JP2011528557A - 過体重動物と関連する障害を治療するための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
[0008]1つの態様において、本発明は、痩せた動物に比較して過体重動物において示差的に発現される1以上の遺伝子の発現に干渉する1以上の成分の有効量を含む、イヌペットフード組成物であって、1以上の遺伝子の発現に干渉する前記の1以上の成分が、乾物重量で26重量%〜35重量%の粗タンパク質、乾物重量で7.5重量%〜8.5重量%の粗脂肪、乾物重量で20重量%〜30重量%の総食物繊維、および乾物重量で10重量%〜20重量%の粗繊維を含む、前記組成物を含む。
[0033]本発明の別の態様は、痩せた動物に比較して過体重動物において示差的に発現される2以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの組み合わせを含む。
[0036]本発明の別の態様は、試験物質をスクリーニングして、動物の脂肪組織量を調節するのに有用である可能性が高いかどうかを決定するための方法として、痩せた動物に比較して過体重動物において示差的に発現される1以上の遺伝子の発現プロフィールに対する試験物質の影響を測定するための方法を含む。
[0038]本発明の別の態様は、痩せた動物に比較して過体重動物において示差的に発現される1以上の遺伝子の発現を調節するための、または動物の脂肪組織量を調節するための方法および組成物を含む。
[0045]用語「動物」は、脂肪組織を有する、ヒト、または鳥類、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヒクリン(hicrine)、ネズミ、ヒツジ、およびブタ動物を含む他の動物を意味する。該用語を、痩せた動物に対して過体重動物を比較する文脈で用いた場合、比較する動物は、同じ種の動物であり、そしておそらく同じ品種(race)または種族(breed)の動物である。好ましい態様において、動物は、イヌまたはネコ、最も好ましくはイヌである。
[0049]用語「DEXA」は、体組成分析二重エネルギーX線吸光光度法を意味する。
[0054]用語「倍」は、示差的遺伝子発現の測定値として用いられる場合、比較動物、例えば痩せた動物に比較される過体重動物における遺伝子発現量に比較した遺伝子発現の倍数または割合である、動物における遺伝子発現量を意味する。例えば、比較動物におけるものの3倍が動物において発現される遺伝子は、3倍の示差遺伝子発現を有し、そして該遺伝子は上方制御されているという。一方、比較動物におけるものの1/3が発現される遺伝子もまた、3倍の示差遺伝子発現を有し、そして該遺伝子は下方制御されているという。
[0080]1つの態様において、本発明は、痩せた動物の脂肪組織および/またはリンパ球に比較して、過体重動物の脂肪組織および/またはリンパ球において示差的に発現される1以上の遺伝子または遺伝子セグメント(本明細書において「遺伝子」と定義する)を含む。本発明は、痩せた動物の脂肪組織に比較した過体重動物の脂肪組織における、445のポリヌクレオチド、および痩せた動物から採取されたリンパ球に比較した過体重動物から採取されたリンパ球における、1767のポリヌクレオチドによって代表される、示差的に発現される遺伝子の発見に基づく。本発明は、さらに、過体重および痩せた動物間で示差的に発現され、そして表3に列挙される、脂肪酸代謝に関与する7つの重要な遺伝子の同定に基づく。これらの重要な遺伝子は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼファミリー、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼファミリーおよび溶質キャリアーファミリー27(脂肪酸輸送体)のメンバー、ならびに長鎖脂肪酸伸長と関連する遺伝子に相当し、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼファミリーおよびカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼファミリーが最も重要であり、そしていくつかの場合、律速酵素である。Affymetrix GeneChip(登録商標)技術を用いて、過体重と診断される動物から採取された脂肪組織およびリンパ球における遺伝子と、痩せたと診断される動物由来の脂肪組織およびリンパ球における遺伝子の発現を比較することによって、遺伝子を同定した。ポリヌクレオチドを表1、2および3に示す。表は、Affymetrixプローブ同定番号(本明細書において「APIN」)、p値、q値、倍発現(太った/痩せた)、問題のプローブの上位BLAST注釈、最高BLASTヒットの寄託番号、遺伝子記号の情報を含有し、そして最後に遺伝子の説明を最後の列に示す。いくつかの場合、推定上のまたは実際の遺伝子の説明が、当業者に知られる方法を用いて、BLASTデータベースから得られうる。一般的に、推定上のまたは実際の遺伝子の機能は、(1)痩せた動物に比較して過体重動物において、1.3倍以上高い遺伝子発現を有する各遺伝子に関してAPINを同定し、(2)APIN番号と配列を相関させる好適に入手可能なAffymetrixデータベースにAPINを入力することによって、こうした各遺伝子のヌクレオチド配列を決定し、そして(3)米国国立衛生研究所によって提供されるBLASTデータベースにヌクレオチド配列を入力し、そしてデータベース中の相同配列に対する、生じた配列のマッチから、推定上のまたは実際の遺伝子機能を決定することによって決定される。
[00107]1つの態様において、試験系は、組織培養物、細胞抽出物、または細胞株などのin vitro試験系である。別の態様において、試験系はin vivo試験系、すなわちイヌなどの動物である。他の態様において、試験系はex vivo組織系またはin silico系である。
[00112]比較で用いる痩せた動物に関する発現プロフィールを、試験中の動物に関する発現プロフィールと同時期に1以上の痩せた動物から、または痩せた動物の発現プロフィールのデータベースから得てもよい。好ましくは、長期に渡って集積された、痩せた動物に関する発現プロフィールのデータベースが、参照として使用するために利用可能である。
[00124]本発明は、乾物重量で26重量%〜35重量%の粗タンパク質、乾物重量で7.5重量%〜8.5重量%の粗脂肪、乾物重量で20重量%〜30重量%の総食物繊維、および乾物重量で10重量%〜20重量%の粗繊維を含む、イヌ食物組成物を含む。
[00129](a)乾物重量で26重量%〜35重量%の粗タンパク質;
[00130](b)乾物重量で7.5重量%〜8.5重量%の粗脂肪;
[00131](c)乾物重量で20重量%〜30重量%の総食物繊維;および
[00132](d)乾物重量で10重量%〜20重量%の粗繊維
を含む。
[00134](a)乾物重量で30重量%〜37重量%の粗タンパク質;
[00135](b)乾物重量で7.5重量%〜9重量%の粗脂肪;
[00136](c)乾物重量で30重量%〜35重量%の総食物繊維;および
[00137](d)乾物重量で20重量%〜25重量%の粗繊維
を含むネコ組成物を含む。
[00139](a)以下の少なくとも1つ:
[00140](i)少なくとも0.05%(または0.05%〜0.30%、または0.1%〜0.30%、または0.1%〜0.2%)のDHA、および
[00141](ii)少なくとも0.1%(または0.1%〜0.5%、または0.2%〜0.5%、または0.2%〜0.3%)のEPA、
[00142](b)少なくとも15%(または15%〜55%、または30%〜55%、または33%〜36%)のタンパク質、
[00143](c)少なくとも9%(または9%〜35%、または18%〜35%、または18%〜24%)の脂肪、ならびに
[00144](d)以下の少なくとも1つ:
[00145](i)少なくとも250IU/kg(または250IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1100IU/kg)のビタミンE、
[00146](xii)少なくとも50ppm(または50ppm〜300ppm、または100ppm〜300ppm、または100ppm〜200ppm)のビタミンC、
[00147](xiii)少なくとも1100ppm(または1100ppm〜3500ppm、または2300ppm〜3500ppm、または2300ppm〜2350ppm)のタウリン、および
[00148](xiv)少なくとも200ppm(または200〜750ppm、または400ppm〜750ppm、または400〜525ppm)のカルニチン、および
[00149](xv)少なくとも0.05%(または0.05%〜0.6%、または0.1%〜0.6%、または0.1%〜0.4%)のシステイン
を含む。
[00151](a)0.02%(または0.05%〜10%、または0.1%〜6%)の少なくとも1つのオメガ−3ポリ不飽和脂肪酸、ならびに
[00152](b)以下の少なくとも1つ:
[00153](xvi)10%〜55%(または18%〜30%、または33%〜55%、または18%〜20%、または33%〜36%)のタンパク質、
[00154](xvii)7%〜35%(または18%〜35%、または7%〜24%、または14%〜24%、または14%〜16%、または18%〜24%)の脂肪、
[00155](xviii)少なくとも.05(または0.05ppm〜7500ppm、または250〜3600、または250ppm〜1650ppm、または5ppm〜225ppm、または0.05ppm〜2.4ppm)の酸化防止剤、および
[00156](xix)少なくとも1000ppm(または1000ppm〜5000ppm、3300ppm〜5000ppm、または2000ppm〜3000ppm、または3000ppm〜4000ppm)のコリン
を含む。
[00158](a)以下の少なくとも1つ:
[00159](i)少なくとも0.02%(または0.02%〜0.3%、または0.05%〜0.3%、または0.05%〜0.2%)のDHA、および(ii)少なくとも0.1%(または0.1%〜0.5%、または0.2%〜0.5%、または0.2%〜0.3%)のEPA、
[00160](b)少なくとも9%(または9%〜30%、または18%〜30%、または18%〜20%)のタンパク質、
[00161](c)少なくとも7%(または7%〜24%、または14%〜24%、または14%〜16%)の脂肪、
[00162](d)以下の少なくとも1つ:
[00163](i)少なくとも250IU/kg(または250IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1000IU/kg)のビタミンE、
[00164](xx)少なくとも50ppm(または50ppm〜500ppm、または100ppm〜500ppm、または100ppm〜301ppm)のビタミンC、
[00165](xxi)少なくとも600ppm(または600ppm〜2400ppm、または1260ppm〜2400ppm、または1260ppm〜1545ppm)のタウリン、および
[00166](xxii)少なくとも50ppm(または50ppm〜200ppm、または100〜160、または100〜155)のリポ酸、および
[00167](xxiii)少なくとも50ppm(または50ppm〜500ppm、または200ppm〜500ppm、または200ppm〜350ppm)のカルニチン、
[00168](e)少なくとも1000ppm(または1000ppm〜3200ppm、または2000ppm〜3200ppm、または2000ppm〜2500ppm)のコリン、
[00169](f)少なくとも50ppm(または50ppm〜150ppm、または100ppm〜150ppm、または100ppm〜110ppm)のマンガン、ならびに
[00170](g)少なくとも0.4%(または0.4%〜2%、または0.9%〜2%、または0.9%〜1.2%)のリジン、ならびに
[00171](h)少なくとも0.4%〜1.5%のメチオニン
を含む。
[00173](a)以下の少なくとも1つ:
[00174](i)少なくとも0.02%(または0.02%〜0.3%、または0.05%〜0.3%、または0.05%〜0.2%)のDHA、および
[00175](ii)少なくとも0.1%(または0.1%〜0.5%、または0.2%〜0.5%、または0.2%〜0.3%)のEPA、
[00176](b)少なくとも9%(または9%〜30%、または18%〜30%、または18%〜20%)のタンパク質、
[00177](c)少なくとも7%(または7%〜24%、または14%〜24%、または14%〜16%)の脂肪、
[00178](d)以下の少なくとも1つ:
[00179](i)少なくとも250IU/kg(または250IU/kg〜1500IU/kg、または500lU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1000IU/kg)のビタミンE、
[00180](xxiv)少なくとも50ppm(または50ppm〜500ppm、または100ppm〜500ppm、または100ppm〜301ppm)のビタミンC、
[00181](xxv)少なくとも600ppm(または600ppm〜2400ppm、または1260ppm〜2400ppm、または1260ppm〜1575ppm)のタウリン、および
[00182](xxvi)少なくとも50ppm(または50ppm〜200ppm、または100〜160、または100〜155)のリポ酸、および
[00183](xxvii)少なくとも50ppm(または50ppm〜500ppm、または200ppm〜500ppm、または200ppm〜350ppm)のカルニチン、
[00184](e)少なくとも1000ppm(または1000ppm〜3200ppm、または2000ppm〜3200ppm、または2000ppm〜2500ppm)のコリン、
[00185](f)少なくとも50ppm(または50ppm〜150ppm、または100ppm〜150ppm、または100ppm〜110ppm)のマンガン、ならびに
[00186](g)少なくとも0.4%(または0.4%〜2%、または0.9%〜2%、または0.9%〜1.2%)のリジン、ならびに
[00187](h)少なくとも0.4%〜1.5%のメチオニン
を含む。
[00189](a)以下の少なくとも1つ:
[00190](i)少なくとも0.05%(または0.05%〜0.30%、または0.1%〜0.30%、または0.1%〜0.2%)のDHA、および
[00191](ii)少なくとも0.1%(または0.1%〜0.5%、または0.2%〜0.5%、または0.2%〜0.3%)のEPA、
[00192](b)少なくとも15%(または15%〜55%、または30%〜55%、または33%〜36%)のタンパク質、
[00193](c)少なくとも9%(または9%〜35%、または18%〜35%、または18%〜24%)の脂肪、
[00194](d)以下の少なくとも1つ:
[00195](i)少なくとも250IU/kg(または250IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1500IU/kg、または500IU/kg〜1100IU/kg)のビタミンE、
[00196](xxviii)少なくとも50ppm(または50ppm〜300ppm、または100ppm〜300ppm、または100ppm〜200ppm)のビタミンC、
[00197](xxix)少なくとも1100ppm(または1100ppm〜3500ppm、または2300ppm〜3500ppm、または2300ppm〜2350ppm)のタウリン、および
[00198](xxx)少なくとも200ppm(または200〜750ppm、または400ppm〜750ppm、または400〜525ppm)のカルニチン、および
[00199](xxxi)少なくとも0.05%(または0.05%〜0.6%、または0.1%〜0.6%、または0.1%〜0.4%)のシステイン、
[00200](e)少なくとも1600ppm(または1600ppm〜5000ppm、または3300ppm〜5000ppm、または3300ppm〜3400ppm)のコリン、
[00201](f)少なくとも50ppm(または50ppm〜150ppm、または100ppm〜150ppm、または100ppm〜110ppm)のマンガン、ならびに
[00202](g)少なくとも0.7%(または0.7%〜3%、または1.4%〜3%、または1.4%〜1.7%)のリジン、ならびに
[00203](h)少なくとも0.4%〜1.5%のメチオニン
を含む。
[00204]本発明は、in vitroおよびin vivoの両方で、動物において肥満と関連するタンパク質の発現および/または活性を調節するのに有効な、本発明の組成物の投与を含む、疾患および障害を治療するかまたは防止するための方法を含む。本発明者らは、驚くべきことに、本発明の組成物が、動物において肥満と関連するタンパク質を調節する際に有効であることを見出した。理論に束縛されることなく、動物において肥満と関連するタンパク質の発現および/または活性の調節は、異常な血糖レベル、体重増加、または脂肪沈着レベルと関連する障害を治療するかまたは防止するのに有用であると考えられる。本発明はさらに、過体重および/または肥満動物において、タンパク質活性を調節するのに有用な組成物および配合物をさらに含む。本発明はまた、被験体、好ましくは前記治療または防止が必要なコンパニオン哺乳動物に、療法的または予防的に有効な量の組成物を投与して、被験体において、肥満と関連するタンパク質または遺伝子の活性を調節する工程を含む、タンパク質または遺伝子活性を調節する方法も含む。例示的な態様において、lynキナーゼ活性を調節するための剤は、本発明の化合物である。
[00209]本発明は、心臓血管疾患の治療または防止のための方法であって、コンパニオン動物に、療法的に有効な量の本発明の組成物および薬学的に許容されうるビヒクルを投与する工程を含む、前記方法を提供する。いくつかの態様において、心臓血管疾患は、異常な/改変されたタンパク質発現と関連する。本明細書において、用語「心臓血管疾患」は、心臓および循環器系の疾患を指す。これらの疾患は、しばしば、異常リポタンパク質血症および/または脂質異常症と関連する。本発明の組成物が防止するかまたは治療するのに有用な心臓血管疾患には、限定されるわけではないが、動脈硬化症;アテローム性動脈硬化症;脳卒中;虚血;内皮機能不全、特に血管弾性に影響を及ぼす機能不全;末梢血管疾患;冠動脈心臓疾患;心筋梗塞;脳梗塞および再狭窄が含まれる。
[00210]本発明は、脂質異常症の治療または防止のための方法であって、コンパニオン動物に、療法的に有効な量の本発明の組成物および薬学的に許容されうるビヒクルを投与する工程を含む、前記方法を提供する。いくつかの態様において、脂質異常症は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現と関連する。本明細書において、用語「脂質異常症」は、循環脂質の異常なレベルを導くかまたはこうしたレベルによって明らかになる障害を指す。血中脂質レベルが非常に高い限りにおいて、本発明の組成物をコンパニオン動物に投与して、正常レベルを回復させる。脂質の正常レベルは、当業者に知られる医学専門書に報告される。例えば、LDL、HDL、未結合(free)トリグリセリドおよび脂質代謝に関連する他のパラメータの推奨される血中レベルは、米国心臓協会のウェブサイトおよび米国心肺血液研究所の全米コレステロール教育プログラムのウェブサイトで見出されうる。現時点で、血中のHDLコレステロールの推奨されるレベルは35mg/dLより高く;血中のLDLコレステロールの推奨されるレベルは130mg/dL未満であり;血中の推奨されるLDL:HDLコレステロール比は5:1、理想的には3.5:1未満であり;そして血中の未結合トリグリセリドの推奨されるレベルは200mg/dL未満である。
[00213]本発明は、異常リポタンパク質血症の治療または防止のための方法であって、コンパニオン動物に、療法的に有効な量の本発明の組成物および薬学的に許容されうるビヒクルを投与する工程を含む、前記方法を提供する。本明細書において、用語「異常リポタンパク質血症」は、循環リポタンパク質の異常なレベルを導くかまたはこうしたレベルによって明らかになる障害を指す。血中リポタンパク質レベルが非常に高い限りにおいて、本発明の組成物を患者に投与して、正常レベルを回復させる。逆に、血中リポタンパク質レベルが非常に低い限りにおいて、本発明の組成物を患者に投与して、正常レベルを回復させる。リポタンパク質の正常レベルは、当業者に知られる医学専門書に報告される。
[00215]本発明は、グルコース代謝障害の治療または防止のための方法であって、コンパニオン動物に、療法的に有効な量の本発明の組成物および薬学的に許容されうるビヒクルを投与する工程を含む、前記方法を提供する。本明細書において、用語「グルコース代謝障害」は、異常なグルコース貯蔵および/または利用を導くかまたはこれによって明らかになる障害を指す。グルコース代謝指標(indicia)(すなわち血中インスリン、血糖)が非常に高い限りにおいて、本発明の組成物を患者に投与して、正常レベルを回復させる。逆に、グルコース代謝指標が非常に低い限りにおいて、本発明の組成物を患者に投与して、正常レベルを回復させる。正常なグルコース代謝指標は、当業者に知られる医学専門書に報告される。いくつかの態様において、グルコース代謝障害は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現と関連する。
[00218]本明細書において、「症候群Xまたは代謝症候群の治療または防止」は、限定されるわけではないが、耐糖能異常、高血圧および脂質異常症および/または異常リポタンパク質血症を含む、代謝症候群と関連する症状の治療または防止を含む。いくつかの態様において、代謝症候群は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現と関連する。
II型糖尿病の治療または防止
[00224]本明細書において、「II型糖尿病の治療または防止」は、限定されるわけではないが、網膜症(すなわち盲目);足の潰瘍、壊疽、および切断につながるニューロパシー(すなわち神経損傷);透析につながる腎損傷;ならびに心臓血管疾患を含む、II型糖尿病と関連する合併症の治療または防止を含む。いくつかの態様において、II型糖尿病は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現に関連する。
[00229]本明細書において、「肥満の治療または防止」は、肥満に関連する合併症の治療または防止を含む。肥満の合併症には、限定されるわけではないが、高コレステロール血症、高血圧、脂質異常症(例えば高い総コレステロールまたは高レベルのトリグリセリド)、2型糖尿病、冠動脈心臓疾患、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、およびいくつかの癌(子宮内膜、***、および結腸)が含まれる。いくつかの態様において、肥満は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現に関連する。
[00230]本発明は、敗血症、血栓性障害、膵炎、高血圧、炎症、およびインポテンスの治療または防止のための方法であって、患者に、本発明の化合物および薬学的に許容されうるビヒクルを含む組成物の療法的に有効な量を投与する工程を含む、前記方法を提供する。いくつかの態様において、これらの障害は、異常な/改変されたlynキナーゼ活性および/または発現に関する。
[00232]本明細書において、「血栓性障害の治療または防止」は、フィブリノーゲンの高血中レベルの治療または防止および線維素溶解の促進を含む。
本発明のキット
[00234]キットが、バーチャルなパッケージを含む場合、キットは、1以上の物理的キット構成要素と組み合わせて、バーチャルな環境中の指示に制限される。1つの態様において、キットは、プローブおよび/または他の物理的構成要素を含有し、そしてプローブおよび他の構成要素を用いるための指示は、インターネットを通じて入手可能である。キットは、試料、プローブ、および試薬を混合するためのデバイス、ならびにキットを用いるためのデバイス、例えば試験管または混合用具などのさらなる物品を含有してもよい。
組織からのリボ核酸(RNA)の単離
[00237]収集され、液体窒素中で凍結され、そして融解された組織試料をホモジナイズし、そしてTRIzol(登録商標)RNA抽出法を用いてプロセシングして、優れた品質のRNAを産生し、これを次いで、さらなるゲノム分析に供した。
[00241]組織ホモジナイズ:液体窒素を保持可能な容器を、3〜4杯の液体窒素で満たす。前述の容器内に凍結組織片を直ちに入れ(組織はエンドウ豆サイズでなければならない)そして組織を適切な標識50mLポリプロピレン試験管(すでに4mL TRIzol(登録商標)を含有しているもの)内に入れる。Ultra−Turrax T25強力ホモジナイザーを用いて、直ちにホモジナイズを開始する。最高設定(6)で10〜15秒間ホモジナイズする。試料を氷上でさらに10〜15秒間冷却し、そして次いで反復する。組織が完全にホモジナイズされるまで続け、そして溶液は濁っている。完全にホモジナイズされたら、50mL試験管に蓋をし、そして氷に戻す。ホモジナイズした組織を室温で5分間インキュベーションした後、単離法を進める。
RNeasyミニキットを用いた、OptiCellチャンバー中で培養した細胞からのRNA単離
[00244]哺乳動物細胞株から培養した細胞を用いて、優れた品質のRNAを単離し、これを次いで、さらなる下流ゲノム分析に用いる。細胞の培養に関連するすべての実験を、厳密な無菌条件下で行うものとする。
[00250]Agilent 2100バイオアナライザーおよびRNA 6000ナノアッセイを用いて、培養哺乳動物細胞、リンパ球または組織から単離したRNAを、品質に関して分析する。
[00254]Affymetrix社, Santa Clara CA 95051より商業的に入手可能なAffymetrixイヌ1およびイヌ2 GeneChip(登録商標)アレイを用いて、遺伝子発現を分析する。総RNAをcDNAに逆転写する。cDNAを用いて、cRNAを生成し、これを断片化して、そしてGeneChipハイブリダイゼーションのプローブとして用いる。遺伝子チップを洗浄し、そしてAffymetrixレーザースキャナでハイブリダイゼーションシグナルを測定する。次いで、ハイブリダイゼーションデータを検証し、そしてさらなる分析のため標準化する。
過体重および痩せた動物由来の脂肪組織試料間の示差的遺伝子発現を決定する
[00258]慣用法を用いて、「太った」または「痩せた」のいずれかと診断された18頭の(3頭の痩せたおよび15頭の太った)イヌ動物から脂肪組織試料を得るか、または44頭の(12頭の痩せたおよび32頭の太った)イヌ動物からリンパ球を得る。動物の「太っている状態」または「痩せている状態」は、慣用的な方法を用いたDEXAによる測定に基づくか、または5ポイントのボディ・コンディション・スコア系に基づいて決定される。例えば、2または2.5のボディ・コンディション・スコアおよび/または27%以下のDEXA総体脂肪パーセンテージを有するならば、動物は痩せていると見なされる。4以上のボディ・コンディション・スコアおよび30%以上の総体脂肪パーセンテージを有するならば、動物は過体重であると見なされる。すべての固形組織試料を、動物から除去した直後に液体窒素中でスナップ凍結した。製造者の指示にしたがってBD Vacutainer(登録商標)CPTTM細胞調製試験管を用いて、リンパ球を単離し、そしてまた、必要となるまでスナップ凍結した。
イヌ細胞株における遺伝子発現に対する多様な物質または成分の影響の決定
[00259]AffymetrixイヌGeneChip(登録商標)イヌ−1およびイヌ−2を用いて(イヌ−1の代わりにイヌ−2を用いる)、MCT;TAG;ALA;EPA;DHA;リノール酸(LA);アラキドン酸(ARA);ステアリン酸(SA);ミリスチン酸(MA)、コンジュゲート化リノール酸(CLA)、GLA;アラキドン酸;レシチン;ビタミンA、ビタミンD、ビタミンE、ビタミンK、リボフラビン、ナイアシン、ピリドキシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、ビタミンC、カテキン、ケルセチンおよびテアフラビン;ユビキノン;リコペン、リコキサンチン;リスベラトロール;α−リポ酸;L−カルニチン;D−リモネン;グルコサミン;S−アデノシルメチオニン;キトサン、1以上のこれらの化合物を含有する多様な物質、およびこれらの多様な組み合わせなどの多様な試験物質または成分の、4つのイヌ細胞株および適切な対照における遺伝子発現に対する影響を決定した。表6に示す選択される試料成分に関して例示するように、2つの濃度で各成分を試験する。2つの濃度のより高い方の溶媒を対照として用いる。4つのイヌ細胞株を用いた:CCL34(腎臓)、CRL1430(胸腺)、CCL183(骨)(American Tissue Culture Collectionより得る)およびCTAC(甲状腺)(Measurement of NK Activity in Effector Cells Purified from Canine Peripheral Lymphocytes, Veterinary Immunology and Immunopathology, 35(1993)239−251を参照されたい)。特定の濃度の成分で処理した細胞株を「処理」と称し、そして未処理試料を「対照」と称する。用語「遺伝子」および「プローブ」を、この方法では同義で用いる。Affymetrixチップとともに提供される指示を用いて、処理細胞株および対照に関して、遺伝子発現を測定する。
[00261]上に論じるin vitro成分スクリーニングから得られるデータによって、長鎖脂肪酸が多量であるいくつかの成分(表5を参照されたい)は、全体として動物が痩せている状態を促進する方式で、脂肪代謝に関与する遺伝子発現に影響を及ぼす潜在能力を有しうることが示される。これは、脂肪組織から得られたデータを分析することによって、そして慣用的なコンピュータアルゴリズム分析を用いる、上に論じるような成分アッセイから、決定される。これに関連して有用なアルゴリズムのコードは当業者にはよく知られており、そして過度の実験を伴わずに開発されうる。こうしたコードの例を以下に提供する。
ありうる体重減少維持実験
[00266]上に論じる体重減少実験の結果に基づいて、EPA/DHAを含有する食餌を給餌された動物は、体重を減少させるだけでなく、他の試験および対照高繊維食餌を給餌された動物に比較して、その減少をより長い期間維持するとも仮定される。
[00268]「痩せている状態」の最適レベルに到達するまで、過体重動物に4つの異なる食餌(実施例4に記載するようなもの)を給餌してもよい。次いで、これらをランダム化し、そして亜群に分け、先に給餌されていたものと同じ試験食餌を給餌し続けるか、あるいは栄養的にバランスが取れているが、体重減少を誘導するかまたは維持するようには設計されておらず、そして例えばリノレン酸またはEPA/DHAの相当量を含まない維持食餌にスイッチするかいずれかを行ってもよい。
Claims (18)
- (a)乾物重量で26重量%〜35重量%の粗タンパク質;
(b)乾物重量で7.5重量%〜8.5重量%の粗脂肪;
(c)乾物重量で20重量%〜30重量%の総食物繊維;および
(d)乾物重量で10重量%〜20重量%の粗繊維
を含むイヌ組成物。 - タンパク質が28重量%〜33重量%で存在する、請求項1の組成物。
- タンパク質が30重量%〜31重量%で存在する、請求項1の組成物。
- 粗脂肪が7.6重量%〜8.0重量%で存在する、請求項1の組成物。
- 総食物繊維が22重量%〜28重量%で存在する、請求項1の組成物。
- 総食物繊維が24重量%〜26重量%で存在する、請求項1の組成物。
- 粗繊維が12重量%〜18重量%で存在する、請求項1の組成物。
- 粗繊維が14重量%〜16重量%で存在する、請求項1の組成物。
- (a)乾物重量で30重量%〜37重量%の粗タンパク質;
(b)乾物重量で7.5重量%〜9重量%の粗脂肪;
(c)乾物重量で30重量%〜35重量%の総食物繊維;および
(d)乾物重量で20重量%〜25重量%の粗繊維
を含むネコ組成物。 - タンパク質が31重量%〜36重量%で存在する、請求項9の組成物。
- タンパク質が33重量%〜35重量%で存在する、請求項9の組成物。
- 粗脂肪が8.0重量%〜8.5重量%で存在する、請求項9の組成物。
- 総食物繊維が31重量%〜34重量%で存在する、請求項9の組成物。
- 粗繊維が21重量%〜24重量%で存在する、請求項9の組成物。
- 疾患または障害を治療する必要があるイヌに、請求項1の組成物を投与する工程を含む、疾患または障害を治療する方法。
- 疾患または障害が肥満である、請求項15の方法。
- 疾患または障害を治療する必要があるネコ動物に、請求項9の組成物を投与する工程を含む、疾患または障害を治療する方法。
- 疾患または障害が肥満である、請求項15の方法。
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