JP2010235524A - Antihistamine agent containing pollen dumpling - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗ヒスタミン剤に関する。 The present invention relates to an antihistamine that contains pollen cargo or a solvent extract of pollen cargo as an active ingredient.
一般に、花粉荷は、蜜蜂が植物の雄しべから花粉を得て、蜂蜜や唾液で丸めて団子状に固めたもので、良質なタンパク質、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる事から「パーフェクトフード」とも呼ばれている。花粉荷は、採集器等により蜜蜂から容易に回収され、主に栄養補助食品等として摂取されている。 In general, pollen load is a bee that is pollen from plant stamens, rolled with honey or saliva and hardened into dumplings, and contains a variety of nutrients such as high-quality proteins, vitamins and minerals. It is also called “Perfect Food”. Pollen cargo is easily recovered from bees by a collector or the like, and is mainly consumed as a dietary supplement.
従来より、花粉荷は、いくつかの薬理効果を有することが知られている。花粉荷の薬理効果を利用した発明として、例えば特許文献１，２に開示される組成物が知られている。特許文献１は、花粉荷を有効成分として含有する骨量増進組成物について開示する。特許文献２は、花粉荷を有効成分として含有する糖尿病性疾患の予防・治療用組成物について開示する。
Conventionally, pollen load is known to have several pharmacological effects. As an invention using the pharmacological effect of pollen cargo, for example, compositions disclosed in
ところで、免疫反応が特定の抗原に対して過剰に起こる疾患としてアレルギー疾患が知られている。この中でも、生理活性物質としてヒスタミンを介するアレルギー疾患としてＩ型アレルギーが知られている。Ｉ型アレルギーは、即時型過敏症とも呼ばれ、代表的な疾患として、例えば気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショックが知られている。Ｉ型アレルギーは、まず免疫グロブリンであるＩｇＥがマスト細胞（肥満細胞）や好塩基球に結合し、そこに抗原が結合すると細胞内に顆粒として貯蔵されるヒスタミンが細胞外に放出されることによって生ずる。従来よりＩ型アレルギーの治療薬として種々の第一世代及び第二世代抗ヒスタミン薬が知られている。しかしながら、それらのいずれも副作用の問題があり、投与に慎重を要する場合があった。 By the way, allergic diseases are known as diseases in which an immune reaction occurs excessively with respect to a specific antigen. Among these, type I allergy is known as an allergic disease mediated by histamine as a physiologically active substance. Type I allergy is also called immediate hypersensitivity. As typical diseases, for example, bronchial asthma, urticaria, atopic dermatitis, and anaphylactic shock caused by bee venom, food, drugs and the like are known. . Type I allergy is caused by the fact that IgE, an immunoglobulin, binds to mast cells (mast cells) and basophils, and when antigen is bound there, histamine that is stored as granules inside the cells is released outside the cells. Arise. Conventionally, various first generation and second generation antihistamines are known as therapeutic agents for type I allergy. However, all of them have a problem of side effects and may require careful administration.
本発明者らは、上述した花粉荷の新たな生理作用を模索した結果、花粉荷にマスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離を抑制する作用を有することを発見するに至った。
本発明の目的とするところは、医薬品、化粧品等の様々な用途に利用することが可能である花粉荷を有効成分として含有する抗ヒスタミン剤を提供することにある。
As a result of searching for a new physiological action of the above-mentioned pollen load, the present inventors have found that the pollen load has an action of suppressing the release of histamine from mast cells and basophils.
An object of the present invention is to provide an antihistamine containing, as an active ingredient, a pollen load that can be used for various uses such as pharmaceuticals and cosmetics.
上記目的を達成するために、請求項１に記載の抗ヒスタミン剤は、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の抗ヒスタミン剤において、Ｉ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられることを特徴とする。
In order to achieve the above object, the antihistamine according to claim 1 is characterized by containing pollen cargo or a solvent extract of pollen cargo as an active ingredient.
The invention according to
請求項３に記載の発明は、請求項１又は請求項２に記載の抗ヒスタミン剤において、前記溶媒は、水、親水性有機溶媒、及び水／親水性有機溶媒の混合液から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする。
Invention of Claim 3 is an antihistamine of Claim 1 or
本発明によれば、医薬品、化粧品等の様々な用途に利用することが可能である花粉荷を有効成分として含有する抗ヒスタミン剤を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the antihistamine which contains the pollen load which can be utilized for various uses, such as a pharmaceutical and cosmetics, as an active ingredient can be provided.
以下、本発明の抗ヒスタミン剤を具体化した一実施形態を説明する。
本実施形態の抗ヒスタミン剤は、花粉荷又は花粉荷から溶媒により抽出処理することにより得られる溶媒抽出物を有効成分として含有する。花粉荷は、上述したように蜜蜂が植物の雄しべから花粉を得て、蜂蜜や唾液で丸めて団子状に固めたもので、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる。花粉荷の原産地は、特に限定されず、例えば日本、中国、ブラジル、ヨーロッパ諸国、オセアニア諸国、及びアメリカ等のいずれであってもよい。また、花粉荷の原料となる花粉の起源植物としては、特に限定されず、蜜蜂が採取したものであればいずれも使用することができる。花粉の起源植物としては、例えば、ハンニチバナ科、ツツジ科、シソ科、ムラサキ科、ブナ科、キク科、モクセイ科、アブラナ科、マメ科、バラ科、及びヤナギ科が挙げられる。これらの中で、ハンニチバナ科、及びアブラナ科が入手容易性の観点から好ましい。ハンニチバナ科としては、例えばシスタス属ジャラが挙げられる。アブラナ科としては、例えばアブラナ属ナタネ、及びダイコン属ダイコンが挙げられる。花粉荷の採集方法としては、特に限定されず公知の方法を適宜採用することができる。例えば、巣箱の出入り口に取り付けられ、格子状の剥取多孔板を備えてなる花粉採集器を用いる方法、巣板又は蜜蜂に付着した花粉荷を直接採集する方法等が挙げられる。
Hereinafter, an embodiment embodying the antihistamine of the present invention will be described.
The antihistamine of this embodiment contains a solvent extract obtained by extracting a pollen load or a pollen load with a solvent as an active ingredient. As described above, the pollen load is obtained by bees obtained from stamens of plants, rolled up with honey or saliva, and hardened in a dumpling form, and contains various nutrients such as vitamins and minerals. The place of origin of the pollen load is not particularly limited, and may be any of, for example, Japan, China, Brazil, European countries, Oceania countries, and the United States. Moreover, the origin plant of the pollen used as the raw material of the pollen load is not particularly limited, and any plant collected by bees can be used. Examples of the plant from which pollen originates include, for example, Hannibalidae, Azalea, Perilla, Muraceae, Beech, Asteraceae, Spiraceae, Brassicaceae, Legume, Rose, and Willow. Of these, the genus Hannibalae and the Brassicaceae are preferable from the viewpoint of availability. Examples of the genus Hannibalidae include the genus Cystas. Examples of the Brassicaceae include Brassica rape and Japanese radish radish. The method for collecting pollen cargo is not particularly limited, and a known method can be appropriately employed. For example, a method using a pollen collector attached to the entrance / exit of a nest box and provided with a lattice-like stripped perforated plate, a method of directly collecting a pollen load attached to a nest plate or a bee, and the like can be mentioned.
本実施形態において、有効成分として花粉荷自体の他、花粉荷から溶媒により抽出処理することにより得られる溶媒抽出物を有効成分として使用してもよい。抽出処理に使用される溶媒としては、例えば水、親水性有機溶媒、及び水／親水性有機溶媒の混合液が挙げられる。親水性有機溶媒としては、水に溶解する性質を有するエタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコールのほか、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類を適宜選択して使用することができる。これらの親水性有機溶媒を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。これら溶媒の中でも、抽出物の抗ヒスタミン遊離作用がより優れる水又はエタノールを好ましく適用することができる。 In this embodiment, a solvent extract obtained by subjecting the pollen cargo to extraction with a solvent other than the pollen cargo itself may be used as the active ingredient as the active ingredient. Examples of the solvent used for the extraction treatment include water, a hydrophilic organic solvent, and a water / hydrophilic organic solvent mixture. As the hydrophilic organic solvent, in addition to lower alcohols such as ethanol, methanol and isopropanol having the property of dissolving in water, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone can be appropriately selected and used. These hydrophilic organic solvents may be used alone or in combination of two or more. Among these solvents, water or ethanol, which is more excellent in the antihistamine releasing action of the extract, can be preferably applied.
抽出溶媒として例えば水が使用される場合、溶媒の花粉荷に対する添加量は、抽出効率の点から、花粉荷１質量部に対して１〜１０質量部が好ましく、４〜８質量部がより好ましく、５〜６質量部が最も好ましい。これらの抽出溶媒は、花粉荷とともに混合及び撹拌される。抽出温度は溶媒の種類等により適宜設定されるが、有効成分の抽出効率の観点から３０〜６０℃であることが好ましい。抽出温度が３０℃未満の場合には、溶解成分と不溶性成分の分離効率が低下するため好ましくない。逆に抽出温度が６０℃を超える場合には、抽出成分の変性を招くおそれがある。抽出の時間は、抽出温度等により適宜設定されるが、例えば４〜４８時間程度が好ましく、５〜２０時間程度がより好ましい。得られた抽出物は、水に可溶性の画分と沈殿物からなる不溶性の画分から構成される。これらの可溶性画分と不溶性画分は、公知の方法、例えば濾過処理、及び遠心分離を用いることにより、容易に分離することができる。このうち可溶性画分を溶媒抽出物として使用することができる。 For example, when water is used as the extraction solvent, the amount added to the pollen cargo of the solvent is preferably 1 to 10 parts by mass and more preferably 4 to 8 parts by mass with respect to 1 part by mass of the pollen cargo from the viewpoint of extraction efficiency. 5 to 6 parts by mass is most preferable. These extraction solvents are mixed and stirred with the pollen load. Although extraction temperature is suitably set according to the kind of solvent etc., it is preferable that it is 30-60 degreeC from a viewpoint of the extraction efficiency of an active ingredient. When the extraction temperature is less than 30 ° C., the separation efficiency of the dissolved component and the insoluble component is lowered, which is not preferable. On the other hand, when the extraction temperature exceeds 60 ° C., the extraction components may be denatured. The extraction time is appropriately set depending on the extraction temperature and the like, but is preferably about 4 to 48 hours, and more preferably about 5 to 20 hours. The obtained extract is composed of a water-soluble fraction and an insoluble fraction consisting of a precipitate. These soluble and insoluble fractions can be easily separated by using known methods such as filtration and centrifugation. Of these, the soluble fraction can be used as a solvent extract.
抽出溶媒として例えばエタノールが使用される場合、溶媒の花粉荷に対する添加量は、抽出効率の点から、花粉荷１質量部に対して１〜１０質量部が好ましく、４〜８質量部がより好ましく、５〜６質量部が最も好ましい。これらの抽出溶媒は、花粉荷とともに混合及び撹拌される。抽出温度は溶媒の種類等により適宜設定されるが、有効成分の抽出効率の観点から１０〜４０℃であることが好ましい。抽出温度が１０℃未満の場合には、溶解成分と不溶性成分の分離効率が低下するため好ましくない。逆に抽出温度が４０℃を超える場合には、抽出溶媒が蒸発するため抽出効率の低下を招くおそれがある。抽出の時間は、抽出温度等により適宜設定されるが、例えば４〜４８時間程度が好ましく、５〜２０時間程度がより好ましい。得られた抽出物は、エタノール溶媒に可溶性の画分と沈殿物からなる不溶性の画分から構成される。これらの可溶性画分と不溶性画分は、公知の方法、例えば濾過処理、及び遠心分離を用いることにより、容易に分離することができる。このうち可溶性画分を溶媒抽出物として使用することができる。 For example, when ethanol is used as the extraction solvent, the amount added to the pollen cargo of the solvent is preferably 1 to 10 parts by mass, more preferably 4 to 8 parts by mass with respect to 1 part by mass of the pollen cargo from the viewpoint of extraction efficiency. 5 to 6 parts by mass is most preferable. These extraction solvents are mixed and stirred with the pollen load. Although extraction temperature is suitably set with the kind etc. of solvent, it is preferable that it is 10-40 degreeC from a viewpoint of the extraction efficiency of an active ingredient. When the extraction temperature is less than 10 ° C., the separation efficiency of the dissolved component and the insoluble component is lowered, which is not preferable. Conversely, when the extraction temperature exceeds 40 ° C., the extraction solvent evaporates, which may lead to a decrease in extraction efficiency. The extraction time is appropriately set depending on the extraction temperature and the like, but is preferably about 4 to 48 hours, and more preferably about 5 to 20 hours. The obtained extract is composed of a fraction soluble in ethanol solvent and an insoluble fraction consisting of a precipitate. These soluble and insoluble fractions can be easily separated by using known methods such as filtration and centrifugation. Of these, the soluble fraction can be used as a solvent extract.
本実施形態の抗ヒスタミン剤は、マスト細胞（肥満細胞）や好塩基球からのヒスタミンの遊離を阻害する作用を有する。したがって、マスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離により生じる各種疾患の治療剤又は予防剤として適用することができる。ヒスタミンは、生体に対し、例えば血圧降下、血管透過性亢進、平滑筋収縮、血管拡張、及び腺分泌促進等の薬理作用を有する。ヒスタミンは通常マスト細胞や好塩基球等の細胞内に顆粒として貯蔵されるが、免疫グロブリンであるＩｇＥがマスト細胞や好塩基球に結合し、そこに抗原が結合すると細胞内に顆粒として貯蔵されるヒスタミンが細胞外に放出される。マスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離が関連（介在）する疾患として例えばＩ型アレルギーや炎症反応が挙げられる。Ｉ型アレルギーは、即時型過敏症とも呼ばれ、ヒスタミンが過剰に分泌された場合、平滑筋、血管内皮細胞及び中枢神経等の組織において発現するヒスタミン１型受容体に結合し、その後血圧降下や平滑筋収縮等の生理作用を介した喘息発作や浮腫発赤等の症状を生じさせる。Ｉ型アレルギーの代表的な疾患として、気管支喘息、蕁麻疹、ＰＩＥ症候群、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショック（薬物過敏症）が知られている。本実施形態の抗ヒスタミン剤により、これらの症状の緩和が期待される。したがって、本実施形態の抗ヒスタミン剤は、Ｉ型アレルギーの治療、症状の軽減又は発症抑制を得ることを目的とした治療剤又は予防剤として好ましく適用することができる。 The antihistamine of this embodiment has an action of inhibiting the release of histamine from mast cells (mast cells) and basophils. Therefore, it can be applied as a therapeutic or prophylactic agent for various diseases caused by the release of histamine from mast cells and basophils. Histamine has a pharmacological action on a living body, such as blood pressure lowering, increased vascular permeability, smooth muscle contraction, vasodilation, and promotion of gland secretion. Histamine is usually stored as granules in cells such as mast cells and basophils, but IgE, an immunoglobulin, binds to mast cells and basophils, and when antigen binds to it, it is stored as granules in the cells. Histamine is released extracellularly. Examples of diseases associated with (mediated) release of histamine from mast cells and basophils include type I allergy and inflammatory reaction. Type I allergy, also called immediate hypersensitivity, binds to histamine type 1 receptors that are expressed in tissues such as smooth muscle, vascular endothelial cells, and central nerves when histamine is secreted excessively, and then decreases blood pressure and Symptoms such as asthma attacks and redness of edema are caused through physiological actions such as smooth muscle contraction. Representative diseases of type I allergy include bronchial asthma, urticaria, PIE syndrome, atopic dermatitis, allergic rhinitis, hay fever, and anaphylactic shock caused by bee venom, food and drugs (drug hypersensitivity) It has been known. Alleviation of these symptoms is expected by the antihistamine of this embodiment. Therefore, the antihistamine of this embodiment can be preferably applied as a therapeutic or prophylactic agent aimed at obtaining treatment for type I allergy, reduction of symptoms, or suppression of onset.
本実施形態の抗ヒスタミン剤の具体的な配合形態としては、上記の作用効果を得ることを目的とした医薬品、研究用試薬、化粧品及び飲食品等として適用することができる。
本実施形態の抗ヒスタミン剤を医薬品として使用する場合は、目的等に応じ公知の投与方法を適宜採用することができる。例えば、患部への塗布、服用（経口摂取）により投与する場合の他、血管内投与、経皮投与等のあらゆる投与方法を採用することが可能である。剤形としては、抗ヒスタミン剤の目的等に応じ公知の剤形を適宜採用することができる。例えば、軟膏、液剤、スプレー剤、シート剤、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、注射剤等が挙げられる。また、添加剤として賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等を配合してもよい。
As a specific blending form of the antihistamine of this embodiment, it can be applied as pharmaceuticals, research reagents, cosmetics and foods and drinks for the purpose of obtaining the above-mentioned effects.
When using the antihistamine of this embodiment as a pharmaceutical, a well-known administration method can be suitably employ | adopted according to the objective etc. For example, it is possible to adopt any administration method such as intravascular administration or transdermal administration, in addition to administration by application to the affected area, administration (oral intake). As the dosage form, a known dosage form can be appropriately employed depending on the purpose of the antihistamine. For example, ointments, solutions, sprays, sheets, powders, powders, granules, tablets, capsules, pills, suppositories, injections and the like can be mentioned. Moreover, you may mix | blend an excipient | filler, a base, an emulsifier, a solvent, a stabilizer etc. as an additive.
本実施形態の抗ヒスタミン剤をマスト細胞や好塩基球からのヒスタミン遊離抑制試薬の形態で実験用・研究用試薬として適用してもよい。上記ヒスタミンの遊離が関係する生理作用のメカニズムの解明又は各種症状の治療法等の研究・開発等の分野において好適に用いられる。 The antihistamine of this embodiment may be applied as a reagent for experiment and research in the form of a reagent for inhibiting histamine release from mast cells or basophils. It is suitably used in fields such as elucidation of the mechanism of physiological action related to the release of histamine and research / development of treatment methods for various symptoms.
本実施形態の抗ヒスタミン剤を化粧品に適用する場合、化粧品基材に配合することにより製造することができる。化粧品の形態は、乳液状、クリーム状、粉末状等のいずれであってもよい。このような化粧品を肌に適用することにより、ヒスタミンを介する炎症の抑制作用等の効果を得ることができる。化粧品基剤は、一般に化粧品に共通して配合されるものであって、例えば、油分、精製水及びアルコールを主要成分として、界面活性剤、保湿剤、酸化防止剤、増粘剤、抗脂漏剤、血行促進剤、美白剤、ｐＨ調整剤、色素顔料、防腐剤及び香料から選択される少なくとも一種が適宜配合される。 When applying the antihistamine of this embodiment to cosmetics, it can manufacture by mix | blending with a cosmetic base material. The form of the cosmetic may be any of emulsion, cream, powder and the like. By applying such cosmetics to the skin, it is possible to obtain effects such as an action of suppressing inflammation via histamine. Cosmetic bases are generally blended in common with cosmetics. For example, oil, purified water, and alcohol as main components, surfactants, moisturizers, antioxidants, thickeners, anti-seborrheic agents. At least one selected from an agent, a blood circulation promoter, a whitening agent, a pH adjuster, a pigment, a preservative, and a fragrance is appropriately blended.
本実施形態の抗ヒスタミン剤を飲食品に適用する場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって使用することができる。飲食品の形態としては、特に限定されず、液状、粉末状、ゲル状、固形状等のいずれであってもよく、また剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤等のいずれであってもよい。その中でも、吸湿性が抑えられることから、カプセル剤であることが好ましい。前記飲食品としては、その他の成分としてゲル化剤含有食品、糖類、香料、甘味料、油脂、基材、賦形剤、食品添加剤、副素材、増量剤等を適宜配合してもよい。 When applying the antihistamine of this embodiment to food-drinks, it can be used by adding to various food materials or beverage materials. The form of the food or drink is not particularly limited, and may be any of liquid, powder, gel, solid, etc. The dosage form is any of tablets, capsules, granules, drinks, etc. It may be. Among these, a capsule is preferable because hygroscopicity is suppressed. As said food-drinks, you may mix | blend gelatinizer containing foodstuffs, saccharides, a fragrance | flavor, a sweetener, fats and oils, a base material, an excipient | filler, a food additive, a subsidiary material, a bulking agent etc. suitably as another component.
本実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
（１）本実施形態において、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物は、高い抗ヒスタミン作用を有している。したがって、抗ヒスタミン剤として抗ヒスタミン作用を目的とした医薬品、研究用試薬、化粧品、及び飲食品に好ましく適用することができる。
The effects exhibited by this embodiment will be described below.
(1) In this embodiment, the pollen load or the solvent extract of the pollen load has a high antihistamine action. Therefore, it can be preferably applied to pharmaceuticals, research reagents, cosmetics, and foods and drinks intended for antihistaminic activity as antihistamines.
（２）本実施形態の抗ヒスタミン剤は、好ましくはＩ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられる。Ｉ型アレルギーは、マスト細胞や抗塩基球からのヒスタミンの遊離を介するアレルギーである。したがって、本実施形態の抗ヒスタミン剤は、Ｉ型アレルギーの代表的な症状である気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショック等に対し、治療剤又は予防剤として好ましく適用することができる。 (2) The antihistamine of this embodiment is preferably used as a therapeutic or prophylactic agent for type I allergic diseases. Type I allergies are allergies through the release of histamine from mast cells and antibasophils. Therefore, the antihistamine of this embodiment is a therapeutic agent for bronchial asthma, urticaria, atopic dermatitis, and anaphylactic shock caused by bee venom, food and drugs, which are typical symptoms of type I allergy. Or it can apply preferably as a preventive agent.
（３）本実施形態の抗ヒスタミン剤において、花粉荷の溶媒抽出物を得るために用いられる溶媒は、好ましくは水、親水性有機溶媒、又は水／親水性有機溶媒の混合液である。したがって、有効成分として花粉荷自体を用いるよりも不純物の含有量が少ないため、より効果の高い抗ヒスタミン作用を発揮することができる。 (3) In the antihistamine of this embodiment, the solvent used for obtaining the pollen cargo solvent extract is preferably water, a hydrophilic organic solvent, or a water / hydrophilic organic solvent mixture. Therefore, since the content of impurities is less than that of using pollen cargo itself as an active ingredient, a more effective antihistamine action can be exhibited.
（４）本実施形態では、抗ヒスタミン剤の有効成分として、天然素材である花粉荷又はその溶媒抽出物が用いられる。したがって、副作用を生ずるおそれがなく、安全に各種用途に適用することができる。 (4) In this embodiment, a pollen load which is a natural material or a solvent extract thereof is used as an active ingredient of an antihistamine. Therefore, there is no possibility of causing side effects, and it can be safely applied to various uses.
（５）本実施形態の抗ヒスタミン剤は、有効成分として花粉荷が含有される場合、花粉荷には、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる事から、摂取により各種栄養成分の補給も行うことができる。 (5) When the antihistamine of this embodiment contains pollen cargo as an active ingredient, the pollen cargo contains various nutrients such as vitamins and minerals. It can be carried out.
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態の抗ヒスタミン剤は、ヒトに適用される医薬品、化粧品及び飲食品のみならず、家畜等の飼養動物に対する医薬品等に適用してもよい。
In addition, you may change the said embodiment as follows.
-The antihistamine of the above embodiment may be applied not only to pharmaceuticals, cosmetics and foods and drinks applied to humans, but also to pharmaceuticals for domestic animals such as livestock.
・上記実施形態の抗ヒスタミン剤は、マスト細胞や抗塩基球からのヒスタミンの遊離が関係する疾患の症状の治療又は症状の軽減の為の用途のみならず、その疾患の症状の発症予防のために適用してもよい。 -The antihistamine of the above embodiment is applied not only for the treatment of symptoms of diseases associated with the release of histamine from mast cells and anti-basophils but also for the prevention of the onset of symptoms of the diseases. May be.
以下に試験例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（製造例１）
半径数キロ以内の周辺植物としてシスタス属ジャラ等が存在するセイヨウミツバチの巣箱から花粉荷を得た。その花粉荷１００ｇに、抽出溶媒としてのエタノール６００ｇを加えて室温で４時間攪拌して抽出した。そして、前記花粉荷の攪拌抽出液を濾紙（アドバンテック東洋株式会社製のＮｏ．２）で濾過して、エタノールに不溶性の残渣と上澄み（抽出液）を分離することによって、抽出液３０ｇ（固形分４質量％）を得た。これを製造例１における花粉荷エタノール抽出エキス（花粉荷エタノール抽出物）とした。
Although the test example is given below and the embodiment is described more specifically, the present invention is not limited to these.
(Production Example 1)
A pollen load was obtained from a honeybee's nest box in which cistus genus Jara etc. exist as surrounding plants within a radius of several kilometers. To 100 g of the pollen load, 600 g of ethanol as an extraction solvent was added and extracted by stirring at room temperature for 4 hours. Then, the agitation extract of the pollen load is filtered with a filter paper (No. 2 manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.) to separate the residue insoluble in ethanol and the supernatant (extract), thereby obtaining 30 g of extract (solid content) 4% by mass) was obtained. This was designated as pollen loaded ethanol extract (Pollen loaded ethanol extract) in Production Example 1.
（製造例２）
半径数キロ以内の周辺植物としてシスタス属ジャラ等が存在するセイヨウミツバチの巣箱から花粉荷を得た。その花粉荷１００ｇに、抽出溶媒としての水６００ｇを加えて６０℃で６時間攪拌して抽出した。そして、前記花粉荷の攪拌抽出液を濾紙（アドバンテック東洋株式会社製のＮｏ．２）で濾過して、水に不溶性の残渣と上澄み（抽出液）を分離することによって、抽出液５０ｇ（固形分７．５質量％）を得た。これを製造例２の花粉荷水抽出エキス（花粉荷水抽出物）とした。
(Production Example 2)
A pollen load was obtained from a honeybee's nest box in which cistus genus Jara etc. exist as surrounding plants within a radius of several kilometers. To 100 g of the pollen load, 600 g of water as an extraction solvent was added and extracted by stirring at 60 ° C. for 6 hours. And the filtered extract (No. 2 made by Advantech Toyo Co., Ltd.) is filtered through the agitation extract of the above-mentioned pollen load, and the residue insoluble in water and the supernatant (extract) are separated to obtain 50 g of extract (solid content 7.5% by mass). This was designated as Pollen Water Extract (Pollen Water Extract) in Production Example 2.
（試験例１：マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制試験）
花粉荷の生理活性作用の一つである抗ヒスタミン作用について、ラット腹腔内マスト細胞を用い、ヒスタミン遊離抑制作用を測定した。試料として上記製造例１，２の各花粉荷溶媒抽出エキスを使用した。陽性対象として甜茶水抽出エキス（松浦薬業社製、固形分１００％）を使用した。各試料は、固形分濃度が図１に記載の各量になるようリン酸緩衝生理食塩液で希釈した。
(Test Example 1: Histamine release inhibition test from mast cells)
With regard to the antihistamine action, which is one of the physiologically active actions of pollen cargo, the histamine release inhibitory action was measured using rat intraperitoneal mast cells. The pollen cargo solvent extract of the said manufacture examples 1 and 2 was used as a sample. As a positive target, a strawberry tea water extract (manufactured by Matsuura Pharmaceutical Co., Ltd.,
被験動物として、Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットを用いた。ラットをエーテル過麻酔致死させた後、腹腔内にリン酸緩衝生理食塩液（Dulbecco's Phosphate Buffered Saline：Ｄ−ＰＢＳ（＋）、ナカライテスク社製）２０ｍＬを注入し、腹腔内液を回収した。回収液を、１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離し、上清を除去した。さらに、リン酸緩衝生理食塩液（Ｄ−ＰＢＳ（−）、カルシウム及びマグネシウム不含、ナカライテスク社製）５ｍＬを加えた細胞浮遊液を、１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離して上清を除去することを２回繰り返して、均一な細胞浮遊液を作成した。血球計算盤で細胞数を測定し、４×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬに調整したものをマスト細胞浮遊液とした。 Wistar male rats were used as test animals. After the rats were lethal by ether anesthesia, 20 mL of phosphate buffered saline (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline: D-PBS (+), manufactured by Nacalai Tesque) was injected into the peritoneal cavity, and the intraperitoneal fluid was collected. The collected liquid was centrifuged at 1200 rpm, 4 ° C. for 5 minutes, and the supernatant was removed. Further, the cell suspension obtained by adding 5 mL of phosphate buffered saline (D-PBS (−), calcium and magnesium free, manufactured by Nacalai Tesque) was centrifuged at 1200 rpm, 4 ° C. for 5 minutes to obtain the supernatant. The removal was repeated twice to create a uniform cell suspension. The number of cells was measured with a hemocytometer, and adjusted to 4 × 10 5 cells / mL to obtain a mast cell suspension.
まず、１５ｍＬ容のプラスチック製チューブにマスト細胞浮遊液を２．５ｍＬ分注し、固形分濃度が上記所定量となるように調製した各試料を０．５ｍＬを加えた後、３７℃のウォーターバスで５分間前培養した。脱顆粒誘発剤として、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（シグマアルドリッチジャパン社製）０．５ｍＬ（１０μｇ／ｍＬ）を添加した後、３７℃のウォーターバスで１０分間培養した。５分間、氷水中で反応を停止した。１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離してマスト細胞を除去し、上清を回収して、遊離ヒスタミン量を測定した。ヒスタミンの分析は、市販のヒスタミン測定キット（チェックカラーヒスタミン、キッコーマン社製）を用いて行った。ヒスタミン遊離抑制率は、下記の計算式から算出した。 First, 2.5 mL of mast cell suspension was dispensed into a 15 mL plastic tube, 0.5 mL of each sample prepared so that the solid content concentration was the above predetermined amount was added, and then a 37 ° C. water bath was added. For 5 minutes. As a degranulation inducer, Compound 48/80 (manufactured by Sigma-Aldrich Japan) 0.5 mL (10 μg / mL) was added, followed by culturing in a water bath at 37 ° C. for 10 minutes. The reaction was stopped in ice water for 5 minutes. The mast cells were removed by centrifugation at 1200 rpm and 4 ° C. for 5 minutes, the supernatant was collected, and the amount of free histamine was measured. The analysis of histamine was performed using a commercially available histamine measurement kit (Check Color Histamine, manufactured by Kikkoman Corporation). The inhibition rate of histamine release was calculated from the following formula.
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝[（ａ−ｃ）−（ｂ−ｃ）]／（ａ−ｃ）×１００
ａは脱顆粒誘発剤を加えたマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す（エキス０％）。ｂは脱顆粒誘発剤、及び花粉荷溶媒抽出エキス又は甜茶水抽出エキスを加えたマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す。ｃはマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す（ベースライン）。遊離したヒスタミン量及びヒスタミン遊離抑制率の結果を図１に示す。また、検量線を作成し、ヒスタミン遊離の８０％阻害濃度（抽出エキスの固形分濃度）を算出した。この結果を表１に示す。
Histamine release inhibition rate (%) = [(ac)-(bc)] / (ac) × 100
a shows the amount of histamine in the supernatant of the mast cell suspension added with the degranulation inducer (extract 0%). b shows the amount of histamine in the supernatant of the mast cell suspension to which the degranulation inducer and the pollen-loaded solvent extract or strawberry tea water extract were added. c indicates the amount of histamine in the supernatant of the mast cell suspension (baseline). The results of the amount of histamine released and the histamine release inhibition rate are shown in FIG. Further, a calibration curve was prepared, and an 80% inhibitory concentration of histamine release (solid extract concentration) was calculated. The results are shown in Table 1.
（試験例２：ラット好塩基球性白血病細胞からのヒスタミン遊離抑制試験）
花粉荷の生理活性作用の一つである抗ヒスタミン作用について、ラット好塩基球性白血病細胞を用い、ヒスタミン遊離抑制作用を測定した。試料として上記製造例１，２の各花粉荷溶媒抽出エキスを使用した。陽性対象として甜茶水抽出エキス（松浦薬業社製、固形分１００％）を使用した。各試料は、固形分濃度が図１に記載の各量になるようリン酸緩衝生理食塩液で希釈した。
(Test Example 2: Histamine release inhibition test from rat basophilic leukemia cells)
The antihistamine action, which is one of the physiologically active actions of pollen cargo, was measured for inhibitory action on histamine release using rat basophilic leukemia cells. The pollen cargo solvent extract of the said manufacture examples 1 and 2 was used as a sample. As a positive target, a strawberry tea water extract (manufactured by Matsuura Pharmaceutical Co., Ltd.,
ラット好塩基球性白血病細胞として、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％非動化牛胎児血清（シグマアルドリッチジャパン社製）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ、ナカライテスク社製）及びストレプトマイシン（０．１ｍｇ／ｍＬ、ナカライテスク社製）含有のダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco's modified Eagle’s medium：Ｄ−ＭＥＭ、シグマアルドリッチジャパン社製）にて５％ＣＯ２、３７℃の条件下で前培養を行った。前培養終了後、０．２５％トリプシン−１ｍＭのＥＤＴＡ溶液（ナカライテスク社製）を用いて細胞を剥がした。１０００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離して細胞を集めた。血球計算盤で細胞数を測定し、４×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬに調整したものをＲＢＬ−２Ｈ３細胞浮遊液とした。 As rat basophilic leukemia cells, RBL-2H3 cells were treated with 10% non-immobilized fetal bovine serum (manufactured by Sigma-Aldrich Japan), penicillin (100 U / mL, manufactured by Nacalai Tesque) and streptomycin (0.1 mg / mL). And pre-cultured under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. in Dulbecco's modified Eagle's medium (D-MEM, Sigma-Aldrich Japan) containing Nacalai Tesque. After completion of the preculture, the cells were detached using a 0.25% trypsin-1 mM EDTA solution (manufactured by Nacalai Tesque). Cells were collected by centrifugation at 1000 rpm, 4 ° C., 5 minutes. The number of cells was measured with a hemocytometer, and adjusted to 4 × 10 5 cells / mL was used as the RBL-2H3 cell suspension.
まず、２４ウェルの培養プレートに、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞浮遊液を５００μＬ（２×１０５ｃｅｌｌ／ウェル）播種し、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で１２時間培養した。培養終了後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で各ウェルを洗浄した。Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ及びＰｈｅｎｏｌ Ｒｅｄ不含のＤ−ＭＥＭ培地（シグマアルドリッチジャパン社製）を各ウェルに４００μＬ添加後、固形分濃度が上記所定量となるように調製した各試料を５０μＬを添加して、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で３０分間培養した。異なる作用機序を想定して脱顆粒誘発剤として、カルシウムイオノホア（Ａ２３１８７、和光純薬社製）と、ＩｇＥ受容体のアゴニストであるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ、和光純薬社製）及びホスファチジルセリン（ＰＳ、フナコシ社製）の組み合わせの２種類を用いた。Ａ２３１８７では、各ウェルに５０μＬ（１０μｇ／ｍＬ）添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で３０分間培養した。ＣｏｎＡ（２ｍｇ／ｍＬ）及びＰＳ（０．５ｍｇ／ｍＬ）では、各ウェルに２５μＬずつ添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で６０分間培養した。各ウェルの培養上清を回収し、１０００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離してＲＢＬ−２Ｈ３細胞を除去した後、遊離ヒスタミン量を測定した。 First, 500 μL (2 × 10 5 cells / well) of RBL-2H3 cell suspension was seeded in a 24-well culture plate and cultured under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. for 12 hours. After completion of the culture, the medium was removed, and each well was washed with PBS (−). After adding 400 μL of L-glutamine and Phenol Red-free D-MEM medium (manufactured by Sigma Aldrich Japan) to each well, 50 μL of each sample prepared so that the solid content concentration is the above predetermined amount was added, The cells were cultured for 30 minutes under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. Assuming different mechanism of action, as degranulation inducers, calcium ionophore (A23187, manufactured by Wako Pure Chemical Industries), IgE receptor agonist concanavalin A (Con A, manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and phosphatidylserine ( Two types of combinations of PS and Funakoshi were used. In A23187, 50 μL (10 μg / mL) was added to each well, and then cultured for 30 minutes under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. In ConA (2 mg / mL) and PS (0.5 mg / mL), 25 μL was added to each well, and then cultured for 60 minutes under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. The culture supernatant of each well was collected, centrifuged at 1000 rpm at 4 ° C. for 5 minutes to remove RBL-2H3 cells, and then the amount of free histamine was measured.
ヒスタミンの分析は、市販のヒスタミン測定キット（チェックカラーヒスタミン、キッコーマン社製）を用いて行った。ヒスタミン遊離抑制率は、下記計算式から算出した。
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝（ａ−ｂ）／ａ×１００
ａは脱顆粒誘発剤を加えた培養上清中のヒスタミン量を示す（エキス０％）。ｂは脱顆粒誘発剤、及び花粉荷溶媒抽出エキス又は甜茶水抽出エキスを加えた培養上清中のヒスタミン量を示す。遊離したヒスタミン量及びヒスタミン遊離抑制率の結果を図２，３に示す。ラット好塩基球性白血病細胞からのカルシウムイオノホアによるヒスタミン遊離の抑制効果の結果を図２に示す。ラット好塩基球性白血病細胞からのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）及びホスファチジルセリン（ＰＳ）によるヒスタミン遊離の抑制効果の結果を図３に示す。また、検量線を作成し、ヒスタミン遊離の８０％阻害濃度（抽出エキスの固形分濃度）を算出した。この結果を表２に示す。
The analysis of histamine was performed using a commercially available histamine measurement kit (Check Color Histamine, manufactured by Kikkoman Corporation). The inhibition rate of histamine release was calculated from the following formula.
Histamine release inhibition rate (%) = (ab) / a × 100
a shows the amount of histamine in the culture supernatant to which a degranulation inducer is added (
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）前記抗ヒスタミン剤を含有する医薬品、研究用試薬、化粧品、及び飲食品。
Next, technical ideas that can be grasped from the above-described embodiment and other examples will be described below together with their effects.
(A) Pharmaceuticals, research reagents, cosmetics, and foods and drinks containing the antihistamines.
（ｂ）前記親水性有機溶媒は、エタノールである前記抗ヒスタミン剤。
（ｃ）花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とするマスト細胞又は好塩基球における脱顆粒抑制剤又はヒスタミン遊離抑制剤。
(B) The said antihistamine whose said hydrophilic organic solvent is ethanol.
(C) A degranulation inhibitor or histamine release inhibitor in mast cells or basophils, comprising pollen cargo or a solvent extract of pollen cargo as an active ingredient.
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