JP2009274957A - Bactericidal agent against pathogenic bacterium of periodontal disease comprising red longhorn frass as active ingredient - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、歯周病原菌殺菌薬に関するものである。 The present invention relates to a periodontal pathogen fungicide.
歯周病は、40才以上の国民の約80%が罹患する、いわば国民病である。
近年、アメリカで行われた大規模な疫学調査から、重症の歯周病患者は、動脈硬化、肺炎の発症率が高いばかりでなく、歯周病が糖尿病や早産にも深く関係することが判明した。歯周病が全身疾患の原因及び誘因となり、さまざまな慢性疾患を引き起こす可能性が強く指摘されている。高齢者の増加と共に、歯周病患者はますます増加傾向にあり、対策が急務である。
口腔内には、約700種、60億の細菌が常在するが、歯周病は、歯肉溝内に生息する嫌気性グラム陰性桿菌により発症することが知られている。歯周病は単独の細菌で発症する感染症ではなく、一群の弱毒菌により長期間の潜伏の後に発症する。歯周病原細菌は、多くの細胞に毒性を示す内毒素、直接免疫担当細胞を破壊する白血球毒素、及び、歯肉組織を破壊するタンパク分解酵素、コラーゲン分解酵素など多くの病原因子を産生する。
従って、個々の病原因子の排除による予防は困難であり、病原菌の増加を防止する必要がある。
しかし、これらの原因菌は、常在菌の一種と考えられ、口腔内の正常細菌がつくる正常歯垢(プラーク)、つまり、バイオフィルムに付着し、歯周病原細菌優勢で強固な病原性バイオフィルムを形成する。
このバイオフィルムの除去は極めて困難で、専門的歯面清掃、つまりスケーリング、によるプラークコントロールが最善の方法であるが、定期的な通院が必要となる。従って、高齢者や時間的に拘束される勤労者には困難であることが多く、簡便に、歯周病原菌の増殖を抑制する薬剤などの開発が急務である。
Periodontal disease is a national disease that affects about 80% of people over the age of 40.
In recent years, a large-scale epidemiological study conducted in the United States found that patients with severe periodontal disease not only have a high incidence of arteriosclerosis and pneumonia, but also that periodontal disease is deeply related to diabetes and premature birth. did. It has been strongly pointed out that periodontal disease can cause and induce systemic diseases and cause various chronic diseases. As the number of elderly people increases, the number of periodontal disease patients is increasing and countermeasures are urgently needed.
About 700 species and 6 billion bacteria are permanently present in the oral cavity, and it is known that periodontal disease is caused by anaerobic gram-negative bacilli that live in the gingival crevice. Periodontal disease is not an infection caused by a single bacterium, but develops after a long period of incubation with a group of attenuated bacteria. Periodontopathic bacteria produce many pathogenic factors such as endotoxins that are toxic to many cells, leukocyte toxins that directly destroy immunocompetent cells, and proteolytic and collagenolytic enzymes that destroy gingival tissue.
Therefore, prevention by eliminating individual pathogenic factors is difficult, and it is necessary to prevent an increase in pathogenic bacteria.
However, these causative bacteria are considered to be a kind of resident bacteria, normal plaque (plaque) produced by normal bacteria in the oral cavity, that is, adheres to biofilms, and is a strong pathogenic bio that is dominated by periodontopathic bacteria Form a film.
The removal of this biofilm is extremely difficult and plaque control by professional tooth cleaning, ie scaling, is the best method but requires regular visits. Therefore, it is often difficult for the elderly and workers who are restricted in time, and there is an urgent need to easily develop a drug that suppresses the growth of periodontal pathogens.
現在、う蝕と歯周病の口腔感染症予防目的で行われているプラークコントロールは、スケーリングが最も有効な方法とされるが、このスケーリングは専門的な技術が必要とされる。従って、日常的な口腔感染症予防は、歯磨剤を用いたブラッシングが中心となる。 Currently, plaque control, which is performed for the purpose of preventing oral infections of caries and periodontal disease, is considered to be the most effective method, but this scaling requires specialized techniques. Therefore, daily oral infection prevention is centered on brushing with a dentifrice.
歯磨剤と共に口腔感染症予防薬として殺菌剤を使用できる。また、洗口液に殺菌剤を添加したものを使用できる。この殺菌剤を用いる場合には、以下の問題点が指摘され、使用は限定的なものになっている。
薬剤である殺菌剤としては、グルクロン酸クロロヘキシジンがある。歯面に吸着し、長期使用により歯の着色や歯石沈着を起こす欠点が指摘されており、良好な薬剤と言うことができない。
ポピドンヨード剤は、殺菌効果は強いものの、強い粘膜刺激作用がある。また、一部では酵素製剤を含む歯磨剤が使用されているが、強い効果は望めない。
その他に、抗生剤を使用することがあるが、長期使用により耐性菌が出現するため、菌交代症による日和見感染発症の原因となり、短期的な治療目的以外の使用は困難であり、避けることが必要である。
A bactericidal agent can be used as a preventive agent for oral infection together with a dentifrice. Moreover, what added the bactericidal agent to the mouthwash can be used. When this disinfectant is used, the following problems are pointed out, and its use is limited.
As a disinfectant that is a drug, there is chlorohexidine glucuronate. It has been pointed out that it adsorbs on the tooth surface and causes tooth coloring and calculus deposition due to long-term use, and cannot be said to be a good drug.
Popidone iodine has a strong bactericidal effect but a strong mucosal irritation effect. In some cases, dentifrices containing enzyme preparations are used, but strong effects cannot be expected.
In addition, antibiotics may be used, but because resistant bacteria appear after long-term use, it may cause opportunistic infections due to fungal substitution, and it is difficult to use for purposes other than short-term treatment. is necessary.
以上のことを前提として、殺菌効果の強い天然物の開発が必要とされる。
口腔には、正常歯垢細菌として多数を占めるレンサ球菌群と、通常菌数は少ないものの、増加と共に病原性を発揮する細菌群とが常在している。
前者には歯面や粘膜面に付着し、外来性細菌の定着を阻害する有益な、
Streptococcus mitisなどのグラム陽性レンサ球菌群が含まれる。
後者には、歯周病原細菌のPorhyromonas gingivaris(FDC381)、 Porhyromonas gingivaris(ATCC53978)、Prevotella intermedia(ATCC25611) などの嫌気性グラム陰性菌が含まれる。
従って、抗菌剤開発には、前記の全ての細菌に対して作用する抗菌剤は有効であるということはできず、前者の有益な常在細菌群には極力影響が少なく、後者の歯周病原細菌に強い抗菌作用を発揮する特性を有する薬剤の開発が必要となる。
On the premise of the above, it is necessary to develop natural products with a strong bactericidal effect.
In the oral cavity, a streptococci group that occupies a large number as normal plaque bacteria and a bacterial group that normally exhibits a pathogenicity with an increase in the number of bacteria are present.
The former is useful for adhering to the tooth surface and mucous membrane surface and inhibiting the colonization of exogenous bacteria.
Includes Gram-positive streptococci such as Streptococcus mitis.
The latter includes anaerobic gram-negative bacteria such as periodontopathic bacteria Porhyromonas gingivaris (FDC381), Porhyromonas gingivaris (ATCC53978), Prevotella intermedia (ATCC25611).
Therefore, for the development of antibacterial agents, the above-mentioned antibacterial agents that act against all the bacteria cannot be effective, and the former beneficial resident bacteria group has as little influence as possible, while the latter periodontal pathogens It is necessary to develop a drug having the property of exerting a strong antibacterial action against bacteria.
従来、行われた抗歯周病の医薬には以下の例が知られている。
特許文献1は、「ω−アルケニルイソチオシアナート、ω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート、ω−フェニルアルキルイソチオシアナートを含む(わさび成分)抗歯周病剤」である。
歯周病原菌殺菌薬が対象とする菌は、Porhyromonas gingivaris、Actinobacillus atinomycetemcomitans、Fusobacterium nucleatum、及びPrevotella nigrescens等の歯周病原因菌であることを述べている。この発明は、口腔レンサ球菌に対する作用についても同等に作用するものであると考えられる。薬剤の作用の点では、歯周病原因菌と口腔レンサ球菌に同等に作用してしまう結果となる。
同様に、「ポリフェノール及び特定のリグナン類からなる歯周病予防又は治療用組成物」である発明(特許文献2)について同じことが指摘できる。また、ポリフェノールそのものが、抗う蝕及び抗歯周病組成物として用いられてきた(特許文献3、特許文献4、特許文献5)。
「松樹皮、ローズバッツ、ライチ種子から選ばれる少なくとも1種の植物の抽出物を、病原菌や免疫細胞が放出するプロテアーゼを阻害することができるプロテアーゼ阻害剤として含有する口腔用組成物」(特許文献6)、「ラクトフェリンとウシ初乳及びウシ初乳の免疫グロブリン濃縮物を用いる新規齲歯と歯周病治療用医薬組成物」(特許文献7)、「システインプロテアーゼが関与する疾患が、骨粗鬆症、歯周病、又は細菌・ウイルス感染症などのいずれかであるシステインプロテアーゼ阻害剤」(特許文献8)、「炭素数11〜16のδ−ラクトンから選ばれる少なくとも1種のラクトン類を有効成分とする歯周病原菌の付着抑制剤。」(特許文献9)、「ジヒドロファルネソール、イソカンフィルシクロヘキサノールなどから選ばれた口腔用組成物に添加するための抗菌香料。」(特許文献10)、「特定構造の大環状ラクトンを含有する抗菌性口腔用組成物及び虫歯菌と歯周病菌に対して増殖抑制能を有する前記抗菌性口腔用組成物」(特許文献11)など知られている。
いずれも歯周病原菌殺菌薬として選択的に作用することを述べるものではない。
The following examples are known for conventional anti-periodontal disease drugs.
Patent Document 1 is “Anti-periodontal disease agent containing ω-alkenyl isothiocyanate, ω-alkylthioalkyl isothiocyanate, ω-phenylalkyl isothiocyanate (wasabi component)”.
It describes that the bacteria targeted by periodontal pathogen fungicides are periodontal disease-causing bacteria such as Porhyromonas gingivaris, Actinobacillus atinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum, and Prevotella nigrescens. This invention is considered to act equally on the action against oral streptococci. In terms of the action of the drug, it results in acting equally on periodontal disease-causing bacteria and oral streptococci.
Similarly, the same can be pointed out with respect to the invention (Patent Document 2) which is “a composition for preventing or treating periodontal disease comprising polyphenols and specific lignans”. In addition, polyphenols themselves have been used as anti-carious and anti-periodontal disease compositions (Patent Document 3, Patent Document 4, Patent Document 5).
“A composition for oral cavity containing an extract of at least one plant selected from pine bark, rose butts and lychee seeds as a protease inhibitor capable of inhibiting proteases released by pathogenic bacteria and immune cells” (Patent Literature) 6), “A novel dental caries and periodontal treatment pharmaceutical composition using lactoferrin and bovine colostrum and bovine colostrum immunoglobulin concentrate” (Patent Document 7), “Disease involving cysteine protease is osteoporosis, dental Cysteine protease inhibitor that is either peri-oral or bacterial / viral infection "(Patent Document 8)," At least one lactone selected from delta-lactones having 11 to 16 carbon atoms is used as an active ingredient Periodontal pathogen adhesion inhibitor "(Patent Document 9)," Dihydrofarnesol, Isocamphylcyclohexanol, etc. Antibacterial perfume for addition to the oral composition. ”(Patent Document 10),“ Antimicrobial oral composition containing a macrocyclic lactone having a specific structure and anti-proliferative ability against caries and periodontal bacteria. The above-mentioned antibacterial composition for oral cavity ”(Patent Document 11) is known.
Neither of them mentions that it acts selectively as a periodontal pathogen fungicide.
竹成分を用いる特許には、特許文献12がある。
これは、「油性基剤(A)及び竹酢液(B)、そして必要に応じて水(C)及び乳化剤(D)を含有する油中水型エマルジョン組成物であることを特徴とする竹酢液のクリーム状組成物」である。技術的な内容として、本発明と相違する。
特許文献13は、孟宗竹抽出物などとε−ポリリジンを組み合わせて用いるものである。又、対象とする菌は、「う蝕の原因は、主としてストレプトコッカス・ミュタンス(Streptococcus mutans)の増殖が、また歯周病の原因は、主としてポルフィロモナス・ジンジバリス(Porhyromonas gingivaris)やアクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス(Actinobacillus atinomycetemcomitans)」とするものである。
Patents using bamboo components include
This is a bamboo characterized by being a water-in-oil emulsion composition containing an oily base (A) and bamboo vinegar (B), and optionally water (C) and an emulsifier (D). It is a creamy composition of vinegar. The technical contents are different from the present invention.
Patent Document 13 uses a combination of Sosetsu bamboo extract and ε-polylysine. Also, the target bacteria are: “The cause of dental caries is mainly the growth of Streptococcus mutans, and the cause of periodontal disease is mainly Porphyromonas gingivaris and Actinobacillus actinos. It is called “Mectemcommitans” (Actinobacillus atinomycetemcomitans).
以上の従来技術をみても明らかなように、口腔に用いられる医薬は従来口腔レンサ球菌と歯周病原細菌の両方を対象とするものであり、口腔レンサ球菌に対する殺菌作用が弱く、歯周病原細菌に対して十分に殺菌作用するといった両方の菌に対して相違する作用の医薬の開発が望まれていた。
本発明の課題は、(a)歯周病の原因となる嫌気性グラム陰性桿菌に対しては強い殺菌力を有している一方、(b)口腔内には生息する別の正常歯垢細菌であるレンサ球菌群に対しては殺菌力が弱い歯周病原菌殺菌薬、この歯周病原菌殺菌薬を含む口腔衛生剤及びこの歯周病原菌殺菌薬を含む食品を提供することである。 The subject of the present invention is (a) a strong bactericidal power against anaerobic gram-negative bacilli causing periodontal disease, while (b) another normal plaque bacterium that lives in the oral cavity. It is to provide a periodontal pathogen bactericidal agent having a weak bactericidal power, an oral hygiene agent containing this periodontal pathogen bactericidal agent, and a food containing this periodontal pathogen bactericidal agent.
本発明者らは前記課題について鋭意研究し、以下のことを見出して、本発明を完成させた。本発明者らが薬剤として有効であることを見出したベニカミキリフラス抽出物について、歯周病原菌殺菌薬として歯周病原細菌に用いた場合は、12〜15%の発育阻害効果が認められ、さらに、0.06%においても10%の発育阻害効果があった。
多くの口腔細菌に付着し、歯垢蓄積に重要な役割を果たすActinomyces菌属に対しても、殺菌効果が認められ、0.125%添加で約40%の発育阻害が認められた。一方、口腔の健康維持に必要な有益口腔レンサ球菌Streptococcus gordonii、Streptococcus sanguinis、Streptococcus oralis、Streptococcus mitisに対する発育阻害効果は、発育培地への0.125%を添加した場合には全く発育阻害効果が認められなかった。
The present inventors diligently researched on the above problems, and found the following to complete the present invention. About Benicum kirifras extract that the present inventors have found to be effective as a drug, when used as a periodontal pathogen bactericidal agent for periodontal pathogenic bacteria, 12-15% growth inhibitory effect is recognized, Even at 0.06%, the growth inhibitory effect was 10%.
Actinomyces spp., Which adheres to many oral bacteria and plays an important role in plaque accumulation, also showed a bactericidal effect, and growth inhibition of about 40% was observed when 0.125% was added. On the other hand, the growth inhibitory effect against beneficial oral streptococci Streptococcus gordonii, Streptococcus sanguinis, Streptococcus oralis, and Streptococcus mitis necessary for maintaining oral health is completely observed when 0.125% of the growth medium is added. I couldn't.
本発明によれば、以下の発明が提供される。
(1)ベニカミキリフラス成分を含む歯周病原菌殺菌薬。
(2)前記(1)記載の歯周病原菌殺菌薬を含有することを特徴とする口腔衛生剤。
(3)前記(1)記載の歯周病原菌殺菌薬を含有することを特徴とする食品。
According to the present invention, the following inventions are provided.
(1) Periodontopathic fungicide containing Benica longiflas component.
(2) An oral hygiene agent comprising the periodontal pathogen bactericidal agent according to (1).
(3) A food comprising the periodontal pathogen fungicide according to (1) above.
本発明によれば、ベニカミキリフラス成分を含む歯周病原菌殺菌薬、歯周病原菌殺菌薬を含有する口腔衛生剤、及び歯周病原菌殺菌薬を含有す食品が得られる。
ベニカミキリフラス成分を1重量%程度含有する場合には、グラム陽性レンサ球菌群及び歯周病原細菌に対して作用し、これらの全被検菌の発育はほぼ発育阻害活性を有している。0.25%程度とすることにより歯周病原細菌に対して作用し30から60%と顕著な発育阻害活性があり、0.1%程度とすることにより10から15%程度の阻害活性がある。グラム陽性レンサ球菌群に対しては0.25%程度で阻害活性は0から40%であり、0.1%程度でほとんど影響を与えない。以上のことから、本発明の医薬、それを含む口腔衛生剤及び食品は、歯周病原菌殺菌薬及び予防剤として有用である。
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the periodontal pathogen bactericidal agent containing a Benica longiflas component, the oral hygiene agent containing a periodontal pathogen bactericidal agent, and the foodstuff containing a periodontal pathogen bactericidal agent are obtained.
In the case of containing about 1% by weight of the red beetle flax component, it acts on the gram-positive streptococci group and periodontopathic bacteria, and the growth of all these test bacteria has almost growth inhibitory activity. When it is about 0.25%, it acts on periodontopathic bacteria and has a remarkable growth inhibitory activity of 30 to 60%, and when it is about 0.1%, it has an inhibitory activity of about 10 to 15%. . For the gram-positive streptococci group, the inhibitory activity is about 0 to 40% at about 0.25%, and hardly affects at about 0.1%. From the above, the medicament of the present invention, the oral hygiene agent and food containing it are useful as periodontal pathogen bactericides and preventive agents.
ベニカミキリフラス及びベニカミキリフラス成分を用いる医薬については本発明者らにより既に発明されている(特開2003−277276号)。本発明では、歯周病原菌殺菌薬、歯周病原菌殺菌薬を含有する口腔衛生剤、及び歯周病原菌殺菌薬を含有する食品として有用であることを見出したものである。 Benicamikiriflas and pharmaceuticals using the Benicumakifurras component have already been invented by the present inventors (Japanese Patent Laid-Open No. 2003-277276). In this invention, it discovered that it was useful as a foodstuff containing a periodontal pathogen fungicide, an oral hygiene agent containing a periodontal pathogen fungicide, and a periodontal pathogen fungicide.
本発明の対象であるベニカミキリフラス及びベニカミキリフラス成分を取得するために用いられる原料の竹としては、モウソウチク属、シホウチク属、マダケ属、シュドササ属、ササモルフア属、ナリヒラタケ属、トウチク属などの竹類が用いられる。なかでも、マダケ属の孟宗竹及びハチクが好適に用いられる。
これらの竹が切り取られ、放置されると、ベニカミキリ(PurpuricenustemminckiiGuerin-Meneville1844)が卵をうみつけ、その幼虫が竹類を食べて成長する。その成長過程で、***物を竹の中に残す。これをベニカミキリフラスと呼ぶ。このベニカミキリフラスを集めて、ベニカミキリフラス及びベニカミキリフラス成分を本発明の歯周病原菌殺菌薬などの対象物質とする。
なお、ベニカミキリは、主に我が国では、本州(ヤブツバキ帯−ブナ帯下部)、佐渡、四国、九州、壱岐、対馬などに分布し、春から夏にかけて出現する。
Examples of the bamboo used as a raw material for obtaining Benicumakirisura and Benikamichifurasu ingredients that are the subject of the present invention include bamboo species such as Mosouchiku, Shibuchiku, Madake, Shudosasa, Sasamorpha, Narihiratake, and Tochiku. Used. Of these, the bamboo genus Machitake and Hachiku are preferably used.
When these bamboos are cut out and left unattended, the red beetle (Purpuricenustemminckii Guerin-Meneville 1844) lays eggs and the larvae eat the bamboo and grow. During the growth process, excrement remains in the bamboo. This is called Benikamikiriflas. By collecting the red beetle, the red bean and the red bean component are used as target substances such as the periodontal pathogen fungicide of the present invention.
In Japan, red beetle is distributed mainly in Honshu (Yabutsubaki belt-lower part of beech belt), Sado, Shikoku, Kyushu, Sanuki, Tsushima, etc., and appears from spring to summer.
竹から得られるベニカミキリフラスは、しっとりとした粒状の薄黄色を帯びた組成物として得られる。このベニカミキリフラスは、水分を含有するので、これを乾燥させることにより水分を取り除いて粉状体とすることができる。乾燥させるには、30〜80℃の条件下に行う。80℃を越える高温で処理すると、分解などを伴うので、好ましくない。この粉状のものを、ガーゼなどを用いて患部に直接接触させることにより、薬剤として使用することができる。また、このベニカミキリフラスは、格別水分などを取り除くことなく、そのまま歯周病原菌殺菌薬として使用することもできる。また、このベニカミキリフラスから水又は有機溶媒により抽出されたベニカミキリフラス成分を歯周病原菌殺菌薬として用いることができる。 Benica longiflas obtained from bamboo is obtained as a moist granular light yellowish composition. Since the red-breasted beetle contains water, it can be dried to form a powdery body. In order to dry, it carries out on the conditions of 30-80 degreeC. Treatment at a high temperature exceeding 80 ° C. is not preferable because it involves decomposition. This powder can be used as a medicine by directly contacting the affected part using gauze or the like. Moreover, this red-breasted crab can also be used as a periodontal pathogen fungicide as it is without removing special moisture. Moreover, the red beetle fluff component extracted from this red beetle with water or an organic solvent can be used as a periodontal pathogen fungicide.
ベニカミキリフラスより水抽出物を取り出す場合には、過剰量の水(熱水)と容器内で接触させる。水には熱湯を用いることが効果的である。通常、0.001〜0.007重量%程度の濃度になるように水量を調節する。抽出には、環流条件下に加熱する。加熱時間は、適宜設定する。加熱処理は、通常少なくとも15分以上、1時間程度は必要である。その結果、ベニカミキリフラスの抽出成分は熱水層に移行させることができる。この熱水処理は2回以上、通常3回程度まで繰り返すことが有効である。この一回目の操作により、一般には、ベニカミキリフラス重量に対して0.3〜1.0%程度、通常0.7重量%程度の割合で液状物が得られる。このようにして得られる液状物を環流条件下に濃縮する。最終的に、ベニカミキリフラスの抽出物は、茶褐色の粉末状のものとして得られる。収量は、ベニカミキリフラスの重量に対して1.0〜2.0重量%程度のものが得られる。温水の利用も可能である。圧力をかけた条件下にも行うことができる。このようにして得られる粉末状の水抽出物を、使用に際しては、適宜水に溶かして薬剤として利用する。後の実施例に示すようにベニカミキリフラス10gを用いて水抽出を行った結果、176.2mgのフラス抽出物を得ている。 When the water extract is taken out from the red beetle, it is brought into contact with an excessive amount of water (hot water) in a container. It is effective to use hot water as water. Usually, the amount of water is adjusted to a concentration of about 0.001 to 0.007% by weight. The extraction is heated under reflux conditions. The heating time is appropriately set. The heat treatment usually requires at least 15 minutes or more and about 1 hour. As a result, the extracted component of the red beetle can be transferred to the hydrothermal layer. It is effective to repeat this hot water treatment twice or more, usually about 3 times. By this first operation, a liquid material is generally obtained at a ratio of about 0.3 to 1.0%, usually about 0.7% by weight with respect to the weight of the red beetle. The liquid obtained in this way is concentrated under reflux conditions. Finally, the extract of Benicum kirifras is obtained as a brownish powder. The yield is about 1.0 to 2.0% by weight with respect to the weight of the red beetle. Hot water can also be used. It can also be performed under conditions under pressure. The powdery water extract thus obtained is appropriately dissolved in water before use and used as a medicine. As shown in a later Example, as a result of performing water extraction using 10 g of Benicum krillus, 176.2 mg of a frass extract was obtained.
ベニカミキリフラスを有機溶媒に接触させて処理することにより有機溶媒による抽出物としたものを薬剤として利用することができる。有機溶媒としては、エタノール、メタノール、イソプロパノールなどのアルコール類、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコールなどの多価アルコール又はその誘導体、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、酢酸エチル、酢酸イソプロピルなどのエステル類、エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類を挙げることができる。また、石油エーテル、n−へキサン、n−ペンタンなどの脂肪族炭化水素なども用いることができる。これらの中では、エタノール、1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコールなどが用いられる。これらには、水を含めて混合溶媒として用いることもできる。いずれも溶媒抽出した後、更に他の溶剤に接触させて、さらに特定の成分を取り出すことができるが、そのような操作を施すことなく、エタノール或いは1,3−ブチレングリコール溶媒のものを適当な濃度のものとして、患部に直接、塗りつけることによって、用いることができる。 An extract obtained from an organic solvent can be used as a drug by treating the beetle chrysanthemum in contact with the organic solvent. Examples of the organic solvent include alcohols such as ethanol, methanol, and isopropanol, polyhydric alcohols such as glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol or derivatives thereof, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, ethyl acetate, and acetic acid. Mention may be made of esters such as isopropyl and ethers such as ethyl ether and isopropyl ether. In addition, aliphatic hydrocarbons such as petroleum ether, n-hexane, and n-pentane can be used. Among these, ethanol, 1,3-butylene glycol, propylene glycol and the like are used. These can be used as a mixed solvent including water. In any case, after solvent extraction, it can be further brought into contact with another solvent to extract further specific components. However, ethanol or 1,3-butylene glycol solvent can be appropriately used without such operation. As a concentration, it can be used by applying directly to the affected area.
ベニカミキリフラスの有機溶媒抽出に当たっては、へキサンなどで抽出を行って、へキサン抽出物と残さに分け、この残さをメタノール抽出し、メタノール抽出物と残さに分け、メタノール抽出物を酢酸エチル溶解成分とブタノール溶解成分に分けることができ、残さを水抽出を行うなどして、各種溶解成分を取り出すこともできる。 In the organic solvent extraction of Benica longiflas, extraction with hexane or the like is performed, and the residue is separated into a hexane extract and a residue. The residue is extracted with methanol, and the methanol extract and the residue are separated. And the butanol-dissolved component, and various dissolved components can be taken out by extracting the residue with water.
ベニカミキリフラスを、口腔衛生剤として用いる場合には、水抽出物又は有機溶剤抽出物として0.1〜1.10重量%程度の濃度のものを用いることが一般的である。
ベニカミキリフラス成分を含む歯周病原菌殺菌薬は、(a)歯周病の原因となる嫌気性グラム陰性桿菌に対しては強い殺菌力を有している一方、(b)口腔内には生息する別の正常歯垢細菌であるレンサ球菌群に対しては殺菌力が弱い医薬であるから、歯周病治療薬及び歯周病予防薬となる歯周病原菌殺菌薬、この歯周病原菌殺菌薬を含有する口腔衛生剤及び歯周病原菌殺菌薬を含有する食品として使用することができる。歯周病の原因となる嫌気性グラム陰性桿菌に対しては強い殺菌力を有している一方、(b)口腔内には生息する別の正常歯垢細菌であるレンサ球菌群に対しては殺菌力が弱い薬剤として用いる場合には0.5%以下の濃度とすることが有効であり、好ましくは0.25%以下の濃度とすること、更に好ましくは0.1%濃度とすることが必要である。
In the case where Benica longiflas is used as an oral hygiene agent, it is common to use a water extract or an organic solvent extract having a concentration of about 0.1 to 1.10% by weight.
The periodontopathic fungicide containing the Benica longiflas component has (a) a strong bactericidal power against anaerobic gram-negative bacilli causing periodontal disease, while (b) inhabits the oral cavity. Since it is a medicine with weak bactericidal activity against another normal plaque bacterium Streptococcus group, the periodontal pathogen bactericidal agent that becomes a periodontal disease therapeutic agent and periodontal disease preventive agent, this periodontal pathogen bactericidal agent It can be used as a food containing the contained oral hygiene agent and periodontal pathogen fungicide. While it has a strong bactericidal power against anaerobic gram-negative bacilli that cause periodontal disease, (b) for streptococci, another normal plaque bacterium that lives in the oral cavity When used as a drug with weak sterilizing power, it is effective to adjust the concentration to 0.5% or less, preferably 0.25% or less, more preferably 0.1%. is necessary.
本発明の歯周病原菌殺菌薬は、飲食物又は口腔衛生剤に添加して適用することができる。
添加する口腔衛生剤の剤型は液剤、固形剤、半固形剤のいずれであっても良く、歯磨き剤、トローチ剤、液状又は粉末状うがい薬、塗布液、チューインガムなどに適用可能である。
また、本発明の歯周病原菌殺菌薬を配合する飲食物としてはジュースなどの清涼飲料、キャンディ、チューインガムなどの菓子類が適当である。
本発明の歯周病原菌殺菌薬は、上記最終製品に対し、好ましくは0.001〜1質量%の濃度で、特に好ましくは0.002〜0.06質量%程度の濃度になるように添加して使用される。添加量が下限質量未満では歯周病抑制効果が発揮されず、添加量が上限質量を超えると、歯周病原菌殺菌薬として飲食物や口腔衛生剤等に配合するには適さないこともある。
The periodontal pathogen bactericidal agent of the present invention can be applied by adding it to foods and drinks or oral hygiene agents.
The dosage form of the oral hygiene agent to be added may be any of a liquid agent, a solid agent, and a semi-solid agent, and is applicable to a dentifrice, a troche, a liquid or powdered mouthwash, a coating liquid, a chewing gum, and the like.
In addition, as foods and drinks to which the periodontal pathogen bactericidal agent of the present invention is blended, soft drinks such as juice and confectionery such as candy and chewing gum are suitable.
The periodontal pathogen bactericidal agent of the present invention is added to the final product so as to have a concentration of preferably 0.001 to 1% by mass, particularly preferably about 0.002 to 0.06% by mass. Used. If the addition amount is less than the lower limit mass, the periodontal disease inhibitory effect is not exhibited, and if the addition amount exceeds the upper limit mass, it may not be suitable as a periodontal pathogen bactericidal agent for blending in foods and beverages, oral hygiene agents, and the like.
歯磨剤組成物は以下の通りである。
(A)ベニカミキリフラス成分 0.01〜0.5%
(B)キサンタンガム0.4〜2.0質量%、
(C)ノニオン性界面活性剤及び/又は両性界面活性剤0.5〜10.0質量%、
(D)水10〜40質量%
The dentifrice composition is as follows.
(A) Benica longiflas component 0.01-0.5%
(B) 0.4 to 2.0% by mass of xanthan gum,
(C) 0.5 to 10.0% by mass of a nonionic surfactant and / or an amphoteric surfactant,
(D) Water 10-40 mass%
歯磨き組成物の組成は以下の通りである。
品名 質量部
リン酸水素カルシウム 20
無水ケイ酸 8
ソルビット液 43
グリセリン 19
増粘剤 0.6
香料 0.8
水 8.595
ベニカミキリフラス成分 0.005
計 100
The composition of the toothpaste composition is as follows.
Product name Mass parts Calcium hydrogen phosphate 20
Sorbit liquid 43
Glycerin 19
Thickener 0.6
Perfume 0.8
Water 8.595
Benica longiflas ingredient 0.005
Total 100
チューインガム
品名 質量部
ガムベース 22
砂糖 49.5
グルコース 10
水あめ 17.995
香料 0.5
ベニカミキリフラス成分 0.005
計 100
Chewing gum product name Mass gum base 22
Sugar 49.5
Mizuame 17.7995
Fragrance 0.5
Benica longiflas ingredient 0.005
Total 100
口中洗浄剤
品名 質量部
エタノール 10
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 1
サッカリンナトリウム 0.2
安息香酸ナトリウム 0.1
グリセリン 6
香料 0.2
クエン酸ナトリウム 適量(pH調整済み)
ベニカミキリフラス成分 0.005
水 残部
計 100
Mouth cleaner product part by
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 1
Saccharin sodium 0.2
Sodium benzoate 0.1
Glycerin 6
Fragrance 0.2
Sodium citrate appropriate amount (pH adjusted)
Benica longiflas ingredient 0.005
Water balance 100
以下に、本発明の内容を実施例により説明する。本発明のベニカミキリフラスの抽出液の製造方法として、有機溶媒による抽出液の製造方法及び水による抽出液の製造方法について示す。本発明のベニカミキリフラスの薬剤として用いた効果については、歯周病原細菌のPorhyromonas gingivaris(FDC381), Porhyromonas gingivaris(ATCC53978)、Prevotella intermedia(ATCC25611) を対象に、使用濃度に応じた発育阻害率及び濁りの度合いを測定した結果、 口腔レンサ球菌のStreptococcus gordonii(ATCC10558)、Streptococcus sanguinis(ATCC10556)、Streptococcus oralis(ATCC10557)、Streptococcus mitis(ATCC903)を対象に、使用濃度に応じた発育阻害率及び濁りの度合いを測定した結果より定めた。
ベニカミキリフラス成分の各種皮膚疾患に対しての毒性試験として、線維芽細胞を用いる「24穴マルチウェル・スクリーニング法」により行い、その結果から、その毒性の有無を確認することができる。
以下に、その内容及び実験結果について詳細に説明する。
The contents of the present invention will be described below with reference to examples. As a method for producing the extract of Benica longiflas of the present invention, a method for producing an extract with an organic solvent and a method for producing an extract with water will be described. Regarding the effect of Benicum kirifras of the present invention as a drug, the growth inhibition rate and turbidity according to the concentration used in the periodontopathic bacteria Porhyromonas gingivaris (FDC381), Porhyromonas gingivaris (ATCC53978) and Prevotella intermedia (ATCC25611) As a result of measuring the degree of growth, the rate of growth inhibition and turbidity depending on the concentration used in Streptococcus gordonii (ATCC10558), Streptococcus sanguinis (ATCC10556), Streptococcus oralis (ATCC10557), and Streptococcus mitis (ATCC903) Was determined from the measurement results.
As a toxicity test for various skin diseases of the red beetle frass component, a “24-well multiwell screening method” using fibroblasts can be performed, and the presence or absence of the toxicity can be confirmed from the result.
The contents and experimental results will be described in detail below.
(ベニカミキリフラスの有機溶媒による抽出液の製造)
竹から得られたベニカミキリフラス591gを、へキサンで抽出を行って、へキサン抽出物332mgと残さに分け、この残さをメタノール抽出し、メタノール抽出物14.6gと残さに分け、メタノール抽出物が酢酸エチルに溶解した区分3.685gと水により溶解した区分に分けることができ、水により溶解した区分について、n−ブタノール溶剤で処理し、ブタノール溶解区分1.931gと水区分に分けることができ、メタノール抽出残さを水(熱水)抽出を行って、水抽出物12.132gを得た。
(Manufacture of extract of Benica longiflas with organic solvent)
591 g of red beetle flax obtained from bamboo is extracted with hexane, divided into 332 mg of hexane extract and the residue, this residue is extracted with methanol, and 14.6 g of methanol extract is divided into the residue. It can be divided into 3.685 g of the category dissolved in ethyl acetate and the category dissolved in water, and the segment dissolved in water can be divided into 1.931 g of butanol-soluble category and water category by treating with n-butanol solvent. The methanol extraction residue was subjected to water (hot water) extraction to obtain 12.132 g of a water extract.
(ベニカミキリフラスの有機溶媒による抽出液の製造)
竹から得られたベニカミキリフラス1037gを、へキサンで抽出を行って、へキサン抽出物509.9mgと残さに分け、この残さを、メタノール抽出し、メタノール抽出物と残さに分け、メタノール抽出物を酢酸エチル溶解区分5.41g及び水溶解区分にわけることができ、水により溶解した区分について、n−ブタノール溶剤で処理し、ブタノール溶解区分2.53gと水区分3.65gに分けることができ、メタノール抽出残さを、水(熱水)抽出を行って、水抽出物27.132gを得た。
(Manufacture of extract of Benica longiflas with organic solvent)
Extract 1037 g of red beetle from bamboo with hexane, divide it into 509.9 mg of hexane extract, extract this residue with methanol, divide it into methanol extract and residue, It can be divided into the ethyl acetate dissolution section 5.41g and the water dissolution section, and the section dissolved with water can be treated with n-butanol solvent and divided into 2.53g butanol dissolution section and 3.65g water section, The methanol extraction residue was subjected to water (hot water) extraction to obtain 27.132 g of a water extract.
(24穴マルチウェル・スクリーニング法(毒性試験))
24穴マルチウェル・スクリーニング法(高岡聡子著「組織培養入門」学会出版センタ−発行68頁記載)により、本発明のベニカリキリフラスの薬剤の毒性試験を行った。
(この方法は、ABCD各ライン(行)及び1から6列のウェル(合計24穴)を用意し、Aラインについて薬剤原液0.1mlを含む(A1)、及び濃度が倍々に希釈され、濃度が相違する((A2〜A5)、薬剤を含まない(A6))を用意する。次に、細胞の浮遊液を調製する。細胞数は、5×104/ml程度である。各ウェルに細胞浮遊液を0.9mlずつ分注する。これを水平にしたまま、左右に軽く揺すって、炭酸ガスふらん器で培養した。3〜7日培養し、培地をすて、メタノールを静かに注入し、10分以上固定。流水で洗った後、ギムザ染色を行い、染色異常が見られるかどうかで毒性を判定するものである。)
毒性試験の内容は、以下の通りであった。
(1)薬剤抽出液の作成
ベニカミキリフラス水抽出物(ベニカミキリフラス3.9gに、20ccの純水を添加して撹拌し、室温から100℃直前(沸騰直前)まで加熱し、この温度において煮出した状態として、1時間保ち、室温まで冷却し、遠心分離器により(1200rpm.10分間)、遠心分離を行った。上澄の清浄液を濾過滅菌し、薬剤原液を作成した。
(2)毒性試験として、前記24穴マルチウェル・スクリーニング法を行った。
(3)使用細胞は、以下の細胞を使用した。NHDF−NEO CRYOPRESERVED(ヒト皮膚線芽細胞 新生児)である。BIO WHITTAKER(ACAMBREX COMPANY製製造年月日:1999年5月10日 Lot番号:9F0889 保証書添付のもの)
(4)培養培地は、以下の培地を使用した。
FBM(改変 MCDB202血清添加)
(5)添加条件は以下の通りであった。原液のマルチウェルへの添加は、1ウェルあたり、0.1mlであった。希釈は、PBS(リン酸緩衝塩類溶液)により、最終濃度を、0%、12.5%、25%、50%の4段階とした。
(6)培養条件培地FBMに浮遊した細胞液0.9mlを、各24ウェルに添加した。36℃で4日間、加温した。
(7)鑑定法
(イ)ウェル内の培地を捨て(細胞は、ウェルに接地)、直ちに、メタノールで固定後、ギムザ染色を行った。顕微鏡により観察し、写真記録を行った(図3)。
(ロ)25cm2のプラスチック培養瓶で原液50%を添加し、8日間観察した。また、培養後、ギムザ染色を行った。
(8)鑑定法(イ)の結果
以上の操作により得られた、24穴マルチウェル・スクリーニング法による対照結果によれば、対照結果(0%)と前記最終濃度0%、12.5%、25%、50%の結果と比較して、最終濃度0%、12.5%、25%、50%のいずれも、増殖及び形態に変化はなく、毒性がないことがわかった。
(9)鑑定結果(ロ)の結果
25cm2のプラスチック培養瓶で原液50%を添加し、8日間観察した結果では、増殖及び形態共に影響は見られなかった。培養後、ギムザ染色を行った結果によれば、異常はなかった。
(10)結論 ベニカミキリフラスの水抽出液は、ヒト由来線維芽細胞に影響を与えず、薬剤として使用した場合に安全であると言うことができる。
(24-well multiwell screening method (toxicity test))
Toxicity test of the drug of Benicari liflas of the present invention was performed by a 24-well multiwell screening method (described in Eiko Takaoka, “Introduction to Tissue Culture” published by the Society Publishing Center, page 68).
(In this method, each ABCD line (row) and 1 to 6 columns of wells (total of 24 wells) are prepared, containing 0.1 ml of drug stock solution for A line (A1), and the concentration is diluted twice. ((A2 to A5), containing no drug (A6)) Next, a suspension of cells is prepared, and the number of cells is about 5 × 10 4 / ml. Dispense 0.9 ml of the cell suspension in a horizontal position, shake gently to the left and right, and incubate in a carbon dioxide funnel, incubate for 3-7 days, rinse the medium, and gently inject methanol. And fixed for 10 minutes or more.After washing with running water, Giemsa staining is performed, and toxicity is determined by whether or not staining abnormality is observed.)
The contents of the toxicity test were as follows.
(1) Preparation of drug extract Benica longiflas water extract (Benica longiflas 3.9 g, 20 cc of pure water was added and stirred, heated from room temperature to just before 100 ° C. (just before boiling) and boiled at this temperature. The state was kept for 1 hour, cooled to room temperature, and centrifuged with a centrifuge (1200 rpm for 10 minutes), and the supernatant was sterilized by filtration to prepare a drug stock solution.
(2) The 24-well multiwell screening method was performed as a toxicity test.
(3) The following cells were used. NHDF-NEO CRYOPRESERVED (human skin fibroblast neonate). BIO WHITTAKER (manufactured by ACAMBREX COMPANY: May 10, 1999 Lot number: 9F0889 with warranty attached)
(4) The following culture media were used as culture media.
FBM (modified MCDB202 serum added)
(5) The addition conditions were as follows. The stock solution was added to the multiwell at 0.1 ml per well. For dilution, PBS (phosphate buffered saline) was used, and the final concentration was made into four stages of 0%, 12.5%, 25%, and 50%.
(6) Culture condition 0.9 ml of cell suspension suspended in the culture medium FBM was added to each 24 well. Warm for 4 days at 36 ° C.
(7) Appraisal method (a) The medium in the well was discarded (the cells were grounded in the well), and immediately fixed with methanol, followed by Giemsa staining. It observed with the microscope and recorded the photograph (FIG. 3).
(B) A 50% stock solution was added in a 25 cm 2 plastic culture bottle and observed for 8 days. Moreover, Giemsa staining was performed after culture.
(8) Result of Appraisal Method (A) According to the control result obtained by the above operation by the 24-well multiwell screening method, the control result (0%) and the final concentration of 0%, 12.5%, Compared to the 25% and 50% results, the final concentrations of 0%, 12.5%, 25%, and 50% were found to have no change in growth and morphology and were not toxic.
(9) Appraisal result (b) As a result of adding 50% of the stock solution in a 25 cm 2 plastic culture bottle and observing for 8 days, neither growth nor morphology was observed. According to the result of Giemsa staining after the culture, there was no abnormality.
(10) Conclusion It can be said that the water extract of Benicum kirifras does not affect human-derived fibroblasts and is safe when used as a drug.
予め凍結保存してある歯周病原因菌Porhyromonas gingivaris(FDC381)、
Porhyromonas gingivaris(ATCC53978)、Prevotella intermedia(ATCC25611) を対象に、使用濃度に応じた発育阻害率及び濁りの度合いを測定した結果、同じく口腔レンサ球菌のStreptococcus gordonii(ATCC10558)、Streptococcus sanguinis(ATCC10556)、Streptococcus oralis(ATCC10557)、Streptococcus mitis(ATCC903)を対象に、使用濃度に応じた発育阻害率及び濁りの度合いを測定した結果を算出した。
結果を表1に纏めた。表1の左側数値は濁り度合を示す。( )内は阻害率を示している。
又その結果を図1及び図2に示した。
Periodontal disease-causing bacteria Porhyromonas gingivaris (FDC381) that has been cryopreserved in advance,
As a result of measuring the growth inhibition rate and the degree of turbidity according to the concentration used in Porhyromonas gingivaris (ATCC53978) and Prevotella intermedia (ATCC25611), Streptococcus gordonii (ATCC10558), Streptococcus sanguinis (ATCC10556), Streptococcus For oralis (ATCC 10557) and Streptococcus mitis (ATCC 903), the results of measuring the growth inhibition rate and the degree of turbidity according to the concentration used were calculated.
The results are summarized in Table 1. The values on the left side of Table 1 indicate the degree of turbidity. Figures in parentheses indicate the inhibition rate.
The results are shown in FIG. 1 and FIG.
ベニカミキリフラス水抽出成分を0.75重量%程度含有する場合には、グラム陽性レンサ球菌群及び歯周病原細菌に対して作用し、これらの全被検菌の発育はほぼ発育阻害活性を有している。0.25%程度とすることにより歯周病原細菌に対して作用し30から60%と顕著な発育阻害活性があり、0.1%程度とすることにより10から15%程度の阻害活性がある。グラム陽性レンサ球菌群に対しては0.25%程度で阻害活性は0から40%であり、0.1%程度でほとんど影響を与えないことを示している。以上のことから、本発明の薬剤は、歯周病原菌殺菌薬及び予防剤として有用であることがわかる。 In the case of containing about 0.75% by weight of the extract of Benica longiflas water, it acts on Gram-positive streptococci and periodontopathic bacteria, and the growth of all these test bacteria has almost growth inhibitory activity. ing. When it is about 0.25%, it acts on periodontopathic bacteria and has a remarkable growth inhibitory activity of 30 to 60%, and when it is about 0.1%, it has an inhibitory activity of about 10 to 15%. . For the gram-positive streptococci group, the inhibitory activity is about 0 to 40% at about 0.25%, and there is almost no effect at about 0.1%. From the above, it can be seen that the drug of the present invention is useful as a periodontal pathogen fungicide and a preventive agent.
Claims (3)
A food comprising the periodontal pathogen fungicide according to claim 1.
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- 2006-08-28 JP JP2006230365A patent/JP2009274957A/en active Pending
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2007
- 2007-08-28 WO PCT/JP2007/066669 patent/WO2008026591A1/en active Application Filing
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016113460A (en) * | 2014-12-15 | 2016-06-23 | ライオン株式会社 | Oral antimicrobial agent and oral composition |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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WO2008026591A1 (en) | 2008-03-06 |
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