JP2009137922A - Pharmaceutical preparation for delivering rifamycin derivative to damaged tissue - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、リファマイシン誘導体を含有する製剤に関する。 The present invention relates to a preparation containing a rifamycin derivative.
リファマイシン誘導体は、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）等に対して極めて強い抗菌活性を有する抗生物質であるが、本発明者らは、最近、リファマイシン誘導体が血管性疾患等にも有効に作用することを見出している。 Rifamycin derivatives are antibiotics having extremely strong antibacterial activity against Chlamydia pneumoniae, Helicobacter pylori and the like. However, the present inventors have recently reported that rifamycin derivatives are vascular diseases. It has been found that this also works effectively.
血管疾患、悪性腫瘍、感染症などの局所疾患を治療するためには、薬物の投与は、一般的には、全身投与により行われる場合が多い。しかし、全身投与により部位特異的に薬物をデリバリーすることは困難であり、例えば、経口投与、あるいは静脈内投与された薬物は、患者の体全体に分布し、代謝される。多くの場合、所望の部位に到達する薬物の量は投与量に対して大きく減少する。それ故に、全身投与の場合、大量の薬物を投与する必要があり、その結果、不快で望ましくない全身性の副作用が生じる。また、経済的にも非効率となる。したがって、副作用や効率性の点から、局所での使用が可能な薬物デリバリーシステムが必要とされる。 In order to treat local diseases such as vascular diseases, malignant tumors, and infections, administration of drugs is generally carried out by systemic administration. However, it is difficult to deliver a drug site-specifically by systemic administration. For example, a drug administered orally or intravenously is distributed and metabolized throughout the patient's body. In many cases, the amount of drug reaching the desired site is greatly reduced with respect to the dose. Therefore, systemic administration requires the administration of large amounts of drugs, resulting in unpleasant and undesirable systemic side effects. Moreover, it becomes economically inefficient. Therefore, there is a need for a drug delivery system that can be used locally in terms of side effects and efficiency.
しかし、これまでに報告された部位特異的に薬物をデリバリーする方法の多くはは、組織移行性のあまりよくない薬剤に対して、組織移行性を改善するために行われたものであった（特許文献１〜３）。
特許文献１〜３においては、薬物の組織移行性を改善するために薬物を粒子に封入している。しかし、リファマイシン誘導体のように組織移行性が比較的良好な薬物に対して同様の手法を採用した場合、薬物が正常組織にも移行し、望ましくない副作用を招くおそれがある。 In Patent Documents 1 to 3, a drug is encapsulated in particles in order to improve the tissue migration of the drug. However, when a similar technique is employed for a drug having relatively good tissue transferability such as a rifamycin derivative, the drug may also transfer to normal tissue, leading to undesirable side effects.
本発明は、組織移行性の高いリファマイシン誘導体であっても、リファマイシン誘導体をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することにより、正常組織に比べ傷害組織に選択的に移行して、血管疾患等を治療することが可能なことを見出し、本発明を完成させるに至った。 Even if a rifamycin derivative having a high tissue migration property is used, the rifamycin derivative is encapsulated in microparticles or nanoparticles, so that the rifamycin derivative can be selectively transferred to a damaged tissue as compared with a normal tissue, and vascular diseases and the like can be prevented. The present inventors have found that it can be treated and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、リファマイシン誘導体含有組成物がマイクロ粒子またはナノ粒子に封入された、正常組織に比べ傷害組織に当該組成物を選択的にデリバリーすることを特徴とする製剤に関する。 That is, the present invention relates to a preparation characterized in that the composition containing rifamycin derivative is encapsulated in microparticles or nanoparticles and selectively delivered to the injured tissue as compared to normal tissue.
前記リファマイシン誘導体は、下記式（Ｉ）： The rifamycin derivative has the following formula (I):
また、前記リファマイシン誘導体含有組成物を封入する粒子の平均粒径は５０から１００００ｎｍの範囲にあるのが好ましく、粒子が平均粒径５０〜４００ｎｍに分級されたナノ粒子であるのがさらに好ましい。 The average particle size of the particles encapsulating the rifamycin derivative-containing composition is preferably in the range of 50 to 10,000 nm, and more preferably nanoparticles in which the particles are classified to an average particle size of 50 to 400 nm.
また、前記粒子が生分解性ポリマーからなり、表面改質剤を当該粒子表面に持つことを特徴とする製剤であるのが好ましい。 Moreover, it is preferable that the particle is made of a biodegradable polymer and has a surface modifier on the particle surface.
また、前記生分解性ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸とグリコール酸との共重合体、レシチン、コラーゲン、ゼラチン、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、ポリアミノ酸、澱粉、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリエチレンサクシネート、ポリ−β−ヒドロキシアルカノエートからなる群から少なくとも１つ以上選択されることが好ましく、このうち、乳酸‐グリコール酸共重合体であるのが好ましい。 The biodegradable polymer may be polylactic acid, polyglycolic acid, a copolymer of lactic acid and glycolic acid, lecithin, collagen, gelatin, chitin, chitosan, hyaluronic acid, polyamino acid, starch, poly-ε-caprolactone, polyethylene Preferably, at least one selected from the group consisting of succinate and poly-β-hydroxyalkanoate is selected, and among these, a lactic acid-glycolic acid copolymer is preferable.
また、前記表面改質剤が、カルボキシメチルセルロース、セルロース、酢酸セルロース、フタル酸セルロース、レシチン、キトサン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩又はカルシウム塩、非晶質セルロース、ポラキソマー、ポロキサミン、デキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ドデシル硫酸ナトリウム、及びケイ酸からなる群から少なくとも１つ以上選択されるのが好ましい。 The surface modifier is carboxymethylcellulose, cellulose, cellulose acetate, cellulose phthalate, lecithin, chitosan, polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylcellulose, sodium salt or calcium salt of carboxymethylcellulose, It is preferable that at least one or more be selected from the group consisting of amorphous cellulose, polyxomer, poloxamine, dextran, DEAE-dextran, polyvinylpyrrolidone, polystyrene, sodium dodecyl sulfate, and silicic acid.
また、前記傷害組織が疾患により細胞間の構築性が悪化している組織であることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 In addition, the preparation is preferably a preparation characterized in that the injured tissue is a tissue in which the constructability between cells is deteriorated due to a disease.
また、前記疾患が炎症性疾患、感染症、悪性腫瘍から選択される少なくとも１つであることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 Further, the preparation is preferably a preparation characterized in that the disease is at least one selected from inflammatory diseases, infectious diseases, and malignant tumors.
また、前記炎症性疾患が血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 In addition, the inflammatory disease is vascular disease, inflammatory bowel disease, inflammatory nervous system disease, inflammatory lung disease, inflammatory eye disease, chronic inflammatory gingival disease, chronic inflammatory joint disease, rheumatoid arthritis, skin disease, Bone disease, heart disease, renal failure, chronic demyelinating disease, endothelial cell disease, allergic syndrome, septic / septic shock, hepatitis, meningitis, multiple sclerosis, skin inflammation, transplant rejection, autoimmune disease, obesity, A preparation characterized by being selected from cold, sickle cell anemia, diabetes, stroke, and inflammation after malignant neoplastic chemotherapy or radiation therapy is preferred.
また、前記血管性疾患が動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞である製剤であるのが好ましい。 In addition, the vascular disease is arteriosclerosis, aneurysm, pseudoaneurysm, arterial dissection, inflammatory arterial disease, non-inflammatory arterial disease, dialysis shunt, and vascular restenosis or reocclusion after percutaneous angioplasty Preferably, the formulation is
また、前記感染症が肺炎、上気道および下気道感染症、皮膚および軟部組織感染症、骨および関節感染症、院内肺感染症、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染症、非複雑性感染症、腎盂腎炎、腹腔内感染症、深部膿瘍、細菌性敗血症、中枢神経系の感染症、菌血症、創傷感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷の後の感染症、尿生殖路感染症、消化管感染症、骨盤炎症性疾病、心内膜炎または血管内感染症から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 In addition, the infection is pneumonia, upper and lower respiratory tract infections, skin and soft tissue infections, bone and joint infections, nosocomial pulmonary infections, acute bacterial otitis media, bacterial pneumonia, complex infections, non-complexity Sexually transmitted disease, pyelonephritis, intraperitoneal infection, deep abscess, bacterial sepsis, central nervous system infection, bacteremia, wound infection, peritonitis, meningitis, infection after burn, urogenital tract infection It is preferably a preparation characterized in that it is selected from diseases, gastrointestinal infections, pelvic inflammatory diseases, endocarditis or endovascular infections.
また、前記悪性腫瘍が、脊髄腫瘍、褐色細胞腫、進行悪性疾患、アミロイド症、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管外皮細胞腫、多発性脳転移、多形性膠芽細胞腫、膠芽細胞腫、脳幹神経膠腫、予後不良の悪性脳腫瘍、悪性神経膠腫、未分化星細胞腫、未分化乏突起神経膠腫、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、局在性もしくは転移性黒色腫、腹膜癌、漿液性乳頭癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、セルロデルマ、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除したハイリスク軟組織肉腫、切除不能な肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無痛無症候性骨髄腫、輸卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立腺癌、乳頭甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、又は平滑筋腫から選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 The malignant tumor may be a spinal cord tumor, pheochromocytoma, advanced malignant disease, amyloidosis, neuroblastoma, meningioma, hemangioblastoma, multiple brain metastases, glioblastoma multiforme, glioblastoma Cell tumor, brain stem glioma, malignant brain tumor with poor prognosis, malignant glioma, anaplastic astrocytoma, anaplastic oligodendroglioma, neuroendocrine tumor, rectal adenocarcinoma, Dukes C & D colorectal cancer, unresectable Colorectal cancer, metastatic hepatocellular carcinoma, Kaposi's sarcoma, calotype acute myeloblastic leukemia, Hodgkin lymphoma, non-Hodgkin lymphoma, cutaneous T-cell lymphoma, cutaneous B-cell lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, low grade Follicular lymphoma, localized or metastatic melanoma, peritoneal cancer, serous papillary cancer, gynecological sarcoma, soft tissue sarcoma, celluloderma, dermatovasculitis, Langerhans cell histiocytosis, leiomyosarcoma, progressive ossification line Dysplasia, hormone-resistant prostate cancer, resected high-risk soft tissue sarcoma, unresectable hepatocellular carcinoma, Waldenstrom's macroglobulinemia, smoldering myeloma, asymptomatic asymptomatic myeloma, oviduct cancer, androgen non Dependent prostate cancer, androgen-dependent stage IV non-metastatic prostate cancer, hormone-insensitive prostate cancer, chemotherapy-insensitive prostate cancer, papillary thyroid cancer, follicular thyroid cancer, medullary thyroid cancer, or leiomyoma It is preferable that it is the formulation characterized by this.
また、血中への徐放が、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択されることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 In addition, sustained release into the blood is oral administration or intramuscular administration, intraarterial administration, intravenous administration, subcutaneous administration, intraperitoneal administration, transdermal administration, mucosal administration, inhalation administration, and administration using an implant. The preparation is preferably selected from the group consisting of:
また、前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする製剤であるのが好ましい。 The implant is a stent, stent graft, artificial blood vessel, catheter, balloon catheter, artificial heart valve, pacemaker lead, bone screw, artificial bone, artificial trachea, or suture. Is preferred.
本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体含有組成物を球形晶析法によりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法がある。 In another embodiment of the present invention, a preparation for selective delivery to a damaged tissue as compared to a normal tissue, wherein the rifamycin derivative-containing composition is encapsulated in microparticles or nanoparticles by a spherical crystallization method. There is a way.
また、本発明の別の態様として、リファマイシン誘導体含有組成物を前記表面改質剤と混合粉砕することによりマイクロ粒子またはナノ粒子に封入することを特徴とする、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の製造方法がある。 Further, as another aspect of the present invention, the rifamycin derivative-containing composition is mixed with the surface modifier and encapsulated in microparticles or nanoparticles, and is selected as an injured tissue compared to a normal tissue. There are methods for the production of pharmaceuticals that are delivered in an automated manner.
上記方法においては、リファマイシン誘導体含有組成物を生分解性ポリマーから構成される粒子に封入するのが好ましい。 In the above method, the rifamycin derivative-containing composition is preferably encapsulated in particles composed of a biodegradable polymer.
本発明のその他の態様およびこれらの効果は、以下に説明する実施形態および図面によって明らかにされる。 Other aspects of the present invention and their effects will become apparent from the embodiments and drawings described below.
本発明にかかるリファマイシン誘導体をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入した製剤は、正常組織に比べ傷害組織に蓄積しやすいことから、傷害組織でのリファマイシン誘導体の効果の増強、及び正常組織における副作用の軽減あるいは抑制が期待される。 Since the preparation in which the rifamycin derivative according to the present invention is encapsulated in microparticles or nanoparticles is likely to accumulate in the injured tissue as compared with the normal tissue, the effect of the rifamycin derivative in the injured tissue is enhanced, and the side effect in the normal tissue is reduced. Reduction or suppression is expected.
以下に、本発明のリファマイシン誘導体含有組成物をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入し、正常組織に比べ傷害組織に選択的にデリバリーする製剤について詳細に記載する。 Hereinafter, a preparation that encapsulates the rifamycin derivative-containing composition of the present invention in microparticles or nanoparticles and selectively delivers it to injured tissues as compared with normal tissues will be described in detail.
１．リファマイシン誘導体
（１）本願発明で用いられるリファマイシン誘導体は、以下の式（Ｉ）：
1. Rifamycin derivative (1) The rifamycin derivative used in the present invention has the following formula (I):
上記式（IV）中、Ｒ7、Ｒ8は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ2は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
In the above formula (IV), R 7 and R 8 are the same or different and each represents a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, X 2 represents an oxygen atom, a sulfur atom, a carbonyl group, and the following formula (V) Or a group represented by the following formula (VI).
−（ＣＨ2）k−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ11は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）nＸ3
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ3は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
− (CH 2 ) k −
(Wherein k represents an integer of 1 to 4)
In the above formula (VI), m represents 0 or 1, and R 11 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 7 carbon atoms, or a group represented by the following formula.
- (CH 2) n X 3
(In the formula, n represents an integer of 1 to 4, and X 3 represents an alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms, a vinyl group, an ethynyl group, or a group represented by the following formula (VII).)
Ｘ3の炭素数１から３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基およびシクロプロポキシ基を挙げることができる。
（２）好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ2はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ3、Ｒ4は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
Examples of the alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms of X 3 include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, an isopropoxy group, and a cyclopropoxy group.
(2) Preferably, in the rifamycin derivative, X 1 in the formula (I) is an oxygen atom, R 1 represents an acetyl group or a hydrogen atom, R 2 represents a methyl group or a hydroxymethyl group, and R 3 , R 4 are the same or different and are a hydroxyl group, a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, or formula (VIII):
Ｒ12の炭素数１から７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシキル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状のアルキル基を挙げることができる。
（３）好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ1が酸素原子であり、Ｒ1がアセチル基であり、Ｒ2がメチル基であり、Ｒ3が水酸基であり、Ｒ4が式（IX）：
Examples of the alkyl group having 1 to 7 carbon atoms of R 12 include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, cyclobutyl, cyclo Propylmethyl group, pentyl group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, 1,2-dimethylpropyl group, 1-ethylpropyl group, cyclopentyl group, cyclobutylmethyl group, hexyl group, 4-methylpentyl group And a chain or cyclic alkyl group such as a cyclohexyl group, a 3-methylcyclopentyl group, a heptyl group, and an isoheptyl group.
(3) Preferably, in the rifamycin derivative, X 1 in the formula (I) is an oxygen atom, R 1 is an acetyl group, R 2 is a methyl group, R 3 is a hydroxyl group, R 4 Is the formula (IX):
また、リファマイシン誘導体含有組成物とは、リファマイシン誘導体を含有する組成物であればよく、例えば、抗凝固薬、抗血小板物質、抗痙薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物剤、抗炎症剤、抗物質代謝剤、免疫抑制剤等や、その他薬剤を含んでいてもよい。 The rifamycin derivative-containing composition may be a composition containing a rifamycin derivative, such as an anticoagulant, an antiplatelet substance, an antispasmodic agent, an antibacterial agent, an antitumor agent, an antimicrobial agent, an antimicrobial agent, It may contain inflammatory agents, anti-metabolite metabolizers, immunosuppressants, and other drugs.
２．リファマイシン誘導体含有組成物を、傷害組織に選択的にデリバリーする製剤の調製
薬剤を傷害組織に選択的にデリバリーするために、本発明で用いられるリファマイシン誘導体を含有する組成物は、マイクロ粒子またはナノ粒子に封入される。
2. Preparation of preparation for selectively delivering rifamycin derivative-containing composition to injured tissue In order to selectively deliver a drug to injured tissue, the composition containing rifamycin derivative used in the present invention comprises microparticles or Encapsulated in nanoparticles.
粒子の大きさは、動的光散乱式法により測定した場合、平均粒子径として、その上限が、１０，０００ｎｍ以下であり、好ましくは２，０００ｎｍ以下であり、より好ましくは１，０００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは８００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは４００ｎｍ以下、特に好ましくは２５０ｎｍ以下である。また、その下限は、１ｎｍ以上であり、好ましくは１０ｎｍ以上であり、より好ましくは５０ｎｍ以上であるのが好ましい。このような粒子径とすることにより、薬剤が傷害組織に選択的にデリバリーされることとなる。 When the particle size is measured by a dynamic light scattering method, the upper limit of the average particle diameter is 10,000 nm or less, preferably 2,000 nm or less, more preferably 1,000 nm or less. More preferably 800 nm or less, still more preferably 400 nm or less, particularly preferably 250 nm or less. Further, the lower limit is 1 nm or more, preferably 10 nm or more, and more preferably 50 nm or more. By setting it as such a particle diameter, a chemical | medical agent will be selectively delivered to an injury tissue.
また、製剤中のリファマイシン誘導体の量は、通常は約１０〜２０％（ｗ／ｗ）が好ましい。 The amount of the rifamycin derivative in the preparation is usually preferably about 10 to 20% (w / w).
リファマイシン誘導体含有組成物を封入するマイクロ粒子またはナノ粒子は、生理活性を持たないポリマー等で構成され、表面改質剤を当該粒子表面に持つ構造をとる。 The microparticle or nanoparticle encapsulating the rifamycin derivative-containing composition is composed of a polymer or the like that does not have physiological activity, and has a structure having a surface modifier on the particle surface.
マイクロ粒子またはナノ粒子を構成するポリマーとしては、例えば、生分解性ポリマーが挙げられる。生分解性ポリマーとは、生体内で分解・消失する性質を有する高分子であり、生理活性を持たないポリマーであればどのようなものであってもよい。このようなポリマーとしては、例えば乳酸、グリコール酸、酪酸、ヒドロキシ酪酸またはシュウ酸、リンゴ酸、ヒドロキシ酢酸、グリコール酸などのホモポリマー（重合体）、並びにこれらのコポリマー（共重合体）があげられ、好ましくは、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸−グリコール酸共重合体であり、さらに好ましくは、乳酸・グリコール酸共重合体である。なお、光学活性体は、ｄ体、ｌ体またはそれらの混合物のいずれであってもよい。 Examples of the polymer constituting the microparticle or nanoparticle include a biodegradable polymer. The biodegradable polymer is a polymer having a property of degrading and disappearing in a living body, and may be any polymer as long as it does not have physiological activity. Examples of such polymers include homopolymers (polymers) such as lactic acid, glycolic acid, butyric acid, hydroxybutyric acid or oxalic acid, malic acid, hydroxyacetic acid, glycolic acid, and copolymers thereof (copolymers). Polylactic acid, polyglycolic acid, and lactic acid-glycolic acid copolymer are preferable, and lactic acid / glycolic acid copolymer is more preferable. The optically active substance may be any of d-form, l-form, or a mixture thereof.
乳酸−グリコール酸共重合体としては、乳酸とグリコール酸を約０．０１：１〜１：０．０１、好ましくは１：５〜１０：１、さらに好ましくは１：１〜６：１の比率で含む、分子量約２，０００〜２００，０００、好ましくは２，０００〜１００，０００、さらに好ましくは５，０００〜８５，０００のものがあげられる。 As the lactic acid-glycolic acid copolymer, lactic acid and glycolic acid are in a ratio of about 0.01: 1 to 1: 0.01, preferably 1: 5 to 10: 1, more preferably 1: 1 to 6: 1. And having a molecular weight of about 2,000 to 200,000, preferably 2,000 to 100,000, and more preferably 5,000 to 85,000.
本発明に用いられる表面改質剤とは、粒子の表面を変化させる性質を有する生物活性剤となりうる化学的または生物学的化合物のことを示し、組織または細胞への粒子を結合させること、投与部位における保持を含む粒子の持続放出性を強化すること、粒子に封入したリファマイシン誘導体組成物を保護すること、抗血栓溶解効果を付与すること、懸濁性を改善すること、及び粒子の凝集を防ぐことのうち少なくとも１つ以上の目的を実施するために使用される。 The surface modifier used in the present invention refers to a chemical or biological compound that can be a bioactive agent having the property of changing the surface of the particle, and binds the particle to a tissue or a cell, administration Enhancing sustained release of particles including retention at the site, protecting the rifamycin derivative composition encapsulated in the particles, imparting an antithrombolytic effect, improving suspendability, and agglomeration of the particles Used to perform at least one or more purposes.
表面改質剤としては、例えばカルボキシメチルセルロース、セルロース、酢酸セルロース、フタル酸セルロース、レシチン、キトサン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩又はカルシウム塩、非晶質セルロース、ポラキソマー、ポロキサミン、デキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ドデシル硫酸ナトリウム、及びケイ酸が挙げられ、好ましくは、ポリビニルアルコール、キトサン、ポリエチレングリコールである。 Examples of the surface modifier include carboxymethylcellulose, cellulose, cellulose acetate, cellulose phthalate, lecithin, chitosan, polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylcellulose, sodium salt or calcium salt of carboxymethylcellulose, Examples thereof include crystalline cellulose, polaromer, poloxamine, dextran, DEAE-dextran, polyvinylpyrrolidone, polystyrene, sodium dodecyl sulfate, and silicic acid, and preferably polyvinyl alcohol, chitosan, and polyethylene glycol.
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）としては重合度１００〜５，０００のものが挙げられ、好ましくは１００〜３，０００、さらに好ましくは２００〜２，０００のものが挙げられる。また、そのけん化度は、約７０〜１００のものが挙げられ、好ましくは７５〜９５、さらに好ましくは７５〜９０のものが挙げられる。このようなポリビニルアルコールは、ポリ酢酸ビニルの部分もしくは完全加水分解により製造することもできるが、適当な市販品も存在する。 Examples of polyvinyl alcohol (PVA) include those having a polymerization degree of 100 to 5,000, preferably 100 to 3,000, and more preferably 200 to 2,000. Moreover, the thing of about 70-100 is mentioned as the saponification degree, Preferably it is 75-95, More preferably, the thing of 75-90 is mentioned. Such polyvinyl alcohol can be produced by partial or complete hydrolysis of polyvinyl acetate, but there are also suitable commercial products.
リファマイシン誘導体含有組成物をマイクロ粒子またはナノ粒子に封入する方法としては、粉砕法（湿式粉砕法、及び乾式粉砕法）、球形晶析法が好ましく、より具体的には、前記表面改質剤との混合粉砕、水中エマルジョン分散法、エバポレーション溶媒留去法などが挙げられる。粒子径は、例えば、粉砕法においては遊星ボールミルの粉砕ボールの径を変えることにより、球形晶析法においては溶媒の攪拌速度を調節することによりコントロールすることが出来る。 As a method for encapsulating the rifamycin derivative-containing composition in the microparticles or nanoparticles, a pulverization method (wet pulverization method and dry pulverization method) or a spherical crystallization method is preferable, and more specifically, the surface modifier. And a mixed pulverization method, an emulsion dispersion method in water, an evaporation solvent evaporation method, and the like. The particle diameter can be controlled, for example, by changing the diameter of the pulverized ball of the planetary ball mill in the pulverization method and by adjusting the stirring speed of the solvent in the spherical crystallization method.
上記のようにして得られた、リファマイシン誘導体含有組成物は、分級して用いるのが好ましい。分級する方法としては、例えば、遠心操作が挙げられる。遠心操作によれば、遠心速度を調節することにより、目的に応じて、所望の粒子径のナノ粒子を得ることができる。より具体的には、生成したナノ粒子を洗浄する際の遠心速度を数種類に分けることが挙げられ、好ましくは０〜３，０００Ｇ、３，０００〜２０，０００Ｇ、２０，０００〜６０，０００Ｇ、さらに好ましくは１，０００〜２，０００Ｇ、４，０００〜８，０００Ｇ、３０，０００〜５０，０００Ｇに分ける方法が挙げられる。 The rifamycin derivative-containing composition obtained as described above is preferably classified and used. Examples of the classification method include centrifugation. According to the centrifugal operation, nanoparticles having a desired particle diameter can be obtained according to the purpose by adjusting the centrifugal speed. More specifically, the centrifugal speed at the time of washing the generated nanoparticles can be classified into several types, preferably 0 to 3,000 G, 3,000 to 20,000 G, 20,000 to 60,000 G, More preferably, the method is divided into 1,000 to 2,000 G, 4,000 to 8,000 G, and 30,000 to 50,000 G.
薬物を封入したナノ粒子は、治療部位への投与、封入した薬物の投与形態などに応じて種々の目的に使用され、１０〜１０００ｎｍの範囲、好ましくは５０〜６００ｎｍの範囲で自在に平均粒子径を調節することができる。なお、１，０００ｎｍ以上だと大きすぎて病変部位に入らないおそれがある。また、１０ｎｍ以下だと、小さすぎて病変部位以外に入るおそれがある。このうち、粒子の直径が５０〜４００ｎｍであることが、病変部位への取り込まれやすさの点から好適である。より好ましくは、２５０ｎｍ以下である。 The nanoparticles encapsulating the drug are used for various purposes depending on the administration to the treatment site, the administration form of the encapsulated drug, etc., and the average particle diameter is freely in the range of 10 to 1000 nm, preferably in the range of 50 to 600 nm. Can be adjusted. If it is 1,000 nm or more, it may be too large to enter the lesion site. On the other hand, if it is 10 nm or less, it may be too small to enter other than the lesion site. Among these, the particle diameter of 50 to 400 nm is preferable from the viewpoint of easy incorporation into a lesion site. More preferably, it is 250 nm or less.
３．傷害組織の例
本発明において使用される製剤は、炎症性疾患、感染症、悪性腫瘍といった病因により細胞間の構築性が悪化している傷害組織に対して使用されうる。
3. Example of Injured Tissue The preparation used in the present invention can be used for injured tissues whose constitutive properties between cells have deteriorated due to pathogenesis such as inflammatory diseases, infectious diseases, and malignant tumors.
前記炎症性疾患としては血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症などがある。このうち、血管性疾患としては、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞などがある。 Examples of the inflammatory diseases include vascular diseases, inflammatory bowel diseases, inflammatory nervous system diseases, inflammatory lung diseases, inflammatory eye diseases, chronic inflammatory gingival diseases, chronic inflammatory joint diseases, rheumatoid arthritis, skin diseases, bones Disease, heart disease, renal failure, chronic demyelinating disease, endothelial cell disease, allergic syndrome, septic / septic shock, hepatitis, meningitis, multiple sclerosis, skin inflammation, transplant rejection, autoimmune disease, obesity, cold , Sickle cell anemia, diabetes, stroke, and inflammation after malignant neoplastic chemotherapy or radiation therapy. Among these, vascular diseases include arteriosclerosis, aneurysm, pseudoaneurysm, arterial dissection, inflammatory arterial disease, non-inflammatory arterial disease, dialysis shunt, and vascular restenosis after percutaneous angioplasty or There is re-occlusion.
また前記感染症としては、肺炎、上気道および下気道感染症、皮膚および軟部組織感染症、骨および関節感染症、院内肺感染症、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染症、非複雑性感染症、腎盂腎炎、腹腔内感染症、深部膿瘍、細菌性敗血症、中枢神経系の感染症、菌血症、創傷感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷の後の感染症、尿生殖路感染症、消化管感染症、骨盤炎症性疾病、心内膜炎または血管内感染症などがある。 The infections include pneumonia, upper and lower respiratory tract infections, skin and soft tissue infections, bone and joint infections, nosocomial lung infections, acute bacterial otitis media, bacterial pneumonia, complex infections, non-infections Complicated infection, pyelonephritis, intraperitoneal infection, deep abscess, bacterial sepsis, central nervous system infection, bacteremia, wound infection, peritonitis, meningitis, infection after burn, urogenital tract There are infections, gastrointestinal infections, pelvic inflammatory diseases, endocarditis or endovascular infections.
また前記悪性腫瘍としては、脊髄腫瘍、褐色細胞腫、進行悪性疾患、アミロイド症、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管外皮細胞腫、多発性脳転移、多形性膠芽細胞腫、膠芽細胞腫、脳幹神経膠腫、予後不良の悪性脳腫瘍、悪性神経膠腫、未分化星細胞腫、未分化乏突起神経膠腫、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度濾胞性リンパ腫、局在性もしくは転移性黒色腫、腹膜癌、漿液性乳頭癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、セルロデルマ、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除したハイリスク軟組織肉腫、切除不能な肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無痛無症候性骨髄腫、輸卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立腺癌、乳頭甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌、または平滑筋腫などがある。 Examples of the malignant tumor include spinal cord tumor, pheochromocytoma, advanced malignant disease, amyloidosis, neuroblastoma, meningioma, hemangioblastoma, multiple brain metastases, glioblastoma multiforme, glioblastoma Cell tumor, brain stem glioma, malignant brain tumor with poor prognosis, malignant glioma, anaplastic astrocytoma, anaplastic oligodendroglioma, neuroendocrine tumor, rectal adenocarcinoma, Dukes C & D colorectal cancer, unresectable Colorectal cancer, metastatic hepatocellular carcinoma, Kaposi's sarcoma, calotype acute myeloblastic leukemia, Hodgkin lymphoma, non-Hodgkin lymphoma, cutaneous T-cell lymphoma, cutaneous B-cell lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, low grade Follicular lymphoma, localized or metastatic melanoma, peritoneal cancer, serous papillary cancer, gynecological sarcoma, soft tissue sarcoma, celluloderma, dermatovascularitis, Langerhans cell histiocytosis, leiomyosarcoma, progressive ossification Dysplasia, hormone-resistant prostate cancer, resected high-risk soft tissue sarcoma, unresectable hepatocellular carcinoma, Waldenstrom's macroglobulinemia, smoldering myeloma, painless asymptomatic myeloma, fallopian tube cancer, androgen Non-dependent prostate cancer, androgen-dependent stage IV non-metastatic prostate cancer, hormone-insensitive prostate cancer, chemotherapy-insensitive prostate cancer, papillary thyroid cancer, follicular thyroid cancer, medullary thyroid cancer, or leiomyoma .
４．傷害組織への徐放
リファマイシン誘導体を含有する傷害組織に選択的にデリバリーされる製剤を血中に徐放する場合の経路は特に限定されず、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与のいずれでもよい。
4). Sustained release to injured tissue The route for sustained release into the blood of a preparation that is selectively delivered to injured tissue containing a rifamycin derivative is not particularly limited. Oral administration, intramuscular administration, intraarterial administration , Intravenous administration, subcutaneous administration, intraperitoneal administration, transdermal administration, mucosal administration, inhalation administration, and administration using an implant.
上記インプラントは、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸のいずれでもよい。 The implant may be a stent, stent graft, artificial blood vessel, catheter, artificial heart valve, pacemaker lead, bone screw, artificial bone, artificial trachea, or suture.
以下の実施例では、ＰＬＧＡを用いたリファマイシン誘導体を含むナノ粒子が傷害組織に蓄積しやすいことを説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 In the following examples, it will be explained that nanoparticles containing a rifamycin derivative using PLGA are likely to accumulate in injured tissues, but the present invention is not limited thereto.
（実施例１）リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子の作製
リファマイシン誘導体の一種であるリファラジル（１１２．５ｍｇ）、ＰＬＧＡ（和光純薬工業(株)製、７５０ｍｇ）をアセトン：エタノール（２：１）混合液（２２．５ｍｌ）に溶解し、撹拌中（４００ｒｐｍ）の４０度の０．２％ＰＶＡ水溶液（３７５ml）に１ｍｌ/ｍｉｎの速度で滴下した。そのまま撹拌を２時間続けた後、有機溶媒を留去した。留去後、得られた液を遠心分離し（４０，０００Ｇ、２０分）、上澄み液を廃棄して残渣（ナノ粒子）を得た。さらに、残渣を蒸留水に分散させ、再び遠心分離した。得られた残渣に少量の水を加えて再分散させ、２４時間真空乾燥してナノ粒子を得た。なお、ＰＬＧＡはＰＬＧＡ７５２０、ＰＬＧＡ７５０５、ＰＬＧＡ５００５（いずれも和光純薬工業(株)製）を用いた。
Example 1 Preparation of Rifalazil-Containing PLGA Nanoparticles Rifalazil (112.5 mg), which is a kind of rifamycin derivative, and PLGA (made by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 750 mg) are mixed in acetone: ethanol (2: 1). (22.5 ml) was added dropwise to a 40 ° 0.2% PVA aqueous solution (375 ml) under stirring (400 rpm) at a rate of 1 ml / min. Stirring was continued for 2 hours, and then the organic solvent was distilled off. After distilling off, the obtained liquid was centrifuged (40,000 G, 20 minutes), and the supernatant was discarded to obtain a residue (nanoparticles). Further, the residue was dispersed in distilled water and centrifuged again. A small amount of water was added to the resulting residue for redispersion and vacuum drying for 24 hours to obtain nanoparticles. In addition, PLGA7520, PLGA7505, and PLGA5005 (all are Wako Pure Chemical Industries Ltd. make) were used for PLGA.
得られたナノ粒子を精製水に再懸濁させ、リファラジルの含有率と平均粒径を測定した。含有率は、粒子懸濁液にアセトニトリル、メタノールを加え、リファラジルの濃度を測定することにより導き出した。また、平均粒径は動的光散乱式粒径分布測定装置（ＬＢ−５５０、（株）堀場製作所製）により測定した。その結果、3種類とも含有率は１０〜２０％、平均粒径は２００〜４００ｎｍの間にあった。 The obtained nanoparticles were resuspended in purified water, and the content and average particle size of rifalazil were measured. The content rate was derived by adding acetonitrile and methanol to the particle suspension and measuring the concentration of rifalazil. The average particle size was measured with a dynamic light scattering type particle size distribution analyzer (LB-550, manufactured by Horiba, Ltd.). As a result, all three types had a content of 10 to 20% and an average particle size of 200 to 400 nm.
（実施例２）ＰＬＧＡナノ粒子からのリファラジルの溶出性
前記実施例１にて作製した３種類の粒子に５％ウシ胎児血清含有の培地を加え、粒子濃度が５００μｇ/ｍｌとなるように再分散させ、一定時間（１、３、７、１４、２１、２８日）３７℃にて放置した。一定時間放置後、遠心分離し、上清中のリファラジル濃度を測定することにより粒子からの溶出率を求めた。
(Example 2) Dissolution property of rifalazil from PLGA nanoparticles A medium containing 5% fetal bovine serum was added to the three types of particles prepared in Example 1, and redispersed so that the particle concentration was 500 μg / ml. And allowed to stand at 37 ° C. for a certain time (1, 3, 7, 14, 21, 28 days). After standing for a certain period of time, the mixture was centrifuged, and the concentration of rifalazil in the supernatant was measured to determine the elution rate from the particles.
図１は、経過時間とリファラジル溶出率の関係を示すグラフである。
図１に示されるように、時間の経過と共にリファラジル含有粒子からリファラジルが溶出した。その溶出速度は分解の速いＰＬＧＡほど速かった。
FIG. 1 is a graph showing the relationship between elapsed time and rifalazil elution rate.
As shown in FIG. 1, rifalazil eluted from the rifalazil-containing particles over time. The elution rate was faster for PLGA with faster degradation.
（実施例３）動脈へのリファラジルの集積
血管はウサギ腹部大動脈を用いた。傷害動脈は、市販の動脈閉塞除去用バルーンカテーテルを用いてウサギの腹部大動脈を擦過し、１〜２週間後に腹部大動脈を摘出することにより得た。
(Example 3) Accumulation of rifalazil in the artery The rabbit abdominal aorta was used as the blood vessel. The damaged artery was obtained by rubbing the rabbit abdominal aorta using a commercially available balloon catheter for removing the arterial occlusion and removing the abdominal aorta 1-2 weeks later.
摘出した腹部大動脈を約１〜１．５ｃｍの幅でカットし、長軸方向に沿って切開した。次に、下室をＤＭＥＭ（１０％牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）で満たしたブラインドウェル（ＢＷ２００Ｓ、家田貿易株式会社）に内腔側が上方になるよう血管を取り付けた。次に、上室に２００μＬのリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液（ＰＬＧＡ７５２０を用いて前記実施例１に記載した方法で粒子を作製し、培地を用いてリファラジル濃度が1μＭとなるように再分散させ調整した）を加え、ＣＯ2インキュベーターにて所定時間（１０、１２０分）インキュベートした。培養終了後、上室の培地を除去し、ＰＢＳ（−）にて上室を洗浄した。ブラインドウェルから血管を取り出し、余分な水分を除去した後、透過面のみを切り取り、組織中のリファラジル含量を測定した。この結果を図２および図３に示す。図２及び３は、インキュベート時間と動脈中のリファラジル含有量との関係を示すグラフである。図２は正常動脈（バルーンカテーテルで擦過していない動脈）を、図３は傷害動脈を用いた場合である。 The excised abdominal aorta was cut to a width of about 1 to 1.5 cm and incised along the long axis direction. Then, the lower chamber is filled with DMEM (containing 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 U / mL penicillin, 0.1 mg / mL streptomycin) in a blind well (BW200S, Iida Trading Co., Ltd.) A blood vessel was attached. Next, 200 μL of rifalazil-containing PLGA nanoparticle suspension (in the upper chamber, particles were prepared by the method described in Example 1 using PLGA7520, and redispersed so that the rifalazil concentration was 1 μM using a culture medium. Adjusted) and incubated in a CO 2 incubator for a predetermined time (10, 120 minutes). After completion of the culture, the medium in the upper chamber was removed, and the upper chamber was washed with PBS (−). After removing the blood vessel from the blind well and removing excess water, only the permeation surface was cut out and the rifalazil content in the tissue was measured. The results are shown in FIGS. 2 and 3 are graphs showing the relationship between incubation time and rifalazil content in the artery. FIG. 2 shows a case where a normal artery (an artery not scratched by a balloon catheter) is used, and FIG. 3 shows a case where an injured artery is used.
リファラジルの抽出法はＦｏｌｃｈの方法を参考にした。すなわち、６ｍＬのＣ−Ｍ液（クロロホルム：メタノール＝２：１）を加え、１昼夜放置した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、別の５０ｍＬ遠沈管に溶媒を回収した。残渣に２ｍｌのＣ−Ｍ液を加えて攪拌し、溶液を回収した。回収した溶媒に２ｍＬの０．０４％塩化マグネシウム溶液を加え、攪拌した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、上清を除去した。除去した上清と等量のＣ−Ｍ−Ｗ液（クロロホルム：メタノール：蒸留水＝３：４８：４７）を加え、攪拌した。遠心分離（３,０００ｒｐｍ（１,２００Ｇ）、１０分、４℃）し、上清を除去した。窒素にて溶媒を留去し、抽出物を乾固した。３５０μＬのメタノールを加えて抽出物を溶解し、リファラジルの濃度を測定した。 The extraction method of rifalazil was based on the Folch method. That is, 6 mL of CM solution (chloroform: methanol = 2: 1) was added and left for a whole day and night. Centrifugation was performed (3,000 rpm (1,200 G), 10 minutes, 4 ° C.), and the solvent was collected in another 50 mL centrifuge tube. 2 ml of CM solution was added to the residue and stirred to collect the solution. 2 mL of 0.04% magnesium chloride solution was added to the recovered solvent and stirred. The supernatant was removed by centrifugation (3,000 rpm (1,200 G), 10 minutes, 4 ° C.). The same amount of CMW solution (chloroform: methanol: distilled water = 3: 48: 47) as the removed supernatant was added and stirred. The supernatant was removed by centrifugation (3,000 rpm (1,200 G), 10 minutes, 4 ° C.). The solvent was distilled off with nitrogen and the extract was dried. 350 μL of methanol was added to dissolve the extract, and the concentration of rifalazil was measured.
（比較例１）
比較例１では、リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液に替えてリファラジル溶液（１μＭ、培地を用いて調製）を用いたほかは前記実施例１と同様の方法で実験した。実験結果を図２および図３に示す。
(Comparative Example 1)
In Comparative Example 1, the experiment was performed in the same manner as in Example 1 except that a rifalazil solution (1 μM, prepared using a medium) was used instead of the rifalazil-containing PLGA nanoparticle suspension. The experimental results are shown in FIGS.
図２に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、溶液では大きく増加するのに対し、粒子懸濁液では殆ど増加しなかった。このことから、粒子懸濁液の状態ではリファラジルは正常動脈に蓄積しにくいことが示された。
また、図３に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、溶液と同様に粒子懸濁液でも大きく増加した。
As shown in FIG. 2, the rifalazil content in the arteries after 120 minutes of incubation increased significantly with the solution, but hardly increased with the particle suspension. From this, it was shown that rifalazil hardly accumulates in normal arteries in the state of particle suspension.
In addition, as shown in FIG. 3, the rifalazil content in the artery after 120 minutes of incubation was greatly increased in the particle suspension as well as the solution.
（実施例４）遠心操作により分級したリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子の作製
リファマイシン誘導体の一種であるリファラジル（１１２．５ｍｇ）、ＰＬＧＡ７５２０（和光、２２７．３ｍｇ）をアセトン：エタノール（２：１）混合液（２２．５ｍｌ）に溶解し、撹拌中（４００ｒｐｍ）の４０度の０．２％ＰＶＡ水溶液（３７５ｍｌ）に１ｍｌ/ｍｉｎの速度で滴下した。そのまま撹拌を２時間続け、有機溶媒を留去した。留去後、得られた液を遠心分離し（１，５００Ｇ、２０分）、上澄み液を回収し、残渣（ナノ粒子）を得た。回収した上澄み液を遠心分離（５，０００Ｇ、２０ｍｉｎ）し、上澄み液を回収し、残渣を得た。さらに、回収した上澄み液を遠心分離し（４０，０００Ｇ、２０ｍｉｎ）残渣を得た。得られた残渣を再度遠心分離した。得られた残渣に少量の水を加えて再分散させ、２４時間真空乾燥してナノ粒子を得た。
Example 4 Preparation of Rifalazil-Containing PLGA Nanoparticles Classified by Centrifugal Operation Rifalazil (112.5 mg) and PLGA7520 (Wako, 227.3 mg), which are one type of rifamycin derivatives, are mixed with acetone: ethanol (2: 1). (22.5 ml) was added dropwise to a 40 ° 0.2% PVA aqueous solution (375 ml) under stirring (400 rpm) at a rate of 1 ml / min. Stirring was continued for 2 hours, and the organic solvent was distilled off. After distilling off, the obtained liquid was centrifuged (1,500 G, 20 minutes), and the supernatant was recovered to obtain a residue (nanoparticles). The collected supernatant was centrifuged (5,000 G, 20 min), and the supernatant was collected to obtain a residue. Further, the collected supernatant was centrifuged (40,000 G, 20 min) to obtain a residue. The resulting residue was centrifuged again. A small amount of water was added to the resulting residue for redispersion and vacuum drying for 24 hours to obtain nanoparticles.
得られたナノ粒子を１０％ウシ胎児血清含有の培地に再懸濁させ、粒度分布計（ＨＯＲＩＢＡ ＬＢ−５５０）を用いて算術平均粒径を測定した。その結果を表１に示す。 The obtained nanoparticles were resuspended in a medium containing 10% fetal bovine serum, and the arithmetic average particle diameter was measured using a particle size distribution analyzer (HORIBA LB-550). The results are shown in Table 1.
（実施例５）動脈へのリファラジルの集積
傷害血管は、ウサギの動脈をバルーンで擦過することにより得た。すなわち、市販の動脈閉塞除去用バルーンカテーテルを用いてウサギの腹部大動脈を傷害し、５日後に腹部大動脈を摘出した。
(Example 5) Accumulation of rifalazil in arteries Damaged blood vessels were obtained by rubbing rabbit arteries with a balloon. That is, the rabbit abdominal aorta was injured using a commercially available balloon catheter for removing the artery occlusion, and the abdominal aorta was removed 5 days later.
摘出した腹部大動脈を約１〜１．５ｃｍの幅でカットし、長軸方向に沿って切開した。次に、下室を培地で満たしたブラインドウェル（ＢＷ２００Ｓ、家田貿易株式会社）に内腔側が上方になるよう血管を取り付けた。次に、上室に２００μＬの上記実施例４で作製したリファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液（1μＭ、培地を用いて懸濁）を加え、ＣＯ2インキュベーターにて所定時間（１２０分）インキュベートした。培養終了後、上室の培地を除去し、ＰＢＳ（−）にて上室を洗浄した。ブラインドウェルから血管を取り出し、余分な水分を除去した後、透過面のみを切り取り、組織中のリファラジル含量を測定した。なお、培地はＤＭＥＭ（１０％牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）を用いた。この結果を図４に示す。図４は、使用した粒子の粒径と動脈中のリファラジル含有量との関係を示すグラフである。
なお、リファラジルの抽出は実施例３と同様の方法で行った。
The excised abdominal aorta was cut to a width of about 1 to 1.5 cm and incised along the long axis direction. Next, a blood vessel was attached to a blind well (BW200S, Iida Trading Co., Ltd.) in which the lower chamber was filled with a medium so that the lumen side was upward. Next, 200 μL of rifalazil-containing PLGA nanoparticle suspension prepared in Example 4 (1 μM, suspended using a medium) was added to the upper chamber, and incubated in a CO 2 incubator for a predetermined time (120 minutes). After completion of the culture, the medium in the upper chamber was removed, and the upper chamber was washed with PBS (−). After removing the blood vessel from the blind well and removing excess water, only the permeation surface was cut out and the rifalazil content in the tissue was measured. The medium used was DMEM (containing 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 U / mL penicillin, 0.1 mg / mL streptomycin). The result is shown in FIG. FIG. 4 is a graph showing the relationship between the particle size of the particles used and the rifalazil content in the artery.
Note that rifalazil was extracted in the same manner as in Example 3.
（比較例２）
比較例２では、リファラジル含有ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液に替えてリファラジル溶液（１μＭ、培地を用いて調製）を用いたほかは前記実施例５と同様の方法で実験した。実験結果を図４に示す。
(Comparative Example 2)
In Comparative Example 2, the experiment was performed in the same manner as in Example 5 except that a rifalazil solution (1 μM, prepared using a medium) was used instead of the rifalazil-containing PLGA nanoparticle suspension. The experimental results are shown in FIG.
図４に示されるように、１２０分間インキュベート後の動脈中のリファラジル含量は、４０，０００Ｇで分級した粒子を使用した場合では他の遠心速度で分級した場合、及びリファラジル溶液を使用した場合よりも多いことが示された。このことから、リファラジル含有粒子懸濁液は、傷害動脈に蓄積し易く、さらに粒径によっても異なることが示された。 As shown in FIG. 4, the content of rifalazil in the artery after 120 minutes of incubation is greater when using particles classified at 40,000 G than when classified at other centrifugal speeds and when using rifalazil solution. It was shown that there are many. From this, it was shown that the rifalazil-containing particle suspension easily accumulates in the injured artery and further varies depending on the particle size.
以上より、リファラジル含有粒子懸濁液は、正常動脈には蓄積し難く、傷害動脈に蓄積し易いことが示された。したがって、リファラジル含有粒子は、正常組織に比べ病変組織に選択的にデリバリーする製剤として有用であり、さらにその平均粒径を調整することにより（特に粒径が１９０ｎｍ程度の場合に）、さらに効果が上がることがわかる。 From the above, it was shown that the rifalazil-containing particle suspension hardly accumulates in normal arteries and easily accumulates in damaged arteries. Therefore, the rifalazil-containing particles are useful as a preparation that is selectively delivered to a diseased tissue as compared with a normal tissue. Further, by adjusting the average particle size (especially when the particle size is about 190 nm), the effect is further improved. I understand that it goes up.
Claims (22)
上記式（IV）中、Ｒ7、Ｒ8は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ2は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
−（ＣＨ2）k−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ11は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ2）nＸ3
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ3は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
In the above formula (IV), R 7 and R 8 are the same or different and each represents a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, X 2 represents an oxygen atom, a sulfur atom, a carbonyl group, and the following formula (V) Or a group represented by the following formula (VI).
− (CH 2 ) k −
(Wherein k represents an integer of 1 to 4)
In the above formula (VI), m represents 0 or 1, and R 11 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 7 carbon atoms, or a group represented by the following formula.
- (CH 2) n X 3
(In the formula, n represents an integer of 1 to 4, and X 3 represents an alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms, a vinyl group, an ethynyl group, or a group represented by the following formula (VII).)
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