JP2010195726A - Dermatopontin production promoter - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ハンゴンソウ（Ｓｅｎｅｃｉｏ ｃａｎｎａｂｉｆｏｌｉｕｓ）、モクマオウ（Ｃａｓｕａｒｉｎａ ｓｔｒｉｃｔａ Ａｉｔ．）、ガジュマル（Ｆｉｃｕｓ ｍｉｃｒｏｃａｒｐａ Ｌ． ｆｉｌ．）、クサトベラ（Ｓｃａｅｖｏｌａ ｓｅｒｉｃｅａ Ｖａｈｌ）から選択される１種または２種以上の植物抽出物を含むデルマトポンチン産生促進剤に関する。 The present invention relates to an extract from a species that is selected from a species of Hang Saw (Senecio cannabifolios), Mohama (Casualina stricta Ait.), Gajumaru (Ficus microcarpa L. fil.), Or a plant selected from two species of Scaetola serica varieties. The present invention relates to a dermatopontin production promoter.
加齢や紫外線等の外来ストレスにより生じるシワ、シミの発生、皮膚弾性の低下といった皮膚の老化症状には、皮膚真皮の線維芽細胞の機能低下やマトリックス線維の減少または分解、変性が重要な要因となっている。従って、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るため、線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分や、マトリックス線維の産生を促進する成分に関して検討が行われている。 For skin aging symptoms such as wrinkles and spots caused by external stress such as aging and ultraviolet rays, skin dermal symptom such as decreased skin fibroblast function, matrix fiber decrease or degradation, and degeneration are important factors It has become. Therefore, in order to obtain a skin external preparation having an effect of preventing and improving skin aging, a component having an activity of promoting or promoting the proliferation of fibroblasts and a component promoting the production of matrix fibers have been studied.
例えば、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、ツリガネニンジン属植物の抽出物（特許文献２参照）、クロレラ抽出物（特許文献３参照）、ビワ抽出物（特許文献４参照）、オオボウシバナ由来のフラボノイド（特許文献５参照）等が開示されている。
また、皮膚内部の細胞外マトリックスではコラーゲンが多く含まれていることはよく知られている。この他にも非コラーゲン成分が多種存在し、種々の生理活性を有する。非コラーゲン成分としてはエラスチンやプロテオグリカンが量的に多いということは以前より知られてきたが、低分子量の分子については着目されていなかった。しかし１９８９年にプロテオグリカンの１つであるデコリンの精製時に、分子量２２ｋＤａの蛋白質が同時に精製され、後にデルマトポンチンと命名された(非特許文献１)。その後、細胞外マトリックス成分であるデルマトポンチンの機能解析が行われている（非特許文献２）。
このように、これまで多くの天然由来成分が抗老化剤として応用されてきた。しかし、天然由来成分の中には、未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた抗老化効果を有する有効成分の開発が期待されていた。 Thus, many naturally derived components have been applied as anti-aging agents. However, there are many naturally-derived ingredients whose effects are not yet known, and the development of an active ingredient having an excellent anti-aging effect has been expected.
本発明者らは、真皮に存在する細胞外マトリックス成分であるデルマトポンチンの産生を促進することにより、シワ、タルミ、ハリといった老化症状を防止・改善することができる天然由来成分についてスクリーニングを行った。その結果、ハンゴンソウ、モクマオウ、ガジュマル、クサトベラから得られる成分が優れたデルマトポンチン産生促進作用を有することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。 The present inventors screened for naturally-derived components that can prevent and ameliorate aging symptoms such as wrinkles, tarmi, and tension by promoting the production of dermatopontin, an extracellular matrix component present in the dermis. As a result, it has been found that components obtained from Hangonsou, Mokumao, Banyan and Kusatobella have an excellent dermatopontin production promoting action, and further studies have been made to complete the present invention.
すなわち本発明は、ハンゴンソウ、モクマオウ、ガジュマル、クサトベラから選択される１種または２種以上の植物抽出物を含むデルマトポンチン産生促進剤に関する。 That is, the present invention relates to a dermatopontin production promoter containing one or more plant extracts selected from Hangonsou, Mokumau, Banyan, and Kusatbella.
本発明によれば、ハンゴンソウ、モクマオウ、ガジュマル、クサトベラから選択される１種または２種以上の植物抽出物を配合することにより、優れた効果を有するデルマトポンチン産生促進剤を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the dermatopontin production promoter which has the outstanding effect can be provided by mix | blending 1 type, or 2 or more types of plant extracts selected from Hangonsou, Mokumao, Banyan, and Kusatobella.
本発明で用いるハンゴンソウは、キク科、キオン属（Ｓｅｎｅｃｉｏ Ｌ．）の双子葉植物であり、東アジアの北部に分布し、本州中部以北の山地の湿地草原や林縁に生える多年草で、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは新芽を用いるのがよい。 Hangonsou used in the present invention is a dicotyledonous plant of the family Asteraceae, Senecio L., which is distributed in the northern part of East Asia and is a perennial grass that grows in the wetland grasslands and forest margins in the mountains north of central Honshu. , Stems, flowers, roots and the like and whole plants can be used, but preferably shoots are used.
本発明で用いるモクマオウは、モクマオウ科、モクマオウ属（Ｃａｓｕａｒｉｎａ Ａｄａｎｓ．）の双子葉植物であり、オーストラリア原産の常緑の小高木で、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは枝葉を用いるのがよい。 The Omaumao used in the present invention is a dicotyledonous plant of Casuarina Adans., Which is an evergreen small tree native to Australia, and uses parts such as leaves, stems, flowers, roots, and whole plants. However, it is preferable to use branches and leaves.
本発明で用いるガジュマルは、クワ科、イチジク属（Ｆｉｃｕｓ Ｌ．）の双子葉植物で、気根を垂らす巨大な常緑樹であり、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは葉を用いるのがよい。 The banyan tree used in the present invention is a dicotyledonous plant of the family Mulaceae, Ficus L., which is a huge evergreen tree that hangs the air roots, and uses parts such as leaves, stems, flowers, roots and whole plants. Although it is possible, it is preferable to use leaves.
本発明で用いるクサトベラは、クサトベラ科、クサトベラ属（Ｓｃａｅｖｏｌａ Ｌ．）の双子葉植物であり、東南アジアからオーストラリア、南太平洋諸島の熱帯域海岸に普通な、常緑で草本的な低木で、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは茎を用いるのがよい。 The Xanthobella used in the present invention is a dicotyledonous plant belonging to the family of the family Xatoberidae (Scaevola L.), and is an evergreen and herbaceous shrub that is common from the Southeast Asia to Australia and the tropical coast of the South Pacific Islands. , Flowers, roots, etc. and whole plants can be used, but stems are preferably used.
抽出の際は、植物を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。 In the extraction, the plant may be used as it is, but considering the extraction efficiency, it is preferable to perform the extraction after performing processing such as shredding, drying, and pulverization.
抽出は、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬して行うことができる。抽出溶媒は、必要に応じて加熱してもよい。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり、抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。 The extraction can be performed by immersing in an arbitrary extraction solvent for a predetermined time. The extraction solvent may be heated as necessary. Alternatively, the extraction can be performed using a supercritical fluid or a subcritical fluid. In order to increase extraction efficiency, stirring or homogenization in an extraction solvent may be performed. The extraction temperature is suitably about 5 ° C. to the boiling point of the extraction solvent. The extraction time varies depending on the type of extraction solvent and the extraction temperature, but is suitably about 1 hour to 14 days.
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、好ましくは、水、エタノールがよい。これらは単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。 As an extraction solvent, in addition to water, lower alcohols such as methanol, ethanol, propanol and isopropanol; polyhydric alcohols such as 1,3-butylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol and glycerin; ethers such as ethyl ether and propyl ether Solvents such as esters such as butyl acetate and ethyl acetate; ketones such as acetone and ethyl methyl ketone can be used, and water and ethanol are preferable. These may be used alone or in combination of any two or more. Saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like may be used.
本発明で用いる植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間そのまま静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。本発明で用いる植物の前記抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。 The plant extract used in the present invention can be used as it is, but it may be left standing for a certain period of time and matured, or the concentrated and dried product in water or a polar solvent. It can be dissolved again and used. Alternatively, it may be used after performing purification treatment such as decolorization, deodorization, and desalting, and fractionation treatment by column chromatography or the like within a range not impairing these physiological functions. The said extract of a plant used by this invention, its processed material, and a fraction can also be lyophilized | freeze-dried after each process and fractionation, and can also be melt | dissolved and used for a use solvent. It can also be used by encapsulating in vesicles such as liposomes or microcapsules.
本発明で用いる植物抽出物は、抗老化効果を有する優れたデルマトポンチン産生促進剤として利用することができる。 The plant extract used in the present invention can be used as an excellent dermatopontin production promoter having an anti-aging effect.
本発明で用いる植物抽出物を有効成分とするデルマトポンチン産生促進剤は、優れたヒト真皮線維芽細胞のデルマトポンチン産生促進作用を有し、優れた老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。 The dermatopontin production promoter comprising the plant extract used in the present invention as an active ingredient has an excellent dermatopontin production promoting action of human dermal fibroblasts, and exhibits an excellent effect in preventing and improving excellent aging symptoms.
これらの各剤は、本発明で用いる植物またはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状または粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、またはその他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤または分散剤等）を任意に含むことができる。 As long as each of these agents contains the plant used in the present invention or an extract thereof as an active ingredient, the form and presence / absence of addition of other ingredients are not limited at all. As for the form, any form such as liquid, paste, gel, solid or powder can be selected according to its use and the like, vehicle (excipient), solvent, Or other general additives (an antioxidant, a coloring agent, a dispersing agent, etc.) can be included arbitrarily.
ここで皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品または外用医薬品等の皮膚または毛髪に外用される全ての外用組成物を意味している。 Here, the external preparation for skin means all external compositions for external use on the skin or hair, such as cosmetics, quasi-drugs or external pharmaceuticals.
皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、カラミンローション等の分散系、またはクリームや乳液等の乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤またはパップ剤等の種々の剤型で提供することもできる。 The dosage form of the external preparation for skin is arbitrary, and can be provided, for example, as a solubilization system such as lotion, a dispersion system such as calamine lotion, or an emulsification system such as cream or emulsion. Furthermore, it can also be provided in various dosage forms such as aerosol form, ointment or poultice filled with propellant.
具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料またはメイクアップ化粧料等の各種化粧料；液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼付剤またはパップ剤等の様々な形態の化粧料、医薬部外品または外用医薬品などが例示できる。 Specifically, various cosmetics such as emulsions, creams, lotions, lotions, packs, cosmetic liquids, cleaning agents or makeup cosmetics; liquids, ointments, powders, granules, aerosols, patches or poultices Various forms of cosmetics, quasi-drugs, or external medicines can be exemplified.
皮膚外用剤には、本発明で用いる植物またはその抽出物の他に、その用途と必要に応じて、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料および洗浄料等に通常配合される任意の成分、例えば、水、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防菌防かび剤、抗酸化剤、またはアルコール類等を適宜配合することができる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の抗老化剤あるいは本発明で用いる植物以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。 In addition to the plant or extract thereof used in the present invention, the external preparation for skin is usually blended in pharmaceuticals, quasi-drugs, skin cosmetics, hair cosmetics and cleansing agents, etc., as required and necessary. Optional ingredients such as water, oily ingredients, moisturizers, powders, pigments, emulsifiers, solubilizers, gelling agents, detergents, UV absorbers, anti-inflammatory agents, thickeners, pH adjusters, chelates Agents, drugs (medicinal ingredients), fragrances, resins, fungicides, fungicides, antioxidants, alcohols, and the like can be appropriately blended. Furthermore, in the range which does not impair the effect of this invention, combined use with other anti-aging agents, plants other than the plant used by this invention, or its extract is also possible.
本発明で用いる植物またはその抽出物の皮膚外用剤への配合量は、種類や目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して固形分換算で、好ましくは０．０００１〜１０．０質量％であり、より好ましくは０．００１〜５．０質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５質量％であり、一層好ましくは０．１〜５質量％である。 The amount of the plant or extract thereof used in the present invention to the external preparation for skin can be adjusted depending on the type, purpose, etc., but from the viewpoint of the effect and stability, preferably in terms of solid content with respect to the total amount. Is 0.0001-10.0 mass%, More preferably, it is 0.001-5.0 mass%, More preferably, it is 0.01-5 mass%, More preferably, it is 0.1-5 mass% %.
以下に本発明で用いる植物抽出物の調製例、抗老化効果を評価するための試験方法、皮膚外用剤としての処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによってなんら限定されるものではない。 Hereinafter, preparation examples of plant extracts used in the present invention, test methods for evaluating anti-aging effects, and formulation examples as external preparations for skin will be described in more detail, but the technical scope of the present invention is limited by these. Is not to be done.
［抽出物１］
ハンゴンソウの新芽の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
[Extract 1]
To 100 g of dried pulverized shoots of Hangon Sou, 2.0 kg of 50 mass% ethanol aqueous solution was added and extracted at room temperature for 2 hours with stirring. The extract was collected by filtration, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain extract 1.
［抽出物２］
モクマオウの枝葉の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物２を得た。
[Extract 2]
To 100 g of dried pulverized leaves of oleander, 2.0 kg of a 50% by mass aqueous ethanol solution was added and extracted at room temperature for 2 hours with stirring. The extract was collected by filtration, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain extract 2.
［抽出物３］
ガジュマルの葉の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物３を得た。
[Extract 3]
To 100 g of dry pulverized banyan leaves, 2.0 kg of a 50% by mass aqueous ethanol solution was added and extracted at room temperature for 2 hours with stirring. The extract was collected by filtration, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain extract 3.
［抽出物４］
クサトベラの茎の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物４を得た。
[Extract 4]
To 100 g of dried ground stalks of Kusatella, 2.0 kg of a 50% by mass aqueous ethanol solution was added and extracted at room temperature for 2 hours with stirring. The extract was collected by filtration, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain extract 4.
上記抽出物を用いて、各効果の評価を行った。 Each effect was evaluated using the said extract.
［実施例１］
＜ｃＤＮＡの調製＞
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて表１〜４に示した濃度となるように調整した抽出物１〜４を添加した培養液に交換し、さらに２４時間培養した。ｍＲＮＡの抽出及びｃＤＮＡ合成には、SuperScript III cell direct cDNA Synthesis System（Invitrogen社製キット）を使用した。
[Example 1]
<Preparation of cDNA>
Normal human dermal fibroblasts were seeded in a 96-well microplate so as to be 1.0 × 10 4 cells per well. Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) supplemented with 5 wt% fetal bovine serum (FBS) was used as the seeding medium. After 24 hours, the medium was replaced with a culture solution added with extracts 1 to 4 adjusted to have the concentrations shown in Tables 1 to 4 in a 5% by mass FBS-added DMEM medium, and further cultured for 24 hours. SuperScript III cell direct cDNA Synthesis System (Invitrogen kit) was used for mRNA extraction and cDNA synthesis.
［実施例２］
＜デルマトポンチンの産生促進効果評価＞
デルマトポンチンの産生促進効果の評価は、調製したｃＤＮＡ内のデルマトポンチンＤＮＡ量を定量することにより行った。
評価機器としてApplied Biosystems StepOnePlus（登録商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Applied Biosystems Japan社製）を用いた。試薬にはFast SYBR（登録商標） Green Master Mix（Applied Biosystems Japan社製）を、デルマトポンチンのセンス側プライマーTGTCGCTACAGCAAGAGGTGおよびアンチセンス側プライマーTTCCACTGCAGAGAAAGTGGもしくはＧＡＰＤＨのセンス側プライマーTTTGGTATCGTGGAAGGACTCおよびアンチセンス側プライマーGAGGCAGGGATGATGTTCTGを用いた。デルマトポンチンの測定値をＧＡＰＤＨの測定値で補正し、評価エキス未処理の値をコントロールとしてエキス処理によるデルマトポンチンの産生促進作用を相対比較した。
[Example 2]
<Dermatopontin production promotion effect evaluation>
Evaluation of the production promoting effect of dermatopontin was performed by quantifying the amount of dermatopontin DNA in the prepared cDNA.
Applied Biosystems StepOnePlus (registered trademark) real-time PCR system (Applied Biosystems Japan) was used as an evaluation device. Fast SYBR (registered trademark) Green Master Mix (Applied Biosystems Japan) was used as a reagent, and dermatopontin sense side primer TGTCGCTACAGCAAGAGGTG and antisense side primer TTCCACTGCAGAGAAAGTGG or GAPDH sense side primer TTTGGTATCGTGGAAGGACTC and antisense side primer GAGGCAGGGATGATGTTCTG were used. The measured value of dermatopontin was corrected with the measured value of GAPDH, and the production promoting effect of dermatopontin by the extract treatment was compared relative to the value of the untreated evaluation extract as a control.
ハンゴンソウ５０％エタノール抽出物のヒト真皮線維芽細胞デルマトポンチン産生促進作用の評価結果 Evaluation result of human dermal fibroblast dermatopontin production promoting effect of Hangon Sou 50% ethanol extract
モクマオウ５０％エタノール抽出物のヒト真皮線維芽細胞デルマトポンチン産生促進作用の評価結果 Evaluation results of human dermal fibroblast dermatopontin production-promoting effect of 50% ethanol extract of Mokumau
ガジュマル５０％エタノール抽出物のヒト真皮線維芽細胞デルマトポンチン産生促進作用の評価結果 Evaluation result of human dermal fibroblast dermatopontin production promoting effect of 50% banyan ethanol extract
クサトベラ５０％エタノール抽出物のヒト真皮線維芽細胞デルマトポンチン産生促進作用の評価結果 Evaluation result of human dermal fibroblast dermatopontin production promoting effect of Kusatobella 50% ethanol extract
以上の結果から、ハンゴンソウ、モクマオウ、またはクサトベラ抽出物は、優れたデルマトポンチン産生促進作用を有することが明らかとなった。 From the above results, it has been clarified that the extract of Hangonsou, Mokumau, or Kusatobella has an excellent dermatopontin production promoting action.
本発明のデルマトポンチン産生促進剤は、皮膚化粧料、毛髪用化粧料または洗浄料等の皮膚外用剤、医薬品、医薬部外品に配合して用いるのに有用である。また、本発明に係る、ハンゴンソウ、モクマオウ、ガジュマル、クサトベラ抽出物は、天然由来成分であることから、安全性が高いことが容易に考えられ、皮膚外用剤としての意義も大きく、したがって本発明は、新たな皮膚外用剤として有用である。 The dermatopontin production promoter of the present invention is useful for use in skin external preparations such as skin cosmetics, hair cosmetics or cleaning agents, pharmaceuticals, and quasi drugs. In addition, the extract of Hangonsou, Mokumao, Banyan, Kusatobella according to the present invention is a naturally derived component, so it is easily considered to be highly safe and has great significance as an external preparation for skin. It is useful as a new external preparation for skin.
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