JP2010241715A - Neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、中性エンドペプチダーゼ阻害剤及び発毛抑制剤に関する。 The present invention relates to a neutral endopeptidase inhibitor and a hair growth inhibitor.
頭髪や手足の体毛は本来、頭部、胸部、手足等の重要な器官を保護するためのものであるが、現代では生活環境の変化や技術の進歩発展とともに、保護機能の重要性は薄れつつある。体毛本来の保護機能が衣服等の保護手段によって代替されたり、生活環境の変化に伴い身体を損傷しうる外的な危険性が薄れたこと等によるものである。
これらに加え、最近では手足の体毛は美的外観上できるだけ少ない方が好まれる傾向にあり、特に女性においては、手足等の体毛を除去することが盛んに行われている。また、男性においても、従来から髭処理が一般的に行われている。
体毛を除去する除毛・脱毛方法としては、シェーバー等の器具を用いるもの、電気やレーザー等を用いるもの又は皮膚に脱毛剤を塗布して化学的に処理するものが一般的である。しかしながら、これらの方法は皮膚表面を傷つける、皮膚に炎症が起こる、薬剤によって皮膚がかぶれる等の弊害がある。また、処理に痛みを伴うという問題もある。
Head hair and limbs' hair is originally intended to protect important organs such as the head, chest, and limbs. However, the importance of protective functions is diminishing as the living environment changes and technology advances and develops today. is there. This is because the original protective function of body hair is replaced by protective means such as clothes, or the external risk of damaging the body with a change in living environment is diminished.
In addition to these, recently, there is a tendency that the body hair of the limbs is as small as possible in terms of aesthetic appearance, and particularly for women, removal of body hairs such as limbs is actively performed. Further, wrinkle treatment has been generally performed for men.
As hair removal / hair removal methods for removing body hair, those using a device such as a shaver, those using electricity, laser, etc., or those chemically treated by applying a hair removal agent to the skin are generally used. However, these methods have problems such as damaging the skin surface, causing inflammation on the skin, and rashing the skin by drugs. There is also a problem that processing is painful.
このような背景から、発毛抑制効果を謳った発毛抑制剤や化粧料等が提案されているが、効果等の面で十分とは言い難く、発毛抑制効果を有する素材のさらなる探索が望まれている。近年、中性エンドペプチターゼ活性を阻害すれば体毛の成長を抑制出来ることが報告されている（例えば、特許文献１参照）。皮膚組織内における中性エンドペプチダーゼの活性の上昇は、毛包形成およびその成長にとって重要な影響を及ぼしており、皮膚組織内の中性エンドペプチダーゼ活性を抑制することで、体毛の成長を抑制できる。
しかし、従来知られている中性エンドペプチダーゼ阻害剤は活性阻害効果が十分とはいえない等の問題点を有していた。そのため、新たな中性エンドペプチダーゼ阻害剤が望まれている。
Against this background, hair growth inhibitors and cosmetics that are effective in suppressing hair growth have been proposed, but it is difficult to say that they are sufficient in terms of effects and the like, and there is a further search for materials having a hair growth suppressing effect. It is desired. In recent years, it has been reported that hair growth can be suppressed by inhibiting neutral endopeptidase activity (see, for example, Patent Document 1). Increased neutral endopeptidase activity in skin tissue has an important effect on hair follicle formation and its growth, and suppression of neutral endopeptidase activity in skin tissue can suppress hair growth .
However, conventionally known neutral endopeptidase inhibitors have problems such as an insufficient activity inhibitory effect. Therefore, a new neutral endopeptidase inhibitor is desired.
本発明は、新規な中性エンドペプチダーゼ阻害剤及び発毛抑制剤を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a novel neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor.
本発明者等は上記課題に鑑み、鋭意検討を行った。その結果、地衣類の抽出物が高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害作用を有することを見出した。さらに、前記抽出物に含まれる下記一般式（１）で表される化合物が、同様の中性エンドペプチダーゼ活性阻害作用を示すことを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成させたものである。 In view of the above problems, the present inventors have conducted intensive studies. As a result, it was found that the lichen extract has a high neutral endopeptidase activity inhibitory action. Furthermore, it has been found that the compound represented by the following general formula (1) contained in the extract exhibits the same neutral endopeptidase activity inhibitory action. The present invention has been completed based on these findings.
本発明は、地衣類抽出物を有効成分として含有する中性エンドペプチダーゼ阻害剤または発毛抑制剤に関する。 The present invention relates to a neutral endopeptidase inhibitor or hair growth inhibitor containing a lichen extract as an active ingredient.
本発明によれば、高い活性阻害効果を有する中性エンドペプチダーゼ阻害剤を提供することができる。また、本発明によれば、高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有する発毛抑制剤を提供することができる。 According to the present invention, a neutral endopeptidase inhibitor having a high activity inhibitory effect can be provided. Moreover, according to this invention, the hair growth inhibitor which has a high neutral endopeptidase activity inhibitory effect can be provided.
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の中性エンドペプチダーゼ阻害剤及び発毛抑制剤は、地衣類の抽出物を有効成分として含有する。さらに、本発明の中性エンドペプチダーゼ阻害剤及び発毛抑制剤に含まれる前記地衣類の抽出物には、下記一般式（１）で表される化合物が有効成分として含まれることが好ましい。地衣類の抽出物および下記一般式（１）で表される化合物が中性エンドペプチダーゼ阻害効果を有することについては全く知られていなかった。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor of the present invention contain a lichen extract as an active ingredient. Further, the lichen extract contained in the neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor of the present invention preferably contains a compound represented by the following general formula (1) as an active ingredient. It was not known at all that the lichen extract and the compound represented by the following general formula (1) had a neutral endopeptidase inhibitory effect.
本発明に用いられる地衣類としては、セキカ、セッチャ、ナガサルオガセ、ササクレカラタチゴケ、ウチキアワビゴケ、イワタケ、ミヤマハナゴケ、ハナゴケ、コアカミゴケ、キゴケ、カムリゴケ、ヘリトリゴケ、エビラゴケ、シラチャカワラゴケ、ボンジゴケ、サンゴゴケなどが挙げられる。中でも、セキカおよびセッチャを用いることが好ましい。
セキカは、ウメノキゴケ科ウメノキゴケ属に属し、学名Parmelia tinctorum Despr.、和名はウメノキゴケである。
セッチャは、ムシゴケ科ムシゴケ属に属し、学名Thamnolia vermicularis、和名はムシゴケ、雪茶である。
Examples of lichens used in the present invention include Sekika, Setcha, Nagasaru Ogase, Sasukurekara Tachigoke, Uchikiwabigoke, Iwatake, Miyama Hanagoke, Hanagoke, Kookamikeke, Kigoke, Kamurigoke, Horitori Soke, Shirachagoragoke, Shirachakawagoke, Bonjigoke, etc. It is done. Among them, it is preferable to use sekika and a setcher.
Sekika belongs to the genus Umenocokeaceae, and the scientific name is Parmelia tinctorum Despr.
Setcha belongs to the genus Musgoque , and scientific name is Thamnolia vermicularis .
本発明の地衣類の抽出物を得るためには、地衣類の全ての任意の部分が使用可能である。中でも、上記地衣類の葉状体、子実体を用いるのが好ましい。
本発明において、地衣類の抽出物の調製に、上記地衣類をそのまま、又は乾燥粉砕して用いることもできるが、その水蒸気蒸留物又は圧搾物を用いることもでき、これらは精油等、より精製したものを用いることもでき、また市販品を利用することもできる。上記地衣類又はその水蒸気蒸留物若しくは圧搾物は、いずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
また、本発明に用いる地衣類抽出物は、上述の地衣類２種以上から得られた混合物であってもよい。
In order to obtain the lichen extract of the present invention, any arbitrary part of the lichen can be used. Among these, it is preferable to use the leaf-like body and fruit body of the lichen.
In the present invention, the lichen can be used as it is or after dry pulverization for the preparation of lichen extract, but its steam distillate or compressed product can also be used. What was used can also be used and a commercial item can also be utilized. Any of the above lichens or steam distillates or compressed products thereof may be used alone or in combination of two or more.
In addition, the lichen extract used in the present invention may be a mixture obtained from two or more of the above-mentioned lichens.
本発明に用いる地衣類抽出物を得る方法は特に限定されず、適当な溶媒を用いた常法の抽出方法によって調製することができる。
抽出に用いる溶媒としては、通常菌類成分の抽出に用いられるもの、例えば水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；及びピリジン類等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。本発明において、抽出溶媒としては、水性アルコールが好ましく、９５質量％エタノールを用いることが特に好ましい。
また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記地衣類を０〜１００℃で数分間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましく、室温付近の温度で１時間〜３週間程度浸漬することが特に好ましい。
The method for obtaining the lichen extract used in the present invention is not particularly limited, and can be prepared by a conventional extraction method using an appropriate solvent.
Solvents used for extraction are those usually used for extraction of fungal components, such as water; alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol; polyhydric alcohols such as propylene glycol and butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone. Esters such as methyl acetate and ethyl acetate; Chain and cyclic ethers such as tetrahydrofuran and diethyl ether; Halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, chloroform and dichloroethane; Hydrocarbons such as squalane, hexane, cyclohexane and petroleum ether Aromatic hydrocarbons such as toluene; Polyethers such as polyethylene glycol; and pyridines, and the like can be used alone or in combination of two or more. In the present invention, the extraction solvent is preferably aqueous alcohol, and particularly preferably 95% by mass ethanol.
Moreover, normal conditions can be applied as the extraction conditions. For example, the lichen is preferably immersed or heated to reflux at 0 to 100 ° C. for several minutes to several weeks, and for about 1 hour to 3 weeks at a temperature near room temperature. Particularly preferred.
上記地衣類の抽出物は、そのまま本発明の中性エンドペプチダーゼ阻害剤または発毛抑制剤の有効成分として使用できるが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により分画して用いることもできる。また、前記抽出物を希釈、濃縮または凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。本発明において、地衣類抽出物とは、前記のような抽出方法で得られた各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を含むものである。 The lichen extract can be used as it is as an active ingredient of the neutral endopeptidase inhibitor or hair growth inhibitor of the present invention, but is further fractionated by an appropriate separation means such as gel filtration, chromatography, precision distillation and the like. It can also be used. Further, the extract can be used after being diluted, concentrated or freeze-dried and then prepared into a powder or paste. In the present invention, the lichen extract includes various solvent extracts obtained by the extraction method as described above, a diluted solution thereof, a concentrated solution thereof or a dried powder thereof.
本発明において、地衣類の抽出物はそのまま中性エンドペプチダーゼ阻害剤として用いてもよい。または、上記抽出物に、例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤を加えて用いてもよい。この場合、中性エンドペプチダーゼ阻害剤中の地衣類の抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分換算で０．００００１〜５０重量％含まれるのが好ましく、０．００１〜１０重量％程度含まれるのが特に好ましい。 In the present invention, the lichen extract may be used as it is as a neutral endopeptidase inhibitor. Alternatively, an appropriate liquid or solid excipient or extender such as titanium oxide, calcium carbonate, distilled water, lactose, starch or the like may be added to the above extract. In this case, the amount of the lichen extract in the neutral endopeptidase inhibitor is not particularly limited, but the extract is preferably contained in an amount of 0.00001 to 50% by weight in terms of solid content, and 0.001 to 10%. It is particularly preferable that it is contained in an amount of about% by weight.
本発明に用いられる前記地衣類抽出物は高い中性エンドペプチダーゼ阻害効果を奏する。そのため、地衣類抽出物を有効成分として含有する本発明の発毛抑制剤は、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害し体毛の成長を抑えることができる。 The lichen extract used in the present invention has a high neutral endopeptidase inhibitory effect. Therefore, the hair growth inhibitor of the present invention containing a lichen extract as an active ingredient can inhibit neutral endopeptidase activity and suppress the growth of body hair.
本発明において、前記地衣類の抽出物をそのまま発毛抑制剤として用いることができる。また、必要に応じて濃縮し、あるいは希釈して用いることもできる。さらに、凍結乾燥などの方法により粉末化して用いてもよい。 In the present invention, the lichen extract can be used as it is as a hair growth inhibitor. Further, it can be concentrated or diluted as necessary. Further, it may be used after being pulverized by a method such as freeze-drying.
本発明の発毛抑制剤は、その形態としては特に限定されず、前記地衣類抽出物をそのまま発毛抑制剤として用いてもよい。また、本発明の発毛抑制剤は、その多くは人や動物に適用されるものであるため、人や動物の皮膚、毛髪等に適用されうるすべての形態を含みうる。
なかでも、本発明の発毛抑制剤は皮膚外用剤として用いることが好ましく、除毛、脱毛または髭剃り関連化粧料とすることが特に好ましい。本発明の発毛抑制剤を皮膚へ直接塗布することで、発毛を抑制したい部位のみに効果的に作用させることができる。
The form of the hair growth inhibitor of the present invention is not particularly limited, and the lichen extract may be used as it is as a hair growth inhibitor. Moreover, since most of the hair growth inhibitors of the present invention are applied to humans and animals, they can include all forms that can be applied to human and animal skin, hair, and the like.
Especially, it is preferable to use the hair growth inhibitor of this invention as a skin external preparation, and it is especially preferable to set it as the hair removal, hair removal, or shaving related cosmetics. By directly applying the hair growth inhibitor of the present invention to the skin, it is possible to effectively act only on the site where hair growth is desired to be suppressed.
このような皮膚外用剤または化粧料としては、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、ペースト状、クリーム状、エアゾール状等の除毛剤、ワックス状、ジェル状、シート状等の脱毛剤、除毛または脱毛の後処理に用いるローション、クリーム等の後処理料、プレシェーブローション等の髭剃り前処理料、シェービングクリーム等の髭剃り料、アフターシェーブローション等の髭剃り後処理料などが挙げられる。 Such skin external preparations or cosmetics include aqueous solutions, solubilization systems, emulsification systems, powder systems, gel systems, ointment systems, creams, water-oil two-layer systems, water-oil-powder three-layer systems, and the like. Can take a wide variety of forms. For example, hair remover such as paste, cream, aerosol etc., hair remover such as wax, gel, sheet etc., lotion used for hair removal or after treatment of hair removal, post treatment for cream etc., pre-shave lotion, etc. Shave pre-treatment charges, shaving creams and other shaving charges, and post-shaving treatment charges such as after-shave lotion.
本発明の発毛抑制剤における前記地衣類の抽出物の配合量は特に限定されないが、発毛抑制効果等の観点から、固形分換算で０．００００１〜５０重量％が好ましく、０．００１〜１０重量％程度が特に好ましい。 The blending amount of the lichen extract in the hair growth inhibitor of the present invention is not particularly limited, but is preferably 0.00001 to 50% by weight in terms of solid content from the viewpoint of hair growth inhibiting effect, etc. About 10% by weight is particularly preferable.
本発明の発毛抑制剤には、前記抽出物の他に、本発明の効果を損なわない範囲において通常の皮膚外用剤、化粧料等に用いられる各種任意成分を適宜配合することができる。このような任意成分としては、例えば精製水、アルコール、界面活性剤、油性物質、保湿剤、皮膚老化防止剤、美白剤、高分子化合物、防腐剤、増粘剤、乳化剤、薬効成分、紛体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等を適宜配合できる。 In the hair growth inhibitor of the present invention, in addition to the above extract, various optional components used in normal skin external preparations, cosmetics and the like can be appropriately blended within a range not impairing the effects of the present invention. Examples of such optional components include purified water, alcohol, surfactant, oily substance, moisturizer, skin anti-aging agent, whitening agent, polymer compound, preservative, thickener, emulsifier, medicinal component, powder, Ultraviolet absorbers, pigments, fragrances, emulsion stabilizers, pH adjusters, and the like can be appropriately blended.
皮膚外用剤または化粧料として使用する場合の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ２当たり０．１〜１００ｍｇ、液状製剤の場合、０．１〜１００ｍｇ使用するのが好ましい。 The amount used when used as a skin external preparation or cosmetic varies depending on the content of the active ingredient. For example, in the case of a cream or ointment, 0.1 to 100 mg per cm 2 of the skin surface, and in the case of a liquid preparation, 0 It is preferable to use 1 to 100 mg.
本発明に用いられる地衣類抽出物には、下記一般式（１）で表される化合物が有効成分として含まれていることが好ましい。 The lichen extract used in the present invention preferably contains a compound represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
一般式（１）で表される化合物について説明する。 The compound represented by the general formula (1) will be described.
前記一般式（１）中、Ｒ１としては水素原子、メチル基が好ましく、水素原子がより好ましい。Ｒ２としては、水素原子、エチル基が好ましく、エチル基がより好ましい。Ｒ３としては、水素原子、エチル基が好ましく、水素原子がより好ましい。Ｒ４としては水素原子、エチル基が好ましく、エチル基がより好ましい。
Ｘとしては、水素原子、ヒドロキシル基、エトキシ基、アセトキシ基が好ましく、エトキシ基がより好ましい。
In the general formula (1), R 1 is preferably a hydrogen atom or a methyl group, and more preferably a hydrogen atom. R 2 is preferably a hydrogen atom or an ethyl group, and more preferably an ethyl group. R 3 is preferably a hydrogen atom or an ethyl group, and more preferably a hydrogen atom. R 4 is preferably a hydrogen atom or an ethyl group, and more preferably an ethyl group.
X is preferably a hydrogen atom, a hydroxyl group, an ethoxy group, or an acetoxy group, and more preferably an ethoxy group.
前記一般式（１）で表される化合物としては、サラチン酸、ノルスチクチン酸、スチクチン酸、ガルビン酸、プロトセトラール酸及びそれらの類縁体が好ましい。 As the compound represented by the general formula (1), saratinic acid, norsticinic acid, sticinic acid, galvinic acid, protocetralic acid and analogs thereof are preferable.
以下に、前記一般式（１）で表される化合物の具体例を示すが、本発明は下記具体例に限定されるものではない。なお、本明細書中、Ａｃはアセチル基を、Ｅｔはエチル基をそれぞれ表す。 Specific examples of the compound represented by the general formula (1) are shown below, but the present invention is not limited to the following specific examples. In the present specification, Ac represents an acetyl group, and Et represents an ethyl group.
本発明おいて、前記一般式（１）で表される化合物として、人工的に合成されたものを用いてもよく、地衣類等の天然物から抽出された抽出物を用いてもよい。
本発明に係る中性エンドペプチダーゼ阻害剤または発毛抑制剤は有効成分として前記一般式（１）で表される化合物を含有することが好ましい。本発明の中性エンドペプチダーゼ阻害剤または発毛抑制剤中の前記一般式（１）で表される化合物の含有量は特に制限されないが、０．００００１〜５０重量％であることが好ましく、０．００１〜１０重量％であることがより好ましい。
In the present invention, as the compound represented by the general formula (1), an artificially synthesized compound or an extract extracted from a natural product such as lichen may be used.
The neutral endopeptidase inhibitor or hair growth inhibitor according to the present invention preferably contains the compound represented by the general formula (1) as an active ingredient. The content of the compound represented by the general formula (1) in the neutral endopeptidase inhibitor or hair growth inhibitor of the present invention is not particularly limited, but is preferably 0.00001 to 50% by weight, More preferably, the content is 0.001 to 10% by weight.
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further in detail based on an Example, this invention is not limited to this.
（製造例１）セキカ抽出液の調製
セキカ抽出液は、セキカ葉状体（石花：新和物産）４０ｇに９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間浸漬した。これをろ過し、セキカ抽出液を得た。このセキカ抽出液を濃縮したところ、その固形分は０．４９ｇであった。抽出液の固形分濃度は、０．１２％であった。調整したセキカ抽出液１ｍＬを濃縮した後、９５％エタノール水溶液０．２４０ｍＬを加え、評価サンプルとした。
(Production Example 1) Preparation of Sekika Extract Solution Sekika extract solution was obtained by adding 400 mL of 95% ethanol aqueous solution to 40 g of Sekika frond (Ishibana: Shinwa product) and immersing it at room temperature for 7 days. This was filtered to obtain a sekika extract. When this Sekika extract was concentrated, the solid content was 0.49 g. The solid concentration of the extract was 0.12%. After concentrating 1 mL of the prepared Sekika extract, 0.240 mL of 95% ethanol aqueous solution was added to prepare an evaluation sample.
（製造例２）セッチャ抽出液の調整
セッチャ抽出液は、セッチャ（雪茶：新和物産）４０ｇに９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間浸漬した。これをろ過し、セッチャ抽出液を得た。このセッチャ抽出液を濃縮したところ、その固形分は１．１０ｇであった。抽出液の固形分濃度は、０．３４％であった。調整したセッチャ抽出液１．５ｍＬを濃縮した後、９５％エタノール水溶液１ｍＬを加え、評価サンプルとした。
(Manufacture example 2) Preparation of a setcher extract The setcher extract added 400 mL of 95% ethanol aqueous solution to 40g of a setcher (Snow tea: Shinwa Bussan), and was immersed for seven days at normal temperature. This was filtered to obtain a setcher extract. When this setcher extract was concentrated, the solid content was 1.10 g. The solid concentration of the extract was 0.34%. After concentrating 1.5 mL of the adjusted Setcha extract, 1 mL of 95% ethanol aqueous solution was added to prepare an evaluation sample.
（実施例１）培養ヒト線維芽細胞由来の中性エンドペプチダーゼ活性測定試験
Cell System社より市販されている正常ヒト線維芽細胞を用いて、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥ培地で継体培養し、以下の試験に供した。試験方法は、The Journal of Biological Chemistry,266(34),23041-23047(1991)に記載の方法を参照した。
ラバーポリスマンを用いてシャーレから剥がした細胞を、リン酸緩衝食塩水中に浮遊させ、低速の遠心分離器を使って細胞を集めた後、同生理食塩水で３回洗浄した。得られた細胞を０．１％ Triton X-100／０．２Ｍ Tris-HClバッファー（pH 8.0）に浮遊させ、超音波粉砕し、これをヒト線維芽細由来酵素液とした。酵素活性測定の基質には、１０ｍＭグルタリル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−４−メトキシ−β−ナフチルアミンを用いた。酵素液１００μＬに対し、所定の濃度に希釈した前記地衣類抽出物（評価サンプル）を２μＬまたは０．６μＬ、基質を２μＬ添加し、３７℃で１時間反応させ、基質を分解した。その後、ホスホラミドン（Phosphoramidone）を最終濃度１μＭとなるように添加して、基質分解反応を停止させた。この酵素分解反応により、ヒト線維芽細由来酵素液に含まれる中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）が基質をＡｌａ−Ｐｈｅ間で切断、分解する。
コントロールとして、上記酵素反応系において、評価サンプル２μＬまたは０．６μＬのかわりに９５％エタノール水溶液を同量加えた以外は上記と同様にした試料を作成した。
さらに、反応系にロイシンアミノペプチダーゼ（Leucine aminopeptidase）を最終濃度が０．５０ｍＵ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で１時間反応させた。これにより、ＮＥＰ分解産物がロイシンアミノペプチダーゼによってさらに切断、分解され、４−メトキシ−２−ナフチルアミンを生じる。生成した４−メトキシ−２−ナフチルアミン量を、蛍光分光光度計で励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４２５ｎｍにて蛍光強度を測定した。
得られた測定値をもとに、以下の式から地衣類抽出物（評価サンプル）の中性エンドペプチダーゼ活性阻害率を求めた。結果を表１に示す。
中性エンドペプチダーゼ活性阻害率（％）＝100−{(評価サンプル添加時の4-メトキシ-2-ナフチルアミン量)／(コントロール添加時の4-メトキシ-2-ナフチルアミン量）｝×100
(Example 1) Neutral endopeptidase activity measurement test derived from cultured human fibroblasts
Using normal human fibroblasts commercially available from Cell System, the cells were subcultured in DME medium containing 10% fetal bovine serum and subjected to the following tests. For the test method, the method described in The Journal of Biological Chemistry, 266 (34), 23041-23047 (1991) was referred to.
Cells detached from the petri dish using a rubber policeman were suspended in phosphate buffered saline, and the cells were collected using a low-speed centrifuge, and then washed three times with the same physiological saline. The obtained cells were suspended in 0.1% Triton X-100 / 0.2M Tris-HCl buffer (pH 8.0) and sonicated, and this was used as a human fibroblast-derived enzyme solution. As a substrate for enzyme activity measurement, 10 mM glutaryl-Ala-Ala-Phe-4-methoxy-β-naphthylamine was used. 2 μL or 0.6 μL of the lichen extract (evaluation sample) diluted to a predetermined concentration and 2 μL of the substrate were added to 100 μL of the enzyme solution, and reacted at 37 ° C. for 1 hour to decompose the substrate. Thereafter, Phosphoramidone was added to a final concentration of 1 μM to stop the substrate degradation reaction. By this enzymatic degradation reaction, neutral endopeptidase (NEP) contained in the human fibroblast-derived enzyme solution cleaves and decomposes the substrate between Ala and Phe.
As a control, a sample was prepared in the same manner as above except that the same amount of 95% ethanol aqueous solution was added in place of the evaluation sample 2 μL or 0.6 μL in the enzyme reaction system.
Furthermore, leucine aminopeptidase (Leucine aminopeptidase) was added to the reaction system so that the final concentration would be 0.50 mU / mL, and the reaction was performed at 37 ° C. for 1 hour. Thereby, the NEP degradation product is further cleaved and decomposed by leucine aminopeptidase to give 4-methoxy-2-naphthylamine. The amount of 4-methoxy-2-naphthylamine produced was measured with a fluorescence spectrophotometer at an excitation wavelength of 340 nm and a fluorescence wavelength of 425 nm.
Based on the obtained measured value, the neutral endopeptidase activity inhibition rate of the lichen extract (evaluation sample) was calculated from the following formula. The results are shown in Table 1.
Neutral endopeptidase activity inhibition rate (%) = 100 − {(4-methoxy-2-naphthylamine amount at the time of evaluation sample addition) / (4-methoxy-2-naphthylamine amount at the time of control addition)} × 100
表１から明らかなように、地衣類の抽出物が優れた中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することが認められた。
前述のように、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害すると体毛の成長が抑制されることが知られている。したがって、表１の結果から、本発明の地衣類抽出物は中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、発毛を抑制できることがわかる。
As is clear from Table 1, it was recognized that the lichen extract had an excellent neutral endopeptidase activity inhibitory effect.
As described above, it is known that inhibiting neutral endopeptidase activity suppresses hair growth. Therefore, it can be seen from the results in Table 1 that the lichen extract of the present invention can suppress hair growth by inhibiting neutral endopeptidase activity.
（実施例２）
１.セキカ抽出物からの活性成分の単離
セキカの葉状体の乾燥物（石花：新和物産）４０ｇに９５％エタノール４００ｍＬを加え、室温で１０日間抽出を行った。抽出液を減圧濃縮し、抽出物０．４９ｇを得た。この抽出物０．３ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１００〜酢酸エチル１００％の溶出画分０．１０３６ｇを得た。得られた溶出画分は、ＯＤＳカラム（商品名：Inertsil ODS-3、ジーエルサイエンス社製）を用いてアセトニトリル水溶液でグラジェント溶出したＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより分画し、画分４０ｍｇを得た。次に、この画分２８ｍｇをＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝２０：１展開）に供し、画分１３ｍｇを得た。この画分をさらにＴＬＣ（酢酸エチル展開）に供し、活性画分８ｍｇを得た。得られた活性画分から前記例示化合物１を単離した。化合物１の解析データを下記に示す。
淡黄色粉末
ＭＳ ｍ／ｚ：５１３［Ｍ＋Ｎａ］＋
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．０８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、１．１４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．３０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、３．２２（ｄｑ，１Ｈ，Ｊ＝９．０，７．１Ｈｚ）、３．６７（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．７０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、３．７７（ｄｑ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，７．２Ｈｚ）、３．９３（ｄｑ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，７．２Ｈｚ）、４．８３（ｓ，２Ｈ）、５．７０（ｓ，１Ｈ）、６．６８（ｓ，１Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、８．７０（ｓ，１Ｈ）、１０．３１（ｓ，１Ｈ）、１１．９７（ｓ，１Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１３．８（ｑ），１４．６（ｑ），１５．０（ｑ），２１．０（ｑ），６１．７（ｔ），６４．４（ｔ），６６．３（ｔ），６７．２（ｔ），１０１．３（ｄ），１０２．９（ｓ），１１１．６（ｓ），１１２．９（ｓ），１１５．３（ｄ），１１６．５（ｓ），１３１．７（ｓ），１３３．５（ｓ），１４７．７（ｓ），１５１．０（ｓ），１５５．０（ｓ），１５６．４（ｓ），１６３．５（ｓ），１６５．５（ｓ），１６９．５（ｓ），１９４．２（ｄ）．
(Example 2)
1. Isolation of active ingredient from sekika extract 400 ml of 95% ethanol was added to 40 g of dried citrus frond (Sekihana: Shinwa product) and extracted at room temperature for 10 days. The extract was concentrated under reduced pressure to obtain 0.49 g of extract. 0.3 g of this extract was subjected to silica gel column chromatography to obtain 0.1036 g of an elution fraction of hexane: ethyl acetate = 20: 100 to 100% ethyl acetate. The obtained elution fraction was fractionated by ODS column chromatography eluting with an acetonitrile aqueous solution using an ODS column (trade name: Inertsil ODS-3, manufactured by GL Sciences) to obtain 40 mg of a fraction. Next, 28 mg of this fraction was subjected to TLC (chloroform: methanol = 20: 1 development) to obtain 13 mg of a fraction. This fraction was further subjected to TLC (ethyl acetate development) to obtain 8 mg of an active fraction. The exemplified compound 1 was isolated from the obtained active fraction. Analysis data of Compound 1 is shown below.
Pale yellow powder MS m / z: 513 [M + Na] +
1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 1.08 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1.14 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 1.30 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.33 (s, 3 H), 3.22 (dq, 1 H, J = 9.0, 7.1 Hz), 3.67 (q, 1 H, J = 7.2 Hz), 3. 70 (q, 2H, J = 7.0 Hz), 3.77 (dq, 1H, J = 10.8, 7.2 Hz), 3.93 (dq, 1H, J = 10.8, 7.2 Hz) 4.83 (s, 2H), 5.70 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 10.31 ( s, 1H), 11.97 (s, 1H).
13 C-NMR (CDCl 3 ) δ: 13.8 (q), 14.6 (q), 15.0 (q), 21.0 (q), 61.7 (t), 64.4 (t ), 66.3 (t), 67.2 (t), 101.3 (d), 102.9 (s), 111.6 (s), 112.9 (s), 115.3 (d) , 116.5 (s), 131.7 (s), 133.5 (s), 147.7 (s), 151.0 (s), 155.0 (s), 156.4 (s), 163.5 (s), 165.5 (s), 169.5 (s), 194.2 (d).
２．中性エンドペプチダーゼ活性測定試験
上記で単離した前記例示化合物１を用いて、実施例１と同様の手法により該化合物１の中性エンドペプチダーゼ活性を測定し、中性エンドペプチダーゼ活性阻害率を算出した。結果を表２に示す。
2. Neutral endopeptidase activity measurement test Using the exemplified compound 1 isolated above, the neutral endopeptidase activity of the compound 1 is measured by the same method as in Example 1, and the neutral endopeptidase activity inhibition rate is calculated. did. The results are shown in Table 2.
表２から明らかなように、単離した化合物１が優れた中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することが認められた。
前述のように、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害すると体毛の成長が抑制されることが知られている。したがって、表２の結果から、本発明の一般式（１）で表される化合物は中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、発毛を抑制できることがわかる。
As is clear from Table 2, it was confirmed that the isolated compound 1 has an excellent neutral endopeptidase activity inhibitory effect.
As described above, it is known that inhibiting neutral endopeptidase activity suppresses hair growth. Therefore, from the results in Table 2, it can be seen that the compound represented by the general formula (1) of the present invention can suppress hair growth by inhibiting neutral endopeptidase activity.
（処方例）
前記製造例で得られた抽出物を有効成分として、下記に示す組成のローション、クリーム、エアゾール、パック剤、ファンデーション、化粧水、ジェルを常法により各々調製した。
(Prescription example)
Using the extract obtained in the above production example as an active ingredient, lotions, creams, aerosols, packs, foundations, lotions and gels having the compositions shown below were prepared by conventional methods.
１．発毛抑制ローションの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、ローションを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ ポリオキシエチレン硬化ひまし油 ０．８
エタノール ３０．０
Ｂ セキカ又はセッチャ抽出物 １．０（乾燥固形分）
ドデシル硫酸ナトリウム ０．１２
ドデシルメチルアミンオキシド ０．１８
イソプロピルアルコール １５．０
ベンジルアルコール １５．０
グリセリン ２．０
精製水 残部
1. Preparation of hair growth inhibiting lotion Solution A in which the following components A were mixed was prepared. Separately, a solution B in which the following component B was mixed was prepared. The solution B was added to the solution A and stirred and mixed uniformly to obtain a lotion.
(Composition) (Composition: Mass%)
A Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.8
Ethanol 30.0
B Sekika or Setcha extract 1.0 (dry solids)
Sodium dodecyl sulfate 0.12
Dodecylmethylamine oxide 0.18
Isopropyl alcohol 15.0
Benzyl alcohol 15.0
Glycerin 2.0
Purified water balance
２．発毛抑制クリームの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、乳化後、冷却して、クリームを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ 流動パラフィン １０．０
スクワラン ７．０
ホホバ油 ３．０
固形パラフィン ３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル ２．０
ソルビタンセスキオレエート １．０
水酸化カリウム ０．１
Ｂ セキカ又はセッチャ抽出物 １．０（乾燥固形分）
グリセリン ３．０
エチルパラベン ０．１
精製水 残部
2. Preparation of hair growth inhibiting cream A solution A in which the following components A were mixed was prepared. Separately, a solution B in which the following component B was mixed was prepared. Solution B was added to solution A and stirred and mixed uniformly. After emulsification, the solution was cooled to obtain a cream.
(Composition) (Composition: Mass%)
A Liquid paraffin 10.0
Squalane 7.0
Jojoba oil 3.0
Solid paraffin 3.0
Polyoxyethylene cetyl ether 2.0
Sorbitan sesquioleate 1.0
Potassium hydroxide 0.1
B Sekika or Setcha extract 1.0 (dry solids)
Glycerin 3.0
Ethylparaben 0.1
Purified water balance
３．エアゾールの調製
下記Ａの成分を均一に混合して容器に入れ、Ｂの液化石油ガス（噴射剤）を常法により容器に充填してエアゾールを製造した。
（組成） （配合：質量％）
Ａ セキカ又はセッチャ抽出物 １．０（乾燥固形分）
セタノール １．２
プロピレングリコール ４．０
エタノール ８．０
精製水 残部
Ｂ 液化石油ガス（噴射剤） ４．０
3. Preparation of aerosol The following components A were uniformly mixed and placed in a container, and the liquefied petroleum gas (propellant) of B was filled into the container by a conventional method to produce an aerosol.
(Composition) (Composition: Mass%)
A Sekika or Setcha extract 1.0 (dry solids)
Cetanol 1.2
Propylene glycol 4.0
Ethanol 8.0
Purified water balance B Liquefied petroleum gas (propellant) 4.0
４．発毛抑制パック剤の調製
下記の組成のパック剤を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
セキカ又はセッチャ抽出物 ３．０（乾燥固形分）
ポリビニルアルコール ２０．０
グリセリン ５．０
エタノール １６．０
香料 微量
色素 微量
精製水 残部
4). Preparation of hair growth inhibiting pack A pack having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Sekika or Setcha extract 3.0 (dry solids)
Polyvinyl alcohol 20.0
Glycerin 5.0
Ethanol 16.0
Fragrance Trace amount Pigment Trace amount Purified water The remainder
５．ファンデーションの調製
下記の組成のファンデーションを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
セキカ又はセッチャ抽出物 １．０（乾燥固形分）
球状シリカビーズ ２０．０
シリカ被覆セリサイト ４５．０
超微粒子酸化チタン １０．０
黄酸化鉄 ３．０
タルク ５．０
マイカ ５．０
ベンガラ １．０
グンジョウ １．０
パラベン ０．２
流動パラフィン ４．８
スクワラン ４．０
5). Preparation of Foundation A foundation having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Sekika or Setcha extract 1.0 (dry solids)
Spherical silica beads 20.0
Silica coated sericite 45.0
Ultrafine titanium oxide 10.0
Yellow iron oxide 3.0
Talc 5.0
Mica 5.0
Bengala 1.0
Gunjo 1.0
Paraben 0.2
Liquid paraffin 4.8
Squalane 4.0
６．発毛抑制化粧水の調製
下記の組成の化粧水を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
セキカ又はセッチャ抽出物 ５．０（乾燥固形分）
グリセリン １５．０
ジプロピレングリコール ５．０
精製水 残部
6). Preparation of hair growth inhibiting lotion A lotion having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Sekika or Setcha extract 5.0 (dry solids)
Glycerin 15.0
Dipropylene glycol 5.0
Purified water balance
７．発毛抑制ジェルの調製
下記の組成のジェルを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ポリアクリル酸 ０．５
水酸化カリウム ０．１５
グルカム １０．０
グリセリン １０．０
グリシンベタイン ３．０
セキカ又はセッチャ抽出物 ２．０（乾燥固形分）
コハク酸 １．５
精製水 残部
7). Preparation of hair growth inhibiting gel A gel having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Polyacrylic acid 0.5
Potassium hydroxide 0.15
Gurucam 10.0
Glycerin 10.0
Glycine betaine 3.0
Sekika or Setcha extract 2.0 (dry solids)
Succinic acid 1.5
Purified water balance
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| JP2009091283A JP2010241715A (en) | 2009-04-03 | 2009-04-03 | Neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor |
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| JP2012140405A (en) * | 2010-12-13 | 2012-07-26 | Kao Corp | Production method of beomycesic acid-rich thamnolia vermicularis extract |
| US9592183B2 (en) | 2010-12-13 | 2017-03-14 | Kao Corporation | Inhibitor of endothelin action and skin-whitening agent |
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2009
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