JP2012529272A - Gdnfおよびbdnfを中枢神経系へ送達するための融合タンパク質 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図21
Description
A-X-B
[式中、Aはペプチドベクターであり;Bは(i)GDNF、少なくとも1つのGDNF活性を有するその断片、もしくはGDNF類似体(例えば、本明細書に記載のいずれか);または(ii)BDNF、少なくとも1つのBDNF活性を有するその断片、もしくはBDNF類似体(例えば、本明細書に記載のいずれか)と実質的に同一のポリペプチドであり;そしてXはAをBと接続するリンカー(例えば、本明細書に記載のいずれか)である]を含む化合物を特徴とする。本化合物は血液脳関門を(例えば、効率的に)横切ることができる。本化合物はGDNFの成熟型(例えば、アイソフォーム1のアミノ酸118〜211)またはBDNFの成熟型(例えば、アイソフォームAのアミノ酸129〜247)を含んでもよい。GDNF断片はアイソフォーム1のアミノ酸78〜211を含むかまたはそれであってもよい。本化合物はさらにタグ、例えばHisタグまたは切断部位、例えばトロンビン切断部位を含んでもよい。ある特定の実施形態において、本化合物は図2または図14に示した構造を有する。ある特定の実施形態において、Xはペプチド結合であるかまたはXは少なくとも1つのアミノ酸であり、ここで、AとBはそれぞれXとペプチド結合により共有結合されている。ある特定の実施形態において、リンカーは柔軟なリンカー(例えば、(GGGGS)n、ここでnは1、2、または3である)、硬いリンカー(例えば、PAPAPおよび(PT)nP、ここでnは2、3、4、5、6、または7である)、またはα-ヘリックスリンカー(例えば、A(EAAAK)nA、ここでnは1、2、3、4、または5である)。ペプチドベクターはGDNF、BDNF、または関係分子のNまたはC末端に存在してもよい。本発明はまた、化合物(ここで、Xはペプチド結合、アミノ酸、またはペプチドリンカーである)をコードする核酸分子であることを特徴とする。核酸はベクターの一部分であってもよく、そして核酸はプロモーターと機能しうる形で連結されていてもよい。本発明はまた、ベクターがコードするするポリペプチドを細胞内で発現することにより化合物を作製し、かつそのポリペプチドを精製する方法も特徴とする。本発明はまた、前記化合物を固体支持体上で合成することにより本化合物を作製する方法も特徴とする。
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19
[式中、X1〜X19(例えば、X1〜X6、X8、X9、X11〜X14、およびX16〜X19)は、独立して、任意のアミノ酸(例えば、天然アミノ酸、例えばAla、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、およびVal)であるかまたは不在でありかつX1、X10、およびX15の少なくとも1つ(例えば、2つまたは3つ)はアルギニンである]を有するアミノ酸配列を含みうる。いくつかの実施形態において、X7はSerもしくはCysであるか;またはX10およびX15はそれぞれ独立してArgもしくはLysである。いくつかの実施形態において、X1〜X19の残基は、配列番号:1〜105および107〜116のいずれか1つのアミノ酸配列のいずれか(例えば、Angiopep-1、Angiopep-2、Angiopep-3、Angiopep-4a、Angiopep-4b、Angiopep-5、Angiopep-6、およびAngiopep-7)と実質的に同一である。いくつかの実施形態において、アミノ酸X1〜X19の少なくとも1つ(例えば、2、3、4、または5つ)はArgである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは1以上のさらなるシステイン残基をポリペプチドのN末端、ポリペプチドのC末端、または両方に有する。
ある特定の実施形態において、ペプチドベクターはGDNF、GDNF類似体、GDNF断片、またはそれらの改変型と結合している。ある特定の実施形態において、GDNF類似体はGDNF、GDNF類似体と、またはその断片と、実質的に同一の(例えば、少なくとも60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%、99%同一の)配列である。
Xaa1-Pro-Xaa3-Pro-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8(I)
[式中、Xaa1はPhe、Trp、またはTyrであり;Xaa3はLeu、Ala、Ile、またはValであり;Xaa5はAla、Leu、Ile、またはValであり;Xaa6はGlyであり、D-コンフィギュレーションのアミノ酸残基であるかまたは不在であり;Xaa7はLys、Arg、もしくはHisであるかはまたは不在であり;そしてXaa8はArg、Lys、もしくはHisであるかまたは不在である]を有するGDNF類似体を含む。Xaaはアミノ酸を表し、本発明者らはこれをアミノ酸残基と呼ぶこともある。下付き文字(ここでは下付き文字1〜8)はペプチド配列中のそれぞれのアミノ酸の位置を表す。従って、Xaa1はGDNF前駆体タンパク質の断片中の第1アミノ酸残基を表す。
Pro-Pro-Xaa3-Xaa4-Pro-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xa-a10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14(II)
[式中、Xaa3はGluまたはAspであり;Xaa4はAla、Gly、Ile、Leu、Met、またはValであり;Xaa6はAla、Gly、Ile、Leu、Met、またはValであり;Xaa7はGluまたはAspであり;Xaa8はAspまたはGluであり;Xaa9はArg、His、またはLysであり;Xaa10はSer、Asn、Gln、またはThrであり;Xaa11はLeu、Ala、Gly、Ile、Leu、MetまたはValであり;Xaa12はGlyであり、D-コンフィギュレーションのアミノ酸残基であるか、または非存在であり;Xaa13はArg、His、もしくはLysであるかまたは非存在であり;Xaa14はArg、His、もしくはLysであるかまたは非存在である]のアミノ酸配列と一致するアミノ酸残基の配列を有してもよくまたは含んでもよい。式IIと一致する例示のペプチドは配列Pro-Pro-Glu-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Arg-Ser-Leu-Gly-Arg-Arg(配列番号2)を有しうる。
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22(III)
[式中、Xaa1およびXaa2は、独立して、Arg、Lys、もしくはHisであるかまたは不在であり;Xaa3はGluまたはAspであり;Xaa4はArg、Lysであるか、またはHisであり;Xaa5はAsn、Gln、Ser、またはThrであり;Xaa6はArg、Lys、またはHisであり;Xaa7はGln、Asn、Ser、またはThrであり;Xaa8、Xaa9、Xaa10、およびXaa11は、独立して、Ala、Gly、Ile、Leu、Met、またはValであり;Xaa12はAsn、Gln、Ser、またはThr;Xaa13はProまたはSer;Xaa14はGluまたはAspであり;Xaa15はAsn、Gln、Ser、またはThrであり;Xaa16はSer、Asn、Gln、またはThrであり;Xaa17はLys、Arg、またはHisであり;Xaa18はGly、Ala、Ile、Leu、Met、またはValであり;Xaa19はLys、Arg、またはHisであり;Xaa20はGlyであり、D-コンフィギュレーションのアミノ酸残基であるか、または不在であり;およびXaa21およびXaa22は、独立して、Arg、Lys、Hisであるか、または存在しない]のアミノ酸配列と一致するアミノ酸残基の配列を有してもよくまたは含んでもよい。式IIIと一致する例示のペプチドは配列:Arg-Arg-Glu-Arg-Asn-Arg-Gln-Ala-Ala-Ala-Ala-Asn-Pro-Glu-Asn-Ser-Arg-Gly-Lys-Gly-Arg-Argを有してもよい。
Xa-(x)-Xb-Xc-Xd-Xf
[式中、XaはD、E、AまたはGであり、(x)はアミノ酸残基A、D、E、G、I、K、L、P、Q、S、TおよびVから選択される2〜3アミノ酸残基もしくは単一アミノ酸残基の配列であり、Xbはアミノ酸残基YもしくはHであるか、または疎水性アミノ酸残基であり、そしてXc、Xd、もしくはXfの少なくとも1つは帯電性もしくは疎水性アミノ酸残基である]を有するものを含む。この類似体は長さが6〜22アミノ酸であってもよい。
BDNFはタンパク質の神経成長因子ファミリーに属する糖タンパク質である。このタンパク質は247アミノ酸ポリペプチド(アイソフォームA)、255アミノ酸ポリペプチド(アイソフォームB)、262アミノ酸ポリペプチド(アイソフォームC)、276アミノ酸ポリペプチド(アイソフォームD)、329アミノ酸ポリペプチド(アイソフォームE)としてコードされる。成熟119アミノ酸糖タンパク質はさらに大きい前駆体からプロセシングされ、神経細胞集団の生存を促進する神経栄養因子を生じる。成熟タンパク質は、アイソフォームAプレタンパク質のアミノ酸129〜247、アイソフォームBプレタンパク質のアミノ酸137〜255、アイソフォームCプレタンパク質のアミノ酸144〜162、アイソフォームDプレタンパク質のアミノ酸158〜276、またはアイソフォームEプレタンパク質のアミノ酸211(または212)〜329を含む。BDNFは、TrkB受容体および低アフィニティ神経成長因子受容体(LNGFRまたはp75)に作用する。BDNFは存在するニューロンのニューロン生存を支援することができ、そしてまた、新ニューロンの成長と分化を促進することができる。本発明のBDNF断片もしくは類似体は上述した活性のいずれかを有しうる。かかる類似体および断片は当技術分野で公知の任意の手段を用いて試験することができる。
式(1):
A(X-B)n
(式中、Aが脳由来神経栄養因子を表し、Bがグリセロールの2位にヒドロキシル基を有する1-アシル-グリセロール誘導体のそのヒドロキシル基の水素原子を除いた残基を表し、Xが化学的架橋を表し、mは平均導入数を表し、約0.5以上を表す)である、上記の修飾されたBDNF;
(3)Xが式(2):
(4)1-アシル-グリセロール誘導体が1-アシル-グリセロ-3-ホスホリルコリン、1-アシル-グリセロ-3-ホスホリルセリン、または1-アシル-グリセロ-3-ホスホリルエチルアミンである、上記(2)記載の修飾されたBDNF;
(5)Bが式(4):
(7)アシル基が炭素数8〜30のアルカノイル基である上記(2)、(3)、(4)、(5)および(6)のいずれか1つに記載の修飾されたBDNF;
(8)アシル基がパルミトイル基である上記(2)、(3)、(4)、(5)、(6)および(7)のいずれか1つに記載の修飾されたBDNF;
(9)mが約1〜約6である上記(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)および(8)のいずれか1つに記載の修飾されたBDNF;
(11)R1が炭素数2〜10の直鎖状のアルキレン基である、上記(10)記載の修飾されたBDNF;
(12)R1がトリメチレンである、上記(10)記載の修飾されたBDNFを含む。
本発明の化合物は、本明細書に記載のポリペプチドのいずれか、例えば、表1に記載のペプチドのいずれか(例えば、Angiopep-1またはAngiopep-2)、またはその断片もしくは類似体を特徴としうる。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは本明細書に記載のポリペプチドと少なくとも35%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、またはさらに100%同一性を有しうる。ポリペプチドは本明細書に記載の配列の1つと比較して1以上(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15)の置換を有しうる。他の改変を以下にさらに詳しく記載する。
本明細書で用いるペプチドベクターおよびGDNF、BDNF、または関係分子は、改変されたアミノ酸配列を有してもよい。ある特定の実施形態において、改変は所望の生物学的活性(例えば、BBBを横切る能力またはニューロテンシンアゴニスト活性)を有意に破壊しない。改変は元来のポリペプチドの生物学的活性を、(例えば、5%、10%、20%、25%、35%、50%、60%、70%、75%、80%、90%、または95%だけ)低下してもよく、効果を与えなくてもよく、または(例えば、少なくとも5%、10%、25%、50%、100%、200%、500%、または1000%だけ)増加してもよい。改変ペプチドまたはポリペプチドはポリペプチドの特徴、例えば、in vivo安定性、バイオアベイラビリティ、毒性、免疫学的活性、免疫学的同一性、およびコンジュゲーション特性を有してもよくまたは最適化してもよい。
(1)疎水性:ノルロイシン、メチオニン(Met)、アラニン(Ala)、バリン(Val)、ロイシン(Leu)、イソロイシン(Ile)、ヒスチジン(His)、トリプトファン(Trp)、チロシン(Tyr)、フェニルアラニン(Phe);
(2)中性親水性:システイン(Cys)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr);
(3)酸性/負電荷:アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu);
(4)塩基性:アスパラギン(Asn)、グルタミン(Gln)、ヒスチジン(His)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg);
(5)鎖配向に影響を与える残基:グリシン(Gly)、プロリン(Pro);
(6)芳香族性:トリプトファン(Trp)、チロシン(Tyr)、フェニルアラニン(Phe)、ヒスチジン(His);
(7)極性:Ser、Thr、Asn、Gln;
(8)塩基性正電荷:Arg、Lys、His;および
(9)帯電:Asp、Glu、Arg、Lys、His。
天然のアミノ酸から成るポリペプチドに加えて、ペプチドミメチックまたはポリペプチド類似体も本発明に包含され、本発明の化合物で使用するペプチドベクターまたはGDNF、BDNF、または関係分子を形成することができる。ポリペプチド類似体は医薬品産業において一般に、テンプレートポリペプチドに類似した特性をもつ非ペプチド薬物として利用される。非ペプチド化合物は「ペプチド-ミメチック」またはペプチドミメチックと呼ばれる(Fauchere et al, Infect. Immun. 54:283-287,1986 and Evans et al, J. Med. Chem. 30:1229-1239, 1987)。治療上有用なペプチドもしくはポリペプチドと構造的に関係があるペプチドミメッチクを用いて等価またはより高い治療または予防効果を生じうる。一般に、ペプチドミメチックはパラダイムポリペプチド(すなわち、生物学的または薬理学的な活性を有するポリペプチド)、例えば、天然の受容体結合ポリペプチドと構造的に類似するが、当技術分野で公知の方法により、-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(cisおよびtrans)、-CH2SO-、-CH(OH)CH2-、-COCH2-などの結合によって任意に置き換えられた1以上のペプチド結合を有する(Spatola, Peptide Backbone Modifications, Vega Data, 1:267, 1983;Spatola et al., Life Sci. 38:1243-1249, 1986;Hudson et al., Int. J. Pept. Res. 14:177-185, 1979;およびWeinstein, 1983, Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, Weinstein eds, Marcel Dekker, New York)。かかるポリペプチドミメチックは天然のポリペプチドを越える大きな利点を有し、その利点としては、より経済的な生産、より優れた化学安定性、向上した薬理学的特性(例えば、半減期、吸収、効力、効率)、低い抗原性などが挙げられる。
上記のように、本明細書に記載のポリペプチドの主鎖幾何およびファーマコフォア提示を複製するように作製した非ペプチジル化合物(ペプチドミメチック)はしばしば、より高い代謝安定性、より高い効力、より長い作用期間、およびより優れたバイオアベイラビリティの属性を持つ。
GDNF、BDNF、または関係分子を直接(例えば、ペプチド結合などの共有結合を介して)またはリンカーを介して結合することができる。リンカーは化学連結剤(例えば、切断可能なリンカー)およびペプチドを含む。
ニューロンの生存の向上(例えば、ニューロン死滅率の減少)またはニューロン形成速度の増加が有利である疾患または症状は、本発明の化合物を用いて治療することができる。かかる症状には、神経変性障害、例えば、ポリグルタミン鎖増大障害(例えば、ハンチントン病(HD)、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮、ケネディー病(脊髄延髄性筋萎縮とも呼ばれる)、および脊髄小脳失調症(例えば、1型、2型、3型(マチャド-ジョセフ病とも呼ばれる)、6型、7型、および17型)、他のトリヌクレオチド反復増大障害(例えば、脆弱X症候、脆弱XE精神遅滞、フリードリッヒ失調症、筋緊張性ジストロフィー、脊髄小脳失調症8型、および脊髄小脳失調症12型)、アレキサンダー病、アルパーズ病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、毛細血管拡張性運動失調、バッテン病(シュピールマイアー-フォークト-シェーグレン-バッテン病とも呼ばれる)、キャナヴァン病、コケーン症候群、皮質基底変性症、クロイツフェルト‐ヤーコブ病、虚血脳卒中、クラッベ病、レーヴィ小体認知症、多発性硬化症、多系統萎縮症、パーキンソン病、ペリツェーウス-メルツバッヒャー病、ピック病、原発性側索硬化症、レフサム病、サンドホッフ病、シルダー病、脊髄損傷、脊髄筋萎縮、スティール・リチャードソン・オルスゼフスキー病、および脊髄ろうからなる群より選択される障害が含まれる。他の症状には、損傷(例えば、脊髄損傷)、振盪、虚血性脳卒中、および 出血性脳卒中が含まれる。
本発明はまた、本発明の化合物の治療有効量を含有する医薬組成物を特徴とする。組成物は様々な薬物送達システムで用いるために製剤化することができる。1以上の生理的に許容される賦形剤または担体も適当な製剤のために組成物に含まれてよい。本発明における使用に好適な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed., 1985に見出すことができる。薬物送達の方法の総括については、例えば、Langer(Science 249:1527-1533, 1990)を参照されたい。
Angiopep-2/GDNF構築物
Angiopep-2とhGDNF配列(hGDNF78-211)を含む構築物を作製した。これらの構築物はN末端(His)6タグ、トロンビン切断部位、Angiopep-2配列、およびGDNF配列を含む。対照ペプチド(Angiopep-2配列を欠く)も作製した(図2)。これらの配列のN末端部分のアミノ酸配列を図3に示す。これらの構築物をクローニングするストラテジーを図4〜7に記載する。類似したストラテジーをBDNF構築物を作製するのに使った。構築物の配列を図8〜12に示す。GFRα1と結合したAngiopep-2-GDNF化合物を示すイメージを図13に示す。
GDNFコンジュゲートの受容体結合
GDNFコンジュゲートの受容体結合を測定するために、二重サンドイッチElisaを用いた。簡単に説明すると、マウス抗-ヒトIgG抗体をプレートに結合させた(図15)。GFRα1受容体/IgGFc融合体を加えると、これは前記抗体と結合した。リガンド結合を測定するため、GDNF、GDNFコンジュゲート、または Angiopep-2をそれぞれプレートに加えた。プレートを次いで、順にヤギ抗-GDNF抗体およびアルカリホスファターゼ-コンジュゲート-ウサギ抗ヤギIgG抗体を用いて処理した。このサンプルを次いでp-ニトロフェニルホスフェート(p-NPP)(アルカリホスファターゼ(AP)基質で、AP処理すると無色から黄色に変わる)を用いて処理した。タンパク質の結合をこの変色に基づいて測定した。
ホモ二量体の形成
先に記載したように、GDNFがジスルフィド結合を介してホモ二量体を形成することは公知である(図17)。かかるホモ二量体の形成はまた、An2-GDNF タンパク質についても観察された(図18)。還元剤、例えばジチオトレイトール(DTT)での処理により、これらのジスルフィド結合は低減することができる。
GDNFシグナル伝達カスケードの活性化
以上説明したように、GDNFはGFRα1受容体と結合する。リガンド-受容体複合体は次いでチロシンキナーゼ受容体RETと結合する。この受容体は次いで2つの経路、すなわち、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ(PI3K)を介するAkt経路およびRas経路を介するErk経路を活性化することができる。これらの経路の活性化は細胞生存および増殖の増加をもたらす(図19)。
in situ脳潅流
GDNF融合タンパク質が血液脳関門を横切ることができるかどうかを確認するために、in situ潅流アッセイを実施した。かかるアッセイは、例えば、PCT公開公報WO 2006/086870に記載されている。これらの結果からAngiopep-2-GDNFコンジュゲートは非コンジュゲートGDNFより遥かに効果的にBBBを横切ることが観察された(図 21)。
本明細書で記載した全ての特許、米国特許出願第61/186,246号(2009年6月11日出願)を含む特許出願、および公開は、それぞれの特許、特許出願、または公開を特定しておよび個々に参照により組込まれると示したのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (31)
- 式:
A-X-B
[式中、Aはペプチドベクターであり;Bは(i)GDNF、少なくとも1つのGDNF活性を有するその断片、もしくはGDNF類似体;または(ii)BDNF、少なくとも1つのBDNF活性を有するその断片、もしくはBDNF類似体、と実質的に同一のポリペプチドであり;そしてXはAをBと接続するリンカーである]を含む、化合物。 - 血液脳関門を横切ることができる、請求項1に記載の化合物。
- 前記BがGDNFまたはBDNFの成熟型を含む、請求項1に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)、逆転Angiopep-2(配列番号117)、Angiopep-1(配列番号67)、cys-Angiopep-2(配列番号113)、およびAngiopep-2-cys(配列番号114)からなる群より選択される配列と少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の化合物。
- 前記配列同一性が少なくとも90%である、請求項4に記載の化合物。
- AがAngiopep-2 (配列番号97)、逆転Angiopep-2(配列番号117)、Angiopep-1(配列番号67)、cys-Angiopep-2(配列番号113)、およびAngiopep-2-cys(配列番号114)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項5に記載の化合物。
- Aが、Angiopep-2(配列番号97)、逆転Angiopep-2(配列番号117)、Angiopep-1(配列番号67)、cys-Angiopep-2(配列番号113)、およびAngiopep-2-cys(配列番号114)からなる群より選択されるアミノ酸配列から成る、請求項6に記載の化合物。
- Xがペプチド結合である、請求項1に記載の化合物。
- Xが少なくとも1つのアミノ酸であり;AとBがそれぞれペプチド結合によりXと共有結合されている、請求項1に記載の化合物。
- Xが(GGGGS)n(ここでnは1、2、または3である);PAPAP;(PT)pP(ここでpは2、3、4、5、6、または7である);およびA(EAAAK)qA(ここでqは1、2、3、4、または5である)からなる群より選択される、請求項9に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)であり;Xがペプチド結合であり;そしてBがhGDNF78-211であり;AがBのN末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)であり;Xがペプチド結合であり;そしてBがhGDNF78-211であり;AがBのC末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- Aが逆転 Angiopep-2(配列番号117)であり;Xがペプチド結合であり;そしてBがhGDNF78-211であり;AがBのN末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)であり;Xが(GGGGS)2であり;そしてBがhGDNF78-211であり;ここでAはBのN末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)であり;XがPAPAPであり;そしてBがhGDNF78-211であり;ここでAはBのN末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- AがAngiopep-2(配列番号97)であり;XがA(EAAAK)2Aであり;そしてBがhGDNF78-211であり;ここでAはBのN末端とXを介して接続されている、請求項1に記載の化合物。
- 請求項8〜16のいずれか1項に記載の化合物をコードする核酸分子。
- 前記核酸が機能しうる形でプロモーターと連結されている、請求項17に記載の核酸分子を含む、ベクター。
- 請求項18に記載のベクターがコードするポリペプチドを細胞において発現するステップ、および該ポリペプチドを精製するステップを含む、請求項8または9に記載の化合物の作製方法。
- 前記化合物を固体支持体上で合成するステップを含む、請求項8または9に記載の化合物の作製方法。
- 神経変性障害を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に請求項1〜16のいずれか1項に記載の化合物の有効量を投与するステップを含む、上記方法。
- 前記神経変性障害が、ポリグルタミン鎖増大障害、脆弱X症候、脆弱XE精神遅滞、フリードリッヒ失調症、筋緊張性ジストロフィー、脊髄小脳失調症8型、および脊髄小脳失調症12型、アレキサンダー病、アルパーズ病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、毛細血管拡張性運動失調、バッテン病(シュピールマイアー-フォークト-シェーグレン-バッテン病)、キャナヴァン病、コケーン症候群、皮質基底変性症、クロイツフェルト-ヤーコブ病、虚血脳卒中、クラッベ病、レーヴィ小体認知症、多発性硬化症、多系統萎縮症、パーキンソン病、ペリツェーウス-メルツバッヒャー病、ピック病、原発性側索硬化症、レフサム病、サンドホッフ病、シルダー病、脊髄損傷、脊髄筋萎縮、スティール・リチャードソン・オルスゼフスキー病、および脊髄ろうからなる群より選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記ポリグルタミン反復疾患がハンチントン病(HD)、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮、ケネディー病(脊髄延髄筋萎縮とも呼ばれる)、または1型、2型、3型(マチャド-ジョセフ病)、6型、7型、および17型からなる群より選択される脊髄小脳失調症である、請求項22に記載の方法。
- 前記被験体がヒトである、請求項21に記載の方法。
- ニューロン障害を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に請求項1〜16のいずれか1項に記載の化合物の有効量を投与するステップを含む、上記方法。
- 前記ニューロン障害が虚血性脳卒中、出血性脳卒中、または脊髄損傷により誘発されたものである、請求項25に記載の方法。
- 前記被験体がヒトである、請求項25に記載の方法。
- うつ病を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に請求項1〜16のいずれか1項に記載の化合物の有効量を投与するステップを含む、上記方法。
- 前記被験体がヒトである、請求項28に記載の方法。
- 統合失調症を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に請求項1〜16のいずれか1項に記載の化合物の有効量を投与するステップを含む、上記方法。
- 前記被験体がヒトである、請求項30に記載の方法。
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