JP2012252000A - マイクロ流体デバイスおよび組織化学用自動反応装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】上部基板とエラストマーシートと下部基板としてスライドガラスとで着脱可能なマイクロ流体デバイスを構成し、試薬液槽、試薬切替バルブ、三方バルブ、送液用ポンプと制御部を備え自動的に組織化学反応工程を実施する装置を提供する。
【選択図】図1
Description
(図1、図2)
当該マイクロ流体デバイスの反応室中を流れる試薬液の種類、順番、流速、流量、温度を制御する組織化学用自動反応装置を提供する。(図3、図4、図5、図6)
前記制御装置は、さらに前記第1の三方バルブと前記第2の三方バルブを制御して組織化学反応を実行する組織化学用自動反応装置を提供する。(図3、図4)
(1)本発明のマイクロ流体デバイスを構成する上部基板、エラストマーシート、下部基板であるスライドガラスは着脱可能であるため、組織化学反応のプロセスを終了後に、マイクロ流体デバイスの構成物を剥離し、スライドガラス上の試料にカバーガラスをかけ、顕微鏡に持っていき組織化学反応後の試料の検鏡が可能となる。
(2)本発明のマイクロ流体デバイスの上部基板は材質がポリカーボネートであるため再利用が可能であり、エラストマーシートは安価に製作でき使い捨てが可能である。
(3)本発明のマイクロ流体デバイスおよび組織化学用自動反応装置により、反応室中の試料は、組織化学反応が実行されている間、空気と直接触れることが無く、手作業のときに問題となる試料の乾燥等による結果のバラツキを防ぐことができる。
(4)本発明の組織化学用自動反応装置により、組織化学反応をマイクロ流体デバイスの入力ポートと出力ポートを有する反応室中で、制御装置により自動で行え、手作業による実施と比べて再現性が高いなどの利点を有する。
エラストマーシート2の中央部は上部硬質基板1と下部硬質基板3との間で貼り合わされたときに、天井が上部硬質基板1の下面、底面が下部硬質基板3の上面、壁面がエラストマーシート2の断面である密閉された液体の反応室ができるよう刳り貫かれた穴6が開いており、穴6の両端は前記上部硬質基板2の入出力ポート4、5と連通する構造となっている。7は、下部硬質基板3に乗せられた組織切片である。
図示されていないが、入出力ポート4、5にはフィッティングが取り付けられ、フィッティングの上端には送液用流路を形成するためのチューブが接続される。
密着させる手段としては、例えば、後述するネジ式のホルダーのような適当な圧力を発生させる加圧部材を用い、上部硬質基板1と下部硬質基板3を挟み込むようにこの加圧部材を取り付ければよい。加圧部材を取り外せば、上部硬質基板1と下部硬質基板3とエラストマーシート2を、剥がして分離することができる。
また、図3および図4に示すように、試薬液切替バルブSWと送液用ポンプPpとの間に三方バルブVa(第1の三方バルブとも称す)を配置し、マイクロ流体デバイスMFDの出力ポートOPと廃液槽との間にもう一個の三方バルブVb(第2の三方バルブとも称す)を配置し、三方バルブVbから三方バルブVaに試薬液が送液されるように循環送液用流路Ccが構成されており、循環送液用流路Ccには、循環送液される試薬を貯めておく循環送液用試薬液槽Tcが配設される。
これらの試薬液切替バルブSW、三方バルブVaおよびVb、送液用ポンプPpおよびPsは制御装置CDにより制御され、組織化学反応の実行が自動制御されている(図4および図6)。
〔実施例1〕
Silpot184(東レ・ダウコーニング株式会社)を用いて厚みが1mmのPDMSシートを作製した。Silpot184は主材と硬化剤(どちらも液状)がセットになった型取り用キットであり、主材と硬化剤を重量比10:1で混合して加熱すると、硬化して柔軟性のあるゴム状のPDMS材になる。
〔実施例2〕
大きさ500mm×500mm、厚み0.2mmの市販のシリコーンゴムシート(アズワン株式会社、6-9085-13)から、大きさ50mm×100mmのシリコーンゴムシートを4枚カッターナイフで切り出した。その4枚のシートの片面にRIE装置(サムコ株式会社、RIE-10NR)を使って酸素プラズマを照射し、プラズマ照射面同士を重ね合わせて接着すると、大きさ50mm×100mm、厚み0.4mmのシリコーンゴムシートが2枚出来上がる。
同様に、その2枚のシートの片面にRIE装置を使って酸素プラズマを照射し、プラズマ照射面同士を重ね合わせて接着することにより、大きさ50mm×100mm、厚み0.8mmのシリコーンゴムシートを作製した。
〔実施例3〕
一方、上部硬質基板にポリカーボネート基板を使用し、市販のポリカーボネート板(白銅株式会社、ポリカーボネート切板(透明))を機械加工で幅31mm×長さ80mm×厚み8mmの大きさに切り出し、送液用入口および送液用出口となる箇所に直径1mmの貫通孔を開け、そこに1/4インチ-28UNFのネジを切ることで、入力ポートIPと出力ポートOPとした。次に、スライドグラスの組織切片をのせる面に、上記の反応室部分と入力ポート部分および出力ポート部分が刳り抜かれたPDMSシート(厚み1mm)を貼り付け、その上からさらにポリカーボネート基板を貼り付けてマイクロ流体デバイスを構成した(図1)。
入力ポートと出力ポートにはフランジレスフィッティング(アップチャーチ社)を介して内径0.5mm、外径1.5mmのテフロンチューブ(アズワン株式会社)に接続した。以下、試薬液槽やバルブなどの各要素間を繋ぐ流路には同じチューブを用いた。入力ポートIPは送液用ポンプPp(株式会社アクアテック マイクロリングポンプ(商標)RP-Q1、該マイクロリングポンプは脈動流を発生する)を介して切替バルブSW(高砂電気工業株式会社 KTV-2-13MFG-1)に接続し、13種類の異なる試薬液を貯めた試薬液槽T1〜T13に繋げた。切替バルブを動作させることで13種類の試薬液の中から選択的に1種類の試薬液をマイクロ流体デバイスへ導入することができる。
〔実施例4〕
さらに、軟質素材のシリコーンゴムシートと硬質素材のポリカーボネート基板およびスライドグラスとの密着性を高め、液漏れを防ぐために、ネジ式のホルダーを使って3層から構成されるマイクロ流体デバイスに圧力を負荷した(図2)。
入力ポートと出力ポートにはフランジレスフィッティング(アップチャーチ社)を介して内径0.5mm、外径1.5mmのテフロンチューブ(アズワン株式会社)に接続した。以下、試薬液槽やバルブなどの各要素間を繋ぐ流路には同じチューブを用いた。入力ポートIPは送液用ポンプPp(株式会社アクアテック マイクロリングポンプRP-Q1、該マイクロリングポンプは脈動流を発生する)を介して切替バルブSW(高砂電気工業株式会社 KTV-2-12MFG-1)に接続し、12種類の異なる試薬液を貯めた試薬液槽T1〜T12に繋げた。
〔実施例5〕
〔実施例6〕
〔実施例7〕
パラフィン包埋されたゼノグラフト細胞組織のスライス切片を貼り付けたスライドグラス(幅26mm×長さ76mm、松浪硝子工業株式会社)をサンプルとして用いた。(組織切片を貼付けたスライドグラスをサンプルスライドグラスとも称す。)まず前処理としてそのサンプルスライドグラスを、キシレンを満たした染色壺に浸し、パラフィンを除去した後、エタノールを満たした染色壺に浸して洗浄し、脱パラフィン工程を実施した。
実施例3に記載のポリカーボネート基板に配設された入力ポートIPと出力ポートOPは、フィッティング(アップチャーチ社)を介して内径0.5mm、外径1.5mmのテフロンチューブ(アズワン株式会社)に接続される。以下、試薬液槽やバルブなどの各要素間を繋ぐ流路には同じチューブを用いている。
[1]メタノール10mL(和光純薬工業株式会社)に過酸化水素水25μL(和光純薬工業株式会社)を混合した溶液(試薬液1)を25℃環境下で流量200μL/minで15分間送液。
[2]PBS-DEPC(DEPC処理したPBS、試薬液2)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、そのまま20分間静置。
[3]インキュベータ内温度を37℃に変更し、PBS-DEPC 50mLにProk25μL(Protenase K solution, RNA Grade、インビトロジェン社、 cat. No.25530-049)を混合した溶液(試薬液3)を流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、そのまま10分間静置。
[4]インキュベータ内温度を25℃に戻し、Diethyl Pyrocarbonate (DEPC、SIGMA社)25μLをPBS-DEPC 25mLに混合したActive DEPC(試薬液4)を流量200μL/minで40分間送液。
[5]DEPC水(DEPC処理した再蒸留水、試薬液5)を25℃環境下で流量200μL/minで20分間送液。
[6]インキュベータ温度を42℃に変更し、ハイブリダイゼーションバッファー10mL、ヒトACTB mRNA検出用probe (配列番号1に記載のオリゴDNAプローブで5’端と3’端はフルオレセインでラベルされており、作成はオペロンバイオテクノロジー株式会社に委託)100μLを混合した溶液(試薬液6)を流量200μL/minで10分間送液し、その後、三方バルブVaとVbを動作させ循環送液系に切り替えてから流量を100μL/minに変更し、960分間循環送液。
[7]三方バルブVaとVbを動作させ一方向系に切り替えてから流量を200μL/minに変更し、SSC(試薬液7、20X SSC(インビトロジェン社)を希釈して使用)を42℃環境下で40分間送液。
[8]インキュベータ内温度を25℃に戻し、TNTバッファー(0.1M Tris-HCL (pH7.5), 0.15M NaCl, 0.005% Tween 20、試薬液8)を流量200μL/minで25分間送液。
[9] ブロッキングバッファー(試薬液9)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[10] ブロッキングバッファー1960μLに抗フルオレセイン抗体(HRPコンジュゲート、Polyclonal Rabbit Anti-FITC/HRP, Rabbit F(ab’)、Dako社製)40μLを混合した溶液(試薬液10)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、90分間静置。
[11] TNTバッファー(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[12] TSA Plus Fluorescein System(株式会社パーキンエルマージャパン)の1xPlus Amplification Diluent 1960μLにチラミド-フルオレセイン40μLを混合した溶液(試薬液11)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ10分間静置(試薬液11の調整はパーキンエルマー社の製品マニュアルに従った)。
[13] TNTバッファー(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[14] PBS 1998μLにDAPI 2μL(インビトロジェン社、Cat No.D1306)を混合した溶液(試薬液12)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、15分間静置(DAPI染色)。
[15] TNTバッファー(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで13分間送液。
[16] DDW(試薬液13)を25℃環境下で流量200μL/minで20分間送液。以上の16工程終了後、マイクロ流体デバイスからサンプルスライドグラスを取り外し、試料を封入剤(Vectashield H-1000、Vector Laboratories, Inc.)で封入しカバーグラスをかけ、蛍光顕微鏡(オリンパス株式会社、型式IX71)で組織切片の蛍光観察を行った。その結果を図11〜図13に示す。図11はin situハイブリダイゼーション(ヒトACTB遺伝子のmRNAを検出)の結果の顕微鏡写真である。図12は細胞核を染色するDAPI染色(工程14)の結果の顕微鏡写真である。図13は、in situハイブリダイゼーション(ヒトACTB遺伝子のmRNAを検出)の結果(図11)およびDAPI染色の結果(図12)を重ね合わせた写真である。なお、PBS-DEPC(DEPC処理したPBS)、DEPC水(DEPC処理した再蒸留水)、ハイブリダイゼーションバッファー、ブロッキングバッファーの各バッファー類は、非特許文献3、4、5に記載の方法に従って調整した。なお、本実施例での工程[5]と[6]の間に、4%パラフォルムアルデヒドを含むPBS-DEPCを4℃環境下にて5分間送液する後固定を行い、さらにDEPC水を送液する工程を挿入してもよい。また、非特許文献3、4、5に種々記載されているようにin situハイブリダイゼーションの組織化学反応のプロトコルは本実施例に限られるものではない。組織切片として凍結切片を使用してもよい。
〔実施例8〕
パラフィン包埋されたマウス肝臓組織のスライス切片(厚さ5μm)を貼り付けたスライドグラス(幅26mm×長さ76mm、松浪硝子工業株式会社)をサンプルとして用いた。まず前処理としてそのサンプルスライドグラスを、キシレンを満たした染色壺に浸し、パラフィンを除去した後、エタノールを満たした染色壺に浸して洗浄し、脱パラフィン工程を実施した。
軟質素材のシリコーンゴムシートと硬質素材のポリカーボネート基板およびスライドグラスとの密着性を高め、液漏れを防ぐために、ネジ式のホルダーを使って3層から構成されるマイクロ流体デバイスに圧力を負荷した(図2)。
入力ポートIPは送液用ポンプPp(株式会社アクアテック マイクロリングポンプRP-Q1)を介して切替バルブSW(高砂電気工業株式会社 KTV-2-12MFG-1)に接続し、12種類の異なる試薬液を貯めた試薬液槽T1〜T12(実施例2の装置のT1からT12)に繋げ、切替バルブを動作させることで12種類の試薬液の中から選択的に1種類の試薬液をマイクロ流体デバイスへ導入することができるようにした。
[2]PBS-DEPC(DEPC処理したPBS、試薬液2)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、そのまま20分間静置。
[3]インキュベータ内温度を37℃に変更し、PBS-DEPC 50mLにProk25μL(Protenase K solution, RNA Grade、インビトロジェン社、 cat. No.25530-049)を混合した溶液(試薬液3)を流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、そのまま10分間静置。
[4]インキュベータ内温度を25℃に戻し、Diethyl Pyrocarbonate (DEPC、SIGMA社)25μLをPBS-DEPC 25mLに混合したActive DEPC(試薬液4)を流量200μL/minで40分間送液。
[5]DEPC水(DEPC処理した再蒸留水、試薬液5)を25℃環境下で流量200μL/minで20分間送液。
[6]インキュベータ温度を42℃に変更し、ハイブリダイゼーションバッファー10mL、アルブミン mRNA検出用probe (配列番号2に記載のオリゴRNAプローブ、作成にはCUGA in vitro Transcription Kit(株式会社ニッポンジーンテク)を使用し、ユーザーズマニュアルに従った。なお、RNAプローブをフルオレセインでラベルするためにFluorescein-12-UTP(ロッシュアプライドサイエンス社)を使用した。)100uLを混合した溶液(試薬液6、probe濃度が20nM程度)を流量200μL/minで10分間送液し、その後、三方バルブVaとVbを動作させ循環送液系に切り替えてから流量を100μL/minに変更し、960分間循環送液。
[7]三方バルブVaとVbを動作させ一方向系に切り替えてから流量を200μL/minに変更し、SSC(試薬液7、20X SSC(インビトロジェン社)を希釈して使用)を42℃環境下で40分間送液。
[8]インキュベータ内温度を25℃に戻し、TNTバッファー(0.1M Tris-HCL (pH7.5), 0.15M NaCl, 0.05% Tween 20、試薬液8)を流量200μL/minで25分間送液。
[9] ブロッキングバッファー(試薬液9)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[10]ブロッキングバッファー1960μLに抗フルオレセイン抗体(HRPコンジュゲート、Polyclonal Rabbit Anti-FITC/HRP, Rabbit F(ab’)、Dako社製)40μLを混合した溶液(試薬液10)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、90分間静置。
[11] TNTバッファー(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[12] TSA Plus Fluorescein System(株式会社パーキンエルマージャパン)の1xPlus Amplification Diluent 1960μLにチラミド-フルオレセイン40μLを混合した溶液(試薬液11)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ10分間静置(試薬液11の調整はパーキンエルマー社の製品マニュアルに従った)。
[13] TNTバッファー(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[14] DDW(試薬液12)を25℃環境下で流量200μL/minで20分間送液。以上の14工程終了後、マイクロ流体デバイスからサンプルスライドグラスを取り外し、試料を封入剤(Vectashield H-1000、Vector Laboratories, Inc.)で封入しカバーグラスをかけ、蛍光顕微鏡(Axiovert、カールツアイス株式会社)で組織切片の蛍光観察を行った。その結果を図14に示す。なお、PBS-DEPC(DEPC処理したPBS)、DEPC水(DEPC処理した再蒸留水)、ハイブリダイゼーションバッファー、ブロッキングバッファーの各バッファー類は、非特許文献3、4、5に記載の方法に従って調整した。なお、本実施例での工程[5]と[6]の間に、4%パラフォルムアルデヒドを含むPBS-DEPCを4℃環境下にて5分間送液する後固定を行い、さらにDEPC水を送液する工程を挿入してもよい。また、非特許文献3、4、5に種々記載されているようにin situハイブリダイゼーションの組織化学反応のプロトコルは本実施例に限られるものではない。組織切片として凍結切片を使用してもよい。
〔実施例9〕
パラフィン包埋された試料組織のスライス切片を貼り付けたスライドグラス(幅26mm×長さ76mm、松浪硝子工業株式会社)をサンプルとして用い、まず前処理としてそのサンプルスライドグラスを、キシレンを満たした染色壺に浸し、パラフィンを除去した後、エタノールを満たした染色壺に浸して洗浄し、脱パラフィン工程を実施する。
実施例3または4に記載の方法で作成した、ポリカーボネート基板の入力ポートIPと出力ポートOPの各ポートは、フィッティング(アップチャーチ社)を介して内径0.5mm、外径1.5mmのテフロンチューブ(アズワン株式会社)に接続した。以下、試薬液槽やバルブなどの各要素間を繋ぐ流路には同じチューブを用いる。
一方、マイクロ流体デバイスMFDの出力ポートOPは廃液槽Tdに繋げ、さらに、送液用ポンプPpと切替バルブSWの間、およびマイクロ流体デバイスの入力ポートIPと廃液槽Tdの間にそれぞれ三方バルブVaおよびVb(高砂電気工業株式会社 KV-3K-MFG-2)を配設する。これらのバルブを切り替えることでマイクロ流体デバイス、送液用ポンプ、循環送液用試薬液槽Tcが連結された閉鎖流路系を構成することができ、限られた少量の試薬液を循環送液することができる。なおマイクロ流体デバイスや試薬液槽等を含めた送液系はインキュベータ内に設置し、温度環境を制御しながら実験を行う。
[1]メタノール10mL(和光純薬工業株式会社)に過酸化水素水25μL(和光純薬工業株式会社)を混合した溶液(試薬液1)を25℃環境下で流量200μL/minで15分間送液。
[2]PBS(リン酸緩衝液、試薬液2)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液。
[3]ブロッキングバッファー(BSA(bovine serum albumin)を加えたPBS、試薬液3)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[4]BSA(bovine serum albumin)を加えたPBS 1960μLに抗原を検出するための抗体(一次抗体)40μLを混合した溶液(試薬液4)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、60分間静置。
[5] PBS(リン酸緩衝液、試薬液2)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液。
[6] BSA(bovine serum albumin)を加えたPBS 1960μLに一次抗体を検出するための抗体(HRPコンジュゲート、二次抗体)40μLを混合した溶液(試薬液5)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ、60分間静置。
[7] TNTバッファー(0.1M Tris-HCL (pH7.5), 0.15M NaCl, 0.005% Tween 20、試薬液6)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[8] TSA Plus Fluorescein System(株式会社パーキンエルマージャパン)の1xPlus Amplification Diluent 1960μLにチラミド-フルオレセイン40μLを混合した溶液(試薬液6)を25℃環境下で流量200μL/minで10分間送液後、送液用ポンプを停止させ10分間静置(試薬液7の調整はパーキンエルマー社の製品マニュアルに従う)。
[9] TNTバッファー(試薬液6)を25℃環境下で流量200μL/minで40分間送液。
[10] DDW(試薬液8)を25℃環境下で流量200μL/minで20分間送液。以上の10工程終了後、マイクロ流体デバイスからサンプルスライドグラスを取り外し、試料を封入剤(Vectashield H-1000、Vector Laboratories, Inc.)で封入しカバーグラスをかけ、蛍光顕微鏡(Axiovert、カールツアイス株式会社)で組織切片の蛍光観察を行う。非特許文献6にあるように免疫染色には種々のプロトコルがあり、プロトコルに従って、実施例5または6の制御装置CDのシーケンスプログラムを変更することにより、これらのプロトコルを実施可能である。
2:エラストマーシート(PDMSシートあるいはシリコーンゴムシート)
3:下部硬質基板(スライドグラス)
4:入力ポート
5:出力ポート
6:反応室
7:組織切片
8:負荷する圧力
T1、T2、T3、・・・、Tn:試薬液槽
SW:試薬液切替バルブ
Va:三方バルブ
Vb:三方バルブ
Pp:送液用ポンプ
Ps:送液用ポンプ
IP:入力ポート
MFD:マイクロ流体デバイス
OP:出力ポート
Td:廃液槽
Tc:循環送液用試薬液槽
Ca、Cb、Cc:送液用流路
CD:制御装置
PC:パーソナルコンピュータ
PCD:マイコンボード
MPU:マイクロプロセッサ
MEM:メモリー
SSR:ソリッドステートリレー
DIO:デジタルIOインターフェース
PW:直流電源
MD:モータードライバ
USB:USB通信インターフェース
Claims (15)
- 上部基板と下部基板と、少なくとも1枚のエラストマーシートとからなり、該エラストマーシートが前記上部基板と下部基板との間で貼り合わされてできるマイクロ流体デバイスであって、
前記上部基板には流体を出し入れするための少なくとも1個以上の入力ポート及び出力ポートが該上部基板を貫通して配設されており、前記エラストマーシートには中央部に上部基板と下部基板との間で貼り合わされたときに天井が上部基板の下面、底面が下部基板の上面、壁面がエラストマーシートの断面である密閉された液体の反応室ができるよう刳り貫かれた穴があいており、該穴の一部は前記上部基板の入力ポート及び出力ポートと連通する構造となっている
ことを特徴とするマイクロ流体デバイス。 - 前記上部基板、下部基板およびエラストマーシートは、エラストマーシート材料の自己吸着性を利用して貼り合わされ、
前記貼り合わされた上部基板と下部基板およびエラストマーシートは、貼り合わせ面からの液漏れを防ぐために加圧して貼り合わせ面の密着性を高める部材が取り付けられ、
前記貼り合わされた前記上部基板、下部基板およびエラストマーシートは、前記部材を取り外すことで分離される
ことを特徴とする請求項1に記載のマイクロ流体デバイス。 - 前記上部基板がポリカーボネートからなる硬質基板であり、前記下部基板がスライドガラスからなる硬質基板であり、前記エラストマーシートが、厚さが20ミクロンから1000ミクロンのPDMS(ポリジメチルシロキサン)等のシリコーンゴム素材あるいはその他のゴム素材である
ことを特徴とする請求項2に記載のマイクロ流体デバイス。 - 請求項1に記載のマイクロ流体デバイスを用いた組織化学用自動反応装置であって、
組織化学反応用試薬液を貯めておく少なくとも2個以上の試薬液槽と、
反応を終了した前記試薬液を貯めておく廃液槽と、
該試薬液槽と該マイクロ流体デバイスの前記入力ポートとを繋ぐ第1の送液用流路と、
該マイクロ流体デバイスの前記出力ポートと該廃液槽とを繋ぐ第2の送液用流路と、
前記第1の送液用流路に配置された第1の送液用ポンプおよび/または前記第2の送液用流路に配置された第2の送液用ポンプと、
組織化学反応を実行する制御装置とがそれぞれ備えられ、
当該マイクロ流体デバイスの反応室中を流れる試薬液の種類、順番、流速、流量、温度を制御する
ことを特徴とする組織化学用自動反応装置。 - 前記マイクロ流体デバイスの反応室へ前記試薬液を充填後、その液体を反応室中で停留させ、
および/または前記試薬液を前記マイクロ流体デバイスの入力ポートから出力ポートへの一方向に反応室中において送液させ、
および/または前記試薬液を前記マイクロ流体デバイスの入力ポートから出力ポートへの順方向および出力ポートから入力ポートへの逆方向の双方向に交互に反応室中において送液させ、
および/または1時間以上の時間にわたって1種類の前記試薬液を前記マイクロ流体デバイスの反応室に循環送液させる
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記一方向への送液、双方向への交互の送液または循環送液の少なくともいずれか1つの送液として脈動流を送る
ことを特徴とする請求項5に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記第1の送液用流路に前記第1の送液用ポンプが配置された場合であって、
前記第1の送液用流路には、前記試薬液槽と前記第1の送液用ポンプの間に前記マイクロ流体デバイスに送る試薬液を切り替える試薬液切替バルブが配設され、
さらに該第1の送液用流路には、前記試薬液槽と試薬液切替バルブを繋ぐチューブ、該試薬液切替バルブと前記第1の送液用ポンプを繋ぐチューブ、該第1の送液用ポンプから該マイクロ流体デバイスの入力ポートに繋がれたチューブがそれぞれ備えられ、
前記制御装置は、該試薬液切替バルブおよび該第1の送液用ポンプを制御して前記組織化学反応を実行する
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記第2の送液用流路に前記第2の送液用ポンプが配置された場合であって、
前記第1の送液用流路において、前記試薬液槽と前記マイクロ流体デバイスの入力ポートの間にマイクロ流体デバイスに送る試薬液を切り替える試薬液切替バルブが配設され、
さらに該第1の送液用流路には、試薬液槽と試薬液切替バルブを繋ぐチューブ、試薬液切替バルブと入力ポートを繋ぐチューブとがそれぞれ設けられ、
該第2の送液用流路には、マイクロ流体デバイスの出力ポートから該第2の送液用ポンプに繋がれたチューブ、および該第2の送液用ポンプから廃液槽に繋がれたチューブがそれぞれ備えられ、
前記制御装置は、該試薬液切替バルブおよび該第2の送液用ポンプを制御して前記組織化学反応を実行する
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記第1の送液用流路には、前記試薬液切替バルブと前記第1の送液用ポンプとの間に第1の三方バルブが配設され、
前記第2の送液用流路には、前記マイクロ流体デバイスの出力ポートと廃液槽との間に第2の三方バルブが配設され、
前記第2の三方バルブから前記第1の三方バルブに送液される試薬液を貯めておく循環送液用試薬液槽と、前記第2の三方バルブと前記循環送液用試薬液槽を繋ぐチューブと、該循環送液用試薬液槽と前記第1の三方バルブを繋ぐチューブとからなる循環送液用流路が備えられ、
前記制御装置は、さらに前記第1の三方バルブと前記第2の三方バルブを制御して組織化学反応を実行する
ことを特徴とする請求項7に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記第1の送液用流路には、試薬液切替バルブとマイクロ流体デバイスの入力ポートとの間に前記第1の三方バルブが配設され、
前記第2の送液用流路には、前記第2の送液用ポンプと廃液槽との間に前記第2の三方バルブが配設され、
前記第2の三方バルブから前記第1の三方バルブに送液される試薬液を貯めておく循環送液用試薬液槽と、前記第2の三方バルブと循環送液用試薬液槽を繋ぐチューブ、該循環送液用試薬液槽と前記第1の三方バルブを繋ぐチューブからなる循環送液用流路が備えられ、
前記制御装置は、さらに前記第1の三方バルブと前記第2の三方バルブを制御して組織化学反応を実行する
ことを特徴とする請求項8に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記制御される温度が1℃から60℃の間である
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記試薬液槽の温度が、前記反応室において該試薬液槽の試薬液が供される反応の温度と同じ温度以上の温度で維持されている
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記組織化学反応がRNAを検出するin situハイブリダイゼーションである
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記組織化学反応が抗原を検出する免疫染色である
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。 - 前記組織化学反応が細胞核を染色する工程を含む組織化学反応である
ことを特徴とする請求項4に記載の組織化学用自動反応装置。
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