JP2010006728A - Recalcification promoter - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ラクトビオン酸を含有する、抗う蝕機能を有する再石灰化促進剤に関する。 The present invention relates to a remineralization accelerator having an anti-cariogenic function, which contains lactobionic acid.
う蝕は、いわゆるむし歯のことである。う蝕はどの世代でも抱える一般的な病気である。特に歯の萌出後の数年は石灰化度が低いためう蝕になりやすく、未成年に多く見られる。また、高齢化社会においては、老齢期でも健康な歯を有することは重要なことである。そのため、う蝕の予防が注目されている。 A caries is what is called a cavity. Caries are a common disease of all generations. Especially in the years after tooth eruption, the degree of calcification is low, so it tends to cause caries and is often seen in minors. In an aging society, it is important to have healthy teeth even in the old age. Therefore, prevention of caries has attracted attention.
う蝕のメカニズムは、口腔内の細菌が糖質から酸をつくり、それによって歯質からカルシウムとリン酸が溶解されて起こる。この現象を脱灰という。う蝕の原因とされる口腔内の細菌として、ストレプトコッカス・ミュータンスが良く知られている。食事後に、ストレプトコッカス・ミュータンスが口腔内に残存した糖分から酸を作る。この酸が歯の表面を形成しているエナメル質のハイドロキシアパタイトを溶解し、カルシウムとリン酸が溶出してくる。これが繰り返されることでう蝕が発生する。 The mechanism of caries occurs when bacteria in the oral cavity produce acid from carbohydrates, which dissolves calcium and phosphate from the tooth. This phenomenon is called decalcification. Streptococcus mutans is well known as a bacteria in the oral cavity that is a cause of dental caries. After a meal, Streptococcus mutans makes acid from the sugar remaining in the mouth. This acid dissolves the enamel hydroxyapatite forming the tooth surface, and calcium and phosphoric acid are eluted. By repeating this, caries occurs.
しかし、唾液中にはカルシウムとリン酸が十分にあるため、再びリン酸カルシウムとして脱灰部分に沈着する。この現象を再石灰化という。再石灰化により、脱灰した歯牙を十分に再生することが可能となれば、う蝕の発生を抑えることが可能となる。そこで、口腔内に再石灰化を促進する物質を加えることで、再石灰化が促進され抗う蝕作用が期待される。 However, since there is enough calcium and phosphate in the saliva, it again deposits on the decalcified portion as calcium phosphate. This phenomenon is called remineralization. If remineralization can sufficiently regenerate the decalcified teeth, the occurrence of caries can be suppressed. Therefore, by adding a substance that promotes remineralization in the oral cavity, remineralization is promoted and anti-cariogenic action is expected.
そのため、これまでに次のような再石灰化促進物質が報告されている。例えば糖アルコール、特にキシリトールが良く知られている(特許文献1)。また、リン酸化オリゴ糖(特許文献2)やミセル性リン酸カルシウム−ホスホペプチド複合体(特許文献3)などが知られている。
しかしながら、これまでの再石灰化促進物質は、十分な効果が得られなかったり、下痢などの副作用が生じるなどの問題があった。例えば、キシリトールなどの糖アルコールを含む食品を多量に摂取することで、軟便や下痢などの症状を起こすことが報告されている。 However, conventional remineralization promoting substances have problems such as insufficient effects and side effects such as diarrhea. For example, it has been reported that symptoms such as loose stool and diarrhea are caused by ingesting a large amount of food containing sugar alcohol such as xylitol.
本発明は、う蝕の予防に有用な再石灰化促進剤を提供することを課題とするものである。 An object of the present invention is to provide a remineralization accelerator useful for preventing dental caries.
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行なった結果、ラクトビオン酸が良好な再石灰化促進作用を有し、う蝕を予防すること見出し、本発明に至った。 As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have found that lactobionic acid has a good remineralization promoting action and prevents caries, leading to the present invention.
すなわち本発明の第一は、ラクトビオン酸を含有することを特徴とする再石灰化促進剤を要旨とするものである。 That is, the first of the present invention is a remineralization accelerator characterized by containing lactobionic acid.
本発明の第二は、前記の再石灰化促進剤を含有することを特徴とする口腔用組成物を要旨とするものであり、好ましくは、再石灰化促進剤が、口腔用組成物の総質量に対して、0.01〜100質量%の割合で含有するものである。 The second of the present invention is a gist of an oral composition characterized in that it contains the remineralization accelerator, and preferably the remineralization accelerator is a total of the oral composition. It contains in the ratio of 0.01-100 mass% with respect to mass.
本発明の第三は、前記の再石灰化促進剤を含有することを特徴とする飲食物を要旨とするものであり、好ましくは、再石灰化促進剤が、飲食物の総質量に対して、0.01〜100質量%の割合で含有するものである。 3rd of this invention makes the summary the food / beverage characterized by including the said remineralization promoter, Preferably, a remineralization accelerator is with respect to the gross mass of food / beverage. , 0.01 to 100% by mass.
本発明によれば、ラクトビオン酸を含有する再石灰化促進剤や再石灰化促進剤を含有する口腔用組成物、飲食物を摂取することで、再石灰化を促進することができる。すなわち、十分な歯牙の再石灰化が可能となり、引いてはう蝕の予防、発症を抑えることができる。 According to this invention, remineralization can be accelerated | stimulated by ingesting the composition for oral cavity containing a remineralization accelerator containing a lactobionic acid, the remineralization accelerator, and food and drink. That is, sufficient remineralization of teeth can be achieved, and thus prevention of caries and onset can be suppressed.
以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
本発明で用いられるラクトビオン酸は、その形態は問わず、粉末でも水溶液でもよく、遊離のラクトビオン酸のみならず、ラクトビオン酸塩又はラクトビオノラクトンの形であってもよく、あるいはこれらの組み合わせでもよい。さらに、ラクトビオン酸含有物を用いることも可能である。これらのうち、ラクトビオン酸カルシウムが好ましい。 The lactobionic acid used in the present invention is not limited in form, and may be a powder or an aqueous solution, not only free lactobionic acid, but also in the form of lactobionate or lactobionolactone, or a combination thereof. Good. Furthermore, it is also possible to use a lactobionic acid containing material. Of these, calcium lactobionate is preferred.
ラクトビオン酸の製造方法としては、特に限定されるものではなく公知の方法が好適に使用できる。例えば、乳糖を臭素ナトリウムとともに電気を印加することによって酸化する方法が知られている。また、微生物変換・発酵法により得る方法としては、アシネトバクター属やブルクホルデリア属、アセトバクター属、グルコノバクター属などの乳糖酸化活性を有する微生物を、乳糖に作用し酸化することによって得る方法が知られている(詳細は、特開2001−245657号公報、特開2007−28917号公報などを参照)。このようにして得られたラクトビオン酸が本発明において有効に用いられる。 The method for producing lactobionic acid is not particularly limited, and a known method can be suitably used. For example, a method for oxidizing lactose by applying electricity together with sodium bromine is known. Moreover, as a method obtained by microbial conversion / fermentation method, there is a method of obtaining microorganisms having lactose oxidizing activity such as Acinetobacter genus, Burkholderia genus, Acetobacter genus, Gluconobacter genus by acting on lactose and oxidizing them. (For details, refer to JP 2001-245657 A, JP 2007-28917 A, etc.). The lactobionic acid thus obtained is effectively used in the present invention.
本発明の第一は、ラクトビオン酸を含有する再石灰化促進剤であり、その際、ラクトビオン酸は0.01〜100質量%の割合で範囲内にあるものである。ラクトビオン酸の量は、後述する定量方法により測定された値である。 The first of the present invention is a remineralization accelerator containing lactobionic acid, in which case lactobionic acid is within a range of 0.01 to 100% by mass. The amount of lactobionic acid is a value measured by a quantitative method described later.
本発明の再石灰化促進剤を製造するには、特にその製造方法は問わない。例えば(1)所定量のラクトビオン酸を一旦水に溶解し、噴霧乾燥する。(2)所定量のラクトビオン酸含有物を、造粒、乾燥する。(3)所定量の乳糖やそれを含む溶液に、乳糖を酸化する微生物、好ましくは酢酸菌から選ばれる微生物を接触させ、造粒、乾燥する。(4)(1)〜(3)の方法で得られた粉末、顆粒をそのまま打錠、あるいはカプセルに封入する等の方法が挙げられる。これらの方法により得られた再石灰化促進剤は、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤等の形態をとっている。 In order to produce the remineralization accelerator of the present invention, the production method is not particularly limited. For example, (1) a predetermined amount of lactobionic acid is once dissolved in water and spray-dried. (2) A predetermined amount of lactobionic acid-containing material is granulated and dried. (3) A microorganism that oxidizes lactose, preferably a microorganism selected from acetic acid bacteria, is brought into contact with a predetermined amount of lactose or a solution containing the same, and granulated and dried. (4) A method of compressing the powder or granule obtained by the methods (1) to (3) as it is or encapsulating it in a capsule can be mentioned. The remineralization accelerator obtained by these methods is in the form of powder, granules, tablets, capsules and the like.
上記のような方法により作製した再石灰化促進剤の再石灰化促進作用の評価方法は、通常用いられる再石灰化測定方法を用いて調べることができる。例えば、トランスヴァーサル・マイクロラジオグラフィー法が知られている。また以下に例示するような簡易試験系を用いて評価することができる。ただし、本発明における再石灰化促進作用は、この実験系によって評価されるものに限定されるわけではない。 The evaluation method of the remineralization promotion effect of the remineralization accelerator produced by the method as described above can be examined by using a commonly used remineralization measurement method. For example, transversal microradiography is known. Moreover, it can evaluate using the simple test system which is illustrated below. However, the remineralization promoting action in the present invention is not limited to that evaluated by this experimental system.
3mM CaCl2溶液、1.5mM KH2PO4溶液、及び20mM HEPES緩衝液(pH7.0)をそれぞれ含んだ溶液を基本溶液とし、この溶液へ再石灰化促進剤を添加融和させる。この基本溶液にハイドロキシアパタイトを含ませたものと含ませないものの2種類の試験溶液をそれぞれ調整する。37℃で24時間インキュベートした後、10000rpmで3分間遠心分離して上清溶液を得る。この上清溶液中のカルシウムイオン濃度をOCPC法(和光純薬株式会社製:「カルシウムCテストワコー」を用いて測定)で測定し、可溶性Ca率(%)の差により、見かけ上の再石灰化率(%)とする。この方法は「口腔衛生会誌」51巻、p.526-527、(2001)に詳しい。 A solution containing 3 mM CaCl2 solution, 1.5 mM KH2PO4 solution, and 20 mM HEPES buffer (pH 7.0) is used as a basic solution, and a remineralization accelerator is added to this solution for integration. Two types of test solutions are prepared, one containing hydroxyapatite and the other not containing hydroxyapatite. After incubating at 37 ° C. for 24 hours, a supernatant solution is obtained by centrifuging at 10,000 rpm for 3 minutes. The calcium ion concentration in the supernatant solution was measured by the OCPC method (measured using “Calcium C Test Wako” manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and apparently recalculated due to the difference in soluble Ca percentage (%). Conversion rate (%). This method is detailed in “Oral Hygiene Journal”, Volume 51, p.526-527, (2001).
上記した再石灰化促進剤にカルシウムを配合することが可能である。使用するカルシウムとしては、食用に供することが可能な天然物又は、食品添加物に指定されている種類、形態、品質を備えていれば良く、無機質、有機物、その形態等、特に制限はない。具体的に例を挙げれば、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、L−グルタミン酸カルシウム、クエン酸カルシウム、燐酸一水素カルシウム、燐酸二水素カルシウム、燐酸三カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ピロ燐酸二水素カルシウム、エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム、グルコン酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、水酸化カルシウム、乳酸カルシウム、パントテン酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、5’−リボヌクレオチドカルシウム、ステアロイル乳酸カルシウム、硫酸カルシウム等が挙げられる。その他、天然物としてカルシウムとマグネシウムをほぼ2:1の割合で含有するドロマイトも使用出来る。 It is possible to mix calcium with the above-mentioned remineralization accelerator. Calcium to be used is not particularly limited as long as it has a natural product that can be used for food or a kind, form, and quality designated as a food additive, and is inorganic, organic, and its form. Specific examples include calcium carbonate, calcium chloride, calcium L-glutamate, calcium citrate, calcium monohydrogen phosphate, calcium dihydrogen phosphate, tricalcium phosphate, carboxymethyl cellulose calcium, calcium dihydrogen pyrophosphate, ethylenediaminetetraacetic acid. Examples include calcium disodium, calcium gluconate, calcium glycerophosphate, calcium hydroxide, calcium lactate, calcium pantothenate, calcium propionate, 5′-ribonucleotide calcium, stearoyl calcium lactate, and calcium sulfate. In addition, dolomite containing calcium and magnesium in a ratio of approximately 2: 1 can be used as a natural product.
本発明の第二は、上記した再石灰化促進剤を含有する口腔用組成物であり、その際、再石灰化促進剤を組成物の総質量に対して0.01〜100質量%、好ましくは0.05〜50質量%、さらに好ましくは0.1〜20質量%の割合で配合するのが望ましい。口腔用組成物としては、例えば、トローチ剤、ロゼンジ剤、口腔用軟膏、口腔用スプレー、口腔用ジェル、歯磨き剤、うがい薬などが含まれる。 The second of the present invention is a composition for oral cavity containing the above-mentioned remineralization accelerator. In that case, the remineralization accelerator is 0.01 to 100% by mass, preferably based on the total mass of the composition. Is preferably added in a proportion of 0.05 to 50% by mass, more preferably 0.1 to 20% by mass. Examples of oral compositions include lozenges, lozenges, oral ointments, oral sprays, oral gels, dentifrices, mouthwashes, and the like.
本発明の口腔用組成物を製造するには、特にその製造方法は問わず、用途に応じた形態とすればよい。 In order to manufacture the composition for oral cavity of this invention, the manufacturing method should just be taken as the form according to the use especially.
また、本発明の口腔用組成物には、医薬製剤上許容される担体又は添加物が配合されていてもよい。このような担体及び添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤などの他、リポゾームなどの人工細胞構造物などが挙げられる。使用される添加物は、製剤の剤形に応じて適宜又は組み合わせて選択される。本発明の口腔用製剤は、さらに他の薬理成分を含有していてもよい。 The oral composition of the present invention may contain a pharmaceutical preparation acceptable carrier or additive. Examples of such carriers and additives include water, pharmaceutically acceptable organic solvents, collagen, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, carboxyvinyl polymer, sodium alginate, water-soluble dextran, sodium carboxymethyl starch, pectin, xanthan gum, Others such as gum arabic, casein, gelatin, agar, glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, petrolatum, paraffin, stearyl alcohol, stearic acid, human serum albumin, mannitol, sorbitol, lactose, surfactants acceptable as pharmaceutical additives, etc. And artificial cell structures such as liposomes. The additive used is selected appropriately or in combination depending on the dosage form of the preparation. The oral preparation of the present invention may further contain other pharmacological components.
本発明の第三は、上記した再石灰化促進剤を含有する飲食物であり、その際、再石灰化促進剤を飲食物の総質量に対して0.01〜100質量%、好ましくは0.05〜50質量%、さらに好ましくは0.1〜20質量%の割合で配合するのが望ましい。 The third of the present invention is a food or drink containing the above-mentioned remineralization accelerator, and in this case, the remineralization accelerator is 0.01 to 100% by mass, preferably 0, based on the total mass of the food or drink. It is desirable to blend in a proportion of 0.05 to 50% by mass, more preferably 0.1 to 20% by mass.
本発明の飲料の種類は、特に限定されない。本発明の飲料は、例えば、お茶、果物・野菜系飲料、アルコール性飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、乳飲料、清涼飲料、低カロリー飲料等の飲料を具体的に例示することができる。 The kind of beverage of the present invention is not particularly limited. Specific examples of the beverage of the present invention include beverages such as tea, fruit / vegetable beverages, alcoholic beverages, carbonated beverages, lactic acid bacteria beverages, milk beverages, soft drinks, and low calorie beverages.
本発明の食品の種類は、特に限定されない。本発明の食品は、生鮮食品であってもよいし、加工食品であってもよい。好ましくは、口腔内で一定時間保持されるチューインガム、キャンディー、キャラメル、グミ等が好ましい。 The kind of food of the present invention is not particularly limited. The food of the present invention may be a fresh food or a processed food. Preferably, chewing gum, candy, caramel, gummi, etc. that are held in the oral cavity for a certain period of time are preferable.
本発明の飲食物を製造するには、特にその製造方法は問わず、飲食物に応じた形態とすればよい。例えば(1)所定量の再石灰化促進剤をそのまま、または種々の原料と混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤等といった形態で食品、健康補助食品、サプリメントとする。(2)所定量の再石灰化促進剤を種々の原料と混合して、粉末調味料や即席茶、即席味噌汁、即席スープ等の粉末飲料とする。(3)所定量の再石灰化促進剤を種々の飲料等の原料に溶解、混合して、缶飲料、ペットボトル飲料等の飲料とする。(4)所定量の再石灰化促進剤を種々の飲料等の原料に溶解、混合したものを、さらに凍結乾燥、噴霧乾燥等により固化、粉末化して、粉末調味料や即席茶、即席味噌汁、即席スープ等の固形飲料とする。(5)所定量の再石灰化促進剤を種々の原料と混合、加工、調理して、レトルト食品、冷凍食品、和菓子、洋菓子、パン類、シリアル類、麺類等の食品とする等の製造方法、形態が挙げられる。 In order to produce the food and drink of the present invention, the production method is not particularly limited, and a form corresponding to the food and drink may be used. For example, (1) a predetermined amount of the remineralization accelerator is used as it is or mixed with various raw materials to form foods, health supplements, and supplements in the form of powders, granules, tablets, capsules, and the like. (2) A predetermined amount of remineralization accelerator is mixed with various raw materials to form powdered beverages such as powder seasonings, instant tea, instant miso soup, instant soup and the like. (3) A predetermined amount of the remineralization accelerator is dissolved and mixed in raw materials such as various beverages to obtain beverages such as can beverages and plastic bottle beverages. (4) A predetermined amount of remineralization accelerator dissolved and mixed in various beverage materials is further solidified and pulverized by freeze drying, spray drying, etc., and then used as a powder seasoning, instant tea, instant miso soup, A solid beverage such as instant soup. (5) A method for producing a food such as retort food, frozen food, Japanese confectionery, Western confectionery, breads, cereals, noodles, etc. by mixing, processing and cooking a predetermined amount of remineralization accelerator with various raw materials The form.
本発明の飲食物には、甘味料、酸味料、増粘剤、香料、保存料、ビタミン類、ミネラル類などの食品素材を配合させることが可能で、各種の食品、ドリンク類に配合することも可能である。甘味料としては、スクラロース、アセスルファムK、アスパルテーム、ステビア、サッカリン、ソーマチン、グリシン、羅漢果などの高甘味度甘味料、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトールなどの糖アルコール、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳菓オリゴ糖、キシロオリゴ糖などのオリゴ糖類、さらにはトレハロース、パラチノース、異性化糖などの単糖類及び二糖類などを例として挙げることができる。さらに、ミネラルとしては、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅などが挙げられる。 The food and drink of the present invention can be mixed with food materials such as sweeteners, acidulants, thickeners, fragrances, preservatives, vitamins, minerals, etc., and can be incorporated into various foods and drinks. Is also possible. Sweeteners include high-intensity sweeteners such as sucralose, acesulfame K, aspartame, stevia, saccharin, thaumatin, glycine, and rahan fruit, sugar alcohols such as sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, lactitol, maltitol, fructo-oligosaccharides, galacto-oligos Examples include sugars, oligosaccharides such as confectionery oligosaccharides, and xylooligosaccharides, and monosaccharides and disaccharides such as trehalose, palatinose, and isomerized sugar. Further, examples of the mineral include calcium, magnesium, iron, zinc, copper and the like.
参考例〔ラクトビオン酸の定量方法〕
ラクトビオン酸を含有する試料1gを水に溶解し、100mLとし、定量用試料とする。高速液体クロマトグラフシステム(カラム;昭和電工社製、Asahipak NH2P-50、250mm×4.6mm、カラム温度;40℃、移動相;アセトニトリル:40mMクエン酸−NaH2PO4緩衝液(pH5.0)=60:40(体積比)、流速;0.8mL/分、検出;示差屈折率)に定量用試料10μLを注入し、別途用意した標準試料(1、5、10g/L)の測定結果より作成した検量線を用いて、ラクトビオン酸の定量(C)(g/L)を行ない、次式により試料中のラクトビオン酸含量率(%)を算出した。
ラクトビオン酸含量率(%)={(C×0.1)÷1}×100
C=定量用試料中のラクトビオン酸の濃度(g/L)
Reference example [quantification method of lactobionic acid]
1 g of a sample containing lactobionic acid is dissolved in water to make 100 mL, which is used as a sample for quantification. High performance liquid chromatograph system (column: Showa Denko, Asahipak NH2P-50, 250 mm × 4.6 mm, column temperature: 40 ° C., mobile phase: acetonitrile: 40 mM citrate-NaH 2 PO 4 buffer (pH 5.0) = 60: 40 (Volume ratio), flow rate: 0.8 mL / min, detection: differential refractive index) 10 μL of a sample for quantification was injected, and a calibration curve prepared from the measurement results of separately prepared standard samples (1, 5, 10 g / L) Was used for quantification of lactobionic acid (C) (g / L), and the lactobionic acid content (%) in the sample was calculated according to the following formula.
Lactobionic acid content (%) = {(C × 0.1) ÷ 1} × 100
C = Concentration of lactobionic acid in the sample for determination (g / L)
実施例1〔再石灰化促進剤の製造〕
〔前培養〕
試験管(18 mm×200 mm)に、グルコース0.5%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%(pH7.0)を含む培地3mLを分注し、121℃で20分間殺菌した。その試験管に一白金耳のグルコノバクター・セリナス NBRC 3267を植菌し、30℃で1晩振とう培養(220rpm)した。次に上記組成培地を1L分注し121℃で20分間殺菌した3L三角フラスコに上記試験管培養液を植菌し30℃で3日間振とう培養(220rpm)した。
Example 1 [Production of remineralization accelerator]
[Pre-culture]
A test tube (18 mm × 200 mm) was dispensed with 3 mL of medium containing 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, and 0.1% magnesium sulfate (pH 7.0), and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. One platinum loop of Gluconobacter cerinas NBRC 3267 was inoculated into the test tube, and cultured with shaking (220 rpm) at 30 ° C. overnight. Next, 1 L of the above-mentioned composition medium was dispensed, and the test tube culture solution was inoculated into a 3 L Erlenmeyer flask sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, followed by shaking culture (220 rpm) at 30 ° C. for 3 days.
〔本培養〕
グルコース1.5%、ラクトース0.5%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%を含む培地(pH6.0)を20L調製し121℃で20分間殺菌した。これに上記前培養液1Lを植菌し、30℃で深部撹拌培養(300回転、1vvm)をした。48時間培養後、菌体を遠心回収した。
[Main culture]
20 L of a medium (pH 6.0) containing 1.5% glucose, 0.5% lactose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, and 0.1% magnesium sulfate was prepared and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. This was inoculated with 1 L of the above pre-cultured solution and subjected to deep agitation culture (300 rpm, 1 vvm) at 30 ° C. After culturing for 48 hours, the cells were collected by centrifugation.
〔発酵反応〕
本培養で得られた菌体すべてを15%ラクトース溶液、3%炭酸カルシウム2Lに懸濁をして、40度で通気撹拌(300回転、1vvm)した。24時間後、反応液を遠心回収した。得られた反応液を噴霧乾燥し、得られた乾燥粉末を再石灰化促進剤(実施例1)とした。再石灰化促進剤中のラクトビオン酸含量は51.2%であった。
[Fermentation reaction]
All the cells obtained in the main culture were suspended in 2 L of 15% lactose solution and 3% calcium carbonate, and aerated and stirred at 40 degrees (300 rpm, 1 vvm). After 24 hours, the reaction solution was collected by centrifugation. The obtained reaction liquid was spray-dried, and the obtained dry powder was used as a remineralization accelerator (Example 1). The lactobionic acid content in the remineralization accelerator was 51.2%.
実施例2〔再石灰化促進作用の評価〕
3 mM CaCl2溶液、1.5 mM KH2PO4溶液、及び20mM HEPES緩衝液(pH7.0)をそれぞれ含んだ溶液を基本溶液1 mLとし、この溶液へ再石灰化促進剤(実施例1)を2%濃度となるように添加融和させた。対照として、リン酸化オリゴ糖を2%濃度となるように添加した場合(比較例1)、再石灰促進剤を添加しない場合(比較例2)についても行った。上記溶液に5000mgのハイドロキシアパタイトを含ませたものと含ませないものの2種類の試験溶液をそれぞれ調整した。37 ℃で24時間インキュベートした後、10000 rpmで3分間遠心分離して上清溶液を得た。この上清溶液中のカルシウムイオン濃度をOCPC法(上述と同様)で測定し、可溶性Ca率(%)の差により、見かけ上の再石灰化率(%)とした。
Example 2 [Evaluation of remineralization promoting effect]
A solution containing 3 mM CaCl2 solution, 1.5 mM KH2PO4 solution, and 20 mM HEPES buffer (pH 7.0) was used as 1 mL of basic solution, and a remineralization accelerator (Example 1) was added to this solution at a concentration of 2%. The mixture was added and blended. As a control, the case where phosphorylated oligosaccharide was added to a concentration of 2% (Comparative Example 1) and the case where no recalcification accelerator was added (Comparative Example 2) were also performed. Two types of test solutions were prepared, one containing 5000 mg hydroxyapatite and the other not containing it. After incubating at 37 ° C. for 24 hours, the mixture was centrifuged at 10,000 rpm for 3 minutes to obtain a supernatant solution. The calcium ion concentration in the supernatant solution was measured by the OCPC method (as described above), and the apparent remineralization rate (%) was determined by the difference in the soluble Ca rate (%).
実験の結果を表1と図1に示す。本発明の再石灰化促進剤は比較例と比べて著しく高い再石灰化率を示し、再石灰化促進効果を持つことが示された。 The results of the experiment are shown in Table 1 and FIG. The remineralization accelerator of the present invention showed a recalcification rate significantly higher than that of the comparative example, indicating that it has a remineralization promoting effect.
Claims (3)
A food or drink comprising the remineralization accelerator according to claim 1.
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