重特異性のハイブリッド抗体などを含む様々な他の形態、および（本明細書中に参考文献として援用されている、Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85 5879-5883 (1998)及びBird et al., Science, 242:423-426 (1998)などの）単鎖で存在してよい。（一般には、本明細書中に参考文献として援用されている"Immunology", Benjamin, N.Y. 2nd ed. (1984)及びHunkapiller and Hood, Nature, 323:15-16 (1986)を参照のこと）。 In addition to antibodies, immunoglobulins can be single chain or Fv, Fab and (Fab ′) 2 , as well as bispecific antibodies, linear antibodies (as described above and Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol Various other forms, including multivalent or multispecific hybrid antibodies (described in detail in US Pat. No. 17, 105 (1987)), and Huston et al (incorporated herein by reference). , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85 5879-5883 (1998) and Bird et al., Science, 242: 423-426 (1998)). (See generally, "Immunology", Benjamin, NY 2nd ed. (1984) and Hunkapiller and Hood, Nature, 323: 15-16 (1986), incorporated herein by reference).

本明細書中で使用される「単鎖Fv」、「単鎖抗体」、「Fv」又は「scFv」という用語は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を含まず、単一のポリペプチド鎖内にある抗体断片をさす。一般に、単鎖抗体は、それを抗原と結合可能にする所望の構造を形成することを可能とする、VH及びVLドメイン間のポリペプチドリンカーを含む。単鎖抗体は、Pluckthunによって、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994)中で詳細に検討されており；その開示が参考文献として本明細書中に援用されている、PCT国際特許出願公開第WO88/01649号及び米国特許第4,946,778号及び同第5,260,203号も参照のこと。特定の実施態様においては、単鎖抗体は二重特異性及び／又はヒト化されたものであることもできる。   As used herein, the terms “single chain Fv”, “single chain antibody”, “Fv” or “scFv” include variable regions derived from both heavy and light chains, but not constant regions. An antibody fragment that does not contain and is within a single polypeptide chain. In general, a single chain antibody comprises a polypeptide linker between the VH and VL domains that allows it to form the desired structure that allows it to bind to an antigen. Single chain antibodies have been reviewed in detail by Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); See also PCT International Patent Application Publication No. WO 88/01649 and US Pat. Nos. 4,946,778 and 5,260,203, which are incorporated herein by reference. In certain embodiments, single chain antibodies can be bispecific and / or humanized.

「Fab断片」は、１つの軽鎖並びに１つの重鎖のCH1及び可変領域から成る。Fab分子の重鎖は、他の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。 A “Fab fragment” consists of one light chain and one heavy chain C H1 and variable region. The heavy chain of a Fab molecule cannot form disulfide bonds with other heavy chain molecules.

「Fab'断片」は、鎖の間のジスルフィド結合が２つの重鎖間に形成されてF(ab')2分子を形成できるように、１つの軽鎖、並びにCH1及びCH2ドメイン間に定常領域以外も含む重鎖を含む。 A “Fab ′ fragment” is a single light chain and between the C H1 and C H2 domains so that a disulfide bond between the chains can be formed between the two heavy chains to form an F (ab ′) 2 molecule. Includes heavy chains that include other than constant regions.

「F(ab')2断片」は、鎖間のジスルフィド結合が２つの重鎖の間に形成されるように、２つの軽鎖並びにCH1及びCH2ドメインの間に定常領域の一部を含む２つの重鎖を含む。 “F (ab ′) 2 fragment” refers to a portion of the constant region between two light chains and the C H1 and C H2 domains such that an interchain disulfide bond is formed between the two heavy chains. Contains two heavy chains.

「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片をさし、この断片は、同じポリペプチド鎖（VH−VL）中の軽鎖可変ドメイン（VL）に接続された重鎖可変ドメイン（VH）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能とするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは他の鎖の相補的ドメインと対を形成せざるを得ず、そして２つの抗原結合部位ができる。二重特異性抗体は、EP404,097；PCT国際特許出願公開第WO93/11161号；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)に、より完全に記載されている。 The term "bispecific antibody" refers to small antibody fragments with two antigen-binding sites, which fragments the same polypeptide chain (V H -V L) light chain variable domain in (V L) A heavy chain variable domain (V H ) connected to By using a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain, the domain must be paired with the complementary domain of the other chain and two antigen binding sites Can do. Bispecific antibodies are more fully described in EP404,097; PCT International Patent Application Publication No. WO93 / 11161; and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Have been described.

「線状抗体」という用語は、Zapata et al. Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)に記載された抗体をさす。すなわち、これらの抗体は、繰り返しのFdセグメントの対（VH-CH1-VH-CH1）を含み、これは抗原結合領域の対を形成する。線状抗体は二重特異性又は単一特異性であることができる。 The term “linear antibody” refers to the antibody described in Zapata et al. Protein Eng. 8 (10): 1057-1062 (1995). That is, these antibodies contain repetitive Fd segment pairs (V H -C H1 -V H -C H1 ), which form antigen-binding region pairs. Linear antibodies can be bispecific or monospecific.

本明細書中で使用される「免疫学的に機能性のイムノグロブリン断片」という用語は、少なくともイムノグロブリン重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含むポリペプチド断片をさす。本発明の免疫学的に機能性のイムノグロブリン断片は、リガンドに結合可能であり、リガンドのその受容体への結合を阻止することができ、受容体へのリガンドの結合により引き起こされる生物学的応答を妨害することができ、又はそれらの任意の組み合わせを行うことができる。   As used herein, the term “immunologically functional immunoglobulin fragment” refers to a polypeptide fragment comprising at least the variable domains of immunoglobulin heavy and light chains. The immunologically functional immunoglobulin fragments of the present invention are capable of binding to a ligand, can inhibit the binding of the ligand to its receptor, and are biologically caused by binding of the ligand to the receptor. The response can be disturbed, or any combination thereof can be made.

「モノクローナル抗体」という用語は、それが生成された方法にかかわらず、任意の真核生物、原核生物、又はファージのクローンを含む単一のクローンから得られた抗体をさす。   The term “monoclonal antibody” refers to an antibody obtained from a single clone, including any eukaryotic, prokaryotic, or phage clone, regardless of the manner in which it was produced.

本発明は、IL-31Ra及びOSMRbなどのIL-31に結合するヘテロ二量体受容体のサブユニットが、脊髄後根神経節細胞などの神経細胞上で発現されるという発見に一部基づく。したがって、本発明は、疼痛及び炎症並びに炎症性腸疾患、クローン病、そう痒症の症状、並びに神経因性の疼痛及び鋭敏化を阻害することおけるIL-31のアンタゴニストの使用を包含する。本発明はまた、脊髄後根神経節細胞の刺激を介する鋭敏化の改善におけるIL-31アゴニストの使用も包含する。   The invention is based in part on the discovery that heterodimeric receptor subunits that bind to IL-31, such as IL-31Ra and OSMRb, are expressed on nerve cells such as dorsal root ganglion cells. Thus, the invention encompasses the use of antagonists of IL-31 in inhibiting pain and inflammation and symptoms of inflammatory bowel disease, Crohn's disease, pruritus, and neuropathic pain and sensitization. The invention also encompasses the use of IL-31 agonists in improving sensitization through stimulation of dorsal root ganglion cells.

IL-31は、先に米国特許出願公開（米国特許出願公開第20030224487号、２００３年１月２１日に出願され、米国特許第7,064,186号として特許付与された米国特許出願番号10/352,554；参考文献として本明細書中に援用されているSprecher, Cindy et al., 2003を参照のこと）にZcyto17rligとして記載されたサイトカインのHUGO（ヒト遺伝子解析機構）名である。IL-31のヘテロ二量体受容体は、IL-31RaとOncostatin M受容体ベータ（OSMRb）の間に形成されたヘテロ二量体を含む。IL-31aは、本明細書中に参考文献として援用されている、公開された共有の米国特許出願公開第20030215838号、２００３年１月２１日に出願された米国特許出願番号10/351,157号中のzcytor17と呼ばれるタンパク質のHUGO名である。ヒトIL-31のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号１及び２にそれぞれ示す。マウスIL-31のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を配列番号３及び４にそれぞれ示す。本明細書中で使用される用語IL-31は、上記の米国特許出願公開第20030224487号中で使用されるzcytor17ligを意味する。IL-31Raは、本明細書中に参考文献として援用されている、２００１年６月２６日に出願された共有の米国特許出願番号09/892,949号に先に記載されている。   IL-31 was previously published in U.S. Patent Application (U.S. Patent Application Publication No. 20030224487, filed Jan. 21, 2003 and granted as U.S. Patent No. 7,064,186; reference number 10 / 352,554; (See Sprecher, Cindy et al., 2003, incorporated herein by reference) as the HUGO (Human Gene Analysis Organization) name of the cytokine described as Zcyto17rlig. The heterodimeric receptor for IL-31 includes a heterodimer formed between IL-31Ra and Oncostatin M receptor beta (OSMRb). IL-31a is disclosed in published shared U.S. Patent Application Publication No. 20030215838, U.S. Patent Application No. 10 / 351,157, filed January 21, 2003, which is incorporated herein by reference. The HUGO name of a protein called zcytor17. The polynucleotide and polypeptide sequences for human IL-31 are shown in SEQ ID NOs: 1 and 2, respectively. The polynucleotide and polypeptide sequences for mouse IL-31 are shown in SEQ ID NOs: 3 and 4, respectively. As used herein, the term IL-31 refers to zcytor17lig as used in US Patent Application Publication No. 20030224487 mentioned above. IL-31Ra has been previously described in commonly owned US patent application Ser. No. 09 / 892,949 filed Jun. 26, 2001, which is incorporated herein by reference.

OSMR及びIL-31RA受容体のアミノ酸配列は、コードされた受容体が、IL-2、IL-4、IL-7、Lif、IL-12、IL-15、EPO、TPO、GM-CSF、及びG-CSFのための受容体を含むがこれらに限定されない、クラスIサイトカイン受容体サブファミリーに属することを示した（総説として、Cytokine 5(2): 95-106 (1993)中のCosman, "The Hematopoietin Receptor Superfamily"を参照のこと）。zcytor17受容体は、共有のPCT特許出願第US01/20484号（本明細書中に参考文献として援用されているWIPO公開番号WO02/00721号）中に完全に記載されている。   The amino acid sequences of the OSMR and IL-31RA receptors are such that the encoded receptor is IL-2, IL-4, IL-7, Lif, IL-12, IL-15, EPO, TPO, GM-CSF, and It has been shown to belong to the class I cytokine receptor subfamily, including but not limited to receptors for G-CSF (reviewed in Cosman, “In Cytokine 5 (2): 95-106 (1993) (See The Hematopoietin Receptor Superfamily). The zcytor17 receptor is fully described in the co-owned PCT patent application US01 / 20484 (WIPO Publication No. WO02 / 00721 which is incorporated herein by reference).

本発明は、抗−IL-31活性を有する、アンタゴニスト、抗体、結合タンパク質、変異形及び断片を含む、抗−IL-31物質の使用を含む。本発明は、抗−IL-31分子を対象に投与することを含み、ヒトの治療及び獣医学的治療用途の両方を考慮する。例示的な獣医学的対象は、家畜などの哺乳動物対象を含む。   The present invention includes the use of anti-IL-31 substances, including antagonists, antibodies, binding proteins, variants and fragments having anti-IL-31 activity. The present invention includes administering an anti-IL-31 molecule to a subject and contemplates both human therapeutic and veterinary therapeutic applications. Exemplary veterinary subjects include mammalian subjects such as livestock.

「長い」形態のIL-31RAの未処理のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号５及び６にそれぞれ示す。「短い」形態のIL-31RAの未処理のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号７及び８にそれぞれ示す。IL-31RAポリペプチドのさらなる切断形態は自然に発現されるようである。両形態とも可溶性のIL-31RA受容体をコードする。「長い」可溶性IL-31RAポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号９及び１０にそれぞれ示す。「短い」可溶性IL-31RAポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号１１及び１２にそれぞれ示す。マウスIL-31RAの未処理のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号１３及び１４にそれぞれ示す。ヒトOSMRベータの未処理のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を、配列番号１５及び１６にそれぞれ示す。どちらも参考文献として本明細書中に援用されている、PCT国際特許出願公開第WO02/00721号及び同第WO04/003140号を参照のこと。   The raw polynucleotide and polypeptide sequences of the “long” form of IL-31RA are shown in SEQ ID NOs: 5 and 6, respectively. The unprocessed polynucleotide and polypeptide sequences of the “short” form of IL-31RA are shown in SEQ ID NOs: 7 and 8, respectively. Additional truncated forms of IL-31RA polypeptide appear to be naturally expressed. Both forms encode soluble IL-31RA receptors. “Long” soluble IL-31RA polynucleotide and polypeptide sequences are shown in SEQ ID NOs: 9 and 10, respectively. “Short” soluble IL-31RA polynucleotide and polypeptide sequences are shown in SEQ ID NOs: 11 and 12, respectively. The untreated polynucleotide and polypeptide sequences of mouse IL-31RA are shown in SEQ ID NOs: 13 and 14, respectively. The untreated polynucleotide and polypeptide sequences of human OSMR beta are shown in SEQ ID NOs: 15 and 16, respectively. See PCT International Patent Application Publication Nos. WO02 / 00721 and WO04 / 003140, both of which are incorporated herein by reference.

IL-31アンタゴニストは、その変異形、断片又は誘導体を含む、IL-31に結合する抗体、及びIL-31がその同系の受容体に結合することによって有する効果を阻害し、制限し、減少させ、最小化し、阻止し、又は中和する抗体などの抗−IL-31分子を含む。   IL-31 antagonists inhibit, limit, and reduce the effects of antibodies binding to IL-31, including variants, fragments or derivatives thereof, and the binding of IL-31 to its cognate receptors. Including anti-IL-31 molecules such as antibodies that minimize, block or neutralize.

インサイチュの発現解析は、ヒトにおいては、IL-31RA及びOSMRベータが脊髄及び脊髄後根神経節細胞中で発現されることを明らかにした。実施例１を参照のこと。したがって、IL-31分子、それらのアゴニスト、又はアンタゴニストは、ニューロンの維持及び神経因性の炎症及び刺激において役割を果たす。これは、IL-31アゴニスト、アンタゴニストが、筋萎縮性側索硬化症（ALS）、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、末梢神経障害、及び多発性硬化症を含む脱髄疾患などの様々な神経変性疾患を治療するために使用可能であることを示す。IL-31RA及びOSMRbの組織特異性は、IL-31が脊髄及び脳内の成長及び／又は維持因子であることができ、脊髄、脳又は末梢神経系の損傷を治療するために使用可能であることを示唆する。   In situ expression analysis revealed that in humans, IL-31RA and OSMRbeta are expressed in spinal cord and dorsal root ganglion cells. See Example 1. Thus, IL-31 molecules, their agonists or antagonists play a role in neuronal maintenance and neurogenic inflammation and stimulation. This is because IL-31 agonists and antagonists are used in various nerves such as demyelinating diseases including amyotrophic lateral sclerosis (ALS), Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, peripheral neuropathy and multiple sclerosis It can be used to treat degenerative diseases. The tissue specificity of IL-31RA and OSMRb allows IL-31 to be a growth and / or maintenance factor in the spinal cord and brain and can be used to treat spinal cord, brain or peripheral nervous system damage I suggest that.

IL-31の疼痛を刺激する能力を測定する方法は当業者に知られている。例えば、脊髄後根神経節細胞は単離され、そして培養されることができる。Voilley, N. et al., J. Neurosci., 27(20): 8026-8033, 2001を参照のこと。例えば、脊髄後根神経節細胞は、Wister雄性成体（５〜７週）及び新生ラットから、０．１％コラゲナーゼによる解離及びコラーゲンコーティングしたP35ディッシュのDMEM＋５％ウシ胎児血清に播くことによって調製される。同様に、脊髄後根神経節細胞を単離する方法が、Steinhoff, M. et al.により記載されている（Steinhoff, M. et al, Nature Medicine, 6(2):151-157, 2000を参照のこと）。すなわち、脊髄後根神経節細胞は冷ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）中で刻まれ、そして０．０５mg/mlのトリプシン、１mg/mlのコラゲナーゼ、及び０．０１mg/mlのDNAseIを含むDMEM中で、３７℃、４５〜６０分間インキュベートされる。トリプシンを中和するためにSBTIが添加され、そして懸濁液が１，０００ｇで１分間遠心分離される。１０％ウシ胎児血清、５ng/mlの神経成長因子、２mMのグルタミン、１mg/mlのペニシリン／ストレプトマイシン及びDNAseIを含むDMEM中にペレット中のニューロンが懸濁され、そしてMatrigelでコーティングしたカバーガラス上に播かれる。使用前にニューロンを３〜５日間培養する。細胞膜におけるIL-31Raの発現は、抗体を用いる免疫蛍光法によって確認される。   Methods for measuring the ability of IL-31 to stimulate pain are known to those skilled in the art. For example, spinal dorsal root ganglion cells can be isolated and cultured. See Voilley, N. et al., J. Neurosci., 27 (20): 8026-8033, 2001. For example, dorsal root ganglion cells are prepared from Wister male adults (5-7 weeks) and newborn rats by dissociation with 0.1% collagenase and collagen-coated P35 dishes in DMEM + 5% fetal bovine serum. . Similarly, methods for isolating dorsal root ganglion cells have been described by Steinhoff, M. et al. (Steinhoff, M. et al, Nature Medicine, 6 (2): 151-157, 2000. See That is, dorsal root ganglion cells are minced in cold Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) and in DMEM containing 0.05 mg / ml trypsin, 1 mg / ml collagenase, and 0.01 mg / ml DNAseI. Incubate at 37 ° C. for 45-60 minutes. SBTI is added to neutralize trypsin and the suspension is centrifuged at 1,000 g for 1 minute. Neurons in the pellet were suspended in DMEM containing 10% fetal bovine serum, 5 ng / ml nerve growth factor, 2 mM glutamine, 1 mg / ml penicillin / streptomycin and DNAseI and on a Matrigel-coated cover glass Sowing. Neurons are cultured for 3-5 days before use. The expression of IL-31Ra in the cell membrane is confirmed by immunofluorescence using an antibody.

脊髄後根神経節刺激に対するIL-31の効果を測定するために、上記のSteinhoffらによって記載されたとおりに培養ニューロン中の細胞内カルシウムイオン濃度が測定される。ニューロンは、５μMのFura-2/AM（Molecular Probes, Eugene, Oregon）を含む２０mM HEPES、pH ７．４のHank's液中で１時間、３７℃でインキュベートされる。カバーガラスを洗浄し、Zeiss 100TV倒立顕微鏡上のチャンバー（1ml容量）中に入れ、Zeiss ｘ４０Fluar対物レンズを用いて観察する。カルシウムの測定を可能とするために３４０nm及び３８０nmで蛍光を測定する。他の鋭敏化剤とともに、又は伴わずに細胞をIL-31に曝露し、そしてIL-31アンタゴニストの存在下での阻害が測定される。   To measure the effect of IL-31 on dorsal root ganglion stimulation, the intracellular calcium ion concentration in cultured neurons is measured as described by Steinhoff et al. Neurons are incubated at 37 ° C. for 1 hour in 20 mM HEPES, pH 7.4 Hank's solution containing 5 μM Fura-2 / AM (Molecular Probes, Eugene, Oregon). The cover glass is washed and placed in a chamber (1 ml capacity) on a Zeiss 100TV inverted microscope and viewed using a Zeiss x40 Fluar objective. Fluorescence is measured at 340 nm and 380 nm to allow measurement of calcium. Cells are exposed to IL-31 with or without other sensitizers and inhibition in the presence of IL-31 antagonist is measured.

一般的に、脊髄後根神経節又は神経細胞上の同系のヘテロ二量体受容体へのIL-31の結合の効果に対するIL-31アンタゴニストの能力を測定するために、プロスタグランジン、サブスタンスP、CGRP、ガラニン、ニューロペプチドY、ヒスタミン、ブラジキニン、カンナビノイド及びアラキノイド酸経路のメディエーターなどであるがこれらに限定されない疼痛のいくつかのメディエーターが疼痛に際して測定可能である。   In general, to measure the ability of IL-31 antagonists to the effect of IL-31 binding to syngeneic heterodimeric receptors on dorsal root ganglia or nerve cells, prostaglandins, substance P Several mediators of pain can be measured in pain, including but not limited to, mediators of the CGRP, galanin, neuropeptide Y, histamine, bradykinin, cannabinoid and arachinoid acid pathways.

IL-31の神経細胞に対する疼痛誘導効果に対するIL-31のアンタゴニストの能力を測定するための上記インビトロの方法に加えて、数種のインビボモデルも有用である。例えば、Honore, P. et al., Neuroscience, 98(3):585-598, 2000を参照のこと。この記事は、炎症性の疼痛、神経障害性の疼痛及び癌の疼痛のためのいくつかのモデルを記載する。例えば、1つのモデルは、アンタゴニスト分子を伴うか又は伴わない、マウスの後肢の脚底表面へのIL-31の皮下注射などの、IL-31へのアンタゴニストの効果を測定する。マウスは、注射の３日後に安楽死させられ、末梢の浮腫が測定される。浮腫を阻害し、制限し、最小化し、減少させ、予防し、又は中和する、IL-31アンタゴニスト分子の効果が測定される。さらなるインビボモデルは、脊髄神経結紮、坐骨神経処理、肉腫により誘発された骨癌、行動分析及びモルヒネの効果である。   In addition to the in vitro methods described above for measuring the ability of IL-31 antagonists to pain-inducing effects of IL-31 on neurons, several in vivo models are also useful. See, for example, Honore, P. et al., Neuroscience, 98 (3): 585-598, 2000. This article describes several models for inflammatory pain, neuropathic pain and cancer pain. For example, one model measures the effect of an antagonist on IL-31, such as subcutaneous injection of IL-31 into the plantar surface of the hind limb of mice with or without antagonist molecules. Mice are euthanized 3 days after injection and peripheral edema is measured. The effect of an IL-31 antagonist molecule that inhibits, limits, minimizes, reduces, prevents or neutralizes edema is measured. Further in vivo models are spinal nerve ligation, sciatic nerve processing, sarcoma-induced bone cancer, behavioral analysis and morphine effects.

疼痛の他のマウスモデルは、機械的アロジニアである。例えば、Sweizer, S. M. et al., J. Neuroimm., 125:82-93, 2002を参照のこと。すなわち、ラット又はマウスが２及び／又は12-gフォンフレイフィラメントによる機械的アロジニアに関してテストされる。先ず、動物は手順に順化され、そしてベースラインの測定が行われる。IL-31が様々な量で投与される。アロジニアは、IL-31投与に応答して、通常は非侵害性である刺激に脚を強く引っ込めることに特徴を有する。IL-31アンタゴニスト分子の投与を伴う場合及び伴わない場合で比較を行う。   Another mouse model of pain is mechanical allodynia. See, for example, Sweizer, S. M. et al., J. Neuroimm., 125: 82-93, 2002. That is, rats or mice are tested for mechanical allodynia with 2 and / or 12-g von Frey filaments. First, animals are acclimated to the procedure and baseline measurements are taken. IL-31 is administered in various amounts. Alogonia is characterized by strong withdrawal of the leg to stimuli that are normally non-noxious in response to IL-31 administration. Comparison is made with and without administration of IL-31 antagonist molecules.

前炎症性神経ペプチドであるサブスタンスP（SP）は、背部神経節で作られ、そして侵害受容神経A及びCによって末梢に運ばれる（１５）。SPは、マスト細胞顆粒からヒスタミンを放出することによってかゆみを誘発することができる。皮膚においては、SPは、紅斑、浮腫及び神経因性の炎症を起こし、ヒスタミン、IL-1、プロスタグランジン及びリソソーム酵素を放出するが、真皮中で急速に分解される（１６）。抗ヒスタミン剤を先に経口投与すると、SPによって引き起こされるそう痒を阻害する。唐辛子から得られるカプサイシンが局所投与されると、表皮神経からSPを除去し、そしてそう痒を減少させる。IL-31の受容体サブユニットが脊髄後根神経節細胞中で発現されるため、IL-31アンタゴニスト分子の投与はこれらの細胞の刺激を減少させることができ、そしてIl-31投与によって誘導されうるサブスタンスPを減少させることができる。   Substance P (SP), a pro-inflammatory neuropeptide, is made in the dorsal ganglia and is carried to the periphery by nociceptive nerves A and C (15). SP can induce itching by releasing histamine from mast cell granules. In the skin, SP causes erythema, edema and neurogenic inflammation, releasing histamine, IL-1, prostaglandins and lysosomal enzymes, but is rapidly degraded in the dermis (16). Prior oral administration of antihistamines inhibits pruritus caused by SP. When capsaicin obtained from pepper is administered topically, it removes SP from the epidermal nerve and reduces pruritus. Since the receptor subunit of IL-31 is expressed in dorsal root ganglion cells, administration of IL-31 antagonist molecules can reduce stimulation of these cells and is induced by administration of Il-31. The possible substance P can be reduced.

IL-31の脊髄後根神経節細胞上のその受容体、すなわち、IL-31RA及びOSMRベータへの結合は、圧力、接触、温度、疼痛、かゆみ、くすぐったさ、うずき及び無感覚などの感覚に関与する様々な感覚受容体からなる体性感覚系を刺激することができる。IL-31のその同系受容体への結合は、神経因性の炎症及び刺激を引き起こすことができ、これは神経因性の刺激を誘導するさらなる因子の放出に導くことができる。疼痛を仲介する1つの因子群は、プロスタグランジンであり、これは局所的な炎症にも寄与する。したがって、IL-31アンタゴニストは、通常NSAIDで治療される、筋肉痛、頭痛、急性の傷害による関節痛などの急性の炎症性の疼痛又は骨関節炎によって引き起こされるものなどの慢性の疼痛において有益であるかもしれない。かかる神経因性の刺激は、アレルギーなどの自己免疫反応、水痘などのウイルス感染症、火傷又は外傷などの傷害などによって引き起こされる炎症の結果でありうる。したがって、IL-31リガンドのその同系受容体への結合によって誘導されたシグナル伝達を妨害するアンタゴニストは、神経因性の炎症及び体性感覚系の刺激を減少させ、制限し、予防し、又は最小化することにおいて有用であることができる。したがって、脊髄後根神経節細胞におけるIL-31誘導性のシグナル伝達のアンタゴニストは、自己免疫疾患、ウイルス感染および外傷に伴う疼痛、かゆみ、うずきを治療するために使用されることができる。さらに、神経因性の炎症が、最初の発作後の神経の過敏性を生じうるため、IL-31のアンタゴニストは症状の有効な治療剤であることができる。例えば、何人かの帯状疱疹患者は、ウイルス感染が消滅され又は最小化されたずっと後で疼痛及び／又はかゆみの感覚的症状を体験する。急性の帯状疱疹を伴う神経痛及びヘルペス後の神経痛は、ウイルス抗原がT細胞及び他の炎症細胞を誘引する、脊髄後根神経節及び三叉神経節の炎症によると思われる。長期に持続する疼痛は、強固な抗ウイルス反応後のしつこい真皮節の炎症から生じうる。結論として、ウイルス感染のレベル又は段階は、対象の知覚を表すものでないかもしれない。したがって、IL-31誘導性のシグナル伝達をアンタゴナイズすることの有益な効果は、ウイルス感染又は外傷のそのときの状態を超えて広がることができる。   Binding of IL-31 to its receptors on dorsal root ganglion cells, i.e.IL-31RA and OSMR beta, is associated with sensations such as pressure, contact, temperature, pain, itching, tickling, tingling and numbness. It can stimulate the somatosensory system consisting of various sensory receptors involved. Binding of IL-31 to its cognate receptor can cause neurogenic inflammation and stimulation, which can lead to the release of additional factors that induce neurogenic stimulation. One group of factors that mediate pain is prostaglandins, which also contribute to local inflammation. Therefore, IL-31 antagonists are beneficial in chronic pain, such as those caused by acute inflammatory pain or osteoarthritis, such as muscle pain, headache, joint pain from acute injury, usually treated with NSAIDs It may be. Such neurogenic stimulation can be the result of inflammation caused by autoimmune reactions such as allergies, viral infections such as chicken pox, injuries such as burns or trauma. Thus, antagonists that interfere with signaling induced by binding of IL-31 ligand to its cognate receptor reduce, limit, prevent, or minimize neurogenic inflammation and somatosensory system stimulation. Can be useful in Thus, antagonists of IL-31-induced signaling in dorsal root ganglion cells can be used to treat pain, itching, tingling associated with autoimmune diseases, viral infections and trauma. Furthermore, antagonists of IL-31 can be an effective symptomatic treatment because neurogenic inflammation can result in neural hypersensitivity after the first attack. For example, some herpes zoster patients experience sensory symptoms of pain and / or itching long after the viral infection disappears or is minimized. Neuralgia with acute shingles and postherpetic neuralgia appear to be due to inflammation of the dorsal root and trigeminal ganglia, where viral antigens attract T cells and other inflammatory cells. Long-lasting pain can result from persistent dermatome inflammation after a strong antiviral response. In conclusion, the level or stage of viral infection may not be representative of the subject's perception. Thus, the beneficial effects of antagonizing IL-31-induced signaling can extend beyond the current state of viral infection or trauma.

神経障害及び知覚欠損は、疼痛及び感受性の喪失を含み、そしてアトピー、糖尿病、多発性硬化症及び高血圧などの病気に関連しうる。IL-31RA及びOSBRベータが、脊髄及び脊髄後根神経節細胞において発現されるタンパク質であるため、IL-31のアンタゴニストは、疼痛及び知覚欠損の治療に有用であるかもしれない。糖尿病性末梢神経障害、ヘルペス後末梢神経障害並びに一般に火傷患者の症状としての疼痛を含む疼痛を治療するために、例えば、IL31アンタゴニストは局所、皮下、中枢、又は全身に送達されることができる。   Neuropathy and sensory deficits include pain and loss of sensitivity and can be associated with diseases such as atopy, diabetes, multiple sclerosis and hypertension. Since IL-31RA and OSBR beta are proteins expressed in spinal cord and dorsal root ganglion cells, antagonists of IL-31 may be useful in the treatment of pain and sensory deficits. For example, IL31 antagonists can be delivered locally, subcutaneously, centrally, or systemically to treat pain, including diabetic peripheral neuropathy, postherpetic peripheral neuropathy, and pain generally as a symptom of burn patients.

火傷の傷害は、創傷包帯が交換されるときに強められる、激しくそして長期の疼痛を起こす。頻繁な包帯の交換は、感染を防ぎそして治癒を助けるために必要である。創傷ケアの間に患者によって体験される痛みの量は、依然として、火傷の犠牲者並びに多くの他の患者集団にとっての世界的な問題である。患者が静止状態であるとき、火傷に伴う疼痛は、いくつかの望ましくない作用を有するオピオイドで治療可能である。しかしながら、大部分の火傷患者は創傷ケアの間の疼痛は耐え難いものであると述べており、毎日の包帯交換、創傷の洗浄、ステープル除去などの創傷ケアの間、オピオイドでは不十分である。   Burn injury causes intense and long-term pain that is intensified when the wound dressing is changed. Frequent bandage changes are necessary to prevent infection and aid healing. The amount of pain experienced by a patient during wound care remains a global problem for burn victims as well as many other patient populations. When the patient is at rest, the pain associated with burns can be treated with opioids that have several undesirable effects. However, most burn patients have stated that pain during wound care is intolerable and opioids are inadequate during wound care such as daily dressing changes, wound cleaning, and staple removal.

IL-31についてのヘテロ二量体の両メンバー、すなわちIL-31RA及びOSMRベータは、脊髄後根神経節細胞において発現され、中和抗体などのIL-31のアンタゴニストは、火傷又は神経障害に伴う疼痛を含む疼痛を予防し、最小化し、制限し、及び／又は治療するために有用である。火傷を擬態するインビボモデルは当業者に周知である。   Both members of the heterodimer for IL-31, ie IL-31RA and OSMR beta, are expressed in dorsal root ganglion cells, and antagonists of IL-31 such as neutralizing antibodies are associated with burns or neuropathy Useful for preventing, minimizing, limiting and / or treating pain, including pain. In vivo models that mimic burns are well known to those skilled in the art.

しつこい疼痛は、もとの刺激よりも少ない刺激が増加した痛みを生じるように、アロジニアとも呼ばれる過形成を誘発することができる。IL-31RA及びOSMRベータサブユニットはどちらも脊髄後根神経節細胞上に発現されるため、これらを担持する神経細胞内におけるIL-31誘導性のシグナル伝達のアンタゴニストは、アロジニアの症状の緩和を助けることができる。   Persistent pain can induce hyperplasia, also called arosinia, so that less stimulation than the original stimulation results in increased pain. Since IL-31RA and OSMR beta subunits are both expressed on dorsal root ganglion cells, antagonists of IL-31-induced signaling in nerve cells carrying them alleviate symptoms of Alogonia I can help.

IL-31並びにそのアゴニスト、断片、変異形及び／又はキメラなどの本発明のポリペプチドは、哺乳動物における鋭敏性を増加させるために使用されることもできる。例えばアゴニストを含む本発明のIL-31ポリペプチドは、局所的又は局部的、全身的又は中枢に送達された場合、（疼痛、熱又は機械的な）鋭敏性を増加させるために使用されることができ、そして当業者に知られた及び／又は本明細書中に記載されたモデル又は実験において測定されることができる。また、本発明のポリペプチドは投与されて、生き残ったニューロンの神経伝達物質に対する機能を改善するために脊髄及び神経細胞の感受性を亢進することもでき、そしてしたがって、パーキンソン病又はアルツハイマー病並びに麻痺において有効であるかもしれない。   The polypeptides of the invention, such as IL-31 and agonists, fragments, variants and / or chimeras thereof, can also be used to increase sensitivity in mammals. For example, an IL-31 polypeptide of the present invention, including an agonist, may be used to increase sensitivity (pain, heat or mechanical) when delivered locally or locally, systemically or centrally. And can be measured in models or experiments known to those skilled in the art and / or described herein. Polypeptides of the invention can also be administered to enhance spinal cord and nerve cell sensitivity to improve the function of surviving neurons to neurotransmitters, and thus in Parkinson's disease or Alzheimer's disease and paralysis May be effective.

同様に、患者が疼痛に対する増加した鋭敏性を有する場合、IL-31のアンタゴニストは、神経障害を有する患者において、疼痛の感覚を減少させるために使用されることができる。例えば、糖尿病性神経障害及びヘルペス後神経障害を有する患者は、慢性の亢進した痛みを有し、IL-31のアンタゴニストは、その疼痛を制限し、予防し又は減少させることに有用であるかもしれない。   Similarly, IL-31 antagonists can be used to reduce pain sensation in patients with neuropathy if the patient has increased sensitivity to pain. For example, patients with diabetic neuropathy and postherpetic neuropathy have chronic increased pain, and antagonists of IL-31 may be useful in limiting, preventing or reducing the pain Absent.

前炎症性のタンパク質のための受容体として、脊髄および脊髄後根神経節中のIL-31RA及びOSMRベータの存在は、IL-31のアンタゴニストがこれらの組織中の炎症を減少させるために使用可能であることを示唆する。したがって、髄膜炎などの状態は、抗体を含むアンタゴニストの投与の利益を受けることができる。   The presence of IL-31RA and OSMR beta in the spinal cord and dorsal root ganglia as receptors for pro-inflammatory proteins allows IL-31 antagonists to be used to reduce inflammation in these tissues It is suggested. Thus, conditions such as meningitis can benefit from administration of antagonists including antibodies.

神経因性の炎症及び刺激を含み、そして、脊髄後根神経節細胞を含む神経組織におけるIL-31誘導性の疼痛をアンタゴナイズすることによる利益を受けることのできる病気は、慢性の疼痛、偏頭痛、関節炎、骨関節炎、リューマチ関節炎、多発神経障害、糖尿病性末梢神経障害、（術後痛などの）神経断絶後の疼痛、炎症性腸疾患、腎炎、一定の転移性癌及び血管の炎症などの神経因性の疼痛形成成分を含む炎症状態を含む。これらの病気は、IL-31誘導性のシグナル伝達のアンタゴニストによっても治療されることができる。さらに、照射刺激及び火傷、化学熱傷、多種化学物質過敏症、あせも、鼻炎、熱傷、日焼け、皮膚の発赤、及び化学物質による病変を含む皮膚の状態、並びに急性の喘息発作などの急性のアレルギー反応、並びに化学物質への曝露により引き起こされた肺の炎症、並びに蕁麻疹及び結膜炎及び歯周病は、IL-31アンタゴニストで治療可能である。さらに、肩甲腓骨型症候群（scapuloperoneal syndrome）は、肩甲帯と腓骨筋の分布における脆弱性を特徴とする不均一な神経筋疾患である。神経因性（肩甲腓骨型脊髄性筋萎縮症、SPSMA）及び筋障害性（肩甲腓骨型筋ジストロフィー、SPMD）の両方の肩甲腓骨症候群が記載されている。SPMDについての染色体遺伝子座は、近年、染色体12qであるとされ、これはIL-31についての遺伝子座と同じである。したがって、IL-31アンタゴニストは、これらの病気を治療するために使用されることができる。   Diseases that include neurogenic inflammation and stimulation and that can benefit from antagonizing IL-31-induced pain in neural tissue, including dorsal root ganglion cells, are chronic pain, Headache, arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, polyneuropathy, diabetic peripheral neuropathy, post-nervous pain (such as postoperative pain), inflammatory bowel disease, nephritis, certain metastatic cancers and vascular inflammation, etc. Inflammatory conditions including the neuropathic pain-forming component. These diseases can also be treated with antagonists of IL-31-induced signaling. In addition, acute allergic reactions such as radiation irritation and burns, chemical burns, multiple chemical sensitivities, rashes, rhinitis, burns, sunburn, skin redness, and skin conditions including chemical lesions, and acute asthma attacks And inflammation of the lungs caused by chemical exposure, as well as urticaria and conjunctivitis and periodontal disease can be treated with IL-31 antagonists. In addition, scapuloperoneal syndrome is a heterogeneous neuromuscular disease characterized by fragility in the distribution of the scapula and peroneus muscles. Both neuropathic (scapular spinal muscular atrophy, SPSMA) and myopathy (scapular muscular dystrophy, SPMD) have been described. The chromosomal locus for SPMD has recently been referred to as chromosome 12q, which is the same as the locus for IL-31. Thus, IL-31 antagonists can be used to treat these diseases.

米国においては、約５００，０００人が大腸及び小腸のいずれか又は両方に関する炎症性腸疾患に罹っている。潰瘍性大腸炎及びクローン病は、炎症性腸疾患の最も知られた形態であり、どちらも、その病因が未知であるため「特発性」炎症性腸疾患に分類される。   In the United States, approximately 500,000 people suffer from inflammatory bowel disease involving either or both of the large and small intestines. Ulcerative colitis and Crohn's disease are the best known forms of inflammatory bowel disease, both classified as “idiopathic” inflammatory bowel disease because of its unknown etiology.

クローン病は、胃腸管の任意の部分を含むことができるが、遠位小腸及び結腸を最もしばしば含む。炎症は、リンパ濾胞にわたる小さな潰瘍から貫壁性瘢痕及び慢性の炎症にわたる深い裂溝状潰瘍までのいずれかを生成しうる。病因は未知であるが、感染性の及び免疫学的メカニズムが提案されている。症状は多様であって、下痢、発熱及び疼痛、並びに関節炎、ぶどう膜炎、結膜性紅斑及び強直性脊椎炎という小腸以外の徴候も含むことができる。   Crohn's disease can include any part of the gastrointestinal tract, but most often includes the distal small intestine and the colon. Inflammation can produce either small ulcers that span lymphoid follicles to transmural scars and deep fissure ulcers that span chronic inflammation. Although the etiology is unknown, infectious and immunological mechanisms have been proposed. Symptoms vary and can include diarrhea, fever and pain, and other signs of the small intestine such as arthritis, uveitis, conjunctival erythema and ankylosing spondylitis.

炎症性腸疾患を治療するための伝統的なアプローチは、アザチオプリンによる免疫抑制である（例えば、Rutgeerts, J. Gastroenterol. Hepatol. 17(Suppl):S176-85 (2002)を参照のこと）。より最近では、抗−腫瘍壊死因子キメラモノクローナル抗体であるインフリキシマブが特定の病原による病気のメカニズムを標的とし、そして病気のプロセスの完全な抑制及び長期の腸の治癒を可能としている。しかしながら、この治療法は免疫原性という問題を伴う。インフリキシマブに対する抗体の形成は、効力を妨げ、そして注入反応を伴う。   A traditional approach for treating inflammatory bowel disease is immunosuppression by azathioprine (see, eg, Rutgeerts, J. Gastroenterol. Hepatol. 17 (Suppl): S176-85 (2002)). More recently, infliximab, an anti-tumor necrosis factor chimeric monoclonal antibody, targets disease mechanisms due to specific pathogens and allows complete suppression of the disease process and long-term intestinal healing. However, this treatment has the problem of immunogenicity. The formation of antibodies to infliximab prevents efficacy and is accompanied by an infusion reaction.

過敏性腸症候群（IBS）は、慢性の機能性胃腸管障害である。それは、通常、排便習慣の変化に伴う腹痛及び鼓張を含む様々な腸の症状に特徴を有する不均一な状態である（Collins et al, 2001）。米国の人口の１２〜２０％がこの状態にかかっていると推定される。Manning基準（Manning et al, 1978）、Rome基準（Thompson et al, 1992）及び最も最近のRome II（Thompson et al, 1999）を含む、IBSを定義するための異なる基準が提案された。IBSに関する研究はしばしば、IBS患者を便秘優勢（CON）及び下痢優勢（DIA）の２つのサブタイプに分類し、そして時には交代型（ALT）の第三のサブタイプを含む。   Irritable bowel syndrome (IBS) is a chronic functional gastrointestinal tract disorder. It is a heterogeneous condition characterized by various intestinal symptoms, usually including abdominal pain and bloating associated with changes in bowel habits (Collins et al, 2001). It is estimated that 12-20% of the US population has this condition. Different criteria have been proposed for defining IBS, including the Manning criteria (Manning et al, 1978), the Rome criteria (Thompson et al, 1992) and the most recent Rome II (Thompson et al, 1999). Studies on IBS often classify IBS patients into two subtypes, constipation predominant (CON) and diarrhea predominant (DIA), and sometimes include a third subtype of alternating (ALT).

抗−IL-31分子、アンタゴニスト、抗体、結合タンパク質、変異形及び断片は、炎症性腸疾患（IBD）及び過敏性腸症候群（IBS）に伴う疼痛を治療し、検出することにおいて有用である。   Anti-IL-31 molecules, antagonists, antibodies, binding proteins, variants and fragments are useful in treating and detecting pain associated with inflammatory bowel disease (IBD) and irritable bowel syndrome (IBS).

炎症性腸症候群（IBD）は、結腸及び／又は直腸（潰瘍性大腸炎）又は小腸及び大腸（クローン病）を冒しうる。これらの病気の原因は不明であるが、これらは患部組織の慢性の炎症を含む。潜在的な治療剤は、抗−IL-31抗体、他の結合タンパク質、変異形、断片、キメラ及び他のIL-31アンタゴニストを含む抗−IL-31分子を含む。これらの分子は、IBD及び関連する病気において炎症及び病理学的作用を減少させるための貴重な治療剤として役立ちうる。   Inflammatory bowel syndrome (IBD) can affect the colon and / or rectum (ulcerative colitis) or the small and large intestine (Crohn's disease). The cause of these diseases is unknown, but these include chronic inflammation of the affected tissue. Potential therapeutic agents include anti-IL-31 molecules including anti-IL-31 antibodies, other binding proteins, variants, fragments, chimeras and other IL-31 antagonists. These molecules can serve as valuable therapeutic agents to reduce inflammation and pathological effects in IBD and related diseases.

潰瘍性大腸炎（UC）は、一般に結腸と呼ばれる大腸の炎症性疾患であり、結腸の粘膜又は最も内側の裏打ちの炎症及び潰瘍に特徴を有する。この炎症は、結腸をしばしば空にし、下痢を起こす。症状は、便の軟化及び付随する腹部のけいれん、発熱及び体重減少を含む。UCの正確な原因は不明であるが、最近の研究は、体が外来性であるとみなす体内のタンパク質に対して体の自然の防御が働く、と示唆している（「自己免疫反応」）。おそらく、腸内の細菌タンパク質に似ているため、これらのタンパク質は結腸の裏打ちを破壊し始める炎症過程を扇動するか又は刺激しうる。結腸の裏打ちが破壊されると、潰瘍が形成し、粘液、膿汁、及び血液を放出する。この病気は通常、直腸領域から始まり、そしてついには大腸全体に広がることができる。繰り返しおこる炎症は、小腸及び直腸の壁を瘢痕組織によって肥厚させる。重篤な病気では、結腸組織の死滅又は敗血症が起こりうる。潰瘍性大腸炎の症状は、重篤度が多様で、それらの発症は漸進的であるか又は突然である。発作は、呼吸器感染又はストレスを含む多くの因子によって誘発される。したがって、本発明の抗−IL31分子は、UCの治療及び／又は検出に有用である。   Ulcerative colitis (UC) is an inflammatory disease of the large intestine, commonly referred to as the colon, characterized by inflammation and ulceration of the mucosa or innermost lining of the colon. This inflammation often empties the colon and causes diarrhea. Symptoms include stool softening and concomitant abdominal cramps, fever and weight loss. The exact cause of UC is unknown, but recent research suggests that the body's natural defenses work against proteins in the body that the body considers foreign ("autoimmune response") . Perhaps similar to the bacterial proteins in the gut, these proteins can incite or stimulate inflammatory processes that begin to destroy the colonic lining. When the colonic lining is destroyed, ulcers form, releasing mucus, pus and blood. The disease usually begins in the rectal region and can eventually spread throughout the large intestine. Repeated inflammation causes the small intestine and rectal walls to become thickened by scar tissue. In severe illness, colon tissue death or sepsis can occur. Symptoms of ulcerative colitis vary in severity and their onset is gradual or sudden. Seizures are triggered by a number of factors including respiratory infections or stress. Accordingly, the anti-IL31 molecules of the present invention are useful for the treatment and / or detection of UC.

現在、UCの利用可能な治癒方法はないが、治療は、結腸の裏打ち中の異常な炎症過程を抑制することに焦点をあてている。（アザチオプリン、メルカプトプリン、及びメトトレキセートなどの）コルチコステロイド免疫抑制剤、およびアミノサリシテートがこの病気を治療するために利用可能である。しかしながら、コルチコステロイド及びアザチオプリンなどの免疫抑制剤の長期使用は、骨の菲薄化、白内障、感染及び肝臓と骨髄への作用を含む、重大な副作用を引き起こしうる。現在の治療法が成功しない患者においては、手術が選択肢である。手術は、結腸及び直腸全体の切除を含む。   Currently, there are no available cures for UC, but treatment focuses on suppressing abnormal inflammatory processes in the lining of the colon. Corticosteroid immunosuppressants (such as azathioprine, mercaptopurine, and methotrexate), and amino salicates are available to treat this disease. However, long-term use of immunosuppressive agents such as corticosteroids and azathioprine can cause serious side effects, including bone thinning, cataracts, infection and effects on the liver and bone marrow. Surgery is an option in patients who are not successful with current treatments. Surgery involves resection of the entire colon and rectum.

部分的に慢性の潰瘍性大腸炎を擬態するいくつかの動物モデルがある。最も広く使用されるモデルは、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸／エタノール（TNBS）誘発性大腸炎モデルであり、これは結腸中に慢性の炎症及び潰瘍を誘発する。TNBSが感受性マウスの結腸に、直腸内滴下によって導入されると、T細胞介在性の免疫応答を結腸粘膜内に誘発し、この場合、大腸壁全体におけるT細胞及びマクロファージの密な浸潤を特徴とするひどい粘膜の炎症をもたらす。さらに、この組織病理学的臨床像は、進行性の体重減少（消耗）、出血性の下痢、直腸の逸脱、及び大腸壁の肥厚という臨床像を伴う（Neurath et al. Intern. Rev. Immunol. 19:51-62, 2000）。   There are several animal models that partially mimic chronic ulcerative colitis. The most widely used model is the 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid / ethanol (TNBS) -induced colitis model, which induces chronic inflammation and ulcers in the colon. When TNBS is introduced into the colon of susceptible mice by intrarectal instillation, it induces a T cell-mediated immune response in the colonic mucosa, characterized by dense infiltration of T cells and macrophages throughout the colon wall. Causes severe mucosal inflammation. In addition, this histopathological clinical picture is accompanied by clinical features of progressive weight loss (wasting), hemorrhagic diarrhea, rectal deviation, and thickening of the colon wall (Neurath et al. Intern. Rev. Immunol. 19: 51-62, 2000).

他の大腸炎モデルは、デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）を用い、これは出血性の下痢、体重減少、結腸の短縮及び好中球浸潤を伴う粘膜の潰瘍が認められる、急性の大腸炎を誘発する。DSS誘発性の大腸炎は、リンパ様過形成、限局性の陰窩損傷及び上皮の潰瘍を伴う炎症細胞の固有層への浸潤、によって組織学的に特徴付けられる。これらの変化は、上皮へのDSSの毒性効果により、そして固有層細胞の食作用とTNF-アルファ及びIFN-ガンマの産生によって発生すると考えられる。DSSは、SCIDマウスなどのT細胞欠損動物において観察されるため、T細胞依存性のモデルであるとみなされる。   Other colitis models use dextran sulfate sodium (DSS), which induces acute colitis, with bleeding diarrhea, weight loss, colon shortening and mucosal ulcers with neutrophil infiltration . DSS-induced colitis is characterized histologically by lymphoid hyperplasia, localized crypt damage and infiltration of the lamina propria of inflammatory cells with epithelial ulcers. These changes are thought to occur due to the toxic effects of DSS on the epithelium and by phagocytosis of lamina propria cells and the production of TNF-alpha and IFN-gamma. Since DSS is observed in T cell-deficient animals such as SCID mice, it is considered to be a T cell-dependent model.

これらのTNBS又はDSSモデルへのIL-31アンタゴニスト又は結合パートナーの投与は、症状の寛解を測定し、胃腸疾患の過程を変更するために使用可能である。IL-31は炎症反応及び大腸炎に伴う疼痛において役割を果たし、アンタゴニストの投与によるIL-31活性の中和は、IBDに対する潜在的な治療的アプローチである。   Administration of IL-31 antagonists or binding partners to these TNBS or DSS models can be used to measure symptom remission and alter the course of gastrointestinal disease. IL-31 plays a role in the pain associated with inflammatory reactions and colitis, and neutralizing IL-31 activity by administration of antagonists is a potential therapeutic approach to IBD.

過敏性腸症候群は、胃腸クリニックにおいて最も一般的な状態の1つである。しかし、IBSの診断及び治療はいまだ限定されている。IL-31及びIL-31 RA1の発現がクローン病の上方制御と関係付けられてきたため（実施例５を参照のこと）、抗−IL31抗体、他の結合タンパク質、変異形、断片、キメラ及び他のIL-31アンタゴニストを含むIL-31アンタゴニストは、この病気の症状の低下及び治療において有用である。   Irritable bowel syndrome is one of the most common conditions in gastrointestinal clinics. However, the diagnosis and treatment of IBS is still limited. Since expression of IL-31 and IL-31 RA1 has been implicated in up-regulation of Crohn's disease (see Example 5), anti-IL31 antibodies, other binding proteins, variants, fragments, chimeras and others IL-31 antagonists, including other IL-31 antagonists, are useful in reducing and treating the symptoms of this disease.

IL-31アンタゴニスト又は結合パートナーのIBD又はIBS患者への投与は、症状を寛解させ、そして胃腸疾患の過程を変更するために使用されることができる。IL-31は、大腸炎における炎症反応に役割を果たし、そしてアンタゴニストの投与によるIL-31活性の中和はIBD及び／又はIBSの潜在的な治療的アプローチである。   Administration of IL-31 antagonists or binding partners to IBD or IBS patients can be used to ameliorate symptoms and alter the process of gastrointestinal disease. IL-31 plays a role in the inflammatory response in colitis, and neutralization of IL-31 activity by administration of antagonists is a potential therapeutic approach for IBD and / or IBS.

IBS及びIBDに関連する障害のためには、改善された機能の臨床的徴候は、疼痛、けいれん及び過敏性の減少、下痢の減少及び改善された便の硬さ、腹部膨満感の減少及び小腸輸送能の増加を含むが、これらに限定されない。改善は、クローン病活動指数（Crohn's Disease Activity Index (CDAI)）の平均の減少によっても測定可能である。Best W. et al., Gastroenterology 70: 439-44, 1976を参照のこと。さらに、改善された機能は、Irvineらによって記載された生活の質の評価によっても測定可能である（Irvine E. et al., Gastroenterology 106:287-96, 1994）。   For disorders related to IBS and IBD, clinical signs of improved function are reduced pain, convulsions and irritability, reduced diarrhea and improved stool consistency, reduced abdominal distension and small intestine Including but not limited to increased transport capacity. Improvement can also be measured by an average decrease in the Crohn's Disease Activity Index (CDAI). See Best W. et al., Gastroenterology 70: 439-44, 1976. Furthermore, improved function can also be measured by the quality of life assessment described by Irvine et al. (Irvine E. et al., Gastroenterology 106: 287-96, 1994).

過敏性腸症候群の動物モデルは、Mayer and Collinsによって記載されている。Gastroenterol. 122:2032-2048 (2002)。これらのモデルは、主にCNS特異的なメカニズムを主に介するもの（「ストレスメモリー」モデル）、及び腸特異的な病因論を主に介するもの（「ペインメモリー」及び「免疫メモリー」モデル）に分けられることができる。１つのモデルにおいては、動物は電極を近位結腸及び横紋筋に移植され、そしてカテーテルを脳の側脳室に移植されることによって外科的に作製される。直腸の膨満は、直腸に挿入されたバルーンの膨張によって行われ、特徴的な内蔵運動反応を誘発する圧力が測定される。IL-31アンタゴニスト及び／又は変異形又はアンタゴニストなどの被験化合物が（p.o.、i.p.、s.c.、i.v.又はi.m.などの）適切な経路及び適切な時間（すなわち、i.p.又はi.c.v.の場合には約２０分）で、膨満の前に投与される。被験化合物は、結腸の運動性、腹部の収縮及び内蔵の痛みに影響を及ぼすその能力について評価される。   An animal model of irritable bowel syndrome has been described by Mayer and Collins. Gastroenterol. 122: 2032-2048 (2002). These models are mainly those that are mainly via CNS-specific mechanisms (“stress memory” model) and those that are mainly via gut-specific pathogenesis (“pain memory” and “immune memory” models). Can be divided. In one model, animals are surgically created by implanting electrodes into the proximal colon and striated muscle and a catheter into the lateral ventricle of the brain. Rectal bloating is performed by inflation of a balloon inserted into the rectum, and the pressure that elicits a characteristic visceral motor response is measured. The test compound, such as an IL-31 antagonist and / or variant or antagonist, has an appropriate route (such as po, ip, sc, iv or im) and an appropriate time (ie, about 20 minutes for ip or icv) And administered before bloating. Test compounds are evaluated for their ability to affect colonic motility, abdominal contractions and visceral pain.

さらに、小腸の炎症に伴う障害は、本明細書に記載されたその断片、アゴニスト及びアンタゴニストなどのIL-31アンタゴニストで治療されることができる。例えば、過敏性腸症候群（IBS）は、症状（疼痛；下痢及び／又は便秘の発作；異常な胃腸の運動）の非常に広いスペクトルに特徴を有する。原因を特定することは難しく、ストレス、遺伝及び／又は炎症に関連する成分を有するであろう。同様に、抗体及び結合パートナーを含む本発明の抗−IL-31分子は、（大腸炎及びクローン病を含む）炎症性腸疾患を治療するために使用可能である。IBDはIBSよりも深刻であり、下痢、疼痛及び栄養失調に特徴を有する。IBD患者は、しばしば胃腸の癌のリスクが増加する。   Additionally, disorders associated with small intestinal inflammation can be treated with IL-31 antagonists such as fragments, agonists and antagonists thereof described herein. For example, irritable bowel syndrome (IBS) is characterized by a very broad spectrum of symptoms (pain; seizures of diarrhea and / or constipation; abnormal gastrointestinal motility). The cause is difficult to identify and will have components related to stress, heredity and / or inflammation. Similarly, anti-IL-31 molecules of the invention, including antibodies and binding partners, can be used to treat inflammatory bowel disease (including colitis and Crohn's disease). IBD is more serious than IBS and is characterized by diarrhea, pain and malnutrition. Patients with IBD often have an increased risk of gastrointestinal cancer.

胃腸の運動活性は、以下のイヌのモデルにおいて測定されることができる：イヌは麻酔され、そして腹腔が開けられる。管腔外力変換機（収縮を測定するためのセンサー）が、５つの部位、すなわち、幽門輪に対して３ｃｍ近位の胃噴門、幽門輪に対して５cm遠位の十二指腸、幽門輪に対して７０cm遠位の空腸、回腸−結腸境界部に対して５cm近位の回腸、及び回腸−結腸境界部に対して５cm遠位の部位に結紮される。これらの力変換機のリードワイヤーが腹腔から引き出され、そして、コネクターが接続されている肩甲骨の間に作られた皮膚の切開部を通って引き出される。手術後、コネクターを保護するために、ジャケットプロテクターがイヌに設置される。胃腸の運動活性の測定は、手術の２週間後に開始される。自由な測定のために、胃腸管の各部位における収縮運動を測定するために、コネクターが遠隔計測器（電波データ送信機）と接続される。データは、分析のための遠隔計測器を介してコンピュータに保存される。IL-31アンタゴニストなどの被験化合物は、（p.o.、i.v.、s.c.、i.m.などの）適切な経路を介して、胃腸運動活性に影響を与える能力を評価するための適切な時点で投与される。これは、正常なイヌ又は胃腸不全麻痺／イレウスが誘発されたイヌにおいて実施可能である。上記の方法は、Yoshida . and Ito. J. Pharmacol. Experiment. Therap. 257, 781-787 (1991)及びFuruta et al., Biol. Pharm. Bull. 25:103-1071 (2002)中の方法の変法である。   Gastrointestinal motility activity can be measured in the following canine models: dogs are anesthetized and the abdominal cavity is opened. An extraluminal force transducer (a sensor to measure contraction) has five sites: a gastric cardia proximal to 3 cm relative to the pyloric ring, a duodenum 5 cm distal to the pyloric ring, It is ligated to the jejunum 70 cm distal, the ileum 5 cm proximal to the ileum-colon boundary, and the site 5 cm distal to the ileum-colon boundary. The lead wires of these force transducers are withdrawn from the abdominal cavity and through a skin incision made between the scapula to which the connector is connected. After surgery, a jacket protector is placed on the dog to protect the connector. The measurement of gastrointestinal motor activity is started 2 weeks after surgery. For free measurement, a connector is connected to a telemeter (radio data transmitter) in order to measure the contraction movement in each part of the gastrointestinal tract. Data is stored on the computer via a telemeter for analysis. A test compound such as an IL-31 antagonist is administered at an appropriate time point to assess its ability to affect gastrointestinal motility activity via an appropriate route (such as p.o., i.v., s.c., i.m.). This can be done in normal dogs or dogs with induced gastrointestinal dysfunction / ileus. The above method is similar to that of Yoshida and Ito. Pharmacol. Experiment. Therap. 257, 781-787 (1991) and Furuta et al., Biol. Pharm. Bull. 25: 103-1071 (2002). It is a variant.

IL-31は、水痘感染などのウイルス潜伏感染の再活性化のためのトリガーであることができる。水痘帯状疱疹ウイルス（VZV）の一次感染においては、水痘帯状疱疹ウイルスに最も感染しやすいT細胞は、CLA及びCCR4を発現する、CD4陽性メモリーT細胞である。これらは、皮膚ホーミング性T細胞であり、これらは細胞に関連したウイルス血症を促進し、そして皮膚及びDRGへの感染性ウイルスの輸送を促進することができる。これらの細胞は、IL-31の主な製造者である。したがって、VZV一次感染におけるIL-31は、皮膚病変に関与するかゆみ／疼痛に寄与しうる。DRGにおける潜伏ウイルスの再活性化は、VZV-特異的なT細胞応答を誘導し、これは神経因性炎症に寄与する。皮膚ホーミング性のT細胞は、VZVに最も感染しやすく、T細胞からDRGへのウイルスの移動がインビボで観察された。ヘルペス後神経痛は、水痘帯状疱疹ウイルスの再活性化によって引き起こされる帯状疱疹の主要な合併症の一つであり、激しい痛みを特徴とする。本明細書中に参考文献として援用されている、Sato-Takeda, M. et al., Anesthesiology, 2006 104(5): 1063-9を参照のこと。この参考文献は、ヘルペス後疼痛のマウスモデルも教示し、これはヘルペス後神経痛に対応する。すなわち、BALB/cマウス（MHCハプロタイプ：H-2）、C57BL/6マウス（MHCハプロタイプ：H-2）、及びH-2を有するコンジェニックなBALB/c系統であるBALB/bマウスが、単純ペルペスウイルスI型を後肢に経皮接種される。一側性帯状疱疹の皮膚病変及び疼痛に関連した反応（急性のヘルペス疼痛）が引き起こされ、そしてマウスの何匹かは皮膚病変の治癒後に痛みに関連した反応（ヘルペス後疼痛）を示す。単純ヘルペスウイルスI型抗原及びCD3陽性細胞は、急性相において脊髄後根神経節において免疫染色される。本明細書中に参考文献として援用されている、Argoff, C.E. et al., J Pain Symptom Manage. 2004 Oct; 28(4):396-411も参照のこと。したがって、IL-31に対するアンタゴニストは、水痘ウイルスによるウイルス感染の再活性化を制限するか又は予防するために有用であることができる。   IL-31 can be a trigger for reactivation of latent viral infections such as chickenpox infection. In primary infection with varicella-zoster virus (VZV), T cells most susceptible to varicella-zoster virus are CD4-positive memory T cells that express CLA and CCR4. These are skin homing T cells, which promote cell-associated viremia and can facilitate the transport of infectious virus to the skin and DRG. These cells are the main producers of IL-31. Thus, IL-31 in primary VZV infection may contribute to itching / pain involved in skin lesions. Reactivation of latent virus in DRG induces a VZV-specific T cell response, which contributes to neurogenic inflammation. Skin homing T cells were most susceptible to VZV infection and viral transfer from T cells to DRG was observed in vivo. Postherpetic neuralgia is one of the major complications of shingles caused by the reactivation of varicella-zoster virus and is characterized by severe pain. See Sato-Takeda, M. et al., Anesthesiology, 2006 104 (5): 1063-9, which is incorporated herein by reference. This reference also teaches a mouse model of post-herpetic pain, which corresponds to post-herpetic neuralgia. That is, BALB / c mice (MHC haplotype: H-2), C57BL / 6 mice (MHC haplotype: H-2), and BALB / b mice that are congenic BALB / c strains with H-2 are simply Perpesvirus type I is inoculated percutaneously into the hind limb. Unilateral herpes zoster skin lesions and pain-related reactions (acute herpes pain) are caused, and some mice show pain-related reactions (post-herpes pain) after healing of the skin lesions. Herpes simplex virus type I antigen and CD3 positive cells are immunostained in the dorsal root ganglia in the acute phase. See also Argoff, C.E. et al., J Pain Symptom Manage. 2004 Oct; 28 (4): 396-411, incorporated herein by reference. Thus, antagonists to IL-31 can be useful to limit or prevent reactivation of viral infection by varicella virus.

実験的アレルギー性脳脊髄炎（EAE）のためのマウスモデルは、免疫介在性の疾患のメカニズム及び潜在的な治療的介入方法の両方を研究するためのツールとして使用されてきた。このモデルは、ヒトの多発性硬化症に似ており、ミエリン塩基性タンパク質（MBP）又はプロテオリピドタンパク質（PLP）などの神経タンパク質へのT細胞活性化の結果として脱髄を引き起こす。抗原の接種は、CD4+、クラスIIMHC拘束T細胞（Th1）の誘導をもたらす。EAEのためのプロトコールの変更は、モデルの急性の、慢性再発性の、又は受身移入の変形を生じることができる（Weinberg et al., J. Immunol. 162:1818-26., 1999；Mijaba et al., Cell. Immunol.l 186:94-102, 1999；及びGlabinski, Meth. Enzym. 288:182-90, 1997）。IL-31アンタゴニストまたは他の可溶性の融合タンパク質の投与は、症状を緩和し、病気の経過を変更するために有用であることができる。   Mouse models for experimental allergic encephalomyelitis (EAE) have been used as a tool to study both the mechanism of immune-mediated disease and potential therapeutic intervention methods. This model resembles human multiple sclerosis and causes demyelination as a result of T cell activation to neuroproteins such as myelin basic protein (MBP) or proteolipid protein (PLP). Inoculation with antigen results in the induction of CD4 +, class II MHC-restricted T cells (Th1). Altering the protocol for EAE can result in an acute, chronic recurrent or passive transfer variant of the model (Weinberg et al., J. Immunol. 162: 1818-26., 1999; Mijaba et al. al., Cell. Immunol.l 186: 94-102, 1999; and Glabinski, Meth. Enzym. 288: 182-90, 1997). Administration of IL-31 antagonists or other soluble fusion proteins can be useful to alleviate symptoms and alter the course of the disease.

脊髄後根神経節細胞におけるIL-31誘発性のシグナル伝達に対するアンタゴニストは、以下のとおり、***性そう痒症（pruritus uraemicus）；肝炎、肝不全又は胆汁うっ帯によるそう痒；疥癬又は足白癬によるそう痒；妊娠に関連するそう痒；透析患者におけるそう痒；および麻酔及び神経学的障害によるそう痒を治療するために有用であることができる。   Antagonists to IL-31-induced signaling in dorsal root ganglion cells include: uremic pruritus uraemicus; pruritus due to hepatitis, liver failure or cholestasis; Pruritus due to pregnancy; pruritus associated with pregnancy; pruritus in dialysis patients; and pruritus due to anesthesia and neurological disorders can be useful.

***性そう痒症又は尿道のかゆみは、慢性の腎不全の約１３％のケースに存在する耐え難い症状であり（Blachley JD, Blankenship DM, Menter A et al. Uremic pruritus: skin divalent ion content and response to ultraviolet phtotherapy. Am J Kidney Dis 1985; 5: 237-41）；ひっかくことによる、二次的な皮膚の病変が見られうる。それは、腹膜透析又は血液透析を受けている患者にはさらに一般的であり（Murphy M, Carmichael AJ. Renal itch. Clin Exp Dermatol 2000; 25: 103-6）；局在化又は全身性化しうる。かゆみは、急性の腎不全においては存在しない。尿道のかゆみの治療は、かゆみの原因である物質を血液から除去するための集中的かつ効率的な透析に基づき、そして、補体を活性化しない膜の使用に基づく。UV治療、保湿軟膏、活性炭、コレスチラミン（４グラムを1日に２回）、リン酸塩結合剤を用いることもできる。時には、副甲状腺摘出術が必要である。   Uremic pruritus or itching of the urethra is an unbearable symptom present in about 13% of cases of chronic renal failure (Blachley JD, Blankenship DM, Menter A et al. Uremic pruritus: skin divalent ion content and response). to ultraviolet phtotherapy. Am J Kidney Dis 1985; 5: 237-41); secondary skin lesions can be seen due to scratches. It is more common for patients undergoing peritoneal dialysis or hemodialysis (Murphy M, Carmichael AJ. Renal itch. Clin Exp Dermatol 2000; 25: 103-6); it can be localized or generalized. Itching is absent in acute renal failure. Treatment of itching of the urethra is based on intensive and efficient dialysis to remove the substances causing itching from the blood and on the use of a membrane that does not activate complement. UV treatment, moisturizing ointment, activated carbon, cholestyramine (4 grams twice a day), phosphate binders can also be used. Sometimes parathyroidectomy is necessary.

疼痛はかゆみに拮抗する。例えば、Ward, L. et al., Pain 64:129-138, 1996を参照のこと。したがって、IL-31アンタゴニストなどの疼痛のメディエーターは、かゆみに伴う疼痛を治療することに使用可能であり、それによって、かゆみまたは引っかき行動だけでなく、付随する疼痛を緩和する。   Pain antagonizes itching. See, for example, Ward, L. et al., Pain 64: 129-138, 1996. Thus, pain mediators such as IL-31 antagonists can be used to treat pain associated with itching, thereby alleviating associated pain as well as itching or scratching behavior.

そう痒は、肝臓病及び肝内胆汁うっ滞症又は肝後性胆汁うっ滞症の患者の間でよく認識された徴候である。そう痒をもたらす肝臓病は、原発性胆汁性肝硬変、B型及びC型ウイルス性肝炎、原発性硬化性胆管炎、胆管の癌腫、アルコール性肝硬変、自己免疫性肝炎などを含む。そう痒は、全身性化し、手、足およびきつい衣服周辺でより強いが、顔、首及び生殖器領域はめったに含まれない。   Pruritus is a well-recognized sign among patients with liver disease and intrahepatic cholestasis or retrohepatic cholestasis. Liver diseases that cause pruritus include primary biliary cirrhosis, B and C viral hepatitis, primary sclerosing cholangitis, bile duct carcinoma, alcoholic cirrhosis, autoimmune hepatitis and the like. Pruritus is generalized and stronger around hands, feet and tight clothing, but rarely contains the face, neck and genital area.

全身性化したそう痒は、妊婦の１〜８％に存在する。皮膚そう痒感は、妊婦性類天疱瘡（妊娠ヘルペス）、妊娠中の丘疹性又は掻痒性皮膚炎などの妊娠中の皮膚のかゆみとは識別される。皮膚そう痒感は、妊娠末期において最も顕在化する赤みを伴わないものであるが、それはより早く、先ず腹部に現れ、そして全身性化することもある。この症状は通常、夜に悪化し、そして出産後に消滅する（１〜４週間以内）。おそらく、それは、肝内胆汁うっ滞症に関連しているであろう、なぜなら、ガンマGT及びアルカリホスファターゼが増加し、そして時にはこれら患者において直接的にビリルビンレベルも上昇するからである。そう痒は、多胎妊娠においてより頻繁であり、その後の妊娠において又は経口避妊薬の使用中に再発しうる。さらに、妊娠に伴う最も一般的な皮膚炎である、妊娠時に発症する蕁麻疹様丘疹および斑（PUPP）は、抗ヒスタミン薬には反応せず、しばしば分娩後にも持続する。   Generalized pruritus is present in 1-8% of pregnant women. Itchy skin is distinguished from itching of the skin during pregnancy, such as maternal pemphigoid (gestational herpes), papule during the pregnancy, or pruritic dermatitis. Although itching is not accompanied by redness that is most apparent at the end of pregnancy, it appears earlier, first in the abdomen, and may become generalized. This symptom usually worsens at night and disappears after birth (within 1-4 weeks). Perhaps it is related to intrahepatic cholestasis because gamma GT and alkaline phosphatase are increased, and sometimes bilirubin levels are also directly elevated in these patients. Pruritus is more frequent in multiple pregnancies and can recur in subsequent pregnancy or during the use of oral contraceptives. In addition, urticaria-like papules and plaques (PUPP) that occur during pregnancy, the most common dermatitis associated with pregnancy, do not respond to antihistamines and often persist after delivery.

いくつかの血液学的障害は、そう痒を伴うことが知られている。３つの造血細胞系が全て過剰産生される真性赤血球増加症においては、温水に接触した数分後、患者は典型的に体躯にひどいかゆみを有するが、顔、手及び足にはない。水により誘発されたかゆみ（水性のそう痒又は入浴持のかゆみ）は、７０％の患者に存在しうる。このかゆみは、約１５分〜１時間持続することができ、そして患者が入浴を拒否するほどかゆい。ここ１０年、そう痒は、骨髄移植後の移植片対宿主反応を有する患者について記載されてきた。   Some hematological disorders are known to be accompanied by pruritus. In polycythemia, where all three hematopoietic cell lines are overproduced, a few minutes after contact with warm water, patients typically have severe itchiness but not on the face, hands, and feet. Water-induced itching (aqueous itching or bathing itching) may be present in 70% of patients. This itching can last from about 15 minutes to 1 hour and is so itching that the patient refuses to bathe. In the last decade, pruritus has been described for patients with graft-versus-host response after bone marrow transplantation.

IL-31の慢性的な送達が、そう痒と脱毛症及びそれに続く皮膚炎に似た皮膚病変をマウスに誘発することは、IL-31がかゆみを誘発しうることを示唆する。Dillon S.R. et al., Nat Immunol:5, 752(2004)を参照のこと。IL-31のかゆみ応答の誘発への関与は、実施例２に示す２つの方法：（ｉ）IL-31処理マウスにおけるカプサイシン処置及び（ｉｉ）Tac1ノックアウトマウスのIL-31処理によって試験され、神経ペプチドの発現の欠損によって侵害受容性の疼痛反応を顕著に低下させた。さらに、IL-31処理マウスにおけるIL-31の中和がそう痒及び脱毛症を防ぐことができたかを、実施例２において試験した。   Chronic delivery of IL-31 induces skin lesions resembling pruritus and alopecia and subsequent dermatitis, suggesting that IL-31 can induce itching. See Dillon S.R. et al., Nat Immunol: 5, 752 (2004). The involvement of IL-31 in inducing an itchy response was tested by two methods shown in Example 2: (i) capsaicin treatment in IL-31 treated mice and (ii) IL-31 treatment of Tac1 knockout mice, Defects in peptide expression significantly reduced nociceptive pain responses. In addition, it was tested in Example 2 whether IL-31 neutralization in IL-31 treated mice could prevent pruritus and alopecia.

NC/Ngaマウスは、約６〜８週齢で非特定病原体除去の（非−SPF）条件で飼育した場合、臨床経過及び徴候、組織病理学及び免疫病理学を含む多くの面でヒトのADに似たAD様の病変を自然に発生させる。対照的に、SPF条件下で飼育したNC/Ngaマウスは皮膚病変を発生しない。しかしながら、自然発生的な皮膚病変及び引っかき行動は、SPF施設中で飼育され、粗製のほこりダニ抗原の皮内注射を毎週うけるNC/Ngaマウスにおいて同時発生しうる。Matsuoka H., et al., Allergy:58, 139 (2003)を参照のこと。したがって、NC/NgaマウスにおけるADの発生は、AD治療のための新規治療剤の評価のための有用なモデルである。   NC / Nga mice are approximately 6-8 weeks of age when bred under non-specific pathogen elimination (non-SPF) conditions, and human AD in many aspects, including clinical course and signs, histopathology and immunopathology. Spontaneously develops AD-like lesions similar to In contrast, NC / Nga mice raised under SPF conditions do not develop skin lesions. However, spontaneous skin lesions and scratching behavior can occur simultaneously in NC / Nga mice housed in an SPF facility and receiving weekly intradermal injections of crude dust mite antigen. See Matsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003). Thus, the occurrence of AD in NC / Nga mice is a useful model for the evaluation of new therapeutic agents for the treatment of AD.

自然発生的ADのNC/Ngaモデルに加えて、OVAを用いるマウスの皮膚上への感作も、感作されたマウスの皮膚における単核細胞の浸潤をともなう抗原依存性の上皮及び皮膚の肥厚を誘発するためのモデルとして使用可能である。これは通常、総IgE及び特定のIgEの血清レベルの上昇と表裏一体であるが、このモデルにおいては皮膚障壁の機能不全又はそう痒は発生しない。Spergel J.M., et al., J Clin Invest, 101: 1614, (1998)を参照のこと。このプロトコールは、OVAでDO11.10 OVA TCRトランスジェニックマウスを感作することによって、皮膚障壁の調節不全及びそう痒を誘発するために、改変されることができる。感作抗原を認識することのできる抗原特異的T細胞の数を増加させることは、皮膚の炎症レベルを上昇させて、眼に見える引っかき行動及び皮膚の苔癬化／落屑を誘発する。   In addition to the NC / Nga model of spontaneous AD, sensitization on the skin of mice using OVA is also an antigen-dependent epithelial and skin thickening with mononuclear cell infiltration in the sensitized mouse skin. It can be used as a model for inducing This is usually inextricably linked to increased serum levels of total IgE and certain IgEs, but skin barrier dysfunction or pruritus does not occur in this model. See Spergel J.M., et al., J Clin Invest, 101: 1614, (1998). This protocol can be modified to induce skin barrier dysregulation and pruritus by sensitizing DO11.10 OVA TCR transgenic mice with OVA. Increasing the number of antigen-specific T cells that can recognize the sensitizing antigen increases the level of skin inflammation and induces visible scratching behavior and skin lichenification / desquamation.

NC/Nga自然発生的ADモデル及びOVA皮膚上DO11.10モデルはどちらも、ADにおけるIL-31及びIL-31RAの発現、並びに本明細書に記載のアンタゴニストのIL-31の効果を阻害、低下又は中和する能力を測定するために使用可能である。本明細書に記載のアンタゴニストは、皮膚炎及びアトピー性皮膚炎、結節性痒疹および湿疹を含むそう痒性疾患に伴う引っかきを阻害するために有用である。ADにおいては皮膚の激しいかゆみにより引き起こされる引っかき行動は、皮膚の障壁機能を破壊し、そしてケラチノサイトを活性し、ケモカイン産生及び炎症の増大をもたらすことによって、病気を悪化させると考えられる。頻繁にひっかくことにより形成された病変が感染そしてさらに抗原刺激を受けやすいため、多くの医師がADを自己増殖性のサイクルと見ている。全体表面積のほとんどがかかわる患者が、引っかきにくい領域に罹患していない皮膚を有し得ることは、この仮説の信憑性を高めるものである。そう痒を防ぐことによって、IL-31のアンタゴニストまたはその受容体の投与は、IL-31誘発性のケラチノサイト活性化及び神経学的刺激を減少させることそして、炎症とそう痒の間の関連を断つことによって、そう痒性疾患の治療において有効であることができる。そう痒の減少は、神経刺激因子の分泌を減少させ、そして持続的な引っかきに伴う炎症及び擦過傷を減少させ、疾患スコアを改善し及び／又は病気の再発の間隔を延長することももたらすことができる。引っかきの阻害、減少又は防止のみでも、アトピー性皮膚炎、結節性痒疹、及びニキビを含むがこれらに限定されないそう痒性疾患の治療において有効であることができ、それは、引っかきをとめることは、その発生がひっかきに依存する皮膚炎の進行を停止させるであろうからである。   Both the NC / Nga spontaneous AD model and the DO11.10 model on OVA skin inhibit and reduce the expression of IL-31 and IL-31RA in AD and the effects of the antagonist IL-31 described herein Or it can be used to measure the ability to neutralize. The antagonists described herein are useful for inhibiting scratches associated with pruritic diseases including dermatitis and atopic dermatitis, nodular rash and eczema. In AD, scratching behavior caused by severe itching of the skin is thought to exacerbate the disease by disrupting the barrier function of the skin and activating keratinocytes resulting in increased chemokine production and inflammation. Many doctors view AD as a self-propagating cycle because the lesions formed by frequent scratching are susceptible to infection and further antigenic stimulation. The ability of patients with most of the total surface area to have unaffected skin in areas that are difficult to scratch enhances the credibility of this hypothesis. By preventing pruritus, administration of an antagonist of IL-31 or its receptor reduces IL-31-induced keratinocyte activation and neurological stimulation and breaks the link between inflammation and pruritus Can be effective in the treatment of pruritic diseases. Reduction of pruritus may also reduce neurostimulatory secretion and reduce inflammation and scratching associated with persistent scratching, improve disease score and / or extend interval of disease recurrence it can. Inhibition, reduction or prevention of scratches alone can be effective in the treatment of pruritic diseases including, but not limited to, atopic dermatitis, nodular rash, and acne, This is because the occurrence will stop the progression of dermatitis, which depends on scratches.

本明細書中で使用される用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、アフィニティー精製されたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、並びにF(ab')2及びFabタンパク質分解断片などの抗原結合断片を含む。キメラ抗体、Fv断片、単鎖抗体などの遺伝工学処理による無傷の抗体又は断片、並びに合成抗原結合ペプチド及びポリペプチドも含まれる。非ヒト抗体は、非ヒトCDRをヒトフレームワーク及び定常領域に移植するか、又は非ヒト可変ドメイン全体（場合により、露出された残基の置換によってヒト様表面でそれらを覆ってそれらを「クローキング」し、「ベニヤ張りの」抗体とする）を組み込むことによってヒト化されることができる。いくつかの場合には、ヒト化抗体は、適切な結合特性を促進するために、ヒト可変領域フレームワークドメイン内に非ヒト残基を保持してもよい。抗体をヒト化することによって、生物学的半減期が増加され、そしてヒトへの投与による有害な免疫反応の可能性が低下しうる。さらに、ヒト抗体は、PCT国際特許出願公開第WO98/24893号に開示された、ヒトイムノグロブリン遺伝子を含むように工学処理された、トランスジェニック、非ヒト動物中で産生されることができる。これらの動物における内因性のイムノグロブリン遺伝子が相同的組換えなどによって不活性化又は除去されることが好ましい。   The term “antibody” as used herein includes polyclonal antibodies, affinity purified polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, and antigen binding fragments such as F (ab ′) 2 and Fab proteolytic fragments. Also included are intact antibodies or fragments by genetic engineering such as chimeric antibodies, Fv fragments, single chain antibodies, and synthetic antigen binding peptides and polypeptides. Non-human antibodies graft non-human CDRs into the human framework and constant regions, or “cloak them across the non-human variable domain (optionally covering them with a human-like surface by substitution of exposed residues). And then “veneered” antibodies). In some cases, humanized antibodies may retain non-human residues within the human variable region framework domain to facilitate proper binding properties. By humanizing antibodies, the biological half-life can be increased and the potential for adverse immune responses upon administration to humans can be reduced. In addition, human antibodies can be produced in transgenic, non-human animals that have been engineered to contain human immunoglobulin genes, as disclosed in PCT International Patent Application Publication No. WO 98/24893. It is preferred that the endogenous immunoglobulin genes in these animals are inactivated or removed, such as by homologous recombination.

抗体は、以下の：１）それらが閾値レベルの結合活性を示し、そして２）それらが関連するポリペプチド分子と顕著に交差反応しない場合に、特異的に結合すると考えられる。結合の閾値レベルは、本明細書に記載の抗IL-31抗体がIL-31ポリペプチド、ペプチド又はエピトープと、対照（非IL-31）ポリペプチドに対する結合親和性よりも少なくとも１０倍の親和性で結合するとき、決定される。抗体が、１０6M-1以上、好ましくは１０7M-1以上、より好ましくは１０8M-1以上、そして最も好ましくは１０9M-1以上の結合親和性（Ka）を示すことが好ましい。抗体の結合親和性は、Scatchrad分析（Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sci. 51：660-672, 1949)などにより、当業者によって容易に決定可能である。 Antibodies are considered to bind specifically when: 1) they exhibit a threshold level of binding activity, and 2) they do not significantly cross-react with related polypeptide molecules. The threshold level of binding is such that the anti-IL-31 antibody described herein has an affinity at least 10 times greater than the binding affinity for an IL-31 polypeptide, peptide or epitope and a control (non-IL-31) polypeptide. Determined when combining with. The antibody exhibits a binding affinity (Ka) of 10 6 M -1 or more, preferably 10 7 M -1 or more, more preferably 10 8 M -1 or more, and most preferably 10 9 M -1 or more. preferable. The binding affinity of an antibody can be easily determined by those skilled in the art, for example, by Scatchrad analysis (Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sci. 51: 660-672, 1949).

抗IL-31抗体が関連するポリペプチド分子と顕著に交差反応しないかどうかは、IL-31ポリペプチドを検出するが、既知の関連したポリペプチドを検出しない抗体などにより、標準的なウエスタンブロット分析（Ausubel, et al.,上記）によって示される。知られた関連ポリペプチドは、知られたオルソログ及びパラログ、及びタンパク質ファミリーの類似の知られたメンバーなどの、従来技術において開示されたものである。スクリーニングは、非ヒトIL-31及びIL-31突然変異体ポリペプチドを用いても行われることができる。さらに、抗体は、IL-31ポリペプチドに特異的に結合する集団を単離するために、既知の関連ポリペプチドに対して「スクリーニング」されることができる。例えば、IL-31に対する抗体は、不溶性のマトリックスに付着した関連ポリペプチドに吸着され；IL-31に特異的な抗体が適切なバッファー条件下でマトリックスを通って流れる。スクリーニングは、知られた密接に関連するポリペプチドと交差反応しないポリクローナル及びモノクローナル抗体の単離を可能とする（Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988；Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al. (eds.) National Institutes of Health, John Wiley and Sons, Inc., 1995）。特異的な抗体のスクリーニング及び単離は、本分野で知られている。Fundamental Immunology, Paul (eds.) Raven Press, 1993；Getzoff et al., Adv. in Immunol. 43: 1-98, 1988；Monoclonal Antibodies:Principles and Practice, Goding, J.W. (eds.), Academic Press Ltd., 1996；Benjamin et al., Ann. Rev. Immunol. 2: 67-101, 1984を参照のこと。特異的に結合する抗-IL-31抗体は、本分野における多くの方法によって検出可能であり、以下に記載される。   Standard Western blot analysis, such as antibodies that detect IL-31 polypeptides but not known related polypeptides, determine whether anti-IL-31 antibodies do not significantly cross-react with related polypeptide molecules (Ausubel, et al., Supra). Known related polypeptides are those disclosed in the prior art, such as known orthologs and paralogs, and similar known members of the protein family. Screening can also be performed using non-human IL-31 and IL-31 mutant polypeptides. In addition, antibodies can be “screened” against known related polypeptides to isolate a population that specifically binds to an IL-31 polypeptide. For example, antibodies to IL-31 are adsorbed to related polypeptides attached to an insoluble matrix; antibodies specific for IL-31 flow through the matrix under appropriate buffer conditions. Screening allows the isolation of polyclonal and monoclonal antibodies that do not cross-react with known closely related polypeptides (Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al. (Eds.) National Institutes of Health, John Wiley and Sons, Inc., 1995). Screening and isolation of specific antibodies is known in the art. Fundamental Immunology, Paul (eds.) Raven Press, 1993; Getzoff et al., Adv. In Immunol. 43: 1-98, 1988; Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Goding, JW (eds.), Academic Press Ltd. , 1996; Benjamin et al., Ann. Rev. Immunol. 2: 67-101, 1984. Anti-IL-31 antibodies that specifically bind can be detected by a number of methods in the art and are described below.

モノクローナル抗体の調製は、当業者に周知である。発現系により産生された、精製された成熟した組換えヒトIL-31ポリペプチド（配列番号２のアミノ酸残基２７（Leu）〜１６７（Thr））又はマウスオルソログは、モノクローナル抗体を生成するために使用可能である。   The preparation of monoclonal antibodies is well known to those skilled in the art. Purified mature recombinant human IL-31 polypeptide (amino acid residues 27 (Leu) to 167 (Thr) of SEQ ID NO: 2) or mouse ortholog produced by the expression system is used to generate monoclonal antibodies. It can be used.

IL-31介在性シグナル伝達のアンタゴニスト投与の効果は、湿疹面積及び重症度指数（EASI）などの当業者に明らかな他の症状又は複合症状などによる、皮膚の炎症又は皮膚の肥厚、リンパ球の動員及び表皮肥厚の減少、阻害、予防、最小化、中和によってインビボで測定されることができる。さらなる効果は、病変部の皮膚によるサイトカイン又はケモカイン産生の変化又は減少、アトピーパッチテストスコアの低下、及び皮内マイクロ透析又は他の方法により測定された、サイトカイン、ケモカイン又は神経ペプチドなどの可溶性因子の放出の減少を含みうる。かゆみ又は疼痛の程度の評価は、Visual Analogue Scaleなどの臨床的に推奨された機器又はツールを用いて測定可能である。引っかき頻度は、肢移動測定器、指の爪に取付けた圧電振動子装置、あるいは患者における夜間の引っかきの微速度赤外線写真撮影又はビデオ撮影によって測定可能である。疼痛又はかゆみの減少を評価するための他の方法は、当業者に明らかである。   The effect of antagonist administration of IL-31 mediated signaling may be due to skin inflammation or skin thickening, lymphocytes due to other symptoms or complex symptoms apparent to those skilled in the art such as eczema area and severity index (EASI) It can be measured in vivo by reduction, inhibition, prevention, minimization, neutralization of mobilization and epidermal thickening. Further effects include changes or reductions in cytokine or chemokine production by the skin of the lesion, reduction in atopy patch test scores, and soluble factors such as cytokines, chemokines or neuropeptides measured by intradermal microdialysis or other methods. May include a reduction in release. Assessment of the extent of itching or pain can be measured using clinically recommended equipment or tools such as the Visual Analogue Scale. The scratch frequency can be measured by a limb movement measuring device, a piezoelectric vibrator device attached to a fingernail, or a time-lapse infrared photography or video shooting of a night scratch in a patient. Other methods for assessing pain or itching reduction will be apparent to those skilled in the art.

組織培養培地から精製されたモノクローナル抗体は、組換え及び自然のヒトIL-31の定量測定のためのELISAにおけるそれらの有用性に特徴を有する。抗体は、選択され、そして定量的アッセイが開発される。   Monoclonal antibodies purified from tissue culture media are characterized by their utility in ELISA for quantitative determination of recombinant and natural human IL-31. The antibody is selected and a quantitative assay is developed.

組織培養培地から精製されたモノクローナル抗体が、IL-31Ra及びOSMRbを発現する神経細胞への精製された組換えhuIL-31の受容体結合活性をブロック又は低下させるそれらの能力について特徴づけされる（「中和アッセイ」）。このやり方で多数の「中和」モノクローナル抗体が同定される。そして、記載されたヒトIL-31に対する中和モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、ブダペスト条約にしたがって原寄託としてAmerican Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA)特許寄託センターに寄託されることができる。   Monoclonal antibodies purified from tissue culture media are characterized for their ability to block or reduce the receptor binding activity of purified recombinant huIL-31 to neurons expressing IL-31Ra and OSMRb ( "Neutralization assay"). A number of “neutralizing” monoclonal antibodies are identified in this manner. The described hybridomas expressing neutralizing monoclonal antibodies against human IL-31 can be deposited at the American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA) Patent Deposit Center as an original deposit in accordance with the Budapest Treaty.

５つのラット抗−マウスハイブリドーマを類似の方法で作製し、そして以下のクローン名をつけた：クローン271.9.4.2.6.1、クローン271.26.6.6.1、クローン271.33.1.2.2、クローン271.33.3.2.1及びクローン271.39.4.6.5。これらのクローンによって産生されたモノクローナル抗体は、ビニング（すなわち、各抗体が任意の他の結合を阻害することができるかを判定する）、相対的親和性及び中和を含む多くの方法で特徴づけされた。モノクローナル抗体は２つの別々のビンに分類され、クローン271.33.3.2.1は他の４つとは別のエピトープへ結合すると思われる。   Five rat anti-mouse hybridomas were generated in a similar manner and given the following clone names: clone 271.9.4.2.6.1, clone 271.26.6.6.1, clone 271.33.1.2.2, clone 271.33.3.2. 1 and clone 271.39.4.6.5. Monoclonal antibodies produced by these clones are characterized in many ways, including binning (ie, determining whether each antibody can inhibit any other binding), relative affinity and neutralization. It was done. Monoclonal antibodies are classified into two separate bins, and clone 271.33.3.2.1 appears to bind to a different epitope than the other four.

組織培養培地中のモノクローナル抗体は、精製された組換えタンパク質ヒトIL-31の存在下で培養された場合の、受容体への結合をブロック又は減少させるそれらの能力について特徴づけされる。   Monoclonal antibodies in tissue culture media are characterized for their ability to block or reduce binding to the receptor when cultured in the presence of purified recombinant protein human IL-31.

モノクローナル抗体の結合親和性が生成可能である。ヤギ抗−ラットIgG-Fcガンマ特異的抗体（Jackson）が、CM5 Biacoreチップ上に固定化される。各mAbを抗-ラット捕捉表面上に結合させ、そして、一連の濃度のIL-31がmAb全体に注入されて、結合定数（Ka）と解離定数（Kd）を求めるために、アッセイが最適化される。各試行の後、２０mMのHClを２回注入することによって、表面は抗-ラット抗体に再生される。それぞれについてデータを生成し、そして、IL-31タンパク質への抗−IL-31抗体の結合を評価するために評価ソフトウエア（BIAevaluation software version 3.2., Pharmacia BIAcore, Uppsala, Sweden）が使用される。   The binding affinity of the monoclonal antibody can be generated. Goat anti-rat IgG-Fc gamma specific antibody (Jackson) is immobilized on a CM5 Biacore chip. The assay is optimized to bind each mAb onto the anti-rat capture surface and a series of concentrations of IL-31 is injected across the mAb to determine the binding constant (Ka) and dissociation constant (Kd) Is done. After each trial, the surface is regenerated to an anti-rat antibody by injecting 20 mM HCl twice. Evaluation software (BIAevaluation software version 3.2., Pharmacia BIAcore, Uppsala, Sweden) is used to generate data for each and assess anti-IL-31 antibody binding to IL-31 protein.

想定される抗−IL-31 mAbsによって認識される標的分子、IL-31が本当にIL-31であることについての生化学的確認は、標準的な免疫沈降法、その後の、どちらもIL-31によりトランスフェクトされないBaf3細胞とトランスフェクトされたBaf3細胞から調製された可溶性の膜を使用する、SDS-PAGE分析又はウエスタンブロッティング法によって実施される。mAbsは、それらの特異的な免疫沈降能力又は可溶性IL-31-muFcタンパク質のウエスタンブロットについて試験される。   The biochemical confirmation that IL-31 is indeed IL-31, the target molecule recognized by the anti-IL-31 mAbs, is based on standard immunoprecipitation followed by IL-31 Performed by SDS-PAGE analysis or Western blotting using soluble membranes prepared from untransfected Baf3 cells and transfected Baf3 cells. mAbs are tested for their specific immunoprecipitation ability or Western blot of soluble IL-31-muFc protein.

IL-31に対するモノクローナル抗体は、共有にかかる、2006年5月8日出願の米国特許出願第11/430,066号、米国特許出願公開第2006-0275296号に記載されている。組織培養培地から精製されたこれらのモノクローナル抗体は、IL-31がその受容体に結合する能力をブロック又は阻害するそれらの能力について中和アッセイにおいて特徴づけされた。この方法で２０の「中和」モノクローナル抗体が同定された。これらのクローンによって産生されたモノクローナル抗体は、ビニング（すなわち、各抗体が任意の他の結合を阻害することができるかを判定する）、相対的親和性及び中和を含む多くの方法で特徴づけされた。１０個の良好な中和抗体が同じビンに属し、他のモノクローナル抗体は３つの別々のビンに群分けされるようである。さらに、良好な中和抗体のうちの８つは、IgG1アイソタイプであり、他の２つはIgG2aアイソタイプである。かかるモノクローナル抗体は、補体結合及びADCC活性を最小化するように、IgG1又はIgG4でありうる。   Monoclonal antibodies against IL-31 are described in commonly-owned US patent application Ser. No. 11 / 430,066 filed May 8, 2006, US Patent Application Publication No. 2006-0275296. These monoclonal antibodies purified from tissue culture medium were characterized in neutralization assays for their ability to block or inhibit the ability of IL-31 to bind to its receptor. Twenty “neutralizing” monoclonal antibodies were identified in this way. Monoclonal antibodies produced by these clones are characterized in many ways, including binning (ie, determining whether each antibody can inhibit any other binding), relative affinity and neutralization. It was done. Ten good neutralizing antibodies appear to belong to the same bin and the other monoclonal antibodies appear to be grouped into three separate bins. Furthermore, eight of the good neutralizing antibodies are IgG1 isotypes and the other two are IgG2a isotypes. Such monoclonal antibodies can be IgG1 or IgG4 so as to minimize complement binding and ADCC activity.

上記のヒトIL-31に対する中和モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、ブダペスト条約により、American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA)特許寄託センターへ原寄託として寄託され、以下のATCC寄託番号：2005年6月29日に寄託されたATCC 特許寄託番号PTA-6815；2005年6月29日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6816；2005年7月6日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6829；2005年7月6日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6830；2005年7月6日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6831、2005年7月19日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6871；2005年7月19日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6872、2005年7月19日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6875；及び2005年7月19日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6873を与えられた。   The hybridoma expressing the neutralizing monoclonal antibody against human IL-31 was deposited as an original deposit to the American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA) Patent Deposit Center under the Budapest Treaty. The following ATCC deposit number: 2005 ATCC Patent Deposit Number PTA-6815 deposited on June 29; ATCC Patent Deposit Number PTA-6816 deposited on June 29, 2005; ATCC Patent Deposit Number PTA- deposited on July 6, 2005 6829; ATCC Patent Deposit Number PTA-6830 deposited on July 6, 2005; ATCC Patent Deposit Number PTA-6831 deposited on July 6, 2005, ATCC Patent Deposited on July 19, 2005 Deposit number PTA-6871; ATCC patent deposit number PTA-6872 deposited on 19 July 2005; ATCC patent deposit number PTA-6875 deposited on 19 July 2005; and 19 July 2005 Deposited ATCC Patent Deposit Number PTA-6873.

本明細書に記載のマウスIL-31に対する中和モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、ブダペスト条約により、American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA)特許寄託センターへ原寄託として寄託され、以下のATCC寄託番号：2005年７月19日に寄託されたATCC特許寄託番号PTA-6874を与えられた。これらのハイブリドーマクローンにより産生されたモノクローナル抗体は、２mMのL-グルタミン、１００μg/mlのペニシリン及び１００μg/mlのストレプトマイシン硫酸塩、および１０％の胎児クローンI血清を含む９０％Iscove's改変ダルベッコ培地（Hyclone Laboratories）中で培養されることができる。クローンは、２×１０5細胞／mlで培養を開始し、そして１×１０5〜５×１０5細胞／mlで、３７℃及び５〜６％COで維持されることができる。その後のトランスファーによって細胞は無血清条件に適合されることができる。凍結された細胞は、９０％血清、１０％DMSO中で凍結され、そし液体窒素フリーザーの蒸気相中に保存される。 Hybridomas expressing neutralizing monoclonal antibodies against mouse IL-31 described herein were deposited as original deposits at the American Type Tissue Culture Collection (ATCC; Manassas VA) Patent Deposit Center under the Budapest Treaty, and the following ATCC deposits were made: Number: ATCC Patent Deposit Number PTA-6874 deposited on July 19, 2005. Monoclonal antibodies produced by these hybridoma clones are 90% Iscove's modified Dulbecco's medium (Hyclone) containing 2 mM L-glutamine, 100 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin sulfate, and 10% fetal clone I serum. Laboratories). Clones can be cultured at 2 × 10 5 cells / ml and maintained at 37 ° C. and 5-6% CO at 1 × 10 5 to 5 × 10 5 cells / ml. Subsequent transfers allow the cells to be adapted to serum-free conditions. Frozen cells are frozen in 90% serum, 10% DMSO and stored in the vapor phase of a liquid nitrogen freezer.

本明細書に記載の方法によって生成されたIL-31アンタゴニストは、様々な方法によって中和、阻害、低下、拮抗について試験されることができる。さらに、中和は、リガンド及びモノクローナル抗体の存在下でのケラチノサイト培養からのTARC及びMDCなどの前炎症性ケモカイン産生の減少を測定することによっても試験されることができる。MCP-1、MIP1a、TARC、MCP-1、MDC、IL-6、IL-8、1-309、SCYA19、MPIF-1、TECK、MIP-1b、SCYB13、GROa/MGSA、CTACK、SCCA1/Serpin B3、TSLP、及びNT-4も使用されてよい。中和は、本明細書に記載のインビボモデルによって測定されることもできる。   IL-31 antagonists produced by the methods described herein can be tested for neutralization, inhibition, reduction, antagonism by various methods. Furthermore, neutralization can also be tested by measuring the reduction of pro-inflammatory chemokine production such as TARC and MDC from keratinocyte cultures in the presence of ligand and monoclonal antibody. MCP-1, MIP1a, TARC, MCP-1, MDC, IL-6, IL-8, 1-309, SCYA19, MPIF-1, TECK, MIP-1b, SCYB13, GROa / MGSA, CTACK, SCCA1 / Serpin B3 TSLP, and NT-4 may also be used. Neutralization can also be measured by the in vivo model described herein.

本明細書に記載の生理活性を有するアンタゴニスト又は抗体コンジュゲートは、静脈内、動脈内、又は管内、皮下、局所に送達されることができ、或いは目的の作用部位において局部的に導入されてもよい。   The biologically active antagonists or antibody conjugates described herein can be delivered intravenously, intraarterially, or intravascularly, subcutaneously, locally, or even introduced locally at the site of action of interest. Good.

本発明のアンタゴニストは、NcNgaモデル、Ova皮膚上モデル、慢性過敏性モデル、慢性ハプテンモデル、カルシウムフラックスモデル、アロジニアモデルを含むがこれらに限定されないインビボモデルのいずれかによって、IL-31リガンドへのそれらの結合能について測定されることができる。   The antagonists of the present invention may be directed to IL-31 ligand by any of in vivo models including but not limited to NcNga model, Ova on-skin model, chronic hypersensitivity model, chronic hapten model, calcium flux model, Arosinia model. Their binding ability can be measured.

抗-IL-31抗体の阻害効果を測定するためのさらなるモデルは、本分野の当業者に知られ、かつ本明細書に記載されており、Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518: 133-139, 2005；及びYoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202: 541-549, 2005に記載されている。   Additional models for measuring the inhibitory effect of anti-IL-31 antibodies are known to those skilled in the art and described herein, Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518: 133-139, 2005; and Yoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202: 541-549, 2005.

神経因性炎症を測定するためのマウスモデルは本分野で知られている。例えば、Sweitzer, S. M. et al., J. Neuroimmunology 125: 82-93; 2002及びHonore, P., et al., Neuroscience, (98): 585-598, 2000を参照のこと。Yonehara N. and Yoshimura M., Pain, 2001 (92/1-2): pp.259-265を参照のこと。   Mouse models for measuring neurogenic inflammation are known in the art. See, for example, Sweitzer, S. M. et al., J. Neuroimmunology 125: 82-93; 2002 and Honore, P., et al., Neuroscience, (98): 585-598, 2000. See Yonehara N. and Yoshimura M., Pain, 2001 (92 / 1-2): pp. 259-265.

本発明の側面のうちでは、本発明は、哺乳動物の神経組織における炎症の治療方法；哺乳動物における疼痛の治療方法；脊髄後根神経節細胞におけるIL-31誘導性シグナル伝達をアンタゴナイズする方法；火傷に伴う症状を治療するための方法；ウイルス感染に伴う症状を治療しそしてウイルス感染の再活性化を予防するための方法；並びに炎症性腸疾患に伴う疼痛を治療するための方法を提供する。実施態様のうちでは、炎症性腸疾患はクローン病である。   Among aspects of the invention, the invention relates to a method of treating inflammation in mammalian neural tissue; a method of treating pain in mammals; a method of antagonizing IL-31-induced signaling in dorsal root ganglion cells A method for treating symptoms associated with burns; a method for treating symptoms associated with viral infections and preventing reactivation of viral infections; and a method for treating pain associated with inflammatory bowel disease; To do. In an embodiment, the inflammatory bowel disease is Crohn's disease.

これらの側面の実施態様のうちでは、本発明は、神経組織にIL-31アンタゴニストを加えることを含み、ここで、炎症、疼痛、脊髄後根神経節におけるシグナル伝達、ウイルスの感染又は再活性化、或いは火傷の組織、或いは炎症性腸疾患に伴う疼痛が減少され、制限され、予防され、最小化され、又は中和される。   Among embodiments of these aspects, the invention includes adding an IL-31 antagonist to neural tissue, wherein inflammation, pain, signaling in dorsal root ganglia, viral infection or reactivation Or pain associated with burn tissue or inflammatory bowel disease is reduced, limited, prevented, minimized or neutralized.

他の実施態様のうちでは、IL-31アンタゴニストは、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する。他の実施態様のうちでは、アンタゴニストは、以下の：抗−イディオタイプ抗体；抗体断片；キメラ抗体；及びヒト化抗体から選ばれる。他の実施態様のうちでは、アンタゴニストは抗体である。他の実施態様のうちでは、抗体はモノクローナル抗体である。他の実施態様のうちでは、抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合し、ここで、該ポリペプチドは、以下の：ａ）ATCC特許寄託番号PTA-6815；ｂ）ATCC特許寄託番号PTA-6816；ｃ）ATCC特許寄託番号PTA-6829；ｄ）ATCC特許寄託番号PTA-6830；ｅ）ATCC特許寄託番号PTA-6831；ｆ）ATCC特許寄託番号PTA-6871；ｇ）ATCC特許寄託番号PTA-6872；ｈ）ATCC特許寄託番号PTA-6875；及びｉ）ATCC特許寄託番号PTA-6873からなる群から選ばれるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に結合することができる。他の実施態様のうちでは、モノクローナル抗体は、抗体のビンから選ばれ、ここで、該抗体を産生するハイブリドーマは、以下の：ａ）ATCC特許寄託番号PTA-6815；ｂ）ATCC特許寄託番号PTA-6829；ｃ）ATCC特許寄託番号PTA-6816；ｄ）ATCC特許寄託番号PTA-6871；及びｅ）ATCC特許寄託番号PTA-6830から選ばれる。他の実施態様のうちでは、モノクローナル抗体は、抗体のビンから選ばれ、ここで、該抗体を産生するハイブリドーマは、以下の：ａ）ATCC特許寄託番号PTA-6872；ｂ）ATCC特許寄託番号PTA-6873；ｃ）ATCC特許寄託番号PTA-6875；及びｄ）ATCC特許寄託番号PTA-6831から選ばれる。   In other embodiments, the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising the amino acid sequence set forth in residues 27 to 164 of SEQ ID NO: 2. In other embodiments, the antagonist is selected from the following: anti-idiotype antibodies; antibody fragments; chimeric antibodies; and humanized antibodies. In other embodiments, the antagonist is an antibody. In other embodiments, the antibody is a monoclonal antibody. In other embodiments, the antibody specifically binds to a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, wherein the polypeptide comprises the following: a) ATCC Patent Deposit Number PTA-6815; b C) ATCC Patent Deposit Number PTA-6829; d) ATCC Patent Deposit Number PTA-6830; e) ATCC Patent Deposit Number PTA-6831; f) ATCC Patent Deposit Number PTA-6871; g H) ATCC Patent Deposit Number PTA-6875; and i) A monoclonal antibody produced by a hybridoma selected from the group consisting of ATCC Patent Deposit Number PTA-6873. In other embodiments, the monoclonal antibody is selected from an antibody bin, wherein the hybridoma producing the antibody is: a) ATCC Patent Deposit Number PTA-6815; b) ATCC Patent Deposit Number PTA C) ATCC Patent Deposit Number PTA-6816; d) ATCC Patent Deposit Number PTA-6871; and e) ATCC Patent Deposit Number PTA-6830. In other embodiments, the monoclonal antibody is selected from an antibody bin, wherein the hybridoma producing the antibody is: a) ATCC Patent Deposit Number PTA-6872; b) ATCC Patent Deposit Number PTA -6873; c) selected from ATCC Patent Deposit Number PTA-6875; and d) ATCC Patent Deposit Number PTA-6831.

他の実施態様のうちでは、神経組織は脊髄後根神経節又は脊髄組織を含む。   In other embodiments, the neural tissue comprises dorsal root ganglia or spinal cord tissue.

実施例１：神経組織中のIL-31RA、IL-31及びpOSMRbのためのインサイチュハイブリダイゼーション
すべて同じ個体に由来する５つのヒト脳組織サンプル及び脊髄サンプル、そして異なる患者由来の脊髄後根神経節（DRG）をこの試験においてアッセイした。 Example 1: In situ hybridization for IL-31RA, IL-31 and pOSMRb in neural tissue Five human brain tissue samples and spinal cord samples all from the same individual, and dorsal root ganglia from different patients ( DRG) was assayed in this study.

使用したプローブは、IL-31RA、IL-31及びOSMRベータに対するプローブであった。   The probes used were probes for IL-31RA, IL-31 and OSMR beta.

結果を表１に示す：   The results are shown in Table 1:

Figure 2013047259
脳の切片：３つのプローブ全てについて、脳のすべての領域において検出可能な量のシグナルはなかった。視床下部中のニューロンの小部分におけるpOSMRbの染色には一貫性が欠如していた。この一貫性の欠如は、検出レベル前後の非常に低いpOSMRbレベルによって生じたかもしれない。
Figure 2013047259
 Brain section: For all three probes, there was no detectable amount of signal in all areas of the brain. The staining of pOSMRb in a small part of neurons in the hypothalamus was inconsistent. This inconsistency may have been caused by very low pOSMRb levels around the detection level.

脊髄：脊髄の１つの領域が陽性に染色された。脊髄切片の考えうる位置又は方向についての情報はない。シグナルは、脊髄の前部（腹部）内にあるようである。（これも前部の）反対の側／領域は陰性であった。陽性シグナルは、より大きなニューロンの小部分に限られるようである。IL-31RA及びpOSMRbはどちらも、この領域において類似の発現パターンを示した。IL-31は陰性であった。   Spinal cord: One area of the spinal cord stained positive. There is no information about possible positions or orientations of spinal cord sections. The signal appears to be in the front (abdomen) of the spinal cord. The opposite side / region (also the front) was negative. A positive signal appears to be limited to a small portion of larger neurons. Both IL-31RA and pOSMRb showed similar expression patterns in this region. IL-31 was negative.

脊髄後根神経節（DRG）：DRG中の単極性ニューロンは、IL-31RA及びpOSMRbの両方について陽性であった。小さなサテライト細胞は陰性であった。IL-31は、ニューロンを含むすべての細胞において陰性であった。   Spinal dorsal root ganglia (DRG): Unipolar neurons in DRG were positive for both IL-31RA and pOSMRb. Small satellite cells were negative. IL-31 was negative in all cells including neurons.

したがって、IL-31アンタゴニストは、神経因性の刺激に伴う症状及び神経因性の刺激を緩和するために有用であることができる。したがって、IL-31アンタゴニストは、脊髄後根神経節刺激などの神経細胞の刺激に伴う炎症及び疼痛の治療に使用されることができ、そして疼痛及び炎症の減少、制限、最小化、予防又は中和として測定されることができる。   Thus, IL-31 antagonists can be useful for alleviating symptoms associated with neurogenic stimulation and neurogenic stimulation. Thus, IL-31 antagonists can be used to treat inflammation and pain associated with stimulation of nerve cells such as dorsal root ganglion stimulation and reduce, limit, minimize, prevent or moderate pain and inflammation. It can be measured as a sum.

実施例２：かゆみ応答の誘導におけるIL-31の関与
Ａ．方法Ｉ（ＩＬ−３１処理マウスのカプサイシン処置） Example 2: Involvement of IL-31 in the induction of itching responses Method I (capsaicin treatment of IL-31 treated mice)

１０週齢のBALB/c動物（CRL）を麻酔し、そして、食塩水中、１０％エタノール+１０％Tween-80中の４mg/mlのカプサイシン溶液を首筋の皮下に０．２５ml注射する前に、持続性の鎮痛剤、塩酸ブプレノルフィンを０．１mg/kgで皮下注射した。神経毒処理のあと、少なくとも３０分間動物を麻酔しておいた。４８時間後、２０μg/日のIL-31の１４日間の持続的送達のために、１４日間の浸透圧ポンプを皮下に移植した。マウスは、６日間毎日、脱毛症及びそう痒について、以下の基準：０＝ひっかきなし、動物は正常に見える、１＝小部分における被毛の菲薄化、引っかきが認められる、２＝わずかな脱毛（小さなまだら）、引っかき、３＝中度の脱毛、引っかき、および４＝重度の脱毛、過度の引っかき、を用いてモニターした。   A 10 week old BALB / c animal (CRL) was anesthetized and before a 0.25 ml subcutaneous injection of 4 mg / ml capsaicin solution in 10% ethanol + 10% Tween-80 in saline. Sustained analgesic agent, buprenorphine hydrochloride, was injected subcutaneously at 0.1 mg / kg. The animals were anesthetized for at least 30 minutes after the neurotoxin treatment. After 48 hours, a 14-day osmotic pump was implanted subcutaneously for 14-day continuous delivery of 20 μg / day IL-31. Mice are daily for 6 days for alopecia and pruritus with the following criteria: 0 = no scratching, animals appear normal, 1 = thin hair thinning and scratching in small parts, 2 = slight hair loss (Small mottle), scratches, 3 = moderate hair loss, scratches, and 4 = severe hair loss, excessive scratches were monitored.

結果は、非カプサイシン処理マウスが、３日間のIL-31送達後に２．６２５の平均引っかき／脱毛スコアを示した一方、カプサイシン処置マウスは１という顕著に低いスコアを示したことを実証した。したがって、IL-31の送達前にカプサイシン処置したマウスは、引っかき及び脱毛の発生の遅れ並びに引っかき及び脱毛の強度の低いスコアを、実験の６日間にわたって示した。これらのデータは、IL-31が、IL-31によって誘導される脱毛症及びそう痒に関与する何らかの神経成分を誘導することを示唆する。したがって、IL-31の中和は、かゆみの発生率及び強度を低下させ、そしてしたがって、かゆみを含む皮膚の障害に罹った患者において皮膚炎を減少させうる。   The results demonstrated that non-capsaicin treated mice showed an average scratch / hair loss score of 2.625 after 3 days of IL-31 delivery, while capsaicin treated mice showed a significantly lower score of 1. Therefore, mice treated with capsaicin prior to delivery of IL-31 showed a delayed onset of scratching and hair loss and a low score for scratching and hair loss over the 6 days of the experiment. These data suggest that IL-31 induces some neural component involved in IL-31-induced alopecia and pruritus. Thus, neutralization of IL-31 can reduce the incidence and intensity of itching and thus reduce dermatitis in patients with skin disorders including itching.

Ｂ．方法ＩＩ
TacI遺伝子を欠損するホモ接合性のマウスは、検出可能なサブスタンスP又はニューロキニンAを発現しない。これらのマウスは、中度〜強度の刺激に対する侵害受容性の疼痛反応が顕著に減少し、そしてしたがって疼痛／かゆみの進行と炎症性疾患状態に対するタキキニンペプチドの寄与を研究するための有用なツールである。１２週齢のTac1ノックアウトマウスに、１μg/日のIL-31タンパク質を送達するための１４日間浸透圧ポンプを移植し、毎日、脱毛症及びそう痒について、以下の基準：０＝ひっかきなし、動物は正常に見える、１＝小部分における被毛の菲薄化、引っかきが認められる、２＝わずかな脱毛（小さなまだら）、引っかき、３＝中度の脱毛、引っかき、および４＝重度の脱毛、過度の引っかき、を用いて観察した。 B. Method II
Homozygous mice lacking the TacI gene do not express detectable substance P or neurokinin A. These mice have a significantly reduced nociceptive pain response to moderate to intense stimuli and are therefore a useful tool to study the contribution of tachykinin peptides to pain / itch progression and inflammatory disease states is there. Twelve week old Tac1 knockout mice were implanted with an osmotic pump for 14 days to deliver 1 μg / day of IL-31 protein, and daily for alopecia and pruritus the following criteria: 0 = no scratch, animals Appears normal 1 = thinning of the hair in small parts, scratches are observed 2 = slight hair loss (small mottle), scratches 3 = moderate hair loss, scratches, and 4 = severe hair loss, excessive Was observed using a scratch.

この試験の結果は、Tac1欠損マウスがIL-31誘導性のひっかき／脱毛に対して、野生型対照マウスよりも感受性が低かったことを示す。野生型マウスの１００％（１０／１０）が、６日間のIL-31処理による引っかき及び脱毛の証拠を示した一方、Tac１欠損マウスのわずか３３．３％（２／６）が同じ時点で引っかき及び脱毛の徴候を示した。これらのデータは、IL-31が、IL-31処理マウスにおける引っかき／脱毛表現型に寄与する神経成分を誘導し、そして、IL-31の中和は、皮膚炎の状況において引っかきの発生率及び強度を低下させうるということを示している。   The results of this study indicate that Tac1-deficient mice were less sensitive to IL-31-induced scratch / hair removal than wild type control mice. 100% (10/10) of wild-type mice showed evidence of scratching and hair loss after 6 days of IL-31 treatment, while only 33.3% (2/6) of Tac1-deficient mice were scratched at the same time point. And showed signs of hair loss. These data indicate that IL-31 induces a neuronal component that contributes to the scratch / hair loss phenotype in IL-31 treated mice, and neutralization of IL-31 is related to the incidence of scratches in the dermatitis situation and It shows that the strength can be reduced.

Ｃ．方法ＩＩＩ（IL-31中和抗体の投与）
およそ８〜１２週齢の正常な雌性BALB/cマウス（CRL）に、１μg/日のmIL-31を送達する１４日間浸透圧ポンプ（Alzet、＃2002）を皮下に移植した。各群のマウスは、IL-31送達の１週間前から開始して週に２日、１０mg/kg（２００μg/マウス）のラット抗−マウスIL-31モノクローナル抗体の腹腔内（i.p.）注射を受けた。対照群のマウスは、同一の投薬スケジュールで、ビヒクル（PBS／０．１％BSA）のi.p.注射を受けた。毎日、脱毛症及びそう痒について、以下の基準：０＝ひっかきなし、動物は正常に見える、１＝小部分における被毛の菲薄化、引っかきが認められる、２＝わずかな脱毛（小さなまだら）、引っかき、３＝中度の脱毛、引っかき、および４＝重度の脱毛、過度の引っかき、を用いてマウスを評点した。 C. Method III (administration of IL-31 neutralizing antibody)
Approximately 8-12 week old normal female BALB / c mice (CRL) were implanted subcutaneously with a 14 day osmotic pump (Alzet, # 2002) delivering 1 μg / day of mIL-31. Each group of mice received an intraperitoneal (ip) injection of 10 mg / kg (200 μg / mouse) rat anti-mouse IL-31 monoclonal antibody 2 days a week starting one week prior to IL-31 delivery. It was. Control mice received ip injections of vehicle (PBS / 0.1% BSA) with the same dosing schedule. Every day for alopecia and pruritus, the following criteria: 0 = no scratching, the animal looks normal, 1 = thinning of the hair in small parts, scratches are observed, 2 = slight hair loss (small mottle), Mice were scored using scratch, 3 = moderate hair loss, scratch, and 4 = severe hair loss, excessive scratch.

すべての実験においては、ラット抗−mIL-31 mAbで処置したマウスは、約５〜７日症状の発生が遅れ、脱毛症及びそう痒の総スコアが低かった。（投薬頻度又は濃度にかかわらず）すべてのmAb処置マウスの群が、試験１３日目までに対照マウスに類似の脱毛症及びそう痒を発生した。これらのデータは、IL-31の中和が、IL-31によって誘導された引っかき／脱毛反応の発症を遅らせうることを示唆する。   In all experiments, mice treated with rat anti-mIL-31 mAb were delayed in onset of symptoms for about 5-7 days and had a low total score for alopecia and pruritus. All groups of mAb treated mice (regardless of dosing frequency or concentration) developed alopecia and pruritus similar to control mice by day 13 of the study. These data suggest that neutralization of IL-31 may delay the onset of the scratch / hair loss response induced by IL-31.

実施例３
IL-31RA/OSMRベータ受容体ルシフェラーゼアッセイ
修飾されたc-fos Sis誘導性要素（m67SIE又はhSIE）（Sadowski, H. et al., Science 261:1739-1744, 1993）、p21 WAF1遺伝子からのp21 SIE1（Chin, Y. et al., Science 272:719-722, 1996）、β−カゼイン遺伝子の乳腺応答要素（Schmitt-Ney, M. et al., Mol. Cell. Biol. 11:3745-3755, 1991）、及びFeg RI遺伝子のSTAT誘導性要素（Seidel, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 92:3041-3045, 1995）を含む、４つの遺伝子からのSTAT転写制御因子結合要素を含む相補的オリゴヌクレオチドを用いて、KZ134プラスミドを構築した。これらのオリゴヌクレオチドは、Asp718-XhoI適合性末端を含み、同じ酵素で消化され、そしてネオマイシン選択マーカーを含む、c-fosプロモーターを有するレシピエントであるホタルルシフェラーゼレポーターベクター中に標準的な方法を用いてライゲーションした（Poulsen, L.K. et al., J. Biol. Chem. 273:6229-6232, 1998）。KZ134プラスミドは、標準的なトランスフェクション及び選択方法を用いて安定にBaF3細胞をトランスフェクトしてBaF3/KZ134細胞株を作製するために使用した。 Example 3
IL-31RA / OSMR beta receptor luciferase assay modified c-fos Sis inducible element (m67SIE or hSIE) (Sadowski, H. et al., Science 261: 1739-1744, 1993), p21 from the p21 WAF1 gene SIE1 (Chin, Y. et al., Science 272: 719-722, 1996), the mammary gland response element of the β-casein gene (Schmitt-Ney, M. et al., Mol. Cell. Biol. 11: 3745-3755 1991, and STAT inducible elements of the Feg RI gene (Seidel, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 3041-3045, 1995). The KZ134 plasmid was constructed using complementary oligonucleotides containing binding elements. These oligonucleotides use standard methods in a firefly luciferase reporter vector that is a recipient with a c-fos promoter containing Asp718-XhoI compatible ends, digested with the same enzymes, and containing a neomycin selectable marker. (Poulsen, LK et al., J. Biol. Chem. 273: 6229-6232, 1998). The KZ134 plasmid was used to stably transfect BaF3 cells using standard transfection and selection methods to generate the BaF3 / KZ134 cell line.

完全長IL-31RA又はIL-31RA/OSMRベータ受容体を発現する、安定なBaF3/KZ134指示細胞株を構築した。標準的な技術を用いてクローンを希釈し、培養し、そして選択した。ヒトIL-31培養上清又は精製IL-31タンパク質を誘導物質として用いるルシフェラーゼアッセイによってクローンをスクリーニングした（以下のBを参照のこと）。（STATルシフェラーゼを介する）最もルシフェラーゼ反応が高く、そして最もバックグラウンドの低いクローンを選択した。安定なトランスフェクタント細胞株を選択した。細胞株中にトランスフェクトされた受容体によって、細胞株をBaF3/KZ134/IL-31RA又はBaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRベータと呼んだ。   A stable BaF3 / KZ134 indicator cell line expressing full-length IL-31RA or IL-31RA / OSMR beta receptor was constructed. Clones were diluted, cultured and selected using standard techniques. Clones were screened by luciferase assay using human IL-31 culture supernatant or purified IL-31 protein as inducer (see B below). The clone with the highest luciferase reaction (via STAT luciferase) and the lowest background was selected. A stable transfectant cell line was selected. Depending on the receptor transfected into the cell line, the cell line was called BaF3 / KZ134 / IL-31RA or BaF3 / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta.

同様に、BHK細胞株も本明細書に記載の方法を用いて構築し、そして、本明細書に記載のルシフェラーゼアッセイにおいて使用した。この細胞株を、細胞株中にトランスフェクトされた受容体によって、細胞株BHK/KZ134/IL-31RA又はBHK/KZ134/IL-31RA/OSMRベータと呼んだ。   Similarly, the BHK cell line was constructed using the methods described herein and used in the luciferase assays described herein. This cell line was called cell line BHK / KZ134 / IL-31RA or BHK / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta depending on the receptor transfected into the cell line.

BaF3/KZ134/IL-31RA及びBaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ細胞を遠心分離して沈降させ、そしてmIL-3を含まない培地で洗浄した。細胞を遠心分離した沈降させ、そして３回洗浄して、mIL-3の除去を確実にした。細胞を血球計で計数した。細胞を約３０，０００細胞／ウエルで、mIL-3を含まない培地を用いて１００μl／ウエルの体積で９６ウエルフォーマット中で培養した。次のアッセイにおける対照として使用するためのトランスフェクトされないBaF3/KZ134細胞に同じ手順を使用した。BHK/KZ134/IL-31RA又はBHK/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ細胞を、１００μlの培地中１５，０００細胞／ウエルで、９６ウエルフォーマット中で培養した。親BHK/KZ134細胞を対照として使用した。   BaF3 / KZ134 / IL-31RA and BaF3 / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta cells were centrifuged to settle and washed with medium lacking mIL-3. Cells were spun down and washed 3 times to ensure removal of mIL-3. Cells were counted with a hemocytometer. Cells were cultured at about 30,000 cells / well in a 96-well format at a volume of 100 μl / well using medium without mIL-3. The same procedure was used for untransfected BaF3 / KZ134 cells for use as a control in subsequent assays. BHK / KZ134 / IL-31RA or BHK / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta cells were cultured in a 96 well format at 15,000 cells / well in 100 μl medium. Parental BHK / KZ134 cells were used as a control.

BaF3/KZ134/IL-31RA、BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ、BHK/KZ134/IL-31RA又はBHK/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ細胞のSTAT活性化を、培養上清又は精製タンパク質を用いて評価した。希釈された培養上清又はタンパク質の１００マイクロリッターを、BaF3/KZ134/IL-31RA、BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ、BHK/KZ134/IL-31RA又はBHK/KZ134/IL-31RA/OSMRベータ細胞に添加する。培養上清を用いるアッセイを、対照としてのトランスフェクトされないBaF3/KZ134又はBHK/KZ134細胞についても平行して行う。全アッセイ体積は２００μlである。アッセイプレートを、３７℃、５％CO2で２４時間インキュベートし、そしてBaF3細胞を２０００rpm、１０分間の遠心分離によってペレットとし、そして培地を吸引し、２５μlの溶解バッファー（Promega）を加えた。BHK細胞については、細胞が接着性であるために遠心分離ステップは必要ない。室温で１０分後、４０μlのルシフェラーゼアッセイ基質（Promega）を加え、５秒の積分時間でルミノメーター（Labsystems Luminoskan, model RS）で読み取ることによって、STATレポーターコンストラクトの活性化についてプレートを測定した。 STAT activation of BaF3 / KZ134 / IL-31RA, BaF3 / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta, BHK / KZ134 / IL-31RA or BHK / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta cells, culture supernatant or purified protein Was used to evaluate. 100 microliters of diluted culture supernatant or protein is added to BaF3 / KZ134 / IL-31RA, BaF3 / KZ134 / IL-31RA / OSMR beta, BHK / KZ134 / IL-31RA or BHK / KZ134 / IL-31RA / OSMR Add to beta cells. Assays using culture supernatants are also performed in parallel on untransfected BaF3 / KZ134 or BHK / KZ134 cells as controls. The total assay volume is 200 μl. The assay plate was incubated for 24 hours at 37 ° C., 5% CO 2 and BaF3 cells were pelleted by centrifugation at 2000 rpm, 10 minutes, and the medium was aspirated and 25 μl lysis buffer (Promega) was added. For BHK cells, a centrifugation step is not necessary because the cells are adherent. After 10 minutes at room temperature, plates were measured for activation of the STAT reporter construct by adding 40 μl luciferase assay substrate (Promega) and reading on a luminometer (Labsystems Luminoskan, model RS) with an integration time of 5 seconds.

実施例４
アデノウイルスSTAT/SREレポーター遺伝子による一過性の感染によって形質導入されたヒト上皮細胞株におけるルシフェラーゼアッセイ
IL-31活性の阻害、減少、及び／又は中和は、ルシフェラーゼアッセイによって測定可能である。例えば、形質導入されたヒト細胞株を９６ウエル平底プレートに、各細胞タイプについて指定された通常の増殖培地中、１０，０００細胞／ウエルで蒔くことができる。翌日、アデノウイルスレポーターコンストラクト、KZ136で、５０００の感染多重度で、細胞を感染させた。KZ136レポーターは、血清応答要素に加えてSTAT要素を含む。全体積は、２mMのL-グルタミン（GibcoBRL）、1mMのピルビン酸ナトリウム（GibcoBRL）および１×インシュリン−トランスフェリン−セレニウムサプリメント（GibcoBRL）を補充したDMEM（以下、「無血清培地」という）をもちいて１００μl／ウエルである。細胞を一夜培養する。 Example 4
Luciferase assay in human epithelial cell lines transduced by transient infection with adenovirus STAT / SRE reporter gene
Inhibition, reduction, and / or neutralization of IL-31 activity can be measured by a luciferase assay. For example, transduced human cell lines can be seeded in 96-well flat bottom plates at 10,000 cells / well in the normal growth medium specified for each cell type. The next day, cells were infected with the adenovirus reporter construct, KZ136, at a multiplicity of infection of 5000. The KZ136 reporter contains a STAT element in addition to a serum response element. The total volume is DMEM (hereinafter referred to as “serum-free medium”) supplemented with 2 mM L-glutamine (GibcoBRL), 1 mM sodium pyruvate (GibcoBRL) and 1 × insulin-transferrin-selenium supplement (GibcoBRL). 100 μl / well. Incubate the cells overnight.

翌日、培地を除去し、そして１００μlの誘導培地に交換する。誘導培地は、無血清培地中で１００ng/ml、５０ng/ml、２５ng/ml、１２．５ng/ml、６．２５ng/ml、３．１２５ng/ml及び１．５６ng/mlに希釈したヒトIL-31である。アッセイを較正し、そしてアデノウイルスによる感染が成功したことを確認するために２０％FBSの陽性対照を使用する。細胞を５時間誘導し、その時点で培地を吸引する。そして、細胞を５０μl／ウエルのPBSで洗浄し、次に１×細胞溶解バッファー（Promega）の３０μl／ウエル中で溶解した。室温で１０分間インキュベーション後、２５μl／ウエルのライセートを不透明の白色９６ウエルプレートに移す。４０μl／ウエルのルシフェラーゼ基質（Promega）を注入し、５秒の積分時間を用いてルミノメーター上でプレートを読み取った。   The next day, the medium is removed and replaced with 100 μl of induction medium. Induction medium was human IL − diluted to 100 ng / ml, 50 ng / ml, 25 ng / ml, 12.5 ng / ml, 6.25 ng / ml, 3.125 ng / ml and 1.56 ng / ml in serum-free medium. 31. The assay is calibrated and a 20% FBS positive control is used to confirm the successful infection with adenovirus. Cells are induced for 5 hours at which time media is aspirated. Cells were then washed with 50 μl / well of PBS and then lysed in 30 μl / well of 1 × cell lysis buffer (Promega). After 10 minutes incubation at room temperature, 25 μl / well lysate is transferred to an opaque white 96 well plate. 40 μl / well luciferase substrate (Promega) was injected and the plate was read on a luminometer using an integration time of 5 seconds.

実施例５
炎症性腸疾患由来の結腸組織におけるIL-31分析
Ａ）ＩＬ−３１免疫組織化学：
ABC-eliteベースの検出システムによって、炎症性腸疾患患者由来の胃腸組織においてヒトIL-31を検出するために、ポリクローナル抗体（１．０mg/mlにアフィニティー精製した、ウサギ抗−ヒトIL-31 CEE）を使用した。同じプロトコール及び抗体濃度を用いて、１．６６mg/mlに精製された正常なウサギ血清、プロテインAを陰性対照として使用した。 Example 5
IL-31 analysis in colon tissue from inflammatory bowel disease A) IL-31 immunohistochemistry:
For detection of human IL-31 in gastrointestinal tissue from patients with inflammatory bowel disease by an ABC-elite based detection system, a polyclonal antibody (rabbit anti-human IL-31 CEE affinity purified to 1.0 mg / ml) was used. )It was used. Using the same protocol and antibody concentration, normal rabbit serum purified to 1.66 mg / ml, Protein A was used as a negative control.

プロトコールは以下のとおりである：ABC-HRP Elite（Vector Laboratories, PK-6100）；標的の回収（ph9）、２０分スチーム、室温まで２０分冷却；３０分間タンパク質でブロック；一次抗体（１：１，０００〜２，５００）６０分；二次抗体（Bi：抗−ウサギ）４５分間；ABC-HRP複合体、４５分間；そして、推奨されるDAB基質。   The protocol is as follows: ABC-HRP Elite (Vector Laboratories, PK-6100); target recovery (ph9), 20 min steam, 20 min cool to room temperature; 30 min protein blocked; primary antibody (1: 1 Secondary antibody (Bi: anti-rabbit) 45 minutes; ABC-HRP conjugate, 45 minutes; and recommended DAB substrate.

この試験においては、ウサギ抗−ヒトIL-31ポリクローナル抗体を用いて全部で１９の個別のGI組織を分析した。この群においては、IBD又は癌組織に隣接する正常組織からの５つの結腸サンプルが存在した。９つのサンプルをクローン病、そして５つを潰瘍性大腸炎と診断した。全体として、IBD又は癌組織或いは潰瘍性大腸炎組織に隣接する正常組織中よりも、クローン病のサンプル中のほうがより陽性細胞が多いようである。クローン病のサンプル中のシグナルを発する細胞は、平滑筋束間のシグナルを示す浸潤細胞とともに、主に固有層及び粘膜下層中に位置する。肉芽腫においては、小結節中心内の多くのより大きな細胞が陽性であるが、これらの小結節の皮層及びバイエル板は陰性であるように見える。腸腺の上皮はときどき陽性である。潰瘍性大腸炎サンプルにおいては、粘膜下層中に少数の点在する細胞があり、そして平滑筋束間の浸潤細胞は陽性である。潰瘍性大腸炎サンプル中の陽性細胞のパーセンテージはクローン病サンプルよりも低いが、「正常」サンプルと同様又はそれよりもわずかに高い。潰瘍性大腸炎の固有層中の細胞はほとんどが陰性である。要約すると、この試験は、IL-31がクローン病のGIサンプルにおいて上方制御されることを実証する。この試験においては、IL-31は潰瘍性大腸炎サンプル及び「正常」対照において類似の発現プロフィールを示すようである。   In this study, a total of 19 individual GI tissues were analyzed using rabbit anti-human IL-31 polyclonal antibody. In this group, there were 5 colon samples from normal tissue adjacent to IBD or cancer tissue. Nine samples were diagnosed with Crohn's disease and 5 with ulcerative colitis. Overall, there appears to be more positive cells in Crohn's disease samples than in normal tissues adjacent to IBD or cancerous tissue or ulcerative colitis tissue. Cells that emit signals in Crohn's disease samples are located mainly in the lamina propria and submucosa, along with infiltrating cells that show signals between smooth muscle bundles. In granulomas, many larger cells within the nodule center are positive, but the cortex and Bayer plate of these nodules appear to be negative. Intestinal gland epithelium is sometimes positive. In ulcerative colitis samples, there are a few scattered cells in the submucosa and invasive cells between smooth muscle bundles are positive. The percentage of positive cells in ulcerative colitis samples is lower than in Crohn's disease samples but similar to or slightly higher than “normal” samples. Most cells in the lamina propria of ulcerative colitis are negative. In summary, this study demonstrates that IL-31 is upregulated in Crohn's disease GI samples. In this study, IL-31 appears to show a similar expression profile in ulcerative colitis samples and “normal” controls.

Ｂ）IL-31インサイチュハイブリダイゼーション
組織の小部分を、インサイチュハイブリダイゼーション（ISH）を用いても分析した。ISHでは、粘膜下層及び脂肪組織中のわずかな浸潤細胞においてIL-31 mRNAを観察した。IHCを用いて、我々は、先に述べた細胞集団並びに固有層及び肉芽腫中心中の細胞において陽性に染色されたIL31タンパク質を観察した。これら２つのアッセイの間の相違は、アッセイ感度により説明されうる。 B) IL-31 in situ hybridization A small portion of the tissue was also analyzed using in situ hybridization (ISH). In ISH, IL-31 mRNA was observed in a few infiltrating cells in the submucosa and adipose tissue. Using IHC, we observed the IL31 protein that stained positively in the previously mentioned cell population and cells in the lamina propria and granuloma center. The difference between these two assays can be explained by assay sensitivity.

実施例６ 炎症性腸疾患由来の結腸組織におけるIL-31Raの分析
Ａ） IL-31Ra免疫組織学：
炎症性腸疾患患者由来の胃腸組織中のヒトIL-31RAを、ABC-eliteに基づく検出系によって検出するために、ポリクローナル抗体（１．３３mg/mlまでアフィニティー精製された、ウサギ抗−ヒトIL-31RA（バージョン４）CEE抗体）を使用した。同じプロトコールと抗体濃度を用いて、１．６６mg/mlまで精製された正常ウサギ血清、プロテインAを陰性対照として使用した。ウサギ抗−ヒトIL-31RA（バージョン４）抗体を１：２０００（６６５ng/ml）で使用した。 Example 6 Analysis of IL-31Ra in colon tissue from inflammatory bowel disease A) IL-31Ra immunohistology:
In order to detect human IL-31RA in gastrointestinal tissue from patients with inflammatory bowel disease by a detection system based on ABC-elite, a polyclonal antibody (rabbit anti-human IL-, purified to affinity to 1.33 mg / ml). 31RA (version 4) CEE antibody) was used. Using the same protocol and antibody concentration, normal rabbit serum purified to 1.66 mg / ml, Protein A, was used as a negative control. Rabbit anti-human IL-31RA (version 4) antibody was used at 1: 2000 (665 ng / ml).

プロトコールは以下のとおりである：ABC-HRP Elite（Vector Laboratories, PK-6100）；２０分間、蒸気中で標的回収（ph9）；２０分間、室温まで冷却；３０分間、タンパク質ブロッキング；６０分間、一次抗体（１：２０００）；４５分間、二次抗体；４５分間、ABC-HRP複合体；及び１０分間、DAB+Dako Cytomation。   The protocol is as follows: ABC-HRP Elite (Vector Laboratories, PK-6100); target recovery in steam for 20 minutes (ph9); 20 minutes, cool to room temperature; 30 minutes, protein blocking; 60 minutes, primary Antibody (1: 2000); 45 minutes, secondary antibody; 45 minutes, ABC-HRP complex; and 10 minutes, DAB + Dako Cytomation.

この試験においては、ウサギ抗−ヒトIL-31RA（バージョン４）CEE抗体を用いて、全部で１９の個別のGI組織を分析した。この群中には、IBD又は癌組織に隣接する正常組織由来の約５個の結腸サンプルがある。９つのサンプルは、クローン病と診断され、そして５つは潰瘍性大腸炎と診断された。全体として、IBD又は癌組織又は潰瘍性腸炎組織に隣接する正常組織よりも多くの陽性細胞がクローン病サンプル中にあるようである。クローン病サンプル中の陽性細胞は主に粘膜下層の結合組織中に位置する。肉芽腫小結節は陰性である。時には、クローンサンプル中に弱い上皮のシグナルがある。潰瘍性大腸炎（UC）サンプル中に検出可能なシグナルはなかった。粘膜下層中のわずかな細胞が、IHCによって、IL-31RAタンパク質に関して陽性に染色された。   In this study, a total of 19 individual GI tissues were analyzed using rabbit anti-human IL-31RA (version 4) CEE antibody. Within this group are approximately 5 colon samples from normal tissue adjacent to IBD or cancer tissue. Nine samples were diagnosed with Crohn's disease and five were diagnosed with ulcerative colitis. Overall, there appears to be more positive cells in the Crohn's disease sample than IBD or cancer tissue or normal tissue adjacent to ulcerative enterocolitis tissue. Positive cells in Crohn's disease samples are mainly located in the submucosal connective tissue. Granulomas nodules are negative. Sometimes there are weak epithelial signals in clone samples. There was no detectable signal in the ulcerative colitis (UC) sample. A few cells in the submucosa stained positive for IL-31RA protein by IHC.

Ｂ）IL-31RAインサイチュハイブリダイゼーション：
先の試験において、ISHを用いて５つの組織を試験し、そのうちの３つはクローン病の結腸であった。これらのクローン病組織においては、それらの正常な対応物に比べて顕著にIL-31RA mRNAが上方制御され、シグナルは肉芽腫小結節並びに粘膜下層の結合組織及び脂肪組織領域中の多くの浸潤細胞に局在した。IHC及びインサイチュ分析の間の矛盾についての可能性のある理由は、一過性のmRNA発現、タンパク質プロセシング時間、IL-31RAタンパク質の安定性、及び／又は２つのアッセイの間の感度の相違を含む。 B) IL-31RA in situ hybridization:
In previous studies, ISH was used to examine five tissues, three of which were Crohn's disease colons. In these Crohn's disease tissues, IL-31RA mRNA is markedly up-regulated compared to their normal counterparts, and the signals are granuloma nodules and many infiltrating cells in the submucosal connective and adipose tissue regions Localized. Possible reasons for discrepancies between IHC and in situ analysis include transient mRNA expression, protein processing time, IL-31RA protein stability, and / or sensitivity differences between the two assays .

実施例７ EμLck IL-31トランスジェニックマウスにおける、DSS-誘導性大腸炎の試験
病気の易罹患性及び重篤度の潜在的相違を調べるために、EμLck IL-31トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック同腹仔対照マウスを、粘膜炎症のデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘発モデルにおいて試験した。飲料水中の２〜３％DSSを与えた正常マウスは、ヒト炎症性腸疾患に似た症状と病理を発生させた（Strober, Fuss and Blumberg, Annu. Rev. Immunol. 2002を参照のこと）。機械的に、DSSは大腸の粘膜上皮バリアを破壊し、これはその後に炎症を引き起こす。この炎症の結果、DSS処理マウスは体重減少し、そして下痢を発生する。疾患活動指数（DAI）を用いてマウスを大腸炎の重篤度に関してモニターし、この指数は、体重、便の一貫性及び便中の血液に基づく累積スコアである。DSSは、急性又は慢性の大腸炎を誘発するために使用可能である。急性大腸炎は、第０日から第７日までの飲料水中のDSS（われわれの試験においては2％又は3％)の送達によって誘発される一方、慢性大腸炎は、５日間の飲料水中のDSSの送達によって誘発され、その後、DSS処理を繰り返す前に７〜１２日間の回復相がある。 Example 7 Testing of DSS-Induced Colitis in EμLck IL-31 Transgenic Mice To examine potential differences in disease susceptibility and severity, EμLck IL-31 transgenic mice and non-transgenic littermates Pup control mice were tested in a dextran sulfate sodium (DSS) induced model of mucosal inflammation. Normal mice given 2-3% DSS in drinking water developed symptoms and pathology similar to human inflammatory bowel disease (see Strober, Fuss and Blumberg, Annu. Rev. Immunol. 2002). Mechanically, DSS destroys the mucosal epithelial barrier of the large intestine, which subsequently causes inflammation. As a result of this inflammation, DSS treated mice lose weight and develop diarrhea. Mice were monitored for the severity of colitis using the Disease Activity Index (DAI), which is a cumulative score based on body weight, stool consistency and blood in the stool. DSS can be used to induce acute or chronic colitis. Acute colitis is induced by the delivery of DSS in drinking water from day 0 to day 7 (2% or 3% in our study), while chronic colitis is DSS in drinking water for 5 days. Followed by a recovery phase of 7-12 days before the DSS treatment is repeated.

EμLck IL-31トランスジェニックマウスにおける４つの試験を実施した。DSSの急性又は慢性のモデルが使用されるかに関わらず、EμLck IL-31トランスジェニックマウスは同腹対照マウスに比べてよりおおくの体重がより早く減少した。実際、３又は４の試験において、IL-31トランスジェニックマウスは、対照に比べて有意に大きな体重減少を示した（ｐ＜０．００１、ｐ＝０．０１１）。さらに、トランスジェニックマウスは、野生型対照に比べて有意に短い結腸を有した（ｐ＜０．０５）。慢性大腸炎試験においては、DAIスコアは、IL-31トランスジェニックマウスにおいて非トランスジェニック対照に比べて有意に高かった（ｐ＜０．００１）。   Four studies were performed on EμLck IL-31 transgenic mice. Regardless of whether an acute or chronic model of DSS was used, EμLck IL-31 transgenic mice lost more body weight faster than littermate control mice. In fact, in 3 or 4 studies, IL-31 transgenic mice showed significantly greater weight loss compared to controls (p <0.001, p = 0.011). Furthermore, the transgenic mice had a significantly shorter colon compared to the wild type control (p <0.05). In the chronic colitis test, the DAI score was significantly higher in IL-31 transgenic mice compared to non-transgenic controls (p <0.001).

IL-31の全身送達が、正常非トランスジェニックマウスにおけるDSS-誘発性大腸炎の発生に影響しうるかを判定するために、我々は、DSS処理前にIL-31の日用量又はビヒクル（PBS、０．１％ BSA）を送達する浸透圧ポンプを動物に移植した。１つの試験においては、N3ジェネレーションの非トランスジェニックマウス（B6C3F2×C57BL/6）に、２０μg/日のIL-31又はビヒクルのいずれかを、DSS投与の経過中に送達するポンプを皮下移植した。体重減少、DAIスコア又は結腸の長さは、IL-31処理マウスとビヒクル処理マウスの間で相違がなかった。同様のポンプ送達試験を、正常C57BL/6マウスにおいても実施し；１０μg/日のIL-31又はビヒクルを送達するポンプをマウスに移植し、急性の計画において２％DSSを与えた。ここでも、DSS-大腸炎パラメータのいずれにおいても、IL-31又はビヒクルを送達するポンプを移植することの相違はなかった。最後に、２％DSS-急性大腸炎試験を、IL-31RA欠損（IL-31RA-/-）マウスにおいて実施した。ここでも、IL-31RA欠損マウス及び野生型対照の間で体重減少、DAIスコア又は結腸の長さにおける相違はなかった。   To determine whether systemic delivery of IL-31 could affect the development of DSS-induced colitis in normal non-transgenic mice, we used daily doses of IL-31 or vehicle (PBS, PBS) prior to DSS treatment. An osmotic pump delivering 0.1% BSA) was implanted in the animals. In one study, N3 generation non-transgenic mice (B6C3F2 × C57BL / 6) were implanted subcutaneously with a pump that delivered either 20 μg / day IL-31 or vehicle during the course of DSS administration. There was no difference in weight loss, DAI score or colon length between IL-31 and vehicle-treated mice. Similar pump delivery studies were performed in normal C57BL / 6 mice; mice delivering 10 μg / day of IL-31 or vehicle pumps were given 2% DSS in an acute regime. Again, there was no difference in implanting pumps delivering IL-31 or vehicle in any of the DSS-colitis parameters. Finally, a 2% DSS-acute colitis test was performed in IL-31RA deficient (IL-31RA-/-) mice. Again, there was no difference in weight loss, DAI score or colon length between IL-31RA deficient mice and wild type controls.

要約すると、急性大腸炎試験において正常マウスへのIL-31の全身送達が病気の予後に何の効果も有さないため、IL-31は、DSSによって誘発された粘膜の炎症に対して直接的な効果を有さないようである。IL-31トランスジェニック動物は、トランスジェニック表現型により引き起こされたストレスの結果として、DSS-誘発性大腸炎に対してより易罹患性であるかもしれない。しかしながら、EμLck IL-31トランスジェニックマウスは、末梢リンパ節において活性化CD4+及びCD8+T細胞の数が増加しており（Dillon et al., 2004）、EμLck IL-31トランスジェニックマウスにおいて観察された、DSS-誘発性大腸炎に対する易罹患性の増加は、これらの活性化リンパ球が存在する結果であるかもしれない。   In summary, IL-31 is directly against mucosal inflammation induced by DSS because systemic delivery of IL-31 to normal mice has no effect on disease prognosis in acute colitis studies. Does not seem to have a positive effect. IL-31 transgenic animals may be more susceptible to DSS-induced colitis as a result of stress caused by the transgenic phenotype. However, EμLck IL-31 transgenic mice have increased numbers of activated CD4 + and CD8 + T cells in peripheral lymph nodes (Dillon et al., 2004) and were observed in EμLck IL-31 transgenic mice The increased susceptibility to DSS-induced colitis may be the result of the presence of these activated lymphocytes.

実施例８： ミクロ透析によって皮膚の間質液をサンプリングすることによる、抗−IL-31抗体処置の効果
皮膚中の抗体のバイオアベイラビリティー及び分布を直接的に分析するために、本発明の分子とともにミクロ透析が使用可能である。ミクロ透析は、細胞内液を収集し、分析するために使用する。間質液中の抗体は、ルミネックスビーズに架橋された、種特異的抗−IgG抗体を用いて測定可能である。さらに、遊離〜IgG結合したIL-31の評価は、抗−IgGでなく抗−IL31抗体を二次抗体として使用して行う。IL-31によるケラチノサイト及び／又は脊髄後根神経節の活性化により産生された、前炎症性サイトカイン及びケモカインをアッセイする。British J. Dermatology 142(6); 1114-1120,(2000)；J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 73; 299-302, (2002)；Am J. Physiol Heart Circ. Physiol 286; 108-112, (2004)；Neuroscience Letters 230; 117-120, (1997)；及びAAPS J. 7(3); E686-E692, (2005)を参照のこと。Steinhoff, M., et al., J. Neuroscience, 23(15): 6176-6180, 2003も参照のこと。 Example 8: Effect of anti-IL-31 antibody treatment by sampling skin interstitial fluid by microdialysis In order to directly analyze the bioavailability and distribution of antibodies in the skin, the molecules of the invention At the same time, microdialysis can be used. Microdialysis is used to collect and analyze intracellular fluids. The antibody in the interstitial fluid can be measured using a species-specific anti-IgG antibody cross-linked to Luminex beads. Furthermore, evaluation of free-IgG bound IL-31 is performed using anti-IL31 antibody as a secondary antibody instead of anti-IgG. Pro-inflammatory cytokines and chemokines produced by activation of keratinocytes and / or dorsal root ganglia by IL-31 are assayed. British J. Dermatology 142 (6); 1114-1120, (2000); J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 73; 299-302, (2002); Am J. Physiol Heart Circ. Physiol 286; 108-112, (2004) ); Neuroscience Letters 230; 117-120, (1997); and AAPS J. 7 (3); E686-E692, (2005). See also Steinhoff, M., et al., J. Neuroscience, 23 (15): 6176-6180, 2003.

ミクロ透析プローブは、TSE Systems（Midland, Michigan）によって供給される。該プローブは、T字型であり、１５ｍｍのステムに取り付けた外径０．３mm×長さ４mmの３０００kDaの膜からなる。入り口と出口は、内径０．１２ｍｍのピークチューブ（peek tubing）に連結される。エキソビボでの分析は、インビボ分析に使用するチューブ長と同じものを用いて実施する。HMWCOプローブを、（小腸への）外への流れを最小化するために、注入／吸引ポンプ系によって流す。しかしながら、注入のみのポンプ（Harvard PHD 2000）も使用する。Δｐ及びΔПによる体液の損失を様々な流速で測定した。膜の効率（Ed）を、膜によらない（外部への）拡散を排除するために、知られた量のIgGを混合チャンバー中で用いて、様々な流速で測定した。マウスIgG及びマウスヘモグロビンのEdを測定し、インビボ対照としての役割を果たした。Luminexビーズに結合したヤギ抗−ラットIgG抗体によって定量を行い、そして、捕捉は、非特異的反応性を減少させるためにウサギ又はロバビオチン−抗−ラットIgG抗体を用いて報告する。マウスIgG及びヘモグロビンについてのアッセイは、インビボ試験における対照のために作成する。ビーズとの結合は、標準的なキット及びプロトコールを用いて実施される。   The microdialysis probe is supplied by TSE Systems (Midland, Michigan). The probe is T-shaped and consists of a 3000 kDa membrane with an outer diameter of 0.3 mm and a length of 4 mm attached to a 15 mm stem. The inlet and outlet are connected to a peak tube having an inner diameter of 0.12 mm. Ex vivo analysis is performed using the same tube length used for in vivo analysis. The HMWCO probe is run by an infusion / aspiration pump system to minimize outward flow (to the small intestine). However, an infusion only pump (Harvard PHD 2000) is also used. Body fluid loss due to Δp and ΔП was measured at various flow rates. Membrane efficiency (Ed) was measured at various flow rates using known amounts of IgG in the mixing chamber to eliminate membrane-independent (external) diffusion. Mouse IgG and mouse hemoglobin Ed were measured and served as an in vivo control. Quantification is performed by goat anti-rat IgG antibody conjugated to Luminex beads and capture is reported using rabbit or donkey biotin-anti-rat IgG antibody to reduce non-specific reactivity. Assays for mouse IgG and hemoglobin are made for controls in in vivo testing. Binding to the beads is performed using standard kits and protocols.

浸透圧ポンプ、ID又はミクロ透析ファイバーを用いてサイトカインによるマウス及びラットの処置を行う。抗体をIVによって注射する。プローブはUV滅菌する。ミクロ透析プローブを挿入し、そして血液分析物をサンプリングする。循環から皮膚中へのIgG輸送の定量は、エキソビボで測定した膜パラメータを用いて測定し、抗体の透過性及びかん流速度を推定する。   Treat mice and rats with cytokines using osmotic pumps, ID or microdialysis fibers. The antibody is injected by IV. The probe is UV sterilized. A microdialysis probe is inserted and the blood analyte is sampled. Quantification of IgG transport from the circulation into the skin is measured using membrane parameters measured ex vivo to estimate antibody permeability and perfusion rate.

動物の対あたり１つの時間点、そして経時的に循環中の抗体レベル及び真皮／上皮中への拡散を推定するための十分な数の時間点を用いて、以下のステップを実施する：１）ミクロ透析膜を皮膚中に挿入し、エキソビボ分析によって決定した速度で予備的サンプルを取り出す。この対照サンプルは、透過液のベースラインの反応性を決定する；２）尾静脈注射によってラット抗−IL31抗体を導入し、そして循環中抗体レベルを測定するために、所定の時点で眼窩内血液サンプルを採取する；３）分析のための十分な体積のミクロ透析サンプルをプロトコールのポンピング速度で採取する；４）分析物サンプリングの最後に、さらなる眼窩内サンプルを採取して抗−IL31抗体の循環レベルを決定する。   The following steps are performed using one time point per pair of animals and a sufficient number of time points to estimate circulating antibody levels and diffusion into the dermis / epithelium over time: 1) A microdialysis membrane is inserted into the skin and a preliminary sample is removed at a rate determined by ex vivo analysis. This control sample determines the baseline responsiveness of the permeate; 2) The rat anti-IL31 antibody is introduced by tail vein injection and the intraorbital blood is measured at predetermined time points to measure circulating antibody levels. Collect sample; 3) Collect sufficient volume of microdialyzed sample for analysis at protocol pumping rate; 4) At the end of analyte sampling, additional intraorbital sample is collected to circulate anti-IL31 antibody Determine the level.

分析物及び血漿の多重分析を、Luminexにより実施し、１）抗−IL31抗体、２）枯渇／拡散の対照としての抗−マウス−IgG抗体、及び３）ミクロ透析挿入による外傷及び血管損傷についての対照としての抗−マウスヘモグロビン抗体について定量した。エキソビボで測定した膜のパラメータ及び所定の循環抗体濃度において測定した分析物中への抗−IL31抗体の流入速度を用いて、皮膚拡散速度の推定値を決定する。分析物中のマウスIgG濃度を、プローブ近傍のタンパク質の局所的枯渇を評価するために使用する。拡散分析における局所的枯渇を補うための方法を工夫する必要があるかもしれない。   Multiple analysis of analyte and plasma was performed by Luminex for 1) anti-IL31 antibody, 2) anti-mouse-IgG antibody as a depletion / diffusion control, and 3) trauma and vascular damage due to microdialysis insertion Quantified for anti-mouse hemoglobin antibody as a control. Using the membrane parameters measured ex vivo and the influx rate of the anti-IL31 antibody into the analyte measured at a given circulating antibody concentration, an estimate of the skin diffusion rate is determined. Mouse IgG concentration in the analyte is used to assess local depletion of protein near the probe. It may be necessary to devise methods to compensate for local depletion in diffusion analysis.

以上により、本発明の特定の実施態様が例示の目的で本明細書中に記載されたが、本発明の精神及び範囲を離れることなく様々な改変がなされうることは理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の請求項による以外は制限されない。   From the foregoing, it will be appreciated that, although specific embodiments of the invention have been described herein for purposes of illustration, various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, the invention is not limited except as by the appended claims.

Claims (27)

哺乳動物の神経組織における炎症を治療するための方法であって、神経組織とIL-31アンタゴニストを混合することを含み、ここで、前記炎症が減少され、制限され、予防され、最小化され、又は中和される、前記方法。   A method for treating inflammation in mammalian neural tissue, comprising mixing neural tissue and an IL-31 antagonist, wherein said inflammation is reduced, limited, prevented, minimized, Or said method being neutralized. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項１に記載の方法。   2. The method of claim 1, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2 at residue 27 to residue 164. 前記アンタゴニストが抗体である、請求項１に記載の方法。   2. The method of claim 1, wherein the antagonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３に記載の方法。   4. The method of claim 3, wherein the antibody is a monoclonal antibody. 前記神経組織が脊髄後根神経節又は脊髄組織を含む、請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the neural tissue comprises dorsal root ganglia or spinal cord tissue. 哺乳動物における疼痛を治療するための方法であって、前記哺乳動物由来の神経組織をIL-31アンタゴニストと混合することを含み、ここで、前記炎症が減少され、制限され、予防され、最小化され、又は中和される、前記方法。   A method for treating pain in a mammal comprising mixing neural tissue from said mammal with an IL-31 antagonist, wherein said inflammation is reduced, limited, prevented and minimized Or the process is neutralized. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項６に記載の方法。   7. The method of claim 6, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2 at residue 27 to residue 164. 前記アゴニストが抗体である、請求項６に記載の方法。   The method of claim 6, wherein the agonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項６に記載の方法。   The method of claim 6, wherein the antibody is a monoclonal antibody. 前記神経組織が脊髄後根神経節又は脊髄組織を含む、請求項６に記載の方法。   The method of claim 6, wherein the neural tissue comprises dorsal root ganglia or spinal cord tissue. 脊髄後根神経節細胞中における、IL-31誘発性のシグナル伝達をアンタゴナイズする方法であって、IL-31アンタゴニストと脊髄後根神経節細胞を混合することを含み、それによって前記シグナル伝達が阻害される、前記方法。   A method of antagonizing IL-31-induced signaling in dorsal root ganglion cells, comprising mixing an IL-31 antagonist and dorsal root ganglion cells, whereby said signaling is Said method of being inhibited. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項１１に記載の方法。   12. The method of claim 11, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in residues 27 to 164 of SEQ ID NO: 2. 前記アンタゴニストが抗体である、請求項１１に記載の方法。   The method of claim 11, wherein the antagonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１３に記載の方法。   14. A method according to claim 13, wherein the antibody is a monoclonal antibody. 火傷に伴う症状を治療するための方法であって、火傷組織とIL-31アンタゴニストを混合することを含む、前記方法。   A method for treating a symptom associated with a burn comprising mixing burn tissue with an IL-31 antagonist. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項１５に記載の方法。   16. The method of claim 15, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in residues 27 to 164 of SEQ ID NO: 2. 前記アンタゴニストが抗体である、請求項１６に記載の方法。   The method of claim 16, wherein the antagonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１６に記載の方法。   The method of claim 16, wherein the antibody is a monoclonal antibody. 前記症状が疼痛又はかゆみである、請求項１５に記載の方法。   16. The method of claim 15, wherein the symptom is pain or itching. 哺乳動物におけるウイルス感染に伴う症状を治療するための方法であって、IL-31アンタゴニストを前記哺乳動物に投与することを含む、前記方法。   A method for treating a condition associated with a viral infection in a mammal comprising administering an IL-31 antagonist to said mammal. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項２０に記載の方法。   21. The method of claim 20, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in residues 27 to 164 of SEQ ID NO: 2. 前記アンタゴニストが抗体である、請求項２１に記載の方法。   24. The method of claim 21, wherein the antagonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２２に記載の方法。   23. The method of claim 22, wherein the antibody is a monoclonal antibody. 炎症性腸疾患に伴う疼痛を治療するための方法であって、神経組織とIL-31アンタゴニストを混合することを含み、ここで、前記疼痛が減少され、制限され、予防され、又は中和される、前記方法。   A method for treating pain associated with inflammatory bowel disease, comprising mixing neural tissue and an IL-31 antagonist, wherein the pain is reduced, limited, prevented or neutralized Said method. 前記IL-31アンタゴニストが、配列番号２の残基２７〜残基１６４に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する、請求項２４に記載の方法。   25. The method of claim 24, wherein the IL-31 antagonist binds to a polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in residues 27 to 164 of SEQ ID NO: 2. 前記アンタゴニストが抗体である、請求項２４に記載の方法。   25. The method of claim 24, wherein the antagonist is an antibody. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２４に記載の方法。   25. The method of claim 24, wherein the antibody is a monoclonal antibody.
JP2012240592A 2006-01-10 2012-10-31 Method of treating pain and inflammation in neuronal tissue using il-31 antagonist Pending JP2013047259A (en)

Applications Claiming Priority (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US75797906P 2006-01-10 2006-01-10
US75806606P 2006-01-10 2006-01-10
US60/758,066 2006-01-10
US60/757,979 2006-01-10
US77303106P 2006-02-14 2006-02-14
US60/773,031 2006-02-14
US80555406P 2006-06-22 2006-06-22
US80555006P 2006-06-22 2006-06-22
US80555206P 2006-06-22 2006-06-22
US60/805,550 2006-06-22
US60/805,554 2006-06-22
US60/805,552 2006-06-22
US82398706P 2006-08-30 2006-08-30
US82398206P 2006-08-30 2006-08-30
US60/823,987 2006-08-30
US60/823,982 2006-08-30

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008550488A Division JP2009528264A (en) 2006-01-10 2007-01-10 Methods for treating pain and inflammation in neural tissue using IL-31 antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2013047259A true JP2013047259A (en) 2013-03-07

Family

ID=38694567

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008550488A Pending JP2009528264A (en) 2006-01-10 2007-01-10 Methods for treating pain and inflammation in neural tissue using IL-31 antagonists
JP2008550490A Pending JP2009526756A (en) 2006-01-10 2007-01-10 Methods of treating pain and inflammation in neural tissue using IL-31RA antagonists and OSMRB antagonists
JP2012240592A Pending JP2013047259A (en) 2006-01-10 2012-10-31 Method of treating pain and inflammation in neuronal tissue using il-31 antagonist

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008550488A Pending JP2009528264A (en) 2006-01-10 2007-01-10 Methods for treating pain and inflammation in neural tissue using IL-31 antagonists
JP2008550490A Pending JP2009526756A (en) 2006-01-10 2007-01-10 Methods of treating pain and inflammation in neural tissue using IL-31RA antagonists and OSMRB antagonists

Country Status (11)

Country Link
US (22) US7638126B2 (en)
EP (4) EP2594585A1 (en)
JP (3) JP2009528264A (en)
KR (1) KR101345586B1 (en)
AU (2) AU2007249713A1 (en)
BR (1) BRPI0706487A2 (en)
CA (2) CA2633439A1 (en)
IL (4) IL192130A0 (en)
MX (1) MX2008008831A (en)
RU (1) RU2565391C2 (en)
WO (2) WO2007143231A2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018190365A1 (en) * 2017-04-12 2018-10-18 国立大学法人九州大学 Neuropathic pain marker and use thereof
JP2018532749A (en) * 2015-11-09 2018-11-08 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド Treatment methods for bile acid related disorders

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE455852T1 (en) 1999-06-02 2010-02-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd NEW HEMOPOIETIN RECEPTOR PROTEIN NR10
AU7445900A (en) 1999-09-27 2001-04-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Novel hemopoietin receptor protein, nr12
ATE401390T1 (en) * 2002-01-18 2008-08-15 Zymogenetics Inc CYTOKINE (ZCYTOR17 LIGAND)
EP1856539B1 (en) * 2005-02-14 2015-10-21 ZymoGenetics, Inc. Methods of predicting therapeutic response in atopic dermatitis to il-31 antagonists
JP2008530132A (en) 2005-02-14 2008-08-07 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Method for treating skin disorders using IL-31RA antagonists
US8101183B2 (en) 2005-05-06 2012-01-24 Zymogentics, Inc. Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies
MX2007013609A (en) 2005-05-06 2008-01-24 Zymogenetics Inc Il-31 monoclonal antibodies and methods of use.
US20130216542A1 (en) 2005-05-06 2013-08-22 Zymogenetics, Inc. Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use
EP2594585A1 (en) 2006-01-10 2013-05-22 Zymogenetics, Inc. Methods of treating pain and inflammation in neuronal tissue using IL-31 antagonists
DK3056568T3 (en) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROCEDURES FOR CONTROL OF THE BLOOD PHARMACOKINETICS OF ANTIBODIES
CN101500608A (en) * 2006-06-08 2009-08-05 中外制药株式会社 Preventive or remedy for inflammatory disease
CN101522713A (en) 2006-09-01 2009-09-02 津莫吉尼蒂克斯公司 Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies and methods of use
WO2008086505A2 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Zymogenetics, Inc. Methods of using il-31 to treat airway hyper-responsiveness and asthma
CN106519025B (en) 2007-09-26 2021-04-23 中外制药株式会社 Method for changing isoelectric point of antibody by using amino acid substitution of CDR
CL2008002886A1 (en) 2007-09-26 2009-12-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Constant region of a human antibody; anti-interleukin-6 (yl-6) receptor antibody and pharmaceutical composition comprising it.
BRPI0821110B8 (en) 2007-12-05 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anti-nr10/il31ra neutralizing antibody, pharmaceutical composition comprising said antibody and use thereof
MY185647A (en) * 2007-12-05 2021-05-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Therapeutic agent for pruritus
US8470979B2 (en) 2007-12-07 2013-06-25 Zymogenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for IL-31
KR102469853B1 (en) * 2008-04-11 2022-11-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
WO2010062960A2 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Cedars-Sinai Medical Center METHODS OF DETERMINING RESPONSIVENESS TO ANTI-TNFα THERAPY IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
JP5787446B2 (en) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 Antibody constant region variants
WO2010107110A1 (en) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 Antibody constant region variant
EP2348128A1 (en) * 2010-01-21 2011-07-27 Sanofi Methods and uses relating to the identification of compound involved in pain as well as methods of diagnosing algesia
AU2011337704B2 (en) 2010-11-30 2017-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
US8790651B2 (en) 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
US20140179727A1 (en) 2012-12-14 2014-06-26 Trevi Therapeutics, Inc. Methods for treating pruritus
US8987289B2 (en) * 2012-12-14 2015-03-24 Trevi Therapeutics, Inc. Methods for treating pruritus
US10039792B1 (en) 2013-03-16 2018-08-07 Brahm Holdings, Llc Methods for the treatment of inflammation and pain using human birth tissue material composition
CN112870368A (en) 2013-03-27 2021-06-01 西达-赛奈医疗中心 Reduction and reversal of fibrosis and inflammation by inhibition of TL1A function and related signaling pathways
EA201592285A1 (en) 2013-05-30 2016-05-31 Байоджен Ма Инк. ANTIGENSYCLING PROTEINS TO ONCOSTATIN M RECEPTOR
EP3022295A4 (en) 2013-07-19 2017-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Signature of tl1a (tnfsf15) signaling pathway
AU2016210996B2 (en) * 2015-01-29 2021-08-12 Oxford University Innovation Limited Therapeutic target and biomarker in IBD
RU2749512C2 (en) 2015-04-14 2021-06-11 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Pharmaceutical composition for prevention and/or treatment of atopic dermatitis, including il-31 antagonist as the active ingredient
KR102641898B1 (en) 2015-04-14 2024-02-27 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Pharmaceutical composition for prevention and/or treatment of atopic dermatitis containing il-31 antagonist as active ingredient
WO2017033951A1 (en) * 2015-08-24 2017-03-02 学校法人国際医療福祉大学 Novel analgesic
WO2017161342A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing inflammatory bowel disease through rnaset2
JP7165995B2 (en) 2017-02-21 2022-11-07 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Cancer treatment using antibodies that bind to cytotoxic T lymphocyte antigen-4 (CTLA-4)
WO2018156784A1 (en) 2017-02-23 2018-08-30 Magic Leap, Inc. Variable-focus virtual image devices based on polarization conversion
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
EP3765500A2 (en) 2018-03-16 2021-01-20 Zoetis Services LLC Interleukin-31 monoclonal antibodies for veterinary use
MX2020009639A (en) 2018-03-16 2021-01-08 Zoetis Services Llc Peptide vaccines against interleukin-31.
WO2020023486A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Trevi Therapeutics, Inc. Treatment of chronic cough, breathlessness and dyspnea
RU2707954C1 (en) * 2019-01-24 2019-12-02 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method of treating oncological pain
WO2021100794A1 (en) 2019-11-20 2021-05-27 中外製薬株式会社 Antibody-containing preparation
MX2023002482A (en) * 2020-09-01 2023-03-08 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmaceutical composition for prevention and/or treatment of dialysis pruritus containing il-31 antagonist as active ingredient.

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004003140A2 (en) * 2002-01-18 2004-01-08 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zcytor17 multimers
JP2005526494A (en) * 2002-01-18 2005-09-08 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド Novel cytokine zcytor17 ligand

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US750795A (en) * 1904-02-02 Eugene j
US4054646A (en) 1973-07-30 1977-10-18 General Electric Method and apparatus for detection of antibodies and antigens
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0281604B1 (en) 1986-09-02 1993-03-31 Enzon Labs Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
DE3920358A1 (en) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag BISPECIFIC AND OLIGO-SPECIFIC, MONO- AND OLIGOVALENT ANTI-BODY CONSTRUCTS, THEIR PRODUCTION AND USE
DE69120146T2 (en) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc GENERATION OF XENOGENIC ANTIBODIES
JPH07501451A (en) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド Multivalent antigen binding protein
US5492841A (en) 1994-02-18 1996-02-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Quaternary ammonium immunogenic conjugates and immunoassay reagents
US5783672A (en) 1994-05-26 1998-07-21 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M
US6074849A (en) 1995-07-19 2000-06-13 Genetics Institute, Inc. Polynucleotides encoding human CTLA-8 related proteins
US5792850A (en) 1996-05-23 1998-08-11 Zymogenetics, Inc. Hematopoietic cytokine receptor
WO2002008288A2 (en) 2000-07-20 2002-01-31 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
DK1500329T3 (en) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Human antibodies that specifically bind TNF-alpha
RU2175874C2 (en) * 1999-03-17 2001-11-20 Борисов Виктор Александрович Method and device for treating the cases of central nervous system function disorders
ATE455852T1 (en) 1999-06-02 2010-02-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd NEW HEMOPOIETIN RECEPTOR PROTEIN NR10
AU6531101A (en) 2000-06-02 2001-12-17 Genentech Inc Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
EP1309620A2 (en) 2000-06-23 2003-05-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
US20030096339A1 (en) 2000-06-26 2003-05-22 Sprecher Cindy A. Cytokine receptor zcytor17
PT1325115T (en) 2000-06-26 2016-09-28 Zymogenetics Inc Cytokine receptor zcytor17
JP2005507632A (en) 2000-10-06 2005-03-24 イミュネックス・コーポレーション Hematopoietin receptor, HPR1 and HPR2
WO2002077230A1 (en) 2001-03-26 2002-10-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Nr10 splicing variants
EP2110434A1 (en) 2002-02-25 2009-10-21 Genentech, Inc. Type-1 cytokine receptor GLM-R
JP2008528039A (en) 2005-01-28 2008-07-31 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド Homogeneous preparation of IL-31
JP2008530132A (en) 2005-02-14 2008-08-07 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Method for treating skin disorders using IL-31RA antagonists
EP1856539B1 (en) * 2005-02-14 2015-10-21 ZymoGenetics, Inc. Methods of predicting therapeutic response in atopic dermatitis to il-31 antagonists
US8101183B2 (en) 2005-05-06 2012-01-24 Zymogentics, Inc. Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies
MX2007013609A (en) * 2005-05-06 2008-01-24 Zymogenetics Inc Il-31 monoclonal antibodies and methods of use.
EP2594585A1 (en) 2006-01-10 2013-05-22 Zymogenetics, Inc. Methods of treating pain and inflammation in neuronal tissue using IL-31 antagonists
CN101522713A (en) 2006-09-01 2009-09-02 津莫吉尼蒂克斯公司 Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies and methods of use
WO2008086505A2 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Zymogenetics, Inc. Methods of using il-31 to treat airway hyper-responsiveness and asthma
US8470979B2 (en) 2007-12-07 2013-06-25 Zymogenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for IL-31

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004003140A2 (en) * 2002-01-18 2004-01-08 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zcytor17 multimers
JP2005526494A (en) * 2002-01-18 2005-09-08 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド Novel cytokine zcytor17 ligand

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018532749A (en) * 2015-11-09 2018-11-08 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド Treatment methods for bile acid related disorders
JP2020172509A (en) * 2015-11-09 2020-10-22 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド Methods for treatment of bile acid-related disorders
JP2021185178A (en) * 2015-11-09 2021-12-09 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド Methods for treatment of bile acid-related disorders
WO2018190365A1 (en) * 2017-04-12 2018-10-18 国立大学法人九州大学 Neuropathic pain marker and use thereof
JPWO2018190365A1 (en) * 2017-04-12 2020-05-14 国立大学法人九州大学 Neuropathic pain markers and their use
JP7067800B2 (en) 2017-04-12 2022-05-16 国立大学法人九州大学 Neuropathic pain markers and their use

Also Published As

Publication number Publication date
US9834602B2 (en) 2017-12-05
EP2594585A1 (en) 2013-05-22
US20100297125A1 (en) 2010-11-25
US20160222123A1 (en) 2016-08-04
US20110177072A1 (en) 2011-07-21
CA2636288C (en) 2015-02-24
JP2009526756A (en) 2009-07-23
US9631022B2 (en) 2017-04-25
US20070160610A1 (en) 2007-07-12
WO2007133816A2 (en) 2007-11-22
US20110177086A1 (en) 2011-07-21
WO2007133816A3 (en) 2010-11-18
US20190119372A1 (en) 2019-04-25
US8409571B2 (en) 2013-04-02
CA2636288A1 (en) 2007-12-13
US20130177562A1 (en) 2013-07-11
US20170190780A1 (en) 2017-07-06
IL192296A0 (en) 2009-08-03
RU2565391C2 (en) 2015-10-20
US20150132299A1 (en) 2015-05-14
US20150132300A1 (en) 2015-05-14
US20190112369A1 (en) 2019-04-18
EP1991581A2 (en) 2008-11-19
KR20080108413A (en) 2008-12-15
US20160222103A1 (en) 2016-08-04
US9334322B2 (en) 2016-05-10
BRPI0706487A2 (en) 2011-03-29
US9631021B2 (en) 2017-04-25
US20130195855A1 (en) 2013-08-01
US20120107310A1 (en) 2012-05-03
US20140127206A1 (en) 2014-05-08
EP2001906A2 (en) 2008-12-17
US8105590B2 (en) 2012-01-31
US8105591B2 (en) 2012-01-31
US20180044426A1 (en) 2018-02-15
RU2011137369A (en) 2013-03-20
US20120207757A1 (en) 2012-08-16
US7514077B2 (en) 2009-04-07
AU2007249713A1 (en) 2007-11-22
IL219678A0 (en) 2012-06-28
KR101345586B1 (en) 2013-12-31
CA2633439A1 (en) 2007-11-22
US20100221244A1 (en) 2010-09-02
AU2007254715B2 (en) 2013-08-29
IL192130A0 (en) 2009-08-03
IL219677A0 (en) 2012-06-28
US8968732B2 (en) 2015-03-03
US9828431B2 (en) 2017-11-28
JP2009528264A (en) 2009-08-06
US8637015B2 (en) 2014-01-28
EP2749571A2 (en) 2014-07-02
WO2007143231A2 (en) 2007-12-13
MX2008008831A (en) 2009-03-04
US9334321B2 (en) 2016-05-10
US20180066050A1 (en) 2018-03-08
AU2007254715A1 (en) 2007-12-13
US7638126B2 (en) 2009-12-29
US8685395B2 (en) 2014-04-01
US8974783B2 (en) 2015-03-10
EP2749571A3 (en) 2014-08-13
US7939068B2 (en) 2011-05-10
US20170190771A1 (en) 2017-07-06
WO2007143231A3 (en) 2009-08-27
US20140186346A1 (en) 2014-07-03
US20070160611A1 (en) 2007-07-12
US8377438B2 (en) 2013-02-19
US7943132B2 (en) 2011-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9834602B2 (en) Use of IL-31 monoclonal antibodies for treating neuronal inflammation
AU2013204177A1 (en) Methods of Treating Pain and Inflammation in Neuronal Tissue Using IL-31 Antagonists

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20121129

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20121129

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20140204

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20140701