JP2011080864A - Particle preserving container, particle preservation method, and method for inspecting biochemical sample - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、粒子保存容器、粒子の保存方法および生化学試料の検査方法に関する。 The present invention relates to a particle storage container, a particle storage method, and a biochemical sample inspection method.
血清,細胞破砕液,組織などの混合物の中から,糖鎖などの特定の生体分子を精製抽出する手段として,これらの分子と特異的に作用する固相担体を用いる方法がある。例えば,(特許文献1)には,ヒドラジド基含有ポリマービーズを用いて糖鎖を精製抽出する方法が記載されている。また,(非特許文献1)には,固相ビーズを用いてタンパク質を精製する方法が記載されている。
ところで、近年において、同時に複数のアッセイを行うためのマルチウェルタイプ、特に96穴、384穴などのハイスループットタイプのマイクロタイタープレートなどが開発され、アッセイ技術の向上が図られている。また、糖鎖の精製抽出も、迅速化ならびに少量サンプルでの実施の要請から、このようなマイクロタイタープレートを用いて行うことが要望されるようになってきている。
そこで、特許文献1に記載されているような糖鎖捕捉物質を用いて、マイクロタイタープレートにて糖鎖の精製抽出を行う場合には、マイクロタイタープレートの各ウェルにおいて糖鎖捕捉物質を一定量とする必要がある。このような用途では、糖鎖捕捉物質は通常微粒子の形態のものが使用され、一般的に微粒子は乾燥粉末の状態で提供されることが多い。
このような場合、各ウェルにおいて糖鎖捕捉物質を一定量とするために、使用するウェルの数だけ糖鎖捕捉物質の乾燥粉末を秤量して、ウェルごとに分散液を作製する方法がある。この場合、ミリグラムまたはマイクログラムのオーダーで秤量する必要があることから秤量誤差が無視できないという点、およびその秤量誤差が各ウェルについて発生する点、ならびにウェルの数が非常に多いハイスループットアッセイには秤量回数が非常に多くなるという点などから現実的なアプローチとは言えない。
一方で、秤量誤差をおよび秤量回数の低減の観点から、一度に大容量の分散液を作製し、その分散液をマイクロタイタープレートの各ウェルに分注するという操作を行う方法が考えられる。しかしながら、ハイスループットアッセイにおいては、分注の回数が非常に多くなり、操作も煩雑になる。また、分注の操作中に分散液中で微粒子が沈殿し、分散液中で糖鎖捕捉物質の分布ができてしまうため、各ウェルに一定量の糖鎖捕捉物質を導入することが困難であり、これが分注操作時の誤差となる。このような分注操作持の誤差は、各ウェルでのアッセイの評価を困難にし、特にスクリーニング用途でのマイクロタイタープレートでのアッセイでは望ましくない。
分散液の入った容器を振とう、あるいは、分散液をスターラー等で撹拌させながら、各ウェルへの分注操作を行うことにより、分注操作時の誤差を低減することは可能である。しかしながら、分注操作の回数を低減させることは困難であり、このような煩雑な操作は、分注操作を含めた全操作の自動化を実現することを困難にしている。
このため、マイクロタイタープレートを用いて同時に多くのアッセイを行うことが可能であったとしても、分注操作を含めた全操作の自動化が困難であることから、ハイスループットアッセイを行うことの利点が生かし切れていなかった。
そこで、本発明は、簡便な操作にて所定量の糖鎖捕捉物質を導入することを容易にし、たとえハイスループットアッセイにおいても糖鎖捕捉物質の導入に際して煩雑な操作を必要としないような、タブレットおよびその用途を提供するものである。
As a means for purifying and extracting specific biomolecules such as sugar chains from a mixture of serum, cell lysate, tissue, etc., there is a method using a solid phase carrier that specifically acts on these molecules. For example, (Patent Document 1) describes a method for purifying and extracting sugar chains using hydrazide group-containing polymer beads. (Non-patent Document 1) describes a method for purifying a protein using solid phase beads.
By the way, in recent years, multi-well types for performing a plurality of assays simultaneously, in particular, high-throughput type microtiter plates such as 96 holes and 384 holes have been developed, and the assay technology has been improved. In addition, purification and extraction of sugar chains are demanded to be performed using such a microtiter plate because of the demand for speeding up and implementation with a small amount of sample.
Therefore, when a sugar chain capture substance as described in
In such a case, there is a method of preparing a dispersion for each well by weighing the dry powder of the sugar chain-trapping substance as many as the number of wells to be used in order to make the sugar chain-trapping substance constant in each well. In this case, the weighing error is not negligible because it must be weighed on the order of milligrams or micrograms, and the weighing error occurs for each well. It cannot be said that it is a realistic approach because the number of times of weighing becomes very large.
On the other hand, from the viewpoint of reducing weighing errors and the number of times of weighing, a method of performing an operation of preparing a large-capacity dispersion at a time and dispensing the dispersion into each well of a microtiter plate can be considered. However, in the high-throughput assay, the number of times of dispensing becomes very large and the operation becomes complicated. In addition, it is difficult to introduce a certain amount of sugar chain-trapping substance into each well because fine particles are precipitated in the dispersion liquid during the dispensing operation, and the sugar chain-trapping substance is distributed in the dispersion liquid. There is an error in dispensing operation. Such errors in dispensing operations make it difficult to evaluate the assay in each well, and are not desirable for assays on microtiter plates, especially for screening applications.
It is possible to reduce the error during the dispensing operation by shaking the container containing the dispersion or stirring the dispersion with a stirrer or the like. However, it is difficult to reduce the number of dispensing operations, and such a complicated operation makes it difficult to realize automation of all operations including the dispensing operation.
For this reason, even if many assays can be performed simultaneously using a microtiter plate, it is difficult to automate all operations including dispensing operations. It was not alive.
Therefore, the present invention makes it easy to introduce a predetermined amount of a sugar chain-capturing substance by a simple operation, and does not require a complicated operation when introducing a sugar chain-trapping substance even in a high-throughput assay. And its use.
本発明の目的は、粒子の損失を低減し、かつ表面の活性基の失活を低減することができる粒子保存容器および粒子の保存方法を提供することにある。
また、本発明の別の目的は、上述の保存容器を用いた効率の良い生化学試料の検査方法を提供することにある。
An object of the present invention is to provide a particle storage container and a particle storage method capable of reducing loss of particles and reducing deactivation of active groups on the surface.
Another object of the present invention is to provide an efficient biochemical sample inspection method using the above-described storage container.
このような目的は、下記(1)〜(4)に記載の本発明により達成される。
(1)先端が開口し、先細り形状をなす突出部および基端が開口した基端開口部を有し、内部に粒子を保存する筒状の容器本体と、前記容器本体の内部に、前記突出部から連続して基端側に突出した筒状突起部とを有することを特徴とする粒子保存容器。
(2)前記筒状突起部と、容器本体の内部との間隙に粒子を留置可能なものである(1)に記載の粒子保存容器。
(3)(1)記載の先端が開口し、先細り形状をなす突出部および基端が開口した基端開口部を有し、内部に粒子を保存する筒状の容器本体と、前記突出部から連続して容器内部に向かって突き出した中心に先端開口部につながる孔を有する筒状突起を有する容器に、粒子を充填したことを特徴とする粒子の保存方法。
(4)(1)ないし(3)のいずれかに記載の粒子保存容器を用いることを特徴とする生化学試料の検査方法。
Such an object is achieved by the present invention described in the following (1) to (4).
(1) A cylindrical container body having a projecting portion having a distal end opened and a tapered shape and a proximal end opening portion having a proximal end opened, and storing particles therein; and the projecting portion in the container body. A particle storage container comprising: a cylindrical protrusion protruding continuously from the portion toward the proximal end.
(2) The particle storage container according to (1), wherein particles can be placed in a gap between the cylindrical protrusion and the inside of the container body.
(3) A cylindrical container body having a projecting portion having a tapered opening and a proximal end opening in which a distal end is opened and having a proximal end opened, and storing the particles therein; A method for preserving particles, wherein the particles are filled in a container having a cylindrical protrusion having a hole connected to the tip opening at the center continuously protruding toward the inside of the container.
(4) A method for inspecting a biochemical sample, wherein the particle storage container according to any one of (1) to (3) is used.
本発明によれば、粒子の損失を低減し、かつ表面の活性基の失活を低減することができる粒子保存容器および粒子の保存方法を得ることができる。
また、本発明によれば、上述の保存容器を用いた効率の良い生化学試料の検査方法を得ることができる。
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the particle | grain storage container which can reduce the loss of particle | grains and can reduce the deactivation of the active group of a surface, and the storage method of particle | grains can be obtained.
Moreover, according to the present invention, an efficient biochemical sample inspection method using the storage container described above can be obtained.
先端が開口し、先細り形状をなす突出部および基端が開口した基端開口部を有し、内部に粒子を保存する筒状の容器本体と、
前記突出部から連続して容器内部に向かって突き出した中心に先端開口部につながる孔を有する筒状突起を有することを特徴とする
以下、本発明の粒子保存容器、粒子の保存方法および生化学試料の検査方法について説明する。
A cylindrical container main body having a distal end opened, a projecting portion having a tapered shape, and a proximal end opening having a proximal end opened, and storing particles therein;
The particle storage container, the particle storage method and the biochemistry of the present invention are characterized by having a cylindrical protrusion having a hole connected to the tip opening at the center continuously protruding from the protrusion toward the inside of the container. A sample inspection method will be described.
(粒子保存容器)
<実施形態>
まず、粒子保存容器について、図1に示す好適な実施形態に基づいて詳細に説明する。
(Particle storage container)
<Embodiment>
First, the particle storage container will be described in detail based on the preferred embodiment shown in FIG.
図1に示すように、筒状の容器本体1は、先端が開口した突出開口部111を有する先細り形状をなす突出部11と、基端が開口した基端開口部12とを有しており、さらに突出部11から連続して容器本体1内部に突き出た、中心に突出開口部につながる孔を有する筒状突起物13からなる(図1b)。
これにより、粒子を基端開口部12から充填し、容器本体底部と筒状突起物13の上側開口部の間に粒子を保持することが可能である。この状態から、基端開口部12より洗浄液を加えることにより、保持されていた粒子を、筒状突起物13の上側開口部より突出開口部より洗浄液とともに回収することが可能である。
As shown in FIG. 1, the
Thereby, it is possible to fill the particles from the base end opening 12 and hold the particles between the bottom of the container body and the upper opening of the
容器本体1の形状は、図1に示す実施形態では円筒状であるが、これに限定されず角筒状でも良いが、円筒状(より具体的にはチューブ状)であることが好ましい。このような容器本体1の幅は、特に限定されないが、幅0.5mm〜50mmが好ましく、より好ましくは1mm〜20mmであり、さらに好ましくは1.5mm〜10mmである。
また、長さ(突出部11を含む全体の長さ)は2.5mm〜200mmが好ましく、より好ましくは5mm〜100mmであり、さらに好ましくは10mm〜50mmである。容器本体1のサイズが前記範囲内であると、特に生体試料由来のサンプルのように少量のサンプルを扱う際サンプル損失を最小限に抑えることができるという点で優れる。
容器内部に突き出した筒状突起物13の容器内部部分の長さは、その長さにより、保持できる粒子の量が制御可能であるが、容器本体から突き出てはその用を成さないため基端開口部より内側に存在する必要がある。そのためその長さは容器内部の長さの1/2〜1/10が好ましく、より好ましくは1/3〜1/10、さらに好ましくは1/5〜1/10である。
The shape of the
Further, the length (the total length including the protruding portion 11) is preferably 2.5 mm to 200 mm, more preferably 5 mm to 100 mm, and still more preferably 10 mm to 50 mm. When the size of the
The length of the inner portion of the
突出開口部111の内径は、保存する粒子の大きさに依存して特に限定されないが、0.1〜10mmが好ましく、特に0.2〜5mmが好ましく、最も0.5〜3mmが好ましい。突出開口部111の内径が前記範囲内であると、特に粒子の排出を効率良く実施することができる。
また、突出部11の長さも特に限定されないが、1〜50mmが好ましく、特に2〜25mmが好ましく、最も3〜15mmが好ましい。突出部11の長さが前記範囲内であると、微粒子の損失を最小限に抑えられる点に優れる。
The inner diameter of the protruding opening 111 is not particularly limited depending on the size of the particles to be stored, but is preferably 0.1 to 10 mm, particularly preferably 0.2 to 5 mm, and most preferably 0.5 to 3 mm. When the inner diameter of the projecting opening 111 is within the above range, it is possible to discharge particles particularly efficiently.
Moreover, the length of the protrusion part 11 is not specifically limited, However, 1-50 mm is preferable, 2-25 mm is especially preferable, and 3-15 mm is the most preferable. When the length of the protruding portion 11 is within the above range, the loss of fine particles can be minimized.
容器本体1を構成する材料としては、例えばポリプロピレン、塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリスチレン等が挙げられる。これらの中でもポリプロピレンが好ましい。これにより、耐溶剤性を向上することができる。
Examples of the material constituting the
容器本体1は、透明、半透明、不透明でも構わないが、透明または半透明であることが好ましい。これにより、容器内の状態を確認することができる。
The
このような容器本体1は、例えば射出成形、切削加工等の方法により得ることができる。
Such a
本発明の粒子保存容器1は、上述したような容器本体で構成されているが、これに限定されない。
例えば、基端部が角筒状であり、突出部11のみが筒状であっても良く、また、逆に基端部が筒状であって、突出部11のみが角筒状であっても良い。
Although the particle |
For example, the base end portion may be a rectangular tube shape, and only the projecting portion 11 may be cylindrical. Conversely, the base end portion may be a cylindrical shape, and only the projecting portion 11 is a square tube shape. Also good.
また、本発明の粒子保存容器1に保存する粒子には、シリカ粒子、高分子粒子、金粒子、セファロース粒子、アガロース粒子、セルロース粒子等が挙げられる。これらの粒子の中でも、表面に活性基としてアビジン、ビオチン、抗体、レクチン、カルボニル基、アミノ基、アミノオキシル基、ヒドラジド基、エステル基、マレイミド基およびチオール基のいずれか1種以上の活性基を有するものが好ましい。
より具体的には、レーザーイオン化飛行時間型時間型質量分析装置(MALDI−TOF−MASS)高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、またはガスクロマトグラフィー(GC)等の前処理に使用する固相抽出に用いる粒子を保存することが好ましい。
Examples of the particles stored in the
More specifically, it is used for solid-phase extraction used for pretreatment such as laser ionization time-of-flight time-type mass spectrometer (MALDI-TOF-MASS) high performance liquid chromatography (HPLC) or gas chromatography (GC). It is preferred to preserve the particles.
前記粒子の平均粒子径は、特に限定されないが、0.1〜500μmが好ましく、特に10〜150μmであることが好ましい。平均粒子径が前記範囲内であると、○に優れる。
前記平均粒子径は、例えば粒度分布測定装置を用いてで測定することができる。
The average particle diameter of the particles is not particularly limited, but is preferably 0.1 to 500 μm, and particularly preferably 10 to 150 μm. When the average particle diameter is within the above range, the result is excellent.
The average particle diameter can be measured using, for example, a particle size distribution measuring apparatus.
実施形態で説明した粒子保存容器1は、例えば図3に示す、96穴型マイクロプレートに適用可能なものであることが好ましい。これにより、作業性を特に向上することができる。
このように、粒子保存容器1を一体化(連結)させた場合、作業を効率良く進めるために個々の粒子保存容器1間の間隔が既存のディスペンサーに対応していることが好ましい。
The
As described above, when the
(粒子の保存方法)
次に、粒子の保存方法について、詳細に説明する。
容器本体1の基端開口部12より粒子を充填する(図2(a))。充填する粒子の充填量は、容器本体1のサイズに依存して特に限定されないが、容器内部の筒状突起物の上端を越える量を加えると内孔を通して流れ出るので必然的に筒状突起物上端を越えない量に制限される。これにより、生化学試料の検査を精度良く実施することができる。
なお、粒子は、予め保存液に分散した状態で容器本体1に充填した後、乾燥させることが好ましい。これにより、作業性を向上することができる。
乾燥の方法としては、加熱乾燥、自然乾燥または真空凍結乾燥等の方法が用いることができる。
(Preservation method of particles)
Next, the particle storage method will be described in detail.
Particles are filled from the proximal end opening 12 of the container body 1 (FIG. 2A). The filling amount of the particles to be filled is not particularly limited depending on the size of the container
In addition, it is preferable to dry, after filling the container
As a drying method, a method such as heat drying, natural drying or vacuum freeze drying can be used.
前記保存液としては、例えば水、エタノール、メタノール等が挙げられる。これらの中でも水が好ましい。これにより、耐溶剤性の容器を使用する必要がなくなる。 Examples of the preservation solution include water, ethanol, methanol and the like. Among these, water is preferable. This eliminates the need to use a solvent resistant container.
そして、この粒子を使用する際には、溶液を容器本体内部に加え、乾燥状態にある粒子を再分散させて粒子分散液を作製し、さらに、内部の筒状突起物の上端より粒子分散液の界面を揚げることで内容物を、内孔を通して突出開口部より粒子を排出させることが可能となる。 Then, when using these particles, the solution is added to the inside of the container body, and the particles in a dry state are redispersed to prepare a particle dispersion, and further, the particle dispersion from the upper end of the cylindrical projection inside. By lifting the interface, the contents can be discharged from the protruding opening through the inner hole.
これにより、上述した粒子保存容器1を用いた本発明の粒子の保存方法により、粒子を粒子保存容器1内に保存し、必要時に容易に使用することが可能となる。したがってハイスループット処理が可能な方式で、粒子を保存する方法を提供することができる。
さらに、上述した粒子保存容器1を用いた本発明の粒子の保存方法により一定量の粒子を反応容器に容易に導入することが可能となる。この際、従来問題となっていた粒子の損失を低減することが可能である。また、微粒子を封入する部分を複数個連結させることで、作業の効率化も図れる。
Accordingly, the particles can be stored in the
Furthermore, it becomes possible to easily introduce a certain amount of particles into the reaction container by the particle storage method of the present invention using the
上述のように粒子の保存法について、粒子の乾燥状態での保存方法について説明したが、本発明はこれに限定されず、粒子5が保存液に分散された状態で粒子保存容器1の内部に保存されても良い。この場合は、突出部の内孔を液体が流れ出ないようにキャップをしたり、粘着フィルムで封止して分散液が流れださないようにすることが必要である。
As described above, the particle storage method has been described with respect to the storage method in a dry state of the particles. However, the present invention is not limited to this, and the particles 5 are dispersed in the storage liquid in the
(生化学試料の検査方法)
本発明の生化学試料の検査方法は、上述したような粒子保存容器1を用いることを特徴とするものである。
例えば、粒子保存容器1用いた上述の粒子の保存方法で保存した後、回収された粒子を、生体試料と反応させて、粒子に特定の生物由来物質等を固定する。次に、この特定の生物由来物質が固定された粒子に、標識化工程、余剰試薬除去工程等を実施し、固定化された生物由来物質を検査する。
本発明の生化学試料の検査方法では、上述したような粒子保存容器1を用いるので、粒子の損失を低減することができる。それによって、検査結果のバラツキを低減することができる。
このような生化学試料の検査方法を実施する場合、粒子5としてはポリマー粒子、金属粒子等を用いることが好ましい。
また、生体由来物質としては糖鎖、タンパク質、DNA、RNA、脂質等を挙げることができる。
(Biochemical sample inspection method)
The biochemical sample inspection method of the present invention is characterized by using the
For example, after storing by the above-described particle storage method using the
In the biochemical sample inspection method of the present invention, since the
When performing such a biochemical sample inspection method, it is preferable to use polymer particles, metal particles, or the like as the particles 5.
In addition, examples of biological substances include sugar chains, proteins, DNA, RNA, lipids, and the like.
以下、本発明を実施例および比較例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example and a comparative example, this invention is not limited to this.
(実施例1)
粒子保存容器の作製
縦幅38mm、横幅8.2mm、下部開口部の形状は円形で直径2.2mm、突出部が20mm、筒状突起物の容器内部の長さが6mmである容器本体を原材料としてポリプロピレン樹脂(株式会社プライムポリマー製、J235T)を用いて射出成形にて作製した。
Example 1
Preparation of particle storage container
Polypropylene resin (stock) with a container body of 38 mm in length, 8.2 mm in width, circular shape in the lower opening, 2.2 mm in diameter, 20 mm in protrusion, and 6 mm in length of the cylindrical projection inside the container It was produced by injection molding using a company Prime Polymer, J235T).
(2)微粒子の封入・保存
上述の粒子保存容器10個の内部に、ヒドラジド基含有ビーズ分散液(ポリマー粒子、球状、0.1mg/uL、住友ベークライト社製、BS−45603)50μLを分注した。そのうちの5個を自然乾燥して使用し、残りの5個は凍結乾燥させ、使用した。
(2) Encapsulation / Storage of Fine Particles 50 μL of hydrazide group-containing bead dispersion (polymer particles, spherical, 0.1 mg / uL, manufactured by Sumitomo Bakelite Co., Ltd., BS-45603) is dispensed into 10 particle storage containers described above. did. Five of them were naturally dried before use, and the remaining 5 were freeze-dried for use.
(3)微粒子の回収
続いて行う微粒子の反応に使用する新たな反応容器(フィルターカラム、住友ベークライト社製、BS−45603)を準備した。保存容器の下部開口部の真下にフィルターカラムが来るように設置した。保存容器上部から、ディスペンサーを用いて、超純水200μL加え、粒子を浮かせて筒状突起物を通して、フィルターカラムに排出した。目視観察しながらさらに容器内に超純水200μLを加え、容器内に残っている粒子をすべてフィルターカラムに排出させた。
最後に、フィルターカラムを遠心させフィルターカラム内に溜まった水を完全に排出させた。
(3) Collection of fine particles A new reaction vessel (filter column, manufactured by Sumitomo Bakelite Co., Ltd., BS-45603) used for the subsequent reaction of fine particles was prepared. The filter column was installed so as to be directly under the lower opening of the storage container. From the upper part of the storage container, 200 μL of ultrapure water was added using a dispenser, and the particles were floated and discharged through a cylindrical projection to a filter column. While visually observing, 200 μL of ultrapure water was further added to the container, and all the particles remaining in the container were discharged to the filter column.
Finally, the filter column was centrifuged to completely drain water accumulated in the filter column.
(4)微粒子の性能確認
(A)試料の作製
ウシ免疫グロブリンG(ウシIgG)1mgを100mM重炭酸アンモニウム50μLに溶解させた後、120mM DTT(ジチオスレイトール)を5μL加え、60℃で30分間反応させた。反応終了後、123mM IAA(ヨードアセトアミド)10μLを加えて遮光下、室温で1時間反応させた。続いて400Uのトリプシンによってプロテアーゼ処理をし、タンパク質部分をペプチド断片化した。反応溶液を90℃で5分処理した後、5UのグリコシダーゼFによる処理を行って糖鎖をペプチドから遊離させ、予備処理済の生体試料を得た。
(4) Performance confirmation of microparticles (A) Preparation of
(B)微粒子と生体試料の反応
予備処理済の生体試料の懸濁物20μLおよび180μLの2%酢酸/アセトニトリル溶液を加え、80℃で1時間反応させビーズ上のヒドラジド基に糖を固定させた。反応は開放系で行い、溶媒が完全に蒸発しビーズが乾固した状態であることを目視で確認した。続いて、グアニジン溶液、水、メタノール、トリエチルアミン溶液にてビーズを洗浄後、10%無水酢酸/メタノールを添加し、室温で30分間反応させ、未反応のヒドラジド基をキャッピングした。キャッピング後、メタノール、塩酸水溶液、水にてビーズを洗浄した。
ビーズの入ったディスポカラムに超純水20μLおよび2%酢酸/アセトニトリル溶液180μLを加え、70℃で1時間反応させビーズ上の糖鎖を切り出した。反応は開放系で行い、溶媒が完全に蒸発しビーズが乾固した状態であることを目視で確認した。
(B) Reaction between microparticles and biological sample Suspension of pretreated
To the disposable column containing the beads, 20 μL of ultrapure water and 180 μL of a 2% acetic acid / acetonitrile solution were added and reacted at 70 ° C. for 1 hour to excise the sugar chain on the beads. The reaction was carried out in an open system, and it was visually confirmed that the solvent was completely evaporated and the beads were dried.
(C)標識化工程
ビーズの入ったディスポカラムに、2−aminobenzamide(2−AB)およびシアノ水素化ホウ素ナトリウムの終濃度がそれぞれ0.35M、1Mになるように30%酢酸/DMSO混合溶媒に溶解させて調整した溶液50μLを添加し、60℃で2時間反応させた。
(C) Labeling step In a disposable column containing beads, in a 30% acetic acid / DMSO mixed solvent, the final concentrations of 2-aminobenzamide (2-AB) and sodium cyanoborohydride are 0.35M and 1M, respectively. 50 μL of a solution prepared by dissolution was added and reacted at 60 ° C. for 2 hours.
(D)余剰試薬除去工程
反応溶液50μLを回収し、アセトニトリルで10倍に希釈した後、付属のクリーンアップカラムに吸着させた。アセトニトリル、アセトニトリル/水混合溶液(95:5)にてカラムを洗浄後、超純水50μLにて標識糖鎖を回収した。
(D) Excess reagent removal process 50 microliters of reaction solutions were collect | recovered, and it was made to adsorb | suck to the attached cleanup column, after diluting 10 times with acetonitrile. After washing the column with acetonitrile / acetonitrile / water mixed solution (95: 5), the labeled sugar chain was recovered with 50 μL of ultrapure water.
(E)標識化糖鎖の検出
得られた標識糖鎖をHPLCにて測定した。アミドカラム(TSK−GEL Amide−80 4.6*250)を用いて励起波長330 nm、蛍光波長420 nmにて測定した。溶媒Aは50mMギ酸、25%アンモニア水にてpH4.4に調整したものを使用し、溶媒Bとしてアセトニトリルを使用し、溶媒A液20% (0min)→A液58%(158min)で送液した。カラム温度は30℃で流速は0.4mL/minとした。
(E) Detection of labeled sugar chain The obtained labeled sugar chain was measured by HPLC. Measurement was performed using an amide column (TSK-GEL Amide-80 4.6 * 250) at an excitation wavelength of 330 nm and a fluorescence wavelength of 420 nm. Solvent A was adjusted to pH 4.4 with 50 mM formic acid and 25% aqueous ammonia, acetonitrile was used as solvent B, and solution A was sent at 20% (0 min) → A solution 58% (158 min). did. The column temperature was 30 ° C. and the flow rate was 0.4 mL / min.
(比較例)
実施例と同様のヒドラジドビーズを用いて、保存容器内で保存する操作を行わないこと以外は実施例と同様にして標識化糖鎖の検出を行った。
(Comparative example)
Using the same hydrazide beads as in the examples, the labeled sugar chain was detected in the same manner as in the examples except that the operation of storing in a storage container was not performed.
実施例1及び比較例1により、本手法により保存したヒドラジドビーズを用いても、図4に示すように通常と同様の結果が得られることを確認した。 According to Example 1 and Comparative Example 1, it was confirmed that the same result as usual was obtained even when hydrazide beads stored by this method were used, as shown in FIG.
1 容器本体
11 突出部
111 突出開口部
12 基端開口部
13 筒状突起物
2 ディスペンサー
DESCRIPTION OF
本発明の粒子保存容器は、抗体ビーズ、レクチンビーズ、アビジンビーズ、ビオチンビーズ、ヒドラジドビーズ等の微粒子を一定量任意の容器に保存するのに使用できる。また、他の反応容器に微粒子を移し替えも容易に可能であり、例えば、96穴型マイクロプレートに対応した保存容器形状とすることで、ハイスループットに微粒子の移し替えが可能となる。保存容器から微粒子を排出させる方法が単純なため、ロボットによる自動処理にも対抗が可能である。また、一連の操作により微粒子の有する活性基等を破壊することもない。使用毎に量り取る手間や、ロスを心配することなく微粒子保存するのに適している。 The particle storage container of the present invention can be used to store a predetermined amount of fine particles such as antibody beads, lectin beads, avidin beads, biotin beads, hydrazide beads, etc. in an arbitrary container. In addition, it is possible to easily transfer the microparticles to another reaction container. For example, by using a storage container shape corresponding to a 96-well microplate, the microparticles can be transferred with high throughput. Since the method of discharging the fine particles from the storage container is simple, it is possible to counter the automatic processing by the robot. Further, the active groups and the like possessed by the fine particles are not destroyed by a series of operations. It is suitable for preserving fine particles without worrying about the time and weight of each use.
Claims (4)
前記容器本体の内部に、前記突出部から連続して基端側に突出した筒状突起部とを有することを特徴とする粒子保存容器。 A cylindrical container main body having a distal end opened, a projecting portion having a tapered shape, and a proximal end opening having a proximal end opened, and storing particles therein;
A particle storage container having a cylindrical protrusion protruding continuously toward the proximal end from the protrusion in the container main body.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009233452A JP2011080864A (en) | 2009-10-07 | 2009-10-07 | Particle preserving container, particle preservation method, and method for inspecting biochemical sample |
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Publications (1)
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Family Applications (1)
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-
2009
- 2009-10-07 JP JP2009233452A patent/JP2011080864A/en active Pending
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