JP2010210378A - Sensing method and sensing kit to be used of the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、散乱体によるエバネッセント光の散乱光を検出し、被検出物質の量を検出するセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットに関する。 The present invention relates to a sensing method for detecting scattered light of evanescent light by a scatterer and detecting the amount of a substance to be detected, and a sensing kit used therefor.
従来、タンパク質やＤＮＡ等を検出するバイオ測定において、全反射照明を利用したセンシング方法が注目されている。このセンシング方法は、屈折率の異なる界面で測定光が全反射する際に界面からしみ出す光、すなわちエバネッセント光と、試料中に含まれる被検出物質あるいはこの被検出物質に付けられている標識との散乱、吸収、発光等の光学的な相互作用を分析ことにより、上記被検出物質の存在またはその量を検出する方法である。 Conventionally, a sensing method using total reflection illumination has attracted attention in bioassay for detecting proteins, DNA, and the like. This sensing method uses light that oozes out from the interface when the measurement light is totally reflected at the interface with different refractive indices, that is, evanescent light, and a detected substance contained in the sample or a label attached to the detected substance. In this method, the presence or amount of the substance to be detected is detected by analyzing optical interactions such as scattering, absorption, and light emission.
このようなセンシング方法の一例としては、蛍光性標識を用いた蛍光検出法がある。
蛍光検出法は、冷却ＣＣＤ等光検出器の高性能化と相まって、バイオ研究には欠かせない道具となっている。また、蛍光性標識に用いる材料においても、特に可視領域では蛍光量子収率の高い蛍光色素、例えばＦＩＴＣ（蛍光：５２５ｎｍ、蛍光量子収率：０．６）やＣｙ５（蛍光：６８０ｎｍ、蛍光量子収率：０．３）のような実用の目安となる０．２を超える蛍光色素が開発され広く用いられている。さらに、表面プラズモンによる電場の増強を用いて、蛍光信号を増大することにより、１ｐＭ（ピコモーラ）を切るような高感度検出も実現されている。
An example of such a sensing method is a fluorescence detection method using a fluorescent label.
The fluorescence detection method has become an indispensable tool for bio research, coupled with the enhancement of the performance of photodetectors such as cooled CCDs. Also in materials used for fluorescent labels, fluorescent dyes with high fluorescence quantum yield, particularly in the visible region, such as FITC (fluorescence: 525 nm, fluorescence quantum yield: 0.6) and Cy5 (fluorescence: 680 nm, fluorescence quantum yield). A fluorescent dye exceeding 0.2 which is a practical standard such as a rate of 0.3) has been developed and widely used. Furthermore, high-sensitivity detection that cuts 1 pM (picomolar) has been realized by increasing the fluorescence signal by using the enhancement of the electric field by surface plasmons.
しかしながら、蛍光色素は、光を吸収及び発光する性質上、化学構造的に弱いπ結合を有するため、強度の強い光による不可逆的破壊や雰囲気中の酸素やオゾンとの化学反応により変質してしまうという問題がある。これにより、蛍光色素全体から発せられる総蛍光量が経時的に減少する、いわゆる褪色を招いてしまうため、測定光の強度を一定以上あげることが出来ず、高感度化に限界がある。 However, fluorescent dyes have a weak π bond in terms of chemical structure due to the property of absorbing and emitting light, so they are altered by irreversible destruction by strong light and chemical reactions with oxygen and ozone in the atmosphere. There is a problem. This causes a so-called discoloration in which the total amount of fluorescence emitted from the entire fluorescent dye decreases over time, so that the intensity of measurement light cannot be increased beyond a certain level, and there is a limit to increasing sensitivity.
そこで、全反射照明を利用したセンシング方法の別の例として、特許文献１および特許文献２に示すような散乱性標識を用いた散乱光検出法が挙げられる。 Therefore, another example of a sensing method using total reflection illumination is a scattered light detection method using a scattering label as shown in Patent Document 1 and Patent Document 2.
散乱光検出法は、金属微粒子等の散乱性標識によるエバネッセント光の散乱を利用しており、検出した散乱光の波長や強度に基づいて被検出物質の量を検出している。このような散乱光検出法は、上記のような褪色の問題が存在せず、さらに蛍光色素を用いた一般的な蛍光検出法よりも得られる検出光量が大きいため、より高い検出感度が要求されるような場合に用いる方法として利用されている。 The scattered light detection method uses scattering of evanescent light by a scattering label such as metal fine particles, and detects the amount of a substance to be detected based on the wavelength and intensity of the detected scattered light. Such a scattered light detection method does not have the above-mentioned problem of fading, and further, since the amount of detected light obtained is larger than that of a general fluorescence detection method using a fluorescent dye, higher detection sensitivity is required. It is used as a method used in such cases.
しかしながら、上記のような散乱光検出方法において、試料中に含まれる或いは透明担体上に存在する夾雑物により生じるエバネッセント光のノイズ的な散乱光が問題となっている。これは、ノイズ的な散乱光が、本来検出対象としている散乱性標識による散乱光に対するバックグラウンドを上昇させてしまうために、Ｓ／Ｎ比が低下し散乱光検出の定量性を失わせるためである。 However, in the scattered light detection method as described above, there is a problem of noise-like scattered light of evanescent light generated by impurities contained in the sample or present on the transparent carrier. This is because the noise-like scattered light increases the background against the scattered light by the scattering label that is originally a detection target, so that the S / N ratio is lowered and the quantification of scattered light detection is lost. is there.
本発明は上記問題に鑑みてなされたものであり、Ｓ／Ｎ比を向上させ、より高い定量性を備えたセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットの提供を目的とするものである。 The present invention has been made in view of the above problems, and an object of the present invention is to provide a sensing method with improved S / N ratio and higher quantitativeness, and a sensing kit used therefor.
上記課題を解決するために、本願発明者は、透明担体の表面上の屈折率を空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）よりも大きくすると、ある範囲の屈折率ではセンシングにおけるＳ／Ｎ比を向上させることが可能であることを見出し、本発明に至った。 In order to solve the above-mentioned problem, the inventor of the present application has a refractive index within a certain range when the refractive index on the surface of the transparent carrier is larger than air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33). The inventors have found that it is possible to improve the S / N ratio in sensing, and have reached the present invention.
すなわち、本発明に係るセンシング方法は、
被検出物質の量を検出するセンシング方法であって、
散乱体を含む標識複合体を形成するための第１のキャプチャ物質が固定された、透明担体表面上のセンサ部に、被検出物質を含み得る試料を供給し、
被検出物質の量に応じた量の標識複合体をセンサ部に形成せしめ、
透明担体の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、
透明担体に測定光を照射してセンサ部にエバネッセント光を生じせしめ、
散乱体によるエバネッセント光の散乱光を検出することを特徴とするものである。
That is, the sensing method according to the present invention is:
A sensing method for detecting the amount of a substance to be detected,
Supplying a sample capable of containing a substance to be detected to a sensor unit on the surface of a transparent carrier, to which a first capture substance for forming a labeled complex containing a scatterer is fixed,
An amount of labeled complex corresponding to the amount of the substance to be detected is formed on the sensor part,
Adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor part of the transparent carrier to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier;
Irradiate the transparent carrier with measurement light to generate evanescent light in the sensor unit,
It is characterized by detecting the scattered light of the evanescent light by the scatterer.
ここで、「被検出物質の量を検出する」とは、被検出物質の存在の有無の検出を含み、定性的な量のみならず、定量的な量、または活性の程度を検出することも意味するものとする。 Here, “detecting the amount of a substance to be detected” includes detection of the presence or absence of the substance to be detected, and not only a qualitative amount but also a quantitative amount or degree of activity can be detected. Shall mean.
散乱体を含む「標識複合体」とは、標識としての散乱体と第1のキャプチャ物質とを含み、センサ部上に被検出物質の量に応じた量だけ形成される集合体を意味するものとする。すなわち、例えばサンドイッチ法によるアッセイを行う場合には、標識複合体は、語述するように第１のキャプチャ物質−被検出物質−第２のキャプチャ物質のサンドイッチ構造を有する集合体を意味する。一方、競合法によるアッセイを行う場合には、標識キャプチャ物質は、標識複合体は、語述するように第１のキャプチャ物質−第３のキャプチャ物質という構造を有する集合体を意味する。 “Label complex” including a scatterer means an aggregate that includes a scatterer as a label and a first capture substance, and is formed on the sensor unit in an amount corresponding to the amount of the substance to be detected. And That is, for example, when an assay by the sandwich method is performed, the labeled complex means an assembly having a sandwich structure of a first capture substance-a substance to be detected-a second capture substance as described. On the other hand, in the case of performing an assay by a competitive method, the labeled capture substance means an aggregate having a structure of a first capture substance-third capture substance, as the label complex is described.
「キャプチャ物質」とは、ある特定の対象物質と特異的に結合する物質を意味するものとする。例えば、特定の対象物質として抗原を考える場合には、キャプチャ物質としてこの抗原と特異的に結合する抗体が挙げられる。そして、上記の場合において、抗原と競合して上記抗体と特異的に結合する別の抗体もキャプチャ物質である。 The “capture substance” means a substance that specifically binds to a specific target substance. For example, when an antigen is considered as a specific target substance, an antibody that specifically binds to the antigen can be used as a capture substance. In the above case, another antibody that competes with the antigen and specifically binds to the antibody is also a capture substance.
「センサ部」とは、透明担体表面上の第1のキャプチャ物質が固定されている領域を意味するものとする。 The “sensor part” means a region where the first capture substance on the surface of the transparent carrier is fixed.
「被検出物質の量に応じた量」の標識複合体とは、試料中に含まれる被検出物質の量に相関する量の標識複合体を意味するものとする。これにより、散乱体からの散乱光量から被検出物質の量を推量する。 The label complex of “amount corresponding to the amount of the substance to be detected” means an amount of the label complex that correlates with the amount of the substance to be detected contained in the sample. Thereby, the amount of the substance to be detected is estimated from the amount of scattered light from the scatterer.
さらに、本発明に係るセンシング方法において、屈折率を１．３８以上かつ１．５１以下となるように調整することが好ましく、１．４２以上かつ１．４９以下となるように調整することがより好ましい。 Further, in the sensing method according to the present invention, the refractive index is preferably adjusted to be 1.38 or more and 1.51 or less, and more preferably adjusted to be 1.42 or more and 1.49 or less. preferable.
そして、屈折率を調整するための調整液で透明担体の表面を満たし、調整液の屈折率をもってこの表面の屈折率を調整することが好ましい。この場合、調整液は、水と混ざり合う有機溶媒、または屈折率の高い溶質の水溶液であることが好ましい。或いは、屈折率を調整するための粘着性物質またはゴム性物質を透明担体の表面に接触させ、粘着性物質またはゴム性物質の屈折率をもってこの表面の屈折率を調整することが好ましい。 And it is preferable to fill the surface of the transparent carrier with an adjustment liquid for adjusting the refractive index, and adjust the refractive index of this surface with the refractive index of the adjustment liquid. In this case, the adjustment liquid is preferably an organic solvent mixed with water or an aqueous solution of a solute having a high refractive index. Alternatively, it is preferable that an adhesive substance or a rubbery substance for adjusting the refractive index is brought into contact with the surface of the transparent carrier, and the refractive index of this surface is adjusted with the refractive index of the adhesive substance or the rubbery substance.
また、第２のキャプチャ物質が、被検出物質と特異的に結合するものであり、第２のキャプチャ物質と第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなる標識キャプチャ物質を、第１のキャプチャ物質に結合した被検出物質に特異的に結合させることにより、標識複合体を形成することが好ましい。或いは、第３のキャプチャ物質が、被検出物質と競合して第１のキャプチャ物質と特異的に結合するものであり、第３のキャプチャ物質と第３のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなる標識キャプチャ物質を、第１のキャプチャ物質に特異的に結合させることにより、標識複合体を形成することが好ましい。 In addition, the second capture substance specifically binds to the substance to be detected, and a labeled capture substance composed of the second capture substance and a scatterer modified with the second capture substance is used as the first capture substance. It is preferable to form a labeled complex by specifically binding to a substance to be detected bound to a capture substance. Alternatively, the third capture substance competes with the substance to be detected and specifically binds to the first capture substance, and the third capture substance and the scatterer in which the third capture substance is modified are used. It is preferable to form a labeled complex by specifically binding a labeled capture substance to the first capture substance.
ここで、「標識キャプチャ物質」とは、センサ部上に固定され被検出物質と特異的に結合する第１のキャプチャ物質を介して、被検出物質の量に応じた量だけセンサ部上に結合する、散乱体によって標識されたキャプチャ物質を意味するものとする。すなわち、例えばサンドイッチ法によるアッセイを行う場合には、標識キャプチャ物質は、被検出物質と特異的に結合する第２のキャプチャ物質と、この第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とから構成される。これにより、第１のキャプチャ物質−被検出物質−第２のキャプチャ物質のサンドイッチ構造が作られ、標識キャプチャ物質がセンサ部上に結合する。ここで、被検出物質の第１のキャプチャ物質に対する結合部位と第２のキャプチャ物質に対する結合部位とは異なる。一方、競合法によるアッセイを行う場合には、標識キャプチャ物質は、被検出物質と競合して上記第１のキャプチャ物質と特異的に結合する第３のキャプチャ物質と、この第３のキャプチャ物質に修飾された散乱体とから構成される。これにより、第１のキャプチャ物質−第３のキャプチャ物質の結合が作られ、標識キャプチャ物質がセンサ部上に結合する。 Here, the “label capture substance” is bound on the sensor unit by an amount corresponding to the amount of the detected substance via the first capture substance that is fixed on the sensor unit and specifically binds to the detected substance. It is intended to mean a capture substance labeled with a scatterer. That is, for example, when an assay by the sandwich method is performed, the labeled capture substance is composed of a second capture substance that specifically binds to the substance to be detected and a scatterer in which the second capture substance is modified. The As a result, a sandwich structure of the first capture substance-the substance to be detected-the second capture substance is created, and the labeled capture substance is bound on the sensor unit. Here, the binding site for the first capture substance of the substance to be detected is different from the binding site for the second capture substance. On the other hand, in the case of performing the assay by the competitive method, the labeled capture substance competes with the substance to be detected and binds to the third capture substance that specifically binds to the first capture substance, and the third capture substance. And a modified scatterer. Thereby, the coupling | bonding of the 1st capture substance-third capture substance is made, and the label | marker capture substance couple | bonds on a sensor part.
そして、散乱体は、金属性、金属酸化物性、金属窒化物性の微粒子であることが好ましく、この場合微粒子の粒径は、３０ｎｍ以上３００ｎｍ以下であることが好ましい。 The scatterer is preferably fine particles of metal, metal oxide, or metal nitride. In this case, the particle size of the fine particles is preferably 30 nm to 300 nm.
ここで、微粒子の「粒径」とは、その分散液中、通常は水溶液中において独立して動く固体の直径を指し、単粒子で分散している場合はその粒子の直径、複数の粒子が凝集した状態で安定に分散している場合はその凝集塊の直径を指す。粒径は例えば動的光散乱法で測定することができる。動的光散乱によって粒子の水中粒径を測定する方法としては、具体的には大塚電子製のDLS-8000シリーズ、DLS-6500シリーズ、FPAR-1000、Malvern製ゼータサイザーナノシリーズ、Beckman Coulter製Delsa Nano Sなどの装置を用い、各装置の取扱説明書に従って測定することができる。また、微粒子がロッド形状の場合、粒径は短軸の長さを指す。 Here, the “particle size” of the fine particles refers to the diameter of a solid that moves independently in the dispersion liquid, usually in an aqueous solution. When stably dispersed in an aggregated state, the diameter of the aggregate is indicated. The particle size can be measured by, for example, a dynamic light scattering method. Specific methods for measuring particle size in water by dynamic light scattering include: Otsuka Electronics DLS-8000 series, DLS-6500 series, FPAR-1000, Malvern Zetasizer Nano series, Beckman Coulter Delsa Using a device such as Nano S, measurement can be performed according to the instruction manual of each device. When the fine particles are rod-shaped, the particle size indicates the length of the minor axis.
さらに、本発明に係るセンシングキットは、
試料を注入するための注入口と、注入口から注入された試料を流すための流路と、試料が流れるように空気を抜くための空気口と、散乱体を含む標識複合体を形成するための第１のキャプチャ物質が固定された、流路表面上のセンサ部とを有する透明担体チップ、および
流路の表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満である調整液を備え、
被検出物質を含み得る試料をセンサ部に供給し、被検出物質の量に応じた量の標識複合体をセンサ部に形成せしめ、透明担体チップに測定光を照射してセンサ部にエバネッセント光を生じせしめ、散乱体によるエバネッセント光の散乱光を検出し、被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられることを特徴とするものである。
Furthermore, the sensing kit according to the present invention is:
In order to form an inlet for injecting a sample, a flow path for flowing the sample injected from the inlet, an air port for extracting air so that the sample flows, and a labeled complex including a scatterer And a transparent carrier chip having a sensor part on the surface of the flow path to which the first capture substance is fixed, and a transparent carrier having a refractive index of 1.35 or more for adjusting the refractive index on the surface of the flow path With adjustment liquid that is less than the refractive index of the chip,
A sample that can contain a substance to be detected is supplied to the sensor unit, a labeling complex of an amount corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light to emit evanescent light to the sensor unit. It is characterized in that it is used in a sensing method for detecting the amount of a substance to be detected by detecting scattered light of evanescent light caused by a scatterer.
或いは、本発明に係るセンシングキットは、
散乱体を含む標識複合体を形成するための第１のキャプチャ物質が固定されたセンサ部を有する透明担体チップ、および
透明担体チップの表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満である調整液を備え、
被検出物質を含み得る試料をセンサ部に供給し、被検出物質の量に応じた量の標識複合体をセンサ部に形成せしめ、透明担体チップに測定光を照射してセンサ部にエバネッセント光を生じせしめ、散乱体によるエバネッセント光の散乱光を検出し、被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられるものであることを特徴とするものである。
Alternatively, the sensing kit according to the present invention is:
A transparent carrier chip having a sensor portion on which a first capture substance for forming a labeling complex including a scatterer is fixed, and a refractive index of 1. to adjust the refractive index on the surface of the transparent carrier chip. Comprising an adjustment liquid that is 35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip;
A sample that can contain a substance to be detected is supplied to the sensor unit, a labeling complex of an amount corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light to emit evanescent light to the sensor unit. It is characterized in that it is used in a sensing method for detecting the amount of a substance to be detected by detecting the scattered light of evanescent light caused by a scatterer.
或いは、本発明に係るセンシングキットは、
散乱体を含む標識複合体を形成するための第１のキャプチャ物質が固定されたセンサ部を有する透明担体チップ、および
透明担体チップの表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満である粘着性物質またはゴム性物質を備え、
被検出物質を含み得る試料をセンサ部に供給し、被検出物質の量に応じた量の標識複合体をセンサ部に形成せしめ、透明担体チップに測定光を照射してセンサ部にエバネッセント光を生じせしめ、散乱体によるエバネッセント光の散乱光を検出し、被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられることを特徴とするものである。
Alternatively, the sensing kit according to the present invention is:
A transparent carrier chip having a sensor portion on which a first capture substance for forming a labeling complex including a scatterer is fixed, and a refractive index of 1. to adjust the refractive index on the surface of the transparent carrier chip. Comprising an adhesive substance or a rubbery substance that is 35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip,
A sample that can contain a substance to be detected is supplied to the sensor unit, a labeling complex of an amount corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light to emit evanescent light to the sensor unit. It is characterized in that it is used in a sensing method for detecting the amount of a substance to be detected by detecting scattered light of evanescent light caused by a scatterer.
そして、本発明に係るセンシングキットにおいて、
被検出物質と特異的に結合する第２のキャプチャ物質と、第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなる標識キャプチャ物質を備えることが好ましい。或いは、被検出物質と競合して第１のキャプチャ物質と特異的に結合する第３のキャプチャ物質と、第３のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなる標識キャプチャ物質を備えることが好ましい。
And in the sensing kit according to the present invention,
It is preferable to provide a labeled capture substance comprising a second capture substance that specifically binds to the substance to be detected and a scatterer in which the second capture substance is modified. Alternatively, it is preferable to include a labeled capture substance composed of a third capture substance that specifically binds to the first capture substance in competition with the substance to be detected and a scatterer in which the third capture substance is modified.
本発明に係るセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットは、透明担体又は流路の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出している。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。本願発明者は、透明担体の表面上の屈折率を空気や水よりも大きくするとある範囲の屈折率では、検出対象とする散乱光が増加しノイズ的な散乱光が減少するという現象を見出した。したがって、透明担体の表面上の屈折率を空気や水よりも大きくすることにより、Ｓ／Ｎ比を従来法に比して向上させることが可能となる。これにより、本発明に係るセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットによって、より高い定量性を備えたセンシングを行うことが可能となる。 The sensing method according to the present invention and the sensing kit used therefor adjust the refractive index on the surface including at least the sensor part of the transparent carrier or flow path to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier. , Detecting scattered light. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. The inventor of the present application has found a phenomenon that when the refractive index on the surface of the transparent carrier is larger than that of air or water, the scattered light to be detected increases and the noise-like scattered light decreases at a certain range of refractive index. . Therefore, the S / N ratio can be improved as compared with the conventional method by making the refractive index on the surface of the transparent carrier larger than that of air or water. Thereby, it is possible to perform sensing with higher quantitativeness by the sensing method according to the present invention and the sensing kit used therein.
以下、本発明の実施形態について図面を用いて説明するが、本発明はこれに限られるものではない。 Hereinafter, although an embodiment of the present invention is described using a drawing, the present invention is not limited to this.
「センシング方法」
＜センシング方法の第１の実施形態＞
まず、本実施形態に係るセンシング方法について説明する。このセンシング方法は、サンドイッチ形式のセンシング方法である。図１は、本実施形態に係るセンシング方法の工程の一部を示す概略図である。
"Sensing method"
<First Embodiment of Sensing Method>
First, the sensing method according to the present embodiment will be described. This sensing method is a sandwich type sensing method. FIG. 1 is a schematic diagram illustrating a part of the steps of the sensing method according to the present embodiment.
図１Ａおよび図１Ｂに示すように、センシング方法は、透明担体上の所定領域に被検出物質と特異的に結合する第１のキャプチャ物質を固定してセンサ部を形成し（Ｓｔｅｐ１ａ）、被検出物質を含みうる試料をセンサ部に供給し（Ｓｔｅｐ１ｂ）、被検出物質を第１のキャプチャ物質に結合せしめた後センサ部上を洗浄し（Ｓｔｅｐ１ｃ）、次いで被検出物質と特異的に結合する標識キャプチャ物質をセンサ部上に供給し（Ｓｔｅｐ１ｄ）、標識キャプチャ物質を第１のキャプチャ物質に結合した被検出物質に結合せしめた後センサ部上を洗浄し（Ｓｔｅｐ１ｅ）、そして、センサ部上にギャップカバーグラス１２を乗せてその隙間に屈折率調整用の調整液を注入し（Ｓｔｅｐ１ｆ）、その後散乱光測定を行うものである。ここで、標識キャプチャ物質は、被検出物質と特異的に結合する第２のキャプチャ物質と、第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなる。また、別法としてＳｔｅｐ１ｃを行わずにＳｔｅｐ１ｂとＳｔｅｐ１ｄを同時に行う方法、つまり被検出物質を含み得る試料と標識キャプチャ物質を予め混合してからセンサ部上に供給する方法も挙げられる。 As shown in FIGS. 1A and 1B, the sensing method fixes a first capture substance that specifically binds to a target substance to a predetermined region on a transparent carrier to form a sensor unit (Step 1a), and detects the target. A sample that can contain a substance is supplied to the sensor unit (Step 1b). After the substance to be detected is bound to the first capture substance, the sensor part is washed (Step 1c), and then a label that specifically binds to the substance to be detected. The capture substance is supplied onto the sensor part (Step 1d), the label capture substance is bound to the detection substance bound to the first capture substance, and then the sensor part is washed (Step 1e), and a gap is formed on the sensor part. A cover glass 12 is placed and an adjustment liquid for adjusting the refractive index is injected into the gap (Step 1f), and then the scattered light is measured. Here, the label capture substance is composed of a second capture substance that specifically binds to the substance to be detected and a scatterer in which the second capture substance is modified. Another method is to perform Step 1b and Step 1d at the same time without performing Step 1c, that is, a method in which a sample that can contain a substance to be detected and a label capture substance are mixed in advance and then supplied onto the sensor unit.
透明担体１０は、その一表面の所定領域にセンサ部が形成されたものである。透明担体１０は、例えば透明樹脂やガラス等の透明材料から形成されたものである。樹脂製基板を用いた場合には、基板が安価であるという利点があり、ガラス製基板を用いた場合には、不純物や表面凹凸による散乱（この散乱は検出信号に対するノイズとなる）が小さいという利点があるため、用途および検出条件に合わせ適宜選択することが望ましい。このような透明担体においては、透明担体の屈折率はおおむね１．５〜１．６となる。透明担体１０を形成する樹脂の材料としては、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、シクロオレフィンを含む非晶性ポリオレフィン（ＡＰＯ）等が好ましい。透明担体は、散乱光測定において全反射照明についての導波路となる。ここで「導波路」とは、光が多重点で内部全反射し、全表面又はほぼ全表面に実質的に均質なエバネッセント光を形成するような二次元内部全反射素子を意味するものとする。二次元導波路の構造は平面状でも曲面状でもよい。 The transparent carrier 10 has a sensor portion formed in a predetermined region on one surface thereof. The transparent carrier 10 is made of a transparent material such as transparent resin or glass. When a resin substrate is used, there is an advantage that the substrate is inexpensive, and when a glass substrate is used, scattering due to impurities and surface irregularities (this scattering becomes noise for the detection signal) is small. Since there is an advantage, it is desirable to select appropriately according to the application and detection conditions. In such a transparent carrier, the refractive index of the transparent carrier is approximately 1.5 to 1.6. As the resin material forming the transparent carrier 10, polymethyl methacrylate (PMMA), polycarbonate (PC), amorphous polyolefin (APO) containing cycloolefin, and the like are preferable. The transparent carrier becomes a waveguide for total reflection illumination in the scattered light measurement. Here, the “waveguide” means a two-dimensional total internal reflection element in which light is totally internally reflected at multiple points and forms substantially uniform evanescent light on the entire surface or almost the entire surface. . The structure of the two-dimensional waveguide may be planar or curved.
センサ部は、透明担体表面上の第１のキャプチャ物質が固定されている領域である。センサ部は、１つであっても複数であっても構わない。センサ部が複数ある場合には、複数の被検出物質を検出することができるため、いわゆる多項目アレイ検出が可能となる。センサ部が複数ある場合は、それらのセンサ部は、非センサ部（すなわち、第１のキャプチャ物質が固定されていない領域）によって、分離されていることが好ましい。また、センサ部の２次元形状は、棒状、円形状等特に限定されるものではない。 The sensor unit is a region where the first capture substance on the transparent carrier surface is fixed. There may be one sensor unit or a plurality of sensor units. When there are a plurality of sensor units, a plurality of substances to be detected can be detected, and so-called multi-item array detection is possible. When there are a plurality of sensor units, it is preferable that the sensor units are separated by a non-sensor unit (that is, a region where the first capture substance is not fixed). Further, the two-dimensional shape of the sensor unit is not particularly limited, such as a rod shape or a circular shape.
第１のキャプチャ物質は、被検出物質に対して特異的に結合するキャプチャ物質である。このようなキャプチャ物質は、特に制限されるものではなく、検出条件（特に被検出物質２）に応じて適宜選択することができる。例えば被検出物質が抗原である場合は、このようなキャプチャ物質としてそれに対する抗体が挙げられる。例えば、抗原がｈＣＧ抗原（分子量３８０００ Ｄａ）の場合、この抗原と特異的に結合するモノクロナール抗体等を用いることができる。固定化方法としては、透明担体に対して物理的に吸着させる方法、透明担体に表面修飾を施すことによってカルボキシル基、アミノ基、チオール基、などの官能基を導入し、そこに静電的にまたは化学結合を介して固定化する方法、キャプチャ分子に結合する構造を予め導入して固定化する方法などが挙げられる。化学結合の方法として例えば、透明担体をカルボキシル基化し、更に活性化させることによって第１のキャプチャ物質のアミノ基と結合させる、所謂アミンカップリング法を用いることができる。また、第１のキャプチャ物質と表面担体の間にリンカーやゲルなどの層を介する方法も挙げられる。 The first capture substance is a capture substance that specifically binds to the substance to be detected. Such a capture substance is not particularly limited, and can be appropriately selected according to detection conditions (particularly the substance to be detected 2). For example, when the substance to be detected is an antigen, examples of such a capture substance include an antibody against it. For example, when the antigen is an hCG antigen (molecular weight 38000 Da), a monoclonal antibody that specifically binds to the antigen can be used. As the immobilization method, a method of physically adsorbing to a transparent carrier, a functional group such as a carboxyl group, an amino group, a thiol group, etc. is introduced by applying surface modification to the transparent carrier, and electrostatically there Alternatively, a method of immobilizing via a chemical bond, a method of preliminarily introducing a structure that binds to a capture molecule and the like can be mentioned. As a chemical bonding method, for example, a so-called amine coupling method in which the transparent carrier is carboxylated and further activated to bond with the amino group of the first capture substance can be used. In addition, a method in which a layer such as a linker or a gel is interposed between the first capture substance and the surface carrier is also exemplified.
標識キャプチャ物質は、被検出物質Ａの量に応じた量だけセンサ部１４上に結合する、散乱体により標識されたキャプチャ物質である。標識キャプチャ物質は、図１に示すように、サンドイッチ法によるアッセイを行う場合には、被検出物質Ａと特異的に結合するキャプチャ物質と散乱体とから構成されるものである。また、標識キャプチャ物質は、後記する競合法によるアッセイを行う場合には、被検出物質と競合するキャプチャ物質と散乱体とから構成されるものである。より具体的には、透明担体１０としてセンサ部１４に被検出物質Ａと特異的に結合する第１のキャプチャ物質Ｂ１が固定されてなるものを用いた場合、サンドイッチ法における標識キャプチャ物質ＢＦは、被検出物質Ａと特異的に結合する第２のキャプチャ物質Ｂ２と、この第２のキャプチャ物質Ｂ２が修飾された散乱体とからなるものである。一方同様の場合、競合法における標識キャプチャ物質は、被検出物質と競合して第１のキャプチャ物質と特異的に結合する第３のキャプチャ物質と、この第３のキャプチャ物質が修飾された散乱体とからなるものである。被検出物質Ａが抗原である場合、第１、第２のキャプチャ物質として抗体を用いればよい。 The labeled capture substance is a capture substance labeled with a scatterer that binds on the sensor unit 14 by an amount corresponding to the amount of the substance A to be detected. As shown in FIG. 1, the labeled capture substance comprises a capture substance that specifically binds to the substance A to be detected and a scatterer when assaying by the sandwich method. Further, the labeled capture substance is composed of a capture substance and a scatterer that compete with the substance to be detected when assaying by the competition method described later is performed. More specifically, when the transparent carrier 10 is used in which the first capture substance B1 that specifically binds to the substance A to be detected is fixed to the sensor unit 14, the label capture substance BF in the sandwich method is: It consists of a second capture substance B2 that specifically binds to the substance A to be detected and a scatterer in which the second capture substance B2 is modified. On the other hand, in the same case, the labeled capture substance in the competition method includes a third capture substance that specifically binds to the first capture substance in competition with the substance to be detected, and a scatterer in which the third capture substance is modified. It consists of When the substance to be detected A is an antigen, an antibody may be used as the first and second capture substances.
散乱体Ｆは、特に制限なく検出条件によって適宜選択されるが、散乱性および直径制御の観点から、金属微粒子、金属酸化物微粒子または金属窒化物微粒子であることが好ましい。さらに金属微粒子については、Ａｕ、Ａｇ、Ｃｕ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ｃｏ、Ｆｅ、Ｎｉからなる群より選択される少なくとも１種以上の金属にて構成される金属微粒子であることがより好ましい。また、金属酸化物微粒子または金属窒化物微粒子の材料の例としては、シリカ、アルミナ、チタニア、ジルコニア、ゼオライト、酸化亜鉛、酸化イットリウム、酸化セリウム、酸化錫、酸化鉄、窒化ケイ素、窒化アルミニウム、窒化チタン、窒化クロムおよび窒化鉄等を挙げることができる。ここで、微粒子の粒径は、散乱強度の観点から、３０ｎｍ以上、より好ましくは５０ｎｍが良く、単位面積当たりの散乱体の最大結合量の観点、引いてはダイナミックレンジの観点から３００ｎｍ以下、より好ましくは２００ｎｍ以下であることが好ましい。 The scatterer F is appropriately selected according to detection conditions without particular limitation, but is preferably metal fine particles, metal oxide fine particles, or metal nitride fine particles from the viewpoint of scattering properties and diameter control. Further, the metal fine particles are metal fine particles composed of at least one metal selected from the group consisting of Au, Ag, Cu, Pt, Pd, Rh, Ru, Co, Fe, and Ni. preferable. Examples of the metal oxide fine particles or metal nitride fine particles include silica, alumina, titania, zirconia, zeolite, zinc oxide, yttrium oxide, cerium oxide, tin oxide, iron oxide, silicon nitride, aluminum nitride, and nitride. Examples thereof include titanium, chromium nitride, and iron nitride. Here, the particle diameter of the fine particles is preferably 30 nm or more, more preferably 50 nm from the viewpoint of scattering intensity, and from the viewpoint of the maximum amount of binding of the scatterer per unit area, in turn from the viewpoint of dynamic range, 300 nm or less, more Preferably it is 200 nm or less.
第２のキャプチャ物質は、被検出物質に対して特異的に結合するキャプチャ物質であって、散乱体を修飾しているキャプチャ物質である。ここで、第１および第２のキャプチャ物質は、被検出物質のそれぞれ異なる結合部位（抗体の場合にはエピトープ）に結合する。これにより、本実施形態に係るセンシング方法は、第１のキャプチャ物質−被検出物質−第２のキャプチャ物質のサンドイッチ構造を形成するサンドイッチ形式となる。また、サンドイッチ形式で複数の被検出物質を複数のセンサ部で検出する場合、第２のキャプチャ物質として複数の被検出物質の共通構造に特異的に結合する物質を用いることができる。具体的には、被検出物質として特定抗原に対する抗体を検出する場合、第２のキャプチャ物質として、抗体のＦｃ部のような共通構造に結合する物質を用いることができる。 The second capture substance is a capture substance that specifically binds to the substance to be detected and modifies the scatterer. Here, the first and second capture substances bind to different binding sites (epitope in the case of antibodies) of the substance to be detected. Thus, the sensing method according to the present embodiment is a sandwich type that forms a sandwich structure of the first capture substance-the substance to be detected-the second capture substance. When a plurality of substances to be detected are detected by a plurality of sensor units in a sandwich format, a substance that specifically binds to a common structure of the plurality of substances to be detected can be used as the second capture substance. Specifically, when an antibody against a specific antigen is detected as a substance to be detected, a substance that binds to a common structure such as an Fc part of an antibody can be used as the second capture substance.
調整液は、透明担体表面上の屈折率を調整するためのものである。調整液は、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満であることが好ましい。この調整液をセンサ部上に配置することにより、この調整液の屈折率をもって、透明担体表面上の屈折率を調整する。さらに、調整液は、屈折率が１．３８以上かつ１．５１以下であることが好ましく、１．４２以上かつ１．４９以下であることがより好ましい。例えば、下記表１に示すものの中から種々の屈折率を有する物質を適宜選択することができる。ただし、屈折率を調整するための調整液は、下記の物質に限定されるものではない。
また、調整液は、透明担体表面上の必要以上に広範囲に配置せず、少なくともセンサ部を含むセンサ部の近傍の範囲のみに配置することが好ましい。全反射照明型の測定を行う場合、透明担体の屈折率とその表面上の屈折率が近くなることで、エバネッセント光として光エネルギーが漏れやすくなり、光エネルギーの利用効率が低下するためである。 Further, it is preferable that the adjustment liquid is not disposed over a wide range more than necessary on the surface of the transparent carrier, and is disposed only in a range in the vicinity of the sensor unit including at least the sensor unit. This is because when the total reflection illumination type measurement is performed, the refractive index of the transparent carrier and the refractive index on the surface thereof are close to each other, so that light energy easily leaks as evanescent light, and the utilization efficiency of the light energy decreases.
次に、センシング方法における散乱光測定について図３を用いて説明する。図３は、散乱光測定に用いられる検出装置を示す概略断面図である。図３に示す検出装置は、センサ部を有する透明担体と、センサ部を覆うギャップカバーグラスと、センサ部の屈折率を調整するようにギャップカバーグラス内に注入された調整液と、透明担体の端面へ向けて測定光を照射する光源と、測定光が上記端面のみを透過し透明担体中を導波するように透明担体の端部に配置された遮光板と、測定光の導波に起因して生じるエバネッセント光の散乱光を検出する光検出器とを備えている。そして図３中には、センサ部に固定された第１のキャプチャ物質、この第１のキャプチャ物質に結合した被検出物質、およびこの被検出物質に結合した標識キャプチャ物質も示されている。 Next, the scattered light measurement in the sensing method will be described with reference to FIG. FIG. 3 is a schematic cross-sectional view showing a detection device used for scattered light measurement. The detection apparatus shown in FIG. 3 includes a transparent carrier having a sensor part, a gap cover glass covering the sensor part, an adjustment liquid injected into the gap cover glass so as to adjust the refractive index of the sensor part, and a transparent carrier. Due to the light source that irradiates the measurement light toward the end face, the light shielding plate arranged at the end of the transparent carrier so that the measurement light is transmitted only through the end face and guided in the transparent carrier, and the measurement light is guided And a photodetector for detecting the scattered light of the evanescent light generated as described above. FIG. 3 also shows a first capture substance fixed to the sensor unit, a detection substance bound to the first capture substance, and a labeled capture substance bound to the detection substance.
測定光は、例えばレーザ光源等から得られる単波長光でも白色光源等から得られるブロード光でもよく、特に制限はないが、検出条件に応じて適宜選択することができる。本実施形態に係る検出装置では、透明担体の端面から測定光を照射し透明担体を導波させるため、容易にエバネッセント波を生じせしめることが可能である。測定光Ｌｏの波長は、可視、紫外および近赤外領域の値を用いることができ、特に制限されない。 The measurement light may be, for example, single wavelength light obtained from a laser light source or the like, or broad light obtained from a white light source or the like, and is not particularly limited, but can be appropriately selected according to detection conditions. In the detection apparatus according to this embodiment, since the measurement light is irradiated from the end face of the transparent carrier and guided through the transparent carrier, it is possible to easily generate an evanescent wave. The wavelength of the measurement light Lo can be a value in the visible, ultraviolet and near infrared regions, and is not particularly limited.
光源２１は、例えばレーザ光源等でもよく、特に制限はないが、検出条件に応じて適宜選択することができる。また必要に応じて、光源２１は、測定光Ｌｏを透明担体１０の表面に対して、この表面で全反射条件を満たすように誘電体透明担体１０を通して入射させるために、測定光を導光するためのミラーやレンズ等の導光系等を適宜組み合わせることができる。また、遮光板は、光源から発生する迷光の影響を最小限に抑えるためのものである。遮光板は、吸光材を使用するとより効果的である。 The light source 21 may be a laser light source, for example, and is not particularly limited, but can be appropriately selected according to detection conditions. If necessary, the light source 21 guides the measurement light Lo so that the measurement light Lo is incident on the surface of the transparent carrier 10 through the dielectric transparent carrier 10 so as to satisfy the total reflection condition on the surface. Therefore, a light guide system such as a mirror or a lens can be appropriately combined. The light shielding plate is for minimizing the influence of stray light generated from the light source. The light shielding plate is more effective when a light absorbing material is used.
光検出器３０としては、ＣＣＤ、ＰＤ（フォトダイオード）、フォトマルチプライア、ｃ−ＭＯＳ等を適宜用いることができる。特に検出感度の観点から、冷却ＣＣＤを用いることが好ましい。また、光検出器３０は、検出条件に応じて光学フィルタや分光器等の分光手段と組み合わせて用いることができる。好ましい光検出器３０として、例えば富士フイルム株式会社製 LAS-1000 plus（商品名）等を挙げることができる。 As the photodetector 30, a CCD, PD (photodiode), photomultiplier, c-MOS, or the like can be used as appropriate. In particular, from the viewpoint of detection sensitivity, it is preferable to use a cooled CCD. Further, the photodetector 30 can be used in combination with a spectroscopic means such as an optical filter or a spectroscope depending on detection conditions. As a preferable photodetector 30, for example, LAS-1000 plus (trade name) manufactured by FUJIFILM Corporation can be exemplified.
本願発明者は、透明担体の表面上の屈折率を空気や水よりも大きくするとある範囲の屈折率では、検出対象とする散乱光が増加しノイズ的な散乱光が減少するという現象を見出した。通常透明担体の屈折率とその表面上の屈折率とが近づくと、エバネッセント光の強度が増大することが知られている。したがって、技術常識的には検出対象とする散乱光（すなわち、散乱体からの散乱光）の強度が増大し、ノイズ的な散乱光（すなわち、透明担体表面の夾雑物等からの散乱光）の強度も増大すると考えられる。しかしながら、本願発明者は、特に「ノイズ的な散乱光が減少する」という驚くべき現象を見出した。これにより後述するように、本発明に係るセンシング方法によって、Ｓ／Ｎ比を格段に向上させることができる。 The inventor of the present application has found a phenomenon that when the refractive index on the surface of the transparent carrier is larger than that of air or water, the scattered light to be detected increases and the noise-like scattered light decreases at a certain range of refractive index. . Usually, it is known that the intensity of evanescent light increases as the refractive index of a transparent carrier approaches the refractive index on the surface thereof. Therefore, technically, the intensity of scattered light (that is, scattered light from a scatterer) to be detected increases, and noise-like scattered light (that is, scattered light from contaminants on the surface of a transparent carrier) increases. The strength is also expected to increase. However, the present inventor has found a particularly surprising phenomenon that “noisy scattered light decreases”. Thereby, as described later, the S / N ratio can be remarkably improved by the sensing method according to the present invention.
本発明に係るセンシング方法は、透明担体の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出している。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。したがって、透明担体の表面上の屈折率を空気や水よりも大きくすることにより、Ｓ／Ｎ比を従来法に比して向上させることが可能となる。これにより、本発明に係るセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットによって、より高い定量性を備えたセンシングを行うことが可能となる。 In the sensing method according to the present invention, the refractive index on the surface including at least the sensor portion of the transparent carrier is adjusted to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier to detect scattered light. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. Therefore, the S / N ratio can be improved as compared with the conventional method by making the refractive index on the surface of the transparent carrier larger than that of air or water. Thereby, it is possible to perform sensing with higher quantitativeness by the sensing method according to the present invention and the sensing kit used therein.
＜設計変更＞
また、上記において、サンドイッチ形式のセンシング方法について説明してきたが、本発明は上記の態様に限られない。すなわち、図２Ａおよび図２Ｂに示すように、競合形式のセンシング方法とすることも可能である。
<Design changes>
In the above description, the sandwich type sensing method has been described. However, the present invention is not limited to the above aspect. That is, as shown in FIG. 2A and FIG. 2B, a competitive sensing method may be used.
この場合、センシング方法は、透明担体上の所定領域に被検出物質と特異的に結合する第１のキャプチャ物質を固定してセンサ部を形成し（Ｓｔｅｐ２ａ）、被検出物質を含みうる試料をセンサ部に供給し（Ｓｔｅｐ２ｂ）、被検出物質を第１のキャプチャ物質に結合せしめた後センサ部上を洗浄し（Ｓｔｅｐ２ｃ）、次いで被検出物質と競合して第１のキャプチャ物質と特異的に結合する標識キャプチャ物質をセンサ部上に供給し（Ｓｔｅｐ２ｄ）、標識キャプチャ物質を第１のキャプチャ物質に結合せしめた後センサ部上を洗浄し（Ｓｔｅｐ２ｅ）、そして、センサ部上にギャップカバーグラスを乗せてその隙間に屈折率調整用の調整液を注入し（Ｓｔｅｐ２ｆ）、その後散乱光測定を行うものである。 In this case, in the sensing method, a first capture substance that specifically binds to the substance to be detected is fixed to a predetermined region on the transparent carrier to form a sensor unit (Step 2a), and a sample that can contain the substance to be detected is detected by the sensor. (Step 2b), after binding the substance to be detected to the first capture substance, the sensor part is washed (Step 2c), and then competes with the substance to be detected and specifically binds to the first capture substance. The label capture substance to be supplied is supplied onto the sensor part (Step 2d), the label capture substance is bonded to the first capture substance, and then the sensor part is washed (Step 2e), and a gap cover glass is placed on the sensor part. Then, an adjustment liquid for adjusting the refractive index is injected into the gap (Step 2f), and then the scattered light is measured.
＜センシング方法の第２の実施形態＞
まず、本実施形態に係るセンシング方法について説明する。このセンシング方法は、サンドイッチ形式のセンシング方法である。本実施形態に係るセンシング方法は、第1の実施形態に係るセンシング方法と同様の構成であるが、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満である粘着性物質またはゴム性物質を用いて、透明担体表面上の屈折率を調整している点で異なる。したがって、第1の実施形態に係るセンシング方法と同様の構成要素についての説明は、特に必要のない限り省略する。
<Second Embodiment of Sensing Method>
First, the sensing method according to the present embodiment will be described. This sensing method is a sandwich type sensing method. The sensing method according to the present embodiment has the same configuration as the sensing method according to the first embodiment, but has a refractive index of 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip, or a rubbery material Is used to adjust the refractive index on the surface of the transparent carrier. Therefore, the description of the same components as the sensing method according to the first embodiment is omitted unless particularly necessary.
粘着性物質またはゴム性物質は、透明担体表面上の屈折率を調整するためのものである。使用上容易なことから、支持体とその支持体上に形成された粘着性物質層またはゴム性物質層とからなるテープ状のもの（調整テープ）が好ましい。ここで、光検出の観点から、支持体は透明であることが好ましい。ただし、必ずしも透明である必要はない。この場合、この調整テープの粘着性物質層またはゴム性物質層が形成されている側をセンサ部に接触させることにより、これら粘着性物質またはゴム性物質の屈折率をもって、透明担体表面上の屈折率を調整する。粘着性物質またはゴム性物質は、屈折率が１．３５以上かつ透明担体チップの屈折率未満であることが好ましい。さらに、粘着性物質またはゴム性物質は、屈折率が１．３８以上かつ１．５１以下であることが好ましく、１．４２以上かつ１．４９以下であることがより好ましい。 The adhesive substance or rubbery substance is for adjusting the refractive index on the surface of the transparent carrier. Since it is easy to use, a tape-like thing (adjustment tape) which consists of a support body and the adhesive substance layer or rubber-like substance layer formed on the support body is preferable. Here, from the viewpoint of light detection, the support is preferably transparent. However, it is not necessarily transparent. In this case, the side of the adjustment tape on which the adhesive substance layer or rubber substance layer is formed is brought into contact with the sensor portion, so that the refractive index of the adhesive substance or rubber substance can be refracted on the surface of the transparent carrier. Adjust the rate. The adhesive substance or rubbery substance preferably has a refractive index of 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip. Furthermore, the adhesive substance or the rubbery substance preferably has a refractive index of 1.38 or more and 1.51 or less, and more preferably 1.42 or more and 1.49 or less.
本実施形態に係るセンシング方法も、透明担体の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出している。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。したがって、第１の実施形態と同様の効果を得ることが可能となる。 The sensing method according to the present embodiment also detects scattered light by adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor part of the transparent carrier to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. Therefore, it is possible to obtain the same effect as in the first embodiment.
「センシングキット」
＜センシングキットの第１の実施形態＞
本実施形態のセンシングキット６０ａについて説明する。図５はセンシングキット６０ａの構成を示す模式図である。センシングキット６０ａは、流路と、センサ部と、センサ部の上流側に乾燥固定された標識キャプチャ物質とを有する透明担体チップ、および流路表面上の屈折率を調整するための調整液を備えている。ここで、調整液についてはセンシング方法の第１の実施形態の場合と同様である。また、図５では、調整液６３はアンプル６２に入れられ密閉されている。
Sensing kit
<First Embodiment of Sensing Kit>
The sensing kit 60a of this embodiment is demonstrated. FIG. 5 is a schematic diagram showing the configuration of the sensing kit 60a. The sensing kit 60a includes a transparent carrier chip having a flow path, a sensor section, and a label capture substance dried and fixed on the upstream side of the sensor section, and an adjustment liquid for adjusting the refractive index on the surface of the flow path. ing. Here, the adjustment liquid is the same as that in the first embodiment of the sensing method. In FIG. 5, the adjustment liquid 63 is put in an ampoule 62 and sealed.
透明担体チップ５０は、誘電体プレートからなる基台５１と、基台５１上に液体試料Ｓを保持し、液体試料Ｓの流路５２を形成するスペーサ５３と、試料Ｓを注入する注入口５４ａおよび流路５２を流下した試料を排出する排出口となる空気孔５４ｂを備えたガラス板からなる上板５４とから構成され、流路５２の注入口５４ａと空気孔５４ｂとの間の試料接触面となる基台５１の所定領域上に設けられたセンサ部５８、５９が備えられている。また、注入口５４ａから流路５２に至る箇所にはメンブレンフィルター５５が備えられ、流路５２下流の空気孔５４ｂに接続する部分には廃液だめ５６が形成されている。そして、センサ部の上流側には標識キャプチャ物質が乾燥固定されている。 The transparent carrier chip 50 includes a base 51 made of a dielectric plate, a spacer 53 that holds the liquid sample S on the base 51 and forms a flow path 52 for the liquid sample S, and an inlet 54a for injecting the sample S. And an upper plate 54 made of a glass plate provided with an air hole 54b serving as a discharge port for discharging the sample flowing down the channel 52, and the sample contact between the inlet 54a and the air hole 54b of the channel 52 Sensor portions 58 and 59 are provided on a predetermined region of the base 51 serving as a surface. Further, a membrane filter 55 is provided at a location from the inlet 54 a to the flow path 52, and a waste liquid reservoir 56 is formed at a portion connected to the air hole 54 b downstream of the flow path 52. A label capture substance is dried and fixed on the upstream side of the sensor unit.
本発明のセンシング方法において、本実施形態のセンシングキット６０ａを用い、血液（全血）中に被検出物質である抗原を含むか否について、サンドイッチ法によるアッセイを行う手順について図６Ａおよび図６Ｂを参照して説明する。
ｓｔｅｐ６ａ：注入口５４ａから検査対象である血液（全血）Ｓｏを注入する。ここでは、この血液Ｓｏ中に被検出物質である抗原Ａが含まれている場合について説明する。図６Ａ中において血液Ｓｏは網掛け領域で示している。
ｓｔｅｐ６ｂ：血液Ｓｏはメンブレンフィルター５５により濾過され、赤血球、白血球などの大きな分子が残渣となる。
ｓｔｅｐ６ｃ：血漿Ｓ（メンブレンフィルター５５で血球分離された血液）が毛細管現象で流路５２に染み出す。または反応を早め、検出時間を短縮するために、空気孔５４ｂにポンプを接続し、血漿Ｓをポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。図６Ａ中において血漿Ｓは斜線領域で示している。
ｓｔｅｐ６ｄ：流路５２に染み出した血漿Ｓと抗体Ｂ２が付与された散乱体（標識抗体ＢＦ、すなわち標識キャプチャ物質）とが混ぜ合わされ、血漿Ｓ中の抗原Ａが標識抗体ＢＦと結合する。
ｓｔｅｐ６ｅ：血漿Ｓは流路５２に沿って空気孔５４ｂ側へと徐々に流れ、標識抗体ＢＦと結合した抗原Ａが、第１の測定エリア５８上に固定されている固定化抗体Ｂ１と結合し、抗原Ａが固定化抗体Ｂ１と標識抗体ＢＦで挟み込まれたいわゆるサンドイッチが形成される。
ｓｔｅｐ６ｆ：抗原Ａと結合しなかった標識抗体ＢＦの一部は第２の測定エリア５９上に固定されている固定化抗体Ｂ０と結合する。さらに抗原Ａまたは固定化抗体Ｂ０と結合しなかった標識抗体ＢＦが測定エリア上に残っている場合があっても、後続の血漿Ｓが洗浄の役割を担い、プレート上に浮遊および非特異吸着していた標識抗体ＢＦを洗い流す。
ｓｔｅｐ６ｇ：流路表面上の屈折率を調整するための調整液を注入口５４ａから注入する。
ｓｔｅｐ６ｈ：調整液が毛細管現象で流路５２に染み出す。先ほどと同様に、検出時間を短縮するために、空気孔５４ｂにポンプを接続し、調整液をポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。
ｓｔｅｐ６ｉ：調整液がセンサ部をほぼ覆ったところで、流路表面の屈折率の置換が完了する。
In the sensing method of the present invention, FIG. 6A and FIG. 6B show the procedure for performing an assay by the sandwich method as to whether or not an antigen as a substance to be detected is contained in blood (whole blood) using the sensing kit 60a of the present embodiment. The description will be given with reference.
Step 6a: Blood (whole blood) So to be examined is injected from the injection port 54a. Here, the case where the antigen A which is a to-be-detected substance is contained in this blood So is demonstrated. In FIG. 6A, blood So is indicated by a shaded area.
step 6b: The blood So is filtered by the membrane filter 55, and large molecules such as red blood cells and white blood cells become residues.
Step 6c: Plasma S (blood separated by the membrane filter 55) leaks into the flow path 52 by capillary action. Alternatively, in order to accelerate the reaction and shorten the detection time, a pump may be connected to the air hole 54b, and the plasma S may be caused to flow down by pump suction and push-out operations. In FIG. 6A, plasma S is indicated by a hatched area.
Step6d: scatterers plasma S and antibody B 2 exuded into the flow path 52 is attached (labeled antibody BF, namely labeling capture substance) and are mixed, the antigen A in plasma S bind with the labeled antibody BF.
Step 6e: The plasma S gradually flows along the flow path 52 toward the air hole 54b, and the antigen A bound to the labeled antibody BF binds to the immobilized antibody B 1 immobilized on the first measurement area 58. and so-called sandwich antigen A is sandwiched with immobilized antibody B 1 and the labeled antibody BF is formed.
step 6f: A part of the labeled antibody BF that has not bound to the antigen A binds to the immobilized antibody B 0 immobilized on the second measurement area 59. Even if further labeled antibody BF that did not bind with the antigens A or immobilized antibody B 0 remains on the measurement area, a subsequent plasma S is responsible for washing, floating and non-specific adsorption on the plate Wash away the labeled antibody BF.
Step 6g: An adjustment liquid for adjusting the refractive index on the channel surface is injected from the injection port 54a.
Step 6h: The adjustment liquid oozes out to the flow path 52 by capillary action. Similarly to the above, in order to shorten the detection time, a pump may be connected to the air hole 54b, and the adjustment liquid may be caused to flow down by pump suction and push-out operations.
Step 6i: When the adjustment liquid almost covers the sensor unit, the replacement of the refractive index of the flow path surface is completed.
その後、図７に示すような検出装置を用いて、散乱光測定を行う。この検出装置は、透明担体チップを収容する収容部１９と、センサ部１４に測定光Ｌｏを照射する励起光照射光学系２０と、測定光Ｌｏの照射により生じる、被検出物質Ａに応じた量の光を検出する光検出手段３０とを備えている。 Thereafter, the scattered light measurement is performed using a detection apparatus as shown in FIG. This detection apparatus includes an accommodation unit 19 that accommodates a transparent carrier chip, an excitation light irradiation optical system 20 that irradiates the sensor unit 14 with the measurement light Lo, and an amount corresponding to the detected substance A that is generated by the irradiation of the measurement light Lo. And a light detection means 30 for detecting the light.
励起光照射光学系２０は、測定光Ｌｏを出力する半導体レーザ（ＬＤ）等からなる光源２１と、透明担体チップ１０に一面が接触するように配置されたプリズム２２とを備えている。プリズム２２は、透明担体１０の界面で測定光Ｌｏが全反射するように透明担体チップ１０内に測定光Ｌｏを導光するものである。なお、プリズム２２と透明担体チップ１０とは、屈折率マッチングオイルを介して接触されている。光源２１は、プリズム２２の他の一面からセンサチップ１０の試料接触面で測定光Ｌｏが全反射角以上で入射するように配置されている。さらに、光源２１とプリズム２２との間に必要に応じて導光部材を配置してもよい。 The excitation light irradiation optical system 20 includes a light source 21 made of a semiconductor laser (LD) or the like that outputs measurement light Lo, and a prism 22 that is arranged so that one surface thereof is in contact with the transparent carrier chip 10. The prism 22 guides the measurement light Lo into the transparent carrier chip 10 so that the measurement light Lo is totally reflected at the interface of the transparent carrier 10. The prism 22 and the transparent carrier chip 10 are in contact with each other through a refractive index matching oil. The light source 21 is arranged so that the measurement light Lo is incident on the sample contact surface of the sensor chip 10 from the other surface of the prism 22 at a total reflection angle or more. Furthermore, you may arrange | position a light guide member between the light source 21 and the prism 22 as needed.
収容部１９は、透明担体１０を収容する際に、透明担体のセンサ部１４がプリズム２２上に配置され、光検出器３０で散乱光が検出できるよう構成されている。収容部１９に対し透明担体１０は、図中矢印Ｘ方向に出し入れすることができる。 The accommodating portion 19 is configured such that when the transparent carrier 10 is accommodated, the sensor portion 14 of the transparent carrier is disposed on the prism 22 and the scattered light can be detected by the photodetector 30. The transparent carrier 10 can be taken in and out in the direction of the arrow X in the figure with respect to the housing part 19.
そして、所定領域に測定光を全反射照射して、エバネッセント光Ｄを生じせしめ、標識抗体中の散乱体によるこのエバネッセント光の散乱光を検出することにより、被検出物質の量を検出することが可能となる。 Then, it is possible to detect the amount of the substance to be detected by irradiating the predetermined area with the measurement light to generate the evanescent light D and detecting the scattered light of the evanescent light by the scatterer in the labeled antibody. It becomes possible.
このように、血液Ｓｏを注入口５４ａから注入し、第１の測定エリア５８上に抗原Ａが固定化抗体Ｂ１と標識抗体ＢＦで挟まれたサンドイッチが形成されるまでのｓｔｅｐ６ａからＳｔｅｐ６ｉの後、第１の測定エリア５８からの散乱光信号（以下、検出信号）を検出することにより、抗原の有無および／またはその濃度を検出することができる。その後、第２の測定エリア５９からの検出信号を検出できるように試料セル５０をＸ方向に移動させ、第２の測定エリア５９からの検出信号を検出する。標識抗体ＢＦと結合する固定化抗体Ｂ０を固定している第２の測定エリア５９からの検出信号は、標識抗体ＢＦの流下した量、活性などの反応条件を反映した信号であると考えられ、この検出信号をリファレンスとして、第１の測定エリア５８からの検出信号を補正することにより、より精度の高い検出結果を得ることができる。また、第２の測定エリア５９に既知量の標識物質（光散乱物質、金属微粒子）をあらかじめ固定した場合であっても、同様に、第２の測定エリア５９からの光信号をリファレンスとして第１の測定エリア５８からの検出信号を補正することができる。 Thus, by injecting the blood So from the inlet 54a, after Step6i from step6a to sandwich antigen A on the first measurement area 58 is sandwiched by the immobilized antibody B 1 and the labeled antibody BF is formed By detecting a scattered light signal (hereinafter referred to as a detection signal) from the first measurement area 58, it is possible to detect the presence and / or concentration of the antigen. Thereafter, the sample cell 50 is moved in the X direction so that the detection signal from the second measurement area 59 can be detected, and the detection signal from the second measurement area 59 is detected. Detection signal from the second measurement area 59 that the immobilized antibody B 0 which binds the labeled antibody BF fixed is believed falling amounts of labeled antibodies BF, the activity is a signal that reflects the reaction conditions, such as By using this detection signal as a reference and correcting the detection signal from the first measurement area 58, a more accurate detection result can be obtained. Further, even when a known amount of a labeling substance (light scattering substance, metal fine particles) is fixed in advance in the second measurement area 59, similarly, the first optical signal from the second measurement area 59 is used as a reference. The detection signal from the measurement area 58 can be corrected.
本発明に係るセンシングキットは、流路の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出するものである。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。したがって、透明担体の表面上の屈折率を空気や水よりも大きくすることにより、Ｓ／Ｎ比を従来法に比して向上させることが可能となる。これにより、本発明に係るセンシング方法、およびそれに用いられるセンシングキットによって、より高い定量性を備えたセンシングを行うことが可能となる。 The sensing kit according to the present invention detects scattered light by adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor part of the flow path to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. Therefore, the S / N ratio can be improved as compared with the conventional method by making the refractive index on the surface of the transparent carrier larger than that of air or water. Thereby, it is possible to perform sensing with higher quantitativeness by the sensing method according to the present invention and the sensing kit used therein.
＜センシングキットの第２の実施形態＞
本実施形態のセンシングキット６０ｂについて説明する。図８Ａはセンシングキット６０ｂの構成を示す模式図である。センシングキット６０ｂは、センサ部を有する透明担体、および透明担体表面上の屈折率を調整するための調整液、および標識キャプチャ物質を含む標識液を備えている。ここで、調整液についてはセンシング方法の第１の実施形態の場合と同様である。また、標識キャプチャ物質は、第２のキャプチャ物質とこの第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とから構成されている。さらに、図８Ａでは、調整液６３および標識液６５は、それぞれアンプル６２および６４に入れられ密閉されている。
<Second Embodiment of Sensing Kit>
The sensing kit 60b of this embodiment will be described. FIG. 8A is a schematic diagram showing the configuration of the sensing kit 60b. The sensing kit 60b includes a transparent carrier having a sensor part, an adjustment liquid for adjusting the refractive index on the surface of the transparent carrier, and a labeling liquid containing a label capture substance. Here, the adjustment liquid is the same as that in the first embodiment of the sensing method. In addition, the label capture substance is composed of a second capture substance and a scatterer in which the second capture substance is modified. Further, in FIG. 8A, the adjustment liquid 63 and the labeling liquid 65 are sealed in the ampoules 62 and 64, respectively.
本実施形態に係るセンシングキットによって、＜センシング方法の第１の実施形態＞で述べたセンシング方法と同様のセンシングを行うことができる。 Sensing similar to the sensing method described in <First embodiment of sensing method> can be performed by the sensing kit according to the present embodiment.
本発明に係るセンシングキットも、透明担体の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出するものである。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。したがって、センシングキットの第１の実施形態と同様の効果を得ることができる。 The sensing kit according to the present invention also detects scattered light by adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor portion of the transparent carrier to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. Therefore, the same effects as those of the first embodiment of the sensing kit can be obtained.
＜センシングキットの第３の実施形態＞
本実施形態のセンシングキット６０ｃについて説明する。図８Ｂはセンシングキット６０ｃの構成を示す模式図である。センシングキット６０ｃは、センサ部を有する透明担体、および透明担体表面上の屈折率を調整するための調整テープ６６、および標識キャプチャ物質を含む標識液６５を備えている。ここで、調整テープ６６についてはセンシング方法の第２の実施形態の場合と同様である。また、標識キャプチャ物質は、第２のキャプチャ物質とこの第２のキャプチャ物質が修飾された散乱体とから構成されている。さらに、図８Ｂでは、標識液６５はアンプル６４に入れられ密閉されている。
<Third embodiment of sensing kit>
The sensing kit 60c of this embodiment will be described. FIG. 8B is a schematic diagram showing the configuration of the sensing kit 60c. The sensing kit 60c includes a transparent carrier having a sensor part, an adjustment tape 66 for adjusting the refractive index on the surface of the transparent carrier, and a labeling liquid 65 containing a label capturing substance. Here, the adjustment tape 66 is the same as that of the second embodiment of the sensing method. In addition, the label capture substance is composed of a second capture substance and a scatterer in which the second capture substance is modified. Further, in FIG. 8B, the labeling liquid 65 is put in an ampoule 64 and sealed.
本実施形態に係るセンシングキットによって、＜センシング方法の第２の実施形態＞で述べたセンシング方法と同様のセンシングを行うことができる。 Sensing similar to the sensing method described in <Second Embodiment of Sensing Method> can be performed by the sensing kit according to the present embodiment.
本発明に係るセンシングキットも、透明担体の少なくともセンサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ透明担体の屈折率未満となるように調整し、散乱光を検出するものである。すなわち、通常センサ部上が空気（屈折率１．００）や水（屈折率１．３３）である従来法に比して、本発明はセンサ部上の屈折率を大きくしてセンシングを行っている。したがって、センシングキットの第１の実施形態と同様の効果を得ることができる。 The sensing kit according to the present invention also detects scattered light by adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor portion of the transparent carrier to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier. That is, compared with the conventional method in which the sensor unit is usually air (refractive index 1.00) or water (refractive index 1.33), the present invention increases the refractive index on the sensor unit to perform sensing. Yes. Therefore, the same effects as those of the first embodiment of the sensing kit can be obtained.
本発明に係るセンシング方法の実施例を以下に示す。 An embodiment of the sensing method according to the present invention is shown below.
＜実施例１＞
実施例１は以下の工程により行われた。ＭＡＳガラススライド（松浪硝子工業製）上にφ５ｍｍの穴の空いたＰＤＭＳ板を乗せてウェルを作製し、ＰＢＳで洗浄を２回行った。そして、１００ｎＭ 抗ｈＣＧ抗体のＰＢＳ溶液を８ｕｌ分注して室温で１時間静置し、その後ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄を行った。次いで、カゼイン１％のＴＢＳ溶液を２０ｕｌ分注して室温で１時間静置し、その後ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄を行った。１ｎＭもしくは１０ｎＭの ｈＣＧ抗原ＰＢＳ溶液、もしくはＰＢＳのみを２０ｕｌ分注して室温で１時間静置し、ＰＢＳ−Ｔで４回洗浄を行った。次いで、抗ｈＣＧ抗体固定化金コロイド懸濁液（水中粒径５０ｎｍ、５２０ｎｍの吸光度が３.４６の懸濁液をＰＢＳ２％ＰＢＳ溶液で１０倍希釈したもの）を１０ｕｌずつ分注して室温で１時間静置した。ＰＢＳ−Ｔで４回、純水で１回洗浄を行って液を完全に取り除いた。そして、ウェルを形成していたＰＤＭＳ板を剥がし、ギャップカバーグラスを乗せてその隙間にイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）を注入した。最後に、ガラススライドの側面からスライド内を全反射で伝播するように測定光を照射し、抗体を固定化したセンサ部における散乱光強度を冷却ＣＣＤで検出した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．３７７に調整される。
<Example 1>
Example 1 was performed by the following steps. A well was prepared by placing a PDMS plate with a hole of φ5 mm on a MAS glass slide (manufactured by Matsunami Glass Industry), and washed twice with PBS. Then, 8 ul of 100 nM anti-hCG antibody in PBS was dispensed, allowed to stand at room temperature for 1 hour, and then washed 3 times with PBS-T. Next, 20 ul of a 1% casein TBS solution was dispensed, allowed to stand at room temperature for 1 hour, and then washed three times with PBS-T. 20 ul of 1 nM or 10 nM hCG antigen PBS solution or PBS alone was dispensed and allowed to stand at room temperature for 1 hour, followed by washing 4 times with PBS-T. Then, 10 ul of anti-hCG antibody-immobilized gold colloid suspension (suspension with a particle size of 50 nm in water, 520 nm absorbance of 3.46 diluted 10-fold with PBS 2% PBS solution) was dispensed at room temperature. Let stand for 1 hour. The plate was washed 4 times with PBS-T and once with pure water to completely remove the solution. Then, the PDMS plate forming the well was peeled off, and a gap cover glass was placed thereon, and isopropyl alcohol (IPA) was injected into the gap. Finally, measurement light was irradiated from the side surface of the glass slide so as to propagate through the slide with total reflection, and the scattered light intensity in the sensor part on which the antibody was immobilized was detected with a cooled CCD. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.377.
＜実施例２＞
ＩＰＡの代わりにＤＭＦを用いること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．４２７に調整される。
<Example 2>
The same process as in Example 1 was performed except that DMF was used instead of IPA. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.427.
＜実施例３＞
ＩＰＡの代わりにＤＭＳＯを用いること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．４７８に調整される。
<Example 3>
The same process as in Example 1 was performed except that DMSO was used instead of IPA. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.478.
＜実施例４＞
ＩＰＡの代わりにマッチングオイルを用いること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．５１０に調整される。
<Example 4>
The same process as in Example 1 was performed except that matching oil was used instead of IPA. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.510.
＜比較例１＞
ＩＰＡ塗布を行わずセンサ部を乾燥させること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率は１．０００である。
<Comparative Example 1>
The same process as in Example 1 was performed except that the sensor part was dried without applying IPA. In this example, the refractive index on the transparent carrier surface is 1.000.
＜比較例２＞
ＩＰＡの代わりに純水を用いること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率は１．３３３である。
<Comparative example 2>
It implemented by the process similar to the process of the said Example 1 except using a pure water instead of IPA. In this example, the refractive index on the transparent carrier surface is 1.333.
上記＜実施例１＞から＜実施例４＞、並びに＜比較例１＞および＜比較例２＞についての実施データを図９に示す。 FIG. 9 shows implementation data for <Example 1> to <Example 4> and <Comparative Example 1> and <Comparative Example 2>.
図９Ａは、それぞれの実施例および比較例におけるセンサ部からの散乱光強度を示すグラフである。ここで、縦軸は透明担体表面上が空気である場合（屈折率：１．０００）を基準に規格化して表示している。このグラフから、表面上の屈折率が増加するに従い、センサ部からの散乱光強度も増大することがわかる。 FIG. 9A is a graph showing the intensity of scattered light from the sensor unit in each of the examples and the comparative examples. Here, the vertical axis is normalized and displayed based on the case where the surface of the transparent carrier is air (refractive index: 1.000). From this graph, it can be seen that as the refractive index on the surface increases, the intensity of scattered light from the sensor section also increases.
図９Ｂは、それぞれの実施例および比較例における非センサ部からの（ノイズ的な）散乱光強度を示すグラフである。ここで、縦軸は透明担体表面上が空気である場合（屈折率：１．０００）を基準に規格化して表示している。このグラフから、表面上の屈折率が増加するに従い、ノイズ的な散乱光強度はまず減少してから増大することがわかる。前述したように、通常透明担体の屈折率とその表面上の屈折率とが近づくと、ノイズ的な散乱光強度は増大すると考えられるため、この現象は驚くべき現象である。これは、透明担体表面上屈折率が増加することにより、表面上の夾雑物等がエバネッセント光に認識されなくなっていることに起因していると考えられる。すなわち、エバネッセント光の強度増大に伴うノイズの増加と、屈折率増加に伴う夾雑物等の非認識との間にトレードオフ的な関係が起因していると考えられる。 FIG. 9B is a graph showing (noise-like) scattered light intensity from the non-sensor part in each of the examples and the comparative examples. Here, the vertical axis is normalized and displayed based on the case where the surface of the transparent carrier is air (refractive index: 1.000). From this graph, it can be seen that as the refractive index on the surface increases, the noisy scattered light intensity first decreases and then increases. As described above, this phenomenon is a surprising phenomenon because the noise-like scattered light intensity is considered to increase as the refractive index of the transparent carrier and the refractive index on the surface approach each other. This is considered to be due to the fact that impurities on the surface are not recognized by the evanescent light due to an increase in the refractive index on the surface of the transparent carrier. That is, it is considered that a trade-off relationship is caused between the increase in noise accompanying the increase in the intensity of the evanescent light and the non-recognition of impurities and the like accompanying the increase in the refractive index.
図９Ｃは、それぞれの実施例および比較例におけるＳ／Ｎ比を示すグラフである。ここで、縦軸は透明担体表面上が空気である場合（屈折率：１．０００）を基準に規格化して表示している。このグラフから、表面上の屈折率が増加するに従い、Ｓ／Ｎ比はまず増加しから減少することがわかる。特に、調整液としてＤＭＦ（屈折率：１．４２７）を用いた場合には、Ｓ／Ｎ比は１２倍以上も向上している。すなわち、透明担体表面上の屈折率がある範囲においては、非常に高いＳ／Ｎ比で測定実施できるといえる。 FIG. 9C is a graph showing the S / N ratio in each example and comparative example. Here, the vertical axis is normalized and displayed based on the case where the surface of the transparent carrier is air (refractive index: 1.000). From this graph, it can be seen that as the refractive index on the surface increases, the S / N ratio first increases and then decreases. In particular, when DMF (refractive index: 1.427) is used as the adjustment liquid, the S / N ratio is improved by 12 times or more. That is, it can be said that measurement can be performed with a very high S / N ratio within a certain range of the refractive index on the transparent carrier surface.
次に、屈折率を調整するための調整テープを用いた場合、および調整液を広い領域に渡り塗布した場合の実施例について説明する。 Next, an example in which an adjustment tape for adjusting the refractive index is used and an adjustment liquid is applied over a wide area will be described.
＜実施例５＞
ＩＰＡを注入する代わりに粘着性テープ（アクリル樹脂系粘着テープ）をセンサ部上に貼ること以外は上記実施例１の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率がおよそ１．４〜１．５に調整される。本実施形態においても、Ｓ／Ｎ比が９倍も向上するという結果を得た。これより、屈折率の調整は調整液以外にも、粘着性物質またはゴム性物質でも可能であることが示された。
<Example 5>
It implemented by the process similar to the process of the said Example 1 except sticking an adhesive tape (acrylic resin adhesive tape) on a sensor part instead of inject | pouring IPA. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to about 1.4 to 1.5. Also in this embodiment, the result that the S / N ratio was improved by 9 times was obtained. From this, it was shown that the refractive index can be adjusted with an adhesive substance or a rubber substance in addition to the adjustment liquid.
＜実施例６＞
ギャップカバーグラスを透明担体上に乗せてＤＭＦを注入する領域を光照射側の非センサ部に拡大すること以外は上記実施例２の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．４２７に調整され、その調整の範囲が広範囲に渡っている。本実施形態においては、検出対象であるセンサ部からの散乱光が、上記実施例２に比して若干減少するという結果を得た。これは前述したように、測定光がセンサ部にまで導波する間に光エネルギーを損失しているからであると考えられる。しかしながら、それでも、Ｓ／Ｎ比は１２倍近く向上するという結果を得た。したがって、本発明は光エネルギーの利用効率が若干劣る態様であっても、充分にＳ／Ｎ比を向上させることができる顕著な効果を有することが示された。
<Example 6>
The same process as in Example 2 was performed, except that the gap cover glass was placed on a transparent carrier and the region where DMF was injected was expanded to the non-sensor part on the light irradiation side. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.427, and the range of the adjustment is wide. In this embodiment, the result that the scattered light from the sensor part which is a detection object decreases a little compared with the said Example 2 was obtained. As described above, this is presumably because light energy is lost while the measurement light is guided to the sensor unit. However, the S / N ratio was improved by nearly 12 times. Therefore, it was shown that the present invention has a remarkable effect that the S / N ratio can be sufficiently improved even if the utilization efficiency of light energy is slightly inferior.
さらに、ＣＲＰ抗原とその抗体を用いた以下の実施例および比較例を示す。 Furthermore, the following Examples and Comparative Examples using CRP antigen and its antibody are shown.
＜実施例７＞
実施例７は以下の工程により行われた。ＭＡＳガラススライド（松浪硝子工業製）上にφ５ｍｍの穴の空いたＰＤＭＳ板を乗せてウェルを作製し、ＰＢＳで洗浄を２回行った。そして、１００ｎＭ 抗ＣＲＰ抗体のＰＢＳ溶液を８ｕｌ分注して室温で１時間静置し、その後ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄を行った。次いで、カゼイン１％のＴＢＳ溶液を２０ｕｌ分注して室温で１時間静置し、その後ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄を行った。０, ９, ３００, ９０００ｐＭの ＣＲＰ抗原ＰＢＳ溶液、もしくはＰＢＳのみを２０ｕｌ分注して室温で１時間静置し、ＰＢＳ−Ｔで４回洗浄を行った。次いで、抗ＣＲＰ抗体固定化金コロイド懸濁液（５２０ｎｍの吸光度が３.４６の懸濁液をＰＢＳ２％ＰＢＳ溶液で１０倍希釈したもの）を１０ｕｌずつ分注して室温で１時間静置した。ＰＢＳ−Ｔで４回、純水で１回洗浄を行って液を完全に取り除いた。そして、ウェルを形成していたＰＤＭＳ板を剥がし、ギャップカバーグラスを乗せてその隙間にＤＭＦを注入した。最後に、ガラススライドの側面からスライド内を全反射で伝播するように測定光を照射し、抗体を固定化したセンサ部における散乱光強度を冷却ＣＣＤで検出した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率が１．４２７に調整される。すなわち、ＣＲＰ抗原とその抗体を用いること、濃度を０, ９, ３００, ９０００ｐＭに設定したこと以外では、上記実施例２の工程と同様の工程で実施した。
<Example 7>
Example 7 was performed by the following steps. A well was prepared by placing a PDMS plate with a hole of φ5 mm on a MAS glass slide (manufactured by Matsunami Glass Industry), and washed twice with PBS. Then, 8 ul of 100 nM anti-CRP antibody in PBS was dispensed, allowed to stand at room temperature for 1 hour, and then washed 3 times with PBS-T. Next, 20 ul of a 1% casein TBS solution was dispensed, allowed to stand at room temperature for 1 hour, and then washed three times with PBS-T. 20 ul of 0, 9, 300, 9000 pM CRP antigen PBS solution or PBS alone was dispensed and allowed to stand at room temperature for 1 hour, followed by washing 4 times with PBS-T. Next, 10 ul of anti-CRP antibody-immobilized gold colloid suspension (suspension with absorbance at 520 nm of 3.46 diluted 10-fold with PBS 2% PBS solution) was dispensed and allowed to stand at room temperature for 1 hour. . The plate was washed 4 times with PBS-T and once with pure water to completely remove the solution. Then, the PDMS plate forming the well was peeled off, and a gap cover glass was placed thereon, and DMF was injected into the gap. Finally, measurement light was irradiated from the side surface of the glass slide so as to propagate through the slide with total reflection, and the scattered light intensity in the sensor part on which the antibody was immobilized was detected with a cooled CCD. In this embodiment, the refractive index on the transparent carrier surface is adjusted to 1.427. That is, the same process as in Example 2 was performed except that the CRP antigen and its antibody were used and the concentration was set to 0, 9, 300, 9000 pM.
＜比較例３＞
ＤＭＦ塗布を行わずセンサ部を乾燥させること以外は上記実施例７の工程と同様の工程で実施した。本実施例では、透明担体表面上の屈折率は１．０００である。
<Comparative Example 3>
The same process as in Example 7 was performed except that the sensor part was dried without applying DMF. In this example, the refractive index on the transparent carrier surface is 1.000.
上記＜実施例７＞および＜比較例３＞についての実施データを図１０および図１１に示す。 Implementation data for the above <Example 7> and <Comparative Example 3> are shown in FIGS.
図１０ＡおよびＢは、それぞれ実施例７および比較例３についてのＣＲＰ抗原濃度変化に対する散乱強度変化を示している。一方、図１１ＡからＣは、それぞれ実施例７の測定イメージ画像、比較例３の測定イメージ画像、およびイメージ画像中の各センサ部の濃度情報を示している。これらにより、本発明に係るセンシング方法が、ノイズを低減し検出対象信号を増大させることにより、Ｓ／Ｎ比を格段に向上させる非常に顕著な効果を有する方法であることが示された。 10A and 10B show the change in scattering intensity with respect to the change in CRP antigen concentration for Example 7 and Comparative Example 3, respectively. On the other hand, FIGS. 11A to 11C show measurement image images of Example 7, measurement image images of Comparative Example 3, and density information of each sensor unit in the image images, respectively. From these, it was shown that the sensing method according to the present invention is a method having a very remarkable effect of significantly improving the S / N ratio by reducing noise and increasing the detection target signal.
２ 被検出物質
６ 誘電体プリズム基板
９ 励起光
１０ 透明担体
１１ ウェル
１２ ギャップカバーグラス
１４ センサ部
１９ 収容部
２０ 励起光照射光学系
２１ 光源
２２ プリズム
３０ 光検出器
６０ａ センシングキット
６０ｂ センシングキット
６０ｃ センシングキット
６３ 調整液
６５ 標識液
６６ 調整テープ
Ａ 被検出物質
ＢＦ 標識キャプチャ物質
Ｄ エバネッセント光
Ｆ 散乱体
Ｌｏ 測定光
2 Target substance 6 Dielectric prism substrate 9 Excitation light 10 Transparent carrier 11 Well 12 Gap cover glass 14 Sensor part 19 Storage part 20 Excitation light irradiation optical system 21 Light source 22 Prism 30 Photodetector 60a Sensing kit 60b Sensing kit 60c Sensing kit 63 Adjustment liquid 65 Label liquid 66 Adjustment tape A Target substance BF Label capture substance D Evanescent light F Scattering body Lo Measurement light
Claims (15)
散乱体を含む標識複合体を形成するための第１のキャプチャ物質が固定された、透明担体表面上のセンサ部に、前記被検出物質を含み得る試料を供給し、
前記被検出物質の量に応じた量の前記標識複合体を前記センサ部に形成せしめ、
前記透明担体の少なくとも前記センサ部を含む表面上の屈折率を、１．３５以上かつ前記透明担体の屈折率未満となるように調整し、
前記透明担体に測定光を照射して前記センサ部にエバネッセント光を生じせしめ、
前記散乱体による該エバネッセント光の散乱光を検出することを特徴とするセンシング方法。 A sensing method for detecting the amount of a substance to be detected,
Supplying a sample that can contain the substance to be detected to a sensor unit on the surface of the transparent carrier, to which a first capture substance for forming a labeled complex containing a scatterer is fixed,
Forming the labeled complex in an amount corresponding to the amount of the substance to be detected in the sensor unit;
Adjusting the refractive index on the surface including at least the sensor part of the transparent carrier to be 1.35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier;
Irradiating the transparent carrier with measuring light to generate evanescent light in the sensor unit,
A sensing method comprising detecting scattered light of the evanescent light by the scatterer.
該第２のキャプチャ物質と該第２のキャプチャ物質が修飾された前記散乱体とからなる標識キャプチャ物質を、前記第１のキャプチャ物質に結合した前記被検出物質に特異的に結合させることにより、前記標識複合体を形成することを特徴とする請求項１から６いずれかに記載のセンシング方法。 A second capture substance specifically binds to the substance to be detected;
By specifically binding a labeled capture substance composed of the second capture substance and the scatterer modified with the second capture substance to the detected substance bound to the first capture substance, The sensing method according to claim 1, wherein the label complex is formed.
該第３のキャプチャ物質と該第３のキャプチャ物質が修飾された前記散乱体とからなる標識キャプチャ物質を、前記第１のキャプチャ物質に特異的に結合させることにより、前記標識複合体を形成することを特徴とする請求項１から６いずれかに記載のセンシング方法。 A third capture substance that specifically binds to the first capture substance in competition with the substance to be detected;
A labeled capture substance composed of the third capture substance and the scatterer modified with the third capture substance is specifically bound to the first capture substance to form the labeled complex. The sensing method according to claim 1, wherein:
前記流路の表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ前記透明担体チップの屈折率未満である調整液を備え、
被検出物質を含み得る前記試料を前記センサ部に供給し、前記被検出物質の量に応じた量の前記標識複合体を前記センサ部に形成せしめ、前記透明担体チップに測定光を照射して前記センサ部にエバネッセント光を生じせしめ、前記散乱体による該エバネッセント光の散乱光を検出し、前記被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられるものであることを特徴とするセンシングキット。 An inlet for injecting a sample, a channel for flowing the sample injected from the inlet, an air inlet for extracting air so that the sample flows, and a labeling complex including a scatterer A transparent carrier chip having a sensor part on the surface of the flow path to which a first capture substance to be formed is fixed, and a refractive index of 1. to adjust the refractive index on the surface of the flow path. Comprising an adjustment liquid that is 35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip;
The sample that can contain the substance to be detected is supplied to the sensor unit, the labeled complex corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light. A sensing kit, which is used in a sensing method for generating evanescent light in the sensor unit, detecting the scattered light of the evanescent light by the scatterer, and detecting the amount of the substance to be detected.
前記透明担体チップの表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ前記透明担体チップの屈折率未満である調整液を備え、
被検出物質を含み得る前記試料を前記センサ部に供給し、前記被検出物質の量に応じた量の前記標識複合体を前記センサ部に形成せしめ、前記透明担体チップに測定光を照射して前記センサ部にエバネッセント光を生じせしめ、前記散乱体による該エバネッセント光の散乱光を検出し、前記被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられるものであることを特徴とするセンシングキット。 A transparent carrier chip having a sensor part to which a first capture substance for forming a labeling complex including a scatterer is fixed, and a refractive index of 1 for adjusting the refractive index on the surface of the transparent carrier chip An adjustment liquid that is 35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip,
The sample that can contain the substance to be detected is supplied to the sensor unit, the labeled complex corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light. A sensing kit, which is used in a sensing method for generating evanescent light in the sensor unit, detecting the scattered light of the evanescent light by the scatterer, and detecting the amount of the substance to be detected.
前記透明担体チップの表面上の屈折率を調整するための、屈折率が１．３５以上かつ前記透明担体チップの屈折率未満である粘着性物質またはゴム性物質を備え、
被検出物質を含み得る前記試料を前記センサ部に供給し、前記被検出物質の量に応じた量の前記標識複合体を前記センサ部に形成せしめ、前記透明担体チップに測定光を照射して前記センサ部にエバネッセント光を生じせしめ、前記散乱体による該エバネッセント光の散乱光を検出し、前記被検出物質の量を検出するセンシング方法に用いられるものであることを特徴とするセンシングキット。 A transparent carrier chip having a sensor part to which a first capture substance for forming a labeling complex including a scatterer is fixed, and a refractive index of 1 for adjusting the refractive index on the surface of the transparent carrier chip An adhesive substance or a rubbery substance that is 35 or more and less than the refractive index of the transparent carrier chip,
The sample that can contain the substance to be detected is supplied to the sensor unit, the labeled complex corresponding to the amount of the substance to be detected is formed in the sensor unit, and the transparent carrier chip is irradiated with measurement light. A sensing kit, which is used in a sensing method for generating evanescent light in the sensor unit, detecting the scattered light of the evanescent light by the scatterer, and detecting the amount of the substance to be detected.
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013061298A (en) * | 2011-09-14 | 2013-04-04 | Toshiba Corp | Optical waveguide type measuring system, measuring method and optical waveguide type sensor chip |
| JP2014002142A (en) * | 2012-06-06 | 2014-01-09 | National Taiwan Univ | Sensor for detecting target of interest |
| JP2014525592A (en) * | 2011-09-06 | 2014-09-29 | コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェ | Method and device for combining light beams in a foil |
| JP2014532871A (en) * | 2011-11-03 | 2014-12-08 | コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェ | Parallel optical inspection of samples |
| JP2015045664A (en) * | 2014-12-10 | 2015-03-12 | 富士フイルム株式会社 | Analysis chip |
| WO2017081979A1 (en) * | 2015-11-13 | 2017-05-18 | ウシオ電機株式会社 | Detection method and analysis chip |
| WO2019082637A1 (en) * | 2017-10-25 | 2019-05-02 | 株式会社堀場製作所 | Apparatus for analyzing surface plasmon resonance, and method for analyzing surface plasmon resonance |
-
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014525592A (en) * | 2011-09-06 | 2014-09-29 | コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェ | Method and device for combining light beams in a foil |
| JP2013061298A (en) * | 2011-09-14 | 2013-04-04 | Toshiba Corp | Optical waveguide type measuring system, measuring method and optical waveguide type sensor chip |
| JP2014532871A (en) * | 2011-11-03 | 2014-12-08 | コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェ | Parallel optical inspection of samples |
| JP2014002142A (en) * | 2012-06-06 | 2014-01-09 | National Taiwan Univ | Sensor for detecting target of interest |
| JP2015045664A (en) * | 2014-12-10 | 2015-03-12 | 富士フイルム株式会社 | Analysis chip |
| WO2017081979A1 (en) * | 2015-11-13 | 2017-05-18 | ウシオ電機株式会社 | Detection method and analysis chip |
| WO2019082637A1 (en) * | 2017-10-25 | 2019-05-02 | 株式会社堀場製作所 | Apparatus for analyzing surface plasmon resonance, and method for analyzing surface plasmon resonance |
| JPWO2019082637A1 (en) * | 2017-10-25 | 2020-09-17 | 株式会社堀場製作所 | Surface plasmon resonance analyzer and surface plasmon resonance analysis method |
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