JP2011500810A - 運動を模倣するためのsirt−3関連方法及び組成物 - Google Patents
運動を模倣するためのsirt−3関連方法及び組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011500810A JP2011500810A JP2010531037A JP2010531037A JP2011500810A JP 2011500810 A JP2011500810 A JP 2011500810A JP 2010531037 A JP2010531037 A JP 2010531037A JP 2010531037 A JP2010531037 A JP 2010531037A JP 2011500810 A JP2011500810 A JP 2011500810A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sirt3
- muscle
- cell
- cells
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/50—Hydrolases (3) acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5), e.g. asparaginase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
- C12Y305/01098—Histone deacetylase (3.5.1.98), i.e. sirtuin deacetylase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5061—Muscle cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Obesity (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
Abstract
Description
本出願は、引用をもってその全文をここに援用することとする、2007年10月23日出願の標題「運動を模倣するためのSIRT-3関連方法及び組成物」の米国仮出願番号60/981,960号に基づく米国特許法第119条(e)による優先権を主張するものである。
本発明は合衆国国立衛生研究所により付与される助成金RO1GM068072, RO1AG028730 及び PO1AG027916の下で政府支援を受けてなされた。 本政府は本発明に特定の権利を有するものである。
本発明はSIRT3活性を修飾することによりカロリー制限を模倣し、代謝を増加させる方法に関する。
サーチュインはNAD+
を共基質として用いる脱アセチル化酵素及びモノ-ADPリボシルトランスフェラーゼの保存された一ファミリーである (Guarente and Picard, 2005)。クラスI及びII HDACに対して実質的に何の配列相同性も持たない(Denu, 2005; Frye, 2000)、これらの珍しい酵素は、細胞生存及び生物長寿の鍵となる調節物質として出現した (Guarente and Picard, 2005)。サーチュイン・ファミリーの始祖メンバーであるサッカロミセス-セレビジエ(原語:Saccharomyces cerevisiae )Sir2は、中度のストレス及びカロリー制限による寿命伸長を媒介する NAD+-依存的ヒストン脱アセチル化酵素である (CR) (Imai et al., 2000; Lin et
al., 2000; Rogina and Helfand, 2004; Smith et al., 2000; Tanny et al., 1999)。哺乳動物は七種類のサーチュイン、SIRT1-7を有する。SIRT1は核内脱アセチル化酵素であり、細胞生存、糖恒常性、及び脂肪代謝を含む多様な機能を調節する (Guarente, 2005)。三種類のミトコンドリア内サーチュインSIRT3-5がある。 SIRT3 及びSIRT4 は最近、それぞれアセチル-CoA シンセターゼ 2 (AceCS2) 及びグルタミン酸デヒドロゲナーゼを調節することが示されている(Haigis et al., 2006; Hallows et al., 2006; Schwer et al., 2002)が、それらの生物学的機能については他には何も知られていない。
本発明の数局面は、SIRT3発現及び活性の修飾に関する。SIRT3が、代謝上活性な組織では高レベル発現していることをここで実証する。SIRT3の修飾は、カロリー制限又は運動の模倣、ミトコンドリア生合成又は代謝の増加、糖取り込みに対する細胞の感作、脂肪酸酸化の増加、及び活性酸素種の減少を含め、筋細胞にとって多様な生物学的用途を有する。加えて、SIRT3は遺伝毒性ストレス中の細胞生存促進に関与していることをここで実証する。このように、SIRT3レベルの修飾は細胞生存を媒介する際にも用途を有する。
更に本方法には、当該作用物質が、筋細胞内でSIRT3及びSIRT1のタンパク質又は活性レベルを増加させるかどうかを判定するステップを含めることができる。いくつかの実施態様では、前記細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、前記細胞はヒト細胞などの哺乳動物細胞である。
本発明は、少なくとも部分的には、SIRT3が代謝上活性な組織で高レベルに発現し、絶食、カロリー制限及び運動によりSIRT3発現が誘導されるという発見に基づくものである。これらの結果は、SIRT3が、エネルギー恒常性の調節や生理的及び栄養的キューへの応答に関与していることを示している。SIRT3の修飾は、カロリー制限又は運動の効果の模倣、そして代謝の向上を含め、幅広い生理的用途を有する。
SIRT3の増加が有用であろう他の実施態様には、手術又は事故後などの筋肉の修復、筋肉量の増加;及び運動能力の向上がある。
AMP 活性化タンパク質キナーゼ(AMPK)を活性化させる。
上記の方法で有用な作用物質には、SIRT3タンパク質又はその生物学的に有効なホモログ、あるいは、SIRT3タンパク質又はその生物学的に有効なホモログをコードする核酸、が含まれる。いくつかの実施態様では、「生物学的に有効なホモログ」とは、SIRT3脱アセチル化酵素及び/又はSIRT3 ADPリボシルトランスフェラーゼ活性を有するホモログである。例には、脱アセチル化酵素及び/又はADPリボシルトランスフェラーゼ活性を有するヒトSIRT3のフラグメントがある。
上記の方法で有用な他の作用物質には、そのいくつかをここで解説すると共に、いくつかの実施態様ではSIRT1の活性化剤でもあるような低分子が含まれる。
SIRT3 ia NM_012239 NP_036371
ib NM_001017524 NP_001017524
SIRT4 NM_012240 NP_036372
本発明の方法において用いられる薬理学的作用物質は、好ましくは無菌であり、対象への投与に適した単位重量又は体積で所望の応答を生じる、有効量の一種又はそれ以上の作用物質を含有するとよい。対象に投与する薬理学的作用物質の用量は、様々なパラメータで、特に、用いられる投与形態及び対象の状態に従って選ぶことができる。他の因子には、所望の処置期間が含まれる。対象での応答が、適用された当初の用量では不充分である場合、対象の許容が許す程度でより多量を(又は効果的には、違う、より局所的な送達経路により多量を)利用してもよい。薬理学的作用物質の投与量は、個々の担当医又は獣医により、特にいずれかの合併症の場合には、調節されよう。治療上有効量は、典型的には、0.01 mg/kg 乃至約1000 mg/kg、好ましくは約0.1 mg/kg 乃至約 500 mg/kg、そして最も好ましくは約0.2 mg/kg 乃至約250 mg/kgを、一日当り一回又はそれ以上の回数で一日又はそれ以上の日数、の範囲で様々であろう。
and Wilkins, Baltimore MD, 2001) が、薬学的担体に入れた多様な薬学的製剤及び調合物の送達のための投与形態及び処方を提供している。本発明の薬理学的作用物質の投与にとって有用である他のプロトコルは当業者に公知であり、その中で用量、投与スケジュール、投与部位、投与形態等はここで紹介するものから変更してもよい。
1981, "Soluble Polymer-Enzyme Adducts" In: Enzymes as Drugs, Hocenberg and
Roberts, eds., Wiley-Interscience,
New York, NY, pp. 367-383;
Newmark, et al., 1982, J. Appl. Biochem. 4:185-189。用いることができると思われる他のポリマはポリ-1,3-ジオキソラン及びポリ-1,3,6-チオキソカンである。上述したような薬学的利用に好適なのはポリエチレングリコール部分である。
Research, 7:565-569; Adjei et al., 1990, International Journal of
Pharmaceutics, 63:135−144 (酢酸ロイプロリド); Braquet
et al., 1989, Journal of Cardiovascular Pharmacology, 13(suppl. 5):143−146(エンドセリン-1); Hubbard et al., 1989, Annals of Internal
Medicine, Vol. III, pp. 206−212 (a1- アンチトリプシン); Smith et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1145−1146 (a-1-プロテナーゼ); Oswein et al., 1990, "Aerosolization of Proteins",
Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado,
March, (組換えヒト成長ホルモン); Debs et al., 1988, J. Immunol. 140:3482−3488 (インターフェロン-γ及び腫瘍壊死因子アルファ) 及び Platz et al.の米国特許第5,284,656 号(顆粒球コロニー刺激因子)がある。全身効果に向けて薬物を肺送達するための方法及び組成物は、Wang et al.の1995年9月19日発行の米国特許第5,451,569に解説されている。
249:1527-1533, 1990を参照されたい。
Hubell in Macromolecules, (1993) 26:581-587に解説された生侵食性ヒドロゲルがある。これらには、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ(メチルメタクリレート)、ポリ(エチルメタクリレート)、ポリ(ブチルメタクリレート)、ポリ(イソブチルメタクリレート)、ポリ(ヘキシルメタクリレート)、ポリ(イソデシルメタクリレート)、ポリ(ラウリルメタクリレート)、ポリ(フェニルメタクリレート)、ポリ(メチルアクリレート)、ポリ(イソプロピルアクリレート)、ポリ(イソブチルアクリレート)、及びポリ(オクタデシルアクリレート)がある。
実施例1: SIRT3はAMPK及びPGC-1アルファを通じて骨格筋代謝を調節する
SIRT3はサーチュイン・ファミリーのNAD+依存的脱アセチル化酵素の一員であり、主にミトコンドリアに局在し、褐色脂肪組織、心臓、いくつかの骨格筋、及び代謝上活性な組織で濃縮している。我々はここでSIRT3は、栄養的及び生理的シグナルに劇的に応答して筋エネルギー恒常性に影響を与えることを報告する。我々は、マウスSIRT3が、速筋のタイプII長指伸筋及び腓腹筋に比較して、遅筋の酸性タイプIヒラメ筋でより高度に発現していることを示す。マウスにおけるSIRT3の筋内タンパク質レベルはカロリー制限、絶食や運動によって増加する。反対に、SIRT3発現は、三ヶ月間の高脂肪食給餌に応答して抑制される。C2C12筋細胞内でSIRT3を強制的に発現させると pgc-1a 及びucp3 発現が上昇し、細胞内過酸化水素産生が減少し、ミトコンドリア含有量が増加する。更に、SIRT3が発現すると細胞内ATP含有量が減少し、AMPK活性化が増加し、糖取り込み及び脂肪酸酸化などの下流のプロセスが刺激されることから、AMPK活性化が筋代謝に対するSIRT3の作用を媒介している可能性が示唆される。
(そしてSIRT4も) によるアポトーシス遮断を要する (12)ことを示した。更に、他の以前の研究では、我々は、マウス褐色脂肪組織においてSIRT3のRNAレベルは寒冷暴露及びカロリー制限によって増加すること、そして褐色前駆脂肪細胞においてSIRT3が構成的に発現するとPGC-1a、UCP1、及び他のミトコンドリア関連遺伝子の発現が刺激されることを示した。機能的には、褐色脂肪細胞におけるSIRT3の発現は細胞呼吸を促進し、ミトコンドリア膜電位及び活性酸素種(ROS) 産生の両方を減少させる(7)。
動物及び食餌
C57BL/6オスマウスをこの研究に用いた。カロリー制限実験のために、C57BL/6 オスマウスを一匹ずつケージに入れた。8週齢のときにコントロール・マウスには適宜、NIH-31標準食(ウィスコンシン州マジソン、Harlan Teklad社)を与え、食餌消費量を毎日、測定した。カロリー制限マウスにはNIH-31/NIA強化食(ウィスコンシン州マジソン、Harlan Teklad社)を、1週目、2週目、そして3週目のそれぞれにコントロール・マウスの消費した量の90%、70%、及び60%を毎日の食事配給量として与えた。その後、毎日の食事配給量はカロリー制限マウスの不断給餌の60%で安定させた。12ヵ月後、マウスを解剖して分析用に組織を採集した。絶食実験では、24時間の間、食餌を6pmで取り除いた。高脂肪食給餌実験では、8週齢のマウスにコントロール又は35%脂肪色(ニュージャージー州フレンチタウン、Bio-Serv社)を3ヶ月間、与えた。コントロール色を与えられたマウスからも多様な組織を採集して、SIRT3遺伝子発現をウェスタン・ブロット分析により研究の終了時に調べた。運動研究については(29)、7週齢のオス及びメスのFVB/NJ マウスを車輪付きケージで6週間、訓練させ、PicoLab マウス食20 (ミズーリ州セントルイス、LabDiet/Purina社)を与えた。簡単に説明すると、げっ歯類走行用車輪付き又は無しの個別のケージ(ニューヨーク州ロチェスター、Nalgene社)にマウスを収容し、動物は6週間の訓練期間中、自発的に運動することができた。6週の終わりにマウスを安楽死させ、三頭筋を取り出した後、SIRT3、CREB、ホスホ-CREB/Ser122、及びPGC-1a タンパク質発現について分析した(7)。前に解説された通りにクエン酸シンターゼ活性を運動後の三頭筋試料からのミトコンドリア・マーカーとして測定した(29)。
遺伝子とラッピングによりSirt3遺伝子を標的としたマウスをテキサス・インスティテュート・フォー・ゲノミック・メディシン(米国テキサス州、ヒューストン)から得た。簡単に説明すると、前に解説された通りにSirt3遺伝子の一つのアレルを機能的に失活させたレトロウィルス・プロモータ・トラップを持つ胚性幹(ES)細胞 (Omnibank no. OST341297) を作製することにより、作出された(30)。配列解析ではレトロウィルスの挿入はコーディング・エキソン1の前のイントロンに起きていることが示された(受託: NM_022433)。標的決定された129/SvEvBrd胚性幹細胞をC57BL/6 アルビノ胚細胞に注射した。次にキメラ (129/SvEvBrd) を C57BL/6 アルビノと交配して異型接合子を作製した。次に異型接合子を交配させ、その仔を、トラッピング・カセット挿入部位 TG0003-5'(ATCTCGCAGATAGGCTATCAGC)
(SEQ ID NO:1) 及びTG0003-3' (AACCACGTAACCTTACCCAAGG)
(SEQ ID NO:2)をフランクする二つのプライマーや、三番目のプライマーとして、とラッピング・カセットの5'側末端に位置する逆プライマーである LTR rev (ATAAACCCTCTTGCAGTTGCATC) (SEQ ID NO:3)を含有するPCRを用いて遺伝子型決定した。プライマー・ペア TG0003-5’ 及びTG0003-3’ は336bp の断片を野生型アレルから増幅するが、プライマー・ペアTG0003-5’ 及びLTR rev は160bp の断片をノックアウト・アレルから増幅する。
C2C12 筋細胞及びBOSC23 細胞を、10%ウシ胎児血清を含有するダルベッコの改良イーグル培地で培養した。C2C12 分化については、コンフルエントになった時点で、2%のウシ血清(ユタ州ローガン、Hyclone社製)を加えたダルベッコのイーグル改良培地で3日間、インキュベートした。選択された研究でのAMPKの阻害は、化合物C(6-[4-(2-ピペリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)]-3-ピリジン-4-イル-ピラゾロ[1,5-a]-ピリミジン、Merck社) (31) を培地に3時間、最終濃度40μMになるように加えることで達成された。ウェスタン・ブロット分析に用いられた抗体には以下のものが含まれた:組織分布及び高脂肪食分析用にはC末端を狙った抗SIRT3血清抗体 (DLMQRERGKLDGQDR (SEQ ID NO:4)、テキサス州サンアントニオ、Genemed Synthesis社);抗SIRT3 血清も当該タンパク質のC末端領域に対して生じさせた(ペンシルヴァニア州デンヴァー、Covance社)、これはFred Alt 氏のご厚意により提供されたSIRT3ノックアウト・マウス由来の脳、心臓、及び骨格筋組織を用いて特異性についてバリデートされた後(32)、切除試料の分析に用いられた;抗ホスホCREB/Ser133 (マサチューセッツ州ダンヴァー、Cell Signaling社);抗CREB(マサチューセッツ州ダンヴァー、Cell Signaling社);抗GLUT4(ボストン医療大学のPaul F. Pilch氏のご厚意により供与;抗ホスホ-AMPK(マサチューセッツ州ダンヴァー、Cell Signaling社);AMPK(マサチューセッツ州ダンヴァー、Cell Signaling社);抗ホスホ-アセチル CoA カルボキシラーゼ(ヴァージニア州シャルロッツヴィル、UpState Inc社);抗-PGC-1a (カリフォルニア州サンディエゴ、Calbiochem社);チトクロームC酸化酵素サブユニット IV (COX IV) (カリフォルニア州カールスバッド、Invitrogen社);β-アクチン抗体(カリフォルニア州サンタクルズ、Santa Cruz Biotechnology社);及びα-チューブリン(マサチューセッツ州ケンブリッジ、Abcam社)。
pBabe-puroによるレトロウィルス産生のためには、ベクターのみ(ベクター)、野生型マウスSIRT3 (SIRT3)、ADP-リボシルトランスフェラーゼ活性にG11A変異を持つマウスSIRT3、又は、その脱アセチル化酵素活性にN87A変異を持つマウスSIRT3、を含有するコンストラクトを予めデザインし、我々の研究で特徴付けた(7)。そのウィルス粒子を用いてC2C12 筋細胞を感染させた。次にこの細胞を2 μg/ml ピューロマイシンで選択にかけた。
実験は以前に解説された通りに行われた(7)。
総DNAをC2C12 細胞から塩析法を用いて単離した(33)。公開された手法と同様に、10ナノグラムの総DNAをQ-PCR検定で用いた(34)。マウスmtDNA
(GI:34538597) のND1領域を正方向プライマー5’ TCTAATCGCCATAGCCTTCC3’ (SEQ ID
NO:5)及び逆方向プライマー5’GGTTGTTAAAGGGCGTATTGG’
(SEQ ID NO:6)を用いて増幅し、158bpの断片を得た;マウスベータ2マイクログロブリン (B2M) 遺伝子 (GI:149338249) の断片を正方向プライマー 5’
TGATGGTGAGGTCTGGAATG3’ (SEQ ID NO:7) 及び逆方向プライマー5’ GCAGGTTCAAATGAATCTTCAG3’ (SEQ ID NO:8) を用いて増幅し、108bpの断片を得た。mtDNA 含有量(mtDNA/B2M比)を、式: mtDNA 含有量 =1/2DCt, (但し式中、DCt= CtmtDNA-CtB2M)を用いて計算した。
ベクター又はSIRT3 を含有するC2C12細胞を2% ウシ血清と一緒に3日間、分化させた後、0.5%アルブミンを含有するDMEM中で一晩、インキュベートした。翌日、細胞を Krebs Ringer Hepes 緩衝液と一緒に100nM のインシュリンの非存在下又は存在下で20分間、インキュベートした。100μM 2-デオキシ-D-グルコース(plus 0.5μCi 2-デオキシ-D-[3H]グルコース)を添加することで糖輸送検定を開始した。細胞を氷温のKrebs Ringer Hepes緩衝液で洗浄することにより、糖取り込みを終了させた。細胞を溶解緩衝液 (0.1% SDS 及び200mM NaOH) で溶解させ、アリクォートを採取して放射活性及びタンパク質含有量を判定した。糖取り込みを総タンパク質含有量に対して正規化した。
ベクター又はSIRT3 を含有するC2C12細胞を2%ウマ血清と一緒に3日間、25-cm2 フラスコ内でインキュベートした。最終日に筋細胞を糖(25mM)、ロイシン (1mM)、及びパルミチン酸 (0.4mM)の存在下で培養した;放射標識トレーサー(200nCi/ml) [1-14C]糖、[1-14C]ロイシン、又は [1-14C]パルミチン酸(ニュージャージー州ピスカタウェイ、Amersham社)をそれぞれ糖、ロイシン、及びパルミチン酸の酸化の判定のための別々の実験で添加した。フラスコを密封し、一片のWhatmanフィルター紙を容れた中央のウェルを取り付け、キャップに接着させた。6時間後、14CO2 を培養培地から2 ml の6Nの HClによる酸性化で放出させ、フィルター紙を250μlの2N NaOHで飽和させた。ペーパー・フィルターに吸収された14CO2
をシンチレーション計数により測定した。
ベクター又はSIRT3 を含有するC2C12細胞2%のウマ血清と一緒に3日間、分化させた。細胞をPBS中に採集し、3回の凍結−乾燥サイクルを行って細胞を溶解させた。総過酸化水素(H2O2)レベルをAmplex レッド過酸化水素/ペルオキシダーゼ検定キットをメーカのプロトコル(カリフォルニア州カールスバッド、Invitrogen社)に従って用いて検出した。
蛍光性プローブ5,5’,6,6’-テトラクロロ-1,1’,3,3’-テトラエチルベンズイミダゾールカルボシアニドイオダイド (JC-1; Invitrogen社) を用いて細胞 ΔYmを判定した。簡単に説明すると、C2C12
細胞 (1´106) をトリプシン処理で採集した。PBSでの洗浄後、細胞を37℃の10μg/ml JC-1 と一緒に15分間、インキュベートした。次に細胞をPBSで洗浄し、100 μl の細胞懸濁液を黒色96-ウェル・プレートのウェルに移した。赤色の蛍光(励起550nm、放出590nm)及び緑色の蛍光(励起 485nm、放出530nm)を蛍光計 (SpectraMAX GEMINIXS、Molecular Devices社)を用いて測定した。データを相対的赤色/緑色(凝集物/単量体)蛍光強度値の比として表した。
ベクター又はSIRT3のいずれかを発現している分化C2C12細胞をPBSで一回、すすぎ、2.5% (w/v)トリクロ酢酸 (TCA)溶液に5分間、溶解させた。10倍の体積の250mM Tris 塩基 (酢酸を用いてpH 7.75)をTCA細胞スラリ溶液に加えて酸を中和させた。Enliten ATP 検定系生物発光検出キット(ウィスコンシン州マジソン、Promega社)をメーカの指示に従って用いて総細胞内ATPレベルを検出した。
C2C12細胞を分化させ、細胞を14C グルコース (1μCi/ml) で5μg/ml のインシュリンの存在下で6時間、処置した。グリコーゲン産生を判定するために、細胞ペレットを1M KOHで消化した。飽和Na2SO4、エタノール及びグリコーゲンを加えた。20,000g で10分間、遠心分離した後、ペレットを70% エタノールで洗浄し、水に溶解させ、シンチレーション・カウンタで計数した。培地に放出される乳酸をイオン交換カラムで測定した。簡単に説明すると、採集された細胞培地を、200-400番メッシュの AG1-X8樹脂(カリフォルニア州ハーキュリース、Bio-Rad社)から調製されたカラムに加えた。5mM の糖による複数回の洗浄後、14C 乳酸を1μM 乳酸及び0.5M ギ酸溶液を用いて溶出させ、シンチレーション・カウンタで計数した。
我々はまず、多様なマウス組織中のSIRT3のタンパク質発現パターンを、マウスSIRT3の最後の15アミノ酸C末端残基に対するウサギホストポリクローナル抗体を用いて調べた。このSIRT3タンパク質組織分布パターンは SIRT3 mRNAのそれを反映していた (7)。SIRT3は興味深い分布パターンを示し、例えば褐色脂肪、肝臓、脳、特定の筋肉及び腎臓など、鍵となる代謝上活性な組織中で高度に発現していた。興味深いことに、SIRT3 タンパク質レベルは速筋(長指伸筋及び腓腹筋)に比較して遅筋ヒラメ筋の方が高かった。ヒラメ筋は主に、脂肪酸酸化代謝に依存するタイプI線維型から成る(35)ため、SIRT3 は筋肉内の酸化的代謝において重要な役割を有するのであろう。我々は以前に、カロリー制限は褐色脂肪内のSIRT3の発現を刺激することを示した(7)。この研究で我々は、マウスを12ヶ月間、不断給餌の60%にカロリー制限すると、SIRT3たんぱく質量は腓腹筋及び四頭筋内で増加したことを見出した。加えて、24時間の絶食でも、長指伸筋中のSIRT3発現が誘導された。反対に、3ヶ月間の高脂肪食給餌後には、後肢内のSIRT3タンパク質レベルは著しく減少していた。
(データは図示せず)。最後に、より明るい露出でより近寄って分析すると、心臓ライセート内のSIRT3のタンパク質バンディング・パターンは、三頭筋中のそれとは著しく異なっており(図1A)、これらの二種の組織内でSIRT3の代替的翻訳後プロセッシングが存在する可能性が示唆され、組織−及び/又は代謝特異的脈絡におけるSIRT3の異なる生物学的役割に寄与している可能性が示唆された。
(7)。我々は既にSIRT3がPGC-1α及びUCP1の発現を増加させ得ることを褐色脂肪細胞で示しているため、我々はまず、SIRT3がC2C12筋細胞で同様な効果を有するかどうかを判定した。我々は、C2C12細胞でSIRT3の発現が増加すると、pgc-1a 及びucp3の両方のレベルが上昇することを見出した。筋肉におけるUCP3発現の増加は、ROS損傷に対する防御を提供し、脂肪酸酸化を促すよう働く可能性があることに注目することが重要である(37)。驚くべきことに、糖尿病予備軍及び糖尿病の個体ではUCP3の骨格筋発現が減少している(38)。ucp3 発現の上昇と合致して、我々は、SIRT3発現C2C12細胞におけるミトコンドリア膜電位の減少と、細胞内過酸化素レベル減少を観察した。PGC-1a の増加は骨格筋におけるミトコンドリア生合成増加を引き起こすことが示されている(15)。従って、我々はミトコンドリアDNA含有量を定量的PCR解析を用いて測定し、分化C2C12細胞でSIRT3がミトコンドリアDNA含有量増加を引き起こすことを見出した。加えて、チトクロームCオキシダーゼ・サブユニットIV(COX IV)などのミトコンドリアタンパク質の発現も、SIRT3過剰発現C2C12細胞で増加していた。
μM 化合物Cで処置した(31)。化合物Cによる3時間の処置により、ベクター−及びSIRT3−トランスフェクト細胞の両方でAMPKリン酸化が減少した。驚くべきことに、GLUT4タンパク質発現を増加させるSIRT3の能力が化合物Cによって完全に損なわれ、SIRT3によるGLUT4発現の増加にはAMPK活性が必要であることが明確に実証された。
ヘテロ接合型又はホモ接合型欠損マウスの腓腹筋で減少していた。まとめると、これらのデータは、SIRT3はカロリー摂取の減少により誘導されること、そしてSIRT3の誘導は、糖取り込み及びβ-酸化をAMPKの活性化を通じて促進することを強く立証している。
要約すると、我々は、SIRT3はマウス組織中で示差的に発現し、最も大きな発現はヒラメ筋などの代謝上活性な組織中で観察されることを見出したのである。筋内のSIRT3発現は高脂肪食給餌で減少するが、他方、短期間(24時間の絶食)又は長期間の栄養枯渇(12ヶ月間のカロリー制限)及び運動訓練で増加する。C2C12細胞内のSIRT3発現増加は、細胞内ATPレベルを減少させてAMPKを活性化し、ひいてはPGC-1a 及び UCP3 発現の誘導、糖取り込みの速度上昇、並びに脂肪酸酸化(図2)を含め、観察される代謝上及び遺伝子発現上の効果を媒介することが示されている。このように、我々の発見は、骨格筋SIRT3レベルは生理的及び栄養的変化に応答して変化することで筋肉エネルギー恒常性を調節することを示すものである。我々のデータはまた、SIRT3が生理的変化や食餌制限及び運動の健康上の利点を媒介していることとも合致する。
48)が、AICARによるAMPKの活性化の結果、グリコーゲン含有量が増加したことを示す報告もある(49,
50)。加えて、AMPK活性を増加させたAMPK変異体も、トランスジェニック・マウス(51, 52) 又はヒトの患者
(53)の骨格筋中でグリコーゲン含有量の増加を引き起こしていた。心臓内でこのようなAMPK活性化変異体の一つをトランスジェニック発現させたある研究では、糖取り込み、脂肪酸酸化、及びグリコーゲン合成(54)の増加があり、我々の結果と全く同様だった。従って、AMPKはin vivoでグリコーゲン・シンターゼをリン酸化及び阻害すると思われるが、その効果は糖取り込みの増加と、それに伴うグリコーゲン・シンターゼをアロステリックに活性化するグルコース-6-リン酸の増加とにより無効にされるのかも知れない(55)。加えて、グリコーゲン・シンターゼ活性もまた、他のキナーゼ及びホスファターゼにより調節される。
62, 63)。次々と現れる証拠が、ミトコンドリア機能不全が細胞内酸化的代謝機能不全とインシュリン耐性との間の鍵となる媒介物質でありタイプ2糖尿病へとつながるという仮説を裏付けている(64)。最近の研究では、若年及び老年の患者において筋肉内ミトコンドリア酸化的リン酸化の減少がインシュリン耐性に関係付けられている(65, 66)。ミトコンドリア内ROS産生の増加は高脂肪食、インシュリン耐性、及び肥満に関係付けられている(67)。更に、インシュリン耐性の対象はコントロールに比較して低い割合の酸化的タイプI筋線維を有することが見出されており、酸化的代謝の低下が示されている。それらはまた、PGC-1a、PGC-1b、及び酸化的リン酸化に関与する関連遺伝子の発現を減少させていた(68, 69)。SIRT3は酸化的代謝に関与する遺伝子の発現を増加させ、活性酸素種形成を減少させ、脂質酸化的代謝を増加させ、そしてインシュリン依存的及びインシュリン非依存的糖取り込みの両者を増加させることができるため、SIRT3の活性化物質は代謝障害、肥満、及びタイプ2糖尿病の将来の処置にとって重要な治療経路となるであろう。最後に、PGC-1aが神経変性疾患の防止にとって重要であるという最近の発見(70, 71) により、SIRT3活性化も神経変性型障害の中で治療的価値を持つであろうという可能性が持ち上がった。
用いられた省略は:ACS 2、アセチルCoAシンセターゼ 2;AMPK, AMP活性化タンパク質キナーゼ;COX IV、チトクロームC酸化酵素サブユニットIV;GLUT4、糖トランスポーター4;PGC-1a、PPARg コアクチベーター1a;ROS、活性酸素種;SIRT3、サーチュイン3;UCP1、非共役タンパク質1;UCP3、非共役タンパク質3。
1. Haigis,
M. C., and Guarente, L. P. (2006) Mammalian sirtuins--emerging roles in
physiology, aging, and calorie restriction. Genes Dev 20, 2913-2921
2. Michan,
S., and Sinclair, D. (2007) Sirtuins in mammals: insights into their biological
function. Biochem J 404, 1-13
3. Michishita,
E., Park, J. Y., Burneskis, J. M., Barrett, J. C., and Horikawa, I. (2005) Evolutionarily conserved and nonconserved
cellular localizations and functions of human SIRT proteins. Mol Biol Cell
16, 4623-4635
4. North,
B. J., and Verdin, E. (2004) Sirtuins: Sir2-related NAD-dependent protein
deacetylases. Genome Biol 5, 224
5. Onyango,
P., Celic, I., McCaffery, J. M., Boeke, J. D.,
and Feinberg, A. P. (2002) SIRT3, a human SIR2 homologue, is an NAD-dependent
deacetylase localized to mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A 99,
13653-13658
6. Schwer,
B., North, B. J., Frye, R. A., Ott, M., and Verdin, E. (2002) The human silent
information regulator (Sir)2 homologue hSIRT3 is a mitochondrial nicotinamide
adenine dinucleotide-dependent deacetylase. J Cell Biol 158, 647-657
7. Shi,
T., Wang, F., Stieren, E., and Tong, Q. (2005) SIRT3, a mitochondrial sirtuin
deacetylase, regulates mitochondrial function and thermogenesis in brown
adipocytes. J Biol Chem 280, 13560-13567
8. Lombard,
D. B., Alt, F. W., Cheng, H.-L., Bunkenborg, J., Streeper, R. S., Mostoslavsky,
R., Kim, J., Yancopoulos, G., Valenzuela, D., Murphy, A., Yang, Y., Chen, Y.,
Hirschey, M. D., Bronson, R. T., Haigis, M., Guarente, L. P., Farese, R. V.,
Jr., Weissman, S., Verdin, E., and Schwer, B. (2007) Mammalian Sir2 Homolog
SIRT3 Regulates Global Mitochondrial Lysine acetylation
10.1128/MCB.01636-07. Mol. Cell.
Biol. 27, 8807-8814
9. Scher,
M. B., Vaquero, A., and Reinberg, D. (2007) SirT3 is a nuclear NAD+-dependent histone
deacetylase that translocates to the mitochondria upon cellular stress
10.1101/gad.1527307. Genes Dev.
21, 920-928
10. Rose,
G., Dato, S., Altomare, K., Bellizzi, D., Garasto, S., Greco, V., Passarino,
G., Feraco, E., Mari, V., Barbi, C., BonaFe, M., Franceschi, C., Tan, Q.,
Boiko, S., Yashin, A. I., and De Benedictis, G. (2003) Variability of the SIRT3
gene, human silent information regulator Sir2 homologue, and survivorship in
the elderly. Exp Gerontol 38, 1065-1070
11. Ashraf,
N., Zino, S., Macintyre, A., Kingsmore, D., Payne, A. P., George, W. D., and
Shiels, P. G. (2006) Altered sirtuin expression is associated with
node-positive breast cancer. Br J Cancer 95, 1056-1061
12. Yang,
H., Yang, T., Baur, J. A., Perez, E., Matsui, T., Carmona, J. J., Lamming, D.
W., Souza-Pinto, N. C., Bohr, V. A., Rosenzweig, A., de Cabo, R., Sauve, A. A.,
and Sinclair, D. A. (2007) Nutrient-Sensitive Mitochondrial NAD(+) Levels
Dictate Cell Survival. Cell 130, 1095-1107
13. Finck,
B. N., and Kelly, D. P. (2006) PGC-1 coactivators: inducible regulators of
energy metabolism in health and disease
10.1172/JCI27794. J. Clin.
Invest. 116, 615-622
14. Handschin,
C., and Spiegelman, B. M. (2006) Peroxisome Proliferator-Activated Receptor
{gamma} Coactivator 1 Coactivators, Energy Homeostasis, and Metabolism
10.1210/er.2006-0037. Endocr Rev,
er.2006-0037
15. Wu,
Z., Puigserver, P., Andersson, U., Zhang, C., Adelmant, G., Mootha, V., Troy,
A., Cinti, S., Lowell, B., Scarpulla, R. C., and Spiegelman, B. M. (1999)
Mechanisms controlling mitochondrial biogenesis and respiration through the
thermogenic coactivator PGC-1. Cell 98, 115-124
16. Lin,
J., Wu, H., Tarr, P. T., Zhang, C. Y., Wu, Z., Boss, O., Michael, L. F.,
Puigserver, P., Isotani, E., Olson, E. N., Lowell, B. B., Bassel-Duby, R., and
Spiegelman, B. M. (2002) Transcriptional co-activator PGC-1 alpha drives the
formation of slow-twitch muscle fibres. Nature 418, 797-801
17. Smith,
A. G., and Muscat,
G. E. (2005) Skeletal muscle and nuclear hormone receptors: implications for
cardiovascular and metabolic disease. Int J Biochem Cell Biol 37,
2047-2063
18. Yu,
C., Chen, Y., Cline, G. W., Zhang, D., Zong, H., Wang, Y., Bergeron, R., Kim,
J. K., Cushman, S. W., Cooney, G. J., Atcheson, B., White, M. F., Kraegen, E.
W., and Shulman, G. I. (2002) Mechanism by Which Fatty Acids Inhibit Insulin
Activation of Insulin Receptor Substrate-1 (IRS-1)-associated
Phosphatidylinositol 3-Kinase Activity in Muscle
10.1074/jbc.M200958200. J. Biol.
Chem. 277, 50230-50236
19. Kahn,
B. B., Alquier, T., Carling, D., and Hardie, D. G. (2005) AMP-activated protein
kinase: ancient energy gauge provides clues to modern understanding of
metabolism. Cell Metab 1, 15-25
20. Hawley,
S. A., Boudeau, J., Reid, J. L., Mustard, K. J., Udd, L., Makela, T. P.,
Alessi, D. R., and Hardie, D. G. (2003) Complexes between the LKB1 tumor
suppressor, STRADalpha/beta and MO25alpha/beta are upstream kinases in the
AMP-activated protein kinase cascade. J Biol 2, 28
21. Woods,
A., Johnstone, S. R., Dickerson, K., Leiper, F. C., Fryer, L. G., Neumann, D.,
Schlattner, U., Wallimann, T., Carlson, M., and Carling, D. (2003) LKB1 is the
upstream kinase in the AMP-activated protein kinase cascade. Curr Biol
13, 2004-2008
22. Itani,
S. I., Saha, A. K., Kurowski, T. G., Coffin, H. R., Tornheim, K., and Ruderman,
N. B. (2003) Glucose Autoregulates Its Uptake in Skeletal Muscle: Involvement
of AMP-Activated Protein Kinase. Diabetes 52, 1635-1640
23. Fujii,
N., Hayashi, T., Hirshman, M. F., Smith, J. T., Habinowski, S. A., Kaijser, L.,
Mu, J., Ljungqvist, O., Birnbaum, M. J., Witters, L. A., Thorell, A., and
Goodyear, L. J. (2000) Exercise induces isoform-specific increase in
5'AMP-activated protein kinase activity in human skeletal muscle. Biochem
Biophys Res Commun 273, 1150-1155
24. Hutber,
C. A., Hardie, D. G., and Winder, W. W. (1997) Electrical stimulation
inactivates muscle acetyl-CoA carboxylase and increases AMP-activated protein
kinase. Am J Physiol 272, E262-266
25. Kemp,
B. E., Stapleton, D., Campbell, D. J., Chen, Z. P., Murthy, S., Walter, M.,
Gupta, A., Adams, J. J., Katsis, F., van Denderen, B., Jennings, I. G., Iseli,
T., Michell, B. J., and Witters, L. A. (2003) AMP-activated protein kinase,
super metabolic regulator. Biochem Soc Trans 31, 162-168
26. Bergeron,
R., Ren, J. M., Cadman, K. S., Moore, I. K., Perret, P., Pypaert, M., Young, L.
H., Semenkovich, C. F., and Shulman, G. I. (2001) Chronic activation of AMP
kinase results in NRF-1 activation and mitochondrial biogenesis. Am J
Physiol Endocrinol Metab 281, E1340-1346
27. Zong,
H., Ren, J. M., Young, L. H., Pypaert, M., Mu, J., Birnbaum, M. J., and
Shulman, G. I. (2002) AMP kinase is required for mitochondrial biogenesis in
skeletal muscle in response to chronic energy deprivation. Proc Natl Acad
Sci U S A 99, 15983-15987
28. Jager,
S., Handschin, C., St-Pierre, J., and Spiegelman, B. M. (2007) AMP-activated
protein kinase (AMPK) action in skeletal muscle via direct phosphorylation of
PGC-1{alpha}. Proc Natl Acad Sci U S A 104, 12017-12022
29. Rockl,
K. S., Hirshman, M. F., Brandauer, J., Fujii, N., Witters, L. A., and Goodyear,
L. J. (2007) Skeletal muscle adaptation to exercise training: AMP-activated
protein kinase mediates muscle fiber type shift. Diabetes 56, 2062-2069
30. Zambrowicz,
B. P., Friedrich, G. A., Buxton, E. C., Lilleberg, S. L., Person, C., and
Sands, A. T. (1998) Disruption and sequence identification of 2,000 genes in
mouse embryonic stem cells. 392, 608-611
31. Zhou,
G., Myers, R., Li, Y., Chen, Y., Shen, X., Fenyk-Melody, J., Wu, M., Ventre,
J., Doebber, T., Fujii, N., Musi, N., Hirshman, M. F., Goodyear, L. J., and
Moller, D. E. (2001) Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of
metformin action. J Clin Invest 108, 1167-1174
32. Lombard,
D. B., Alt, F. W., Cheng, H. L., Bunkenborg, J., Streeper, R. S., Mostoslavsky,
R., Kim, J., Yancopoulos, G., Valenzuela, D., Murphy, A., Yang, Y., Chen, Y.,
Hirschey, M. D., Bronson, R. T., Haigis, M., Guarente, L. P., Farese, R. V.,
Jr., Weissman, S., Verdin, E., and Schwer, B. (2007) Mammalian Sir2 Homolog
SIRT3 Regulates Global Mitochondrial Lysine acetylation. Mol Cell Biol
33. Lahiri,
D. K., and Nurnberger, J. I., Jr. (1991) A rapid non-enzymatic method for the
preparation of HMW DNA from blood for RFLP studies. Nucleic Acids Res
19, 5444
34. Bai,
R. K., Perng, C. L., Hsu, C. H., and Wong, L. J. (2004) Quantitative PCR
analysis of mitochondrial DNA content in patients with mitochondrial disease. Ann
N Y Acad Sci 1011, 304-309
35. Storlien,
L., Oakes, N. D., and Kelley, D. E. (2004) Metabolic flexibility. Proc Nutr
Soc 63, 363-368
36. Koh,
H. J., Hirshman, M. F., He, H., Li, Y., Manabe, Y., Balschi, J. A., and
Goodyear, L. J. (2007) Adrenaline is a critical mediator of acute exercise-induced
AMP-activated protein kinase activation in adipocytes. Biochem J 403,
473-481
37. MacLellan,
J. D., Gerrits, M. F., Gowing, A., Smith, P. J., Wheeler, M. B., and Harper, M.
E. (2005) Physiological increases in uncoupling protein 3 augment fatty acid
oxidation and decrease reactive oxygen species production without uncoupling
respiration in muscle cells. Diabetes 54, 2343-2350
38. Schrauwen,
P., Mensink, M., Schaart, G., Moonen-Kornips, E., Sels, J. P., Blaak, E. E.,
Russell, A. P., and Hesselink, M. K. (2005) Reduced skeletal muscle UCP3
protein content in pre-diabetic subjects and type 2 diabetic patients:
restoration by rosiglitazone treatment. J Clin Endocrinol Metab
39. Oliveira,
R. L. G. S., Ueno, M., de Souza, C. T., Pereira-da-Silva, M., Gasparetti, A.
L., Bezzera, R. M. N., Alberici, L. C., Vercesi, A. E., Saad, M. J. A., and
Velloso, L. A. (2004) Cold-induced PGC-1{alpha} expression modulates muscle
glucose uptake through an insulin receptor/Akt-independent, AMPK-dependent
pathway. Am J Physiol Endocrinol Metab 287, E686-695
40. Schwer,
B., Bunkenborg, J., Verdin, R. O., Andersen, J. S., and Verdin, E. (2006)
Reversible lysine acetylation controls the activity of the mitochondrial enzyme
acetyl-CoA synthase 2. Proc Natl Acad Sci U S A
41. Hallows,
W. C., Lee, S., and Denu, J. M. (2006) Sirtuins deacetylate and activate
mammalian acetyl-CoA synthases. Proc Natl Acad Sci U S A
42. Clapham,
J. C., Arch, J. R., Chapman, H., Haynes, A., Lister, C., Moore, G. B., Piercy,
V., Carter, S. A., Lehner, I., Smith, S. A., Beeley, L. J., Godden, R. J.,
Herrity, N., Skehel, M., Changani, K. K., Hockings, P. D., Reid, D. G.,
Squires, S. M., Hatcher, J., Trail, B., Latcham, J., Rastan, S., Harper, A. J.,
Cadenas, S., Buckingham, J. A., Brand, M. D., and Abuin, A. (2000) Mice過剰発現 human uncoupling protein-3 in
skeletal muscle are hyperphagic and lean. Nature 406, 415-418
43. Cline,
G. W., Vidal-Puig, A. J., Dufour, S., Cadman, K. S., Lowell, B. B., and
Shulman, G. I. (2001) In vivo effects of uncoupling protein-3 gene disruption
on mitochondrial energy metabolism. J Biol Chem 276, 20240-20244
44. Thomson,
D. M., Herway, S. T., Fillmore, N., Kim, H., Brown, J. D., Barrow, J. R., and
Winder, W. W. (2007) AMP-Activated Protein Kinase Phosphorylates Transcription
Factors of the CREB Family 10.1152/japplphysiol.00900.2007. J Appl Physiol,
104:429-438.
45. Handschin,
C., Rhee, J., Lin, J., Tarr, P. T., and Spiegelman, B. M. (2003) An
autoregulatory loop controls peroxisome proliferator-activated receptor gamma
coactivator 1alpha expression in muscle. Proc Natl Acad Sci U S A 100,
7111-7116
46. Herzig,
S., Long, F., Jhala, U. S., Hedrick, S., Quinn, R.,
Bauer, A., Rudolph, D., Schutz, G., Yoon, C., Puigserver, P., Spiegelman, B.,
and Montminy, M. (2001) CREB regulates hepatic gluconeogenesis through the
coactivator PGC-1. Nature 413, 179-183
47. Halse,
R., Fryer, L. G., McCormack, J. G., Carling, D., and Yeaman, S. J. (2003)
Regulation of glycogen synthase by glucose and glycogen: a possible role for AMP-activated
protein kinase. Diabetes 52, 9-15
48. Cammisotto,
P. G., Londono, I., Gingras, D., and Bendayan,
M. (2008) Control of glycogen synthase through ADIPOR1-AMPK pathway in renal
distal tubules of normal and diabetic rats. Am J Physiol Renal Physiol
294, F881-889
49. Holmes,
B. F., Kurth-Kraczek, E. J., and Winder, W. W. (1999) Chronic activation of
5'-AMP-activated protein kinase increases GLUT-4, hexokinase, and glycogen in
muscle. J Appl Physiol 87, 1990-1995
50. Song,
X. M., Fiedler, M., Galuska, D., Ryder, J. W., Fernstrom, M., Chibalin, A. V.,
Wallberg-Henriksson, H., and Zierath, J. R. (2002)
5-Aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside treatment improves glucose
homeostasis in insulin-resistant diabetic (ob/ob) mice. Diabetologia 45,
56-65
51. Barnes,
B. R., Marklund, S., Steiler, T. L., Walter, M., Hjalm, G., Amarger, V.,
Mahlapuu, M., Leng, Y., Johansson, C., Galuska, D., Lindgren, K., Abrink, M.,
Stapleton, D., Zierath, J. R., and Andersson, L. (2004) The 5'-AMP-activated
protein kinase gamma3 isoform has a key role in carbohydrate and lipid
metabolism in glycolytic skeletal muscle. J Biol Chem 279, 38441-38447
52. Barre,
L., Richardson, C., Hirshman, M. F., Brozinick, J., Fiering, S., Kemp, B. E.,
Goodyear, L. J., and Witters, L. A. (2007) Genetic model for the chronic
activation of skeletal muscle AMP-activated protein kinase leads to glycogen
accumulation. Am J Physiol Endocrinol Metab 292, E802-811
53. Costford,
S. R., Kavaslar, N., Ahituv, N., Chaudhry, S. N., Schackwitz, W. S., Dent, R.,
Pennacchio, L. A., McPherson, R., and Harper, M. E. (2007) Gain-of-function
R225W mutation in human AMPKgamma3 causing increased glycogen and decreased
triglyceride in skeletal muscle. PLoS ONE 2, e903
54. Luptak,
I., Shen, M., He, H., Hirshman, M. F., Musi, N., Goodyear, L. J., Yan, J.,
Wakimoto, H., Morita, H., Arad, M., Seidman, C. E., Seidman, J. G., Ingwall, J.
S., Balschi, J. A., and Tian, R. (2007) Aberrant activation of AMP-activated
protein kinase remodels metabolic network in favor of cardiac glycogen storage.
J Clin Invest 117, 1432-1439
55. Barnes,
B. R., Glund, S., Long, Y. C., Hjalm, G., Andersson, L., and Zierath, J. R.
(2005) 5'-AMP-activated protein kinase regulates skeletal muscle glycogen
content and ergogenics. Faseb J 19, 773-779
56. McCarty,
M. F. (2004) Chronic activation of AMP-activated kinase as a strategy for
slowing aging. Med Hypotheses 63, 334-339
57. Apfeld,
J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., and Curtis, R. (2004) The
AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals
to lifespan in C. elegans. Genes Dev 18, 3004-3009
58. Dagon,
Y., Avraham, Y., Magen, I., Gertler, A., Ben-Hur, T., and Berry, E. M. (2005) Nutritional status,
cognition, and survival: a new role for leptin and AMP kinase. J Biol Chem
280, 42142-42148
59. Hou,
X., Xu, S., Maitland-Toolan, K. A., Sato, K., Jiang, B., Ido, Y., Lan, F.,
Walsh, K., Wierzbicki, M., Verbeuren, T. J., Cohen, R. A., and Zang, M. (2008)
SIRT1 Regulates Hepatocyte Lipid Metabolism through Activating AMP-activated
Protein Kinase
10.1074/jbc.M802187200. J. Biol.
Chem. 283, 20015-20026
60. Baur,
J. A., Pearson, K. J., Price, N. L., Jamieson, H. A., Lerin, C., Kalra, A.,
Prabhu, V. V., Allard, J. S., Lopez-Lluch, G., Lewis, K., Pistell, P. J.,
Poosala, S., Becker, K. G., Boss, O., Gwinn, D., Wang, M., Ramaswamy, S.,
Fishbein, K. W., Spencer, R. G., Lakatta, E. G., Le Couteur, D., Shaw, R. J.,
Navas, P., Puigserver, P., Ingram, D. K., de Cabo, R., and Sinclair, D. A.
(2006) Resveratrol improves health and survival of mice on a high-calorie diet.
Nature 444, 337-342
61. Gerhart-Hines,
Z., Rodgers, J. T., Bare, O., Lerin, C., Kim, S. H., Mostoslavsky, R., Alt, F.
W., Wu, Z., and Puigserver, P. (2007) Metabolic control of muscle mitochondrial
function and fatty acid oxidation through SIRT1/PGC-1alpha. Embo J 26,
1913-1923
62. Bruce,
C. R., Anderson, M. J., Carey, A. L., Newman, D. G., Bonen, A., Kriketos, A.
D., Cooney, G. J., and Hawley, J. A. (2003) Muscle oxidative capacity is a
better predictor of insulin sensitivity than lipid status. J Clin Endocrinol
Metab 88, 5444-5451
63. Kelley,
D. E., Goodpaster, B., Wing, R. R., and Simoneau, J. A. (1999) Skeletal muscle
fatty acid metabolism in association with insulin resistance, obesity, and
weight loss. Am J Physiol 277, E1130-1141
64. Lowell,
B. B., and Shulman, G. I. (2005) Mitochondrial dysfunction and type 2 diabetes.
Science 307, 384-387
65. Petersen,
K. F., Dufour, S., Befroy, D., Garcia, R., and Shulman, G. I. (2004) Impaired
mitochondrial activity in the insulin-resistant offspring of patients with type
2 diabetes. N Engl J Med 350, 664-671
66. Petersen,
K. F., Befroy, D., Dufour, S., Dziura, J., Ariyan, C., Rothman, D. L.,
DiPietro, L., Cline, G. W., and Shulman, G. I. (2003) Mitochondrial dysfunction
in the elderly: possible role in insulin resistance. Science 300,
1140-1142
67. Fridlyand,
L. E., and Philipson, L. H. (2006) Reactive species and early manifestation of
insulin resistance in type 2 diabetes. Diabetes Obes Metab 8, 136-145
68. Mootha,
V. K., Lindgren, C. M., Eriksson, K. F., Subramanian, A., Sihag, S., Lehar, J.,
Puigserver, P., Carlsson, E., Ridderstrale, M., Laurila, E., Houstis, N., Daly,
M. J., Patterson, N., Mesirov, J. P., Golub, T. R., Tamayo, P., Spiegelman, B.,
Lander, E. S., Hirschhorn, J. N., Altshuler, D., and Groop, L. C. (2003)
PGC-1alpha-responsive genes involved in oxidative phosphorylation are
coordinately downregulated in human diabetes. Nat Genet 34, 267-273
69. Patti,
M. E., Butte, A. J., Crunkhorn, S., Cusi, K., Berria, R., Kashyap, S.,
Miyazaki, Y., Kohane, I., Costello, M., Saccone, R., Landaker, E. J., Goldfine,
A. B., Mun, E., DeFronzo, R., Finlayson, J., Kahn, C. R., and Mandarino, L. J.
(2003) Coordinated reduction of genes of oxidative metabolism in humans with
insulin resistance and diabetes: Potential role of PGC1 and NRF1. Proc Natl
Acad Sci U S A 100, 8466-8471
70. Cui,
L., Jeong, H., Borovecki, F., Parkhurst, C. N., Tanese, N., and Krainc, D.
(2006) Transcriptional repression of PGC-1alpha by mutant huntingtin leads to
mitochondrial dysfunction and neurodegeneration. Cell 127, 59-69
71. St-Pierre,
J., Drori, S., Uldry, M., Silvaggi, J. M., Rhee, J., Jager, S., Handschin, C.,
Zheng, K., Lin, J., Yang, W., Simon, D. K., Bachoo, R., and Spiegelman, B. M.
(2006) Suppression of reactive oxygen species and neurodegeneration by the
PGC-1 transcriptional coactivators. Cell
127, 397-408
遺伝毒性ストレスにより引き起こされる細胞死の主要な原因は、核及び細胞質からのNAD+の枯渇が原因であると考えられている。ここで我々は、ミトコンドリア内のNAD+レベルは遺伝毒性ストレス後でも生理的レベルに留まると共に、NAD+の核内及び細胞質内プールが枯渇した場合にすら、細胞生存率を維持することができることを示す。48時間絶食させたげっ歯類はNAD+生合成酵素Namptのレベル増加と、それと同時に、ミトコンドリア内NAD+の増加を示す。Namptの増加は細胞死に対する防御を提供し、インタクト・ミトコンドリア内NAD+ 再利用経路やミトコンドリア内NAD+-依存的脱アセチル化酵素SIRT3及びSIRT4を要する。我々は、栄養がどのように生理機能を調節するかの理解と、アポトーシスの進化とに対するこれらの発見の関連性を議論する。
and Chiarugi, 2005)。
が枯渇して、アポトーシス誘導性因子(AIF)がミトコンドリア膜から核へ移動する
(Burkle, 2005; Cipriani et al., 2005; van Wijk and Hageman, 2005; Yu et al.,
2002)。細菌の研究の一つでは、ある割合のPARP-1がミトコンドリアに局在することが報告されており、細胞の運命を決定する上でのミトコンドリア内NAD+ の可能性に関する憶測につながっている (Du et al., 2003)。しかしミトコンドリア内NAD+ 生合成について(Barile et al., 1996; Berger
et al., 2005; Kun et al., 1975)や、ミトコンドリア内のNAD+ の実際の濃度はどれほどか (Di Lisa and Bernardi, 2006)、ミトコンドリアNAD+ レベルは生物学的ストレス又は食事に応答して変化するかどうか、そしてこれが細胞生存及び代謝にどのような影響を有するか(Porcu
and Chiarugi, 2005; Viswanathan et al., 2005)、は、ほとんど知られていない。
2000; Rogina and Helfand, 2004; Smith et al., 2000; Tanny et al., 1999)。哺乳動物は7種類のサーチュイン、SIRT1-7を有する。SIRT1は核内脱アセチル化酵素であり、細胞生存、糖恒常性、及び脂肪代謝を含め多種の機能を調節する (Guarente, 2005)。三種類のミトコンドリア・サーチュイン、SIRT3-5がある。SIRT3 及びSIRT4 は最近、それぞれアセチル-CoA シンセターゼ 2 (AceCS2) 及びグルタミン酸デヒドロゲナーゼを調節することが示された (Haigis et al., 2006; Hallows et
al., 2006; Schwer et al., 2002)が、それらの生物学的機能についてはほとんど知られていない。
et al., 2003; Kaeberlein et al., 1999; Lin et al., 2000; Rogina and Helfand,
2004; Tissenbaum and Guarente, 2001; Wood et al., 2004)。酵母Sir2 は、ニコチンアミド(NAM)からのNAD+生合成で第一及び律速段階を触媒するストレス-及びカロリー-応答性寿命遺伝子であるPNC1により正の調節を受ける(NAM) (Anderson et al., 2003; Gallo
et al., 2004)。哺乳動物がPNC1 遺伝子の機能的均等物を持つかどうかは不明である。明らかに、サーチュイン活性を支配し、寿命を促進する遺伝子の哺乳動物均等物を発見することは、CRが哺乳動物で寿命をどのように伸長するかの我々の理解を含め、数多くの潜在的可能性を有する。
Samal et al., 1994)。最近の研究では、 Nampt が過剰発現するとSIRT1活性が増加し (Revollo et al., 2004)、PARP過剰発現による死から細胞を防御することができることが示されており(Pillai et al., 2005)、Namptが哺乳動物におけるPnc1の機能的均等物であるという仮説と合致する。
はアポトーシスの主要な決定因子であり、器官の生理及び疾患に対する食事の影響について新しい光を投げかけるものである。
細胞培養
ヒト胚性腎(HEK293) 及びヒト線維芽肉腫HT1080細胞株をATCCから入手し、10% FBS 及び100 μg/ml ペニシリン/ストレプトマイシンを加えた完全DMEM培地中で成長させた。Nampt過剰発現又は空のベクターの安定なクローンを作るために、hNAMPT/pcDNA 又は pcDNA空ベクターをHEK293又はHT1080 細胞にトランスフェクトし、0.5-1.0 mg/ml ゲネチシンで選抜した。Nampt ノックダウン細胞を作るために、siRNA/NAMPT/pMSCV 又はpMSCV 空ベクターをHT1080細胞にトランスフェクトし、安定なクローンを500 ng/ml ピューロマイシンで選抜した。初代新生仔ラット心筋細胞を以前に解説された通りに調製した (Matsui et al., 1999)。単離された心筋細胞を完全培地(RPMI 1640、5% ウシ胎児血清、10% ウシ血清) 中で80%コンフルエントまで成長させてから、細胞を低酸素及び/又は血清枯渇状態に置いた。低酸素については、培地を、95% N2/5% CO2 で飽和させた血清を加えた、又は、加えていないRPMI 1640 に取り替え、その後、細胞を、95% N2/5% CO2で飽和させた37°C 気密箱内に18時間、置いた。O2 濃度は0.1% 未満だった(Ohmeda 酸素モニター、タイプ 5120)。HT1080を血清枯渇させるために、細胞を、血清を含まないDMEM 培地中で成長させた。細胞を26時間の血清枯渇後に採集し、Nampt 発現をウェスタン・ブロット法で分析した。
85%コンフルエント未満のHEK293 及びHT1080 細胞をMMS (1.2 mM) でそれぞれ6−8.5時間、及び8−17時間、処置した。過渡的にトランスフェクトした細胞をPBSで3回、洗浄して残ったトランスフェクション試薬を取り除いてから、MMSで処置した。HEK293細胞及びHT1080細胞をそれぞれ120 又は40 μMのエトポシドにそれぞれ72時間又は46時間、暴露した。HT1080 細胞を14 μM のカンプトテシンに23時間、暴露した。薬物処置後、細胞をトリプシン処置で採集し、遠心分離でペレットにし、3% FBSを含有するPBS中に再懸濁させた。細胞死はFACS によりヨウ化プロピジウム (PI) 染料を用いて分析された。mNAMPT/MSCV、SIRT1-7 siRNA、Nmnat-3、又はhMFT siRNA oligosを過渡的にトランスフェクトされ、FAM-標識スクランブルsiRNA oligosを同時トランスフェクトされた細胞の細胞死率を、PI/GFP又はPI/FAM陽性細胞、対、緑色蛍光のある細胞の総数、の比として判定した。
コントロール又はNampt過剰発現HEK293細胞にコントロール・ベクタ又はAceCS2-HAをトランスフェクトした。トランスフェクトから48時間後に細胞を洗浄し、IP溶解緩衝液 [50 mM Tris-HCl、pH
7.5、150 mM NaCl、 0.5 mM EDTA、0.5% NP-50、400 nM TSA、5 mM ニコチンアミド、及びプロテアーゼ阻害剤(完全、Roche社)]中に30分間、4℃で溶解させた。ライセートを清澄させ、抗-HA アフィニティ・ゲル (Roche社) で2時間、4℃で免疫沈降させた。免疫沈降液を3回、それぞれ15分間、溶解緩衝液で洗浄し、1x SDS-PAGE に再懸濁させ、ウェスタン・ブロット法で分析した。
そうでないと言明しない限り、培養細胞の分画を、僅かに改変した差次的遠心分離及びショ糖勾配法を用いて行った(Schwer
et al., 2002)。ミトコンドリアの薬物処置のために、新鮮なミトコンドリアを、給餌した若いオスのラットから切り出した肝臓から得た。肝臓ホモジネートの半分を、プロトコル1と指定された、メーカの指示に解説された(イリノイ州ロックフォード、ピアース・ミトコンドリア単離キット)通りに市販のキットを用いたミトコンドリア単離に用いた。元のホモジネートの他の半分を差次的遠心分離プロトコルにかけ、ミトコンドリアを単離した(プロトコル2)。ミトコンドリア(500
μl)
を48-ウェル・プレートに加え、1:1000の希釈度のメチルメタンスルホネート (MMS) 、及び/又は、 FK866 (10 nM)で30分間、37℃で処置した。懸濁液を1分、14,000
rpm で4℃で遠心して沈降させ、ペレットをHPLC-MALDI-MSによるNAD+分析まで−80℃で保存した。詳細なプロトコルはサプリメンタル・インフォメーションに解説されている。
NAD+ を以前に解説された通りに (Sauve and Schramm, 2003)以下の改変を用いて判定した。HEK293 又はHT1080細胞をトリプシン処理で採集し、血球計算器で計数された。NAD+ を全細胞又はミトコンドリア・ペレットから10% 過塩素酸で抽出し、5分間、氷上で音波破砕した。次に、基準標準18O-NAD+
(典型的には613.4 pmol) を試料に加えた。よく混合した後、試料を3分間、遠心分離し、その後NaOHで中和した。上清(100
μL 試料)中のNAD+ を他の細胞成分からHPLCにより分離した。NAD+ピークを標準的な保持時間に従って採集し、凍結乾燥機で乾燥させた。MALDI-MSを用いて、正に帯電した同位体的に別個のイオン同士の間のピーク比を判定し、16O-
及び 18O-ピークの強度の比率を求めて
(664/666)、試料中の16O
NAD+/18O NAD+ を得た。16O 及び18O
NAD+ (それぞれ600 pmol)のみを含有する標準を泳動させて、同位体純度の補正値を判定し、手法の較正を提供した。ミトコンドリア・ペレットの体積を、ミトコンドリア・ペレットの密度を1.0
μL/mgであるとみなすことにより、計算した。細胞一個あたりのNAD+の量を、クールター計数器で測定した、HT1080 は2183.95 fL 、そしてHEK293は1691.04
fLという平均細胞体積(MCV)で除算することにより、総細胞NAD+
濃度を計算した。
in vivoでのNampt発現を評価するために、スプラーグ-ドーリー・ラット (120-150 g) をチャールズ・リバー・ラボラトリーズ社から得、無作為に4匹の動物のコントロール群及び実験群に割り振った。コントロール群にはResearch Diets Inc社で調製された78%ショ糖食を不断給餌し、実験群は48時間絶食させてからと殺した。RNA抽出用の肝組織を RNAlater試薬 (Qiagen社)中に保存した。他の試料はすべて液体窒素で凍結させ、使用時まで−80℃で保存した。ミトコンドリアNampt及びNAD+
レベルを評価するために、オスのフィッシャー-344 (F344)ラットを育種し、Gerontology
Research Center (メリーランド州バルチモア、GRC)の動物施設で飼育した。離乳時(2
w)からラットを個別に、ベータ・ウッドの床材を敷いた標準的なプラスチック製ケージに容れた。コントロール動物にはNIH-31標準食を不断給餌した(AL)。肝臓由来のミトコンドリアの調製法は補足情報の欄に解説されている。
E.coli内で発現させた精製済みヒトNamptタンパク質でウサギを免疫処置することにより、ウサギポリクローナル抗Nampt抗体を作製した。マウス抗-Nampt mAb (14A5) はのアンソニー・ロンヴォー氏及びオバーダン・レオ氏(ベルギー、ゴセリエス、Laboratoire de Physiologie Animale,
Universite Libre de Bruxelles)のご厚意により提供されたものである。抗-SIRT3抗体は、ヒトSIRT3タンパク質のC末端の最後の15アミノ酸残基に相当する合成ペプチドでウサギを免疫処置することにより、作製された。抗-SIRT2、及び抗-アセチル化AceCS2抗体は UCSFのエリック・ヴァーディン氏より贈呈いただいた。抗-SIRT5 抗体はBIOMOL社から購入した。抗-SIRT7抗体はIzumi Horikawa(ラボラトリー・オブ・バイオシステムズ・アンド・カンサー、NIH)氏のご厚意により提供いただいた。抗-V5
抗体はInvitrogen社から購入した。抗切断型カスパーゼ-3 抗体はCell Signaling社から得、ウサギポリクローナルマウス抗-Sir2a 抗体はUpstateから、抗-AIF 及び抗アクチン抗体はSanta Cruz Biotechnology社から、抗-Hsp90及び抗-MnSOD は Stressgenから、抗-CoxIV 及び抗-GAPDH はAbcamから、抗-EZH2はBD Biosciences社から得た。MMS及びサーチノールはSigma社から購入した。DPQ (3,4-ジヒドロ-5-[4-(1-ピペリジニル)ブトキシ]-1(2H)-イソキノリノン)、カンプトテシン、エトポシドはEMDから購入した。FK866 ((E)-[4-(1-ベンゾイルピペリジン-4-イル)ブチル]-3-ピリジン-3-イル)アクリルアミド) はRTI (Research
Triangle Institute)社のご厚意により提供いただいた。EX-527
(6-クロロ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-カルバゾール-1-カルボキシレート) はJill Milne氏(マサチューセッツ州ケンブリッジ、Sirtris
Pharmaceuticals社)より贈呈いただいた。FuGENE6
トランスフェクション試薬はRoche社から、リポフェクション 2000はInvitrogen社から、そしてヒトSIRT1-7、hNmnat-3 又は hMFT mRNAを狙った低分子干渉性RNA (siRNA) oligos はDharmacon社から得た。
ヒトNAMPT/pcDNAはGillian Bryant-Greenwood 氏(ハワイ大学)から贈呈いただいた。mNAMPT/MSCVのプラスミド及び対応する空のベクターはAnthony Rongvaux & Oberdan Leo (ベルギー、ゴッセリース、Laboratoire de Physiologie Animale,
Universite Libre de Bruxelles)から得た。ヒトSIRT1-7-flag/pcDNA コンストラクト、AceCS2-HA 及び対応する空のベクターはEric
Verdin氏(サンフランシスコ、カリフォルニア大学)のご厚意により提供いただいた。pMSCV-U6 はYang Shi氏(ボストン、ハーヴァード・メディカル・スクール)から贈呈いただき、Nampt配列
GGTGAAGATCTAAGACATTTA (SEQ ID NO:9) (siRNA/NAMPT/pMSCV)に対するsiRNAを発現させるためのウィルス性プラスミドを構築するために用いられた。
SIRT4、SIRT6、hMFT 及びhNmant-3を標的としたスクランブルドsiRNA 又は siRNAi oligosを過渡的にトランスフェクトした肝組織又はHEK293細胞由来の全RNAをトリゾール (Invitrogen社)を用いて抽出し、mRNAをsuperscript III (Invitrogen社)と、それぞれラット肝及びHEK293試料に向けたoligo dT 又はランダム六量体プライマーとを用いて逆転写した。逆転写で作製した cDNA をLightCycler and
FastStart DNA Master SYBR Green I(Roche Molecular Biochemicals社)を用いたリアル・タイムPCRのテンプレートとして用いた。NAMPT、SIRT4、SIRT6、Nmant-3 及びhMFT mRNA の相対的コピー数をβ-アクチンとの比較により、判定した。定量的リアル・タイムPCR反応ではプライマー・セット:AAATCCGCTCGACACTGTCCTGAA (SEQ ID
NO:10) 及び
TTGGGATCAGCAACTGGGTCCTTA (SEQ ID NO:11) をNAMPTに;
TTCCTCCCTGGAGAAGAGCTATGA (SEQ ID NO:12) 及び TACTCCTGCTTGCTGATCCACATC (SEQ ID NO:13)をラットβ-アクチンに; ACTTCGTAGGCTGGCCTCAATTCT (SEQ ID NO:14) 及び ACATCTGGTTTCAGATGGCCTCCA (SEQ ID NO:15)をhSIRT4に; AGAGCTCCACGGGAACATGTTTGT (SEQ ID NO:16) 及び
ATGTACCCAGCGTGATGGACAGGT (SEQ ID NO:17)をhSIRT6に; TGGCCAGAGATCACCTACACCAAA (SEQ ID
NO:18) 及び TGATGATGCCTCAGCACCTTCACT (SEQ ID NO:19) をhNmant-3に;
AGGGATTTGTTCCTGGGCTGTTTG (SEQ ID NO:20) 及び AAATCCACCGACGCCTTCTTTCCT
(SEQ ID NO:21)をhMFT; TTCTACAATGAGCTGCGTGTGGCT (SEQ ID NO:22) 及び
TTAATGTCACGCACGATTTCCCGC (SEQ ID NO:23) をヒトβ-アクチンに、用いた。
そうでないと明示しない限り、培養細胞の分画は、僅かに改良を加えた差次的遠心分離及びショ糖勾配法を用いて行われた(Schwer
et al., 2002)。差次的遠心分離で出た上清を超遠心分離にかけて軽い膜を沈降させ、細胞内S-100画分として採集した。差次的遠心分離で出たペレットを緩衝液で3回、洗浄し、核内画分として用いた。単離されたミトコンドリア試料の数アリクォートを溶解させ、ミトコンドリアタンパク質濃度をブラッドフォード検定法を用いて判定した。S-100からのタンパク質抽出物 (40 μg)、ミトコンドリア画分、及び核内画分をSDS-PAGEで分離し、Nampt、Hsp90
及びCoxIV について、ウェスタン・ブロット法でプローブした。核をHEK293細胞から、以前に公開された手法(Busch
et al., 1963)の変形であるAngus Lamond’s 博士の研究所(School of Life Sciences, Wellcome Trust
Biocentre University of Dundee, UK)のプロトコルを用いて単離した。簡単に説明すると、細胞を採集し、低温のPBSで洗浄し、5 ml の低張性緩衝液A(10 mM HEPES、pH
7.9、10mM
KCl、
1.5 mM MgCl2、0.5 mM DTT)中に再懸濁させ、氷上で5分間、インキュベートした。細胞懸濁液を予め冷却した7 ml のDounce 組織ホモジナイザーに移し、90%を越える細胞が溶解するまで均質化した。218 x gでの遠心分離により核をペレットにした。核を3 mlのS1溶液(0.25 M ショ糖、10
mM MgCl2)中に再懸濁させ、3 ml のS2溶液(0.35 M ショ糖、0.5 mM MgCl2)上にこの懸濁液を層にした。1430 x g で5分間、遠心分離することにより、超純粋な核ペレットを得た。
(Nukala et al., 2006)。この試験管にEGTAを加えない単離緩衝液(215mMのマンニトール、75mMのショ糖、0.1% BSA、20mMのHEPES, pH はKOHで7.2 に調節)を注ぎ足し、13,000×gで10分間、4℃で遠心分離した。上清慎重に取り除き、ペレットを、EGTAを加えない500μlの単離緩衝液中に再懸濁させた。この試験管にEGTAを加えない単離緩衝液を注ぎ足し、10,000×gで5分間、4℃で遠心分離して、より密なペレットを生じさせた。最終的なミトコンドリア・ペレットを、EGTAを加えない単離緩衝液中に再懸濁させた。タンパク質濃度は562nmでの吸光度をVictor3プレート・リーダーで測定するBCAタンパク質検定キットを用いて判定された。これらのミトコンドリア試料をウェスタン分析及びNAD+判定にかけた。
NAMPT発現は細胞ストレス及び栄養制限により誘導される
他の研究者及び我々は、哺乳動物Namptは酵母Pnc1の機能的均等物であると考えた (Anderson et al., 2002; Anderson et al., 2003;
Bitterman et al., 2003; Revollo et al., 2004; Yang et al., 2006)。この考えはPnc1及びNampt の両者はニコチンアミド(NAM)からのNAD+ 生合成において第一及び律速段階を触媒するという事実に基づくものである(Pillai et al., 2005; Revollo et al., 2004;
Rongvaux et al., 2002)。
細胞がコントロールに比較して最高1.5乃至2倍のNamptレベルを有することを見出した(図3A)。mRNA及びタンパク質の両方のレベルで同様なNampt増加が、48時間絶食させたラットの肝臓内で観察された(図3B−D)。低酸素又は無血清培地に暴露した初代心筋細胞もまた、最高2倍のNamptレベルを有していた(図3E)。同様な結果は、無血清培地(データは図示せず)中で成長させた初代マウス胚性線維芽細胞(MEF)で観察された。このように、NAMPT1は、この点では酵母PNC1遺伝子と同様にストレス-及び栄養-応答性遺伝子である。
Namptの上方調節を模倣すると共に、これがストレス耐性にどんな効果を有するかを検査するため、我々はHT1080線維芽肉腫及びHEK293胚性腎細胞からヒトNampt過剰発現性安定細胞株を作製し、ベクター・コントロールに比較して1.5乃至2倍のレベルのNamptを発現する株を選抜した(図3F、H)。Nampt発現における同様な変化をHT1080細胞をマウスNampt発現コンストラクトを過渡的にトランスフェクトすることにより得た(図3G)。安定なNamptノックダウン細胞株もsiRNA法を用いて作製した(図4A)。
al., 2003)、Nampt過剰発現による細胞防御を妨げた(図4B)ことから、Namptの活性が細胞防御には必要であることが示された。
PARP-1過剰発現からのNamptの防御能はSIRT1媒介性であることを示す最近の研究(Pillai et
al., 2005)を鑑み、我々は、MMSからの防御もSIRT1依存的であろうと予測した。しかし、SIRT1特異的阻害剤であるEX-527
(Solomon et al., 2006)も、SIRT1のsiRNA媒介性ノックダウンも、Nampt媒介性生存に対して有意な効果を有していなかった(図5A、B、及び11A)。しかし興味深いことに、細胞を全サーチュイン阻害剤であるシルチノールで処置すると、Nampt過剰発現の細胞防御能が遮断された(図5C)ことから、生存は別のサーチュインによって媒介されている可能性が持ち上がった。
遺伝毒性ストレスは、核内及び細胞失側NAD+プールを枯渇させることにより細胞を致死させると広く認識されている (Burkle, 2005; Porcu and Chiarugi, 2005)。NamptがNAD+枯渇に対して防御をするかどうかを調べるために、我々は、MMSへの暴露後のHEK293細胞中のNAD+濃度を、定量的HPLC質量分析法(HPLC-MALDI-MS)を用いて測定した (Sauve et
al., 2005)。我々はミトコンドリア中のニコチンアミド・レベルを測定することは試みなかった。なぜなら、NAD+とは異なり、それは膜を通じて拡散するからである。(van Roermund et al., 1995)。
標識された標準の添加後、細胞抽出物中のNAD+ をHPLC精製し、質量分析法で分析したところ、二つのイソトポマー分子イオンに相当する二つのピークが生じた(図6B)。分子量が高い方の種である18O-NAD+を用いて、分子量が低い方の内因性の種である16O-NAD+の量を判定した。
μMであると推定したが、これは、HPLC-MS-エレクトロスプレーイオン化方を用いた、マウス赤血球についての最近の推定値(368 μM)に大変近い(Yamada et al., 2006)。興味深いことに、Nampt-過剰発現細胞はベクター・コントロール細胞の総NAD+濃度のほぼ2倍を有しており、反対にNamptノックダウン細胞はほぼ半分を有していた(図6B及びC)。これらのデータは、Namptが核−細胞質NAD+生合成中の律速段階を触媒することを示す他の研究とも合致する(Pillai et
al., 2005; Revollo et al., 2004)。
[NAD+]<100 μM)(図6F)。
これらのデータは興味深い疑問を投げかける:総NAD+レベルを維持することによるのでなければ、どうやってNamptは遺伝毒性から細胞を防御しているのか?その重要な鍵は、ミトコンドリア・サーチュインSIRT3及びSIRT4が、Namptが細胞生存を高めるのに必要であるという我々の観察にあった。我々が用いていた細胞株T1080及びHEK293は、肝細胞及び筋細胞など、代謝活性の高い細胞に比較して数少ないミトコンドリアを持つ (Di Lisa and Bernardi, 2006)ため、ミトコンドリアはこれらの細胞の総NAD+プールのごく僅かな成分にしか、寄与していない。MMS処置細胞中に残ったNAD+は主にミトコンドリアであったこと、そしてNampt過剰発現細胞の生存率上昇はミトコンドリア中のNAD+レベル増加の結果であったことが考えられる。
al., 2005)。この知見の欠如は、部分的には、ミトコンドリアNAD+濃度を測定する強固で正確な方法がないことから来ているようである。実際、ごく2、3の研究しか、何らかの手段でミトコンドリアNAD+レベルを測定しようと試みていない。酵素検定を用いると、オルガネラ内のNAD+の実際の濃度を精確に判定することはできなかった。レベルは典型的にはモル濃度ではなく、nmol NAD+/mg のミトコンドリアタンパク質として表されている
(Di Lisa and Bernardi, 2006; Noack et al., 1992; Tobin et al., 1980)。
次に我々は、遺伝毒性ストレス中、ミトコンドリアはどのようにこのような高レベルのNAD+を維持するかに疑問を持った。二つの考えられる説明があった。つまり、ミトコンドリアが内因性NAD+生合成経路を持つ、および/又は、これらが細胞質ゾルからNAD+を輸入する、である。我々はまず、Namptがミトコンドリアに局在し、ミトコンドリアNAD+生合成に参与しているという仮説を調べた。既に、ミトコンドリア内のNAD+再利用経路の良い証拠がある。二つの研究で、NAD+前駆体をミトコンドリア標品に加えたところ、NAD+に転化することができ (Barile et al., 1996; Kun et al., 1975) 、そしてより最近では、NAD+再利用経路中、Namptのすぐ下流の酵素であるNmnat3(NAM モノヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼの意)が、ミトコンドリアにのみ在ることが示されている (Berger et al., 2005)。
(Kitani et al., 2003; Revollo et al., 2004; Rongvaux et al., 2002)。HEK293細胞由来及び肝組織由来のミトコンドリア標品のすべてにおいて、Namptは明確に検出された。Namptはまた、ヒトリンパ芽球、HepG2 肝癌腫細胞及びHeLa 細胞(図示せず)由来のミトコンドリア標品でも高度の純度で存在した。
al., 2004)。
and Chiarugi, 2005; Yu et al., 2002)。図8Aに示すように、Nampt の過剰発現は、MMSに応答したAIFの核への転位を抑制したことから、Namptはこの主要なアポトーシス経路の上流にあることが実証された。
最後に我々は、これらのデータがin
vivo での状況に関係するかどうかを調べた。NamptはミトコンドリアNAD+の栄養応答性調節物質であるという仮説を我々が立てるには、我々は、ミトコンドリアNAD+のレベル増加と同時、絶食ラットのミトコンドリアではNamptのレベル増加も観察するはずである。我々の知るところでは、ミトコンドリアNAD+のin vivoでの変化が以前に調べられたことはなかった。ラットを48時間、絶食させ、それらの肝臓を切り出し、上述したようにミトコンドリアを精製した。ミトコンドリア画分をウェスタン・ブロット法と、HPLC-MSを用いたNAD+判定とに向けて分けた。48時間の絶食後には、ミトコンドリア画分中のNamptレベルに劇的な上昇があり(図8B)、と同時に、絶食動物からのミトコンドリア抽出物中のミトコンドリアNAD+レベルにも増加があった(図8C)。このように、細胞培養における我々の結果は、in vivo での状況に意味のある外挿をするものである。
癌、糖尿病及び神経変性などの年齢に関係する疾患の進行速度に対するミトコンドリア機能の重要性が近年、ますます明白になってきた
(Lin et al., 2005; St-Pierre et al., 2006)。しかし、ミトコンドリア中のNAD+の細胞内濃度や、それが食事に応答して変動するかどうかや、あるいは、これらの変化がアポトーシスなどの鍵となる細胞機能に影響するかどうかについては、現在のところほとんど知られていない。この研究では、我々は、哺乳動物ミトコンドリア内のNAD+濃度を精確に判定し、ミトコンドリアNAD+を細胞生存の決定因子として特定し、そしてミトコンドリアNAD+レベルは、in vitro 及びin
vivoで栄養制限により劇的に上方調節されることを示した。本研究のより驚くべき発見の一つは、ミトコンドリアは遺伝毒性ストレス中のNAD+の生理的レベルを維持することができ、たとえ細胞質及び核内のNAD+が通常の生理的レベルを遥かに下回っていても、細胞生存を促進することができるという観察である。我々は、ミトコンドリアが細胞生存を決定する能力を「ミトコンドリア・オアシス効果」と呼ぶ。
et al., 2002; Campisi, 2003; Higami and Shimokawa, 2000; Migliaccio et al.,
1999; Zhang and Herman, 2002)。
Lisa and Bernardi, 2006; Yu et al., 2002)。この研究で我々は、Namptの過剰発現が、AIF局在の減衰につながることを見出した。NAMPTがAIFの上流にあることを考えると、SIRT3又はSIRT4が、AIFや、又は透過性遷移ポア(PTP)などの他のアポトーシス決定因子に結合する、及び/又は、修飾するかどうかを調べると面白いであろう。
et al., 2003; Bitterman et al., 2003)。過剰発現したNAMPTの効果を調べるために、トランスジェニック・マウス実験が進行中である。我々は、これらの動物は細胞ストレスに対する耐性増加、代謝変化、及び疾患耐性を有するのではないかと仮説を立てる(North
and Sinclair, 2007)。
Anderson,
R. M., Bitterman, K. J., Wood, J. G., Medvedik, O., Cohen, H., Lin, S. S.,
Manchester, J. K., Gordon, J. I., and Sinclair, D. A. (2002). Manipulation of a Nuclear
NAD+ Salvage Pathway Delays Aging without Altering Steady-state NAD+
Levels. J Biol Chem 277, 18881-18890.
Anderson, R. M.,
Bitterman, K. J., Wood, J. G., Medvedik, O., and Sinclair, D. A. (2003).
Nicotinamide and Pnc1 govern lifespan extension by calorie restriction in S.
cerevisiae. Nature 423, 181-185.
Andersson, S. G.,
Karlberg, O., Canback, B., and Kurland, C. G.
(2003). On the origin of mitochondria: a genomics perspective. Philos Trans R
Soc Lond B Biol Sci 358, 165-177; discussion 177-169.
Ando, K., Higami, Y.,
Tsuchiya, T., Kanematsu, T., and Shimokawa, I.
(2002). Impact of aging and life-long calorie restriction on expression of
apoptosis-related genes in male F344 rat liver. Microsc Res Tech 59,
293-300.
Araki, T., Sasaki, Y.,
and Milbrandt, J. (2004). Increased nuclear NAD biosynthesis and SIRT1
activation prevent axonal degeneration. Science 305, 1010-1013.
Barile, M., Cozzani, E.,
Anonide, A., Usiglio, D., Burroni, A., and Guarrera, M. (1996). Is contact
allergy rare in psoriatics? Contact Dermatitis 35, 113-114.
Berger, F., Lau, C.,
Dahlmann, M., and Ziegler, M. (2005). Subcellular compartmentation and
differential catalytic properties of the three human nicotinamide mononucleotide
adenylyltransferase isoforms. J Biol Chem 280, 36334-36341.
Bieganowski, P., and
Brenner, C. (2004). Discoveries of nicotinamide riboside as a nutrient and
conserved NRK genes establish a Preiss-Handler independent route to NAD+ in
fungi and humans. Cell 117, 495-502.
Bitterman, K. J.,
Medvedik, O., and Sinclair, D. A. (2003). Longevity regulation in Saccharomyces
cerevisiae: linking metabolism, genome stability, and heterochromatin.
Microbiol Mol Biol Rev 67, 376-399, table of contents.
Brenner, C. (2005).
Evolution of NAD biosynthetic enzymes. Structure 13, 1239-1240.
Burkle, A. (2005).
Poly(ADP-ribose). The most elaborate metabolite of NAD+. Febs J 272,
4576-4589.
Busch, H., Muramatsu, M.,
Adams, H., Steele, W. J., Liau, M. C., and Smetana, K. (1963). Isolation of
Nucleoli. Exp Cell Res 24, SUPPL9:150-163.
Campisi, J. (2003).
Cellular senescence and apoptosis: how cellular responses might influence aging
phenotypes. Exp Gerontol 38, 5-11.
Cipriani, G., Rapizzi,
E., Vannacci, A., Rizzuto, R., Moroni,
F., and Chiarugi, A. (2005). Nuclear poly(ADP-ribose) polymerase-1 rapidly
triggers mitochondrial dysfunction. J Biol Chem 280, 17227-17234.
Denu, J. M. (2005). The
Sir2 family of protein deacetylases. Curr Opin Chem Biol 9, 431-440.
Di Lisa, F., and
Bernardi, P. (2006). Mitochondria and ischemia-reperfusion injury of the heart:
fixing a hole. Cardiovasc Res 70, 191-199.
Drevs, J., Loser, R.,
Rattel, B., and Esser, N. (2003). Antiangiogenic potency of FK866/K22.175, a
new inhibitor of intracellular NAD biosynthesis, in murine renal cell
carcinoma. Anticancer Res 23, 4853-4858.
Du, L., Zhang, X., Han,
Y. Y., Burke, N. A., Kochanek, P. M., Watkins, S. C., Graham, S. H., Carcillo,
J. A., Szabo, C., and Clark, R. S. (2003). Intra-mitochondrial poly(ADP-ribosylation)
contributes to NAD+ depletion and cell death induced by oxidative stress. J
Biol Chem 278, 18426-18433.
Foster, J. W., Park, Y.
K., Penfound, T., Fenger, T., and Spector, M. P. (1990). Regulation of NAD
metabolism in Salmonella typhimurium: molecular sequence analysis of the
bifunctional nadR regulator and the nadA-pnuC operon. J Bacteriol 172,
4187-4196.
Frye, R. A. (2000).
Phylogenetic classification of prokaryotic and eukaryotic Sir2-like proteins.
Biochem Biophys Res Commun 273, 793-798.
Fukuhara, A., Matsuda,
M., Nishizawa, M., Segawa, K., Tanaka, M., Kishimoto, K., Matsuki, Y.,
Murakami, M., Ichisaka, T., Murakami, H., et al. (2004). Visfatin: A
Protein Secreted by Visceral Fat that Mimics the Effects of Insulin. Science.
Gallo, C. M., Smith, D.
L., Jr., and Smith, J. S. (2004). Nicotinamide clearance by Pnc1 directly
regulates Sir2-mediated silencing and longevity. Mol Cell Biol 24,
1301-1312.
Gray, M. W., Burger, G.,
and Lang, B. F. (1999). Mitochondrial evolution. Science 283, 1476-1481.
Guarente, L. (2005).
Calorie restriction and SIR2 genes--towards a mechanism. Mech Ageing Dev 126,
923-928.
Guarente, L., and Picard,
F. (2005). Calorie restriction--the SIR2 connection. Cell 120, 473-482.
Haigis, M. C.,
Mostoslavsky, R., Haigis, K. M., Fahie, K., Christodoulou, D. C., Murphy, A.
J., Valenzuela, D. M., Yancopoulos, G. D., Karow, M., Blander, G., et al.
(2006). SIRT4 inhibits glutamate dehydrogenase and opposes the effects of
calorie restriction in pancreatic beta cells. Cell 126, 941-954.
Hallows, W. C., Lee, S.,
and Denu, J. M. (2006). Sirtuins deacetylate and activate mammalian acetyl-CoA
synthases. Proc Natl Acad Sci U S A 103, 10230-10235.
Higami, Y., and
Shimokawa, I. (2000). Apoptosis in the aging
process. Cell Tissue Res 301, 125-132.
Horton, J. K., Stefanick,
D. F., and Wilson, S. H. (2005). Involvement of poly(ADP-ribose) polymerase
activity in regulating Chk1-dependent apoptotic cell death. DNA Repair (Amst)
4, 1111-1120.
Imai, S., Armstrong, C.
M., Kaeberlein, M., and Guarente, L. (2000). Transcriptional silencing and
longevity protein Sir2 is an NAD- dependent histone deacetylase. Nature 403,
795-800.
James, S. J.,
Muskhelishvili, L., Gaylor, D. W., Turturro, A., and Hart, R. (1998).
Upregulation of apoptosis with dietary restriction: implications for
carcinogenesis and aging. Environ Health Perspect 106 Suppl 1, 307-312.
Kaeberlein, M., McVey,
M., and Guarente, L. (1999). The SIR2/3/4 complex and SIR2 alone promote
longevity in Saccharomyces cerevisiae by two different mechanisms. Genes Dev
13, 2570-2580.
Kitani, T., Okuno, S.,
and Fujisawa,
H. (2003). Growth phase-dependent changes in the subcellular localization of
pre-B-cell colony-enhancing factor. FEBS Lett 544, 74-78.
Kun, E., Zimber, P. H.,
Chang, A. C., Puschendorf, B., and Grunicke, H. (1975). Macromolecular
enzymatic product of NAD+ in liver mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A 72,
1436-1440.
Lin, J., Handschin, C.,
and Spiegelman, B. M. (2005). Metabolic control through the PGC-1 family of
transcription coactivators. Cell Metab 1, 361-370.
Lin, S. J., Defossez, P.
A., and Guarente, L. (2000). Requirement of NAD and SIR2 for life-span
extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science
289, 2126-2128.
Matsui, T., Li, L., del
Monte, F., Fukui,
Y., Franke, T. F., Hajjar, R. J., and Rosenzweig, A. (1999). Adenoviral gene
transfer of activated phosphatidylinositol 3'-kinase and Akt inhibits apoptosis
of hypoxic cardiomyocytes in vitro. Circulation 100, 2373-2379.
Migliaccio,
E., Giorgio, M., Mele, S., Pelicci, G., Reboldi, P., Pandolfi, P. P.,
Lanfrancone, L., and Pelicci, P. G. (1999). The p66shc adaptor protein controls
oxidative stress response and life span in mammals. Nature 402, 309-313.
Noack, H., Kunz, W. S.,
and Augustin, W. (1992). Evaluation of a procedure for the simultaneous
determination of oxidized and reduced pyridine nucleotides and adenylates in
organic phenol extracts from mitochondria. Anal Biochem 202, 162-165.
North, B. J., and
Sinclair, D. A. (2007). Sirtuins: a conserved key unlocking AceCS activity.
Trends Biochem Sci 32, 1-4.
Nukala, V. N., Singh, I.
N., Davis, L.
M., and Sullivan, P. G. (2006). Cryopreservation of brain mitochondria: a novel
methodology for functional studies. J Neurosci Methods 152, 48-54.
Pillai, J. B., Isbatan,
A., Imai, S., and Gupta, M. P. (2005). Poly(ADP-ribose) polymerase-1-dependent
cardiac myocyte cell death during heart failure is mediated by NAD+ depletion
and reduced Sir2alpha deacetylase activity. J Biol Chem 280,
43121-43130.
Porcu, M., and Chiarugi,
A. (2005). The emerging therapeutic potential of sirtuin-interacting drugs:
from cell death to lifespan extension. Trends Pharmacol Sci 26, 94-103.
Revollo, J. R., Grimm, A.
A., and Imai, S. (2004). The NAD biosynthesis pathway mediated by nicotinamide
phosphoribosyltransferase regulates Sir2 activity in mammalian cells. J Biol
Chem 279, 50754-50763.
Rogina, B., and Helfand,
S. L. (2004). Sir2 mediates longevity in the fly through a pathway related to
calorie restriction. Proc Natl Acad Sci U S A 101, 15998-16003.
Rongvaux, A., Shea, R.
J., Mulks, M. H., Gigot, D., Urbain, J., Leo, O., and Andris, F. (2002).
Pre-B-cell colony-enhancing factor, whose expression is up-regulated in
activated lymphocytes, is a nicotinamide phosphoribosyltransferase, a cytosolic
enzyme involved in NAD biosynthesis. Eur J Immunol 32, 3225-3234.
Samal, B., Sun, Y.,
Stearns, G., Xie, C., Suggs, S., and McNiece, I.
(1994). Cloning and characterization of the cDNA encoding a novel human
pre-B-cell colony-enhancing factor. Mol Cell Biol 14, 1431-1437.
Sauve, A. A., Moir, R.
D., Schramm, V. L., and Willis, I. M. (2005).
Chemical activation of Sir2-dependent silencing by relief of nicotinamide
inhibition. Mol Cell 17, 595-601.
Sauve, A. A., and
Schramm, V. L. (2003). Sir2 regulation by nicotinamide results from switching
between base exchange and deacetylation chemistry. Biochemistry 42,
9249-9256.
Schwer, B., North, B. J.,
Frye, R. A., Ott, M., and Verdin, E. (2002). The human silent information
regulator (Sir)2 homologue hSIRT3 is a mitochondrial nicotinamide adenine
dinucleotide-dependent deacetylase. J Cell Biol 158, 647-657.
Smith, J. S., Brachmann,
C. B., Celic, I., Kenna, M. A., Muhammad, S., Starai, V. J., Avalos, J. L.,
Escalante-Semerena, J. C., Grubmeyer, C., Wolberger, C., and Boeke, J. D.
(2000). A phylogenetically conserved NAD+-dependent protein deacetylase
activity in the Sir2 protein family. Proc Natl Acad Sci U S A 97,
6658-6663.
Solomon, J. M.,
Pasupuleti, R., Xu, L., McDonagh, T., Curtis, R., DiStefano, P. S., and Huber,
L. J. (2006). Inhibition of SIRT1 catalytic activity increases p53 acetylation
but does not alter cell survival following DNA damage. Mol Cell Biol 26,
28-38.
St-Pierre, J., Drori, S.,
Uldry, M., Silvaggi, J. M., Rhee, J., Jager, S., Handschin, C., Zheng, K., Lin,
J., Yang, W., et al. (2006). Suppression of reactive oxygen species and
neurodegeneration by the PGC-1 transcriptional coactivators. Cell 127,
397-408.
Tanny, J. C., Dowd, G.
J., Huang, J., Hilz, H., and Moazed, D. (1999). An enzymatic activity in the yeast
Sir2 protein that is essential for gene silencing. Cell 99, 735-745.
Tissenbaum, H. A., and
Guarente, L. (2001). Increased dosage of a sir-2 gene extends lifespan in
Caenorhabditis elegans. Nature 410, 227-230.
Tobin, A., Djerdjour, B.,
Journet, E., Neuburger, M., and Douce, R. (1980). Effect of NAD on Malate
Oxidation in Intact Plant Mitochondria. Plant Physiol 66, 225-229.
Todisco, S., Agrimi, G.,
Castegna, A., and Palmieri, F. (2006). Identification of the mitochondrial NAD+
transporter in Saccharomyces cerevisiae. J Biol Chem 281, 1524-1531.
van Roermund, C. W.,
Elgersma, Y., Singh, N., Wanders, R. J., and Tabak, H. F. (1995). The membrane
of peroxisomes in Saccharomyces cerevisiae is impermeable to NAD(H) and
acetyl-CoA under in vivo conditions. Embo J 14, 3480-3486.
van Wijk, S. J., and
Hageman, G. J. (2005). Poly(ADP-ribose) polymerase-1 mediated
caspase-independent cell death after ischemia/reperfusion. Free Radic Biol Med
39, 81-90.
Viswanathan, M., Kim, S.
K., Berdichevsky, A., and Guarente, L. (2005). A role for SIR-2.1 regulation of
ER stress response genes in determining C. elegans life span. Dev Cell 9,
605-615.
Wood, J. G., Rogina, B.,
Lavu, S., Howitz, K., Helfand, S. L., Tatar, M., and Sinclair, D. (2004).
Sirtuin activators mimic caloric restriction and delay ageing in metazoans.
Nature 430, 686-689.
Yamada, K., Hara, N.,
Shibata, T., Osago, H., and Tsuchiya, M. (2006). The simultaneous measurement
of nicotinamide adenine dinucleotide and related compounds by liquid
chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry. Anal Biochem
352, 282-285.
Yang, H., Lavu, S., and
Sinclair, D. A. (2006). Nampt/PBEF/Visfatin: a regulator of mammalian health
and longevity? Exp Gerontol 41, 718-726.
Yu, S. W., Wang, H.,
Poitras, M. F., Coombs, C., Bowers, W. J., Federoff, H. J., Poirier, G. G.,
Dawson, T. M., and Dawson, V. L. (2002). Mediation of poly(ADP-ribose)
polymerase-1-dependent cell death by apoptosis-inducing factor. Science 297,
259-263.
Zhang, Y., and Herman, B.
(2002). Ageing and apoptosis. Mech Ageing Dev 123, 245-260.
本発明の少なくとも一つの実施態様のいくつかの局面を解説してきたところで、当業者であれば、多様な変更、改変、及び向上が容易に想到されるはずである。このような変更、改変、及び向上は、本開示の一部として意図されており、また、本発明の精神及び範囲内にあると意図されている。従って、前述の解説及び図面は単に例示である。
Claims (37)
- 筋細胞中でカロリー制限又は運動の利点を模倣する方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 筋細胞中でミトコンドリア生合成又は代謝を増加させる、あるいは、ミトコンドリア活性/持久性を高める、ための方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 糖取り込みに対して筋細胞を感作する方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 筋細胞中の脂肪酸酸化を増加させる方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 筋細胞中の活性酸素種(ROS)を減少させる方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 筋細胞中のPGC-1α 及び/又は ucp3 及び/又はGLUT4 発現を増加させる、及び/又は、AMP活性化タンパク質キナーゼ (AMPK) を活性化させる方法であって、前記細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質に筋細胞を接触させるステップを含む、方法。
- 前記筋細胞が骨格筋細胞である、請求項1乃至6のいずれかに記載の方法。
- 前記筋細胞が遅筋の細胞である、請求項1乃至7のいずれかに記載の方法。
- 前記筋細胞がヒラメ筋細胞である、請求項1乃至8のいずれかに記載の方法。
- 前記筋細胞が対象内にあって、前記方法が、前記対象の細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質、これを必要とする対象である対象に投与するステップを含む、方法。
- 前記作用物質が対象の筋肉に標的決定される又は投与される、請求項10に記載の方法。
- 前記作用物質がSIRT3タンパク質又はその生物学的に有効なホモログ又はこのようなものをコードする核酸である、請求項1乃至11のいずれかに記載の方法。
- 前記作用物質が、ヒトSIRT3をコードする核酸又はその生物学的に有効なホモログである、請求項12に記載の方法。
- 前記生物学的に有効なホモログが、脱アセチル化酵素及び/又はADPリボシルトランスフェラーゼ活性を有するヒトSIRT3の断片である、請求項13に記載の方法。
- 前記作用物質が低分子である、請求項1乃至11のいずれかに記載の方法。
- 前記作用物質がSIRT1の活性化剤である、請求項15に記載の方法。
- 前記細胞が、タンパク質又は活性レベルでSIRT3の増加を必要とする細胞である、請求項1乃至16のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞が、対象の罹患細胞である、請求項17に記載の方法。
- 対象の骨格筋代謝又は骨格筋エネルギー恒常性を調節する方法であって、対象においてSIRT3のタンパク質又は活性レベルを修飾する作用物質を、これを必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
- 対象の骨格筋代謝又は骨格筋エネルギー恒常性を調節する方法であって、対象においてAMPKのタンパク質又は活性レベルを修飾する作用物質を、これを必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
- 対象の骨格筋代謝又は骨格筋エネルギー恒常性を増加させる方法であって、対象においてAMPKのタンパク質又は活性レベルを刺激する作用物質を対象に投与するステップを含む、請求項20に記載の方法。
- 筋細胞中のSIRT3のタンパク質レベルを増加させる方法であって、カロリー制限又は絶食に細胞をさらすステップを含む、方法。
- 対象の筋内のSIRT3のタンパク質レベルを増加させる方法であって、前記対象をカロリー制限、絶食又は運動にさらすステップを含む、方法。
- 筋細胞がカロリー制限又は運動から利益を得るであろう対象において疾患又は状態を処置又は防止する方法であって、筋細胞中のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる作用物質を、これを必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
- 前記疾患又は状態がミトコンドリア疾患、代謝障害、神経学的障害、筋肉障害、心臓血管疾患、体重過剰又は肥満である、請求項24に記載の方法。
- 前記疾患がインシュリン耐性又は糖尿病又は糖尿病関連状態又は障害である、請求項25に記載の方法。
- 前記疾患がメタボリック・シンドロームである、請求項25に記載の方法。
- ある対象が、筋肉代謝又は筋肉エネルギー恒常性の欠陥に関連する疾患又は状態を有するかどうか、又は、発症する可能性が高いかどうかを判定する方法であって、対象の筋細胞内のSIRT3のタンパク質又は活性のレベルを判定するステップを含み、この場合、コントロールに比較したときに、対象の細胞内のSIRT3のタンパク質又は活性のレベルが統計上低いレベルであることは、前記対象が、筋肉代謝又は筋肉エネルギー恒常性の欠陥に関連する疾患又は状態を有する、又は、発症する可能性が高いことの指標となる、方法。
- 前記コントロールが、ある健康な対象の同様な筋細胞内のSIRT3のタンパク質又は活性のレベルであるか、あるいは、少なくとも5人の健康な対象の平均のそれである、請求項28に記載の方法。
- 筋細胞内でカロリー制限又は運動の利点を模倣する作用物質を同定する方法であって、筋細胞を作用物質に接触させる、又は、筋細胞内に作用物質を投与するステップと、カロリー制限又は運動の利点が細胞内で模倣されたかどうかを判定するステップとを含む、方法。
- 前記作用物質が、筋細胞内のSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させる、請求項30に記載の方法。
- 前記作用物質が筋細胞内でのSIRT3のタンパク質又は活性レベルを増加させるかどうかを判定するステップを更に含む、請求項30に記載の方法。
- 前記作用物質が、筋細胞内でSIRT3及びSIRT1のタンパク質又は活性レベルを増加させる、請求項31に記載の方法。
- 前記作用物質が筋細胞内でSIRT3及びSIRT1のタンパク質又は活性レベルを増加させるかどうかを判定するステップを含む、請求項30に記載の方法。
- 前記細胞が真核細胞である、請求項1乃至34のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項35に記載の方法。
- 前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項36に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US98196007P | 2007-10-23 | 2007-10-23 | |
PCT/US2008/012058 WO2009054994A2 (en) | 2007-10-23 | 2008-10-23 | Sirt-3 related methods and compositions for mimicking exercise |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011500810A true JP2011500810A (ja) | 2011-01-06 |
Family
ID=40580292
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010531037A Pending JP2011500810A (ja) | 2007-10-23 | 2008-10-23 | 運動を模倣するためのsirt−3関連方法及び組成物 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20110082189A1 (ja) |
EP (1) | EP2214698A2 (ja) |
JP (1) | JP2011500810A (ja) |
WO (1) | WO2009054994A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014503071A (ja) * | 2011-01-06 | 2014-02-06 | ライジェル ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Ampk活性化を測定するための全血アッセイ |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060025337A1 (en) * | 2003-07-01 | 2006-02-02 | President And Fellows Of Harvard College | Sirtuin related therapeutics and diagnostics for neurodegenerative diseases |
US20090169585A1 (en) * | 2003-10-23 | 2009-07-02 | Resveratrol Partners, Llc | Resveratrol-Containing Compositions And Their Use In Modulating Gene Product Concentration Or Activity |
US20050158376A1 (en) * | 2003-10-23 | 2005-07-21 | Sardi William F. | Dietary supplement and method of processing same |
US8017634B2 (en) | 2003-12-29 | 2011-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions for treating obesity and insulin resistance disorders |
WO2006138418A2 (en) * | 2005-06-14 | 2006-12-28 | President And Fellows Of Harvard College | Improvement of cognitive performance with sirtuin activators |
WO2007041641A1 (en) * | 2005-10-03 | 2007-04-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Methods of reducing the production of reactive oxygen species and methods of screening or identifying compounds and compositions that reduce the production of reactive oxygen species |
WO2011143317A2 (en) * | 2010-05-11 | 2011-11-17 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for the regulation of cellular metabolism through the modulation of sirt3 activity |
WO2012114204A2 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-30 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Epfl-Tto | Methods of treating mitochondrial dysfunction |
EP3466418A1 (en) | 2011-07-15 | 2019-04-10 | NuSirt Sciences, Inc. | Compositions and methods for modulating metabolic pathways |
WO2013074948A1 (en) | 2011-11-16 | 2013-05-23 | Resveratrol Partners, Llc | Compositions containing resveratrol and nucleotides |
US9198454B2 (en) | 2012-03-08 | 2015-12-01 | Nusirt Sciences, Inc. | Compositions, methods, and kits for regulating energy metabolism |
US9877981B2 (en) | 2012-10-09 | 2018-01-30 | President And Fellows Of Harvard College | NAD biosynthesis and precursors for the treatment and prevention of cancer and proliferation |
WO2014078459A1 (en) | 2012-11-13 | 2014-05-22 | Nusirt Sciences, Inc. | Compositions and methods for increasing energy metabolism |
MX2015011195A (es) | 2013-03-15 | 2016-03-11 | Nusirt Sciences Inc | La leucina y el acido nicotinico reducen los niveles de lipidos. |
RU2016138136A (ru) | 2014-02-27 | 2018-04-02 | Нусерт Сайенсиз, Инк. | Композиции и способы уменьшения или профилактики жировой дистрофии печени |
WO2016011360A1 (en) * | 2014-07-17 | 2016-01-21 | The Scripps Research Institute | Methods and compositions for enhancing cancer therapy |
WO2020092877A1 (en) * | 2018-11-02 | 2020-05-07 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Modulation of mitochondrial biogenesis by increase in iron sulfur cluster activity |
US11840709B2 (en) * | 2020-04-10 | 2023-12-12 | Takako Nagata | Mitochondria isolation |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050136537A1 (en) * | 2003-07-01 | 2005-06-23 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions for manipulating the lifespan and stress response of cells and organisms |
WO2006094236A1 (en) * | 2005-03-03 | 2006-09-08 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | N-phenyl benzamide derivatives as sirtuin modulators |
WO2007008548A2 (en) * | 2005-07-07 | 2007-01-18 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Methods and related compositions for treating or preventing obesity, insulin resistance disorders, and mitochondrial-associated disorders |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7977049B2 (en) * | 2002-08-09 | 2011-07-12 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for extending the life span and increasing the stress resistance of cells and organisms |
US20060025337A1 (en) * | 2003-07-01 | 2006-02-02 | President And Fellows Of Harvard College | Sirtuin related therapeutics and diagnostics for neurodegenerative diseases |
US8017634B2 (en) * | 2003-12-29 | 2011-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions for treating obesity and insulin resistance disorders |
CA2548671C (en) * | 2003-12-29 | 2015-02-24 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions for treating or preventing obesity and insulin resistance disorders |
US20090117543A1 (en) * | 2004-05-04 | 2009-05-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for inducing sirtuins |
DK1755391T3 (en) * | 2004-06-04 | 2016-02-08 | Univ Washington | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF neuropathies |
EP1765316A2 (en) * | 2004-06-16 | 2007-03-28 | The President and Fellows of Harvard College | Methods and compositions for modulating bax-ku70-mediated apoptosis |
US7244765B2 (en) * | 2004-06-25 | 2007-07-17 | Cytokine Pharmasciences, Inc | Guanylhydrazone salts, compositions, processes of making and methods of using |
US20060276393A1 (en) * | 2005-01-13 | 2006-12-07 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Novel compositions for preventing and treating neurodegenerative and blood coagulation disorders |
EP1877054A2 (en) * | 2005-03-30 | 2008-01-16 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Nicotinamide riboside and analogues thereof |
US20090137681A1 (en) * | 2005-04-08 | 2009-05-28 | David A Sinclair | Sirtuin Inhibiting Compounds |
WO2006138418A2 (en) * | 2005-06-14 | 2006-12-28 | President And Fellows Of Harvard College | Improvement of cognitive performance with sirtuin activators |
AU2006278504B2 (en) * | 2005-08-04 | 2013-01-17 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Imidazopyridine derivatives as sirtuin modulating agents |
US7855289B2 (en) * | 2005-08-04 | 2010-12-21 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Sirtuin modulating compounds |
US8093401B2 (en) * | 2005-08-04 | 2012-01-10 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Sirtuin modulating compounds |
WO2007084857A2 (en) * | 2006-01-13 | 2007-07-26 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for treating cell proliferative disorders |
US20100242139A1 (en) * | 2006-01-13 | 2010-09-23 | President And Fellows Of Harvard College | Xenohormesis based compositions and methods |
WO2008028065A2 (en) * | 2006-08-31 | 2008-03-06 | The University Of Chicago | Sirt activation in managing heart failure |
WO2008073451A2 (en) * | 2006-12-11 | 2008-06-19 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Benzoimidazole derivatives as sirtuin (sir) modulating compounds |
EP2359144A2 (en) * | 2008-10-23 | 2011-08-24 | President and Fellows of Harvard College | Detection and modulation of cytochrome c acetylation |
US8477295B2 (en) * | 2009-05-07 | 2013-07-02 | Solum, Inc. | Automated soil measurement device |
EP2446048A4 (en) * | 2009-06-23 | 2013-04-03 | Harvard College | MEASURING METHODS AND KITS FOR ENZYMATIC ACTIVITY |
-
2008
- 2008-10-23 US US12/739,428 patent/US20110082189A1/en not_active Abandoned
- 2008-10-23 EP EP08842132A patent/EP2214698A2/en not_active Ceased
- 2008-10-23 WO PCT/US2008/012058 patent/WO2009054994A2/en active Application Filing
- 2008-10-23 JP JP2010531037A patent/JP2011500810A/ja active Pending
-
2015
- 2015-10-15 US US14/884,681 patent/US20160263140A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-06-27 US US16/020,652 patent/US20190314395A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050136537A1 (en) * | 2003-07-01 | 2005-06-23 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions for manipulating the lifespan and stress response of cells and organisms |
WO2006094236A1 (en) * | 2005-03-03 | 2006-09-08 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | N-phenyl benzamide derivatives as sirtuin modulators |
WO2007008548A2 (en) * | 2005-07-07 | 2007-01-18 | Sirtris Pharmaceuticals, Inc. | Methods and related compositions for treating or preventing obesity, insulin resistance disorders, and mitochondrial-associated disorders |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JPN6013036528; SHI,T. et al: The Journal of biological chemistry Vol.280, No.14, 2005, p.13560-7 * |
JPN6013036530; SCHER,M.B. et al: Genes & development Vol.21, No.8, 200704, p.920-8 * |
JPN6013036531; HAIGIS,M.C. et al: Genes & development Vol.20, No.21, 2006, p.2913-21 * |
JPN6013036532; GAN,L.: Drug news & perspectives Vol.20, No.4, 200705, p.233-9 * |
JPN6013036534; YANG,H. et al: Cell Vol.130, No.6, 200709, p.1095-107 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014503071A (ja) * | 2011-01-06 | 2014-02-06 | ライジェル ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Ampk活性化を測定するための全血アッセイ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2214698A2 (en) | 2010-08-11 |
WO2009054994A3 (en) | 2009-12-10 |
WO2009054994A2 (en) | 2009-04-30 |
US20110082189A1 (en) | 2011-04-07 |
US20160263140A1 (en) | 2016-09-15 |
US20190314395A1 (en) | 2019-10-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20190314395A1 (en) | Use of compounds activating sirt-3 for mimicking exercise | |
Bardai et al. | Selective toxicity by HDAC3 in neurons: regulation by Akt and GSK3β | |
Luo et al. | HDAC4 controls muscle homeostasis through deacetylation of myosin heavy chain, PGC-1α, and Hsc70 | |
Xu et al. | Myocardial oxidative stress contributes to transgenic β2‐adrenoceptor activation‐induced cardiomyopathy and heart failure | |
De Palma et al. | Endothelial nitric oxide synthase activation by tumor necrosis factor α through neutral sphingomyelinase 2, sphingosine kinase 1, and sphingosine 1 phosphate receptors: a novel pathway relevant to the pathophysiology of endothelium | |
Chen et al. | Activation of TRPV1 channel by dietary capsaicin improves visceral fat remodeling through connexin43-mediated Ca 2+ influx | |
Hung et al. | Quercetin is a potent anti‐atherosclerotic compound by activation of SIRT1 signaling under oxLDL stimulation | |
Aatsinki et al. | Metformin induces PGC‐1α expression and selectively affects hepatic PGC‐1α functions | |
Lira et al. | Nitric oxide and AMPK cooperatively regulate PGC‐1α in skeletal muscle cells | |
Bauer et al. | Seizure-induced up-regulation of P-glycoprotein at the blood-brain barrier through glutamate and cyclooxygenase-2 signaling | |
Boyle et al. | Metformin action on AMP‐activated protein kinase: a translational research approach to understanding a potential new therapeutic target | |
Burén et al. | Insulin action and signalling in fat and muscle from dexamethasone-treated rats | |
Miller et al. | Adiponectin suppresses gluconeogenic gene expression in mouse hepatocytes independent of LKB1-AMPK signaling | |
Pandey et al. | The LIM domain only 4 protein is a metabolic responsive inhibitor of protein tyrosine phosphatase 1B that controls hypothalamic leptin signaling | |
Zuo et al. | CTRP9 knockout exaggerates lipotoxicity in cardiac myocytes and high‐fat diet‐induced cardiac hypertrophy through inhibiting the LKB1/AMPK pathway | |
Pavlidou et al. | Metformin delays satellite cell activation and maintains quiescence | |
Jeske et al. | A-kinase anchoring protein 150 mediates transient receptor potential family V type 1 sensitivity to phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate | |
Yang et al. | The microbicidal and cytoregulatory roles of NADPH oxidases | |
Thotala et al. | Inhibition of glycogen synthase kinase 3β attenuates neurocognitive dysfunction resulting from cranial irradiation | |
Park et al. | Specific Sirt1 activator-mediated improvement in glucose homeostasis requires Sirt1-independent activation of AMPK | |
Yang et al. | Targeting mitochondria‐associated membranes as a potential therapy against endothelial injury induced by hypoxia | |
Anilkumar et al. | AMP‐activated protein kinase (AMPK)–induced preconditioning in primary cortical neurons involves activation of MCL‐1 | |
US20240165115A1 (en) | Compounds, Compositions and Methods of Treating or Preventing Acute Lung Injury | |
Premkumar et al. | Synergistic interaction between 17‐AAG and phosphatidylinositol 3‐kinase inhibition in human malignant glioma cells | |
Hurtado-Carneiro et al. | PAS kinase is a nutrient and energy sensor in hypothalamic areas required for the normal function of AMPK and mTOR/S6K1 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20111021 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20111021 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130730 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131030 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131107 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131120 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131127 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131224 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140130 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140930 |