JP2010241832A - Adiponectin decrease inhibitor - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide medicines or foods which inhibit the decrease of adiponectin in the blood and exhibit a liver fibrillation-inhibiting effect. <P>SOLUTION: The adiponectin decrease inhibitors, which contain a diacylglycerol as an effective ingredient, improve hepatic function and inhibit liver fibrillation effectively. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、血中アディポネクチンの低下を抑制するアディポネクチン低下抑制剤に関する。   The present invention relates to an adiponectin decrease inhibitor that suppresses a decrease in blood adiponectin.

肝臓は、再生力の非常に強い臓器であるが、再生過程で線維化が起こると、正常な肝細胞の再生が妨げられる。肝線維化は、ウイルスやアルコール等の外的要因若しくは自己免疫異常が関与する内的要因によって惹起される肝細胞壊死と、肝機能を維持するための肝再生とのバランスが崩れた場合に、肝臓組織を修復するためにコラーゲン等の細胞外マトリックスが過剰沈着し、起こると考えられている。
肝線維化の進展は、血行動態を阻害し、肝再生の過程を障害して肝不全の病態を不可逆的にし、肝硬変、肝癌に移行する場合も多い。慢性肝炎等の治療において、肝硬変、肝癌への移行を抑制することは重要であり、そのためには肝線維化を抑制する必要がある。 The liver is an organ with very strong regenerative power, but when fibrosis occurs during the regeneration process, normal hepatocyte regeneration is hindered. Liver fibrosis occurs when the balance between hepatocyte necrosis caused by external factors such as viruses and alcohol, or internal factors that involve autoimmune abnormalities, and liver regeneration to maintain liver function is lost. It is thought that extracellular matrix such as collagen is excessively deposited to repair liver tissue.
Progression of liver fibrosis often inhibits hemodynamics, impairs the process of liver regeneration, makes the pathology of liver failure irreversible, and often shifts to cirrhosis and liver cancer. In the treatment of chronic hepatitis and the like, it is important to suppress liver cirrhosis and the transition to liver cancer. To that end, it is necessary to suppress liver fibrosis.

アディポネクチンは、１９９６年、前田らによりヒト脂肪組織から新たに分離された動物脂肪組織特異的タンパク質であるが（非特許文献１参照)、脂肪組織のみならず、血中にも多量に存在しており、正常ヒト血中には５〜１０μｇ／ｍＬという高濃度で存在している（非特許文献２参照)。最近の研究により、アディポネクチンの発現低下又は欠乏は、肥満インスリン抵抗性の原因であり、ひいては肥満及び２型糖尿病の原因であることが判明している（非特許文献３参照）。また、アディポネクチンの作用については、これまでに血管平滑筋の増殖ならびに細胞遊走の抑制作用、抗動脈硬化作用、単球及びマクロファージの活性化抑制作用（非特許文献４、５、６参照）、抗炎症作用（特許文献１参照）などが報告され、最近、肝星細胞の活性化の抑制、細胞外マトリックス産生の抑制、肝星細胞増殖の抑制、肝細胞増殖促進などの作用があり、肝線維化を抑制することが明らかにされている（特許文献２参照）。従って、生体内のアディポネクチン量の低下を抑制することができれば、肝線維化等を抑制することができると考えられる。   Adiponectin is an animal adipose tissue-specific protein newly isolated from human adipose tissue by Maeda et al. In 1996 (see Non-Patent Document 1), and is abundant in blood as well as adipose tissue. In normal human blood, it exists at a high concentration of 5 to 10 μg / mL (see Non-Patent Document 2). Recent studies have shown that reduced or deficient adiponectin expression is responsible for obesity insulin resistance, and thus obesity and type 2 diabetes (see Non-Patent Document 3). As for the action of adiponectin, the effects of vascular smooth muscle proliferation and cell migration, anti-arteriosclerosis, monocyte and macrophage activation (see Non-Patent Documents 4, 5, and 6), Inflammatory effects (see Patent Document 1) have been reported, and recently, there are effects such as suppression of hepatic stellate cell activation, suppression of extracellular matrix production, suppression of hepatic stellate cell proliferation, and promotion of hepatocyte proliferation. It has been clarified that the conversion is suppressed (see Patent Document 2). Accordingly, it is considered that liver fibrosis and the like can be suppressed if a decrease in the amount of adiponectin in the living body can be suppressed.

一方、ジアシルグリセロールは、食後の血中中性脂肪の上昇抑制作用（例えば、特許文献３参照）や、血中ＨＤＬコレステロール上昇作用を有し（例えば、特許文献４参照）、調理油や種々の油脂加工食品に使用されている。しかしながら、ジアシルグリセロールのアディポネクチンに対する作用はこれまでに全く知られていない。   On the other hand, diacylglycerol has an inhibitory effect on the increase in blood neutral fat after meal (see, for example, Patent Document 3) and an effect of increasing blood HDL cholesterol (see, for example, Patent Document 4). Used in processed oil and fat foods. However, the action of diacylglycerol on adiponectin has never been known so far.

特許第３０１８１８６号公報Japanese Patent No. 3018186 特開２００２−３６３０９４号公報JP 2002-363094 A 特開２００３−２８３５号公報JP 2003-2835 A 特開２００１−６４１７０号公報JP 2001-64170 A

Maeda K, et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 221:286(1996)Maeda K, et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 221: 286 (1996) Arita Y et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 257:79〜83(1999)Arita Y et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 257: 79-83 (1999) T. Yamauchi et al, Nature Medicine, Vol. 7, No.8(2001)T. Yamauchi et al, Nature Medicine, Vol. 7, No. 8 (2001) Arita Y et al, Circulation.105(24),2893-8.（2002）Arita Y et al, Circulation.105 (24), 2893-8. (2002) Ouchi N et al, Circulation.102(11),1296-301.(2000)Ouchi N et al, Circulation.102 (11), 1296-301. (2000) Okamoto Y et al, Circulation. 106(22),2767-70.(2002)Okamoto Y et al, Circulation. 106 (22), 2767-70. (2002)

本発明は、血中アディポネクチンの低下を抑制し、肝線維化抑制効果を発揮する医薬又は食品を提供するものである。   The present invention provides a medicament or food that suppresses the decrease of blood adiponectin and exhibits an effect of suppressing liver fibrosis.

本発明者らは、血中アディポネクチンの低下を抑制する物質について検討したところ、ジアシルグリセロールに当該作用があると共に、肝線維化抑制効果があることを見出した。   The present inventors examined a substance that suppresses a decrease in blood adiponectin, and found that diacylglycerol has the effect and also has an effect of suppressing liver fibrosis.

すなわち本発明は、ジアシルグリセロールを有効成分とするアディポネクチン低下抑制剤、及びジアシルグリセロールを有効成分とする肝線維化抑制剤を提供するものである。   That is, the present invention provides an adiponectin decrease inhibitor containing diacylglycerol as an active ingredient and a liver fibrosis inhibitor containing diacylglycerol as an active ingredient.

本発明のアディポネクチン低下抑制剤によれば、血中アディポネクチンの低下を抑制でき、肝機能を改善すると共に、肝線維化を有効に抑制することができる。従って、慢性肝炎等の慢性肝臓疾患の予防・治療において、肝再生を促進し、肝硬変、肝癌への移行を抑制することができる。   According to the adiponectin decrease inhibitor of the present invention, it is possible to suppress a decrease in blood adiponectin, improve liver function, and effectively suppress liver fibrosis. Therefore, in the prevention and treatment of chronic liver diseases such as chronic hepatitis, liver regeneration can be promoted, and the transition to cirrhosis and liver cancer can be suppressed.

本発明のアディポネクチン低下抑制剤及び肝線維化抑制剤に用いられるジアシルグリセロ−ルは、その構成脂肪酸が炭素数８〜２４、特に１６〜２２のものであるのが好ましい。また、全構成脂肪酸中、不飽和脂肪酸が７０重量％（以下単に％で示す）以上であるのが望ましい。特に、本発明の効果を高めるという点から、不飽和脂肪酸量／飽和脂肪酸量（重量比）が５．５以上であるのが好ましく、より好ましくは不飽和脂肪酸量／飽和脂肪酸重量比が８以上、更に好ましくは１０〜２５である。また、飽和脂肪酸含量は１０％以下、より好ましくは６％以下であるのが望ましい。ここで、不飽和脂肪酸量としては、オレイン酸、α-リノール酸、α−リノレン酸、シス−ジホモγ-リノレン酸、シス−アラキドン酸、シス-エイコサペンタエン酸、シス−ドコサヘキサエン酸などが挙げられ、飽和脂肪酸としては、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸などが挙げられる。   The diacylglycerol used in the adiponectin lowering inhibitor and liver fibrosis inhibitor of the present invention preferably has 8 to 24 carbon atoms, particularly 16 to 22 carbon atoms. In addition, it is desirable that the unsaturated fatty acid is 70% by weight (hereinafter simply expressed as%) or more in all the constituent fatty acids. In particular, from the viewpoint of enhancing the effect of the present invention, the unsaturated fatty acid amount / saturated fatty acid amount (weight ratio) is preferably 5.5 or more, more preferably the unsaturated fatty acid amount / saturated fatty acid weight ratio is 8 or more. More preferably, it is 10-25. The saturated fatty acid content is desirably 10% or less, more preferably 6% or less. Here, the amount of unsaturated fatty acid includes oleic acid, α-linoleic acid, α-linolenic acid, cis-dihomo γ-linolenic acid, cis-arachidonic acid, cis-eicosapentaenoic acid, cis-docosahexaenoic acid, and the like. Saturated fatty acids include palmitic acid, stearic acid, arachidonic acid and the like.

本発明のアディポネクチン低下抑制剤及び肝線維化抑制剤においては、当該ジアシルグリセロールは、純度１００％のジアシルグリセロールを用いるのが好ましいが、トリアシルグリセロール、モノアシルグリセロール等を若干含む油脂組成物を用いることでもよい。
この場合、モノアシルグリセロール含量は２％以下、特に１．５％以下であるのが好ましく、ジアシルグリセロールは、３５％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは６０％以上、更に好ましくは８０％以上含有するのが望ましい。 In the adiponectin decrease inhibitor and liver fibrosis inhibitor of the present invention, it is preferable to use 100% pure diacylglycerol as the diacylglycerol, but an oil / fat composition slightly containing triacylglycerol, monoacylglycerol and the like is used. It may be.
In this case, the monoacylglycerol content is preferably 2% or less, particularly preferably 1.5% or less, and diacylglycerol is 35% or more, preferably 50% or more, more preferably 60% or more, and still more preferably 80%. It is desirable to contain above.

ジアシルグリセロールを含有する油脂組成物は以下の方法により得ることができる。
すなわち、特開平６-２４７８４９号公報に示されるように、目的の構成脂肪酸を有する油脂とグリセリンとをエステル交換反応に付すか、あるいは目的の構成脂肪酸またはそのエステルとグリセリンとの混合物にリパーゼを作用させてエステル化反応を行うことにより製造できるが、反応中の異性化を防止する上で、リパーゼを用いたエステル化反応がより好ましい。また、リパーゼを用いたエステル化反応においても、反応終了後精製手段における異性化を防止するため、精製手段も脂肪酸の異性化が生起しないような緩和な条件で行うのが好ましい。 An oil and fat composition containing diacylglycerol can be obtained by the following method.
That is, as disclosed in JP-A-6-247849, fats and oils having a target constituent fatty acid and glycerin are subjected to a transesterification reaction, or lipase acts on a mixture of the target constituent fatty acid or its ester and glycerin. However, in order to prevent isomerization during the reaction, an esterification reaction using lipase is more preferable. Moreover, also in the esterification reaction using lipase, in order to prevent isomerization in the purification means after completion of the reaction, the purification means is also preferably performed under mild conditions so that fatty acid isomerization does not occur.

通常の植物油には植物ステロールが０．０５〜１．２％程度含まれている。ジアシルグリセロールを含有する油脂組成物は上記の方法により得ることができるが、製造方法により植物ステロールが低下することがある。例えば、一般に市販されている蒸留して得られた脂肪酸を原料として用いた場合、組成物中の植物ステロール量は低下してしまう。このような場合には、植物ステロールを０．０５％以上になるように添加してもよい。また、植物ステロール含量の上限は特に限定されない。ここで、植物ステロールとしては、α-シトステロール、β−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、α-シトスタノール、β-シトスタノール、スチグマスタノール、カンペスタノール、シクロアルテノール等のフェリー体、及びこれらの脂肪酸エステル、フェルラ酸エステル、桂皮酸エステル体が挙げられる。   Normal vegetable oil contains about 0.05 to 1.2% of plant sterol. An oil and fat composition containing diacylglycerol can be obtained by the above method, but the plant sterol may be lowered by the production method. For example, when the fatty acid obtained by distillation generally marketed is used as a raw material, the amount of plant sterols in a composition will fall. In such a case, you may add a plant sterol so that it may become 0.05% or more. Moreover, the upper limit of plant sterol content is not specifically limited. Here, as plant sterols, ferries such as α-sitosterol, β-sitosterol, stigmasterol, campesterol, α-sitostanol, β-sitostanol, stigmasteranol, campestanol, cycloartenol, and the like Fatty acid esters, ferulic acid esters, and cinnamic acid esters.

尚、ジアシルグリセロールを含有する油脂組成物は、上記製造方法の他、天然食用油脂の分別により得ることもでき、本発明においては、そのような油脂組成物を用いることもできる。   In addition, the oil-and-fat composition containing diacylglycerol can be obtained by fractionating natural edible oils and fats in addition to the above production method, and such oil-and-fat compositions can also be used in the present invention.

アディポネクチンは、正常ヒト血中に高濃度で存在する動物脂肪組織特異的タンパク質であり（前記非特許文献２)、肝線維化抑制作用（前記特許文献２）、血管平滑筋の増殖ならびに細胞遊走の抑制作用、抗動脈硬化作用、単球及びマクロファージの活性化抑制作用（前記非特許文献４、５、６参照）抗炎症作用（前記特許文献１）等を有する。本発明のジアシルグリセロールは、後記実施例に示すように、ラットにおいて、高蔗糖食により誘導される血中アディポネクチン濃度の低下を有意に抑制し、肝線維化抑制作用を有する。従って、斯かるジアシルグリセロールは、慢性肝炎等の慢性肝臓疾患における肝線維化を抑制することが可能であり、肝硬変、肝癌への移行を抑えるのに有効な医薬又は食品のための素材として有用である。   Adiponectin is an animal adipose tissue-specific protein that exists in high concentrations in normal human blood (Non-patent Document 2), suppresses liver fibrosis (Patent Document 2), and promotes vascular smooth muscle proliferation and cell migration. It has inhibitory action, anti-arteriosclerotic action, monocyte and macrophage activation inhibitory action (see Non-Patent Documents 4, 5, and 6), anti-inflammatory action (Patent Document 1), and the like. The diacylglycerol of the present invention significantly suppresses a decrease in blood adiponectin concentration induced by a high sucrose diet and has a liver fibrosis inhibitory effect in rats as shown in Examples below. Therefore, such a diacylglycerol can suppress liver fibrosis in chronic liver diseases such as chronic hepatitis, and is useful as a material for pharmaceuticals or foods effective in suppressing the transition to cirrhosis and liver cancer. is there.

本発明のアディポネクチン低下抑制剤及び肝線維化抑制剤は、ジアシルグリセロールを単体でヒト及び動物に投与できる他、各種飲食品、医薬品、ペットフード等に配合して摂取することができる。
食品形態としては、例えば、ドリンク等のドリンク飲料、粉末ジュース等の粉末飲料、キャンディ、ドロップ、ゼリー、クッキー、チョコレート、ケーキ、ヨーグルト、ガム等の菓子類、調味料、調理油、乳製品、パン、加工米等の他、錠剤（タブレット）、カプセル、顆粒等の肝臓機能の改善をコンセプトとする食品、病者用食品、特定保健用食品とすることができる。斯かる食品は、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、乳化剤、ビタミン類、香料、ミネラル等の添加剤、タンパク質、脂質、糖質、炭水化物、食物繊維等の食品原料に、ジアシルグリセロールを混合し、常法に従って各種食品形態とすることにより調製できる。 The adiponectin decrease inhibitor and hepatic fibrosis inhibitor of the present invention can be administered in combination with diacylglycerol alone to humans and animals, and in addition to various foods, medicines, pet foods and the like.
Examples of food forms include drinks such as drinks, powdered drinks such as powdered juice, confectionery such as candy, drop, jelly, cookies, chocolate, cake, yogurt, gum, seasonings, cooking oil, dairy products, bread In addition to processed rice, etc., foods based on the concept of improving liver function such as tablets, capsules and granules, foods for the sick, and foods for specified health use can be obtained. Such foods include, for example, sweeteners, colorants, antioxidants, emulsifiers, vitamins, fragrances, minerals, and other food ingredients such as proteins, lipids, sugars, carbohydrates, dietary fiber, and diacylglycerol. It can be prepared by mixing and making various food forms according to conventional methods.

医薬品として使用する場合は、例えば、錠剤、顆粒剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤とすることができる。尚、経口用固形製剤を調製する場合には、本発明のジアシルグリセロールに賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。また、経口用液体製剤を調製する場合は、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯味剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。   When used as a pharmaceutical, for example, oral solid preparations such as tablets and granules, and oral liquid preparations such as oral liquids and syrups can be used. When preparing an oral solid preparation, after adding an excipient, if necessary, a binder, a disintegrant, a lubricant, a coloring agent, a corrigent, a corrigent and the like to the diacylglycerol of the present invention. Tablets, coated tablets, granules, powders, capsules and the like can be produced by conventional methods. Moreover, when preparing a liquid preparation for oral use, a liquid preparation, a syrup, an elixir, etc. can be manufactured by a conventional method by adding a corrigent, a buffer, a stabilizer, a corrigent and the like.

上記各製剤中に配合されるべきジアシルグリセロールの配合量は、一般に０．１〜１００重量％、特に１〜９０重量％が好ましい。   The blending amount of diacylglycerol to be blended in each of the above preparations is generally 0.1 to 100% by weight, particularly preferably 1 to 90% by weight.

本発明のアディポネクチン低下抑制剤及び肝線維化抑制剤の投与量（有効摂取量）は、ジアシルグリセロールとして、１日あたり０．０３〜２５ｇ、更には5〜２０ｇ、特に６〜１５ｇが好ましい。   The dosage (effective intake) of the adiponectin lowering inhibitor and hepatic fibrosis inhibitor of the present invention is preferably 0.03 to 25 g, more preferably 5 to 20 g, and particularly preferably 6 to 15 g per day as diacylglycerol.

実施例１
以下の実施例で用いたジアシルグリセロールは下記の方法で製造したものである。
固定化１，３−位選択的リパーゼである市販リパーゼ製剤（商品名「Lipozyme IM−２０」、の簿インダストリーＡ.Ｓ.社製）を触媒として、表１の脂肪酸組成を有するジアシルグリセロールを得た。
次に、表２に示す組成の高蔗糖ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）配合食（本発明品）を製造した。また、高蔗糖トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）配合食（比較品）及びコントロール食（コントロール品）を同様に製造した。 Example 1
The diacylglycerol used in the following examples was produced by the following method.
A diacylglycerol having the fatty acid composition shown in Table 1 was obtained using a commercially available lipase preparation (trade name “Lipozyme IM-20”, manufactured by Book Industries AS Co., Ltd.) as an immobilized 1,3-position selective lipase. It was.
Next, a high sucrose diacylglycerol (DAG) combination meal (product of the present invention) having the composition shown in Table 2 was produced. In addition, a high sucrose triacylglycerol (TAG) combination food (comparative product) and a control food (control product) were produced in the same manner.

実施例２ 血中アディポネクチン低下抑制効果及び肝線維化抑制効果
＜実験方法＞
Ｗｉｓｔａｒ系♂ラットに高蔗糖食を負荷させた場合、血糖値の上昇、血清中性脂肪の上昇、内臓脂肪量の増加、インスリン抵抗性を誘導する（Metabolism.36,11(1987)，Obes.Res.4,6(1996), Am.J.Physiol.271(1996), J Appl physiol.91(2001),Ｊ.Nutr.133(2003)）。そこで、7週齢のＷｉｓｔａｒ系♂ラットを用い、各群6匹ずつ3群に分け、表２に示すように実施例１で調製した本発明品、比較品及びコントロール品で飼育した。１、２、１１ヶ月後にエーテル麻酔下において頚静脈より採血を行い、血中アディポネクチン濃度を大塚製薬株式会社製マウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキットを用い、測定した。更に１２ヶ月後に、肝臓を採取し、ホルマリン固定後、パラフィン包埋した後、切片を渡辺の鍍銀染色し、肝臓の線維化状態（新犬山分類によるスコア；日本消化器病学会雑誌 Vol.96 No.4 377-384）を観察した。また、肝線維化の１指標である血中ヒアルロン酸量を測定した。結果を表３及び表４に示す。 Example 2 Blood Adiponectin Decrease Inhibitory Effect and Liver Fibrosis Inhibitory Effect <Experimental Method>
When a high sucrose diet is loaded on Wistar rats, it induces an increase in blood glucose level, an increase in serum neutral fat, an increase in visceral fat mass, and insulin resistance (Metabolism. 36, 11 (1987), Obes. Res. 4, 6 (1996), Am. J. Physiol. 271 (1996), J Appl physiol. 91 (2001), J. Nutr. 133 (2003)). Thus, 7-week-old Wistar rats were used, divided into 3 groups of 6 animals each, and reared with the product of the present invention, comparative product and control product prepared in Example 1 as shown in Table 2. 1, 2, and 11 months later, blood was collected from the jugular vein under ether anesthesia, and the blood adiponectin concentration was measured using a mouse / rat adiponectin ELISA kit manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. After 12 months, the liver was collected, fixed in formalin, embedded in paraffin, and then the section was stained with silver of Watanabe, and the fibrosis state of the liver (score according to Shininuyama classification; Journal of Japanese Society of Gastroenterology Vol.96 No. 4 377-384) was observed. In addition, the amount of blood hyaluronic acid, which is one index of liver fibrosis, was measured. The results are shown in Tables 3 and 4.

＜結果＞

<Result>

表３より、比較品投与群ではコントロール群と比較し、アディポネクチン濃度の有意な低下を認めたが、本発明品投与群はコントロール群と同等であり、血中アディポネクチンの低下を抑制した。   From Table 3, the comparison product administration group showed a significant decrease in adiponectin concentration compared to the control group, but the product administration group of the present invention was equivalent to the control group and suppressed the reduction of blood adiponectin.

表４より、比較品投与群ではコントロール群と比較し、肝臓の線維化が認められたが、本発明品投与群は肝臓の線維化を抑制した。また、肝線維化の１指標である血中ヒアルロン酸濃度は、比較品投与群ではコントロール群と比較し、有意に高値であったが、本発明品投与群はコントロール群と同等であった。すなわち、本発明品投与群は、肝線維化を有効に抑制した。   From Table 4, although the fibrosis of the liver was recognized in the comparison product administration group compared with the control group, the administration product of the present invention suppressed the fibrosis of the liver. The blood hyaluronic acid concentration, which is one index of liver fibrosis, was significantly higher in the comparison product administration group than in the control group, but the product administration group was equivalent to the control group. That is, the present invention product administration group effectively suppressed liver fibrosis.

Claims (1)

ジアシルグリセロールを有効成分とするアディポネクチン低下抑制剤。   An adiponectin decrease inhibitor comprising diacylglycerol as an active ingredient.