JP2010235447A - Inhibitory agent for inflammatory cytokine - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、CD36結合能を有する物質の利用に関し、特に、CD36結合能を有する物質を利用した炎症性サイトカイン産生抑制剤に関する。 The present invention relates to the use of a substance having CD36 binding ability, and in particular, to an inflammatory cytokine production inhibitor using a substance having CD36 binding ability.
炎症は、生体が刺激に応答して呈する複雑な一連の反応である。炎症は、本来は生体の防御システムのひとつであり、外因性因子によって引き起こされる。例えば、細菌やウイルス等の病原性微生物、外傷や放射線等の物理的因子、酸やアルカリ、金属等の化学的因子などは炎症を誘引する。しかし炎症は必ずしも外因性因子によるものばかりではなく、内因性の原因によって炎症が起こる場合もある。例えば、自己に対する自己抗体によって生じる免疫複合体は、自己免疫疾患を引き起こす。 Inflammation is a complex series of reactions that an organism presents in response to a stimulus. Inflammation is essentially one of the body's defense systems and is caused by exogenous factors. For example, pathogenic microorganisms such as bacteria and viruses, physical factors such as trauma and radiation, and chemical factors such as acids, alkalis and metals induce inflammation. However, inflammation is not always due to exogenous factors, but inflammation may occur due to intrinsic causes. For example, immune complexes generated by autoantibodies against self cause autoimmune diseases.
炎症性疾患の多くは、生体内における炎症性サイトカインの制御異常が関連している。炎症性サイトカインは、炎症を促進するサイトカインの総称であり、TNFα、IL-1α、IL-1β、IL-6、IFNγ、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、TNFα、GM-CSFなどが炎症性サイトカインに分類される。炎症性サイトカインは各種刺激によって血球から産生されるが、一方、炎症を抑制する活性を有する抗炎症性サイトカイン（IL-10、IL-4、TGFβ等）も血球から産生される。通常は、炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインは互いの産生量を適宜調節するため、生体内における炎症反応は過剰になることなく正常範囲内に制御されている。 Many inflammatory diseases are associated with dysregulation of inflammatory cytokines in vivo. Inflammatory cytokine is a general term for cytokines that promote inflammation, and includes TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-6, IFNγ, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18 , TNFα and GM-CSF are classified as inflammatory cytokines. Inflammatory cytokines are produced from blood cells by various stimuli, while anti-inflammatory cytokines (IL-10, IL-4, TGFβ, etc.) having an activity to suppress inflammation are also produced from blood cells. Usually, inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines regulate the production of each other as appropriate, so that the inflammatory response in the living body is controlled within the normal range without becoming excessive.
全身性炎症反応症候群（Sytemic Inflammatory Response Syndrome, SIRS）は、感染、火傷、外傷、浸襲性の大きい手術などが誘引となって引き起こされる炎症性疾患の一群である。SIRSでは、血液中の炎症性サイトカインの異常上昇が特徴的に観察される（高サイトカイン血症）。重症例では、自己破壊的な全身性炎症が発生し血栓形成が誘導される。そのため短期間に複数の臓器が機能不全に陥り、最悪の場合は死に至る。 Systemic Inflammatory Response Syndrome (SIRS) is a group of inflammatory diseases that are triggered by infection, burns, trauma, and invasive surgery. In SIRS, an abnormal increase in inflammatory cytokines in the blood is characteristically observed (hypercytokinemia). In severe cases, self-destructive systemic inflammation occurs and thrombus formation is induced. As a result, multiple organs become dysfunctional in a short period of time, resulting in death in the worst case.
敗血症はSIRSの一疾患である。米国では、敗血症は心臓疾患以外のICUにおける死亡原因の最上位に位置づけられているほど、重篤な疾患として認識されている。しかし残念なことに、敗血症の有効な治療法はいまだ確立されていない。現時点での敗血症の臨床上の治療法としては、エンドトキシン吸着による血液浄化や、抗血栓凝固活性を持つ活性化プロテインCの投与など、限られた治療が適用されているに過ぎない。 Sepsis is a disease of SIRS. In the United States, sepsis is recognized as a serious disease as it is ranked as the top cause of death in ICUs other than heart disease. Unfortunately, no effective treatment for sepsis has yet been established. At present, only limited treatments such as blood purification by endotoxin adsorption and administration of activated protein C having antithrombotic coagulation activity are applied as clinical treatments for sepsis.
また、関節リウマチも、炎症性疾患の代表例である。関節リウマチは、免疫の異常によって関節や筋肉に強い炎症を生じ、腫れや痛み、熱を伴う自己免疫性疾患のひとつである。一般に、関節リウマチは進行性であり、症状の進行に伴い関節の変形や骨破壊などの障害が起き、完治は困難である。患者数は人口の0.5-1.0%に上り、日本では約70万人の患者がいると推定されている。関節リウマチ発症の機序は不明であるが、炎症を起こした関節では滑膜が肥厚する（パンヌス形成）。パンヌス内では様々な炎症性サイトカインが産生され、この炎症性サイトカインは炎症を悪化させるだけでなく、骨破壊を促進する。 Rheumatoid arthritis is also a representative example of inflammatory diseases. Rheumatoid arthritis is one of the autoimmune diseases that causes strong inflammation in joints and muscles due to immune abnormalities and is accompanied by swelling, pain, and heat. In general, rheumatoid arthritis is progressive, and disorders such as joint deformation and bone destruction occur with the progress of symptoms, and complete cure is difficult. The number of patients is 0.5-1.0% of the population, and it is estimated that there are about 700,000 patients in Japan. The mechanism of the onset of rheumatoid arthritis is unknown, but the synovium thickens in inflamed joints (pannus formation). Various inflammatory cytokines are produced in Pannus, which not only exacerbate inflammation but also promote bone destruction.
一部の炎症性疾患は、炎症性サイトカイン効果を抑制することによって治療することが可能である。実際、関節リウマチは、すでに抗TNFα抗体（レミケード）、可溶性TNFα受容体（エンブレル）による治療が臨床上実用化されており、また、抗IL-6受容体抗体（トシリズマブ）の有効性も報告されている。また潰瘍性大腸炎のクローン病に対しては、IFNγに対する中和抗体（fontolizumab）を用いた臨床試験が行なわれ、有効性が示されている。しかしながら、サイトカインをターゲットにした上述の治療戦略は、すでに分泌されたサイトカインをブロックする方法であって、炎症性サイトカイン産生細胞の活動を抑制しているのではない。 Some inflammatory diseases can be treated by suppressing inflammatory cytokine effects. In fact, rheumatoid arthritis has already been clinically treated with anti-TNFα antibody (Remicade) and soluble TNFα receptor (embrel), and the effectiveness of anti-IL-6 receptor antibody (tocilizumab) has also been reported. ing. In addition, a clinical trial using a neutralizing antibody against IFNγ (fontolizumab) has been conducted for Crohn's disease of ulcerative colitis, and its effectiveness has been shown. However, the above therapeutic strategy targeting cytokines is a method of blocking already secreted cytokines and not suppressing the activity of inflammatory cytokine producing cells.
また乾癬やクローン病については、IL-10の炎症性サイトカイン産生抑制作用による抗炎症効果を期待して、IL-10投与の臨床試験が実施されている。一定の成果が認められる一方で、外因性IL-10の多量投与がかえって炎症を悪化させる恐れがあることも報告されている。このように、抗炎症性サイトカイン投与による炎症性疾患治療は、必ずしも容易ではない。 As for psoriasis and Crohn's disease, clinical trials of IL-10 administration are being conducted in anticipation of the anti-inflammatory effect of IL-10 due to the suppressive action of inflammatory cytokine production. While certain results have been observed, it has also been reported that high doses of exogenous IL-10 may exacerbate inflammation. Thus, treatment of inflammatory diseases by administration of anti-inflammatory cytokines is not always easy.
ところで、本発明者等によって、細胞接着分子であるインテグリンβ3（CD61）に対する抗体が単球・マクロファージによる炎症性サイトカインの産生を著しく抑制することが明らかにされている（特許文献１）。一方、抗CD36抗体と炎症性サイトカイン産生との関係については、Janciauskieneらによる報告がある。単球のTNFα産生量およびIL-6産生量は抗CD36抗体単独では影響されないが、一方、単球活性化能を有するC-36によって活性化された単球に抗CD36抗体を投与した場合は、単球のIL-6産生量は低下し、逆にTNFα産生量は3倍以上に上昇した（非特許文献１）。
本発明は上記状況に鑑みてなされたものであり、本発明が解決しようとする課題は、敗血症を含む炎症性疾患の新規治療薬の提供である。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and the problem to be solved by the present invention is to provide a novel therapeutic agent for inflammatory diseases including sepsis.
上記課題を解決すべく、本発明者らは炎症性疾患治療薬の候補物質を鋭意探索した。本発明者等は炎症性疾患とサイトカインの関係に注目し、内在的に炎症性サイトカインの産生を制御する機能抗体を取得することを思いついた。そこで、ヒト末梢血単核球画分（PBMC）でマウスを免疫し、得られた抗体のサイトカイン産生制御効果について検討したところ、PBMCによるIFNγ産生を単独で強く抑制する抗CD36抗体を見出した。加えて、他のサイトカイン産生に対する効果についても検討したところ、上記抗CD36抗体は代表的な炎症性サイトカインの産生を確実に抑制することが明らかになった。Janciauskieneらによる報告では、抗CD36抗体単独の炎症性サイトカイン産生抑制効果は全く観察されていない。むしろ、Janciauskieneらによる報告では、C-36で活性された単球のTNFα産生量は抗CD36抗体の添加により増加している。これらを考慮すると、単独で炎症性サイトカイン産生抑制効果を有する抗CD36抗体の存在は、全く予想外であった。さらに本発明者等は、抗CD36抗体に抗炎症性サイトカイン産生促進能があることを初めて見出した。本発明の抗体によって主要な炎症性サイトカインの産生を抑制することにより、または抗炎症性サイトカインの産生を促進することにより、新規メカニズムの炎症性疾患治療が可能になると考えられる。すなわち、本発明は抗CD36抗体を用いた炎症性疾患の治療に関し、より具体的には、以下の発明を提供するものである。
（１） 抗CD36抗体を含む、抗炎症性サイトカイン産生促進剤、
（２） CD36がヒトCD36である、上記（１）に記載の抗炎症性サイトカイン産生促進剤、
（３） 抗炎症性サイトカインがIL-10、TGFβからなる群より選択される少なくとも１つである上記（１）または（２）に記載の抗炎症性サイトカイン産生促進剤、
（４） 重鎖可変領域が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：１、配列番号：９、配列番号：１６、配列番号：２２、配列番号：３０のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
（b）配列番号：１、配列番号：９、配列番号：１６、配列番号：２２、配列番号：３０のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、
（５） 軽鎖可変領域が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：２、配列番号：１０、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３１のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
（b）配列番号：２、配列番号：１０、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３１のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
（６） 重鎖CDR1が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：３、配列番号：１１、配列番号：２４、配列番号：３２のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR1
（b）配列番号：３、配列番号：１１、配列番号：２４、配列番号：３２のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR1、
（７） 重鎖CDR2が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：４、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：２５、配列番号：３３のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR2
（b）配列番号：４、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：２５、配列番号：３３のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR2、
（８） 重鎖CDR3が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：５、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：２６、配列番号：３４のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR3
（b）配列番号：５、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：２６、配列番号：３４のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR3、
（９） 軽鎖CDR1が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：６、配列番号：２０、配列番号：２７、配列番号：３５のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR1
（b）配列番号：６、配列番号：２０、配列番号：２７、配列番号：３５のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR1、
（１０） 軽鎖CDR2が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：７、配列番号：１４、配列番号：２８のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR2
（b）配列番号：７、配列番号：１４、配列番号：２８のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR2、
（１１） 軽鎖CDR3が下記（a）または（b）のいずれかである、抗CD36抗体
（a）配列番号：８、配列番号：１５、配列番号：２１、配列番号：２９、配列番号：３６のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR3
（b）配列番号：８、配列番号：１５、配列番号：２１、配列番号：２９、配列番号：３６のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR3、
（１２） 上記（４）から（１１）のいずれかに記載の抗CD36抗体と競合してCD36と結合する、抗CD36抗体、
（１３） 上記（４）から（１１）のいずれかに記載の抗CD36抗体が認識するCD36の領域を認識する、抗CD36抗体、
（１４） 抗CD36抗体が上記（４）から（１３）のいずれかに記載された抗CD36抗体である、上記（１）から（３）のいずれかに記載の抗炎症性サイトカイン産生促進剤、
（１５） 上記（４）から（１３）のいずれかに記載された抗CD36抗体を含む、炎症性サイトカイン産生抑制剤、
（１６） 炎症性サイトカインがIFNγ、IL-1α、IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSFからなる群より選択される少なくとも１つである、上記（１５）記載の炎症性サイトカイン産生抑制剤、
（１７） 上記（１）、（２）、（３）、若しくは（１４）のいずれかに記載の抗炎症性サイトカイン産生促進剤または上記（１５）若しくは（１６）に記載の炎症性サイトカイン産生抑制剤を含む、炎症性疾患治療用医薬品、
（１８） 炎症性疾患が、敗血症、全身性炎症反応症候群、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ様脊椎炎、変形性関節炎、痛風性関節炎、炎症性腸疾患、ギランバレー症候群、強皮症、繊維症、皮膚炎、乾癬、血管性浮腫、湿疹様皮膚炎、高増殖性皮膚疾患（hyperproliferative skin disease）、皮膚の炎症状態（inflammatory skin condition）、糸球体腎炎、腎炎、血管炎症、アテローム動脈硬化症、脈管炎、静脈炎、動脈炎、大動脈炎、PTCA後再狭窄、バイパス手術後再狭窄、移植拒絶反応（同種腎臓移植拒絶、同種心臓移植拒絶、これらに伴う脈管障害等）、アナフィラキシー、血栓症、虚血／再灌流傷害、自己免疫疾患からなる群より選ばれるいずれか1以上の疾患である、（１７）記載の炎症性疾患治療用医薬品、
（１９） 抗CD36抗体を用いることを特徴とする、炎症性疾患の治療方法、
（２０） 炎症性疾患治療薬の製造のための、抗CD36抗体の使用。
In order to solve the above problems, the present inventors have eagerly searched for candidate substances for therapeutic agents for inflammatory diseases. The present inventors focused on the relationship between inflammatory diseases and cytokines, and came up with the idea of obtaining functional antibodies that endogenously control the production of inflammatory cytokines. Thus, mice were immunized with a human peripheral blood mononuclear cell fraction (PBMC), and the cytokine production control effect of the obtained antibody was examined. As a result, an anti-CD36 antibody that strongly suppressed IFNγ production by PBMC alone was found. In addition, when the effects on the production of other cytokines were examined, it was revealed that the above-mentioned anti-CD36 antibody surely suppresses the production of typical inflammatory cytokines. In a report by Janciauskiene et al., No anti-CD36 antibody alone has been observed to suppress the production of inflammatory cytokines. Rather, the report by Janciauskiene et al. Shows that the amount of TNFα produced by monocytes activated by C-36 is increased by the addition of anti-CD36 antibody. Considering these, the existence of an anti-CD36 antibody having an inhibitory effect on the production of inflammatory cytokines alone was completely unexpected. Furthermore, the present inventors have found for the first time that the anti-CD36 antibody has the ability to promote the production of anti-inflammatory cytokines. By suppressing the production of major inflammatory cytokines by the antibody of the present invention or by promoting the production of anti-inflammatory cytokines, it is considered that inflammatory diseases can be treated by a novel mechanism. That is, the present invention relates to the treatment of inflammatory diseases using anti-CD36 antibodies, and more specifically, provides the following inventions.
(1) an anti-inflammatory cytokine production promoter comprising an anti-CD36 antibody,
(2) The anti-inflammatory cytokine production promoter according to (1), wherein CD36 is human CD36,
(3) The anti-inflammatory cytokine production promoter according to (1) or (2) above, wherein the anti-inflammatory cytokine is at least one selected from the group consisting of IL-10 and TGFβ,
(4) Anti-CD36 antibody (a) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: wherein the heavy chain variable region is any of the following (a) or (b) : Heavy chain variable region comprising the amino acid sequence described in any one of (30) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, amino acid described in SEQ ID NO: 30 A heavy chain variable region comprising an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted in the sequence;
(5) The anti-CD36 antibody (a) whose light chain variable region is any of the following (a) or (b) (a) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: : Light chain variable region comprising the amino acid sequence of any one of 31 (b) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, amino acid according to SEQ ID NO: 31 A light chain variable region comprising an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted in the sequence;
(6) The anti-CD36 antibody (a) whose heavy chain CDR1 is either the following (a) or (b) (a) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32 CDR1 comprising the described amino acid sequence
(B) From an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24, and SEQ ID NO: 32 CDR1,
(7) The anti-CD36 antibody (a) SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: wherein the heavy chain CDR2 is any of the following (a) or (b) CDR2 comprising the amino acid sequence of any of 33
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 33 CDR2 consisting of the inserted amino acid sequence,
(8) Anti-CD36 antibody (a) SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: wherein the heavy chain CDR3 is either of the following (a) or (b) CDR3 comprising the amino acid sequence of any of 34
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 26, and SEQ ID NO: 34 CDR3 consisting of the inserted amino acid sequence,
(9) The anti-CD36 antibody (a) in which the light chain CDR1 is either of the following (a) or (b): (a) SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 35 CDR1 comprising the described amino acid sequence
(B) From an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, and SEQ ID NO: 35 CDR1,
(10) The anti-CD36 antibody (a) in which the light chain CDR2 is any of the following (a) or (b): (a) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 14, and SEQ ID NO: 28 Including CDR2
(B) CDR2 consisting of an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 14, or SEQ ID NO: 28;
(11) The anti-CD36 antibody (a) in which the light chain CDR3 is either of the following (a) or (b): SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: CDR3 comprising the amino acid sequence of any of 36
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 29, and SEQ ID NO: 36 CDR3 consisting of the inserted amino acid sequence,
(12) An anti-CD36 antibody that competes with the anti-CD36 antibody according to any one of (4) to (11) and binds to CD36,
(13) An anti-CD36 antibody that recognizes a CD36 region recognized by the anti-CD36 antibody according to any one of (4) to (11) above,
(14) The anti-inflammatory cytokine production promoter according to any of (1) to (3), wherein the anti-CD36 antibody is the anti-CD36 antibody described in any of (4) to (13) above,
(15) An inflammatory cytokine production inhibitor comprising the anti-CD36 antibody described in any of (4) to (13) above,
(16) From the group consisting of inflammatory cytokines consisting of IFNγ, IL-1α, IL-1β, TNFα, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, and GM-CSF The inflammatory cytokine production inhibitor according to the above (15), which is at least one selected;
(17) The anti-inflammatory cytokine production promoter according to any one of (1), (2), (3), or (14) or the inflammatory cytokine production inhibition according to (15) or (16) Pharmaceuticals for treating inflammatory diseases, including agents,
(18) Inflammatory diseases are sepsis, systemic inflammatory response syndrome, rheumatoid arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis, gouty arthritis, inflammatory bowel disease, Guillain-Barre syndrome, strong Dermatosis, fibrosis, dermatitis, psoriasis, angioedema, eczema-like dermatitis, hyperproliferative skin disease, inflammatory skin condition, glomerulonephritis, nephritis, vascular inflammation, Atherosclerosis, vasculitis, phlebitis, arteritis, aortitis, restenosis after PTCA, restenosis after bypass surgery, transplant rejection (allogeneic kidney transplant rejection, allocardial transplant rejection, associated vascular disorders, etc.) ), An inflammatory disease therapeutic drug according to (17), which is any one or more diseases selected from the group consisting of anaphylaxis, thrombosis, ischemia / reperfusion injury, and autoimmune diseases,
(19) A method for treating an inflammatory disease, characterized by using an anti-CD36 antibody,
(20) Use of an anti-CD36 antibody for the manufacture of a therapeutic agent for inflammatory diseases.
本発明によって、炎症性疾患の新規治療薬が提供された。本発明は抗CD36抗体の炎症性サイトカインの産生抑制効果を利用し、従来の炎症性疾患治療薬にはない新規メカニズムの治療薬である。本発明の治療薬は、抗炎症性サイトカイン投与等の従来治療法では困難であった症例にも有効に奏する可能性があると考えられ、炎症性疾患治療方法の新たな選択肢として期待される。 According to the present invention, a novel therapeutic agent for inflammatory diseases has been provided. The present invention utilizes the anti-CD36 antibody production-suppressing effect of inflammatory cytokines, and is a therapeutic agent with a novel mechanism not found in conventional therapeutic agents for inflammatory diseases. The therapeutic agent of the present invention is considered to be effective in cases that have been difficult with conventional treatment methods such as administration of anti-inflammatory cytokines, and is expected as a new option for treating inflammatory diseases.
本発明は、抗CD36抗体を利用した炎症性疾患の治療に関する。CD36は、血小板の第四番目の糖タンパク質として発見され、その後、内皮細胞、単球、分化初期の赤血球、さらには一部のヒト腫瘍細胞株上に発現することが確認された。リガンドの種類は多様であり、トロンボスポンジン-1、type I / type IVコラーゲン、陰イオンリン脂質、長鎖脂肪酸、酸化LDL、エラスターゼの内因性インヒビターであるα1-antitrypsin、マラリアが感染した赤血球などが知られる。（Dale E. Greenwalt et al. / Blood 80(1992) 1105-1115，Valerie A. Fadok et al. / Journal of Immunology(1998) 6250-6257，）。CD36は2回膜貫通型の構造を持ち、スカベンジャー受容体ファミリーBクラスに分類される。CD36は、ヒト、マウス、ラット、アカゲザル、ウシ等で存在が確認されている。またCD36は、FAT、SCARB、GP88、glycoprotein IV (gpIV)、glycoprotein IIIV (gpIIIb)の別名でも知られている。 The present invention relates to the treatment of inflammatory diseases using anti-CD36 antibodies. CD36 was discovered as the fourth glycoprotein of platelets and subsequently confirmed to be expressed on endothelial cells, monocytes, early erythrocytes and even some human tumor cell lines. There are various types of ligands, such as thrombospondin-1, type I / type IV collagen, anion phospholipids, long chain fatty acids, oxidized LDL, α1-antitrypsin, an endogenous inhibitor of elastase, malaria-infected erythrocytes, etc. known. (Dale E. Greenwalt et al./Blood 80 (1992) 1105-1115, Valerie A. Fadok et al./Journal of Immunology (1998) 6250-6257). CD36 has a two-transmembrane structure and is classified into the scavenger receptor family B class. CD36 has been confirmed to exist in humans, mice, rats, rhesus monkeys, cows and the like. CD36 is also known as FAT, SCARB, GP88, glycoprotein IV (gpIV), or glycoprotein IIIV (gpIIIb).
CD36の機能は多岐にわたる。CD36は細胞接着分子として血小板の凝集や血小板と単球の接着に寄与するほか、長鎖脂肪酸の輸送に関与する。また、修飾されたLDL（酸化、アセチル化）を認識するスカベンジャーレセプターとして機能し、マクロファージによるLDLの取り込みにも関与する。さらにCD36は、αVβ3（CD61）やトロンボスポンジンと複合体を形成し、アポトーシス細胞のクリアランスに寄与している。（Dale E. Greenwalt et al. / Blood 80(1992) 1105-1115，Valerie A. Fadok et al. / Journal of Immunology(1998) 6250-6257）。CD36のリガンドであるα1-antitrypsinのC末端断片（C-36）は、CD36を介して単球によるLDL取り込みを促進させるだけでなく、炎症性サイトカインの産生を亢進させる活性を有する。C-36によって活性化された単球のIL-6産生が、CD36に対する抗体でブロックされることが報告されている (S.Janciauskiene et al./ Atherosclerosis 158 (2001) 41-51)。 CD36 has a wide range of functions. CD36 is a cell adhesion molecule that contributes to platelet aggregation, platelet-monocyte adhesion, and long-chain fatty acid transport. It also functions as a scavenger receptor that recognizes modified LDL (oxidation and acetylation), and is involved in LDL uptake by macrophages. In addition, CD36 forms a complex with αVβ3 (CD61) and thrombospondin and contributes to the clearance of apoptotic cells. (Dale E. Greenwalt et al. / Blood 80 (1992) 1105-1115, Valerie A. Fadok et al. / Journal of Immunology (1998) 6250-6257). The C1-terminal fragment (C-36) of α1-antitrypsin, which is a ligand for CD36, not only promotes LDL uptake by monocytes via CD36 but also has an activity of enhancing the production of inflammatory cytokines. It has been reported that IL-6 production of monocytes activated by C-36 is blocked with an antibody against CD36 (S. Janciauskiene et al./ Atherosclerosis 158 (2001) 41-51).
抗CD36抗体は、CD36を抗原として公知方法により調製することができる。すなわち、CD36を適当な免疫動物に免疫し、抗体価の上昇を確認したところで抗体を回収する。抗体はポリクローナル抗体としても良いが、モノクローナル抗体とすることによって特異性に優れた抗体を選択することが可能となる。モノクローナル抗体の調製方法も公知である。一般的には、免疫動物から回収した抗体産生細胞を適当な融合パートナーと細胞融合させることによってハイブリドーマとし、該ハイブリドーマから産生される抗体の活性を指標としてスクリーニングを行えばよい(Gulfre G.,Nature 266.550-552,1977)。本発明においてCD36の由来は特に問わないが、好ましくはヒト由来のCD36である。抗原として使用するCD36は、CD36産生細胞から天然のCD36を調製してもよいし、CD36遺伝子を適当な細胞に形質転換して遺伝子工学技術によって調製してもよい。あるいは、CD36配列情報をもとに合成することも可能である。 The anti-CD36 antibody can be prepared by a known method using CD36 as an antigen. That is, CD36 is immunized to an appropriate immunized animal, and the antibody is recovered when an increase in antibody titer is confirmed. The antibody may be a polyclonal antibody, but an antibody having excellent specificity can be selected by using a monoclonal antibody. Methods for preparing monoclonal antibodies are also known. In general, antibody-producing cells recovered from an immunized animal are subjected to cell fusion with an appropriate fusion partner to form a hybridoma, and screening may be performed using the activity of the antibody produced from the hybridoma as an index (Gulfre G., Nature 266.550-552,1977). In the present invention, the origin of CD36 is not particularly limited, but human-derived CD36 is preferred. CD36 used as an antigen may be prepared from natural CD36 from CD36-producing cells, or may be prepared by genetic engineering techniques after transforming the CD36 gene into an appropriate cell. Alternatively, it can be synthesized based on CD36 sequence information.
多くの哺乳類において、抗体はIgG、IgM、IgA、IgD、IgEの5クラスに分類される。いずれのクラスの抗体にも、2本の重鎖（H鎖）および2本の軽鎖（L鎖）がS-S結合と非共有結合によって連結されたY字型の基本構造が存在する。重鎖および軽鎖は、それぞれ定常領域と可変領域からなる。可変領域は、３つのCDR（complementarity determining region:相補性決定部位）と４つのフレームワークで構成される。CDRは、抗原分子と相補的な立体構造を形成し抗体の特異性を決定する部位である。重鎖および軽鎖のそれぞれの可変領域に、４つのFR（Framework region:枠組み構造領域）に挟まれて3つのCDRがモザイク状に存在する(E. A. Kabat et al.,「免疫学的観点におけるタンパク質の配列(Sequences of proteins of immunological interest)」,vol I,第5版,NIH publication (1991))。基本的にはこれら6つのCDRによって構成される立体構造により抗原との特異性が決定されるが、必ずしも6箇所すべてのCDRがすべての抗原−抗体結合に関与するとは限らない。また、FRのアミノ酸残基が抗原との結合に関与する場合もある。FRのアミノ酸配列は良く保存されているのに対して、CDRのアミノ酸配列の変異性は高く、超可変領域(hyper variable region)とも呼ばれる。3つのCDRは、アミノ末端側からCDR1、CDR2、CDR3と呼ばれている。 In many mammals, antibodies are classified into five classes: IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE. Both classes of antibodies have a Y-shaped basic structure in which two heavy chains (H chains) and two light chains (L chains) are linked by S-S bonds and non-covalent bonds. The heavy and light chains are each composed of a constant region and a variable region. The variable region is composed of three CDRs (complementarity determining regions) and four frameworks. CDR is a site that determines the specificity of an antibody by forming a three-dimensional structure complementary to an antigen molecule. In each variable region of the heavy chain and light chain, there are three CDRs sandwiched between four FRs (Framework regions) (EA Kabat et al., “Proteins from an immunological perspective). (Sequences of proteins of immunological interest), vol I, 5th edition, NIH publication (1991)). Basically, the specificity to the antigen is determined by the three-dimensional structure constituted by these six CDRs, but not all the six CDRs are necessarily involved in all antigen-antibody binding. In addition, FR amino acid residues may be involved in antigen binding. The amino acid sequence of FR is well conserved, while the amino acid sequence of CDR is highly variable and is also called a hyper variable region. The three CDRs are called CDR1, CDR2, and CDR3 from the amino terminal side.
本発明者等は、炎症性サイトカイン産生を単独で抑制できる抗CD36抗体として、クローン１−３、１−３６、２−６、２−６６、および４−６２を見出した。したがって本発明は、炎症性サイトカイン産生を抑制する抗CD36抗体も提供する。本発明者等は、上記抗CD36抗体について、重鎖可変領域（VH）、軽鎖可変領域（VL）、重鎖のCDR1-3、軽鎖のCDR1-3の配列をそれぞれ決定した。 The present inventors have found clones 1-3, 1-36, 2-6, 2-66, and 4-62 as anti-CD36 antibodies capable of suppressing inflammatory cytokine production alone. Accordingly, the present invention also provides an anti-CD36 antibody that suppresses inflammatory cytokine production. The inventors determined the heavy chain variable region (VH), light chain variable region (VL), heavy chain CDR1-3, and light chain CDR1-3 sequences for the anti-CD36 antibody.
クローン１−３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：１に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：２に、重鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：３に、重鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：４に、重鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：５に、軽鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：６に、軽鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：７に、軽鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：８に示す。上記重鎖CDR1-3の重鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：１の第50位から第54位、CDR2は配列番号：１の第69位から第85位、CDR3は配列番号：１の第118位から第126位に相当する。上記軽鎖CDR1-3の軽鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：２の第44位から第54位、CDR2は配列番号：２の第70位から第76位、CDR3は配列番号：２の第109位から第117位に相当する。 The amino acid sequence of the heavy chain variable region of clone 1-3 is SEQ ID NO: 1, the amino acid sequence of the light chain variable region is SEQ ID NO: 2, the amino acid sequence of heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 3, and the heavy chain CDR2 The amino acid sequence is SEQ ID NO: 4, the heavy chain CDR3 amino acid sequence is SEQ ID NO: 5, the light chain CDR1 amino acid sequence is SEQ ID NO: 6, the light chain CDR2 amino acid sequence is SEQ ID NO: 7, the light chain The amino acid sequence of CDR3 is shown in SEQ ID NO: 8. Explaining the position of the heavy chain CDR1-3 in the heavy chain variable region, CDR1 is the 50th to 54th position of SEQ ID NO: 1, CDR2 is the 69th to 85th position of SEQ ID NO: 1, and CDR3 is the sequence It corresponds to No. 1 from 118th to 126th. The position of the light chain CDR1-3 in the light chain variable region is explained below. CDR1 is the 44th to 54th position of SEQ ID NO: 2, CDR2 is the 70th to 76th position of SEQ ID NO: 2, and CDR3 is the sequence. It corresponds to No. 109 from No. 2 to No. 117.
また同様に、クローン１−３６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：９に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：１０に、重鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：１１に、重鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：１２に、重鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：１３に示す。クローン１−３６の軽鎖CDR1のアミノ酸配列は、クローン１−３の軽鎖CDR1アミノ酸配列と同一である（配列番号：６）。クローン１−３６の軽鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：１４に、軽鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：１５に示す。上記重鎖CDR1-3の重鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：９の第50位から54位、CDR2は配列番号：９の第69位から85位、CDR3は配列番号：９の第118位から126位に相当する。上記軽鎖CDR1-3の軽鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：１０の第44位から第54位、CDR2は配列番号：１０の第70位から第76位、CDR3は配列番号：１０の第109位から第117位に相当する。 Similarly, the amino acid sequence of the heavy chain variable region of clone 1-36 is SEQ ID NO: 9, the amino acid sequence of the light chain variable region is SEQ ID NO: 10, and the amino acid sequence of heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 11. The amino acid sequence of heavy chain CDR2 is shown in SEQ ID NO: 12, and the amino acid sequence of heavy chain CDR3 is shown in SEQ ID NO: 13. The amino acid sequence of light chain CDR1 of clone 1-36 is identical to the light chain CDR1 amino acid sequence of clone 1-3 (SEQ ID NO: 6). The amino acid sequence of light chain CDR2 of clone 1-36 is shown in SEQ ID NO: 14, and the amino acid sequence of light chain CDR3 is shown in SEQ ID NO: 15. Describing the position of the heavy chain CDR1-3 in the heavy chain variable region, CDR1 is from positions 50 to 54 in SEQ ID NO: 9, CDR2 is from positions 69 to 85 in SEQ ID NO: 9, and CDR3 is SEQ ID NO: It corresponds to 9th from 118th to 126th place. The position of the light chain CDR1-3 in the light chain variable region will be described. CDR1 is the 44th to 54th position of SEQ ID NO: 10, CDR2 is the 70th to 76th position of SEQ ID NO: 10, and CDR3 is the sequence. It corresponds to No. 10 from No. 109 to No. 117.
クローン２−６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：１６に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：１７に示す。クローン２−６の重鎖CDR1のアミノ酸配列は、クローン１−３６の重鎖CDR1アミノ酸配列と同一である（配列番号：１１）。クローン２−６の重鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：１８に、重鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：１９に、軽鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：２０に示す。クローン２−６の軽鎖CDR2のアミノ酸配列は、クローン１−３の軽鎖CDR2アミノ酸配列と同一である（配列番号：７）。クローン２−６の軽鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：２１に示す。上記重鎖CDR1-3の重鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：１６の第50位から第54位、CDR2は配列番号：１６の第69位から第85位、CDR3は配列番号：１６の第118位から第131位に相当する。上記軽鎖CDR1-3の軽鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：１７の第44位から第54位、CDR2は配列番号：１７の第70位から第76位、CDR3は配列番号：１７の第109位から第117位に相当する。 The amino acid sequence of the heavy chain variable region of clone 2-6 is shown in SEQ ID NO: 16, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO: 17. The amino acid sequence of the heavy chain CDR1 of clone 2-6 is identical to the heavy chain CDR1 amino acid sequence of clone 1-36 (SEQ ID NO: 11). The amino acid sequence of the heavy chain CDR2 of clone 2-6 is shown in SEQ ID NO: 18, the amino acid sequence of heavy chain CDR3 is shown in SEQ ID NO: 19, and the amino acid sequence of light chain CDR1 is shown in SEQ ID NO: 20. The light chain CDR2 amino acid sequence of clone 2-6 is identical to the light chain CDR2 amino acid sequence of clone 1-3 (SEQ ID NO: 7). The amino acid sequence of light chain CDR3 of clone 2-6 is shown in SEQ ID NO: 21. Describing the position of the heavy chain CDR1-3 in the heavy chain variable region, CDR1 is the 50th to 54th position of SEQ ID NO: 16, CDR2 is the 69th to 85th position of SEQ ID NO: 16, and CDR3 is the sequence. Number: 16 corresponds to No. 118 to No. 131. The position of the light chain CDR1-3 in the light chain variable region will be explained. CDR1 is the 44th to 54th position of SEQ ID NO: 17, CDR2 is the 70th to 76th position of SEQ ID NO: 17, and CDR3 is the sequence. It corresponds to No. 17 from No. 109 to No. 117.
クローン２−６６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：２２に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：２３に、重鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：２４に、重鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：２５に、重鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：２６に、軽鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：２７に、軽鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：２８に、軽鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：２９に示す。上記重鎖CDR1-3の重鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：２２の第48位から第52位、CDR2は配列番号：２２の第67位から第83位、CDR3は配列番号：２２の第116位から第125位に相当する。上記軽鎖CDR1-3の軽鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：２３の第43位から第58位、CDR2は配列番号：２３の第74位から第80位、CDR3は配列番号：２３の第113位から第121位に相当する。 The amino acid sequence of the heavy chain variable region of clone 2-66 is SEQ ID NO: 22, the amino acid sequence of the light chain variable region is SEQ ID NO: 23, the amino acid sequence of heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 24, and the heavy chain CDR2 The amino acid sequence is SEQ ID NO: 25, the heavy chain CDR3 amino acid sequence is SEQ ID NO: 26, the light chain CDR1 amino acid sequence is SEQ ID NO: 27, the light chain CDR2 amino acid sequence is SEQ ID NO: 28, and the light chain. The amino acid sequence of CDR3 is shown in SEQ ID NO: 29. Explaining the position of the heavy chain CDR1-3 in the heavy chain variable region, CDR1 is from position 48 to position 52 of SEQ ID NO: 22, CDR2 is position 67 to position 83 of SEQ ID NO: 22, CDR3 is the sequence It corresponds to No. 116 from No. 116 to No. 125. The position of the light chain CDR1-3 in the light chain variable region will be described. CDR1 is the 43rd to 58th position of SEQ ID NO: 23, CDR2 is the 74th to 80th position of SEQ ID NO: 23, and CDR3 is the sequence. No. 23 corresponds to No. 113 to No. 121.
クローン４−６２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：３０に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：３１に、重鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：３２に、重鎖CDR2のアミノ酸配列を配列番号：３３に、重鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：３４に、軽鎖CDR1のアミノ酸配列を配列番号：３５に示す。クローン４−６２の軽鎖CDR2のアミノ酸配列は、クローン２−６６の軽鎖CDR2のアミノ酸配列と同一である（配列番号：２８）。クローン４−６２の軽鎖CDR3のアミノ酸配列を配列番号：３６に示す。上記重鎖CDR1-3の重鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：３０の第50位から第54位、CDR2は配列番号：３０の第69位から第85位、CDR3は配列番号：３０の第118位から第129位に相当する。上記軽鎖CDR1-3の軽鎖可変領域における位置を説明すると、CDR1は配列番号：３１の第43位から第58位、CDR2は配列番号：３１の第74位から第80位、CDR3は配列番号：３１の第113位から第121位に相当する。 The amino acid sequence of the heavy chain variable region of clone 4-62 is SEQ ID NO: 30, the amino acid sequence of the light chain variable region is SEQ ID NO: 31, the amino acid sequence of heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 32, and the heavy chain CDR2 The amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 33, the amino acid sequence of heavy chain CDR3 is shown in SEQ ID NO: 34, and the amino acid sequence of light chain CDR1 is shown in SEQ ID NO: 35. The amino acid sequence of light chain CDR2 of clone 4-62 is identical to the amino acid sequence of light chain CDR2 of clone 2-66 (SEQ ID NO: 28). The amino acid sequence of light chain CDR3 of clone 4-62 is shown in SEQ ID NO: 36. The position of the heavy chain CDR1-3 in the heavy chain variable region will be described. CDR1 is the 50th to 54th position of SEQ ID NO: 30, CDR2 is the 69th to 85th position of SEQ ID NO: 30, and CDR3 is the sequence. Number: 30 corresponds to No. 118 to No. 129. The position of the light chain CDR1-3 in the light chain variable region will be described. CDR1 is the 43rd to 58th position of SEQ ID NO: 31, CDR2 is the 74th to 80th position of SEQ ID NO: 31, and CDR3 is the sequence. It corresponds to No. 31 from No. 113 to No. 121.
本発明の抗体における可変領域またはCDRは、上記記載のアミノ酸配列と完全に同一のもののみならず、炎症性サイトカイン産生抑制活性を維持する限り上記記載のアミノ酸配列に変異を含んでいてもよい。すなわち、本発明において、前記可変領域またはCDR領域の配列を１個または数個改変したアミノ酸配列を可変領域またはCDR領域として含む抗体も、炎症性サイトカイン産生抑制活性を維持する限り、本発明の抗体に包含される。可変領域またはCDR領域のアミノ酸配列の中で変換するアミノ酸は、好ましくは全体の可変領域またはCDRの30%以下であり、更に好ましくは全体の20%以下であり、更に好ましくは全体の10%以下、最も好ましくは5％以下である。あるいは、改変された可変領域またはCDR領域のアミノ酸配列は、上記配列番号に記載されたアミノ酸配列全体に対し、70％以上、好ましくは80％以上、さらに好ましくは90％以上、最も好ましくは95％以上の相同性を有する。 The variable region or CDR in the antibody of the present invention is not limited to the completely identical amino acid sequence described above, and may contain a mutation in the amino acid sequence described above as long as the inflammatory cytokine production inhibitory activity is maintained. That is, in the present invention, an antibody comprising the amino acid sequence obtained by modifying one or several of the variable region or CDR region as a variable region or CDR region is also an antibody of the present invention as long as the inflammatory cytokine production inhibitory activity is maintained. Is included. The amino acid to be converted in the amino acid sequence of the variable region or CDR region is preferably 30% or less of the entire variable region or CDR, more preferably 20% or less of the whole, more preferably 10% or less of the whole. Most preferably, it is 5% or less. Alternatively, the amino acid sequence of the modified variable region or CDR region is 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably 95% with respect to the entire amino acid sequence described in SEQ ID NO: It has the above homology.
また、上記可変領域またはCDRを有する本発明の抗CD36抗体が認識するCD36の構造（エピトープ）を認識する抗CD36抗体は、上記本発明の抗CD36抗体と同様の活性を有するものと期待できる。したがって、本発明はこのような抗体も包含する。このような抗体は、公知手法により調製することができる。まず、公知手法により本発明の抗CD36抗体が認識するCD36の構造を決定する。例えば、CD36の公知アミノ酸配列の一部であるペプチドのセットを作製し、該ペプチドセットの中から本発明の抗CD36抗体が認識するペプチドを、ペプチドアレイ等の手法でスクリーニングすることにより、本発明の抗CD36抗体が認識するCD36の構造を決定することが可能である。決定したエピトープを有するペプチドを用いて動物を免疫し、該動物から抗体を調製することにより、上記可変領域またはCDRを有する抗CD36抗体と同様の活性を有する抗CD36抗体を得ることが可能である。 Further, an anti-CD36 antibody that recognizes the structure (epitope) of CD36 recognized by the anti-CD36 antibody of the present invention having the above variable region or CDR can be expected to have the same activity as the anti-CD36 antibody of the present invention. Accordingly, the present invention also includes such antibodies. Such an antibody can be prepared by a known method. First, the structure of CD36 recognized by the anti-CD36 antibody of the present invention is determined by a known technique. For example, a peptide set that is a part of the known amino acid sequence of CD36 is prepared, and the peptide recognized by the anti-CD36 antibody of the present invention is screened from the peptide set by a technique such as a peptide array. It is possible to determine the structure of CD36 recognized by the anti-CD36 antibody. By immunizing an animal with a peptide having the determined epitope and preparing an antibody from the animal, it is possible to obtain an anti-CD36 antibody having the same activity as the anti-CD36 antibody having the above variable region or CDR. .
本発明の抗体は、炎症性サイトカイン産生抑制活性を有し、可変領域またはCDRが上述の特徴を有する限り、IgG、IgM、IgA、IgD、IgEのいずれのクラスであってもよい。さらにこれらのサブクラスについても特に問わない。例えば、IgGにはIgG1〜IgG4のサブクラスの存在が知られるが、いずれのサブクラスであってもよい。 The antibody of the present invention may be any class of IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE as long as it has inflammatory cytokine production inhibitory activity and the variable region or CDR has the above-mentioned characteristics. Further, these subclasses are not particularly limited. For example, the existence of IgG1 to IgG4 subclasses is known for IgG, but any subclass may be used.
また、本発明の抗体は、天然のイムノグロブリン本来の構造でもよく、または、構造を人工的に改変された抗体であってもよい。構造を人工的に改変された抗体の例として、Fab、F(ab´)2、ScFvを挙げることができるがこれらに限定されない。本発明の抗体の由来も、炎症性サイトカイン産生抑制活性を有し、可変領域またはCDRが上述の特徴を有する限り、特に限定されない。本発明の抗体の由来として、例えば、ヒト、サル、げっ歯類（マウス、ラット、モルモット等）、ウサギ、ブタ、ヤギ、ウマ、ウシ、ロバ、イヌ、ネコ、等を挙げることができる。あるいは、本発明の抗体は、その構造の一部として異なる動物種に由来する抗体部分を含んでいてもよい。すなわち本発明の抗体は、定常領域がヒト由来であるキメラ抗体、定常領域およびFRがヒト由来であるヒト化抗体でもよい。 In addition, the antibody of the present invention may have a native structure of a natural immunoglobulin, or an antibody having an artificially modified structure. Examples of antibodies whose structure has been artificially modified include, but are not limited to, Fab, F (ab ′) 2 , and ScFv. The origin of the antibody of the present invention is not particularly limited as long as it has inflammatory cytokine production inhibitory activity and the variable region or CDR has the above-mentioned characteristics. Examples of the origin of the antibody of the present invention include humans, monkeys, rodents (mouse, rat, guinea pig, etc.), rabbits, pigs, goats, horses, cows, donkeys, dogs, cats, and the like. Alternatively, the antibody of the present invention may contain antibody portions derived from different animal species as part of its structure. That is, the antibody of the present invention may be a chimeric antibody whose constant region is derived from human, or a humanized antibody whose constant region and FR are derived from human.
このような人工的に改変された抗体は、上記可変領域またはCDRをコードする塩基配列を持ったcDNAを用い、当業者の技術常識の方法により作製することができる。上記可変領域またはCDRをコードする塩基配列を持ったcDNAは、上述した公知手法により抗CD36モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作製し、クローニングすることができる。具体的には、可変領域遺伝子のシグナル配列と定常領域側の塩基配列を利用してPCRを行い、増幅生成物を適当なクローニングベクターに挿入し、可変領域遺伝子のライブラリーとする。上記CDRに相当する配列をプローブとし、前記可変領域のライブラリーをスクリーニングする。このようにして得られた軽鎖と重鎖の可変領域遺伝子を適当なリンカーで連結してファージに組み込み、１本鎖抗体（いわゆるscFV）として発現させることができる。または該可変領域を抗体発現用の公知ベクターに組み込み、定常領域をコードする遺伝子と連結して完全なイムノグロブリン分子を発現させることも可能である。抗体発現ベクターとしては、例えばSV40 virus basedベクター、EB virus basedベクター、BPV(パピローマウイルス) basedベクターなどを用いることができるが、特にこれらに限定されない。 Such an artificially modified antibody can be prepared by a method of common technical knowledge of those skilled in the art using a cDNA having a base sequence encoding the above variable region or CDR. A cDNA having a base sequence encoding the variable region or CDR can be cloned by preparing a hybridoma that produces an anti-CD36 monoclonal antibody by the known method described above. Specifically, PCR is performed using the signal sequence of the variable region gene and the base sequence on the constant region side, and the amplified product is inserted into an appropriate cloning vector to obtain a library of variable region genes. The variable region library is screened using the sequence corresponding to the CDR as a probe. The light chain and heavy chain variable region genes thus obtained can be linked with an appropriate linker, incorporated into a phage, and expressed as a single chain antibody (so-called scFV). Alternatively, the variable region can be incorporated into a known vector for antibody expression and linked to a gene encoding the constant region to express a complete immunoglobulin molecule. As an antibody expression vector, for example, SV40 virus based vector, EB virus based vector, BPV (papilloma virus) based vector and the like can be used, but not limited thereto.
上記のように作製した抗体の炎症性サイトカイン産生抑制活性は、当業者にとって周知の手段によって確認することができる。例えば、抗CD36抗体存在下で炎症性サイトカイン産生細胞を培養し、該細胞の炎症性サイトカイン産生量を炎症性サイトカインに対する抗体を用いたELISA法等で測定し、抗CD36抗体非存在の場合の産生量と比較すればよい。具体的には、実施例の方法を参考として、抗CD36抗体の抗炎症性サイトカイン産生促進能を確認することができる。 The inflammatory cytokine production inhibitory activity of the antibody prepared as described above can be confirmed by means well known to those skilled in the art. For example, culturing inflammatory cytokine-producing cells in the presence of an anti-CD36 antibody, measuring the amount of inflammatory cytokine production of the cells by ELISA using an antibody against the inflammatory cytokine, etc., production in the absence of anti-CD36 antibody Compare with quantity. Specifically, the ability of anti-CD36 antibody to promote anti-inflammatory cytokine production can be confirmed with reference to the method of Example.
また本発明者らによって、抗CD36抗体に抗炎症性サイトカイン産生促進能があることが初めて明らかになった。抗CD36抗体の抗炎症性サイトカイン産生促進能の確認も、上記炎症性サイトカイン産生抑制活性の確認と同様の方法で行うことができる。すなわち、抗CD36抗体存在下で抗炎症性サイトカイン産生細胞を培養し、該細胞の抗炎症性サイトカイン産生量を抗炎症性サイトカインに対する抗体を用いたELISA法等で測定し、抗CD36抗体非存在の場合の産生量と比較すればよい。具体的には、実施例の方法を参考として、抗CD36抗体の抗炎症性サイトカイン産生促進能を確認することができる。 The present inventors have also revealed for the first time that anti-CD36 antibodies have the ability to promote anti-inflammatory cytokine production. Confirmation of the anti-inflammatory cytokine production promoting ability of the anti-CD36 antibody can also be performed by the same method as the confirmation of the inflammatory cytokine production inhibitory activity. That is, anti-inflammatory cytokine-producing cells are cultured in the presence of anti-CD36 antibody, and the amount of anti-inflammatory cytokine production of the cells is measured by an ELISA method using an antibody against anti-inflammatory cytokine, and the absence of anti-CD36 antibody. What is necessary is just to compare with the production amount in the case. Specifically, the ability of anti-CD36 antibody to promote anti-inflammatory cytokine production can be confirmed with reference to the method of Example.
本発明の抗CD36抗体は、炎症性サイトカイン産生抑制効果または抗炎症性サイトカイン産生促進効果を利用して、炎症性疾患の治療薬の製造に使用することができる。本発明における炎症性疾患として、例えば、敗血症、全身性炎症反応症候群、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ様脊椎炎、変形性関節炎、痛風性関節炎、炎症性腸疾患、ギランバレー症候群、強皮症、繊維症、皮膚炎、乾癬、血管性浮腫、湿疹様皮膚炎、高増殖性皮膚疾患（hyperproliferative skin disease）、皮膚の炎症状態（inflammatory skin condition）、糸球体腎炎、腎炎、血管炎症、アテローム動脈硬化症、脈管炎、静脈炎、動脈炎、大動脈炎、PTCA後再狭窄、バイパス手術後再狭窄、移植拒絶反応（同種腎臓移植拒絶、同種心臓移植拒絶、これらに伴う脈管障害等）、アナフィラキシー、血栓症、虚血／再灌流傷害、自己免疫疾患を挙げることができるが、これらに限定されない。上記治療薬は、対象疾患の種類、炎症の発症部位、患者の年齢、症状等に応じ、適切な投与経路および剤形を選択し、公知製剤技術によって本発明の抗CD36抗体を製剤化して製造することができる。製剤化にあたっては、性状および品質を確保する等の目的に応じ、薬学的に許容されうる賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、懸濁化剤、乳化剤、溶解補助剤、等の適当な添加剤を適宜加えることができる。例えば、ポリソルベート80、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、無水クエン酸などと配合して注射剤として製剤化することができる。生理食塩水またはブドウ糖液注射液によって用時調製としてもよい。投与量は、疾患の種類、患者の年齢、体重等の要素に応じて調整することができる。例えば、静注の1回投与量として0.00001mg/ｋｇ〜10000mg/kgであるが、これに限られるものではない。 The anti-CD36 antibody of the present invention can be used for the manufacture of a therapeutic agent for inflammatory diseases by utilizing the effect of suppressing inflammatory cytokine production or the effect of promoting anti-inflammatory cytokine production. Examples of the inflammatory disease in the present invention include sepsis, systemic inflammatory response syndrome, rheumatoid arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis, gouty arthritis, inflammatory bowel disease, Guillain-Barre syndrome , Scleroderma, fibrosis, dermatitis, psoriasis, angioedema, eczema-like dermatitis, hyperproliferative skin disease, inflammatory skin condition, glomerulonephritis, nephritis, blood vessels Inflammation, atherosclerosis, vasculitis, phlebitis, arteritis, aortitis, restenosis after PTCA, restenosis after bypass surgery, transplant rejection (allogeneic kidney transplant rejection, allocardial transplant rejection, vascular associated with these Disorders), anaphylaxis, thrombosis, ischemia / reperfusion injury, and autoimmune diseases, but are not limited thereto. The above therapeutic agents are manufactured by selecting an appropriate administration route and dosage form according to the type of target disease, site of inflammation, patient age, symptoms, etc., and formulating the anti-CD36 antibody of the present invention by a known formulation technique can do. In formulation, depending on the purpose such as ensuring the properties and quality, pharmaceutically acceptable excipients, stabilizers, preservatives, buffering agents, suspending agents, emulsifiers, solubilizers, etc. Various additives can be added as appropriate. For example, it can be formulated as an injection by blending with polysorbate 80, sodium chloride, sodium citrate, anhydrous citric acid and the like. It may be prepared at the time of use with physiological saline or glucose solution. The dose can be adjusted according to factors such as the type of disease, the age of the patient, and the body weight. For example, a single intravenous dose is 0.00001 mg / kg to 10000 mg / kg, but is not limited thereto.
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
（１）抗体の調製
Open biosystemsより購入したCD36遺伝子（MHS1011-74914）をPCR法によって増幅し、得られたPCR産物を動物培養細胞発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen）にクローニングした（pcDNA-CD36）。pcDNA-CD36をリポフェクトアミン2000（Invitrogen）を用いてヒト培養細胞293Tに一過性に導入し、その結果得られたCD36発現細胞を抗原として、Balb/Cマウスに免疫した。免疫されたマウスのリンパ節から回収したリンパ球を、ミエローマP3U1と細胞融合させ、15% FCS(Equitech)、penicillin / streptomycin (Invitrogen) とHAT solution (Invitrogen)を含むRPMI培地（sigma）に播種し、10日後に各クローンの細胞上清をサンプリングした。フローサイトメトリーによりCD36発現株と反応する細胞上清を選択し、抗CD36抗体を産生するハイブリドーマを得た。得られたハイブリドーマについて、limiting dilution法を用いて単クローン化し、Isostrip kit (Roche)を用いてアイソタイプを決定した。Hybridoma SFM培地(GIBCO)で大量培養した後、protein A affinity chromatography (GE healthcare)を用いて精製した。
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not restrict | limited to these Examples.
(1) Preparation of antibody
The CD36 gene (MHS1011-74914) purchased from Open biosystems was amplified by PCR, and the resulting PCR product was cloned into an animal culture cell expression vector pcDNA3.1 (Invitrogen) (pcDNA-CD36). pcDNA-CD36 was transiently introduced into human cultured cells 293T using Lipofectamine 2000 (Invitrogen), and Balb / C mice were immunized using the resulting CD36-expressing cells as antigens. Lymphocytes recovered from lymph nodes of immunized mice are fused with myeloma P3U1 and seeded in RPMI medium (sigma) containing 15% FCS (Equitech), penicillin / streptomycin (Invitrogen) and HAT solution (Invitrogen). After 10 days, the cell supernatant of each clone was sampled. Cell supernatants that react with the CD36 expression strain were selected by flow cytometry, and hybridomas producing anti-CD36 antibodies were obtained. About the obtained hybridoma, it cloned by the limiting dilution method and isotype was determined using Isostrip kit (Roche). After mass culture in Hybridoma SFM medium (GIBCO), purification was performed using protein A affinity chromatography (GE healthcare).
（２）抗体の配列決定
抗CD36抗体産生ハイブリドーマから、RNeasy Mini kit(Qiagen)でtotal RNAを回収し、Ready-To-Go You-Prime First-Strand Beads(Qiagen)とオリゴdTプライマーを用いてcDNAを作製した。得られたハイブリドーマのcDNAをテンプレートとし、H鎖、L鎖のVariable regionのクローニング用プライマー（Biotechnology 1991 88-89参照）でVariable regionをクローニングし、配列を決定した。
(2) Sequencing of antibodies Total RNA was collected from anti-CD36 antibody-producing hybridomas using RNeasy Mini kit (Qiagen), and cDNA was prepared using Ready-To-Go You-Prime First-Strand Beads (Qiagen) and oligo dT primers. Was made. Using the obtained hybridoma cDNA as a template, the variable region was cloned with primers for cloning the variable regions of the H and L chains (see Biotechnology 1991 88-89), and the sequence was determined.
（３）抗CD36抗体による末梢血単核細胞(PBMC)のサイトカイン産生への影響
まず実験に用いるPBMCを調製した。健常人からヘパリン採血した血液を、RPMI培地（シグマR8340）で2倍に希釈したのち、HISTOPAQUE-1077（シグマ）に重層した。800gによる遠心を30分間行なった後、中間層（白血球画分）を取り出し、溶血用緩衝液（150mM NH4Cl, 1mM KHCO3, 0.1mM Na2EDTA,pH7.2-7.4）で氷上5分間処理し、赤血球を除いた画分をPBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cell）とした。
マウス抗ヒトCD36モノクローナル抗体（クローン1-3, 1-36, 2-6, 2-66, 4-62）によるPBMCのサイトカイン産生に与える影響を調べるため、96ウェルプレート上にて、2 x 105cells/wellのPBMCに対して100ng/mlのpolyI:C（ウイルス2本鎖RNA類似物）で刺激するとともに、1 μg/mlの抗CD36抗体あるいは抗CD61抗体（clone: #33、MBL）を添加した。対照として1 μg/mlのmouse Isotype control (IgG1 M075-3, IgG2a M076-3, IgG2b M077-3, MBLを混合したもの)、抗体添加なし(-)を用いた。上記マウス抗ヒトCD36モノクローナル抗体（クローン1-3, 1-36, 2-6, 2-66, 4-62）のアイソタイプは、クローン1-3および 1-36がIgG2b、クローン2-6および 2-66がIgG1、クローン4-62はIgG2aである。
培地は、10%血清（Equitech,USA）とStreptomycin/Penicillin (Gibco) を含むRPMI培地を使用した。37℃、5% CO2存在下で48時間培養した後、培養上清を回収し、各種サイトカインの量を市販のELISAキットを用いて測定した。測定キットは、IFNγ（IM-1743, MBL）、TNFα（IM-1121, MBL）、IL-1β（IM-3582、MBL）、IL-10（IM-1987, MBL）を用いた。
(3) Effect of anti-CD36 antibody on cytokine production of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) First, PBMC used in the experiment was prepared. The blood collected from heparin from a healthy person was diluted twice with RPMI medium (Sigma R8340) and then overlaid on HISTOPAQUE-1077 (Sigma). After centrifugation at 800 g for 30 minutes, the intermediate layer (leukocyte fraction) is taken out, and then on ice for 5 minutes with a hemolysis buffer (150 mM NH 4 Cl, 1 mM KHCO 3 , 0.1 mM Na 2 EDTA, pH 7.2-7.4) The fraction after treatment and removal of red blood cells was designated as PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Cell).
To examine the effect of mouse anti-human CD36 monoclonal antibody (clone 1-3, 1-36, 2-6, 2-66, 4-62) on cytokine production of PBMC, 2 x 10 cells on a 96-well plate Stimulate 5 cells / well of PBMC with 100 ng / ml polyI: C (virus double-stranded RNA analog) and 1 μg / ml anti-CD36 antibody or anti-CD61 antibody (clone: # 33, MBL) Was added. As controls, 1 μg / ml mouse Isotype control (mixture of IgG1 M075-3, IgG2a M076-3, IgG2b M077-3, MBL) and no antibody addition (-) were used. The mouse anti-human CD36 monoclonal antibodies (clone 1-3, 1-36, 2-6, 2-66, 4-62) have the following isotypes: clones 1-3 and 1-36 are IgG2b, clones 2-6 and 2 -66 is IgG1, and clone 4-62 is IgG2a.
As the medium, RPMI medium containing 10% serum (Equitech, USA) and Streptomycin / Penicillin (Gibco) was used. After culturing at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 for 48 hours, the culture supernatant was collected, and the amounts of various cytokines were measured using a commercially available ELISA kit. As the measurement kit, IFNγ (IM-1743, MBL), TNFα (IM-1121, MBL), IL-1β (IM-3582, MBL), and IL-10 (IM-1987, MBL) were used.
結果を図１に示す。今回使用した抗CD36抗体は5種類とも別クローンにも関わらず、炎症性サイトカインのIFNγの産生（図１a）を著しく抑制した。さらに他の炎症性サイトカインであるIL-1β（図１b）、そしてTNFα（図１c）の産生を抗CD36抗体は抑制することが判明した。
また、抗CD61抗体である#33は、炎症性サイトカインの産生を促進する一方で、抗炎症性サイトカインのIL-10の産生を促進することが知られている。抗CD36抗体によるPBMCからのIL-10産生に与える影響を調べたところ、#33同様にIL-10の産生を促進していることが明らかになった（図1d）。
一方、同じくCD61の周辺分子であるCD51に対する抗体について、抗炎症性効果を検討した。#33のアイソタイプがIｇG２aであることから、対照として、Iso2a:Isotype control IgG2aを使用した。抗CD51抗体（clone: AMF7, IMMUNOTECH）は、抗CD36抗体様の抗炎症性活性は認められなかった(図2-a, b, c,d)。
The results are shown in FIG. The anti-CD36 antibody used this time significantly suppressed the production of the inflammatory cytokine IFNγ (FIG. 1a), regardless of whether it was a different clone or not. Furthermore, it was found that anti-CD36 antibody suppresses the production of IL-1β (FIG. 1b), which is another inflammatory cytokine, and TNFα (FIG. 1c).
Also, # 33, an anti-CD61 antibody, is known to promote the production of IL-10, an anti-inflammatory cytokine, while promoting the production of inflammatory cytokines. Examination of the effect of anti-CD36 antibody on IL-10 production from PBMC revealed that IL-10 production was promoted as in # 33 (FIG. 1d).
On the other hand, the anti-inflammatory effect was examined for an antibody against CD51, which is also a peripheral molecule of CD61. Since
Claims (20)
（a）配列番号：１、配列番号：９、配列番号：１６、配列番号：２２、配列番号：３０のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
（b）配列番号：１、配列番号：９、配列番号：１６、配列番号：２２、配列番号：３０のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなる重鎖可変領域 An anti-CD36 antibody, wherein the heavy chain variable region is either (a) or (b) below.
(A) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 30, the heavy chain variable region comprising the amino acid sequence described in any of SEQ ID NO: 30 (b) SEQ ID NO: 1, sequence A heavy chain variable consisting of an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of No. 9, SEQ ID No: 16, SEQ ID No: 22, and SEQ ID No: 30 region
（a）配列番号：２、配列番号：１０、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３１のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
（b）配列番号：２、配列番号：１０、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３１のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域 An anti-CD36 antibody, wherein the light chain variable region is either (a) or (b) below.
(A) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 31 and the light chain variable region comprising the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 31 (b) SEQ ID NO: 2, sequence Light chain variable consisting of an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of No. 10, SEQ ID No: 17, SEQ ID No: 23, and SEQ ID No: 31 region
（a）配列番号：３、配列番号：１１、配列番号：２４、配列番号：３２のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR1
（b）配列番号：３、配列番号：１１、配列番号：２４、配列番号：３２のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR1 An anti-CD36 antibody, wherein the heavy chain CDR1 is either (a) or (b) below.
(A) CDR1 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32
(B) From an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24, and SEQ ID NO: 32 CDR1
（a）配列番号：４、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：２５、配列番号：３３のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR2
（b）配列番号：４、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：２５、配列番号：３３のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR2 An anti-CD36 antibody, wherein the heavy chain CDR2 is either (a) or (b) below.
(A) CDR2 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 33
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 33 CDR2 consisting of the inserted amino acid sequence
（a）配列番号：５、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：２６、配列番号：３４のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR3
（b）配列番号：５、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：２６、配列番号：３４のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR3 An anti-CD36 antibody, wherein the heavy chain CDR3 is either (a) or (b) below.
(A) CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 34
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 26, and SEQ ID NO: 34 CDR3 consisting of the inserted amino acid sequence
（a）配列番号：６、配列番号：２０、配列番号：２７、配列番号：３５のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR1
（b）配列番号：６、配列番号：２０、配列番号：２７、配列番号：３５のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR1 An anti-CD36 antibody, wherein the light chain CDR1 is either (a) or (b) below.
(A) CDR1 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 35
(B) From an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, and SEQ ID NO: 35 CDR1
（a）配列番号：７、配列番号：１４、配列番号：２８のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR2
（b）配列番号：７、配列番号：１４、配列番号：２８のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR2 An anti-CD36 antibody, wherein the light chain CDR2 is either (a) or (b) below.
(A) CDR2 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 14, and SEQ ID NO: 28
(B) CDR2 comprising an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, deleted, added or inserted into the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 14, or SEQ ID NO: 28
（a）配列番号：８、配列番号：１５、配列番号：２１、配列番号：２９、配列番号：３６のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むCDR3
（b）配列番号：８、配列番号：１５、配列番号：２１、配列番号：２９、配列番号：３６のいずれかに記載のアミノ酸配列に、１または複数のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入したアミノ酸配列からなるCDR3 An anti-CD36 antibody, wherein the light chain CDR3 is either (a) or (b) below.
(A) CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 36
(B) One or more amino acids are substituted, deleted, added or added to the amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 29, and SEQ ID NO: 36 CDR3 consisting of the inserted amino acid sequence
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