JP2011152324A - 脳内物質測定用電極 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】高強度金属針の表面に3〜8%ホウ素原料混入ダイヤモンドが蒸着してなり、直径0.01〜0.3mm、長さ0.02〜2.0mmの微小針状電極部を有する脳内物質測定用電極。
【選択図】図1
Description
従って本発明の課題は、ヒトを含む大型動物の脳に刺入しても折れない十分な強度を有し、かつ高感度に脳内物質を測定できる微小電極を提供することにある。
また、本発明は、上記電極を脳内に刺入し、定電位アンペロメトリー及びサイクリックボルタメトリーにより脳内物質の変動を測定することを特徴とする脳内物質変動の測定方法を提供するものである。
直径0.3mm長さ3cmの細いタングステン針表面に5%ホウ素原料混入ダイヤモンド(BDD)を蒸着させ、先端部以外を絶縁した(図1)。まずタングステンロッドを針状とするため先端部分を2M水酸化ナトリウム(NaOH)中3Vクロノアンペロメトリ(CA)により電解研磨し、先端経を約10〜20μm、テーパー角3.8度とした。その後、酸化皮膜を除去するためにフッ化水素(HF)中に20分浸漬した。あるいは同様の形態の加工品(有明マテリアル株式会社)を使用した.タングステン表面におけるダイヤモンド層成長を促進するため、ダイヤモンドパウダーをイソプロパノール中で90分間核付け処理した。針状に成型した金属針を水素プラズマ中に置き、一方で炭素源及びホウ素源を含む溶液を水素ガスによりバブリングすることで気化させ、これを水素プラズマ中に導入することで表面にダイヤモンド層を形成させる。すなわち、作成したタングステン針をプラズマ装置中(ASTeX Corp.図2)で水素流量300sscm、プラズマ出力2500W、圧力60Torr、ステージ温度700〜900℃にてダイヤモンド層を蒸着した。初め5時間は1%ホウ素仕込み(トリメトキシボラン4.05mL/アセトン50mL)、続く5時間は5%ホウ素仕込み(トリメトキシボラン18.5mL/アセトン40mL)で二段生成させた。1%ホウ素時間を短縮した場合はアンペロメトリーに使用可能な電極ができなかった(表1)。BDD微小電極を作成した先端1mm以外をエポキシ樹脂及びカシュー塗料を用いて絶縁し、安定した電気化学センサーとして使用できる形状に成型した(図1)。先端から1.0mmの範囲を除いてエポキシ樹脂(セメダイン1565)を塗布し先端を電極として確保した。ダイヤモンド層には多くの場合微小な穴があり、タングステン面が露出して電気化学計測に大きな障害となる。ダイヤモンド剥離部分を実体顕微鏡下に探索し、剥離部分にエポキシ樹脂を点状に塗布し絶縁した。
BDD微小電極は中性燐酸緩衝液(PBS)中のドパミンを高感度で検出可能であった(図3、4、5)。銀塩化銀電極を参照電極及び対電極とし、電極を+600mVに保持した定電位アンペロメトリーを用いた(図3、4)。図3では、中性燐酸緩衝液(PBS)が流れる噴水中に電極を浸漬しポテンショスタット及び記録用コンピュータに接続し電気化学測定を行い、試験化合物を含むPBS液に流路を切り替えることができる。図3にアンペロメトリー法によるin−vitroでのドパミン検出試験結果を示す。ドパミンを40、200、1000nM含む液に順次切り替え、測定電流の変動を測定した(図4)。また、反応分子の電位依存性を同定可能なサイクリックボルタメトリー(−0.2V to 1.5V、400V/s)による検出も可能であった(図5)。図5では、ドパミンを40、200、1000nM含む液に順次切り替え、測定電流の変動を測定した。
同一の微小電極の部分を段階的に絶縁塗装して比較した。
2本の5%ホウ素混入微小電極の結果の平均を表2及び図6に示す。
0.6V定電位アンペロメトリー及びFSCV(−0.2 to 1.5V)により1000nMドパミンによる振幅のその直前のノイズ標準偏差SDに対する比率をS/N比とした。
良好なS/N比を得るためには長さ0.3mm以上必要であった反面、電極露出部が長いと流速変動に対するノイズ電流が生じやすい性質が見られた。従って、電極長は0.2〜2.0mm、特に0.3〜0.7mmが好ましいことがわかった。
脳内での測定が可能であるか検証するために、本電極をマウス脳線条体に刺入し電気刺激によりドパミン放出を生じさせたところ、それをリアルタイムで検出可能であった(図7、表3)。図7では、ドパミン神経路を電気刺激した際の線条体における電流変動を示す。横軸0秒の時点から30Hz12発電気刺激を与えた。表3では、ドパミン神経路(MFB)を30Hz刺激パルス数による検出電流をS/N比で示し、ダイヤモンド電極アンペロメトリー(BDD−ampero)及び同時に行った従来法カーボンファイバーによるサイクリックボルタメトリー法(cf−FSCV)と比較した。
大型脳における利用を検証するために、サル線条体に刺入し(図8)ジュースを報酬として中脳ドパミン神経を活動せしめたところ(Schultz W.Behavioral dopamine signals.Trends Neurosci. 2007 May;30(5):203-10.)、報酬予告信号後のドパミン放出を検出可能であった(図9)。
Claims (9)
- 高強度金属針の表面に3〜8%ホウ素原料混入ダイヤモンドが蒸着してなり、直径0.01〜0.3mm、長さ0.02〜2.0mmの微小針状電極部を有することを特徴とする脳内物質測定用電極。
- 針状電極部の長さが0.2〜2.0mmである請求項1記載の脳内物質測定用電極。
- 高強度金属針の表面に0.5〜2%ホウ素原料混入ダイヤモンドが蒸着し、その表面に3〜8%ホウ素原料混入ダイヤモンドが蒸着している請求項1又は2記載の脳内物質測定用電極。
- 微小針状電極部の内部金属の点状露出部分が樹脂の点状塗布により充填されている請求項1〜3のいずれか1項記載の脳内物質測定用電極。
- 全長が10cm以上であり、先端部の微小電極部以外が樹脂塗布により絶縁されたものである請求項1〜4のいずれか1項記載の脳内物質測定用電極。
- 高強度金属がタングステンである請求項1〜5のいずれか1項記載の脳内物質測定用電極。
- 脳内物質が脳内アミンである請求項1〜6のいずれか1項記載の脳内物質測定用電極。
- 脳内刺入用電極である請求項1〜7のいずれか1項記載の脳内物質測定用電極。
- 請求項1〜8のいずれか1項記載の電極を脳内に刺入し、定電位アンペロメトリー又はサイクリックボルタメトリーにより脳内物質の変動を測定することを特徴とする脳内物質変動の測定方法。
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