JP2008515781A - 免疫調節のためのilt6の使用 - Google Patents
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Abstract
更なる態様においては、本発明は、ILT6を使用した、例えば異種および/または自己抗原に対するヒトの免疫応答を調節するためのヒトの医学的処理に関する。更にその上、本発明は、診断目的のためのILT6の分析、および、その分析のために使用することができる診断用組成物に関する。
Description
Trowsdale et al., Immunol. Rev. 181, 20-38 (2001) Chang et al., Nat. Immunol., 3: 237-243(2002) Dietrich et al., J. Immunol., 166: 2514-2521(2001) Torkar et al., Eur. J. Immunol., 30: 3655-3662(2000)
QiaAmp DNA Minikit(Qiagen、Hilden、Germany)を使用して、末梢全血からゲノムDNAを抽出した。PCRプライマー5'CCC CCT GGA GCT CGT GG 3'(配列番号1)および5'GAC AGC AGA TTC TAA AAC AGT G 3'(配列番号2)を使用して、1150塩基対を含む完全なILT6遺伝子を、製造者の取扱説明書に従って、1.5mMのMgCl2、200μMのdNTP、2.5ユニットのTaqポリメラーゼを含む1×PCRバッファー中の10pmolの各プライマー、50ngのゲノムDNAを用いたPCR反応で増幅した。
ILT6タンパク質の産生については、既知の方法に従って、ヒトの末梢全血から単離した完全なRNAについてのRT-PCRを使用して、例えば、QIAamp RNA blood mini kit(Qiagen、Hilden、Germany)を使用して、製造者の取扱説明書に従って、ヒトILT6をコードするcDNAを合成した。
実施例2に従って得られた組み換え産生したILT6::poly-Hisを、リンパ球混合反応における末梢血リンパ球(PBL)の活性を調節するために使用した。リンパ球混合反応は、その添加前に照射された、第二の健康なドナーから得られた20,000 PBLの添加によって刺激した、健康な第一のドナーから得られた100,000 PBLを1ウェル当たり含む。
様々な濃度のILT6を用いて処理したT細胞の細胞内カルシウム濃度をモニターするために、以下のアッセイを使用した:PBLまたはJurkat T細胞を、20μMの可視光-刺激性Ca2+インディケーターfluoro-h fluorochrome(CAS 121714-22-5/グリシン、N-[4-[6-[(アセチルオキシ)メトキシ]-2,7-ジクロロ-3-オキソ-3H-キサンテン-9-イル]-2-[2-[2-[ビス[2-[(アセチルオキシ)メトキシ]-2-オキシエチル]アミノ]-5-メチルフェノキシ]エトキシ]フェニル]-N-[2-[(アセチルオキシ)メトキシ]-2-オキシエチル]-、(アセチルオキシ)メチルエステル(Molecular Probes、c/o Invitrogen、Karlsruhe、Germany、catalog No.F1241)を用いて、30分間37℃で処理し、その後、穏やかにPRMI培地で三回、PBS(リン酸緩衝生理食塩水)で一回洗浄した。ポジティブコントロールとして、10μMのIonomycinを、別々の試験サンプルに加えた。カルシウムの細胞内遊離を、FACScalibur(Becton Dickinson)fluorescence activated cell sorterを用いて、400nmで測定した。
Claims (17)
- 医学的用途のための、ヒトILT6遺伝子の天然の翻訳産物およびその機能的誘導体から選択されるヒトILT6タンパク質。
- 前記医学的用途が、自己免疫疾患および望ましくない免疫応答から選択される疾患を対象とする、請求項1に記載のILT6。
- 前記自己免疫疾患が、多発性硬化症、シューグレン症候群または急性期を有する自己免疫疾患であることを特徴とする、請求項2に記載のILT6。
- 前記望ましくない免疫応答が、移植患者における移植片対宿主病または宿主対移植片病であることを特徴とする、請求項2に記載のILT6。
- 前記医学的用途が、免疫応答の減少であることを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載のILT6。
- 前記免疫応答が、細胞性免疫応答であることを特徴とする、請求項2から5のいずれか一項に記載のILT6。
- 前記免疫応答が、液性免疫応答であることを特徴とする、請求項2から5のいずれか一項に記載のILT6。
- 真核または原核細胞において発現させた、ヒトILT6遺伝子配列に由来する天然の翻訳産物またはその機能的な誘導体である、請求項1から7のいずれか一項に記載のILT6。
- 請求項1から8のいずれか一項に記載のILT6を含むことを特徴とする医薬組成物。
- ヒトから得られた体液サンプル中のILT6の濃度の測定を含むことを特徴とする、ヒトの免疫系の活性化の状態または免疫応答を分析する方法。
- 前記ILT6の測定が、抗体に基づくアッセイであることを特徴とする、請求項10に記載の方法。
- 前記ヒトが自己免疫疾患に罹患していることを特徴とする、請求項10または11に記載の方法。
- 前記自己免疫疾患が、多発性硬化症、シューグレン症候群および急性期を有する自己免疫疾患を含む群から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
- 請求項9から13のいずれか一項に記載の方法に適することを特徴とする、ILT6に特異的な抗体。
- 体液サンプル中のILT6と交差反応する抗体を測定する方法。
- 請求項15に記載の方法で使用するための、ILT6、またはILT6により誘導可能な免疫学的応答性を有するILT6の誘導体。
- リンパ球混合反応における、ヒトから得られた体液サンプル中に含まれるILT6のin vitro活性の測定を含むことを特徴とする、ヒトの免疫系の活性化の状態または免疫応答を分析する方法。
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JPN6010027325, Hum. Immunol., 2003, Vol.64, p.458−461 * |
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JPN6010027330, Immunogenetics, 2003, Vol.55, p.165−171 * |
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