JP2009501900A - 単純ヘルペスウイルス2型を検出するための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
本発明は、生物学的試料中の抗単純ヘルペスウイルス2型(HSV−2)抗体の有無を検出する方法であって、抗体を含む生物学的試料が少なくともアミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含む第一の抗原と接触させること、および、生物学的試料中の特異的な抗HSV−2 gG2抗体の有無を検出することを含む前記検出方法を提供する。ある実施形態において、抗原はJ24、JA、JA1、およびJA2より選択される。
Description
本発明はこれらの必要性に対処するものである。
これらと他の物、および本発明の利益は、以下の詳細な説明から明らかとなる。
図1Aは野生型HSV−2糖タンパク質G2(gG2)のアミノ酸配列(SEQ ID NO:01)を示す。
図1Bは野生型HSV−2糖タンパク質G2(gG2)の核酸配列(SEQ ID NO:14)を示す。
図2はヒト血清中でHSV−2非0特異的抗体と反応しているエピトープを同定するため設計および表現された、HSV−2gG2遺伝子、および特異的gG2抗原、および交差反応性抗原の図を示す。
図3は例となる交差反応性抗原の図を示す。配列位置は図1AのSEQ ID NO:01と対応する。
図4Aは例となる交差反応性抗原の配列比較を示す。
図4Bは野生型HSV−2糖タンパク質G2欠失変異型(gG2ΔMCRS1)のアミノ酸配列(SEQ ID NO:10)を示す。
図4Cは野生型HSV−2糖タンパク質G2置換変異型(gG2subMCRS1)のアミノ酸配列(SEQ ID NO:11)を示す。
図4Dは野生型HSV−2糖タンパク質G2欠失変異型(gG2ΔMCRS2)のアミノ酸配列(SEQ ID NO:12)を示す。
図4Eは野生型HSV−2糖タンパク質G2置換変異型(gG2subMCRS2)のアミノ酸配列(SEQ ID NO:13)を示す。
図5はHSV−2gG2遺伝子の異なるペプチド断片のヒト血清との反応性を示すウエスタンブロットである。ペプチドはSDS−PAGEで電気泳動され、ニトロセルロース膜にトランスファーされた。そしてヒト血清で染色した。18、19、および25−32レーンは通常であり、1−5、10−13、および16レーンはHSV−2陽性であり、6−9、14、15、17、20、21、23、24レーンはHSV−2偽陽性である。その結果は、陽性血清の多くはペプチドJ24およびJAと反応することを示した。よってJ24およびJAは、HSV−2非特異的ヒト抗体と反応するエピトープを含む。
図6は交差反応性抗原JA存在下および非存在下、全長HSV−2 gG2でコートしたELISAにおいて、真陽性血清(Pとマーク)の効果と比較した偽陽性血清(FPとマーク)に対する阻害効果を示すグラフである。試料希釈液中にJAの有る時および無い時のELISA(全gG2抗原に基づいて)指標値が図に示されている。阻害は、血清試料希釈液中でJAと混合することにより達成される。JAは、顕著に偽陽性血清由来の反応性を阻害する一方、真陽性血清には効果を及ぼさない。
図7は交差反応性抗原JAのあるときとないとき間での指標補正を示したグラフであり、交差反応性gG2抗原は真陽性および真陰性試料には作用しないが、偽陽性の反応性は阻害することを示している。多くの偽陽性(ピンク)、多くの真陽性(黄色)、および陰性(青)。JAはELISA試料希釈液中で混合された。JAのない希釈液由来の指標値およびJAのある希釈液由来の指標値は、散布図となった。通常のおよび真陽性の血清は、類似の結果を与え、対角線上にのるが、一方で偽陽性血清は対角線からはずれており、JAが偽陽性活性を阻害していることを示している。
図8は交差反応性抗原JA、JA1、およびJA2を用いた、血清群(陽性、P;陰性、N;と、偽陽性、FP、不定、EQ)へのELISA阻害研究の結果を示す。試料希釈液の4種(異なるJAペプチドありまたはなし)を比較した(JAなし、JA1あり、JA2あり、JA1とJA2あり、組換えJAあり)。JAなしの希釈液の値と様々なJAありの希釈液の値を比較したとき、真陽性および真陰性の血清では、解釈と同様、ODと指標値は顕著には変化しない。偽陽性の血清では、顕著な変化が見られた。
図9は図8のデータ表の値から指標値の変化を表したグラフである。x軸はJAなしの希釈液に基づく値を表す。y軸はJAありの希釈液に基づく値を表す。点円は偽陽性であるが、他の点は真陽性または真偽性である。偽陽性の点は対角線上から落ち、JAまたはJA1またはJA2の阻害作用を示している。
“糖タンパク質G2”、“gG2”、“HSV−2 gG”、および“HSV−2 gG2”の語は、21アミノ酸シグナル配列、4つの潜在的なN末端糖化部位と6つのシステイン残基を有する626アミノ酸からなる第一の多様な極性領域、25アミノ酸からなる膜貫通結合ドメイン、24アミノ酸からなるC末端細胞質ドメインを含んでいる、2097塩基対遺伝子によりコードされるHSV−2の699アミノ酸エンベロープタンパク質(図1A)を表す。HSV−2 gGは、McGeoch et al., J. Gen. Virol, 68:19−38(1987)に、より詳細に記載されている。HSV−2糖タンパク質G2(gG2)のアミノ酸配列は、図1Aにおいて提供される。
“正確さ”は、ある試料の同じまたは比較可能な結果を再現性よく生むアッセイの能力を表す。
本発明は、生物学的試料のような試料中の抗HSV−2抗体の存在とHSV−2に対して特異的でなくHSV−2アッセイにおいて偽陽性となりうる抗体の存在の間の識別を提供するために、交差反応性(非特異的)抗原を用いて、感受性が高く特異的な抗HSV−2抗体の検出法を提供する。本発明は、本発明方法を使用するための核酸、ポリペプチド、およびキットを含む構成も特色とする。
本発明の組成物および方法は、以下により詳細に記述される。
本発明は、交差反応性抗原を用いて、抗HSV−2抗体のアッセイにおいて妨げとなりうる(例えば、偽陽性解釈という結果となる)試料中のHSV−2に特異的でない抗体を除去することによる、試料中の抗HSV−2抗体の検出を提供する。すなわち、本発明は交差反応性抗原ポリペプチドを、同じものをコードしている核酸と同様に提供する。
GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)。
AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)(MCRS2)。
Z(0+n1)−GHTNTSSAS−X(0+n2)(SEQ ID NO:08)
ZおよびXは、天然に生じるもの、または非天然に生じるもの、遺伝学的にコードされるもの、または遺伝学的にコードされないものを含むすべてのアミノ酸から独立に選択され、残基およびn1およびn2は、独立に選択された約0から約60までのすべての整数の形であり、約2から約58まで、約2から約58まで、約4から約56まで、約6から約54まで、約8から約52まで、約10から約50まで、約12から約48まで、約14から約46まで、約16から約44まで、約18から約42まで、約20から約40まで、約22から約38まで、約24から約36まで、約26から約34まで、約28から約32までを含む。そのようなものとして、フランキング領域Z(0+n1)およびX(0+n2)は、同じ長さまたは異なる長さとすることができる。
Z(0+n1)−AAKTPPTTPAP−X(0+n2)(SEQ ID NO:09)
ZおよびXは、天然に生じるもの、または非天然に生じるもの、遺伝学的にコードされるもの、または非遺伝学的にコードされるものを含むすべてのアミノ酸から独立に選択され、残基およびn1およびn2は、独立に選択された約0から約60までのすべての整数の形であり、約2から約58まで、約2から約58まで、約4から約56まで、約6から約54まで、約6から約54まで、約8から約52まで、約10から約50まで、約12から約48まで、約14から約46まで、約16から約44まで、約18から約42まで、約20から約40まで、約22から約38まで、約24から約36まで、約26から約34まで、約28から約32までを含む。そのようなものとして、フランキング領域Z(0+n1)およびX(0+n2)は、同じ長さまたは異なる長さとすることができる。
J24(SEQ ID NO:01の399−497残基):
TVAVTPEETAVASPPATASVESSPLPAAAAATPGAGHTNTSSASAAKTPPTTPAPTTPPPTSTHATPRPTTPGPQTTPPGPATPGPVGASAAPTADSPL
(SEQ ID NO:02)
JA(SEQ ID NO:01の416−455残基):
ASVESSPLPAAAAATPGAGHTNTSSASAAKTPPTTPAPTT(SEQ ID NO:03)
JA1(SEQ ID NO:01の423−442残基):
LPAAAAATPGAGHTNTSSAS(SEQ ID NO:04);および
JA2(SEQ ID NO:01の434−453残基):
GHTNTSSASAAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:05)
例となる交差反応性抗原の配列アラインメントは、図3において図式の形で、図4Aにおいて配列の形で示される。
本発明の診断法において使用するためのポリペプチドは、さまざまな技術を用いて生産することができる。例えば、特異的なgG2および交差反応性抗原は、当業者に知られた方法を用いて、固相または溶液ペプチド合成などの化学合成により生産することができる。ペプチドの化学合成は、当の抗原が比較的小さい場合に適している可能性がある。例えば、固相ペプチド合成技術のためにJ. M. Stewart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, III.(1984)およびG.Barany and R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editors E. Gross and J. Meinhofer, vol.2、Academic Press, New York, (1980), pp. 3−254; 伝統的な溶液合成のためにM. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer−Verlag, Berlin(1984)およびE. Gross and J. Meinhofer, Eds., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, supra, Vol.1参照。
前述のように、本発明は、生物学的試料中のHSV−2に対する抗体の有無を判定する方法を提供する。本発明の方法は、特異的なgG2抗原および交差反応性抗原を、HSV−2感染を正確に検出すること、およびHSV−2特異的抗体とHSV−2に特異的でなくHSV−2アッセイにおいて偽陽性となりうる抗体との間の識別をすることのために利用する。その方法は一般に、抗HSV−2特異的抗体を含んでいると思われる生物学的試料を少なくとも第一の交差反応性抗原と接触させること、および次に抗HSV−2特異的抗体の有無を特異的なgG2抗体で検出することを含む。ある実施態様において、生物学的試料は少なくとも2つの交差反応性抗原と接触し、第一の交差反応性抗原はアミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含み、第二の交差反応性抗原はアミノ酸配列AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含む。代表的な実施態様において、交差反応性抗原は全長野生型gG2ポリペプチドからなることはない。
本発明の方法の実施において、被験者からの試料についてHSV−2に対する抗体の存在を検査する。検査される試料は、HSV−2に対する抗体を含む任意の最初の源であるか、またはそれに由来する試料である。したがって、適した試料の源は、HSV−2に対する抗体が放出された体液に由来する。関心のある試料の源は、限定するものではないが、多くの異なる体液、特に血液または血液を調製したもの、例えば血清、血漿、および全血などを含む。試料の量は、特異的なアッセイ形式に適合する任意の量とすることができる。ある実施態様において、試料は、HSV−2に対する抗体の有無を検査する前に、適した溶液に希釈される。一般に、生物学的試料を希釈するために適した溶液は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)などのような緩衝液を含み、例えば牛血清アルブミン(BSA)などの非特異的ブロッキング試薬や、Triton−X−100などの界面活性剤等、追加項目を含んでもよい。
特異的および交差反応性抗原は、生物学的試料中の反応性抗HSV−2抗体の有無を検出するための診断法として、本発明において用いられる。一形態において、本発明は、生物学的試料中の抗単純ヘルペス2型(HSV−2)抗体を検出する方法であって、生物学的試料を、試料中の非特異的抗HSV−2抗体の抗原への結合に適した条件下、アミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含む少なくとも一つの交差反応性HSV−2糖タンパク質−G(gG2)抗原と接触させること、および、生物学的試料中の抗HSV−2抗体の有無を検出することを含む上記方法であり、特異的抗HSV−2抗体は交差HSV−2 gG2抗原に結合しない。ある実施態様において、生物学的試料は少なくとも2つの交差反応性抗原と接触するものであって、一つ目の交差反応性抗原はアミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含み、二つ目の交差反応性抗原はAAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含む。
上述のように、本発明の方法を実施するために用いられるキットも提供される。対象方法を実施するためのキットは、少なくともヒト患者に由来する試料を抗HSV−2抗体の有無について検査するための試薬を含むものであって、そのようなキットは以下のものを含んでもよい。それは、特異的gG2抗原および交差反応性抗原、または特異的gG2抗原および交差反応性抗原をコードしている核酸、および/または抗体、酵素基質等のようなシグナル産生系と同じものからなる免疫アッセイ装置; 対象検出アッセイを実行するにおいて使用する多様な緩衝液; 試料中の抗HSV−2抗体の有無を検出するための基準等である。
上述のように、本発明の方法を実施するために用いられる装置も提供される。本発明の方法を実施するための装置は少なくともヒト患者に由来する試料を抗HSV−2抗体の有無について検査するための試薬を含むものであって、そのような装置は固体担体の表面に固定された特異的gG2抗原および交差反応性抗原を含んでもよい。
次の材料および方法は以下の実施例において使用された。
gG2断片のPCR増幅
Primer Select Softwareを用いることにより、全HSV−2gG2遺伝子の多数のより短い領域を増幅するため、プライマーはデザインされた。PGEX 4T−3ベクターとDNA挿入断片を連結すること、およびウェスタンブロットにおいて検出するため各コンストラクトのC末端に6X−ヒスチジンタグを追加することの両方が可能となるよう、プライマーに追加の配列が加えられた。プライマー(Qiagen)は、テンプレートとしてFocus DiagnosticsのHSV−2クローンを利用してセグメントを増幅するため、野生型のPfu DNAポリメラーゼ(Strategene)と一緒に使用された。PCR反応はGeneAmp 9700 Thermocyclerで行われた。単位複製配列は、各コンストラクトについて予測したバンドサイズを確認するため2%アガロースゲルで流され、QIAquick PCR Purificationキットを用いて精製された。図2は、ヒト血清中でHSV−2非特異的抗体と反応しているエピトープを同定するため設計および発現された、HSV−2gG2遺伝子、および特異的gG2抗原、および交差反応性抗原の図を示す。
精製した複製単位配列およびPGEX 4T−3ベクターは、制限酵素での消化を受け、互いに正確な連結が出来るよう調製された。分解されたDNA挿入断片およびPGEX 4T−3ベクターは、その後2%アガロースで流され、Quiagen MinElute Gel Extraction Kitを用いてゲルから抽出された。DNA挿入断片のPGEX 4T−3ベクターとの連結は、InvitorgenのT4 DNA Ligase(High Concentration)を用いて行われた。次に環状プラスミド(DNA挿入断片を含んでいる)は、One Shot TOP 10 cells(Invitrogen)に形質転換され、ImMedia AMP agar(Invitrogen)上に蒔かれた。選択されたクローンはその後、プラスミド量が増加するようにImMedia液中で培養され、プラスミドはその後QIAprep Miniprep Kit(Qiagen)を用いて精製された。制限酵素での消化の後、DNA挿入断片の正しい連結を確認するため、明白に識別されたクローンが大規模の発現用に選択された(イソプロピルチオール−b−D−ガラクトシド(IPTG)誘導により)。
組換えgG2抗原をSample Reducing Reagent(Invitorogen)およびLDS Sample Buffer(Invitrogen)を用いて変性させた後、gG2抗原は12%NuPAGE Bis Tris Gel(Invitrogen)上に載せられ、ニトロセルロース膜(Invitrogen)上にトランスファーさせた。トランスファーが完了した後、ブロットはブロッキング溶液(1X TBST中に4%ミルク)で処理され、1:2000で抗His−AP抗体(Invitrogen)1%ミルク(1X TBST中)と温置された。ウエスタンブロットによりgG2の陽性確認をした後、大規模に発現させたgG2抗原は、ProBond Ni+ Resin(Invitrogen)を用いてバッチ精製され、ウエスタンブロットにおいて1:2000で抗His−AP抗体(Invitrogen)を用いてもう一度確認された。次に、組換えgG2抗原のすべてがウエスタンブロットにおいて同じ反応強度となるよう、組換えgG2抗原をヒト血清試料にさらす前に、gG2抗原は用量設定された。ウエスタンブロット条片は、組換えgG2抗原群がすべて一つの条片上にあるように調製された。ウエスタンブロット条片をヒト血清と温置する前に、ヒト血清試料は大腸菌溶菌液で前吸収された。gG2抗原はNi+レジンを用いてバッチ精製されたが、ヒト血清は大腸菌に対する抗体を含んでおり、組換えgG2抗原は大腸菌中に発現されたので、この工程は誤った反応性に対する追加の予防措置であった。
阻害アッセイにおいて使用された交差反応性抗原は、次のもの: 組換えJAならびに合成JA1およびJA2を含む。ElisaプレートgG2 Lot 021005. 28 Sera(HSV1およびHSV2 Cell Lysateを用いた、我々の社内のHSV Inhibitionにより特徴付けられた)は、陽性試料、陰性試料、偽陽性試料、および不確かな試料の阻害の確認のために使用された。8つの(8)陽性試料は次の通り:Westover Heights Clinicから4つの試料、ニューヨークにあるMontefiore Hospitalから3つの試料、Questから1つの試料が使用された。7つの(7)陰性試料は次の通り:Focus donors(DBS、Dried Blood Spots)から2つの試料、ニューヨークにあるMontefiore Hospitalから3つの試料、およびワシントンにあるWestover Heights Clinicから2つの試料が使用された。10個の(10)偽陽性試料は次の通り:ニューヨークにあるMontefiore Hospitalから1つの試料、Luminex In−Houseパネルから5つの試料、およびワシントンにあるWestover Heights Clinicから4つの試料が使用された。3つの(3)不確かな試料は次の通り:Focus donors(DBS、Dried Blood Spots)から1つの試料、ニューヨークにあるMontefiore Hospitalから1つの試料、およびLuminex in−houseパネルから1つの試料が使用された。
交差反応性抗原の反応性は、HSV−2アッセイを用いて、偽陽性シグナルを産生すると知られている血清試料について、最初に評価された。ウェスタンブロットが行われ、そこで最初に交差反応性抗原D1、JA、JB、JC、J24、およびH1がSDS−PAGEにおいて電気泳動され、その後ニトロセルロース膜にトランスファーされた。電気泳動された交差反応性抗原を有するニトロセルロース膜は、HSV−2抗体(例えば通常)に陰性、HSV−2抗体に陽性、またはHSV−2抗体に偽陽性と知られているヒト血清で染色された。実験結果は図5において提供される。図5の下部分は、全長HSV−2 gG2ポリペプチドの31−691アミノ酸からなる組換え661アミノ酸gG2についての、異なる交差反応性抗原(D1、JA、JB、JC、J24、およびH1)の模式的な配列を示す。
次に、交差反応性抗原が、HSV−2 gG2 ELISA上で偽陽性試料の検出を阻害することができるかを調べた。HSV−2に対する抗体に陽性であると知られている試料(Pとマーク)、およびHSV−2に対する抗体に偽陽性であると知られている試料(例えば、試料がHSV−2に対する抗体に陰性であることが知られている時、HSV−2に対する抗体の陽性の存在を示す)(FPとマーク)は、ELISAを用いてHSV−2に対する抗体の存在を試験された。実験は、HSV−2に非特異的で、gG2抗原を標的抗原として用いたHSV−2アッセイにおいて偽陽性と導きうる交差反応性抗体を前吸収するための阻害剤として、交差反応性抗原JAの使用あり(JAとマークされたカラム)、およびなし(no−JAとマークされたカラム)で実施された。
次に、交差反応性抗原が真陽性血清試料および真陰性血清試料に影響を与えるかどうかを検査した。ELISA試料希釈液中の交差反応性抗原の存在が結果に影響を与えるかどうかを判定するため、ELISAは、HSV−2に対する抗体に陽性と知られている試料、HSV−2に対する抗体に偽陽性と知られている試料、およびHSV−2に対する抗体に陰性の試料について実施した。JA交差反応性抗原なしの希釈液からの指標値およびJA交差反応性抗原ありの希釈液からの指標値は、散布図にされた。その結果は図7において提供される。結果は、真陰性血清(菱形および“Neg.”で示した)および真陽性血清(三角および“Pos.”で示した)は比較可能な結果を与え、対角線上にあるが、一方で偽陽性血清(四角および“FP”で示した)は対角線上から落ちていることを示し、それによりJA交差反応性抗原は偽陽性血清試料の反応性を阻害するが、真陽性または真陰性血清試料には影響を与えないことを示す。
HSV−2 ELISAを任意の交差反応性抗原を含まない標準的な希釈液中で行ったとき、例えば試料Q−11のようなある試料は偽陽性の結果を与えた(偽陽性試料は、阻害アッセイに基づいて野生型のHSV−2溶解物で確認される)。さらに、JA1交差反応性抗原を希釈液に添加したとき、交差反応性は残存した。しかしながら、その結果は、JA2交差反応性抗原、またはJA交差反応性抗原が試料希釈液中でスパイクされたとき、偽陽性活性は除去される(表1参照)。さらにJA1濃度を2倍(2X)にしたとき、交差反応性はまだ残存した。それゆえ、その結果は、この特定の被検査物において示された偽陽性活性はAAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)(MCRS2)のアミノ酸配列を含むJA2上のアミノ酸配列に向かっていることを示す。
交差反応性抗原の発見に基づいて、最低限の交差反応性配列の欠失を含むさらに特異的な組換え抗原を生成することができる。例えば、GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)のアミノ酸配列を含んでいる少なくとも最低限の交差反応性抗原配列が欠失している特異的な変異型組換えgG2抗原が生成される。GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)のアミノ酸配列が欠失した野生型HSV−2 gG2の欠失変異型の例となるアミノ酸配列は、図4Bにおいて提供される。
交差反応性抗原の発見に基づいて、最低限の交差反応性配列の、異なるアミノ酸配列との置換を含むより特異的な抗原を生成することができる。一般に、置換したアミノ酸配列は、例えばグリシン残基を含むアミノ酸配列のように、配列が試料中の抗HSV−2抗体の検出を妨げないよう、一般に選択される。例えば、GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)のアミノ酸配列を含んでいる少なくとも最低限の交差反応性抗原配列が異なるアミノ酸配列に置換された、特異的な変異型組換えgG2抗原が生成される。GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)のアミノ酸配列がグリシン残基からなるアミノ酸配列で置換された野生型HSV−2 gG2の置換変異体の例となるアミノ酸配列は、図4Cにおいて提供される。
5’−GGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGA−3’(SEQ ID NO:15)。
5’−GGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGA−3’(SEQ ID NO:16)。
交差反応性抗原の発見に基づいて、最低限の交差反応性配列を欠失しているgG2断片ポリペプチドを含む、より特異的な組換え抗原を生成することができる。例えば、GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)(MCRS1)のアミノ酸配列を含む最低限の交差反応性抗原配列が欠失している、特異的なgG2断片ポリペプチドが生成される。
Claims (58)
- 生物学的試料中の抗単純ヘルペスウイルス2型(HSV−2)抗体の有無を検出する方法であって、
抗体を含んでいる生物学的試料を、アミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含んでいる少なくとも一つの第一の抗原と接触させることであって、前記接触が非特異的抗HSV抗体が前記試料中で前記抗原と結合するのに適した条件下で行われ、前記第一の抗原は全長糖タンパク質G2(gG2)ポリペプチドではない該接触、および
前記試料中の特異的抗HSV−2 gG2抗体の有無を検出することであって、前記試料中で検出された特異的抗HSV−2抗体が前記抗原に結合しない該検出、
を含む前記検出方法。 - 前記抗原がJ24、JA、JA1、またはJA2である、請求項1記載の方法。
- さらに、前述の検出の前に抗体に接触している前記生物学的試料をアミノ酸配列AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含んでいる少なくとも一つの第二の抗原と接触させることであって、前記接触が非特異的抗HSV抗体が前記試料中で前記抗原と結合するのに適した条件下で行われる該接触を含む、請求項1記載の方法。
- 前記特異的な抗HSV−2 gG2抗体の有無を検出することが、前記特異的抗HSV−2抗体が前記HSV−2 gG2抗原に結合するのに適した条件下で前記試料をHSV−2 gG2抗原と接触させることを含む、請求項1記載の方法。
- 前記検出が、さらに前記試料を一または複数の検出可能なよう標識された抗ヒト免疫グロブリン抗体と接触させることを含む、請求項1記載の方法。
- 第一の担体上に固定されたアミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含んでいる抗原を含む組成物であって、前記抗原が130残基長よりも短い、該組成物。
- 前記抗原がJ24、JA、JA1、またはJA2である、請求項6記載の組成物。
- 前記第一の担体が微小粒子である、請求項6記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項8記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項8記載の組成物。
- 前記第一の担体がニトロセルロース膜である、請求項6記載の組成物。
- さらに第二の担体上に固定された特異的なHSV−2 gG2抗原を含んでいる、請求項6記載の組成物。
- 前記第二の担体が微小粒子である、請求項12記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項13記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項13記載の組成物。
- 前記第二の担体がニトロセルロース膜である、請求項12記載の組成物。
- 前記第一の担体が前記第二の担体と液体伝達する、請求項12記載の組成物。
- 前記第一の担体と第二の担体が接触する、請求項17記載の組成物。
- 単離したポリペプチドであって、前記ポリペプチドが前記アミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含む抗原を含んでおり、前記ポリペプチドが130残基長よりも短い、該ポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが検出可能なよう標識されている、請求項19に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが融合タンパク質である、請求項19に記載のポリペプチド。
- 請求項19に記載の前記ポリペプチドをコードする、単離された核酸。
- 請求項22に記載の前記核酸を含んでいる発現ベクター。
- アミノ酸配列GHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含む第一のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが130残基長よりも短い該ポリペプチドおよび
前記第一のポリペプチドと異種で、前記第一のポリペプチドのN末端またはC末端に共有結合した第二のポリペプチド
を含む組成物。 - さらに前記第二のおよび第三のポリペプチドが前記第一のポリペプチドに隣接するように、前記第一のポリペプチドに共有結合した第三のポリペプチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- 前記第二のポリペプチドが第一の担体に固定された、請求項24に記載の組成物。
- 前記第一の担体が微小粒子である、請求項24に記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項27に記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項27に記載の組成物。
- 前記第一の担体がニトロセルロース膜である、請求項24に記載の組成物。
- 第一の担体に固定された前記アミノ酸配列AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含む抗原を含んでいる組成物であって、前記抗原が130残基長よりも短い該組成物。
- 前記抗原がJ24、JA、またはJA2である、請求項31に記載の組成物。
- 前記第一の担体が微小粒子である、請求項31に記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項33に記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項33に記載の組成物。
- 前記第一の担体がニトロセルロース膜である、請求項31に記載の組成物。
- さらに第二の担体上に固定された特異的HSV−2 gG2抗原を含む、請求項31に記載の組成物。
- 前記第二の担体が微小粒子である、請求項37に記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項38に記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項38に記載の組成物。
- 前記第二の担体がニトロセルロース膜である、請求項37に記載の組成物。
- 前記第一の担体が前記第二の担体と液体連絡している、請求項37に記載の組成物。
- 前記第一の担体および第二の担体が接触する、請求項42に記載の組成物。
- 単離されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドがアミノ酸配列AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含む抗原を含んでおり、前記ポリペプチドが130残基長よりも短い、該ポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが検出できるよう標識された、請求項44に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが融合タンパク質である、請求項44に記載のポリペプチド。
- 請求項44に記載の前記ポリペプチドをコードする、単離された核酸。
- 請求項47に記載の前記核酸を含んでいる発現ベクター。
- アミノ酸配列AAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含んでいる第一のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが130残基長よりも短い、該第一のポリペプチド、および
前記第一のポリペプチドと異種であり、前記第一のポリペプチドのN末端またはC末端に共有結合した第二のポリペプチド
を含んでいる組成物。 - さらに、前記第二のおよび第三のポリペプチドが前記第一のポリペプチドに隣接するように、前記第一のポリペプチドに共有結合した第三のポリペプチドを含む、請求項49に記載の組成物。
- 前記第二のポリペプチドが第一の担体上に固定された、請求項49に記載の組成物。
- 前記微小粒子がアガロースビーズである、請求項51に記載の組成物。
- 前記微小粒子が磁性ビーズである、請求項51に記載の組成物。
- 前記第一の担体がニトロセルロース膜である、請求項49に記載の組成物。
- 欠失を有するHSV−2糖タンパク質G2ポリペプチドをコードする、単離された核酸であって、前記欠失がGHTNTSSAS(SEQ ID NO:07)を含む該核酸。
- 前記核酸がSEQ ID NO.10のアミノ酸配列をコードする、請求項55に記載の単離された核酸。
- 欠失を有するHSV−2糖タンパク質G2ポリペプチドをコードする、単離された核酸であって、前記欠失がAAKTPPTTPAP(SEQ ID NO:06)を含む該核酸。
- 前記核酸がSEQ ID NO:12のアミノ酸配列をコードする、請求項57に記載の単離された核酸。
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