JP2010501551A - 毛髪改善のための希土類元素の用途 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図5
Description
表1に示した成分及び含量を利用して、混合希土粉末及びその他の成分を均一に混合した後、ろ過して毛髪改善用組成物を製造した。製造された毛髪改善用組成物は、薄い褐色であり、不透明で、pHが5.0〜8.5であった。
前記実施例1において、混合希土の代わりに、Ce(実施例2)、Pr(実施例3)、Pm(実施例4)、Eu(実施例5)、Tb(実施例6)、Dy(実施例7)、Ho(実施例8)、Er(実施例9)、Tm(実施例10)、Yb(実施例11)、Sc(実施例12)、Y(実施例13)、La(実施例14)、Nd(実施例15)、Sm(実施例16)、Gd(実施例17)及びLu(実施例18)の個々の希土類元素をそれぞれ使用したことを除いては、実質的に同一な過程により毛髪改善用組成物を製造した。
前記実施例1において、混合希土粉末の代わりに、La、Nd、Sm、Gd及びLuの混合粉末を0.1重量%使用して、トウガラシチンキ0.01重量%をさらに使用したことを除いては、実質的に同一な過程により毛髪改善用組成物を製造した。製造された毛髪処理用組成物は、薄い褐色であり、不透明で、pHが5.0〜8.5であった。
前記実施例19において、La、Nd、Sm、Gd及びLuの混合粉末の代わりに、La(実施例20)、Nd(実施例21)、Sm(実施例22)、Gd(実施例23)及びLu(実施例24)の個々の希土元素をそれぞれ使用したことを除いては、実質的に同一な過程により毛髪処理用組成物を製造した
実施例1の組成から希土粉末を除いて組成物を製造した。
マウス胚芽線維芽細胞であるNIH 3T3細胞を、10%牛胎児血清(FBS)と1%ペニシリン−ストレプトマイシンが添加されたDMEM(Dulbeceo's Modified Eagle's Medium)で2×106 または4×106 細胞/mlの密度を維持しながら、37℃(95% O2, 5% CO2, 60%湿度)恒温・恒湿培養器で培養した。細胞の増殖促進実験のために、MTT(3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)アッセイ方法を使用した。MTT実験のために、96ウェルプレートにウェル当たり2×103細胞/mlの各細胞を分株して、10% FBSが含まれた培養液を処理した。培養器で24 時間細胞を安定化させた後、FBSが含まれた培養液を、FBSのないDMEMで入れ換えて、それぞれ10μg、1μg、100ng、10ng、1ng、100pg、10pg及び1pgの混合希土、及び10ngの個々の希土類元素を処理した。一定時間培養後、ウェル当たり50μlのMTT(2mg/1ml滅菌蒸留水)を添加して4時間反応させ、DMSO(dimethyl sulfoxide)を処理して30分間振った後、ELISAリーダー(550, Bio−rad)を利用して540nmで吸光度を測定した。
実験動物は、6週齢のC57BL6雄性マウス(29±3g)で、実験開始前、一般固形飼料(Samyang社)と水を自由摂取させ、ポリプロピレンボックス(453×293×247(H)mm, 19l)で1週間(20〜24℃、湿度60〜80%)の予備飼育で適応期間をおいた。その後、実験動物群の背中部位の一定面積(3×5cm2)を刈って、無作為に比較例の組成物処理群(対照群)、及び実施例1の組成物処理群及び実施例2の組成物処理群(実験群)に分けた。各群は、一日24時間を、それぞれ12時間ずつ明、暗状態に分けて維持した。実施例1及び2と比較例によって製造された組成物を、朝と夜の一定な時間を決めて、一日2回ずつ一定量(1ml)を塗布した。全ての実験では、暗状態の時は実験を行わず、実験マウスが安定を取るように配慮して、組織採取時は、実験前24時間の回復期間をおいた。
頚椎脱臼法で前記実験例2の実験動物を犠牲させた後、皮膚を分離してPBS(Phosphate buffered saline)で異物を最大限除去し、はさみで実験部位を切り出した後、下記の実験に使用した。分離した皮膚を10%ホルムアルデヒドに入れて、一日間固定させて、10mm3大きさに切って、自動浸透器で12時間自動浸透させた後、パラフィンブロックを作って、薄切り機を使用して4μmの厚さに薄切 した。その後、ヘマトキシリン&エオシン染色条件によって染色した。判読及び写真撮影は、光学顕微鏡を使用して100倍で行った。
TGF−βは、同種異形質体であって、種々の細胞と組織において、初期発生の調節、細胞周期の調節、細胞増殖及び分化、移動、生存、細胞外基質の生産、免疫体系、血管生成と血球細胞の生産、細胞死誘導、骨格形成、傷の治癒などを調節する多機能性サイトカインであって、毛周期の退化期には、TGF−βが発現されつつ毛髪細胞の枯死(apoptosis)を誘導すると知られている。血管上皮成長因子(VEGF)は、同種異形質の糖タンパク質で、傷部位で血管新生を刺激すると知られた最も一般的且つ効果的な成長因子であって、多い血管組織で発現されて、上皮細胞に特異的なマイトジェン(mitogen)で上皮細胞の移動と増殖を誘導し、血管の透過性を増加させる役割をすると知られている。VEGFは、既に販売されているミノキシジルの発毛作用メカニズムで、毛根を構成する主要細胞である毛乳頭で血管拡張効果による血流量増加により毛根に影響を供給し、毛髪成長を促進すると考えられている。
男性及び女性の各種脱毛症患者30名を、10名ずつ、実施例1の組成物、実施例2の組成物、比較例の組成物で処置した後、その有効性を評価した。頭皮への投与は、1日2回、毎日2ヶ月間行って、育毛状態を1ヶ月後と2ヶ月後に評価した。判定基準は、
1.高い効果がある−新生毛が観察される(硬毛)
2.中間程度の効果がある−新生毛が観察される(柔毛)
3.少し効果がある−脱毛の数が減少する
4.ふけが減少する
で評価して、その結果を表2に示した。
黒毛生成促進効果を評価するために、ヒト由来黒色腫細胞(human melanoma cell)であるSk−mel−31とマウス由来黒色腫細胞(mouse melanoma cell)であるB16F10においてチロシナーゼの活性を調べた。細胞の培養のために、RPMI−1640(1%ペニシリン−ストレプトマイシン、10%牛胎児血清)培地で 、Sk−mel−31は1×106/ml、 B16F10は2×105/mlの密度を維持しながら、37℃(5% CO2, 60%相対湿度)の恒温・恒湿培養器で培養した。培養器で24時間細胞を安定化させた後、FBSが含まれた培養液を、FBSのないRPMI−1640で入れ換えて、それぞれ10μg、1μg、100ng、10ng、1ng、100pg、10pg及び1pgの混合希土、及び10ngの個々の希土類元素を処理した。チロシナーゼ活性を測定するために、一定時間培養した後、細胞を10分間遠心分離(100×g)して収獲した後、0.01Mリン酸ナトリウム緩衝液(1%トリトンX−100, 0.1mM PMSF(phenylmethyl sulfonyl fluoride)、pH 7.4)で細胞を超音波破砕し、1時間氷に放置した後、4℃で40,000×gで20分間遠心分離し、上澄み液のみを取った。100mM リン酸カリウム(pH 7.1)と4% N,N−ジメチルホルムアミド、0.1%(v/v)トリトンX−100を混合した分析用緩衝液250μlに5mM L−DOPA(L−3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン)130μl、25mM MBTH(3−メチル−2−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone))120μlを入れて、37℃恒温槽で5分間反応させた後、細胞抽出物100μgを入れて、再び2時間さらに反応した。その後、500μlの1M過塩素酸を加えて、常温で9,000×gで3分間遠心分離した。その後、上澄み液のみを取って、505nm で吸光度を測定した。
実験例6と同様な方法により細胞を培養した後、10分間遠心分離(100×g)して、細胞を収獲した。チロシナーゼの発現程度をウェスタンブロッティングにより確認するために、細胞抽出物100μgを10% SDS−PAGEで分離した後、NCに移して、5%脱脂乳を含有したTBSでブロッキングした後、1:2,500に希釈した一次抗体(monoclonal anti-tyrosine hydroxylase clone Th-2)と、1:5,000に希釈した二次抗体(Anti-mouse IgG)をそれぞれ反応させて、0.2%ツイン−20が含有されたTBSで洗浄し、ECL検出キットを利用してX−線フィルムに感光させた。その後、LabWork(商標)(version 4.5.00.0)のイメージ分析プログラムを使用して、OD値をグラフで示した。
実験例6と同一な方法で細胞を培養した後、10分間遠心分離(100×g)して、細胞を収獲した。メラニン生成量を測定するために、1N NaOHに細胞抽出物200μg(総1ml)を加えて、30分間常温に放置した後、400nmで吸光度を測定した。
希土類元素の中、ランタン(La)、ネオジム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)及びルテチウム(Lu)とトウガラシチンキの配合による相乗作用を調べるために、TGF−β及びVEGF発現量、及びメラニン生成量を比較した。
Claims (24)
- 有効成分として、セリウム(Ce)、プラセオジミウム(Pr)、プロメチウム(Pm)、ユーロピウム(Eu)、テルビウム(Tb)、ジスプロシウム(Dy)、ホルミウム(Ho)、エルビウム(Er)、ツリウム(Tm)、イッテルビウム(Yb)、スカンジウム(Sc)、イットリウム(Y)、ランタン(La)、ネオジム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を含有する、脱毛防止、発毛促進、育毛、ふけの除去及び予防、または黒毛生成促進用の組成物。
- セリウム(Ce)、またはその塩若しくは酸化物を含有することを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を0.0001〜10重量%含有することを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 人参、苦参、みかんの陳皮、緑茶、ニンジン、桔梗、桑椹子、タンキリマメ、石榴皮、松葉、月見子、コノテガシワの葉、何首烏、旱蓮草、トリビュラス抽出物、ベタイン、ハッカ抽出物、イラクサ抽出物、トクサ抽出物、ラベンダー抽出物、ホップ抽出物、アロエ、エゾウコギ、冬蟲夏草、トックリイチゴ、桑の実、木醋液、竹塩、黄花黄蓍、オニノタケ、枸杞子、胡桃、ブドウ、サフラワー、ゴマ、エゴマ、ニンニク、昆布、ワカメ、梅、緑豆、黒米、ペンタデカン酸グリセリド、ヒノキチオール、トウガラシチンキ、ショウガチンキ、カンタリスチンキ、フォルスコリン、トランス−3,4’−ジメチル−3−ヒドロキシフラバノン、トコフェロール類、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パルミチン酸レチノール、β−カロチン、 カルシフェロール、 葉酸、ビオチン、D−パントテニルアルコール、アセチルパントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテニルエチルエーテル、アスコルビン酸、グレープフルーツの種抽出物、セファランチ、ニコチン酸ベンジルエステル、ビタミンA、B1、B2、B6及びその誘導体、パントテン酸及びその誘導体、ミノキシジル、ムラサキセンブリ抽出液、アルギニン、アスパラギン酸、メチオニン、セリン、グリシン、グルタミン酸、シスチン、アミノ酸エキス、β−グリシレチン酸、 グリチルリチン酸、塩酸ピリドキシン、サリチル酸、アラントイン、感光素301、イソプロピルメチルフェノール、ピロクトンオラミン、グリセリン、ピロリドンカーボン酸、エストラジオール、エチニルエストラジオール、及び1−メントールから構成された群から選択される一つ以上の毛髪成長促進補助成分をさらに含有することを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- ランタン(La)、ネオジミウム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物と、トウガラシチンキを含有することを特徴とする、請求項4に記載の組成物。
- ショウガチンキ及びカンタリスチンキの一つ以上をさらに含有することを特徴とする、請求項5に記載の組成物。
- 薬剤学的または化粧学的に許容される担体または添加剤をさらに含有することを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 薬剤学的または化粧学的に許容される担体または添加剤が界面活性剤、乳化剤、増粘剤、保存剤、酸化防止剤及び香料、並びにこれらの混合物から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項7に記載の組成物。
- 経皮または経口投与により投与されることを特徴とする、請求項7に記載の組成物。
- ローション、軟膏、ジェル、クリーム、パッチ、噴霧剤、錠剤、丸剤、粉末、サシェ(sachet)、エリキシル(elixir)、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップまたは軟質若しくは硬質カプセルに剤形化されることを特徴とする、請求項9に記載の組成物。
- ヘアートニック、ヘアーローション、ヘアークリーム、ヘアースプレー、ヘアームース、ヘアージェル、ヘアーコンディショナー、ヘアーシャンプー、ヘアーリンス、ヘアーパック、ヘアートリートメント、眉毛発毛剤、睫毛発毛剤若しくは睫毛栄養剤、またはペット用シャンプー及びペット用リンスに使用されることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 人間、飼育動物またはペットに適用するためのものであることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- セリウム(Ce)、プラセオジミウム(Pr)、プロメチウム(Pm)、ユーロピウム(Eu)、テルビウム(Tb)、ジスプロシウム(Dy)、ホルミウム(Ho)、エルビウム(Er)、ツリウム(Tm)、イッテルビウム(Yb)、スカンジウム(Sc)、イットリウム(Y)、ランタン(La)、ネオジム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物の脱毛防止、発毛促進、育毛、ふけの除去及び予防、または黒毛生成促進のための用途。
- 希土類元素がセリウム(Ce)、またはその塩若しくは酸化物であることを特徴とする、請求項13に記載の用途。
- 希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を、人参、苦参、みかん陳皮、緑茶、ニンジン、桔梗、桑椹子、タンキリマメ、石榴皮、松葉、月見子、コノテガシワの葉、何首烏、旱蓮草、トリビュラス抽出物、ベタイン、ハッカ抽出物、イラクサ抽出物、トクサ抽出物、ラベンダー抽出物、ホップ抽出物、アロエ、エゾウコギ、冬蟲夏草、トックリイチゴ、桑の実、木酢液、竹塩、黄花黄蓍、オニノタケ、枸杞子、胡桃、ブドウ、サフラワー、ゴマ、エゴマ、ニンニク、昆布、ワカメ、梅、緑豆、黒米、ペンタデカン酸グリセリド、ヒノキチオール、トウガラシチンキ、ショウガチンキ、カンタリスチンキ、フォルスコリン、トランス−3,4’−ジメチル−3−ヒドロキシフラバノン、トコフェロール類、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パルミチン酸レチノール、β−カロチン、 カルシフェロール、 葉酸、ビオチン、D−パントテニルアルコール、アセチルパントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテニルエチルエーテル、アスコルビン酸、グレープフルーツの種抽出物、セファランチン、ニコチン酸ベンジルエステル、ビタミンA、B1、B2、B6及びその誘導体、パントテン酸及びその誘導体、ミノキシジル、ムラサキセンブリ抽出液、アルギニン、アスパラギン酸、メチオニン、セリン、グリシン、グルタミン酸、シスチン、アミノ酸エキス、β−グリシレチン酸、 グリチルリチン酸類、塩酸ピリドキシン、サリチル酸、アラントイン、感光素301、イソプロピルメチルフェノール、ピロクトンオラミン、グリセリン、ピロリドンカーボン酸、エストラジオール、エチニルエストラジオール、及び1−メントールから構成された群から選択される一つ以上の毛髪成長促進補助成分と配合して使用することを特徴とする、請求項13に記載の用途。
- ランタン(La)、ネオジミウム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を、トウガラシチンキと配合して使用することを特徴とする、請求項15に記載の用途。
- ショウガチンキ及びカンタリスチンキの一つ以上をさらに配合して使用することを特徴とする、請求項16に記載の用途。
- 脱毛防止、発毛促進、育毛、ふけの除去及び予防、または黒毛生成促進を必要とする対象に、セリウム(Ce)、プラセオジミウム(Pr)、プロメチウム(Pm)、ユーロピウム(Eu)、テルビウム(Tb)、ジスプロシウム(Dy)、ホルミウム(Ho)、エルビウム(Er)、ツリウム(Tm)、イッテルビウム(Yb)、スカンジウム(Sc)、イットリウム(Y)、ランタン(La)、ネオジム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を適用する段階を含む、脱毛防止、発毛促進、育毛、ふけの除去及び予防、または黒毛生成促進方法。
- セリウム(Ce)、またはその塩若しくは酸化物を適用することを特徴とする、請求項18に記載の方法。
- 希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を、人参、苦参、みかん陳皮、緑茶、ニンジン、桔梗、桑椹子、タンキリマメ、石榴皮、松葉、月見子、コノテガシワの葉、何首烏、旱蓮草、トリビュラス抽出物、ベタイン、ハッカ抽出物、イラクサ抽出物、トクサ抽出物、ラベンダー抽出物、ホップ抽出物、アロエ、エゾウコギ、冬蟲夏草、トックリイチゴ、桑の実、木酢液、竹塩、黄花黄蓍、オニノタケ、枸杞子、胡桃、ブドウ、サフラワー、ゴマ、エゴマ、ニンニク、昆布、ワカメ、梅、緑豆、黒米、ペンタデカン酸グリセリド、ヒノキチオール、トウガラシチンキ、ショウガチンキ、カンタリスチンキ、フォルスコリン、トランス−3,4’−ジメチル−3−ヒドロキシフラバノン、トコフェロール類、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パルミチン酸レチノール、β−カロチン、 カルシフェロール、 葉酸、ビオチン、D−パントテニルアルコール、アセチルパントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテニルエチルエーテル、アスコルビン酸、グレープフルーツの種抽出物、セファランチン、ニコチン酸ベンジルエステル、ビタミンA、B1、B2、B6及びその誘導体、パントテン酸及びその誘導体、ミノキシジル、ムラサキセンブリ抽出液、アルギニン、アスパラギン酸、メチオニン、セリン、グリシン、グルタミン酸、シスチン、アミノ酸エキス、β−グリシレチン酸、 グリチルリチン酸類、塩酸ピリドキシン、サリチル酸、アラントイン、感光素301、イソプロピルメチルフェノール、ピロクトンオラミン、グリセリン、ピロリドンカーボン酸、エストラジオール、エチニルエストラジオール、及び1−メントールから構成された群から選択される一つ以上の毛髪成長促進補助成分と配合して適用することを特徴とする、請求項18に記載の方法。
- ランタン(La)、ネオジミウム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される一つ以上の希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を、トウガラシチンキと配合して適用することを特徴とする、請求項20に記載の方法。
- ショウガチンキ及びカンタリスチンキの一つ以上をさらに配合して適用することを特徴とする、請求項21に記載の方法。
- 経皮または経口投与に適用することを特徴とする、請求項18に記載の方法。
- セリウム(Ce)、プラセオジミウム(Pr)、プロメチウム(Pm)、ユーロピウム(Eu)、テルビウム(Tb)、ジスプロシウム(Dy)、ホルミウム(Ho)、エルビウム(Er)、ツリウム(Tm)、イッテルビウム(Yb)、スカンジウム(Sc)、イットリウム(Y)、ランタン(La)、ネオジム(Nd)、サマリウム(Sm)、ガドリニウム(Gd)、ルテチウム(Lu)及びこれらの混合物から構成された群から選択される希土類元素、またはその塩若しくは酸化物を利用して、脱毛防止、発毛促進、育毛、ふけの除去及び予防、または黒毛生成促進剤を製造する方法。
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