JP2009161477A - Tumor-imaging agent - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new imaging agent utilizing an epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitor. <P>SOLUTION: This tumor-imaging agent includes a labeled compound obtained by radioactive-labeling a specific quinazoline derivative represented by the compound: [(3-ethynyl-phenyl)-quinazolin-4-ylamine]. The specific quinazoline derivative exhibits an inhibitory activity of the EGFR tyrosine kinase, and the tumor-imaging agent by using the same has a >1 accumulation ratio to a tumor tissue. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、キナゾリン骨格を有する化合物を利用した腫瘍イメージング剤に関する。   The present invention relates to a tumor imaging agent using a compound having a quinazoline skeleton.

上皮成長因子受容体（Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR）は、細胞内チロシンキナーゼドメインと、膜貫通ドメインと、細胞外リガンド結合ドメインとから成る膜貫通型レセプターであり、様々な悪性腫瘍で過剰発現していることが知られている。近年、EGFRを標的とした分子標的治療薬が頭頚部癌、大腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、乳癌に臨床応用されている。そのようなEGFR標的治療薬としては、ゲフィチニブやエルロチニブなどが挙げられるが、これらはEGFRチロシンキナーゼのＡＴＰ結合部位にＡＴＰと競合的に結合することにより、EGFRの自己リン酸化を阻害し、シグナル伝達を遮断する作用を示す。   Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) is a transmembrane receptor consisting of an intracellular tyrosine kinase domain, a transmembrane domain, and an extracellular ligand binding domain, and is overexpressed in various malignant tumors. It is known that In recent years, molecular targeted therapeutic drugs targeting EGFR have been clinically applied to head and neck cancer, colon cancer, pancreatic cancer, non-small cell lung cancer, prostate cancer, and breast cancer. Examples of such EGFR-targeted therapeutic agents include gefitinib and erlotinib, which inhibit the EGFR autophosphorylation by binding to ATP competitively with the ATP binding site of EGFR tyrosine kinase, and signal transduction. The action of blocking is shown.

欧米でのEGFRチロシンキナーゼインヒビターを利用した分子標的製剤の臨床治験では、著名な効果を示す症例がいる一方で、死亡などの重篤な副作用が報告されている。また、欧米での臨床治験では、対象が免疫組織染色にてEGFR陽性であることが条件とされていた。しかしEGFRの遺伝子変異をみる標準的な測定・評価方法が確立されておらず、方法・手技により検出率が異なる可能性があること、また切除不能肺癌においては正常細胞の混入の少ない検体を得ることが困難なことがしばしばあることが問題とされてきた。また、EGFRチロシンキナーゼインヒビターを標的とした分子標的薬剤として市販されたゲフィチニブ（商品名イレッサ）は、米国で遺伝子変異がゲフィチニブの感受性予測因子であると報告されたが、その後遺伝子変異と感受性とが完全には一致しないことが研究で示され、遺伝子変異は本剤投与の適応を決定するほどの確実性・現実性はないと判断されている。   In clinical trials of molecular target preparations using EGFR tyrosine kinase inhibitors in Europe and the United States, there are cases showing remarkable effects, but serious side effects such as death have been reported. In clinical trials in Europe and the United States, the subject was required to be EGFR positive by immunohistochemical staining. However, standard measurement / evaluation methods for EGFR gene mutations have not been established, and detection rates may differ depending on the method / procedure. In unresectable lung cancer, obtain a sample with less normal cell contamination. It has been a problem that things are often difficult. In addition, gefitinib (trade name Iressa) marketed as a molecular targeting drug targeting EGFR tyrosine kinase inhibitor was reported in the United States that genetic mutation was a susceptibility predictor of gefitinib. Studies have shown that the results are not completely consistent, and it has been determined that gene mutations are not as reliable or realistic as to determine the indication for administration of this drug.

EGFRチロシンキナーゼインヒビターを利用した分子標的放射線イメージング製剤の開発により、ガンマ線あるいはポジトロン機能画像を評価することで、すでに市販されている分子標的治療薬が持つ致命的な副作用発現の予見や、治療対象となるEGFR発現症例のよりよい選択が可能になることが期待される。   By developing gamma ray or positron functional images by developing molecular target radiation imaging preparations using EGFR tyrosine kinase inhibitors, it is possible to predict the fatal side effects of molecular target therapeutics already on the market, It is expected that better selection of EGFR expressing cases will be possible.

EGFRチロシンキナーゼインヒビターを利用したイメージング製剤としては、イスラエルのグループが報告した非特許文献１〜２及び特許文献１に記載のイメージング剤や、特許文献２に記載のイメージング剤がある。これらはいずれもキナゾリン骨格を有する化合物の誘導体を利用したものであるが、臨床応用上有用なイメージング剤の開発がさらに望まれている。   Examples of imaging preparations using EGFR tyrosine kinase inhibitors include imaging agents described in Non-Patent Documents 1 and 2 and Patent Document 1 reported by the Israeli group, and imaging agents described in Patent Document 2. These all utilize derivatives of compounds having a quinazoline skeleton, but the development of imaging agents useful for clinical application is further desired.

特表２００７−５０５１０１号公報Special Table 2007-505101 特開２００７−１９１４３０号公報JP 2007-191430 A J. Med. Chem. (2005) vol.48, p.5337-5348J. Med. Chem. (2005) vol.48, p.5337-5348 Int. J. Cancer: (2002) vol.101, p.360-370Int. J. Cancer: (2002) vol.101, p.360-370

従って、本発明は、EGFRチロシンキナーゼインヒビターを利用した新規なイメージング剤を提供することを目的とする。   Therefore, an object of the present invention is to provide a novel imaging agent using an EGFR tyrosine kinase inhibitor.

本願発明者らは、鋭意研究の結果、キナゾリン骨格を有する４−アニリノキナゾリン誘導体がEGFRチロシンキナーゼを阻害する能力を有し、該誘導体を放射性標識した化合物が生体内において正常筋肉組織よりも腫瘍に有意に多く蓄積することを見出し、本願発明を完成した。   As a result of diligent research, the inventors of the present application have found that a 4-anilinoquinazoline derivative having a quinazoline skeleton has an ability to inhibit EGFR tyrosine kinase, and a compound in which the derivative is radiolabeled is more tumor than normal muscle tissue in vivo The invention of the present application was completed.

すなわち、本発明は、下記一般式（I）   That is, the present invention provides the following general formula (I)

[式中
R₁、R₂、R₃はそれぞれ独立して
（１）R基、
（２）ハロゲン、
（３）−NHR基、−RNHR'NR''基、−RNHR'OR''基、若しくは−RNHR'SR''基、
（４）−OR基、−OROR'基、−ROR'NR''基、−ROR'OR''基、若しくは−ROR'SR''基、又は
（５）−SR基、−RSR'NR''基、−RSR'OR''基、若しくは−RSR'SR''基
（ここでR、R'及びR''はそれぞれ独立して水素又は炭素数１〜１０のアルキル基又はアルキレン基を表し、該アルキル基又はアルキレン基中の炭素原子は=O又は=Sで置換されていてもよい）
を表し、
R₄、R₅、R₆、R₇、R₈はそれぞれ独立して
（１）ハロゲン、
（２）−OH、−NH₂、若しくは−NO₂又は
（３）炭素数１〜１０のアルキル基、アルケニル基、若しくはアルキニル基（ここでアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基中の炭素原子はハロゲンで置換されていてもよい）
を表す]
で示されるキナゾリン誘導体を放射性標識した標識化合物から成る腫瘍イメージング剤を提供する。 [In the formula
R ₁ , R ₂ and R ₃ are each independently (1) an R group,
(2) halogen,
(3) -NHR group, -RNHR'NR "group, -RNHR'OR" group, or -RNHR'SR "group,
(4) -OR group, -OROR 'group, -ROR'NR "group, -ROR'OR" group, or -ROR'SR "group, or (5) -SR group, -RSR'NR''Group,-RSR'OR''group, or -RSR'SR''group (wherein R, R' and R '' each independently represents hydrogen, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms or an alkylene group) And a carbon atom in the alkyl group or alkylene group may be substituted with = O or = S)
Represents
R ₄ , R ₅ , R ₆ , R ₇ and R ₈ are each independently (1) halogen,
(2) —OH, —NH ₂ , or —NO ₂ or (3) an alkyl group, alkenyl group, or alkynyl group having 1 to 10 carbon atoms (wherein the carbon atom in the alkyl group, alkenyl group, and alkynyl group is a halogen atom) May be substituted)
Represents
The tumor imaging agent which consists of a labeled compound which radiolabeled the quinazoline derivative shown by this.

本発明により、EGFRチロシンキナーゼ阻害活性を有するキナゾリン誘導体を利用した新規な腫瘍イメージング剤が提供された。本発明の腫瘍イメージング剤を生体に投与し、該イメージング剤からの放射線を体外で測定し解析することにより、腫瘍を検出することができる。   According to the present invention, a novel tumor imaging agent using a quinazoline derivative having EGFR tyrosine kinase inhibitory activity was provided. A tumor can be detected by administering the tumor imaging agent of the present invention to a living body and measuring and analyzing the radiation from the imaging agent outside the body.

本発明で用いられるキナゾリン誘導体は、上記一般式(I)で示されるものである。上記した置換基R₁ないしR₃が表し得るアルキル基及びアルキレン基、並びにR₄ないしR₈が表し得るアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基は、直鎖及び分枝鎖の両者を包含するものとする。また、R₁ないしR₃が表し得るアルキル基及びアルキレン基においては、１以上の炭素原子が=O又は=Sで置換されていてもよい。すなわち、該アルキル基及びアルキレン基の炭素鎖を構成する炭素原子は、カルボニル基又はチオカルボニル基を形成していてもよい。上記「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。キナゾリン骨格４位に結合するアニリノ基の環構造上の置換基R₄ないしR₈が表し得るアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基においては、炭素鎖を構成する１以上の炭素原子がハロゲンで置換されていてもよい（すなわち、炭素原子がハロゲンと結合していてもよい）。 The quinazoline derivative used in the present invention is represented by the above general formula (I). The alkyl group and alkylene group that can be represented by the substituents R ₁ to R _3, and the alkyl group, alkenyl group, and alkynyl group that R ₄ to R ₈ can represent include both straight and branched chains. To do. In the alkyl group and alkylene group that can be represented by R ₁ to R ₃ , one or more carbon atoms may be substituted with ═O or ═S. That is, the carbon atoms constituting the carbon chain of the alkyl group and alkylene group may form a carbonyl group or a thiocarbonyl group. The “halogen” means fluorine, chlorine, bromine or iodine. In the alkyl, alkenyl and alkynyl groups that can be represented by the substituents R ₄ to R ₈ on the ring structure of the anilino group bonded to the 4-position of the quinazoline skeleton, one or more carbon atoms constituting the carbon chain are substituted with halogen. (Ie, a carbon atom may be bonded to a halogen).

上記した一般式(I)のキナゾリン誘導体のうち、好ましい置換基の例としては以下のものが挙げられる。   Among the quinazoline derivatives of the general formula (I) described above, examples of preferable substituents include the following.

R₁、R₂、R₃が表し得るアルキル基及びアルキレン基としては、炭素数１〜４であるものが好ましい。また、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈が表し得るアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基としては、炭素数１〜４であるものが好ましい。 As the alkyl group and alkylene group that R ₁ , R ₂ , and R ₃ can represent, those having 1 to 4 carbon atoms are preferable. _{Further, R 4, R 5, R} 6, R 7, the alkyl group R ₈ may represent, the alkenyl and alkynyl groups, it is preferable 1 to 4 carbon atoms.

キナゾリン骨格の６位及び７位にそれぞれ結合する置換基R₁及びR₂としては、それぞれ独立してR基又は−OROR'基が好ましく、中でも両者が水素であることが好ましい。 As the substituents R ₁ and R ₂ bonded to the 6-position and 7-position of the quinazoline skeleton, respectively, an R group or an —OROR ′ group is preferable independently, and it is preferable that both are hydrogen.

キナゾリン骨格の４位を置換するアニリノ基の窒素原子に結合する置換基R₃としては、上記したR基が好ましく、中でも水素が好ましい。 As the substituent R ₃ bonded to the nitrogen atom of the anilino group substituting the 4-position of the quinazoline skeleton, the above R group is preferable, and hydrogen is particularly preferable.

４位のアニリノ基の環構造上の置換基としては、R₄、R₅、R₆、R₈が水素又はハロゲン（F,Cl,Br,I）であり、R₇が炭素数１〜４のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であることが好ましい。中でも、R₄、R₅、R₆、R₈が水素であることが好ましく、R₇が炭素数１〜４のアルキニル基、特にエチニル基であることが好ましい。 As substituents on the ring structure of the 4-position anilino group, R ₄ , R ₅ , R ₆ , and R ₈ are hydrogen or halogen (F, Cl, Br, I), and R ₇ has 1 to 4 carbon atoms. Are preferably an alkyl group, an alkenyl group or an alkynyl group. Among these, R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₈ are preferably hydrogen, and R ₇ is preferably an alkynyl group having 1 to 4 carbon atoms, particularly an ethynyl group.

上記した一般式(I)で示されるキナゾリン誘導体は、この分野で公知の常法により、市販の化合物から容易に調製することができる。例えば、下記スキーム１に記載されるように、4−クロロ−6,7−置換−キナゾリンと、１〜３当量程度の置換アニリンとを、アルコール溶媒（出発物質のキナゾリン化合物1molに対し5〜15L程度）中で１〜５時間程度加熱還流することにより、両者を反応させ、R₃が水素である一般式(I)のキナゾリン誘導体(I')を得ることができる。アルコール溶媒としては、イソプロパノール等を好ましく用いることができる。 The quinazoline derivative represented by the above general formula (I) can be easily prepared from a commercially available compound by a conventional method known in this field. For example, as described in Scheme 1 below, 4-chloro-6,7-substituted-quinazoline and about 1 to 3 equivalents of substituted aniline are mixed with an alcohol solvent (5-15 L to 1 mol of the starting quinazoline compound). In general, the quinazoline derivative (I ′) of the general formula (I) in which R ₃ is hydrogen can be obtained by heating to reflux for about 1 to 5 hours. As the alcohol solvent, isopropanol or the like can be preferably used.

（置換基R₁〜R₈は上記定義に同じ） (Substituents R _{1 to} R ₈ are the same as defined above)

置換基R₃が上記（１）〜（５）に示される水素以外の基である一般式(I)のキナゾリン誘導体は、上記一般式(I')の化合物から公知の常法により得ることができる。また、R₁及びR₂は、出発物質上の置換基のままでもよいし、(I')を合成した後に公知の常法により他のR₁及びR₂に変換してもよい。 The quinazoline derivative of the general formula (I) in which the substituent R ₃ is a group other than hydrogen represented by the above (1) to (5) can be obtained from the compound of the above general formula (I ′) by a known conventional method. it can. R ₁ and R ₂ may be the same as the substituents on the starting material, or may be converted to other R ₁ and R ₂ by a conventional method after synthesis of (I ′).

本発明の腫瘍イメージング剤は、上記した一般式(I)で示されるキナゾリン誘導体を放射性標識した化合物から成る。標識に用いる放射性物質としては、PET（陽電子断層撮影法）やSPECT（単一光子放射型コンピュータ断層撮影法）等において使用されるイメージング剤の標識に通常用いられる放射性物質であれば特に限定されず、例えば放射性ハロゲン（¹²³I、¹⁸F等）、放射性金属（⁶⁸Ga等の放射性ガリウム、^99mTc等の放射性テクネチウム等）¹¹C、¹³N、¹⁵O等を用いることができる。 The tumor imaging agent of the present invention comprises a compound obtained by radiolabeling a quinazoline derivative represented by the above general formula (I). The radioactive substance used for labeling is not particularly limited as long as it is a radioactive substance usually used for labeling imaging agents used in PET (positron emission tomography) and SPECT (single photon emission computed tomography). For example, radioactive halogen ( ¹²³ I, ¹⁸ F, etc.), radioactive metal (radio gallium such as ⁶⁸ Ga, radioactive technetium such as ^99m Tc, etc.) ¹¹ C, ¹³ N, ¹⁵ O, etc. can be used.

放射性ハロゲンによる標識は、上記した一般式(I)のキナゾリン誘導体中のハロゲンを放射性ハロゲンとすることにより、容易に行うことができる。また、¹¹C、¹³N、¹⁵O等による標識は、上記キナゾリン誘導体の骨格構造（キナゾリン骨格及びアニリン環）中又は上記置換基中にこれらの放射性原子を適用することにより、容易に行うことができる。このような放射性原子の導入は、この分野で周知の常法により行なうことができる。 Labeling with a radioactive halogen can be easily performed by making the halogen in the quinazoline derivative of the general formula (I) into a radioactive halogen. In addition, labeling with ¹¹ C, ¹³ N, ¹⁵ O, etc. can be easily carried out by applying these radioactive atoms in the skeleton structure (quinazoline skeleton and aniline ring) of the quinazoline derivative or in the substituent. it can. Such a radioactive atom can be introduced by a conventional method well known in this field.

放射性ガリウムや放射性テクネチウム等の放射性金属による標識は、例えば、上記したキナゾリン誘導体に二官能性キレート剤構造を導入し、該キレート剤を介して放射性金属を結合させることにより、容易に行うことができる。このような手法はこの分野において公知の常法であり、導入する二官能性キレート剤は種々のものが公知であり、市販品も存在する。例えば、二官能性キレート剤としては、ジアミノジチオール（DADT）類、ヒドラジノニコチンアミド（HYNIC）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTPA）や、European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (2007) vol.34, No.3, p.354-362,及びAcad Radiol. (2007) Sep, 14(9), p.1050-1057に記載のポリグルタミン酸ペプチド（GAP）が挙げられるが、これらに限定されない。このような二官能性キレート剤は、上記キナゾリン誘導体中のアミノ基を利用して容易に該誘導体中に導入できる。従って、このような手法により放射性金属標識を行う場合、上記キナゾリン誘導体は、末端にアミノ基を有する置換基を有することが好ましい。例えば、一般式(I)のキナゾリン誘導体が、R³が水素である上記一般式(I')の化合物である場合、キナゾリン骨格の４位に結合するアミノ基を利用してキレート剤構造を導入することができる。 Labeling with a radioactive metal such as radioactive gallium or radioactive technetium can be easily performed by, for example, introducing a bifunctional chelating agent structure into the above-described quinazoline derivative and binding the radioactive metal via the chelating agent. . Such a method is a conventional method known in this field, and various bifunctional chelating agents to be introduced are known, and there are commercially available products. For example, as the bifunctional chelating agent, diaminodithiol (DADT), hydrazinonicotinamide (HYNIC), diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA), European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (2007) vol.34, No. 3, p.354-362, and Acad Radiol. (2007) Sep, 14 (9), p.1050-1057, but not limited thereto. Such a bifunctional chelating agent can be easily introduced into the derivative by utilizing an amino group in the quinazoline derivative. Therefore, when performing radioactive metal labeling by such a technique, the quinazoline derivative preferably has a substituent having an amino group at the terminal. For example, when the quinazoline derivative of the general formula (I) is a compound of the above general formula (I ′) in which R ³ is hydrogen, a chelating agent structure is introduced using an amino group bonded to the 4-position of the quinazoline skeleton. can do.

例えば、本発明で用いられる標識化合物としては、一般式(I')のキナゾリン骨格４位のアミノ基にキレート剤構造を導入した下記一般式(II)   For example, as the labeling compound used in the present invention, the following general formula (II) wherein a chelating agent structure is introduced into the amino group at the 4-position of the quinazoline skeleton of the general formula (I ′)

[式中、R₁、R₂、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈は前記定義に同じであり、Xはキレート剤構造を表す]
で示される化合物のキレート剤構造部分に放射性金属を結合させた標識化合物を挙げることができるが、これに限定されない。 [Wherein R ₁ , R ₂ , R ₄ , R ₅ , R ₆ , R ₇ , R ₈ are the same as defined above, and X represents a chelator structure]
A labeling compound in which a radioactive metal is bound to the chelating agent structure portion of the compound represented by the above can be exemplified, but the present invention is not limited thereto.

本発明の腫瘍イメージング剤は、PETやSPECTのような非侵襲の検出技術におけるイメージング剤として用いることができる。下記実施例に記載される通り、本発明の腫瘍イメージング剤を生体内に投与すると、正常筋肉組織よりも腫瘍組織に有意に多く蓄積するので、放射性標識からの放射線を検出・解析することで生体内の腫瘍を検出することができる。   The tumor imaging agent of the present invention can be used as an imaging agent in a noninvasive detection technique such as PET or SPECT. As described in the Examples below, when the tumor imaging agent of the present invention is administered in vivo, it accumulates significantly more in the tumor tissue than in the normal muscle tissue. It can detect tumors in the body.

本発明の腫瘍イメージング剤は、通常、投与に適した緩衝液に溶解し、血管内投与により生体内に投与される。投与量は、特に限定されないが、通常、対象動物の体重1kg当たり1MBq〜15MBq程度、特に1.5MBq〜5MBq程度である。対象動物は哺乳動物であり、好ましくはヒトである。   The tumor imaging agent of the present invention is usually dissolved in a buffer suitable for administration and administered in vivo by intravascular administration. The dose is not particularly limited, but is usually about 1 MBq to 15 MBq, particularly about 1.5 MBq to 5 MBq per kg body weight of the subject animal. The target animal is a mammal, preferably a human.

以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。   Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. However, the present invention is not limited to the following examples.

市販の4-クロロ-キナゾリンと3-エチニル-アニリンから、(3-エチニル-フェニル)-キナゾリン-4-イル-アミン（YCU05）を合成した。   (3-Ethynyl-phenyl) -quinazolin-4-yl-amine (YCU05) was synthesized from commercially available 4-chloro-quinazoline and 3-ethynyl-aniline.

具体的には、50 mLのナス型フラスコに4-クロロキナゾリン(164.6 mg, 1.00 mmol), 3-エチニルアニリン (0.22 mL, 2当量), イソプロピルアルコール(10 mL)を順次加え、３時間加熱還流した。TLCで原料の消失を確認した後、室温まで冷却し、飽和NaHCO₃水溶液(5 mL)を加えた。AcOEt(10mL x 3)で抽出し、有機層を飽和食塩水(5 mL)で洗浄した後、Na₂SO₄で乾燥し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィーで精製しYCU05(207mg, 収率76%)を黄色固体として得た。 Specifically, 4-chloroquinazoline (164.6 mg, 1.00 mmol), 3-ethynylaniline (0.22 mL, 2 equivalents) and isopropyl alcohol (10 mL) were sequentially added to a 50 mL eggplant-shaped flask and heated under reflux for 3 hours. did. After confirming disappearance of the raw material by TLC, the mixture was cooled to room temperature, and saturated aqueous NaHCO ₃ solution (5 mL) was added. After extraction with AcOEt (10 mL × 3), the organic layer was washed with saturated brine (5 mL), dried over Na ₂ SO ₄ , and the solvent was evaporated under reduced pressure. The obtained residue was purified by column chromatography to obtain YCU05 (207 mg, yield 76%) as a yellow solid.

European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (2007) vol.34, No.3, p.354-362,及びAcad Radiol. (2007) Sep, 14(9), p.1050-1057記載の方法に準じて、上記で得られたYCU05のキナゾリン骨格４位のアミノ基に公知のキレート剤（ポリグルタミン酸ペプチド、GAP）を結合させ、これを介して⁶⁸Gaを結合させることにより、YCU05への標識を行い、分子標的ポジトロンイメージング製剤（⁶⁸Ga-GAP-YCU05)を調製した。 According to the method described in European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (2007) vol.34, No.3, p.354-362, and Acad Radiol. (2007) Sep, 14 (9), p.1050-1057. , By binding a known chelating agent (polyglutamic acid peptide, GAP) to the amino group at the 4-position of the quinazoline skeleton of YCU05 obtained above, and labeling YCU05 by binding ⁶⁸ Ga through this, molecular targets positron imaging formulation ⁽⁶⁸ Ga-GAP-YCU05) was prepared.

キレート剤のポリグルタミン酸ペプチド（GAP）としては、上記式中に示される分子量1,500〜3,000（n=10-20）のものを用いた。まず、GAPのナトリウム塩500mgを2mlの2N塩酸に溶解して酸性型に変換し、該溶液を分子量カットオフ値1,000のSpectra/POR molecular porous membrane（Spectrum Medical Industries Inc.）を用いて４８時間透析した。凍結乾燥後、酸性型GAP（357.7 mg, 0.1589 mmol）を10mlのDMFに溶解した。該溶液にYCU05（38.97mg, 0.1589 mmol）、4-N,N-ジメチルアミノピリジン（23.30mg,0.1907mmol）を加えた。この混合物を室温で２日間撹拌した。減圧下でDMFを蒸発させた後、１N炭酸水素ナトリウムを添加してクロロホルムで抽出した。水層を４８時間透析（分子量カットオフ値1,000）し、生成物を凍結乾燥することにより、キナゾリン骨格４位のアミノ基にGAPを結合させた化合物（GAP-YCU05、105mg）を得た。   As the chelating agent polyglutamic acid peptide (GAP), one having a molecular weight of 1,500 to 3,000 (n = 10-20) shown in the above formula was used. First, 500 mg of GAP sodium salt was dissolved in 2 ml of 2N hydrochloric acid to convert it into an acidic form, and the solution was dialyzed for 48 hours using a Spectra / POR molecular porous membrane (Spectrum Medical Industries Inc.) having a molecular weight cutoff of 1,000. did. After lyophilization, acidic GAP (357.7 mg, 0.1589 mmol) was dissolved in 10 ml of DMF. YCU05 (38.97 mg, 0.1589 mmol) and 4-N, N-dimethylaminopyridine (23.30 mg, 0.1907 mmol) were added to the solution. The mixture was stirred at room temperature for 2 days. After DMF was evaporated under reduced pressure, 1N sodium hydrogen carbonate was added and extracted with chloroform. The aqueous layer was dialyzed for 48 hours (molecular weight cut-off value 1,000), and the product was freeze-dried to obtain a compound (GAP-YCU05, 105 mg) in which GAP was bonded to the amino group at the 4-position of the quinazoline skeleton.

標識に用いる⁶⁸Gaは、市販の⁶⁸Ge/⁶⁸Ga generator（Eckert & Ziegler Isotope Products Inc., USA）から抽出して得た。具体的には、⁶⁸Ge/⁶⁸Ga generatorから0.5NのHClで⁶⁸Gaを抽出し、酸性溶液をアニオン樹脂カートリッジに通液して⁶⁸Gaを捕捉した。カートリッジを4N塩酸で洗浄し乾燥させた後、⁶⁸GaCl₃として水を用いて⁶⁸Gaを溶出させ、水酸化ナトリウムと酢酸ナトリウムを用いてpHを4-5に調整した。GAP-YCU05のアセテートバッファー溶液を⁶⁸GaCl₃溶液に添加し、３７℃で２０分間反応させることで、YCU05の⁶⁸Ga標識化合物（⁶⁸Ga-GAP-YCU05）を得た。 ⁶⁸ Ga used for labeling was obtained by extraction from a commercially available ⁶⁸ Ge / ⁶⁸ Ga generator (Eckert & Ziegler Isotope Products Inc., USA). Specifically, ⁶⁸ Ga was extracted with 0.5N HCl from a ⁶⁸ Ge / ⁶⁸ Ga generator, and the acidic solution was passed through an anion resin cartridge to capture ⁶⁸ Ga. After the cartridge was washed with 4N hydrochloric acid and dried, ⁶⁸ Ga was eluted with water as ⁶⁸ GaCl ₃ , and the pH was adjusted to 4-5 with sodium hydroxide and sodium acetate. An acetate buffer solution of GAP-YCU05 was added to a ⁶⁸ GaCl ₃ solution and reacted at 37 ° C. for 20 minutes to obtain a ⁶⁸ Ga-labeled compound of YCU05 ( ⁶⁸ Ga-GAP-YCU05).

In vitro実験
YCU05(10μM)のEGFRチロシンキナーゼ阻害作用を、A431腫瘍細胞を用いてELISA定量法により測定した。具体的には、以下のとおりに行なった。A431腫瘍細胞にYCU05を10μMの濃度で添加し、バッファー（50mM HEPES, PH7.4, 20mM MgCl₂, 0.2mM Na₃VO₄）中で２５℃、６０分間インキュベートした。次いで、Journal of Biological Chemistry (1996) vol.271, p.311-318 及びANALYTICAL BIOCHEMISTRY (1992) vol. 203, No.1, p.151-157の論文報告に従いEGFR Receptor チロシンキナーゼの活性の抑制効果を測定した。 In vitro experiments
EGFR tyrosine kinase inhibitory action of YCU05 (10 μM) was measured by ELISA assay using A431 tumor cells. Specifically, it was performed as follows. YCU05 was added to A431 tumor cells at a concentration of 10 μM and incubated in a buffer (50 mM HEPES, PH7.4, 20 mM MgCl ₂ , 0.2 mM Na ₃ VO ₄ ) at 25 ° C. for 60 minutes. Next, the inhibitory effect of the activity of EGFR Receptor tyrosine kinase according to the paper reports of Journal of Biological Chemistry (1996) vol.271, p.311-318 and ANALYTICAL BIOCHEMISTRY (1992) vol.203, No.1, p.151-157 Was measured.

動物実験１
ヒト類表皮癌A431を6週令のBALB/cヌードマウスに移植した腫瘍モデルに対し、0.5MBq/0.5mg/0.5ml（PH6.4）の⁶⁸Ga標識YCU05を尾静脈から注射し、30分後に屠殺し、OCT(optimal cutting temperature)コンパウンドおよび液体窒素を用いてLeica CM3600（ライカマイクロシステムズ）により凍結薄層組織切片を作製した。該切片は、マウスをほぼ体軸に沿う方向で、腫瘍部を縦断するように切断して作製した。該切片を、Instant Imager (Perkin-Elmer)にて撮像し、筋肉組織に対する腫瘍組織の集積比を算出した（図１）。 Animal experiment 1
The human epidermoid carcinoma A431 to implanted tumor model in BALB / c nude mice of 6 weeks old, were injected ⁶⁸ Ga-labeled YCU05 of 0.5MBq / 0.5mg / 0.5ml (PH6.4) via the tail vein, 30 minutes Later, the mice were sacrificed, and frozen thin layer tissue sections were prepared with Leica CM3600 (Leica Microsystems) using OCT (optimal cutting temperature) compound and liquid nitrogen. The section was prepared by cutting the mouse so as to cut the tumor part in a direction substantially along the body axis. The sections were imaged with an Instant Imager (Perkin-Elmer), and the accumulation ratio of tumor tissue to muscle tissue was calculated (FIG. 1).

動物実験２
ヒト類表皮癌A431を6週令のBALB/cヌードマウスに移植した腫瘍モデルに対し、4MBq/2mg/0.5ml（PH6.4）の⁶⁸Ga-GAP-YCU05を尾静脈から注射し、30分後に屠殺し解剖して腫瘍と筋肉を取り出し、Cobra gamma counter(Packard)でカウントし、筋肉組織に対する腫瘍組織の集積比を算出した。 Animal experiment 2
4MBq / 2mg / 0.5ml (PH6.4) of ⁶⁸ Ga-GAP-YCU05 was injected into the tumor model in which human epidermoid carcinoma A431 was transplanted into 6-week-old BALB / c nude mice. After sacrifice and dissection, the tumor and muscle were taken out, counted with a Cobra gamma counter (Packard), and the accumulation ratio of the tumor tissue to the muscle tissue was calculated.

結果
In Vitro 実験
A431腫瘍細胞を用いたEGFRチロシンキナーゼ阻害作用試験において、YCU05は23%の阻害作用を示した。すなわち、10μMのYCU05を添加したA431腫瘍細胞では、EGFRチロシンキナーゼの活性が、YCU05非添加のA431腫瘍細胞の活性の23%まで低下していた。 result
In Vitro experiment
In the EGFR tyrosine kinase inhibitory action test using A431 tumor cells, YCU05 showed 23% inhibitory action. That is, in the A431 tumor cell added with 10 μM YCU05, the activity of the EGFR tyrosine kinase was reduced to 23% of the activity of the A431 tumor cell not added with YCU05.

動物実験１
Autoradiographic image上の筋肉組織に対する腫瘍組織の集積比は1.27と1より高い集積を示した（図１）。 Animal experiment 1
The accumulation ratio of tumor tissue to muscle tissue on the autoradiographic image was 1.27, which was higher than 1 (Fig. 1).

動物実験２
A431腫瘍移植したBALB/cヌードマウスの生体内分布の実験ではT/M比が1.1±0.2と１よりも高値を示した。 Animal experiment 2
In the biodistribution experiment of BALB / c nude mice transplanted with A431 tumor, the T / M ratio was 1.1 ± 0.2, which was higher than 1.

動物実験１において作製した腫瘍モデルマウスの凍結切片像（上段）と、該切片からの放射線を撮像した図（下段）である。枠内が腫瘍組織であり、図の左側が頭部、右側が尾部方向である。It is the frozen section image (upper stage) of the tumor model mouse produced in animal experiment 1, and the figure (lower stage) which imaged the radiation from this section. The inside of the frame is the tumor tissue, the left side of the figure is the head, and the right side is the tail direction.

Claims (7)

下記一般式（I）
[式中
R₁、R₂、R₃はそれぞれ独立して
（１）R基、
（２）ハロゲン、
（３）−NHR基、−RNHR'NR''基、−RNHR'OR''基、若しくは−RNHR'SR''基、
（４）−OR基、−OROR'基、−ROR'NR''基、−ROR'OR''基、若しくは−ROR'SR''基、又は
（５）−SR基、−RSR'NR''基、−RSR'OR''基、若しくは−RSR'SR''基
（ここでR、R'及びR''はそれぞれ独立して水素又は炭素数１〜１０のアルキル基又はアルキレン基を表し、該アルキル基又はアルキレン基中の炭素原子は=O又は=Sで置換されていてもよい）
を表し、
R₄、R₅、R₆、R₇、R₈はそれぞれ独立して
（１）ハロゲン、
（２）−OH、−NH₂、若しくは−NO₂又は
（３）炭素数１〜１０のアルキル基、アルケニル基、若しくはアルキニル基（ここでアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基中の炭素原子はハロゲンで置換されていてもよい）
を表す]
で示されるキナゾリン誘導体を放射性標識した標識化合物から成る腫瘍イメージング剤。 The following general formula (I)
[In the formula
R ₁ , R ₂ and R ₃ are each independently (1) an R group,
(2) halogen,
(3) -NHR group, -RNHR'NR "group, -RNHR'OR" group, or -RNHR'SR "group,
(4) -OR group, -OROR 'group, -ROR'NR "group, -ROR'OR" group, or -ROR'SR "group, or (5) -SR group, -RSR'NR''Group,-RSR'OR''group, or -RSR'SR''group (wherein R, R' and R '' each independently represents hydrogen, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms or an alkylene group) And a carbon atom in the alkyl group or alkylene group may be substituted with = O or = S)
Represents
R ₄ , R ₅ , R ₆ , R ₇ and R ₈ are each independently (1) halogen,
(2) —OH, —NH ₂ , or —NO ₂ or (3) an alkyl group, alkenyl group, or alkynyl group having 1 to 10 carbon atoms (wherein the carbon atom in the alkyl group, alkenyl group, and alkynyl group is a halogen atom) May be substituted)
Represents
A tumor imaging agent comprising a labeled compound obtained by radiolabeling a quinazoline derivative represented by 一般式(I)において、前記全てのアルキル基、アルキレン基、アルケニル基及びアルキニル基の炭素数が１〜４である請求項１記載の腫瘍イメージング剤。   The tumor imaging agent according to claim 1, wherein in general formula (I), all the alkyl groups, alkylene groups, alkenyl groups, and alkynyl groups have 1 to 4 carbon atoms. 一般式(I)において、R₄、R₅、R₆、R₈が水素であり、R₇がエチニル基である請求項１又は２記載の腫瘍イメージング剤。 The tumor imaging agent according to claim 1 or 2, wherein, in the general formula (I), R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₈ are hydrogen and R ₇ is an ethynyl group. 一般式(I)において、R₁、R₂がそれぞれ独立して水素又は−OROR'基であり、R₃が水素である請求項３記載の腫瘍イメージング剤。 The tumor imaging agent according to claim ₃ , wherein, in the general formula (I), R ₁ and R ₂ are each independently hydrogen or -OROR 'group, and R ₃ is hydrogen. 一般式(I)において、R₁、R₂が共に水素である請求項４記載の腫瘍イメージング剤。 The tumor imaging agent according to claim 4, wherein, in the general formula (I), R ₁ and R ₂ are both hydrogen. 前記放射性標識は放射性ハロゲン、放射性ガリウム又は放射性テクネチウムである請求項１ないし５のいずれか１項に記載の腫瘍イメージング剤。   The tumor imaging agent according to any one of claims 1 to 5, wherein the radioactive label is radioactive halogen, radioactive gallium, or radioactive technetium. 前記標識化合物は、下記一般式(II)
[式中、R₁、R₂、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈は前記定義に同じであり、Xはキレート剤構造を表す]
で示される化合物のキレート剤構造部分に放射性金属が結合したものである請求項１ないし６のいずれか１項に記載の腫瘍イメージング剤。 The labeling compound has the following general formula (II)
[Wherein R ₁ , R ₂ , R ₄ , R ₅ , R ₆ , R ₇ , R ₈ are the same as defined above, and X represents a chelator structure]
The tumor imaging agent according to any one of claims 1 to 6, wherein a radioactive metal is bound to a chelating agent structure portion of the compound represented by formula (1).