JP2011167193A - 凝固因子viiポリペプチド - Google Patents
凝固因子viiポリペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011167193A JP2011167193A JP2011057881A JP2011057881A JP2011167193A JP 2011167193 A JP2011167193 A JP 2011167193A JP 2011057881 A JP2011057881 A JP 2011057881A JP 2011057881 A JP2011057881 A JP 2011057881A JP 2011167193 A JP2011167193 A JP 2011167193A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- factor vii
- vii polypeptide
- fvii
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6437—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】TF非依存的活性が増加した因子VIIポリペプチド、即ち、野生型の因子VIIaと比較して同等かまたはより高い活性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較してより低い組織因子結合親和性を示す新規な凝固因子VIIポリペプチド。および前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド構築物、前記ポリヌクレオチドを含みかつ発現させるベクターおよび宿主細胞、薬学的組成物、使用および治療方法。
【選択図】なし
Description
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が前記因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1のK18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379 から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309 から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1のK18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379 から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1のK18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379 から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309 から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1のK18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379 から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309 から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
b)野生型ヒトFVIIaを含む組成物と、組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す因子VIIポリペプチドを含む第二の組成物。
WO 01/83725, WO 02/22776, WO 02/077218, PCT/DK02/00635, デンマーク特許出願PA 2002 01423, デンマーク特許出願PA 2001 01627; WO 02/38162 (Scripps Research Institute)に開示されたFVII変異体; およびJP 2001061479 (Chemo-Sero-Therapeutic Res Inst.)に開示された増強された活性を有するFVIIa変異体が含まれる。
8T/E296V-FVII, L305V/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, S314E/K316H-FVII, S314E/K316Q-FVII, S314E/L305V-FVII, S314E/K337A-FVII, S314E/V158D-FVII, S314E/E296V-FVII, S314E/M298Q-FVII, S314E/V158T-FVII, K316H/L305V-FVII, K316H/K337A-FVII, K316H/V158D-FVII, K316H/E296V-FVII, K316H/M298Q-FVII, K316H/V158T-FVII, K316Q/L305V-FVII, K316Q/K337A-FVII, K316Q/V158D-FVII, K316Q/E296V-FVII, K316Q/M298Q-FVII, K316Q/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D-FVII, S314E/L305V/E296V-FVII, S314E/L305V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/K337A/E296V-FVII, S314E/L305V/K337A/V158D-FVII, S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V-FVII, S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V-FVII, S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D-FVII, K316H/L305V/E296V-FVII, K316H/L305V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T-FVII, K316H/L305V/K337A/V158T-FVII, K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/K337A/E296V-FVII, K316H/L305V/K337A/V158D-FVII, K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V-FVII, K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V-FVII, K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D-FVII, K316Q/L305V/E296V-FVII, K316Q/L305V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII, K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII, K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII, K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/K337A-FVII, F374Y/V158D-FVII, F374Y/E296V-FVII, F374Y/M298Q-FVII, F374Y/V158T-FVII, F374Y/S314E-FVII, F374Y/L305V-FVII, F374Y/L305V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D-FVII, F374Y/L305V/E296V-FVII, F374Y/L305V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T-FVII, F374Y/L305V/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E-FVII, F374Y/K337A/V158T-FVII, F374Y/K337A/M298Q-FVII, F374Y/K337A/E296V-FVII, F374Y/K337A/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q-FVII, F374Y/V158D/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q-FVII, F374Y/V158T/E296V-FVII, F374Y/E296V/S314E-FVII, F374Y/S314E/M298Q-FVII, F374Y/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158D-FVII, F374Y/L305V/K337A/E296V-FVII, F374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158D/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/E296V/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/S314E-FVII, F374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII, F374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E/V158T-FVII, F374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII, F374Y/K337A/S314E/E296V-FVII, F374Y/K337A/S314E/V158D-FVII, F374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII, F374Y/K337A/V158T/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII, F374Y/K337A/E296V/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII, F374Y/V158D/S314E/E296V-FVII, F374Y/V158D/M298Q/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E/M298Q-FVII, F374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII, F374Y/E296V/S314E/M298Q-FVII, F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/S314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, S52A-因子VII, S60A-因子VII; R152E-因子VII, S344A-因子VII, Glaドメインを欠く因子VIIa; および P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII, K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII, K143N/N145T/R315N/V317T-FVII; および 233Thrから240Asnまでのアミノ酸配列内に置換、付加また欠失を有するFVII、304Argから329Cysまでのアミノ酸配列内に置換、付加または欠失を有するFVII、が含まれるがこれらに限定されない。
上述したパラメータを有するGAPプログラムは有用である。上述したパラメータは、GAPアルゴリズムを使用するポリペプチド比較についてのデフォルトパラメータである(エンドギャップについてはペナルティを課さない)。
上述したパラメータを有するGAPプログラムは有用である。上述したパラメータは、核酸分子比較のためのデフォルトパラメータである。
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y.)。
施形態において、SEQ ID NO: 1のF275が、システインアミノ酸残基と置換される。一つの実施形態において、SEQ ID NO: 1のR277が、システインアミノ酸残基と置換される。一つの実施形態において、SEQ ID NO: 1のM306が、システインアミノ酸残基と置換される。一つの実施形態において、SEQ ID NO: 1のQ308が、システインアミノ酸残基と置換される。一つの実施形態において、SEQ ID NO: 1のD309が、システインアミノ酸残基と置換される。一つの実施形態において、SEQ ID NO: 1のR379が、システインアミノ酸残基と置換される。
b)野生型ヒトFVIIaを含む第一の組成物と、組み換え体野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を有し、かつ組み換え体野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を有する因子VIIポリペプチドを含む第二の組成物。
例1
FVII-(S43N), FVII-(K62E), FVII-(Q64E), FVII-(I69F), FVII-(K62E/I69A), FVII-(Q64E/I69A), FVII-(Q62E/Q64E/I69A), FVII-(K62E/I69F), FVII-(Q64E/I69F), FVII-(K62E/Q64E/I69F), FVII-(S43C), FVII-(I69C), FVII-(Q64C), FVII-(M306C), FVII-(R277C), FVII-(I69N/F71T), FVII-(F71N/L73T), FVII-(R277N), および FVII-(D309N/L311T)をコードするDNA構築物:
FVII-(S43N), FVII-(K62E), FVII-(Q64E), FVII-(I69F), FVII-(K62E/I69A), FVII-(Q64E/I69A), FVII-(Q62E/Q64E/I69A), FVII-(K62E/I69F), FVII-(Q64E/I69F), FVII-(K62E/Q64E/I69F), FVII-(S43C), FVII-(I69C), FVII-(Q64C), FVII-(M306C), FVII-(R277C), FVII-(I69N/F71T), FVII-(F71N/L73T), FVII-(R277N), および FVII-(D309N/L311T)をコードするDNA構築物は、ヒトFVIIを挿入するスーパーコイル化された二本鎖DNAベクターと、所望の変異を含む二つの合成プライマーとを使用する部位特異的突然変異誘発によって調製された。以下のプライマーが使用された:
FVII-(S43N)について:
5’- GGACGAAGCTGTTCTGGATTAACTACAGTGATGGGGACCAG-3’ (SEQ ID NO:2)
5’- CTGGTCCCCATCACTGTAGTTAATCCAGAACAGCTTCGTCC-3’(SEQ ID NO:3)
FVII-(K62E)について:
5’- GGGGGCTCCTGCGAGGACCAGCTCCAG-3’(SEQ ID NO:4)
5’- CTGGAGCTGGTCCTCGCAGGAGCCCCC-3’(SEQ ID NO:5)
FVII-(Q64E)について:
5’- GGGCTCCTGCAAGGACGAGCTCCAGTCCTATATCTGC-3’(SEQ ID NO:6)
5’- GCAGATATAGGACTGGAGCTCGTCCTTGCAGGAGCCC-3’(SEQ ID NO:7)
FVII-(I69F)について:
5’- CCAGCTCCAGTCCTATTTCTGCTTCTGCCTCCC-3’(SEQ ID NO:8)
5’- GGGAGGCAGAAGCAGAAATAGGACTGGAGCTGG-3’(SEQ ID NO:9)
FVII-(K62E/I69A)について:
5’- GGGGGCTCCTGCGAGGACCAGCTCCAGTCCTATGCCTGCTTCTGCCTC-3’(SEQ ID NO:10)
5’- GAGGCAGAAGCAGGCATAGGACTGGAGCTGGTCCTCGCAGGAGCCCCC-3’(SEQ ID NO:11)
FVII-(Q64E/I69A)について:
5’- GGGCTCCTGCAAGGACGAGCTCCAGTCCTATGCCTGCTTCTGCCTCC-3’(SEQ ID NO:12)
5’- GGAGGCAGAAGCAGGCATAGGACTGGAGCTCGTCCTTGCAGGAGCCC-3’(SEQ ID NO:13)
FVII-(K62E/Q64E/I69A)について:
5’- GGGGGCTCCTGCGAGGACGAGCTCCAGTCCTATGCCTGCTTCTGCCTCC-3’(SEQ ID NO:14)
5’- GGAGGCAGAAGCAGGCATAGGACTGGAGCTCGTCCTCGCAGGAGCCCCC-3’(SEQ ID NO:15)
FVII-(S43C)について:
5'-GGACGAAGCTGTTCTGGATTTGCTACAGTGATGGGGAC-3’(SEQ ID NO:16)
5'-GTCCCCATCACTGTAGCAAATCCAGAACAGCTTCGTCC-3’(SEQ ID NO:17)
FVII-(I69C)について:
5'-CCAGCTCCAGTCCTATTGCTGCTTCTGCCTCCCTG-3’(SEQ ID NO:18)
5'-CAGGGAGGCAGAAGCAGCAATAGGACTGGAGCTGG-3’(SEQ ID NO:19)
FVII-(Q64C)について:
5'-GGGCTCCTGCAAGGACTGCCTCCAGTCCTATATCTG-3’(SEQ ID NO:20)
5'-CAGATATAGGACTGGAGGCAGTCCTTGCAGGAGCCC-3’(SEQ ID NO:21)
FVII-(R277C)について:
5'-GGACGCTGGCCTTCGTGTGCTTCTCATTGGTCAGCG-3’(SEQ ID NO:22)
5'-CGCTGACCAATGAGAAGCACACGAAGGCCAGCGTCC-3’(SEQ ID NO:23)
FVII-(M306C)について:
5'-CAACGTGCCCCGGCTGTGCACCCAGGACTGCCTGC-3’(SEQ ID NO:24)
5'-GCAGGCAGTCCTGGGTGCACAGCCGGGGCACGTTG-3’(SEQ ID NO:25)
FVII-(I69N/F71T)について:
5'-CCAGCTCCAGTCCTATAACTGCACCTGCCTCCCTGCCTTCG-3’(SEQ ID NO:26)
5'-CGAAGGCAGGGAGGCAGGTGCAGTTATAGGACTGGAGCTGG-3’(SEQ ID NO:27)
FVII-(F71N/L73T)について:
5'-CCAGTCCTATATCTGCAACTGCACCCCTGCCTTCGAGGGCCG-3’(SEQ ID NO:28)
5'-CGGCCCTCGAAGGCAGGGGTGCAGTTGCAGATATAGGACTGG-3’(SEQ ID NO:29)
FVII-(R277N)について:
5'-GGACGCTGGCCTTCGTGAACTTCTCATTGGTCAGCGG-3’(SEQ ID NO:30)
5'-CCGCTGACCAATGAGAAGTTCACGAAGGCCAGCGTCC-3’(SEQ ID NO:31)
FVII-(D309N/L311T)について:
5'-CGGCTGATGACCCAGAACTGCACCCAGCAGTCACGGAAGG-3’(SEQ ID NO:32)
5'-CCTTCCGTGACTGCTGGGTGCAGTTCTGGGTCATCAGCCG-3’(SEQ ID NO:33)
ベクター挿入の反対の鎖に各々相補的なオリゴヌクレオチドプライマーを、Pfu DNAポリメラーゼによって温度循環中に伸長させた。プライマーの組み込みでは、ねじれ型の切れ目を含む変異型プラスミドを作製した。温度循環に続いて、該作製物を、メチル化およびヘミメチル化されたDNAに特異的であるDpnlで処理し、親DNAの鋳型を消化して変異を含む合成されたDNAを選択した。
FVII-(S43N), FVII-(K62E), FVII-(Q64E), FVII-(I69F), FVII-(K62E/I69A), FVII-(Q64E/I69A), FVII-(Q62E/Q64E/I69A), FVII-(K62E/I69F), FVII-(Q64E/I69F), FVII-(K62E/Q64E/I69F), FVII-(S43C), FVII-(I69C), FVII-(Q64C), FVII-(M306C), FVII-(R277C), FVII-(I69N/F71T), FVII-(F71N/L73T), FVII-(R277N), および FVII-(D309N/L311T)の調製。
5 mM EDTAおよび10 mM Trisの添加後、8.0へのpHの調節後、および水を加えることによる10〜11mS/cmへの伝導率の調節後、条件を整えた培地をQ Sepharose Fast Flow (Pharmacia Biotech)の50mlカラム上に搭載した。タンパク質の溶出を、10mM Tris, 50mM NaCl, pH8.0から10mM Tris, 50mM NaCl, 25mM CaCl2, pH8.0までの勾配によって達成した。様々なFVIIポリペプチドを含む画分を貯留し、CNBrで活性化されたSepharose 4B (Pharmacia Biotech)に結合したモノクローナル抗体F1A2 (Novo Nordisk, Bagsvard, Denmark)を含む25mlカラムに加えた。
インビトロ加水分解アッセイ
天然(野生型)因子VIIaおよび因子VIIa変異体を、これらの特定の活性を直接比較するために並行して試験した。試験をマイクロタイタープレートで行う(MaxiSorp, Nunc, Denmark)。色素生産性基質D-Ile-Pro-Arg-p-ニトロアニリド(S-2288, Chromogenix, Sweden)、最終濃度1mMを、0.1M NaCl、5mM CaCl2および1mg/mlウシ血清アルブミンを含む50mM Hepes, pH 7.4中の因子VIIa(最終濃度100nM)に加えた。405nmでの吸収度を、SpectraMax(登録商標) 340プレートリーダー(Molecular Devices, USA)において継続的に測定する。20分のインキュベーション中に得られた吸光度を、酵素を含まないブランクウェルの吸光度を引いた後、変異体の活性と野生型因子VIIaの活性との間の比率を計算するために使用する。
比率=(A405 nm因子VIIa変異体)/(A405 nm因子VIIa野生型)。
インビトロタンパク質分解アッセイ
天然(野生型)因子VIIaおよび因子VIIa変異体を、これらの特定の活性を直接比較するために並行して試験した。試験をマイクロタイタープレートで行う(MaxiSorp, Nunc, Denmark)。0.1M NaCl、5mM CaCl2および1mg/mlウシ血清アルブミンを含む100μL 50mM Hepes, pH 7.4中の因子VIIa(10nM)および因子X(0.8μM)を15分間にわたってインキュベートする。その後、因子Xの切断を、0.1M NaCl, 20mM EDTAおよび1 mg/mlウシ血清アルブミンを含む50μL 50mM Hepes, pH7.4の添加によって停止させる。生成された因子Xaの量を、色素生産性基質Z-D-Arg-Gly-Arg-p-ニトロアニリド(S-2765、Chromogenix, Sweden)、最終濃度0.5mMの添加によって測定した。405nmでの吸光度を、SpectraMax(登録商標) 340プレートリーダー(Molecular Devices, USA)において継続的に測定する。10分間にわたって得られた吸光度を、FVIIaを含まないブランクウェルの吸光度を引いた後、変異体のタンパク質分解活性と野生型因子VIIaのタンパク質分解活性との間の比率を計算するために使用する。
比率=(A405 nm因子VIIa変異体)/(A405 nm因子VIIa野生型)。
TF結合親和性アッセイ−バイオセンサーアッセイ:
FVIIポリペプチドを、FVIIポリペプチドの標準的溶液を不動化されたTFを有するチップを通過させることによって、Biacore機器で試験する。これは、150mM NaCl, 10mM CaCl2および0.0003%ポリソルベート20を含む10 mM hepes pH 7.4中のTFの異なる濃度によって追従される。Kdを統合されたBiacore評価ソフトウェアを使用するセンサグラムから計算する。
Claims (44)
- 組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す因子VIIポリペプチドであって、以下のi)および/またはii)および/またはiii)から選択される因子VIIポリペプチド。
i)異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された1以上のアミノ酸置換を含む因子VIIポリペプチド(式中、
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。 - 異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された一以上のアミノ酸置換を含む、請求項1に記載の因子VIIポリペプチド(式中、
X1は、E, D, A, または F;
X2は、E, D, K, A, F, または N;
X3は、E, D, K, R, A, または F;
X4は、D, A, または F;
X5は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6は、E, D, K, R, A, または F;
X7は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y)。 - SEQ ID NO: 1のK18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379 から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が前記因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる、請求項1または2に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309 から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む、請求項1ないし3のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。
- SEQ ID NO: 1の位置K18のアミノ酸に対応するアミノ酸が、E, D, A, およびFからなる群から選択されたアミノ酸で置換された、請求項1ないし4のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置R36のアミノ酸に対応するアミノ酸が、E, D, K, A, F, およびNからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし5のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置S43のアミノ酸に対応するアミノ酸が、E, D, K, R, A, およびFからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし6のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置K62のアミノ酸に対応するアミノ酸が、D, A, およびFからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし7のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置Q64のアミノ酸に対応するアミノ酸が、E, D, K, R, A, F, およびNからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし8のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置L65のアミノ酸に対応するアミノ酸が、E, D, K, R, A, およびFからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし9のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置I69のアミノ酸に対応するアミノ酸が、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし10のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置F71のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, および Wからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし11のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置L73のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし12のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置P74のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし13のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置E77のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし14のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置G78のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし15のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置R79のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし16のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置K85のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし17のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置Q88のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし18のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置N93のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし19のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置F275のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし20のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置R277のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし21のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置M306のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし22のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置T307のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし23のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置Q308のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし24のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置D309のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし25のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- SEQ ID NO: 1の位置R379のアミノ酸に対応するアミノ酸が、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, および Yからなる群から選択されるアミノ酸で置換された、請求項1ないし26のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチド。
- FVII-(S43N), FVII-(K62E), FVII-(Q64E), FVII-(I69F), FVII-(K62E/I69A), FVII-(Q64E/I69A), FVII-(Q62E/Q64E/I69A), FVII-(K62E/I69F), FVII-(Q64E/I69F), FVII-(K62E/Q64E/I69F), FVII-(S43C), FVII-(I69C), FVII-(Q64C), FVII-(M306C), FVII-(R277C), FVII-(I69N/F71T), FVII-(F71N/L73T), FVII-(R277N), および FVII-(D309N/L311T)からなる群から選択された、請求項1に記載の因子VIIポリペプチド。
- 請求項1ないし27のいずれか1項に記載の因子VIIポリペプチドであって、L305V, L305V/M306D/D309S, L305I, L305T, F374P, V158T/M298Q, V158D/E296V/M298Q, K337A, M298Q, V158D/M298Q, L305V/K337A, V158D/E296V/M298Q/L305V, V158D/E296V/M298Q/K337A, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A, K157A, E296V, E296V/M298Q, V158D/E296V, V158D/M298K, S336G, L305V/K337A, L305V/V158D, L305V/E296V, L305V/M298Q, L305V/V158T, L305V/K337A/V158T, L305V/K337A/M298Q, L305V/K337A/E296V, L305V/K337A/V158D, L305V/V158D/M298Q, L305V/V158D/E296V, L305V/V158T/M298Q, L305V/V158T/E296V, L305V/E296V/M298Q, L305V/V158D/E296V/M298Q, L305V/V158T/E296V/M298Q, L305V/V158T/K337A/M298Q, L305V/V158T/E296V/K337A, L305V/V158D/K337A/M298Q, L305V/V158D/E296V/K337A, L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A, L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, S314E/K316H, S314E/K316Q, S314E/L305V, S314E/K337A, S314E/V158D, S314E/E296V, S314E/M298Q, S314E/V158T, K316H/L305V, K316H/K337A, K316H/V158D, K316H/E296V, K316H/M298Q, K316H/V158T, K316Q/L305V, K316Q/K337A, K316Q/V158D, K316Q/E296V, K316Q/M298Q, K316Q/V158T, S314E/L305V/K337A, S314E/L305V/V158D, S314E/L305V/E296V, S314E/L305V/M298Q, S314E/L305V/V158T, S314E/L305V/K337A/V158T, S314E/L305V/K337A/M298Q, S314E/L305V/K337A/E296V, S314E/L305V/K337A/V158D, S314E/L305V/V158D/M298Q, S314E/L305V/V158D/E296V, S314E/L305V/V158T/M298Q, S314E/L305V/V158T/E296V, S314E/L305V/E296V/M298Q, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q, S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q, S314E/L305V/V158T/E296V/K337A, S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q, S314E/L305V/V158D/E296V/K337A, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, K316H/L305V/K337A, K316H/L305V/V158D, K316H/L305V/E296V, K316H/L305V/M298Q, K316H/L305V/V158T, K316H/L305V/K337A/V158T, K316H/L305V/K337A/M298Q, K316H/L305V/K337A/E296V, K316H/L305V/K337A/V158D, K316H/L305V/V158D/M298Q, K316H/L305V/V158D/E296V, K316H/L305V/V158T/M298Q, K316H/L305V/V158T/E296V, K316H/L305V/E296V/M298Q, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q, K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q, K316H/L305V/V158T/E296V/K337A, K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q, K316H/L305V/V158D/E296V/K337A , K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, K316Q/L305V/K337A, K316Q/L305V/V158D, K316Q/L305V/E296V, K316Q/L305V/M298Q, K316Q/L305V/V158T, K316Q/L305V/K337A/V158T, K316Q/L305V/K337A/M298Q, K316Q/L305V/K337A/E296V, K316Q/L305V/K337A/V158D, K316Q/L305V/V158D/M298Q, K316Q/L305V/V158D/E296V, K316Q/L305V/V158T/M298Q, K316Q/L305V/V158T/E296V, K316Q/L305V/E296V/M298Q, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q, K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q, K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A, K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q, K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A , K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, F374Y/K337A, F374Y/V158D, F374Y/E296V, F374Y/M298Q, F374Y/V158T, F374Y/S314E, F374Y/L305V, F374Y/L305V/K337A, F374Y/L305V/V158D, F374Y/L305V/E296V, F374Y/L305V/M298Q, F374Y/L305V/V158T, F374Y/L305V/S314E, F374Y/K337A/S314E, F374Y/K337A/V158T, F374Y/K337A/M298Q, F374Y/K337A/E296V, F374Y/K337A/V158D, F374Y/V158D/S314E, F374Y/V158D/M298Q, F374Y/V158D/E296V, F374Y/V158T/S314E, F374Y/V158T/M298Q, F374Y/V158T/E296V, F374Y/E296V/S314E, F374Y/S314E/M298Q, F374Y/E296V/M298Q, F374Y/L305V/K337A/V158D, F374Y/L305V/K337A/E296V, F374Y/L305V/K337A/M298Q, F374Y/L305V/K337A/V158T, F374Y/L305V/K337A/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V, F374Y/L305V/V158D/M298Q, F374Y/L305V/V158D/S314E, F374Y/L305V/E296V/M298Q, F374Y/L305V/E296V/V158T, F374Y/L305V/E296V/S314E, F374Y/L305V/M298Q/V158T, F374Y/L305V/M298Q/S314E, F374Y/L305V/V158T/S314E, F374Y/K337A/S314E/V158T, F374Y/K337A/S314E/M298Q, F374Y/K337A/S314E/E296V, F374Y/K337A/S314E/V158D, F374Y/K337A/V158T/M298Q, F374Y/K337A/V158T/E296V, F374Y/K337A/M298Q/E296V, F374Y/K337A/M298Q/V158D, F374Y/K337A/E296V/V158D, F374Y/V158D/S314E/M298Q, F374Y/V158D/S314E/E296V, F374Y/V158D/M298Q/E296V, F374Y/V158T/S314E/E296V, F374Y/V158T/S314E/M298Q, F374Y/V158T/M298Q/E296V, F374Y/E296V/S314E/M298Q, F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E, F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E, F374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A, F374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A, F374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E, F374Y/L305V/V158D/K337A/S314E, F374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E, F374Y/V158D/E296V/K337A/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A, F374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V/S314E, F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A, F374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E, F374Y/L305V/V158T/K337A/S314E, F374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E, F374Y/V158T/E296V/K337A/S314E, F374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q, F374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A, F374Y/L305V/V158T/E296V/K337A, F374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E, F374Y/L305V/V158T/E296V/S314E, F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E, F374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T, F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E, F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E, S52A, S60A; R152E, S344A, P11Q/K33E, T106N, K143N/N145T, V253N, R290N/A292T, G291N, R315N/V317T, および K143N/N145T/R315N/V317Tからなる群から選択されたアミノ酸置換基を含む因子VIIポリペプチド; または233Thrから240Asnまでのアミノ酸配列内に置換、付加または欠失を有する因子VIIポリペプチド; または304Argから329Cysまでのアミノ酸配列内に置換、付加または欠失を有する因子VIIポリペプチド。
- 前記因子VIIポリペプチドの解離定数Kdが、5nMよりも高い( 例えば7 nMより高い、例えば10 nMより高い、例えば20 nMより高い、例えば30 nMより高い、例えば50 nMより高い、例えば100 nMより高い、例えば200 nMより高い、例えば300 nMより高い、例えば400 nMより高い、例えば500 nMより高い、例えば1μMより高い )、請求項1ないし29のいずれか1項に記載の因子VIIポリペプチド。
- 組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す因子VIIポリペプチドを含む組成物であって、以下のi)および/またはii)および/またはiii)から選択される因子VIIポリペプチドを含む組成物。
i)異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された1以上のアミノ酸置換を含む因子VIIポリペプチド(式中、
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。 - 請求項1ないし30のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチドを含む組成物。
- 組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す因子VIIポリペプチドを含む薬学的組成物であって、以下のi)および/またはii)および/またはiii)から選択される因子VIIポリペプチドを含む薬学的組成物。
i)異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された1以上のアミノ酸置換を含む因子VIIポリペプチド(式中、
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。 - 請求項1ないし30のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチドと、任意的に薬学的に許容可能なキャリアとを含む薬学的組成物。
- 請求項1ないし30のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチドをコードするポリヌクレオチド構築物。
- ベクターである請求項35に記載のポリヌクレオチド構築物。
- 請求項35または36に記載のポリヌクレオチド構築物を含む真核生物宿主細胞。
- 哺乳類起源である請求項37に記載の真核生物宿主細胞。
- 前記細胞が、CHO細胞、BHK細胞およびHEK細胞からなる群から選択される請求項38に記載の真核生物宿主細胞。
- 請求項1ないし30のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチドを生成する方法であって、前記方法が、前記ポリヌクレオチド構築物由来のタンパク質の合成を可能にする条件のもと、請求項37ないし39のいずれか一項に記載の真核生物宿主細胞を適切な増殖培地中で培養し、前記因子VIIポリペプチドを培養液から回収することを含む方法。
- 組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す因子VIIポリペプチドであって、以下のi)および/またはii)および/またはiii)から選択される因子VIIポリペプチドの、出血性疾患の治療のためまたは正常な止血系の増強のための薬物の調製における使用。
i)異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された1以上のアミノ酸置換を含む因子VIIポリペプチド(式中、
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。 - 請求項1ないし30のいずれか一項に記載の因子VIIポリペプチドの、出血性疾患の治療のためまたは正常な止血系の増強のための薬物の調製における使用。
- 患者の出血または出血性疾患の治療または正常な止血系の増強のための方法において、前記方法が、組換え体の野生型ヒト因子VIIaよりも低い組織因子結合親和性を示し、かつ組換え体の野生型ヒト因子VIIaと比較して実質的に同等または増加した活性を示す治療的または予防的有効量の因子VIIポリペプチドであって、以下のi)および/またはii)および/またはiii)から選択される因子VIIポリペプチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
i)異なるアミノ酸が組織因子結合親和性を減少させる、SEQ ID NO: 1の位置のアミノ酸に対応するK18X1, R36X2, S43X3, K62X4, Q64X5, L65X6, I69X7, F71X8, L73X9, P74X10, E77X11, G78X12, R79X13, K85X14, Q88X15, N93X16, F275X17, R277X18, M306X19, T307X20, Q308X21, D309X22, または R379X23から選択された1以上のアミノ酸置換を含む因子VIIポリペプチド(式中、
X1 は、E, D, A, または F;
X2 は、E, D, K, A, F, または N;
X3 は、E, D, K, R, A, または F;
X4 は、D, A, または F;
X5 は、E, D, K, R, A, F, または N;
X6 は、E, D, K, R, A, または F;
X7 は、C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X8 は、A, G, H, I, K, L, M, P, R, S, T, V, または W;
X9 は、A, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X10 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X11 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X12 は、A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X13 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X14 は、A, D, E, F, G, I, L, M, P, S, T, V, W, または Y;
X15 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X16 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X17 は、A, D, E, G, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X18 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y;
X19 は、A, E, F, G, H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, W, または Y;
X20 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, V, W, または Y;
X21 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, R, S, T, V, W, または Y;
X22 は、A, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, または Y; および
X23 は、A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, S, T, V, W, または Y);
および/または
ii)SEQ ID NO: 1の K18, R36, K62, Q64, L65, I69, F71, L73, P74, E77, G78, R79, K85, Q88, N93, F275, R277, M306, Q308, D309, または R379から選択された位置のアミノ酸に対応する一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸残基で置換され、前記システインアミノ酸残基が組織因子結合親和性を減少させ、かつ前記システインアミノ酸残基が任意的には化学基と結合し、前記化学基が因子VIIポリペプチドの分子量を増加させる因子VIIポリペプチド;
および/または
iii)SEQ ID NO: 1のR36, Q64, I69, F71, P74, E77, G78, Q88, N93, F275, M306, T307, または D309から選択された位置で始まるアミノ酸に対応するアミノ酸置換によって導入された一以上のNグリコシル化部位N-Xaa-S/Tを含む因子VIIポリペプチド(式中、Xaaは、Pを除く任意のアミノ酸であり、導入されたN-グリコシル化部位は、組織因子結合親和性を減少させる)。 - 患者の出血または出血性疾患の治療ためかまたは正常な止血系の増強のための方法であって、前記方法が、請求項1ないし30のいずれか一項に記載の治療的または予防的有効量の因子VIIポリペプチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200301296 | 2003-09-09 | ||
DKPA200301296 | 2003-09-09 | ||
US50341803P | 2003-09-16 | 2003-09-16 | |
US60/503,418 | 2003-09-16 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006525627A Division JP4824559B2 (ja) | 2003-09-09 | 2004-09-09 | 凝固因子viiポリペプチド |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011167193A true JP2011167193A (ja) | 2011-09-01 |
Family
ID=34276708
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011057881A Withdrawn JP2011167193A (ja) | 2003-09-09 | 2011-03-16 | 凝固因子viiポリペプチド |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1664291B1 (ja) |
JP (1) | JP2011167193A (ja) |
WO (1) | WO2005024006A2 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2381110T3 (es) | 2003-09-09 | 2012-05-23 | Novo Nordisk Health Care Ag | Polipéptidos de factor VII de coagulación |
EP1893632B1 (en) | 2005-06-17 | 2015-08-12 | Novo Nordisk Health Care AG | Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine |
FR2901707B1 (fr) | 2006-05-31 | 2017-09-29 | Lab Francais Du Fractionnement | Composition de facteur vii recombinant ou transgenique, chaque molecule de facteur vii possedant deux sites de n-glycosylation a motifs glycanniques definis |
EP2046372A2 (en) * | 2006-07-17 | 2009-04-15 | Novo Nordisk Health Care AG | Factor viia analogues with increased activity for treating thrombocytopenia |
FR2904558B1 (fr) * | 2006-08-01 | 2008-10-17 | Lab Francais Du Fractionnement | "composition de facteur vii recombinant ou transgenique, presentant majoritairement des formes glycanniques biantennees, bisialylees et non fucosylees" |
TWI538916B (zh) | 2008-04-11 | 2016-06-21 | 介控生化科技公司 | 經修飾的因子vii多肽和其用途 |
EP2444491B1 (en) | 2008-04-21 | 2016-11-16 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Hyperglycosylated human coagulation factor IX |
ES2773766T3 (es) | 2008-12-19 | 2020-07-14 | Baxalta GmbH | Inhibidores de TFPI y métodos de uso |
AU2011227714B2 (en) | 2010-03-19 | 2014-09-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | TFPI inhibitors and methods of use |
EP2588499B1 (en) | 2010-06-30 | 2020-04-08 | Novo Nordisk A/S | Antibodies that are capable of specifically binding tissue factor pathway inhibitor |
KR20140012082A (ko) | 2011-03-02 | 2014-01-29 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 활성화된 혈소판에서 tlt-1을 표적화하는 응고 인자 |
CA2867363C (en) | 2012-03-21 | 2023-02-28 | Baxter International Inc. | Tfpi inhibitors and methods of use |
CN104717973A (zh) | 2012-10-10 | 2015-06-17 | 诺和诺德保健Ag(股份有限公司) | 因子vii多肽的液体药物组合物 |
US20210069306A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-03-11 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified factor vii polypeptides for subcutaneous administration and on-demand treatment |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003521930A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | マキシゲン・エイピーエス | 第VII因子または第VIIa因子様分子 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002218029A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-05-21 | The Scripps Research Institute | Modified factor viia |
-
2004
- 2004-09-09 EP EP04762814A patent/EP1664291B1/en not_active Not-in-force
- 2004-09-09 WO PCT/DK2004/000594 patent/WO2005024006A2/en active Application Filing
-
2011
- 2011-03-16 JP JP2011057881A patent/JP2011167193A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003521930A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | マキシゲン・エイピーエス | 第VII因子または第VIIa因子様分子 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6010041364; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 1996, p.14379-84 * |
JPN6014000211; Eur. J. Biochem vol.251, 1998, pp.382-388 * |
JPN6014000213; ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS vol.326 no.1, 1996, pp.145-151 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2005024006A3 (en) | 2005-04-28 |
EP1664291B1 (en) | 2012-02-29 |
EP1664291A2 (en) | 2006-06-07 |
WO2005024006A8 (en) | 2006-06-15 |
WO2005024006A2 (en) | 2005-03-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220073895A1 (en) | Human coagulation factor vii polypeptides | |
US8674074B2 (en) | Coagulation factor VII polypeptides | |
JP2011167193A (ja) | 凝固因子viiポリペプチド | |
AU2002333211B2 (en) | Human coagulation factor VII polypeptides | |
JP4597678B2 (ja) | ヒト凝固因子viiポリペプチド | |
EP1451315B1 (en) | Human coagulation factor vii polypeptides | |
US6960657B2 (en) | Human coagulation factor VII polypeptides | |
KR20030085041A (ko) | 응고 인자 ⅶ 유도체 | |
US20070037746A1 (en) | Novel compounds | |
US20090011992A1 (en) | Human Coagulation Factor VII Polypeptides | |
US6911323B2 (en) | Human coagulation factor VII polypeptides | |
EP1646398A2 (en) | Formulations comprising factor viia and a factor vii related polypeptide | |
US20060116324A1 (en) | Novel formulations |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110415 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121016 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130108 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130111 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130416 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140114 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20140513 |