JP2010017094A - 酵素反応によりアセトアルデヒドを製造する方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ピルビン酸デカルボキシラーゼを用いて、ピルビン酸を脱炭酸させてアセトアルデヒドを生成させる酵素反応において、生成したアセトアルデヒドを留去しながら、該酵素反応を行うことにより、ピルビン酸デカルボキシラーゼの活性を損なうことなく、効率的にアセトアルデヒドを製造する方法。
【選択図】なし
Description
項1. ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応によってアセトアルデヒドを製造する方法であって、生成したアセトアルデヒドを留去しながら該酵素反応を行うことを特徴とする、アセトアルデヒドの製造方法。
項2. 前記酵素反応を常圧下50℃以上の条件で行うことにより、酵素反応中に生成するアセトアルデヒドを留去する、項1に記載の製造方法。
項3. 前記酵素反応を、反応温度及び圧力雰囲気が下記の式(A)を満たす環境下で行うことにより、酵素反応中に生成するアセトアルデヒドを留去する、項1に記載の製造方法。
項5. ピルビン酸から酵素反応によりエタノールを製造する方法であって、
(1) ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応において、生成したアセトアルデヒドを留去しながら該酵素反応を行うことにより、アセトアルデヒドを得る工程、及び
(2)前記工程で得られたアセトアルデヒドにエタノールデヒドロゲナーゼを作用させて、エタノールを得る工程。
1.アセトアルデヒドの製造方法
本発明の製造方法では、生成したアセトアルデヒドを留去しながら、ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応を行うことを特徴とする。
基質溶液:10 mM ピルビン酸カリウム、0.1 mM チアミンピロフォスフェート、5 mM 塩化マグネシウム、0.15 mM NADH、10 Uアルコールデヒドロゲナーゼ(酵母由来, 和光純薬製cat. No.300-50021)を含む酢酸緩衝液(測定対象のピルビン酸デカルボキシラーゼの至適pHに調整)を調製する。
測定プロトコール:
(1)光路長10mmのキュベットに上記基質溶液1mlをとり、50℃で3分間プレインキュベートする。
(2)酵素溶液を1〜5ml混合し、340 nmにおける吸光度の減少(NADHの減少量)を測定することで、ピルビン酸デカルボキシラーゼによってピルビン酸より生成したアセトアルデヒドの生成速度を測定する。
2.エタノールの製造方法
本発明は、上記アセトアルデヒドの製造方法を利用して、更に、ピルビン酸から酵素反応によりエタノールを製造する方法についても提供する。具体的には、本発明では、下記工程(1)及び(2)を経ることによって、エタノールの製造が実現される。
(1)ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応において、生成するアセトアルデヒドを留去しながら該酵素反応を行うことにより、アセトアルデヒドを得る工程、及び
(2)前記工程(1)で得られたアセトアルデヒドにエタノールデヒドロゲナーゼを作用させて、エタノールを得る工程。
実施例
0.1 M酢酸緩衝液(pH6.0)に、ピルビン酸デカルボキシラーゼ(配列番号1のアミノ酸配列からなる酵素、Zymobacter palmae由来、至適温度60℃、至適pH6.0、配列番号2に示す塩基配列の遺伝子をpET21dにクローニングし大腸菌にて発現させた)を2.7U/ml、チアミンピロフォスフェートを0.1 mM、MgCl2を5 mM、ピルビン酸を10mMとなるように添加し、常圧下で、30、40、50又は55℃の温度条件で5分間緩やかに振とう(50rpm)して、酵素反応を行った。なお、反応液から生成するアセトアルデヒドが揮散により留去されるように、酵素反応を行う容器を設定しておき、酵素反応中に留去されたアルデヒドを冷却することにより、アセトアルデヒドを液化させて回収した。
0.1M酢酸緩衝液(pH6.0)に、ピルビン酸デカルボキシラーゼ(配列番号1のアミノ酸配列からなる酵素、Zymobacter palmae由来、至適温度60℃、至適pH6.0、配列番号2に示す塩基配列の遺伝子をpET21dにクローニングし大腸菌にて発現させた)を2.7U/ml、チアミンピロフォスフェートを0.1 mM、MgCl2を5 mM、及びピルビン酸を10mMとなるように添加し、常圧下で、30、40、50又は55℃の温度条件で5分間静置して、酵素反応を行った。なお、本酵素反応中は、酵素反応を行う容器を密閉状態にして、反応液から生成するアセトアルデヒドが揮散されないように設定した。
Claims (5)
- ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応によってアセトアルデヒドを製造する方法であって、生成したアセトアルデヒドを留去しながら該酵素反応を行うことを特徴とする、アセトアルデヒドの製造方法。
- 前記酵素反応を常圧下50℃以上の条件で行うことにより、酵素反応中に生成するアセトアルデヒドを留去する、請求項1に記載の製造方法。
- 前記ピルビン酸デカルボキシラーゼが、Zymobacter属に属する耐熱菌由来の耐熱性酵素である、請求項1乃至3のいずれかに記載の製造方法。
- ピルビン酸から酵素反応によりエタノールを製造する方法であって、
(1) ピルビン酸にピルビン酸デカルボキシラーゼを作用させる酵素反応において、生成したアセトアルデヒドを留去しながら該酵素反応を行うことにより、アセトアルデヒドを得る工程、及び
(2)前記工程で得られたアセトアルデヒドにエタノールデヒドロゲナーゼを作用させて、エタノールを得る工程。
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