JP2011525483A - プロバイオティクス、分泌型ＩｇＡ及び炎症 - Google Patents

Abstract

本発明は、広義には、栄養、健康及び健康状態の分野に関する。特に、本発明はプロバイオティクス及びその有効性を高める方法に関する。本発明の一実施形態は、プロバイオティクスとＳＩｇＡの組合せ、及びこの組合せの考えられる使用に関する。例えば、炎症を治療又は予防する製品の調製のための、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物の使用が開示されている。
【選択図】図１

Description

本発明は、広義には、栄養、健康及び健康状態の分野に関する。特に、本発明はプロバイオティクス及びその有効性を高める方法に関する。本発明の一実施形態は、プロバイオティクスと分泌型ＩｇＡの組合せ、及びこの組合せの考えられる使用に関する。

炎症は、病原体、損傷細胞又は刺激物等の有害な刺激に対する、組織による複雑な生物学的反応である。一般的に炎症は、有害な刺激を除去し、さらには組織の治癒過程を開始しようとする、生物による防御の試みである。しかしながら、炎症を適切に制御しないと、被験者の年齢に関係なく、いくつかの疾患につながる恐れがある。

加齢は多くの場合、液性免疫不全の進行に随伴する細胞性免疫反応の顕著な低下（例えば、ワクチンに対する反応の低下）等の、免疫系の調節不全に関与している。さらに、加齢は多くの場合軽度の炎症状態に関与している。したがって、特に多くの高齢の被験者は、罹患率及び死亡率に寄与する感染性及び非感染性疾患にかかる危険性が高い。

望ましくない炎症は、正しい薬物療法によって治療が可能である。しかし、薬物療法は、望ましくない副作用を生じる恐れが常にあり、多くの場合は医療関係者の監視を必要とする。それゆえ、当技術分野においては、望ましくない副作用もなく医師に助言を求める必要もなく、好ましくは毎日、投与することができ、炎症を治療又は予防するために用いることができる組成物が必要とされている。

この目的を達成する方法の１つは、プロバイオティクスを含む食品組成物を投与することである。

プロバイオティクス微生物は、宿主の健康と幸福に有益な効果をもたらすことが知られている。この２０〜３０年の間、プロバイオティクス細菌の使用は、例えば胃腸疾患の治療の安全で利用しやすい形態として多くの注目を集めてきた（Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ．ら、Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ １９９４、３９：２５９５〜２６００）。この点において使用されてきた代表的なプロバイオティクス細菌は、ラクトバチルス又はビフィドバクテリウム属に属する。

プロバイオティクスの有効性は、消化管条件に抵抗し腸上皮に付着する能力によって一部は決まる。さらに、宿主に有益である可能性があることの条件となる重要な側面は、プロバイオティクスと宿主の環境とのクロストーク、並びに上皮バリア及びその機能へのプロバイオティクスの影響である。

いくつかのプロバイオティクスは、胃腸管のコロニー形成及び宿主との相互作用という点においては、すでに非常に素晴らしい結果を達成しているが、プロバイオティクス微生物が腸でコロニー形成して宿主と相互作用する際の有効性をさらに改善するための利用可能なツールがあれば望ましい。

したがって本発明の目的は、プロバイオティクスを必要としている被験者へのプロバイオティクスの投与と利点は同じであるが、プロバイオティクスのみの投与よりも炎症の治療又は予防においてより一層効果的である組成物を当技術分野に提供することであった。

本発明らはこの要求に取り組み、請求項１に記載の使用及び請求項１２に記載の食品組成物によりこの目的を達成できることを見出した。

ゆえに本発明は、分泌型ＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物、並びに炎症を治療、軽減又は予防するためのその使用に関する。

ＳＩｇＡが、共生細菌と結合した場合に、宿主の腸管粘膜との相互作用を高めることでいかにして共生細菌の効果を改善すると考えられるかを模式的に示す図である。共生細菌に結合しているＳＩｇＡと宿主の腸管粘膜との相互作用の考えられる経路及び確認されている経路を表す。 ２つの主な性、ラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属を代表する２つのプロバイオティクス株、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＬＰＲ）及びビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＢＬ８１８）の上皮細胞に対する結合特性を試験した実験の結果を示す図である。データは、Ｃａｃｏ−２細胞１００個あたりのＣＦＵの平均値±ＳＥＭで表す。 ２つの主な性、ラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属を代表する２つのプロバイオティクス株、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＬＰＲ）及びビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＢＬ８１８）の上皮細胞に対する結合特性、及び分泌型ＩｇＡ（ＳＩｇＡ）又は分泌成分（ＳＣ）の影響を試験した実験の結果を示す図である。データは、Ｃａｃｏ−２細胞１００個あたりのＣＦＵの平均値±ＳＥＭで表す。 ２つの主な性、ラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属を代表する２つのプロバイオティクス株、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＬＰＲ）及びビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＢＬ８１８）が、単独又はＳＩｇＡ若しくはＳＣとの組合せで、上皮透過性を測定する経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）に及ぼす効果を試験した実験の結果を示す図である。データは、１ｃｍ^２あたりのオームの平均値±ＳＥＭで表す。 ＳＩｇＡ又はＳＣと組み合わせた時又は組み合わせていない時のＬＰＲが、Ｃａｃｏ−２細胞単層におけるＮＦ−κＢ活性化に及ぼす効果を試験した実験の結果を示す図である。ＮＦ−κＢ結合活性の低下は、Ｃａｃｏ−２細胞内で炎症経路が減衰していることを示す。 ＳＩｇＡ又はＳＣと組み合わせた時又は組み合わせていない時のＬＰＲが、Ｓ・フレックスネリのＣａｃｏ−２細胞への侵入に及ぼす効果を試験した実験の結果を示す図である。２つのモノクローナルＳＩｇＡ分子、サルモネラ菌エピトープを認識する非特異的ＳＩｇＡ（ＳＩｇＡｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）及び特異的抗Ｓ・フレックスネリＳＩｇＡ（ＳＩｇＡＣ５）を用いた。データは、１トランスウェルフィルターあたりのＣＦＵの平均値±ＳＥＭで表す。 Ｃａｃｏ−２単層における多量体Ｉｇ受容体（ｐＩｇＲ）発現に及ぼすプロバイオティクスの効果を試験した実験の結果を示す図である。（Ａ）プロバイオティクスと非特異的ＳＩｇＡとの組合せやＳ・フレックセネリ（ｆｌｅｘｅｎｅｒｉ）と特異的抗Ｓ・フレックスネリＳＩｇＡとの組合せ等の、様々な処理を１６時間目に試験した（ウェスタンブロット）。（Ｂ）Ａのゲルで同定したバンドの濃度測定分析による、β−アクチンに対して標準化したｐＩｇＲ発現レベルの半定量分析。（Ｃ）種々の調製物と共に行ったＣａｃｏ−２細胞の２４時間のインキュベーションにわたる、ｐＩｇＲ発現の動態解析（ＥＬＩＳＡ）。

理論に拘束されることは望まないが、本発明者らは、ＳＩｇＡとプロバイオティクスとで、プロバイオティクスと宿主との相互作用を増強し、且つプロバイオティクスの健康への効果を増大させ得る組合せを作り出すことができると考える。

免疫併用と宿主の腸管粘膜との相互作用機序を示唆したものを図１に示す。

プロバイオティクスと宿主との最初の相互作用は腸粘膜レベルで生じる。プロバイオティクス微生物を選択する際の重要な基準の１つは、腸管粘膜に付着するその能力である。

このような付着は、例えば、病原体の侵入を阻止し、防御免疫機能の調節に寄与するのに必要であると思われる。

ほとんどの哺乳動物において粘膜免疫系の最も特徴的な特性の１つは、分泌型抗体、特に、粘膜特有の抗体クラスである分泌型ＩｇＡ（ＳＩｇＡ）の支配的な存在である。

多量体ＩｇＡの生合成は粘膜固有層で起こり、粘膜表面を覆う上皮を横断する多量体ＩｇＡの輸送は、陰窩及び円柱上皮細胞で発現する多量体Ｉｇ受容体（ｐＩｇＲ）によって確実なものとなる。

分泌においては、分泌成分（ＳＣ）と呼ばれるｐＩｇＲのかなりの部分が多量体ＩｇＡと結合したまま、ＳＩｇＡを放出する。

管腔内へのＳＩｇＡの放出はＳＣの産生に依存しており、ＳＣの発現は出産後に上方制御される。ｐＩｇＲは、抗体の安定性及び粘膜固着に重要な意味を持つと思われる（Ｐｈａｌｉｐｏｎら（２００２）Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ：Ａ ｎｅｗ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ＩｇＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １７：１０７〜１１５）。

新生児は、ＳＩｇＡ抗体はほとんど検出できず、胎盤を通じて運ばれてくる母親のＩｇＧ、及び母乳に豊富に存在するＳＩｇＡの外因性供給に依存している。

同時に、これにより、腸管免疫系の形成及び成熟段階中において宿主を防御するために必須である腸内の受動免疫が付与される。

ゆえに本発明の組成物は、特に新生児及び幼児（２歳まで）に有益となろう。その理由は、新生児及び幼児（２歳まで）は十分量のＳＩｇＡを産生せずに、外部からの供給に頼っているからである。

本発明者らが現在考えるところによれば、プロバイオティクスと宿主との相互作用を増強するのはＳＩｇＡとプロバイオティクスとのこうした結合であり、その結果宿主の健康への効果が増大するのである。

本発明者らは、ＳＩｇＡ抗体とプロバイオティクスとの組合せが、胃腸上皮の模倣体として機能しているヒト細胞株と細菌との相互作用を高めることができることを確認した。

本発明者らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣａｃｏ−２上皮細胞単層を用いて、ＳＩｇＡが非病原性細菌と上皮表面とのクロストークにいかにして有利に働くかを調査した。２つの主な性、ラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属を代表する２つのプロバイオティクス株、すなわちラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＬＰＲ）及びビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＢＬ８１８）が、原理の証明として評価された。

ＳＩｇＡ及び／又はＳＣは、プロバイオティクスに結合すると、プロバイオティクスと宿主との相互作用を促進させ、防御機構に関わる下流のプロセスを調節することがわかった。

このことは、プロバイオティクスの健康効果の増進に寄与する。ＳＩｇＡ及び／又はＳＣは、プロバイオティクスと組み合わせることにより、種々の病原体から効率的に守る、免疫反応等の宿主の防御反応を誘発するのに最適に役立つことができる。ＳＩｇＡは、プロバイオティクスと組み合わせると、その恒常的効果（Ｃｏｒｔｈｅｓｙ Ｂ．（２００７），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．；１７８：２７〜３２）を考慮すると、損傷を与える可能性のあるあらゆる炎症過程を抑えつつ免疫強化効果を誘発するのに役立つ。

したがって、本発明の一実施形態は、炎症を治療又は予防する製品の調製のための、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物である。

本発明は、炎症を治療又は予防する製品の調製のための、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物の使用にも関する。

さらに本発明は、炎症の治療及び／又は予防に使用するための、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物に関する。

炎症の治療には炎症の軽減が含まれる。

「プロバイオティクス」とは、宿主の健康又は幸福に有益な効果を有する微生物細胞調製物又は微生物細胞の構成成分を意味する。（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ．Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ら“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ”Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７〜１０）。

本発明によると、全てのプロバイオティクス微生物が用いられ得る。好ましくは、プロバイオティクス微生物は、ビフィドバクテリウム、ラクトバチルス、ストレプトコッカス及びサッカロミセス、又はそれらの混合物からなる群より選択され、特に、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・サリバリウス、エンテロコッカス・フェシウム、サッカロミセス・ブラウディ及びラクトバチルス・ロイテリ、又はそれらの混合物からなる群より選択され、好ましくは、ラクトバチルス・ジョンソニイ（ＮＣＣ５３３；ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＮＣＣ４９０；ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＮＣＣ２７０５；ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（２８１８；ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ラクトバチルス・パラカゼイ（ＮＣＣ２４６１；ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサス（ＮＣＣ４００７；ＣＧＭＣＣ １．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）、及びそれらの混合物からなる群より選択される。

本発明の組成物はまた、プレバイオティクスを含んでいてもよい。プレバイオティクスはプロバイオティクスと合わせると健康効果に関して相乗効果を挙げることができるので、プレバイオティクスを加えることは有益である。プレバイオティクスとプロバイオティクスの組合せを含む組成物は、一般には共生組成物として知られている。

「プレバイオティクス」とは、ビフィズス菌や乳酸桿菌等の有益な細菌、及び／又は腸内のプロバイオティクスの増殖を促進する食品物質を意味する。プレバイオティクスは、胃の中で分解したり、プレバイオティクスを摂取しているヒトの胃腸管で吸収されたりはしないが、胃腸内細菌叢及び／又はプロバイオティクスによって発酵される。

本発明に従って用いることができるプレバイオティクスは特に限定されず、腸内のプロバイオティクスの増殖を促進する全ての食品物質が含まれる。好ましくは、プレバイオティクスは、所望によってフルクトース、ガラクトース、マンノースを含有するオリゴ糖類；食物繊維、特に可溶性繊維、大豆繊維；イヌリン；又はそれらの混合物からなる群より選択することができる。好ましいプレバイオティクスは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆のオリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖、ペクチン及び／又はそれらの加水分解産物である。

本発明の使用により治療又は予防することができる典型的な炎症状態としては、限定するものではないが、敗血症、感染症、火傷等の急性炎症、及び炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、壊死性腸炎等の慢性炎症、紫外線由来又は化学物質由来の皮膚炎症等の皮膚炎症、湿疹、敏感肌、乾癬、白斑、座瘡、肝炎症、アルコール性肝硬変、アレルギー、アトピー、骨炎症、関節リウマチ、全身性狼瘡、グージェローシェーグレン症候群、ライター症候群、急性灰白髄炎、皮膚筋炎、甲状腺炎、バセドウ病、橋本病、１型糖尿病、アジソン病、自己免疫性肝炎、セリアック病、ビールメル病、多発性硬化症、筋無力症、脳脊髄炎、眼炎、肥満関連炎症、加齢性の軽度の炎症、ブラウ症候群、アルツハイマー病、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドローム、歯肉炎、歯周炎、並びにそれらの組合せが挙げられる。

本発明の組成物は、身体の炎症反応の制御及び／又は軽減のために用いることもできる。

本発明の組成物はさらに、恒常性及び経口免疫寛容を生起、改善又は強化するために用いることができる。

本発明の使用により調製される製品は、食用製品、動物用食用製品又は医薬組成物であってもよい。例えば製品は、栄養組成物、栄養補助食品、飲料、食品添加物又は薬剤であってもよい。

食品添加物又は薬剤は、例えば錠剤、カプセル剤、トローチ又は液体の形態であってもよい。食品添加物又は薬剤は、長時間にわたってＳＩｇＡ及びプロバイオティクスの一定供給を可能にする徐放性製剤として提供されることが好ましい。

製品は、粉乳ベース製品；インスタント飲料；すぐ飲める配合物；栄養粉末；栄養液体；ミルクベース製品、特にヨーグルト若しくはアイスクリーム；穀物製品；飲料；水；コーヒー；カプチーノ；麦芽飲料；チョコレート風味飲料；料理用製品；スープ；錠剤；及び／又はシロップからなる群より選択されることが好ましい。

ミルクは、動物又は植物源から得ることができるいずれのミルクであってもよく、好ましくは、牛乳、人乳、羊乳、山羊乳、馬乳、ラクダ乳、米乳又は豆乳である。

ミルクの代わりに、ミルク由来のタンパク分画又は初乳もまた用いることができる。

組成物は、保護親水コロイド（ゴム、タンパク質、加工デンプン等）、結合剤、被膜剤、封入剤／材料、壁／シェル材料、マトリックス化合物、被覆剤、乳化剤、界面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、蝋、レシチン等）、吸着剤、担体、充填剤、共用化合物（ｃｏ−ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶剤）、流動化剤、味マスキング剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、酸化防止剤及び抗菌剤をさらに含有していてもよい。また組成物は、限定するものではないが、水、任意の起源のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホン酸塩、タルク、砂糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、香味剤、保存剤、安定剤、乳化剤、緩衝剤、潤滑剤、着色剤、湿潤剤、充填剤等を含む、従来の医薬品添加物並びに補助剤、賦形剤及び希釈剤を含有していてもよい。さらに組成物は、経口又は腸内投与に好適な有機又は無機担体材料だけでなく、ＵＳＲＤＡ等の政府機関省庁の推奨に従って、ビタミン、ミネラル微量元素及びその他の微量栄養素を含有していてもよい。

本発明の組成物は、タンパク源、炭水化物源及び／又は脂質源を含有していてもよい。

任意の好適な食事タンパク質、例えば動物性タンパク質（乳タンパク質、食肉タンパク質及び卵タンパク質等）、植物性タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質及びエンドウタンパク質等）、遊離アミノ酸の混合物、又はそれらの組合せを用いることができる。カゼイン及び乳清等の乳タンパク質並びに大豆タンパク質が特に好ましい。

組成物が脂肪源を含む場合、この脂肪源は配合物のエネルギーの５〜４０％、例えばエネルギーの２０〜３０％を生成することがより好ましい。ＤＨＡを加えてもよい．好適な脂肪プロフィールはキャノーラ油、コーン油及び高オレイン酸ひまわり油のブレンドを用いて得ることができる。

炭水化物源は、組成物のエネルギーの４０〜８０％を生成できることがより好ましい。任意の好適な炭水化物、例えばスクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン及びそれらの混合物を用いてもよい。

本発明によって調製される製品は、ヒト又は動物、特にコンパニオンアニマル、ペット若しくは家畜に投与することができる。製品は、いずれの年齢層に対しても有益な効果を有する。好ましくは、製品は幼児、若年者、成人又は高齢者に向けたものである。しかしながら製品は、妊娠中及び授乳期間中の母親に投与して幼児を治療することもできる。

本発明の組成物は、プロバイオティクス及びＳＩｇＡが、同時に投与され、例えば最大で６０分未満、好ましくは３０分未満、より好ましくは１５分未満、最も好ましくは５分未満の時間枠内で短時間に連続的に投与され、及び／又はすでに食物製品中に存在しているように投与前に組み合わされている限りは有効である。

しかしながら、プロバイオティクスとＳＩｇＡの組合せは、ＳＩｇＡ及びプロバイオティクスが投与前に複合体として組み合わされると特に有効であることがわかった。このことには、この有益な複合体は製品が消費された後に形成される必要はないが、食物製品中にすでに存在するという利点がある。

したがって、本発明の一実施形態は、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスが、組成物中で少なくとも部分的に結合している、ＳＩｇＡ及びプロバイオティクスを含む組成物の使用に関する。

ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスは、例えば、少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは全てのプロバイオティクス細菌が、少なくとも１つのＳＩｇＡ分子、例えば少なくとも５つのＳＩｇＡ分子と結合している免疫複合体として存在するという様式で、免疫複合体として存在することが好ましい。

組成物は、好ましくは乳酸菌、ビフィズス菌、腸球菌又はそれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１種の他の種類の他の食品用細菌を含有していてもよい。これらの他の食品用細菌は、健康な腸内微生物叢を得るのに寄与することができ、それゆえに、本発明の目的をより一層効果的に達成するのに寄与することになろう。

本発明は、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクス微生物を含む食品組成物にも関する。ＳＩｇＡ及びプロバイオティクス微生物は、食品組成物中に組み合わせ得ることが好ましい。ＳＩｇＡ及びプロバイオティクス微生物は、少なくとも１０：１、好ましくは少なくとも１００：１、最も好ましくは少なくとも２０００：１〜１０００００：１の化学量論比で存在し得ることが好ましい。当然ながら、プロバイオティクス微生物の表面にＳＩｇＡ分子が結合すればするほど、この組合せはより有効となる。ＳＩｇＡの飽和状態の上限は、プロバイオティクス微生物の表面、及びＳＩｇＡが結合可能な部位の数によって決定される。

通常、プロバイオティクスは広範囲の量で有効となろう。一般的には、製品が日用量あたり細胞１０^２〜１０^１０個のプロバイオティクスを含むと好ましい。

効果を達成するために必要なＳＩｇＡの量は同様に限定されない。一般的には、製品が日用量あたり０．０００１ｍｇ〜１００ｍｇのＳＩｇＡを含むと好ましい。

当業者は、本明細書中に記載の本発明の全ての特徴を、開示された本発明の範囲から逸脱することなく、自由に組み合わせることができることを理解されよう。特に、本発明の使用に関して記載された特徴は、本発明の組成物、例えば食品組成物に適用可能であり、逆もまた然りである。

本発明のさらなる利点及び特徴は、以下の実施例及び図から明らかである。

実施例１
上皮細胞への結合

トランスウェルフィルター１ｃｍ^２あたりに約１０^６個のＣａｃｏ−２細胞を播種した。細胞を、抗生物質又はＦＣＳの不在下で、図の凡例に示す様々な用量の細菌と共に、３７℃で１６時間インキュベートした。ＬＰＲ、ＢＬ８１８及び大腸菌ＴＧ−１細菌の新鮮な一晩培養物を用いた。次いで細胞を洗浄し、その後で数を数えた。結合している細菌はＭＲＳ又はＬＢプレート上に載せてカウントした。各実験について、試験は３回ずつ行った。データは、Ｃａｃｏ−２細胞１００個あたりの結合細菌の平均値±ＳＥＭで表した。各実験について３回ずつ行った。次の実験では、細胞を、図３の凡例に示す通りＳＩｇＡ又はＳＣのいずれかの用量を増加させながら、２×１０^７の細菌と共に３７℃で１６時間インキュベートした。次いで細胞を洗浄し、その後で数を数えた。結合している細菌はＭＲＳ又はＬＢプレート上に載せてカウントした。各実験について、試験は３回ずつ行った。データは、Ｃａｃｏ−２細胞１００個あたりの結合細菌の平均値±ＳＥＭで表した。各実験について３回ずつ行った。

大腸菌ＴＧ−１と比較すると、ＬＰＲ及びＢＬ８１８が極性Ｃａｃｏ−２細胞に選択的に結合していることが観測される（図２）。腸上皮細胞に対するプロバイオティクスの用量依存的な結合能が存在する。２つの株の結合特性は区別可能であることが観測できる。

次の実験では２×１０^７ＣＦＵのプロバイオティクスを用いたが、この量では、一方で培地中でのｐＨ変化を起こすことが全くなく、他方で効率的な結合比率を示したためである。

モノクローナルＳＩｇＡの用量を増加させると、ＬＰＲ及びＢＬ８１８の両方の、極性Ｃａｃｏ−２細胞単層に対する結合能が増強した。分泌成分自体ではこのような特性は示さなかった（図３）。その後の実験では、プロバイオティクスの結合能を有意に向上させる１μｇ用量のＳＩｇＡを選択した。この用量により、細菌１個に対して５０，０００〜１００，０００単位のＳＩｇＡから構成される最終複合体が実現できる。

結果を図２及び３に示す。

実施例２
極性ＣＡＣＯ−２細胞単層におけるバリア機能

トランスウェルフィルター１ｃｍ^２あたりに約１０^６個のＣａｃｏ−２細胞を播種した。細胞を、抗生物質及びＦＣＳの不在下で、２×１０^７ＣＦＵの細菌と共に３７℃で２４時間インキュベートした。細菌を、図４の凡例に示す濃度で、単独又はＳＩｇＡ若しくはＳＣとの組合せで試験した。経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）を３、６、９、１５及び２４時間目に測定した。対照には、ＳＩｇＡ及びＳＣのみとのインキュベーションが含まれる。各実験について３回ずつ行った。

経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）が２０〜２５％上昇したのは、ＬＰＲ又はＢＬ８１８のみでの極性Ｃａｃｏ−２細胞単層のインキュベーションが原因であり、これはプロバイオティクスが上皮バリア機能を増強したことを示唆している。このことは、細菌をＳＩｇＡ又はＳＣと組み合わせた場合にも当てはまった（図４）。ＳＩｇＡ又はＳＣ自体では、ＴＥＲの変化を起こすことは全くなかった。

結果を図４に示す。

実施例３
極性ＣＡＣＯ−２細胞単層におけるＮＦ−κＢ活性化

トランスウェルフィルター１ｃｍ２あたりに約１０^６個のＣａｃｏ−２細胞を播種した。細胞を、抗生物質又はＦＣＳの不在下で、２×１０^７ＣＦＵのＬＰＲと共に３７℃で１６時間インキュベートした。細菌を、図５の凡例に示す濃度で、単独又はＳＩｇＡ若しくはＳＣとの組合せで試験した。Ｓ・フレックスネリ、Ｓ・チフィ及びＨ・ピロリ（２×１０^７ＣＦＵ）を病原性対照として用いた。核抽出物及び細胞質抽出物を調製し、抗ＩκＢα特異的モノクローナル抗体を用いる電気泳動移動度シフト解析（ＥＭＳＡ）及びウェスタンブロットによって分析した。各実験について３回ずつ行った。

病原性細菌にさらすと、非病原性細菌に比べてはるかに顕著な核のＮＦ−κＢの活性化が起きた（図５）。

ＩκＢαの消失（下パネル）は、ＮＦ−κＢの核移行につながる経路の活性化を反映している。その点に関して、ＬＰＲ単独ではＮＦ−κＢの活性化に与える効果は軽いが、ＬＰＲとＳＩｇＡ又はＳＣを組み合わせるとＣａｃｏ−２細胞におけるＮＦ−κＢの活性化が低下した（ＢＬ８１８は試験せず）。上皮細胞を病原性Ｓ・フレックスネリと共にインキュベートした結果、ＩκＢα発現が完全に消失した。

結果を図５に示す。

実施例４
抗病原体活性

トランスウェルフィルター１ｃｍ^２あたりに約１０^６個のＣａｃｏ−２細胞を播種した。細胞を、抗生物質又はＦＣＳの不在下で、２×１０^７ＣＦＵのＬＰＲと共に３７℃で１６時間インキュベートした。ＬＰＲを、単独又は０．２μｇのＳＣ、１μｇのポリクローナルＳＩｇＡ若しくは１μｇの特異的抗Ｓ・フレックスネリＬＰＳ ＳＩｇＡＣ５のいずれかとの組合せで試験した。ＬＰＲと共にインキュベートした後、細胞を洗浄し、次いで１０^７個のＳ・フレックスネリと共に６時間インキュベートし、再度洗浄し、５０ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシンと共に４５分間インキュベートした。最後に、細胞を溶解させ細胞内のＳ・フレックスネリをＬＢ寒天プレート上で数えた。各実験について３回ずつ行った。

ＬＰＲを加えると、極性Ｃａｃｏ−２細胞単層のＳ・フレックスネリによる感染が用量依存的に減少した。この効果は、ＳＩｇＡと組み合わせると大きく高まった。感染の完全防止は、Ｓ・フレックスネリＬＰＳ特異的ＳＩｇＡＣ５抗体を用いた場合に実現された（図６）。

結果を図６に示す。

実施例５
極性Ｃａｃｏ−２細胞単層における多量体Ｉｇ受容体の発現

トランスウェルフィルター１ｃｍ^２あたりに約１０^６個のＣａｃｏ−２細胞を播種した。細胞を、抗生物質又はＦＣＳの不在下で、２×１０^７ＣＦＵのＬＰＲ又はＢＬ８１８と共に３７℃で１６時間インキュベートした。プロバイオティクスを、単独又は０．２μｇのＳＣ、１μｇのポリクローナルＳＩｇＡのいずれかとの組合せで試験した。対照のＳ・フレックスネリを、単独又は１μｇの特異的抗Ｓ・フレックスネリＬＰＳ ＳＩｇＡＣ５との組合せで試験した。洗浄後、Ｃａｃｏ−２細胞をトランスウェルフィルターから直接回収し溶解させた。核を除去し、細胞残屑と細胞質を、ヒトＳＣに対する抗ｐＩｇＲ抗体及び抗血清、並びに対照としてのβ−アクチンを用いてウェスタンブロットで解析した。各実験について３回ずつ行った。

次の実験では、細胞を同じ手順に従ってインキュベートし、次いで、インキュベーションの８、１６、及び２４時間目にトランスウェルフィルターから回収した。細胞残屑／細胞質画分について、ｐＩｇＲの定量分析をＥＬＩＳＡで行った。ＢＣＡタンパク質アッセイで総タンパク質量を求めた。値をタンパク質含有量に対して標準化し、データを、ｎｇ ｐＩｇＲ／ｍｇ総タンパク質量の平均値±ＳＥＭで表した。

上皮細胞におけるｐＩｇＲ発現量をβ−アクチン発現量に対して標準化した。ウェスタンブロット（上パネル）及び各バンドの濃度測定分析（下パネル）から明らかなように、極性Ｃａｃｏ−２単層をＬＰＲ又はＢＬ８１８とＳＩｇＡ又はＳＣのいずれかとの組合せに一晩さらした後は、プロバイオティクス単独にさらした後に比べると、ｐＩｇＲレベルの上昇があった（図７ａ）。特異的抗Ｓ・フレックスネリＬＰＳ ＳＩｇＡＣ５が病原体とＣａｃｏ−２細胞極性単層の相互作用を抑制したことで、Ｓ・フレックスネリ処理単独と比べた時のｐＩｇＲ発現の低下に対して説明がつく。

この結果は、極性Ｃａｃｏ−２細胞単層をプロバイオティクスとＳＩｇＡ又はＳＣとの組合せにさらした後の、多量体Ｉｇ受容体（ｐＩｇＲ）レベルの時間依存的な上昇をさらに示すものであった（図７ｂ）。

結果を図７に示す。

Claims (13)

1. 炎症を治療、軽減又は予防する製品の調製のための、ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスを含む組成物の使用。
2. 恒常性及び経口免疫寛容を生起、改善又は強化するための、請求項１に記載の使用。
3. プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム、ラクトバチルス、ストレプトコッカス及びサッカロミセス、又はそれらの混合物からなる群より選択され、特に、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・サリバリウス、エンテロコッカス・フェシウム、サッカロミセス・ブラウディ及びラクトバチルス・ロイテリ、又はそれらの混合物からなる群より選択され、好ましくは、ラクトバチルス・ジョンソニイ（ＮＣＣ５３３；ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＮＣＣ４９０；ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＮＣＣ２７０５；ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（２８１８；ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ラクトバチルス・パラカゼイ（ＮＣＣ２４６１；ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサス（ＮＣＣ４００７；ＣＧＭＣＣ １．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）、及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の使用。
4. 製品が、食物製品、動物用食物製品又は医薬組成物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
5. 製品が、ヒト、特に幼児、若年者、成人又は高齢者によって消費されることを目的としたものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
6. ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクスが、組成物中で少なくとも部分的に結合している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
7. 炎症反応の制御及び／又は軽減のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
8. 組成物が、好ましくは乳酸菌、ビフィズス菌、腸球菌又はそれらの混合物からなる群より選択される、少なくとも１種の他の種類の他の食品用細菌を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
9. 製品が、好ましくはオリゴ糖類からなる群より選択される少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
10. 製品が、日用量あたり細胞１０^２〜１０^１０個のプロバイオティクスを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
11. 製品が、日用量あたり０．０００１ｍｇ〜１０ｍｇのＳＩｇＡを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
12. ＳＩｇＡ及び少なくとも１種のプロバイオティクス微生物を含む食品組成物。
13. 少なくとも１種のプロバイオティクス微生物及びＳＩｇＡが複合体の形態で存在する、請求項１２に記載の食品組成物。

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