JP2010515463A - 配座的に束縛されたポリペプチド配列のコンビナトリアルライブラリー - Google Patents
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Abstract
Description
(a)1個以上の未変性若しくは変種ポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又はかかる断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む物理的に選択可能なディスプレイであって、かかる集合体の少なくとも一部が、配座的に束縛されたポリペプチド標的を形成し、断片の少なくとも一部が抗体断片以外である、物理的に選択可能なディスプレイを用意すること、
(b)互いに結合親和性を有する配座的に束縛されたポリペプチド標的と結合相手候補が標的−結合相手コンプレックスを形成する条件下で、ディスプレイを結合相手候補のライブラリーと接触させること、及び
(c)形成された標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部を検出すること
を含む、スクリーニング方法に関する。
(a)1個以上の未変性若しくは変種ポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又はかかる断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む物理的に選択可能なディスプレイであって、集合体の少なくとも一部が配座エピトープを形成する、物理的に選択可能なディスプレイを用意すること、
(b)互いに結合親和性を有する配座エピトープと抗体ライブラリーのメンバーとが配座エピトープ−抗体コンプレックスを形成する条件下で、ディスプレイを抗体ライブラリーと接触させること、及び
(c)形成された配座エピトープ−抗体コンプレックスの少なくとも一部を検出すること
を含む、方法に関する。
特に断らない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 1994)は、本願で使用する用語の多くに対する一般的指針を当業者に提供する。
本発明の方法を実施するための技術は当分野で周知であり、例えば、Ausubel et al., Current Protocols of Molecular Biology, John Wiley and Sons (1997)、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, J. Sambrook and D.W. Russell, eds., Cold Spring Harbor, New York, USA, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001、O’Brian et al., Analytical Chemistry of Bacillus Thuringiensis, Hickle and Fitch, eds., Am. Chem. Soc., 1990、Bacillus thuringiensis: biology, ecology and safety, T.R. Glare and M. O’Callaghan, eds., John Wiley, 2000、Antibody Phage Display, Methods and Protocols, Humana Press, 2001、及びAntibodies, G. Subramanian, ed., Kluwer Academic, 2004を含めて、標準の実験室の教科書に記載されている。変異誘発は、例えば、部位特異的変異誘発によって実施することができる(Kunkel et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 82:488−492(1985))。PCR増幅法は、米国特許第4,683,192号、同4,683,202号、同4,800,159号及び同4,965,188号、並びに”PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification”, H. Erlich, ed., Stockton Press, New York(1989)、及びPCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al., eds., Academic Press, San Diego, Calif.(1990)を含めて、幾つかの教科書に記載されている。
(実施例1)
直列に組み立てられた配座cDNA断片(図1及び2)
すべての発現可能なエピトープを標的集団から組み立てるために、まず、標的集団由来の発現された遺伝子のコレクションを用意する。本実施例では、目標は、活性化リンパ球由来のすべての可能な配座エピトープを捕捉することであるが、本明細書に記載の方法は、あらゆる源由来の配座エピトープを捕捉するのにも同様に適切である。
(実施例2)
単一遺伝子配座断片
指定の抗原に対する抗体の生成においては、典型的には、免疫優性エピトープ又は複数の免疫優性エピトープに対する液性応答が見られる。多くの場合、望ましい機能的抗体は、免疫優性のより低いエピトープを認識する必要があり得る。この場合、免疫優性エピトープを抗体でブロックし、次いで再免疫又は選択しようとすることが多い。次いで、液性応答は、所望の抗体をまだ生成し得る、又は生成し得ない、次に最も接触可能なエピトープに向けられる。新しい抗体発見の目標は、機能的配座エピトープに対する抗体を生成することであるので、選択のためにかかるエピトープ(又は複数のエピトープ)を発現させることになる。単一エピトープは、線状決定要因に対する応答しか生じない場合があり、生成した抗体は未変性タンパク質を認識しない可能性がある。かかる未変性タンパク質に対する配座抗体を生成する見込みを増加させるために、このエピトープは、未変性タンパク質に近似させるために、ある重要な構造要素に関連して発現される必要がある。
(実施例3)
可溶性スーパーファミリー配座抗原(図3及び4)
導入された配列が最初のタンパク質の一部又は全部の配座要素を採用するように、標的タンパク質の単一の線状又は不連続配列を代替足場上に提示することができる。本実施例においては、公知の標的抗体相互作用をトロンボポイエチン(Tpo)、4ヘリックスバンドルサイトカイン及び中和抗体の間で再現する。抗Tpo抗体TN1は、Tpo由来の交差ループを認識する。このループが、エリスロポイエチン(Epo)などの密接に関連した代替4ヘリックスバンドルタンパク質に重なるときには、TN1抗体がキメラタンパク質と結合するように十分な構造上の配座を有すると予想される。
(実施例4)
マルチスパンスーパーファミリー配座抗原−GPCR 図1
実施例3と同様に、導入された配列が、未変性標的タンパク質中に存在する配座要素を部分的又は完全に採用するように、標的タンパク質の単一の線状又は不連続配列を代替足場上に提示することができる。例として、マルチスパンGタンパク質共役受容体の細胞外ドメインの部分を無関係なタンパク質足場にグラフトする。Gタンパク質のB1断片は、それぞれCCR3由来の成熟アミノ末端及びCCR3由来の第3の細胞外ループで置換することができる遊離アミノ末端及び近位ループ構造を有する。以前の研究では、融合物は、親和性が全体として1/1000に低下しても、完全長CCR3受容体に対して同様に位置付けられる親和性で、CCR3同族リガンド、エオタキシン及び変異体に結合した(Datta, Protein Sciences vol. 12, pg.2482, Cold Spring Harbor Laboratory Press 2003)。これらの結果によれば、可溶性構築物は、受容体を模倣するのに十分な配座要素を部分的に提供し得る。CCR3との品質管理結合(quality control binding)のために、B1キメラを可溶性又はファージ表示されたエオタキシンを用いて試験した。具体的には、アミノ末端(アミノ酸1から34)及びCCR3の第3の細胞外ループ(アミノ酸265から281)を、アミノ末端の2個のアミノ酸の代わりに用い、Gタンパク質のB1ドメイン断片のループアミノ酸18と19の間に挿入する。次に、胞子表面に表示されたこの構築物を、3から5回の濃縮によってコンビナトリアル抗体ライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、濃縮プールを、CCR3を過剰発現する操作されたほ乳動物細胞系に対してポジティブ選択する。次いで、生成した抗体クローンを組換え発現させ、精製し、次いでCCR3との結合について、又はエオタキシン中和アッセイにおいて、試験する。
(実施例5)
配座抗原を特定し、生成する生物情報学手法
上記実施例は、個々のタンパク質又はスーパーファミリー、及び無秩序なコレクションを使用する方法を記載する。重要なことには、無秩序なコレクションは、発現されたcDNAに由来する可能性があり、cDNAの表示は、相対発現レベルによって極めて偏り、タンパク質のタイプ、又は未変性タンパク質上の断片の接触性に限定されない。また、無秩序な断片のクローニングにおいては、せいぜい、方向性を制御できるのみに過ぎず、枠の適切な読みを制御することはできない。したがって、そのアミノ又はカルボキシ末端において適切な融合を形成しない多数の非生産的クローンが存在すると予想される。これらの態様の一部は、生物情報学手法によって扱うことができる。
(実施例6)
抗体抗原コンプレックスのスクリーニング(図5)
抗体は、その可変領域における特異的相互作用によって抗原に結合する。安定な結合がしばしば形成され、一方又は両方の成分において誘導適合のために維持される。抗体の場合には、リガンド結合抗体とリガンド非結合抗体は構造的に異なることが判明した。この構造上の差は、配座エピトープ提示を利用して、特定の抗体−抗原コンプレックスを認識する抗体をスクリーニングすることによって、活用される。
(実施例7)
ファージ−ファージ標的−抗体選択(図6)
上記実施例においては、胞子を使用してエピトープコレクションを表示し、ファージを使用して抗体選択を表示した。コレクションが、選択に対して物理的に識別可能であり、かつ増幅に対して遺伝子的に識別可能である場合、同じディスプレイ系を用いて両方のコレクションを表示することもできる。
(実施例8)
配座エピトープと抗体ライブラリーの同時選択
上記例では、配座エピトープライブラリーコレクションを使用して、未変性タンパク質を認識する抗体、又は天然に提示される標的を濃縮した。しかし、今記述する系を用いて、同時配座標的−抗体選択を実施することができる。この例の目標は、特定の標的−抗体対形成を維持することである。これは、例えば、標的が不溶性胞子粒子に結合し、抗体が可溶性糸状バクテリオファージに融合するときなど、標的コレクションディスプレイが抗体ディスプレイコレクションと実質的に物理的に異なるときにのみ可能である。対形成を維持するために、まず、標的コレクションを抗体コレクションと混合する。適切なインキュベーション時間後、胞子標的コレクションを遠心分離によって収集し、結合していないファージを適切な洗液を用いて除去する。結合していないファージを除去する洗浄ステップ後、コンプレックス型コレクションをモノクローナル抗ファージ抗体と一緒にインキュベートし、次いでファージ結合胞子のポジティブ磁性選択のために常磁性抗マウスビーズと結合させる。或いは、ファージ−胞子及び抗ファージコンプレックスを蛍光団複合型抗マウス抗体を用いて検出することができ、個々の胞子をFACSによってクローン的に選別することができる。対の組合せを適切な条件下で個々に救済して、バクテリオファージを処理可能に(addressably)独立に救済し、Bacillus胞子を増殖させることができる。
Claims (97)
- 1個以上の未変性若しくは変種ポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む物理的に選択可能なディスプレイであって、前記集合体の少なくとも一部が、配座的に束縛されたポリペプチド標的を形成し、前記断片の少なくとも一部が抗体断片以外である、物理的に選択可能なディスプレイ。
- 配座エピトープライブラリーである、請求項1に記載のディスプレイ。
- 1個を超えるポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、同じポリペプチドの異なる部分に由来する2個以上の断片、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、異なるポリペプチドに由来する断片、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、抗体又は抗体断片、及び前記抗体又は抗体断片のリガンドを含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が互いに直接融合する、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が外来性連結配列によって結合される、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記直列型又は多量体集合体において、少なくとも幾つかの前記断片又は配列が、構造支持要素からなる、又は構造支持要素を含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 配座的に束縛されたポリペプチド標的の少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中に存在する断片又は模倣配列の近接の結果として形成される、請求項1に記載のディスプレイ。
- 配座的に束縛されたポリペプチド標的の少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中の構造支持要素の存在の結果として形成される、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記構造支持要素が、1個以上のタンパク質ファミリーに特有なモチーフである、請求項11に記載のディスプレイ。
- 前記構造支持要素が、ヘリックスバンドル、βシート構造、三葉構造、膜貫通ヘリックス及び細胞外ループからなる群から選択される、請求項11に記載のディスプレイ。
- 配座的に束縛されたポリペプチド標的が受容体配列を含む、請求項1に記載のディスプレイ。
- 前記受容体配列が受容体の構造モチーフを含む、請求項14に記載のディスプレイ。
- 生体内及び生体外ディスプレイ系からなる群から選択される、請求項1に記載のディスプレイ。
- ウイルス、真核生物、細菌、リボソーム、mRNA及びDNAディスプレイ系からなる群から選択される、請求項16に記載のディスプレイ系。
- バクテリオファージディスプレイである、請求項17に記載のディスプレイ。
- 前記真核生物ディスプレイ系がほ乳動物又は酵母ディスプレイである、請求項17に記載のディスプレイ。
- 前記細菌ディスプレイ系が細菌細胞又は胞子ディスプレイである、請求項17に記載のディスプレイ。
- 前記細菌ディスプレイ系がBacillus subtilis又はBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項20に記載のディスプレイ。
- 前記細菌ディスプレイ系がBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項11に記載のディスプレイ。
- (a)1個以上の未変性若しくは変種ポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む物理的に選択可能なディスプレイであって、前記集合体の少なくとも一部が、配座的に束縛されたポリペプチド標的を形成し、前記断片の少なくとも一部が抗体断片以外である、物理的に選択可能なディスプレイを用意すること、
(b)互いに結合親和性を有する配座的に束縛されたポリペプチド標的と結合相手候補が標的−結合相手コンプレックスを形成する条件下で、前記ディスプレイを結合相手候補のライブラリーと接触させること、及び
(c)形成された標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部を検出すること
を含む、スクリーニング方法。 - (d)検出された標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する標的配列を特定するステップを更に含む、請求項23に記載の方法。
- 検出されたすべての標的−結合相手コンプレックスの形成に関与する標的配列が特定される、請求項24に記載の方法。
- 前記ディスプレイが、1個を超えるポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、同じポリペプチドの異なる部分に由来する2個以上の配列、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、異なるポリペプチドに由来する断片、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、抗体又は抗体断片、及び前記抗体又は抗体断片のリガンドを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が互いに直接融合する、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が外来性連結配列によって結合される、請求項23に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、2個以上の配列の少なくとも一部が、構造支持要素からなる、又は構造支持要素を含む、請求項23に記載の方法。
- 配座的に束縛されたポリペプチド標的の少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中に存在する断片又は模倣配列の近接の結果として形成される、請求項23に記載の方法。
- 配座的に束縛されたポリペプチド標的の少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中の構造支持要素の存在の結果として形成される、請求項23に記載の方法。
- 前記構造支持要素が、1個以上のタンパク質ファミリーに特有なモチーフである、請求項34に記載の方法。
- 前記構造支持要素が、ヘリックスバンドル、βシート構造、三葉構造、膜貫通ヘリックス及び細胞外ループからなる群から選択される、請求項34に記載の方法。
- 結合相手候補が抗体又は抗体断片である、請求項23に記載の方法。
- 前記抗体断片が、Fab、Fab’、F(ab’)2、dAb、scFv及び(scFv)2断片、抗体断片から形成される線状抗体、単鎖抗体分子、ミニボディ、二重特異性抗体及び多重特異性抗体からなる群から選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記抗体断片がscFv断片である、請求項38に記載の方法。
- 前記抗体又は抗体断片が抗体ライブラリーの一部である、請求項37に記載の方法。
- 結合タンパク質候補が抗体模倣物である、請求項23に記載の方法。
- 抗体模倣物がAffibody又はアプタマーである、請求項41に記載の方法。
- 前記物理的に選択可能なディスプレイが生体内又は生体外ディスプレイ系である、請求項23に記載の方法。
- 前記物理的に選択可能なディスプレイが、ウイルス、真核生物、細菌、リボソーム、mRNA及びDNAディスプレイ系からなる群から選択される、請求項43に記載の方法。
- 前記ディスプレイ系がバクテリオファージディスプレイである、請求項44に記載の方法。
- 前記真核生物ディスプレイ系がほ乳動物又は酵母ディスプレイである、請求項44に記載の方法。
- 前記細菌ディスプレイ系が細菌細胞又は胞子ディスプレイである、請求項44に記載のライブラリー。
- 前記細菌ディスプレイ系がBacillus subtilis又はBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項47に記載の方法。
- 前記抗体ライブラリーが表示される、請求項40に記載の方法。
- 抗体ディスプレイが生体内又は生体外ディスプレイ系である、請求項49に記載の方法。
- 抗体ディスプレイが、ウイルス、真核生物及び細菌ディスプレイ系からなる群から選択される、請求項49に記載の方法。
- 前記ディスプレイ系がバクテリオファージディスプレイである、請求項51に記載の方法。
- 前記真核生物ディスプレイ系がほ乳動物又は酵母ディスプレイである、請求項51に記載の方法。
- 前記細菌ディスプレイ系が細菌細胞又は胞子ディスプレイである、請求項51に記載のライブラリー。
- 前記細菌ディスプレイ系がBacillus subtilis又はBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項54に記載の方法。
- 抗体ライブラリーがファージライブラリーであり、物理的に選択可能なディスプレイが胞子ディスプレイ又はファージディスプレイである、請求項49に記載の方法。
- 前記胞子ディスプレイがBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項56に記載の方法。
- 前記配座的に束縛されたポリペプチド標的が受容体配列を含む、請求項23に記載の方法。
- 結合相手が受容体リガンド候補である、請求項58に記載の方法。
- 前記受容体配列が受容体の構造モチーフを含む、請求項59に記載の方法。
- 標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する抗体配列又は抗体断片配列が更に特定される、請求項38に記載の方法。
- 標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する標的配列及び抗体配列をステップ(d)の前に濃縮及び分離するステップを更に含む、請求項61に記載の方法。
- 濃縮及び分離に続いて、ステップ(d)の前に、標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する標的配列及び抗体配列を個別に回収するステップを更に含む、請求項62に記載の方法。
- 標的−結合相手コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する標的配列が配座エピトープの一部である、請求項38に記載の方法。
- (a)1個以上の未変性若しくは変種ポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む物理的に選択可能なディスプレイであって、前記集合体の少なくとも一部が配座エピトープを形成する、物理的に選択可能なディスプレイを用意すること、
(b)互いに結合親和性を有する配座エピトープと抗体ライブラリーのメンバーとが配座エピトープ−抗体コンプレックスを形成する条件下で、前記ディスプレイを抗体ライブラリーと接触させること、及び
(c)形成された配座エピトープ−抗体コンプレックスの少なくとも一部を検出すること
を含む、方法。 - (d)検出された配座エピトープ−抗体コンプレックスの少なくとも一部の形成に関与する配座エピトープ及び抗体配列を特定するステップを更に含む、請求項65に記載の方法。
- 形成されたすべての配座エピトープ−抗体コンプレックスが検出される、請求項66に記載の方法。
- 検出されたすべての標的−結合相手コンプレックスの形成に関与する配座エピトープ配列が特定される、請求項67に記載の方法。
- 前記ディスプレイが、1個を超えるポリペプチドの離散的若しくは無秩序な断片の、又は前記断片を模倣した配列の、直列型又は多量体集合体を含む、請求項65に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、同じポリペプチドの異なる部分に由来する断片、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項65に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、異なるポリペプチドに由来する断片、又は前記断片を模倣した配列を含む、請求項65に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体の少なくとも一部が、抗体又は抗体断片、及び前記抗体又は抗体断片のリガンドを含む、請求項71に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が互いに直接融合する、請求項65に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が外来性連結配列によって結合される、請求項65に記載の方法。
- 前記直列型又は多量体集合体において、前記断片又は配列の少なくとも一部が、構造支持要素からなる、又は構造支持要素を含む、請求項65に記載の方法。
- 配座エピトープの少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中に存在する断片又は模倣配列の近接の結果として形成される、請求項65に記載の方法。
- 配座エピトープの少なくとも一部が、前記直列型又は多量体集合体中の構造支持要素の存在の結果として形成される、請求項65に記載の方法。
- 前記構造支持要素が、1個以上のタンパク質ファミリーに特有なモチーフである、請求項77に記載の方法。
- 前記構造支持要素が、ヘリックスバンドル、βシート構造、三葉構造、膜貫通ヘリックス及び細胞外ループからなる群から選択される、請求項77に記載の方法。
- 前記抗体ライブラリーが抗体断片を含む、請求項65に記載の方法。
- 前記抗体断片が、Fab、Fab’、F(ab’)2、dAb、scFv及び(scFv)2断片、抗体断片から形成される線状抗体、単鎖抗体分子、ミニボディ、二重特異性抗体及び多重特異性抗体からなる群から選択される、請求項80に記載の方法。
- 前記抗体断片がscFv断片である、請求項81に記載の方法。
- 前記物理的に選択可能なディスプレイが細菌細胞又は胞子ディスプレイである、請求項65に記載の方法。
- 前記細菌ディスプレイ系がBacillus subtilis又はBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項83に記載の方法。
- 抗体ライブラリーがファージライブラリーであり、物理的に選択可能なディスプレイが胞子ディスプレイ又はファージディスプレイである、請求項65に記載の方法。
- 胞子ディスプレイがBacillus thuringiensis胞子ディスプレイである、請求項85に記載の方法。
- 配座エピトープが、遺伝子断片の直列型又は多量体集合体の発現によって得られる、請求項65に記載の方法。
- 遺伝子断片が、生物学的に関連する標的源から生じる、請求項87に記載の方法。
- 前記生物学的に関連する標的源が、細胞、組織、器官及び生物体からなる群から選択される、請求項88に記載の方法。
- 前記生物学的に関連する標的源が、幹細胞、活性化された免疫細胞、患部組織、器官及び病的生物体からなる群から選択される、請求項89に記載の方法。
- 遺伝子断片の少なくとも一部が、生物学的に関連する標的源における遺伝子発現データの分析によって特定される、請求項88に記載の方法。
- ペプチドリンカーをコードするヌクレオチド配列によって分離された、抗体又は抗体断片をコードするヌクレオチド配列と前記抗体又は抗体断片のリガンドをコードするヌクレオチド配列とを含む、核酸分子。
- 請求項92に記載の核酸分子を含む、ベクター。
- 請求項93に記載のベクターで形質転換された、宿主細胞。
- 真核生物又は原核生物宿主細胞である、請求項94に記載の宿主細胞。
- 細菌、ほ乳動物又は酵母細胞である、請求項95に記載の宿主細胞。
- E.coli細胞である、請求項95に記載の宿主細胞。
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