JP2011504366A - エンドリシン活性を有する新規ポリペプチド及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
獲得すると起こり、宿主上皮を損傷する1つ又は複数の毒素を産生する。GITミクロフローラは病原性微生物に対する重要なバリアであり、宿主と有利な様式で相互作用しながらホメオスタシス平衡に維持される、凡そ500から1000の異なる種の複合群落を形成する。古典的な抗生物質治療は、程度の差はるが無差別的であり、それはGITの微生物群落の微妙なバランスを損なう可能性がある。従来の抗生物質治療又は他の要因の結果として、正常なミクロフローラの破壊はCDADの発症の主な要因である。
(a)バクテリオファージΦCD119のリシン(lysin);
(b)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(c)クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のプロファージ1及び2のリシン。
PhiC2推定エンドリシン: YP_001110754;
CD630ファージエンドリシン: YP_001087453;
phiCD119推定リシン: YP_529586;
QCD−32g58仮想タンパク質: ZP_01803398;
QCD−32g58仮想タンパク質: ZP_01803228;
は、本発明の第1の態様の範囲から明確に除外される。
www.ch.embnet.org/software/LALIGN_form.html
を用いて、パラメーターとしてグローバルアラインメントオプション、スコアリングマトリックススBLOSUM62、開口ギャップペナルティ−14、拡張ギャップペナルティ−4を用いて測定することができる。
L−アラノイル−D−グルタミン酸エンドペプチダーゼ;D−グルタミル−m−DAPエンドペプチダーゼ;ペプチド間架橋特異的エンドペプチダーゼ;N−アセチル−β−D−グルコサミニダーゼ(=ムラモイルヒドロラーゼ);N−アセチル−β−D−ムラミダーゼ(=リゾチーム);溶菌性トランスグリコシラーゼを含む。
(a)本発明の第1の態様のポリペプチド;
(b)本発明の第2の態様の核酸分子;
(c)本発明の第3態様のベクター;
(d)本発明の第4態様の宿主;及び/又は
(e)本発明の第1の態様のポリペプチドを発現することができるバクテリオファージ;
及び薬学的に許容される担体、賦形剤又は医薬品添加剤を含む、医薬組成物を提供することである。
(a)国際公開公報第2006/111553号(ポリ尿素及び他の多層カプセル材);
(b)国際公開公報第2006/111570号及び欧州特許第1715739号(シクロデキストリンカプセル化);
(c)国際公開公報第2006/100308号及び欧州特許第1742728号(酵母及び他の微生物細胞カプセル化技術);
(d)米国特許第5153182号、欧州特許第1499183号及び国際公開公報第03/092378号;米国特許第6831070号(腸細胞発現による治療遺伝子産物送達);
(e)米国特許第7202236号(放出調節用医薬製剤);
(f)米国特許第5762904号(本発明のリシンを送達するために改変し得る、重合リポソームを用いるワクチンの経口デリバリー);
(g)米国特許第7195906号(本発明のリシンを発現させるために改変し得るビフィドバクテリウム);及び
(h)本明細書に引用された文献;
が含まれ、これらの全ては、本発明の新規な送達方法及び組成物を達成するために、当業者が本発明の開示内容を活用するのを可能にする目的で、参照することにより本明細書に組み入れられている。
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のプロファージ1及び2のリシン;
から選択することができる。
(a)患者中の微生物細胞を殺滅し及び/又はその増殖を阻害/抑制するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージを患者に投与することを含む方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法;
(b)患者において微生物細胞に関連する疾患又は病態を治療又は予防するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若バクテリオファージを患者に投与することを含む方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法;
を提供する。
(a)1つ又はそれ以上の従来の抗生物質治療(β−ラクタム、アミノグリコシド及び/又はキノロン);
(b)1つ又はそれ以上の更なるリシン、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージ;
(c)1つ又はそれ以上の抗生物質、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくは細菌;及び/又は
(d)腸内のクロストリジウム・ディフィシレ細胞の細菌溶菌時に放出される毒素を中和する療法;
と併用して投与してもよい。好適な中和療法は、抗生物質(Babcock et al., 2006, Infect. Immun. 74:6339-6347を参照されたい)及びトレバマー(tolevamer)などの毒素吸収剤(Barker et al., 2006, Aliment. Pharmacol. Ther. 24:1525-1534を参照されたい)を含んでもよい。
(a)クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される、微生物細胞に関連する疾患又は病態の診断薬の製造における、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用;
(b)クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される、微生物細胞に関連する疾患又は病態を診断するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用;
(c)インビトロ及び/又はエクスビボで試料中の微生物細胞の存在を検出するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用;及び
(d)患者中の微生物細胞に関連する疾患又は病態を診断するための、試験すべき患者からの細胞試料をクロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージに接触させ、そして試料中の細胞がそれにより溶解されるかどうかを測定することを含む方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法;
を提供することである。
抗菌薬としての細菌ウイルスの利用で、近年多少のルネサンスを経験している。一部において、これは、薬剤耐性病原体の継続的出現に続く従来型抗生物質の代替を見出す必要性を反映している。最近のレビューはこの可能性を強調しているが、バクテリオファージの使用に内在する限界をも強調している(7、8)。
テンペレート・バクテリオファージΦCD27は、クロストリジウム・ディフィシレ菌株保存株NCTC12727から単離された。他の25のC.ディフィシレ株に対してΦCD27を試験し、そしてタイプ株11204を含む他の4株に対して有効なことが示された。バクテリオファージ・ゲノムDNAを抽出して配列決定し、そしてBLAST検索によりエンドリシン配列が同定された。その配列は、公表されたC.ディフィシレのバクテリオファージ・エンドリシン(ΦCD119、ΦC2、配列決定されたC.ディフィシレCD630におけるプロファージ1及び2)と明瞭なアミノ酸及びヌクレオチド相同性を示した。リシンはpET15bへサブクローニングされ、そして6×Hisタグにより大腸菌に発現された。リシンはニッケルカラムで一部精製され、そしてファージ感受性及び非感受性株の両方を溶解することが、37℃でインキュベーション時の光学密度の減少により証明された。試験した30株のうち、毒性リボタイプ027株を含む全てが溶解することを示した。一連の菌属からの多数の他の細菌は、リシンに対して感受性を示さなかった。しかしながら若干の活性がC.ビフェルメンタンス、C.ソルデリ、セレウス菌、枯草菌に対して認められ、そしてリステリア・イバノビイに対して非常にわずかな活性が認められた。部分精製リシンの比活性は、C.ディフィシレ株によって変動した。従って、本明細書に開示されたリシンは、C.ディフィシレ病原性の治療及び検出に対する新しい強力な武器となる。
溶解物の生産及び活性分析は、記載のように行われた(27)。C.ディフィシレ株NCTC12727(the Health Protection Agency, Colindale, London から入手可能−糞便から単離され、1992年にS. Tabaqchali, St. Bart's Hospital, London により寄託)は、BHI+C(ビタミンK(10μl、0.5容量%/l)、ヘミン(5mg/l)、レザズリン(1mg/l)及びL−システイン(0.5g/l)を補充したBHI(Oxoid) )中、37℃で嫌気的に24時間増殖させた。バクテリオファージ生産をマイトマイシンC(Sigma)により3μg/mlの最終濃度で24時間誘導した。培養液を4℃において4000×gで20分間遠心分離し、上清を0.45μmフィルターユニット(Millipore) を通して濾過し、そして4℃で保存した。150μlの一夜C.ディフィシレBHI+C培養液を加えたBHI軟寒天(0.75%)を重層化したBHIプレート(1.5%寒天)上に、上清の25μl部をスポットし、そして37℃で一夜嫌気的にインキュベートした。培養液(表1を参照)を2重複で試験し、12727上清からの明瞭なプラーク形成を、4株−C.ディフィシレ11204(タイプ株)、11205、11207及び11209で確認した。菌株11204からのプラークは、滅菌パスツールピペットで250μlBHI+C中へ採取し、4℃で一夜インキュベートした。バクテリオファージ−ΦCD27の存在は電子顕微鏡で確認したが、それがカウドウイルス目に属することを示した(28)(図1)。総数で25のC.ディフィシレ株がマイトマイシンCで誘導され、その上清は25株全てに対して交差試験した。ΦCD27は、この方法で発見された唯一のプラーク形成単位であった。C.ディフィシレからのバクテリオファージ発見が稀なことはこれまでの刊行物にも示されており、それには94分離株から2バクテリオファージ産生株(29)又は56分離株から3産生株(30)が見出される。
細胞生存性に対するphiCD27の効果を測定するために、反復分析が前還元(pre-reduced)緩衝液及び培地を用いて嫌気性条件下に設定された。細胞はエンド対数で増殖され、嫌気性条件下で遠心分離により採取し、次いでPBS緩衝液中pH7.3で再懸濁した。PBS中でc.1×108細胞からc.1×103細胞まで10倍希釈を行なった;各分析において細胞数の評価が可能なように、それらの10μl分割量を0時点でBHI寒天上にスポットした。分析は2回ずつとし、100μgの部分精製エンドリシン(E1)か又は等量(50μl)の緩衝液(EB)及び300μlの最終量までの細胞を含有した。連続的な穏やかな振盪による2時間のインキュベーション後、PBS中の10倍連続希釈で30μlの試料を採取した;これらの希釈液の10μl分割量をBHI寒天上にスポットし、各2回ずつのペアの1つから残りの270μl分析量を細胞計数可能なように塗布した。
スプライス重複PCRによるΦCD27Lエンドリシン上への新しい酵素ドメインの設計
リステリア・モノサイトゲネスに対して活性なバクテリオファージΦLM4からのエンドリシンLM−4は、宿主細胞の有効な溶解をもたらすことが示された(英国特許公開公報第2255561(B)号)。エンドリシンは864bpの長さで、pfam2557、VanY、蛋白質の始部のD−アラニル−D−アラニルカルボキシペプチダーゼ及びCOG5632、全配列にわたりN−アセチルムラモイル−L−アラニンアミダーゼ(NCBI Blast)に相同性を示す287アミノ酸のタンパク質を与えた。提案酵素活性ドメイン(EAD)をコード化する配列の前半は、スプライス重複伸長PCRにより、CD27L細胞壁結合ドメイン(CBD、Asn180から最終のArg270)か又は全270アミノ酸酵素の上流に挿入された。LM4酵素ドメインは、LM4のATGのNdeI部位を作製するために、プライマーLM4Nde5’−GGA TGA TTA CAT ATG GCA TTA ACA G[配列番号10]、及び2つのスプライス重複プラマーの1つ:LM4 EAD−CD27L EAD−CBDを与えるために、CD27L酵素の最初の15ヌクレオチドに適合する尾部を有するLM4配列の、ヌクレオチド439〜453、Thr147からAsn151を表わす、LM4−スプライス−CD27LE 5’−TAT ACA TAT TTT CAT GTT TTG TGT CGC AGT[配列番号11];又は、LM4 EAD−CD27L CBDを与えるために、Asn180からArg270のCD27Lの提案C末端結合ドメインに適合する尾部を有するLM4配列のヌクレオチド439〜453、Thr147からAsn151を表わす、LM4−スプライス−CD27L 5’−TTT AAC TCC CTC ATT GTT TTG TGT CGC AGT[配列番号12]、を用いてプラスミドpFI567 (Payne et al., 1996 FEMS Microbiology Letters 136: 19-24)からPCRによって増幅した。同様に、CD27L全配列又はCBDは、ベクター、T7T 5’−GCT AGT TAT TGC TCA GCG G[配列番号13]からのプライマー、及びLM4 EAD配列末端−そこでプライマーの最後の20ntがMet1からのCD27L配列の始めをコード化する、全配列に対する、CD27LEスプライスLM4 5’−ACT GCG ACA CAA AAC ATG AAA ATA TGT ATA ACA GT[配列番号14];及びプライマーの最後の16ntがAsn180からのCD27L配列の提案CBDをコード化する、CBDだけに対するCD27LスプライスLM4 5’− CT GCG ACA CAA AAC AAT GAG GGA GTT AAA C[配列番号15]に適合する尾部を有したスプライシングプライマー、を用いてΦCD27L−pET15bから増幅した。PCRを、元の鋳型に100%適合を与えるスプライシングプライマー部分に適合するように5サイクルのアニーリング温度を用い、次いで20サイクルは全スプライシングプライマーに適合するアニーリング温度にて、メーカー推奨の条件でPhusion (Finnzymes)により実施した。生成物は、SureClean (Bioline) を用いて精製し、50μlの容積に再懸濁した。これらの鋳型を100倍希釈し、そして1μl分割量を、2配列のスプライシングを可能にするアニーリング温度(54℃)で、元の外側プライマー−LM4Nde及びT7T−を用いてPCR反応に使用した。最終生成物をSureCleanで精製し、NdeI及びXhoIで制限し、そしてHis−タグ化LM4−CD27LE及びLM4−CD27Lを生産するために、pET15bにサブクローニングした。次いでこれらのプラスミドは大腸菌に形質転換され、それらの配列が確認された。
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Claims (103)
- クロストリジウム・ディフィシレの細胞に特異的に結合し及び/又はそれを溶解させることができる、配列番号1のアミノ酸配列を含む単離したポリペプチド、又はそのフラグメント、バリアント、誘導体若しくは融合体。
- ポリペプチドが、クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のバクテリオファージΦCD119、バクテリオファージΦC2又はプロファージ1若しくは2のリシンではない、請求項1に記載のポリペプチド。
- 請求項1又は2に記載のポリペプチドであって、そのフラグメント、バリアント、誘導体又は融合体が、配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも60%同一性を示すポリペプチド。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリペプチドであって、そのフラグメント、バリアント、誘導体又は融合体が、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージの天然リシンではないポリペプチド。
- クロストリジウム・ディフィシレの細胞に特異的に結合することができる、請求項1〜4のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- クロストリジウム・ディフィシレの細胞を溶解させることができる、請求項1〜5のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- クロストリジウム・ディフィシレの細胞に特異的に結合し及び/又はそれを溶解させることができる、請求項1〜6のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列から成る、請求項8に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列のフラグメントを含み又はそれから成る、請求項1〜9のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 請求項10に記載の単離したポリペプチドであって、フラグメントが、配列番号1の少なくとも50の隣接アミノ酸、例えば、配列番号1の少なくとも60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260又は265の隣接アミノ酸を含むポリペプチド。
- フラグメントが配列番号1の酵素(細胞溶解)ドメインを含み又はそれから成る、請求項10又は11に記載の単離したポリペプチド。
- フラグメントが配列番号1の細胞壁結合ドメインを含み又はそれから成る、請求項10〜12のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列のバリアント、又はそのフラグメントを含み又はそれから成る、請求項1〜13のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 請求項14に記載の単離したポリペプチドであって、バリアントが、配列番号1のアミノ酸配列、又はそのフラグメントに対して少なくとも60%同一性、より好ましくは該配列に対して少なくとも70%又は80%又は85%又は90%同一性、そして最も好ましくは該アミノ酸配列に対して少なくとも95%、96%、97%、98%又は99%同一性を有するアミノ酸配列を含み又はそれから成るポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列の誘導体、又はそのフラグメント若しくはバリアントを含み又はそれから成る、請求項1〜15のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列の融合体、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体を含み又はそれから成る、請求項1〜16のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1のアミノ酸配列、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体のN−及び/又はC−末端に挿入された1つ又はそれ以上の更なるアミノ酸を含み又はそれから成る、請求項17に記載の単離したポリペプチド。
- 配列番号1の細胞壁結合ドメイン及び配列番号1中のものと異なる酵素(細胞溶解)ドメインを含み又はそれから成る、請求項17又は18に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが、クロストリジウム・ディフィシレの複数株の細胞を溶解させることができる、請求項1〜19のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが、バシラス種(例えば、バシラス・セレウス、枯草菌及び炭疽菌)、他のクロストリジウム種(例えば、クロストリジウム・ソルデリ及びクロストリジウム・ビフェルメンタンス)及びリステリア種(例えば、リステリア・イバノビイ)の細胞から成る群から選択される1つ又はそれ以上の細胞型を溶解させることができる、請求項1〜20のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが、クロストリジウム・レプツム、 クロストリジウム・ネキシル、クロストリジウム・コッコイデス、クロストリジウム・イノクーム、クロストリジウム・ラモスム及び/又はアネロコッカス・ヒドロジェナリスの細胞を溶解しない、請求項1〜21のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドがクロストリジウム・ディフィシレリボタイプ027の細胞を溶解することができる、請求項1〜22のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが、クロストリジウム・ディフィシレリボタイプ027の細胞に対して配列番号1のポリペプチドの少なくとも10%、例えば、少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%又はそれ以上の溶解活性を示す、請求項23に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが、クロストリジウム・ディフィシレリボタイプ027の細胞に対して配列番号1のポリペプチドの少なくとも100%、例えば、少なくとも、120%、130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、250%、300%、500%又はそれ以上の溶解活性を示す、請求項24に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが病原菌の細胞を選択的に溶解することができる、請求項1〜25のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- ポリペプチドが組み換えポリペプチドである、請求項1〜26のいずれか1項に記載の単離したポリペプチド。
- 請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドをコード化する単離した核酸分子。
- 核酸分子が配列番号2の核酸配列を含み又はそれから成る、請求項28に記載の核酸分子。
- 請求項28又は29に記載の核酸分子を含むベクター。
- ベクターが発現ベクターである、請求項30に記載のベクター。
- ベクターがpET15b及びpACYC184から成る群から選択される、請求項30又は31に記載のベクター。
- 請求項28又は29に記載の核酸分子又は請求項30又は31に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 宿主細胞が請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドを発現することができる、請求項33に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞が微生物細胞である、請求項33又は34に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞が細菌細胞である、請求項33〜35のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞が非病原性である、請求項35又は36に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞が、大腸菌、ラクトコッカス種、バクテロイデス種、ラクトバシラス種、エンテロコッカス種及びバシラス種の細胞から成る群から選択される、請求項33〜37のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞が乳酸連鎖球菌細胞である、請求項38に記載の宿主細胞。
- ポリペプチドを発現する条件下で請求項28又は29に記載の核酸分子、又は請求項30〜32のいずれか1項に記載のベクターを含む宿主細胞集団を培養し、そこからポリペプチドを単離することを含む、請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドを生産する方法。
- 以下のもの:
(a)請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチド;
(b)請求項28又は29に記載の核酸分子;
(c)請求項30〜32のいずれか1項に記載のベクター;
(d)請求項33〜39のいずれか1項に記載の宿主;及び/又は
(e)本発明の第1の態様に記載のポリペプチドを発現することができるバクテリオファージ;
及び薬学的に許容される担体、賦形剤又は医薬品添加剤を含む医薬組成物。 - 請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドを含む、請求項41に記載の医薬組成物。
- 経口投与のための、請求項41又は42に記載の医薬組成物。
- ポリペプチドがマイクロカプセル化された、請求項41〜43のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- ポリペプチドを胃腸管に送達することができる、請求項41〜44のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 請求項28又は29に記載の核酸分子及び/又は請求項30〜32のいずれか1項に記載のベクターを含む、請求項41〜45のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 請求項33〜39のいずれか1項に記載の宿主細胞を含む、請求項41〜46のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドを発現するように、そして胃腸管内の所定の場所に到達時に該ポリペプチドを放出するように、遺伝子組み換えした病原性細菌宿主細胞を含む、請求項47に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドを発現することができるバクテリオファージを含む、請求項41〜48のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 組成物が胃腸管内でポリペプチドの持続性又は徐放性放出を可能にする、請求項41〜49のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 医薬に使用するための、請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチド又は請求項41〜50のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 患者中の微生物細胞を殺細胞し及び/又はその増殖を阻害/抑制するための薬剤の製造における、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用であって、微生物細胞が、クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 患者中の微生物細胞を殺細胞し及び/又はその増殖を阻害/抑制に使用するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージであって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される、ポリペプチド又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージ。
- 患者中の微生物細胞に関連する疾患又は病態の治療又は予防のための薬剤製造における、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 患者中の微生物細胞に関連する疾患又は病態の治療又は予防に使用するのための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージであって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される、ポリペプチド又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージ。
- 請求項52〜55のいずれか1項に記載の使用であって、細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択される使用。 - 請求項52〜56のいずれか1項に記載の使用であって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞が、クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項52〜57のいずれか1項に記載の使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項58に記載の使用。
- クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージを患者に投与することを含む、患者中の微生物細胞を殺細胞し及び/又はその増殖を阻害/抑制する方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法。
- クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージを患者に投与することを含む、患者中の微生物細胞に関連する疾患又は病態を治療又は予防する方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法。
- 請求項60又は61に記載の方法であって、細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択される方法。 - 請求項60〜62のいずれか1項に記載の方法であって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項60〜63のいずれか1項に記載の方法。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項64に記載の方法。
- インビトロ及び/又はエクスビボで微生物細胞を殺細胞し及び/又はその増殖を阻害/抑制するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 請求項66に記載の使用であって、細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択される使用。 - 請求項66又は67に記載の使用であって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項66〜68のいずれか1項に記載の使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項69に記載の使用。
- クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージを含む、試料中の微生物細胞の存在を検出するためのキットであって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択されるキット。
- 請求項71に記載のキットであって、細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択されるキット。 - 請求項71又は72に記載のキットであって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択されるキット。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項71〜73のいずれか1項に記載のキット。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項74に記載のキット。
- ポリペプチドが表面に固定化されている、請求項71〜75のいずれか1項に記載のキット。
- 試料が細胞試料である、請求項71〜76のいずれか1項に記載のキット。
- 試料が微生物細胞による汚染の試験をするために表面から採取された拭い液由来である、請求項71〜77のいずれか1項に記載のキット。
- 陰性対照試料を更に含む、請求項71〜78のいずれか1項に記載のキット。
- 陽性対照試料を更に含む、請求項71〜79のいずれか1項に記載のキット。
- クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される、微生物細胞に関連する疾患又は病態の診断薬の製造における、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用。
- クロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される微生物細胞に関連する疾患又は病態診断に使用するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージ。
- インビトロ及び/又はエクスビボで試料中の微生物細胞の存在を検出するための、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージの使用であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 請求項81〜83のいずれか1項に記載の使用であって、細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630(CD630)のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択される使用。 - 請求項81〜84のいずれか1項に記載の使用であって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞壁結合活性及び/又は細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜24のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項81〜85のいずれか1項に記載の使用。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項86に記載の使用。
- クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチド、又はそれを発現することができる核酸分子、ベクター、宿主細胞若しくはバクテリオファージを用いて試験するために患者の細胞試料を接触させ、そして試料中の細胞がそれにより溶解されるかどうかを測定することを含む、患者中の微生物細胞に関連する疾患又は病態を診断する方法であって、微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び該エンドリシンによる溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法。
- 請求項88に記載の方法であって、細胞溶解活性を有するポリペプチドが以下のもの:
(a)バクテリオファージΦCD27のリシン;
(b)バクテリオファージΦCD119のリシン;
(c)バクテリオファージΦC2のリシン;及び
(d)クロストリジウム・ディフィシレ株630のプロファージ1及び2のリシン;
から成る群から選択される方法。 - 請求項88又は89に記載の方法であって、クロストリジウム・ディフィシレのバクテリオファージ由来エンドリシンの細胞溶解活性を有するポリペプチドが請求項1〜27のいずれか1項に記載のポリペプチドであり、そして微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞及び配列番号1のポリペプチドとの接触時に溶解を起こし易い他の細菌細胞から成る群から選択される方法。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ細胞である、請求項88〜90のいずれか1項に記載の方法。
- 微生物細胞がクロストリジウム・ディフィシレ・リボタイプ027細胞である、請求項91に記載の方法。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、単離したポリペプチド。
- 実質的に実施例に関連した本明細書に記載した通りの単離した核酸分子。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りのベクター。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの宿主細胞。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、請求項1〜27のいずれか1項に記載したポリペプチドを製造する方法。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、医薬組成物。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、微生物細胞を殺細胞し及び/又はその増殖を阻害/抑制するためのポリペプチドの使用。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、微生物細胞に関連する疾患又は病態を治療又は予防するための薬剤製造におけるポリペプチドの使用。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、試料中の微生物細胞の存在を検出するためのキット。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、微生物細胞に関連する疾患又は病態の診断薬の製造におけるポリペプチドの使用。
- 実質的に実施例に関連して本明細書に記載した通りの、試料中の微生物細胞の存在を検出するためのポリペプチドの使用。
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