JP2008271931A

JP2008271931A - New lactic acid bacterium and various products processed by using the lactic acid bacterium

Info

Publication number: JP2008271931A
Application number: JP2007141034A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Aiba; 勇志相場
Original assignee: SNOWDEN CO Ltd
Current assignee: SNOWDEN CO Ltd
Priority date: 2007-04-27
Filing date: 2007-04-27
Publication date: 2008-11-13
Anticipated expiration: 2027-04-27
Also published as: KR20080096383A; JP4457364B2; KR101061143B1

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a new lactic acid bacterium that has excellent acid resistance, grows in a short time, controls proliferation of pathogenic bacteria, and promotes proliferation of useful bacteria belonging to the genus Lactobacillus, and to provide various products in a wide range using the new lactic acid bacterium. <P>SOLUTION: Lactobacillus johnsonii No.1088 (accession number: NITE P-278) which is a new lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus is found from the gastric juice of healthy adult. Various products in a wide range such as a fermented product, health food, functional food, medicine etc., processed by using the new lactic acid bacterium are developed. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、短時間で増殖すること、病原菌を抑制すること、及び有用な細菌の増殖を促進すること、の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌、並びに前記新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品に関する。尚、本明細書において百分率の表示は、特に断りのない限り、重量によるものである。 The present invention is a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, having strong acid resistance that survives for at least 60 minutes in a buffer solution of pH 1.0, growing in a short time, suppressing pathogenic bacteria, and useful bacteria. The present invention relates to a novel lactic acid bacterium characterized by promoting growth and various products characterized by using and processing the novel lactic acid bacterium. In the present specification, the percentage display is based on weight unless otherwise specified.

ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌の耐酸性については、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）についてｐＨ３．０における試験が報告されている（非特許文献１を参照。）。また、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌については、フジサワ（Ｆｕｊｉｓａｗａ）らによりラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｇａｓｓｅｒｉ）等の詳細な菌種に分別されている（非特許文献２を参照。）。 Regarding the acid resistance of lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, a test at Lactobacillus acidophilus at pH 3.0 has been reported (see Non-Patent Document 1). In addition, for lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Fujisawa et al., Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus johnsonii, ss Lactobacillus johnsonii (See Non-Patent Document 2).

一方、最近プロバイオティクスとしての乳酸菌の効果についてアレルギー炎症性腸疾患、感染症、潰瘍性大腸炎、高血圧、コレステロール血症、大腸癌等の予防又は治療が注目されている（非特許文献３を参照。）。しかしながら、従来公知の乳酸菌を飲食品、医薬品等に利用した場合、摂取又は服用時に胃酸の影響により腸まで到達する菌数が減少することが知られている（非特許文献４を参照。）。従来、この菌数の減少を防止するために、使用する乳酸菌末又は乳酸菌錠剤をコーティングする等の方法により、胃酸による乳酸菌の死滅を軽減する方法が採用されている（特許文献１乃至特許文献５を参照。）。また、耐酸性を有するラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を使用したヨーグルトも市販されている。
特開平５−１８６３３５号特開平５−１８６３３６号特開平５−１８６３３７号特開２０００−１６３２０号特開２００１−６４１８９号プラサド・ジェー（Ｐｒａｓａｄ，Ｊ．）ら、インターナショナル・デイリー・ジャーナル（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＤａｉｒｙＪｏｕｒｎａｌ）、第８巻、第９９３ページ、１９９８年フジサワ・ティー（Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｔ．）ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（ＩｉｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）、第４２巻、第３号、第４８７ページ、１９９２年グウプタ・ピー・エー（Ｇｕｐｔａ，Ｐ．Ａ．）ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・フード・マイクロバイオロジー（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、第巻２９、第１０５ページ、１９９６年ホッド・エス・ケー（Ｈｏｏｄ，Ｓ．Ｋ．）ら、ジャーナル・オブ・フード・サイエンス（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ）、第５３巻、第１５１４ページ、１９８８年 On the other hand, the prevention or treatment of allergic inflammatory bowel disease, infectious disease, ulcerative colitis, hypertension, cholesterolemia, colon cancer, etc. has recently attracted attention regarding the effect of lactic acid bacteria as probiotics (see Non-Patent Document 3). reference.). However, when conventionally known lactic acid bacteria are used in foods and drinks, pharmaceuticals, etc., it is known that the number of bacteria reaching the intestine is reduced due to the effect of gastric acid when ingested or taken (see Non-Patent Document 4). Conventionally, in order to prevent this decrease in the number of bacteria, a method of reducing the killing of lactic acid bacteria by gastric acid by a method such as coating of lactic acid bacteria powder or lactic acid bacteria tablets to be used has been employed (Patent Documents 1 to 5). See). Moreover, yogurt using Lactobacillus johnsonii having acid resistance is also commercially available.
JP-A-5-186335 JP-A-5-186336 JP-A-5-186337 JP 2000-16320 A JP 2001-64189 A Prasad, J. et al., International Daily Journal, Vol. 8, 993, 1998 Fujisawa, T. et al., International Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 42, No. 3, p. 487, 1992 Gupta, PA, et al., International Journal of Food Microbiology, Vol. 29, page 105, 1996. Hood, SK et al., Journal of Food Science, 53, 1514, 1988

前記従来技術に鑑みて本発明者は、数年前から胃酸により死滅することなく腸に到達可能な耐酸性乳酸菌に強い関心を持ち、耐酸性乳酸菌の研究を鋭意行った結果、ｐＨ１．０において少なくとも６０分間生存する従来にない格段に優れた耐酸性を有するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を見出し、更にこの新規な乳酸菌の用途として各種製品に利用することが可能であることを見出し、本発明を完成した。 In view of the prior art, the present inventor has a strong interest in acid-resistant lactic acid bacteria that can reach the intestine without being killed by gastric acid for several years. A novel lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus which has at least 60 minutes of survival and has outstanding acid resistance, and has been found to be applicable to various products as an application of the new lactic acid bacterium. Was completed.

本発明の第一の目的は、短時間で増殖し、優れた耐酸性を有し、病原菌の増殖を抑制するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を提供することであり、本発明の第二の目的は、当該新規な乳酸菌の用途として、当該乳酸菌を含有する各種製品を提供することである。 The first object of the present invention is to provide a novel lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus that grows in a short time, has excellent acid resistance, and suppresses the growth of pathogenic bacteria. Is to provide various products containing the lactic acid bacteria as an application of the novel lactic acid bacteria.

前記課題を解決する本発明の第一の発明（以下、第一発明、と記載する。）は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｏｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥＰ−２７８）であることを望ましい態様としている。A first invention of the present invention that solves the above problems (hereinafter referred to as the first invention) is a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, and the following a) to d):
a) have strong acid resistance to survive at least 60 minutes in pH 1.0 buffer;
b) multiply in a short time;
c) inhibiting pathogenic bacteria, and d) promoting the growth of useful bacteria,
Lactobacillus belonging to the genus Lactobacillus is a novel lactic acid bacterium characterized by having the properties of Lactobacillus johnsonii No. It is a desirable mode that it is 1088 (accession number: NITE P-278).

前記課題を解決する本発明の第二の発明（以下、第二発明、と記載する。）は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有する新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥＰ−２７８）であること、並びに加工が、新規な乳酸菌による発酵、新規な乳酸菌の混合、新規な乳酸菌の菌末化又は新規な乳酸菌の錠剤化であることを望ましい態様としている。A second invention of the present invention that solves the above problems (hereinafter referred to as the second invention) is a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, and the following a) to d):
a) have strong acid resistance to survive at least 60 minutes in pH 1.0 buffer;
b) multiply in a short time;
c) inhibiting pathogenic bacteria, and d) promoting the growth of useful bacteria,
These are various products characterized by using and processing a novel lactic acid bacterium having the properties of Lactobacillus johnsonii No. 1 (Lactobacillus johnsonii). A desirable mode that it is 1088 (accession number: NITE P-278), and that the processing is fermentation by a new lactic acid bacterium, mixing of a new lactic acid bacterium, decontamination of a new lactic acid bacterium, or tableting of a new lactic acid bacterium It is said.

次に本発明について詳細に記載する。第一発明は、本発明者がヒトの胃液から後記試験例１に示すとおり分離した乳酸菌ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（以下、Ｎｏ．１０８８と略記する。）であり、従来知られていなかったラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌であり、各種製品に使用することが可能である。これらの菌株は後記試験例から明らかなとおり、１６ＳｒＲＮＡの塩基配列から新規な菌株であることが明白である。更に後記試験例から明らかなとおり、短時間で増殖し、病原菌の増殖を抑制し、有用な細菌の増殖を促進し、ｐＨ１．０の緩衝液（０．１Ｍの塩酸・クエン酸ナトリウム緩衝液）において少なくとも６０分間生存し得る優れた耐酸性を有する乳酸菌である。 Next, the present invention will be described in detail. The first invention is a lactic acid bacterium Lactobacillus johnsonii No. isolated from human gastric juice as shown in Test Example 1 below. 1088 (hereinafter abbreviated as No. 1088), which is a novel lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus which has not been conventionally known, and can be used for various products. These strains are apparently novel strains from the base sequence of 16S rRNA, as will be apparent from the following test examples. Furthermore, as will be apparent from the test examples described later, it grows in a short time, suppresses the growth of pathogenic bacteria, promotes the growth of useful bacteria, and has a pH 1.0 buffer (0.1 M hydrochloric acid / sodium citrate buffer). Is a lactic acid bacterium having excellent acid resistance that can survive for at least 60 minutes.

第二発明は、前記第一発明の短時間で増殖し、病原菌の増殖を抑制し、優れた耐酸性を有するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を含有する各種製品であり、前記新規な乳酸菌により発酵したヨーグルト等の発酵製品、前記新規な乳酸菌を凍結乾燥した粉末からなる健康食品、前記新規な乳酸菌末を加工した錠剤等の医薬品等の多くの製品に使用することが可能である。 The second invention is a variety of products containing a novel lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus that grows in a short time, suppresses the growth of pathogenic bacteria, and has excellent acid resistance, and is fermented by the novel lactic acid bacterium. It can be used in many products such as fermented products such as yogurt, health foods made from powders obtained by freeze-drying the novel lactic acid bacteria, and pharmaceuticals such as tablets processed from the novel lactic acid bacteria powder.

前記発酵製品を製造するには、例えば次のように実施する。原料乳に前記新規な乳酸菌、スターターとしてラクトバシラス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）及びストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）を添加し、常法により製造することができる。 In order to manufacture the said fermented product, it implements as follows, for example. The novel lactic acid bacteria and Lactobacillus bulgaricus (Lactobacillus bulgaricus) and Streptococcus thermophilus (Streptococcus thermophilus) can be added to the raw milk as a starter, and can be produced by a conventional method.

前記新規な乳酸菌末を製造するには、例えば次のように実施する。前記新規な乳酸菌を市販の培地（例えば、エムアールエス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）、ベクトン・デッキンソン社製）に接種し（例えば、培地１ｍｌ当たり１×１０^７の割合で接種）、培養し（例えば、３７℃で１２〜１８時間）、培養終了後に遠心分離により集菌し、集菌した菌体を洗浄液（例えば、食塩濃度０．８５％の滅菌生理食塩水）により洗浄し、再び遠心分離により集菌し、脱脂粉乳を主成分とする溶液（例えば、１０％脱脂粉乳及び１％グルタミン酸ナトリウムを勧誘する溶液）に洗浄した菌体を懸濁し、常法により凍結乾燥し、前記新規な乳酸菌末を製造する。In order to produce the novel lactic acid bacteria powder, for example, it is carried out as follows. The novel lactic acid bacteria are inoculated into a commercially available medium (for example, MRS broth, manufactured by Becton Dickinson) (for example, inoculated at a rate of 1 × 10 ⁷ per ml of medium) and cultured (for example, At 37 ° C. for 12 to 18 hours), the cells are collected by centrifugation after culturing, and the collected cells are washed with a washing solution (for example, sterile physiological saline having a salt concentration of 0.85%) and collected again by centrifugation. Bacteria and suspension of the washed cells in a solution containing skim milk powder as a main component (for example, a solution that invites 10% skim milk powder and 1% sodium glutamate), freeze-dried by a conventional method, and the novel lactic acid bacteria powder To manufacture.

前記新規な乳酸菌末を加工した錠剤を製造するには、例えば次のように実施する。前記新規な乳酸菌末を、例えば糖、デキストリン及び澱粉等からなる賦形剤を使用し、常法により錠剤に加工する。以上記載したとおり、前記新規な乳酸菌は公知の乳酸菌と同様に処理又は使用することが可能である。 In order to manufacture the tablet which processed the said novel lactic acid bacteria powder, it implements as follows, for example. The novel lactic acid bacteria powder is processed into tablets by a conventional method using excipients composed of, for example, sugar, dextrin and starch. As described above, the novel lactic acid bacteria can be treated or used in the same manner as known lactic acid bacteria.

次に試験例を示し、本発明について詳細に記載する。
試験例１
この試験はラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌株を分離、同定するために行った。尚、菌株の分離及び菌株の確認は、厚生省生活衛生局監修、「食品衛生検査指針：微生物編」、日本食品衛生協会、１９９０年及び乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年に記載されている方法に基づいて実施した。Next, test examples are shown and the present invention is described in detail.
Test example 1
This test was conducted to isolate and identify a novel lactic acid strain belonging to the genus Lactobacillus. In addition, the isolation of the strain and the confirmation of the strain are supervised by the Ministry of Health and Welfare, Health Sanitation Bureau, “Food Sanitation Inspection Guidelines: Microbiology”, Japan Food Sanitation Association, 1990 and Lactic Acid Bacteria Research Meeting, “Science and Technology of Lactic Acid Bacteria”, It was carried out based on the method described in the Society Publishing Center, 1996.

１．乳酸菌株の分離
１）菌株の採取
健康な成人１０名から胃液を採取し、採取した胃液の１ｍｌに滅菌生理食塩水９ｍｌを添加し、試料液を調製した。調製した試料液を滅菌生理食塩水により１０倍から１０万倍に希釈し、希釈液を調製した。1. Isolation of Lactic Acid Bacteria 1) Collection of Bacteria Gastric juice was collected from 10 healthy adults, and 9 ml of sterile physiological saline was added to 1 ml of the collected gastric juice to prepare a sample solution. The prepared sample solution was diluted 10 to 100,000 times with sterile physiological saline to prepare a diluted solution.

胃液原液、試料液及び各希釈液０．１ｍｌを、滅菌して調製したビーエル（ＢＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）、エムアールエス（ＭＲＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）を充填したシャーレの培地表面に塗布し、コンラージ棒によりまき広げ、各シャーレをアネロパック（三菱ガス化学社製）と共に嫌気培養用ジャー（三菱ガス化学社製。アネロパック角型ジャー標準型）に入れ、３７℃で４８時間培養した。培養終了後、出現したコロニーをエムアールエス（ＭＲＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）により３代継承培養し、純粋な菌株を分離した。 A petri dish filled with BB (BL) agar medium (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) and MR S (MRS) agar medium (manufactured by Becton Dickinson) prepared by sterilizing 0.1 ml of gastric juice stock, sample liquid, and each dilution. The petri dish was spread on a medium surface and spread with a conical rod, and each petri dish was placed in an anaerobic jar (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd., anero-pack square jar standard type) together with Anero Pack (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd.). Incubate for hours. After completion of the culture, the colonies that appeared were subcultured for 3 generations on a MRS agar medium (manufactured by Becton Dickinson) to isolate a pure strain.

２）菌株の確認
分離した菌株の確認は前記文献記載の方法により、グラム染色性が陽性、細胞形態が桿菌、カタラーゼが陰性、運動性が陰性、芽胞形成が陰性及び乳酸産生能が陽性であることから、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する菌株であることを確認し、１５株を取得した。2) Confirmation of the strain The isolated strain was confirmed by the method described in the above literature, with Gram staining being positive, Neisseria gonorrhoeae, Catalase negative, Motility negative, Spore formation negative, and Lactic acid production ability positive Accordingly, it was confirmed that the strain belongs to the genus Lactobacillus, and 15 strains were obtained.

３）耐酸性菌株の分離
前記１５菌株を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で４８時間培養した。得られた菌液０．１ｍｌを、ｐＨ２．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸ナトリウム緩衝液２ｍｌに添加し、３７℃で２時間保持し、のち残存菌数を測定し、最も残存菌数の多い１菌株を取得した。3) Isolation of acid-resistant strains The 15 strains were individually inoculated into MRS broth (manufactured by Becton Dickinson) and cultured at 37 ° C for 48 hours. Add 0.1 ml of the obtained bacterial solution to 2 ml of 0.1 M hydrochloric acid / sodium citrate buffer solution at pH 2.0, hold at 37 ° C. for 2 hours, and then measure the number of remaining bacteria. One strain was obtained.

２．菌株の同定
前記取得した菌株の同定は、乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年及びピーター・エッチ・エー・スニース（ＰｅｔｅｒＨ．Ａ．Ｓｎｅａｔｈ）編、「バージェイズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）」、第２巻、ウイリアムス・アンド・ウイルキンス社、１９８６年に記載されている方法に基づいて実施した。2. Identification of strains The obtained strains are identified by the Lactic Acid Bacteria Research Meeting, “Science and Technology of Lactic Acid Bacteria”, Academic Publishing Center, 1996, edited by Peter H. A. Sneath, This was performed based on the method described in “Bergeys Manual of Systematic Bacteriology”, Volume 2, Williams & Wilkins, 1986.

３．試験結果

この試験の結果、前記取得した菌株の細菌学的性質は表１及び表２に示すとおりである。尚、表２は表１の続きである。表１及び表２から明らかなとおり、細菌学的性質からこの菌株は、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）であることが証明され、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８と命名した。この菌株を平成１８年１１月１４日付で独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託し、ＮＩＴＥＰ−２７８の受託番号が付与された。3. Test results

As a result of this test, the bacteriological properties of the obtained strain are as shown in Tables 1 and 2. Table 2 is a continuation of Table 1. As apparent from Tables 1 and 2, the bacteriological properties proved that this strain is Lactobacillus johnsonii, and Lactobacillus johnsonii No. It was named 1088. This strain was deposited on November 14, 2006 at the Patent Microorganism Depositary, National Institute of Technology and Evaluation, and was assigned a deposit number of NITE P-278.

試験例２
この試験は、Ｎｏ．１０８８の塩基配列レベルでの特徴を調べるために行った。尚、Ｎｏ．１０８８の塩基配列の同定は、株式会社テクノスルガに依頼し、次の方法により同定した旨の報告を受けた。Test example 2
This test has This was carried out in order to investigate the characteristics at the base sequence level of 1088. No. The identification of the base sequence of 1088 was requested to Techno Suruga Co., Ltd. and received a report that it was identified by the following method.

１．供試菌体の調製
Ｎｏ．１０８８をエムアールエス・アガー（ＭＲＳＡｇａｒ）培地（オクソイド社製）により３７℃で２４時間嫌気培養し、供試菌体を調製した。1. Preparation of test cells 1088 was anaerobically cultured at 37 ° C. for 24 hours in MRS Agar medium (manufactured by Oxoid) to prepare a test cell.

２．塩基配列の決定
塩基の抽出からサイクルシークエンスまでの操作は、各プロトコルに基づいて実施した。塩基の抽出はインスタ・ジーン・マトリックス（ＩｎｓｔａＧｅｎｅＭａｔｒｉｘ）（バイオラド社製）を使用し、ポリメラーゼ連鎖反応にはプリメ・スター・クッチエス・デイーエヌエー・ポリメラーゼ（ＰｒｉｍｅＳｔａｒＨＳＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ）（タカラバイオ社製）を使用し、サイクルシークエンスにはビッグ・ダイ・ターミネーター・ブイ３．１・サークル・シークエンシング・キット（ＢｉｇＤｙｅＴｅｒｍｉｎａｔａｒＶ３．１ＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用した。また、使用したプライマーは、９Ｆ、３３９Ｆ、７８５Ｆ、１０９９Ｆ、５３６Ｒ、８０２Ｒ、１２４２Ｒ及び１５１０Ｒであり、配列の測定にはアビイ・プリズム３１００ジェネティック・アナライザー・システム（ＡＢＩＰＲＩＳＭ３１００ＧｅｎｅｔｉｃＡｎａｌｙｚｅｒＳｙｓｔｅｍ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、解析ソフトウェアにはオートアセンブラー（ＡｕｔｏＡｓｓｅｍｂｌｅｒ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、相同性検索にはアポロン・デービー最新基準株データベース（テクノスルガ社製）及び国際塩基配列データベース（ジーン・バンク／ディーディービージェー／イーエムビーエル（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ））を使用した。2. Determination of base sequence Operations from extraction of bases to cycle sequencing were performed based on each protocol. For extraction of the base, Insta Gene Matrix (Biorad) is used, and for the polymerase chain reaction, Prime Star HS DNA Polymerase (manufactured by Takara Bio Inc.). ) Was used for cycle sequencing, and Big Dye Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems) was used. The primers used were 9F, 339F, 785F, 1099F, 536R, 802R, 1242R and 1510R, and the measurement of the sequence was performed using the ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer System (Applied System). Bioassembler), Auto Assembler (Applied Biosystems) is used for analysis software, and Apollon Davy latest reference database (Technosulga) is used for homology search. And an international nucleotide sequence database (Gen Bank / DDBJ / EMBL) was used.

３．試験結果

この試験の結果は、表３及び配列表に示すとおりである。表３から明らかなとおりＮｏ．１０８８はアポロン・デービー最新基準株データベース（テクノスルガ社製）のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株であるＡＴＣＣ３３２００株との相同率が９９．７％であり、国際塩基配列データベースの同菌の基準株であるＮＣＣ５３３株との相同率が１００％であった。従って、塩基配列からもＮｏ．１０８８がラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）であることが確認された。3. Test results

The results of this test are as shown in Table 3 and the sequence listing. As is apparent from Table 3, No. 1088 has a homology of 99.7% with the reference strain of Lactobacillus johnsonii in the Apollon Davy latest reference strain database (manufactured by Technosuruga), which is 99.7%. The homology rate with the reference strain NCC533 was 100%. Therefore, no. 1088 was confirmed to be Lactobacillus johnsonii.

全ての細菌は、１６Ｓｒ塩基配列中に共通な塩基配列が存在しているので、１６Ｓｒ塩基配列により細菌の分類群を推定することが可能である。しかしながら、乳酸菌に属する菌群の推定には１６Ｓｒ塩基配列のみならず、細菌の形態、生理学的性質、生化学的性質も重要であり、本発明の試験例で示したとおりである。 Since all bacteria have a common base sequence in the 16Sr base sequence, the bacterial taxonomic group can be estimated from the 16Sr base sequence. However, not only the 16Sr nucleotide sequence but also the bacterial morphology, physiological properties, and biochemical properties are important for the estimation of the bacterial group belonging to lactic acid bacteria, as shown in the test examples of the present invention.

試験例３
この試験は、Ｎｏ．１０８８の耐酸性を調べるために行った。
１．試料の調製
Ｎｏ．１０８８、耐酸性が知られているラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｇａｓｓｅｒｉ）ＴＩ１０１２（ヒト糞便由来。東海大学医学部生体防御学保存株）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）、後記する方法により市販ヨーグルトから分離したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＪＣＭ１１３２（理化学研究所リソースセンターから入手）及びラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｇａｓｓｅｒｉ）ＪＣＭ１１３１（理化学研究所リソースセンターから入手）を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、試料の培養液を調製した。Test example 3
This test has This was done to check the acid resistance of 1088.
1. Sample preparation 1088, Lactobacillus gasseri TI1012 (derived from human faeces. Tokai University School of Bioprotection), Lactobacillus johnsonii JCM2012 (obtained from RIKEN Resource Center) Lactobacillus johnsonii LC1, Lactobacillus acidophilus JCM1132 (obtained from RIKEN Resource Center) and Lactobacillus gasseri 113 The obtained from ter) separably inoculated into Emuaruesu broth (MRS broth) (Becton Dickinson), and cultured for 18 hours at 37 ° C., to prepare a culture solution of the sample.

尚、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１は、この菌株を含有する市販のヨーグルト（ネスレ社製）から次のとおり分離した。ヨーグルトを滅菌生理食塩水により１０倍、１０^３倍、１０^５倍及び１０^７倍に希釈し、各希釈液の０．１ｍｌをビーエル（ＢＬ）寒天平板培地（ニッスイ社製）に滴下し、コンラージ棒によりまき広げ、３７℃で２日間嫌気培養し、培養後に各コロニーを常法により鑑別し、桿菌状の乳酸菌を同菌と同定し、この菌株を試験に使用した。Lactobacillus johnsonii LC1 was isolated from a commercially available yogurt (manufactured by Nestlé) containing this strain as follows. Dilute yogurt 10 times, 10 ³ times, 10 ⁵ times and 10 ⁷ times with sterilized physiological saline, add 0.1 ml of each diluted solution to BB (BL) agar plate medium (manufactured by Nissui) It was spread with a stick and anaerobically cultured at 37 ° C. for 2 days. After culturing, each colony was identified by a conventional method, and a gonococcal lactic acid bacterium was identified as the same bacterium, and this strain was used for the test.

２．試験方法
得られた６種の培養液０．１ｍｌを、それぞれ別個にｐＨ２．０、ｐＨ１．５及びｐＨ１．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸緩衝液に添加し、３７℃に保持し、１５分後、３０分後、６０分後及び９０分後に経時的な残存菌数を常法により測定した。2. Test method 0.1 ml of the obtained 6 kinds of culture solutions were separately added to 0.1 M hydrochloric acid / citrate buffer solutions of pH 2.0, pH 1.5 and pH 1.0, and kept at 37 ° C., 15 After 30 minutes, 30 minutes, 60 minutes and 90 minutes, the number of remaining bacteria over time was measured by a conventional method.

３．試験結果

この試験結果は表４に示すとおりである。尚、表４のＮＤは、残存菌数が検出されなかったことを示す。表４から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８は、最も高い残存菌数を示し、ｐＨ１．０において９０分間保持した場合にも生存し、格段に耐酸性に優れた菌株であることが判明した。3. Test results

The test results are shown in Table 4. In addition, ND in Table 4 indicates that the number of remaining bacteria was not detected. As is clear from Table 4, No. 1088 showed the highest number of remaining bacteria and survived even when kept at pH 1.0 for 90 minutes, and was found to be a strain with excellent acid resistance.

試験例４
この試験は、Ｎｏ．１０８８が前記試験例３において使用したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１と異なる菌株であることを立証するために行った。
１．試料の調製
１）菌株の調製
前記試験例３において使用した両菌株をそれぞれエムアールエス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、培養液から各菌株を集菌し、リン酸緩衝化生理食塩水により３回洗浄し、各菌株を調製した。Test example 4
This test has This was carried out to verify that 1088 is a strain different from Lactobacillus johnsonii LC1 used in Test Example 3.
1. Sample Preparation 1) Strain Preparation Both strains used in Test Example 3 were inoculated into MRS broth (manufactured by Becton Dickinson) and cultured at 37 ° C. for 18 hours. Strains were collected and washed 3 times with phosphate buffered saline to prepare each strain.

２）デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の調製
各菌株をそれぞれリン酸緩衝化生理食塩水に懸濁し、各懸濁液からウイザード・ジェノミック・ディーエヌエー・ピューリフィケーション・キット（ＷｉｚａｒｄＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ）（プロメガ社製）によりＤＮＡを抽出した。尚、抽出の方法は前記キットに添付されている方法に従った。2) Preparation of deoxyribonucleic acid (DNA) Each strain was suspended in phosphate buffered saline, and from each suspension, Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega) DNA was extracted. The extraction method was in accordance with the method attached to the kit.

３）使用したプライマー配列

表５に示した６種類のプライマーを使用した。3) Primer sequences used

Six types of primers shown in Table 5 were used.

２．試験方法

表６に示した反応液を使用し、表７に示した条件により反応サイクルを行い、反応終了後に反応液５μｌを１．４％アガロースゲルを使用し、常法により電気泳動を行った。2. Test method

Using the reaction solution shown in Table 6, the reaction cycle was carried out under the conditions shown in Table 7, and after completion of the reaction, 5 μl of the reaction solution was subjected to electrophoresis using a 1.4% agarose gel in the usual manner.

３．試験結果
この試験の結果は、図１に示すとおりである。図中Ｍ、Ａ及びＢは、それぞれ１００ｂラターマーカー、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株を示す。図１から明らかなとおり、Ｐ−０７、Ｐ−０９及びＰ−３０の電気泳動パターンには明瞭な相違が認められ、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株は、いずれもラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）に属するが、異なった菌株であることが立証された。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, M, A and B are 100b later marker, LC1 strain and No. of the present invention, respectively. 1088 strains are shown. As is clear from FIG. 1, a clear difference was observed in the electrophoretic patterns of P-07, P-09 and P-30. Although all 1088 strains belong to Lactobacillus johnsonii, they have been proved to be different strains.

試験例５
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
試験菌株であるＮｏ．１０８８及びラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株であるＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）を、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（ヒト慢性胃炎患者から分離。東海大学医学部生体防御学保存株）と共に、ビー・エッチ・アイ・ブロス（ＢＨＩｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）１００ｍｌに５％の馬血清を添加した液体培地に、液体培地１ｍｌ当たりラクトバシラス属の２菌株を各１．０×１０^６及びヘリコバクター・ピロリを１．０×１０^７の割合で接種し、３７℃の微好気培養条件下で培養し、培養開始後６時間、１２時間、２４時間及び４８時間に経時的に培地を採取し、試料を調製した。尚、前記両菌を添加しない液体培地そのものを対照試料とした。Test Example 5
This test has This was carried out in order to examine the inhibitory effect of 1088 against Helicobacter pylori.
1. Preparation of sample No. JCM2012 (obtained from RIKEN Resource Center), a reference strain of Lactobacillus johnsonii, was obtained from Helicobacter pylori No. 1088 and Lactobacillus johnsonii. 130 (isolated from human chronic gastritis. Tokai University Biomedical Defense Preservation Co., Ltd.) and BHI broth (Becton Dickinson) 100ml liquid medium supplemented with 5% horse serum Inoculate 2 strains of Lactobacillus genus at a rate of 1.0 × 10 ⁶ and Helicobacter pylori at a rate of 1.0 × 10 ⁷ per ml of liquid medium, and culture under 37 ° C. microaerobic culture conditions. At 6 hours, 12 hours, 24 hours and 48 hours after the start, the medium was collected over time to prepare samples. In addition, the liquid medium itself which does not add both the said bacteria was used as the control sample.

２．試験方法
採取した試料を次の培地により、アネロパック角型ジャー（三菱ガス化学社製）にアネロパック・ヘリコ（三菱ガス化学社製）を入れ、３７℃で４日間微好気培養し、ヘリコバクター・ピロリの菌数を測定した。菌数測定に使用した培地は、ビー・エチ・アイ（ＢＨＩ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）１０００ｍｌに馬血清７％、テトラゾリウム（ジグマ社製）２５ｍｇ、ポリミキシン・ビー（ジグマ社製）２５００単位、バンコマイシン（ジグマ社製）１０ｍｇ、バシトラシン（ジグマ社製）５ｍｇ及びアンフォテリシン・ビー（ジグマ社製）２ｍｇの割合で添加した。2. Test method Using the following medium, put the aneropack helico (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd.) into the aneropack square jar (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd.), and microaerobically culture at 37 ° C for 4 days. The number of bacteria was measured. The medium used for measuring the number of bacteria was 1000 ml of a BHI agar (Becton Dickinson), horse serum 7%, tetrazolium (Zigma) 25 mg, polymyxin bee (Zigma) 2500. A unit, vancomycin (manufactured by Sigma) 10 mg, bacitracin (manufactured by Sigma) 5 mg, and amphotericin bee (manufactured by Sigma) 2 mg were added.

３．試験結果
この試験の結果は図２に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図２から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０^３／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０^４．２／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０倍以上ヘリコバクター・ピロリ菌を抑制することが認められた。3. Test results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, ● indicates a control sample, and △ indicates No. 1088 and □ indicate reference strains of Lactobacillus johnsonii. As is apparent from FIG. In the sample added with 1088, the number of Helicobacter pylori after 24 hours was 1.0 × 10 ³ / ml, and after 48 hours, it was below the detection limit. On the other hand, in the reference strain-added sample of Lactobacillus johnsonii, the number of Helicobacter pylori cells after 24 hours was 1.0 × 10 ^4.2 / ml, and after 48 hours, it was below the detection limit. From this test result, no. 1088 was found to suppress Helicobacter pylori 10 times more than the known strain of Lactobacillus johnsonii.

試験例６
この試験は、腸管出血性大腸菌、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｏ−１５７に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
ガム（ＧＡＭ）ブイヨン（ニッスイ製薬社製）にブドウ糖０．７％を添加した液体培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｏ−１５７は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。Test Example 6
This test is the test for No. against enterohemorrhagic E. coli, Escherichia coli O-157. This was done to examine the inhibitory effect of 1088.
1. Sample Preparation A sample and a control sample were prepared in the same manner as in Test Example 5 except that a liquid medium in which 0.7% of glucose was added to gum (GAM) bouillon (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) was used. In addition, Escherichia coli (Escherichia coli) O-157 is a clinical isolate and a Tokai University School of Medicine biodefense preservation stock.

２．試験方法
エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｏ−１５７の培養にディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。2. Test Method Samples and controls were prepared in the same manner as in Test Example 5 except that D-HELL agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) was used for culturing Escherichia coli O-157. The number of bacteria in the sample was measured.

３．試験結果
この試験の結果は図３に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図３から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０^３．８／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０^４．９／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基凖株よりも１０倍以上エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｏ−１５７を抑制することが認められた。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, ● indicates a control sample, and △ indicates No. 1088 and □ indicate reference strains of Lactobacillus johnsonii. As is apparent from FIG. In the sample added with 1088, the number of Helicobacter pylori after 24 hours was 1.0 × 10 ^3.8 / ml, and after 48 hours, it was below the detection limit. On the other hand, in the reference strain-added sample of Lactobacillus johnsonii, the number of Helicobacter pylori after 24 hours was 1.0 × 10 ^4.9 / ml, and after 48 hours, it was below the detection limit. From this test result, no. 1088 was found to suppress Escherichia coli O-157 10 times more than the known strain of Lactobacillus johnsonii.

試験例７
この試験は、Ｎｏ．１０８８のサルモネラ菌に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、サルモネラ菌（ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２）は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。Test Example 7
This test has This was carried out in order to examine the inhibitory effect of 1088 against Salmonella.
1. Sample Preparation Samples and control samples were prepared in the same manner as in Test Example 5. In addition, Salmonella thyphimurium LT2 is a clinical isolate and a Tokai University School of Medicine biodefense preserved strain.

２．試験方法
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。2. Test Method The bacterial counts of the sample and the control sample were measured by the same method as in Test Example 5.

３．試験結果
この試験の結果は図４に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図４から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では１２時間後にはサルモネラ菌の検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、１２時間後のサルモネラ菌の菌数が１．０×１０^３／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０００倍以上サルモネラ菌を抑制することが認められた。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, ● indicates a control sample, and △ indicates No. 1088 and □ indicate reference strains of Lactobacillus johnsonii. As is clear from FIG. In the sample added with 1088, it was below the detection limit of Salmonella after 12 hours. On the other hand, in the reference strain-added sample of Lactobacillus johnsonii, the number of Salmonella after 12 hours was 1.0 × 10 ³ / ml. From this test result, no. 1088 was found to inhibit Salmonella more than 1000 times more than the standard strain of Lactobacillus johnsonii.

試験例８
この試験は、Ｎｏ．１０８８のクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６は、理化学研究所リソースセンターから入手した。Test Example 8
This test has This was carried out in order to examine the inhibitory effect of 1088 against Clostridium difficile.
1. Sample Preparation A sample and a control sample were prepared by the same method as in Test Example 5 except that anaerobic culture was performed. Clostridium difficile JCM1296 was obtained from RIKEN Resource Center.

２．試験方法
クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の菌数測定のための培養にシーシーエフエー（ＣＣＦＡ）寒天培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。2. Test method The number of bacteria in the sample and the control sample was measured in the same manner as in Test Example 5 except that a CFA (CCFA) agar medium was used for the culture for measuring the number of Clostridium difficile. did.

３．試験結果
この試験の結果は図５に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図５から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にはクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６が１．０×１０^３／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、４８時間後のクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６の菌数が１．０×１０^３．６／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりもクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６を抑制することが認められた。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, ● indicates a control sample, and △ indicates No. 1088 and □ indicate reference strains of Lactobacillus johnsonii. As is clear from FIG. In the sample added with 1088, Clostridium difficile JCM1296 was detected at 1.0 × 10 ³ / ml after 48 hours. On the other hand, in the reference strain-added sample of Lactobacillus johnsonii, the bacterial count of Clostridium difficile JCM1296 after 48 hours was 1.0 × 10 ^3.6 / ml. From this test result, no. 1088 was found to suppress Clostridium difficile JCM1296 rather than the known Lactobacillus johnsonii reference strain.

試験例９
この試験は、Ｎｏ．１０８８のカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）に対する増殖抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。Test Example 9
This test has The test was conducted to examine the growth inhibitory effect of 1088 against Candida albicans.
1. Sample Preparation A sample and a control sample were prepared by the same method as in Test Example 5 except that anaerobic culture was performed. In addition, Candida albicans (Candida albicans) TI3001 is a clinical isolate and a Tokai University School of Medicine biodefense preservation stock.

２．試験方法
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数測定のための同菌の接種菌数を１．０×１０^６／ｍｌにしたこと及び菌数測定のための培地を次のとおり変更したこと除き、前記試験例４と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。菌数測定のための培地は、ポテトデキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）を滅菌後、１０％酒石酸を培地１１当たり１．４ｍｌ添加し、ｐＨを３．５に調整したものを使用した。2. Test method The inoculum number of Candida albicans TI3001 was determined to be 1.0 × 10 ⁶ / ml and the medium for measuring the number of bacteria was changed as follows: Except for the above, the number of bacteria in the sample and the control sample was measured in the same manner as in Test Example 4. As a medium for measuring the number of bacteria, a potato dextrose agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) was sterilized, 1.4 ml of 10% tartaric acid was added per medium 11, and the pH was adjusted to 3.5.

３．試験結果
この試験の結果は図６に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図６から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が２×１０^５／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が５×１０^５／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は、公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）基準株よりもカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１を抑制することが認められた。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, ● indicates a control sample, and △ indicates No. 1088 and □ indicate reference strains of Lactobacillus johnsonii. As is apparent from FIG. In the sample added with 1088, the number of Candida albicans TI3001 was detected at 2 × 10 ⁵ / ml after 48 hours. On the other hand, in the reference strain-added sample of Lactobacillus johnsonii, the number of Candida albicans TI3001 was 5 × 10 ⁵ / ml after 48 hours. From this test result, no. 1088 was found to suppress Candida albicans TI3001 over the known Lactobacillus johnsonii reference strain.

試験例１０
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）感染マウスに対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
４週齢の無菌マウス（東海大学医学部生体防御学繁殖マウス）１５匹に、試験例４と同一の方法により培養したヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（臨床分離株。東海大学医学部生体防御学保存株）を３日間１．０×１０^９／０．５ｍｌを経口投与し、常法により飼育した。４週間飼育後、５匹のマウスを屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を、次の試験方法に記載の方法により測定した結果、いずれのマウスも胃組織１ｇ当たり１０^４〜１０^５のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の感染が確認され、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウスを作成した。Test Example 10
This test has The test was conducted to examine the inhibitory effect on 1088 Helicobacter pylori-infected mice.
1. Preparation of Samples Fifteen 4-week-old aseptic mice (breeding mice of Tokai University School of Medicine), Helicobacter pylori No. cultivated by the same method as in Test Example 4. 130 (clinical isolate. Tokai University School of Medicine Bioprotection Preservation Strain) was orally administered for 3 days at 1.0 × 10 ⁹ /0.5 ml, and reared by a conventional method. After 4 weeks of breeding, 5 mice were sacrificed and Helicobacter pylori no. As a result of measuring the number of bacteria of 130 by the method described in the following test method, all mice were found to have Helicobacter pylori No. 10 of 10 ⁴ to 10 ⁵ per 1 g of stomach tissue. 130 infections were confirmed and Helicobacter pylori No. 130 infected mice were created.

２．試験方法
前記ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウス１０匹に、試験例４と同一の方法により調製したＮｏ．１０８８１．０×１０^９を１回経口投与し、常法により飼育した。Ｎｏ．１０８８投与、２週間後及び４週間後にそれぞれ感染マウス５匹を屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を次の方法により測定した。尚、Ｎｏ．１０８８を投与しない１０匹を対照マウス試料とした。2. Test Method Helicobacter pylori No. No. 130 prepared by the same method as in Test Example 4 was applied to 10 infected mice. 1088 1.0 × 10 ⁹ was orally administered once and reared by a conventional method. No. After 5 weeks of administration, 5 infected mice were sacrificed after 2 weeks and 4 weeks, respectively, and Helicobacter pylori No. 5 in stomach tissue was killed. The number of 130 bacteria was measured by the following method. No. Ten mice that did not receive 1088 served as control mouse samples.

胃組織中のヘリコバクター・ピロリ菌数の測定は、マウスをエーテルで麻酔し、胃を摘出し、胃の内容物を除去し、滅菌したリン酸緩衝化生理食塩水を添加し、ガラスホモジナイザー（旭テクノグラス社製。５ｍｌ容）で破砕し、試料液を調製した。この試料液を１

広げ、３７℃で４〜５日微好気培養し、出現したコロニー数に希釈倍率を乗じて菌数を測定した。尚、この試験を２回実施した。To determine the number of Helicobacter pylori in stomach tissue, anesthetize the mouse with ether, remove the stomach, remove the contents of the stomach, add sterilized phosphate buffered saline, and add a glass homogenizer (Asahi The sample liquid was prepared by crushing with Techno Glass Co., Ltd. (5 ml volume). 1 of this sample solution

The cells were spread and microaerobically cultured at 37 ° C. for 4 to 5 days, and the number of bacteria that appeared was multiplied by the dilution factor. This test was performed twice.

３．試験結果
この試験の結果は、図７に示すとおりである。図中黒の表示はＮｏ．１０８８を投与しない対照群の平均値、白の表示はＮｏ．１０８８を投与した群の平均値を示し、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図７から明らかなとおりＮｏ．１０８８投与しない対照群では２回の試験とも胃組織中に１．０×１０^４．７／ｇのヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が存在していたが、Ｎｏ．１０８８を投与した試料群では胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が１．０×１０^２．４／ｇ（第１回）、１．０×１０^３／ｇ（第２回）であり、対照群よりも有意に減少していたことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８の経口投与がヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の抑制に有効であることが証明された。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. The black display in the figure is No. The mean value of the control group not administered with 1088, the white display is No. The average value of the group administered with 1088 is shown, and the result of the significant difference test (T test) between both groups is indicated as p <0.05. As apparent from FIG. In the control group not administered with 1088, in both tests, 1.0 × 10 ^4.7 / g Helicobacter pylori No. 130 existed, but no. In the sample group to which 1088 was administered, Helicobacter pylori No. 5 in stomach tissue was used. It was recognized that 130 was 1.0 × 10 ^2.4 / g (first time) and 1.0 × 10 ³ / g (second time), which was significantly decreased as compared with the control group. Therefore, no. Oral administration of 1088 is Helicobacter pylori no. It was proved effective in suppressing 130.

試験例１１
この試験は、Ｎｏ．１０８８の腸内菌叢への影響を調べるために行った。
１．試料の調製
試験例１０と同一の無菌マウス１０匹に、ヒト成人の糞便を１００倍に希釈した希釈液を経口投与し、常法により４週間飼育し、ヒトフローラ・マウスを調製した。Test Example 11
This test has This was done to examine the effect of 1088 on the gut microbiota.
1. Preparation of Sample 10 sterile mice identical to those of Test Example 10 were orally administered with a diluted human stool diluted 100-fold, and were bred for 4 weeks by a conventional method to prepare human flora mice.

２．試験方法
前記ヒトフローラ・マウス１０匹に、Ｎｏ．１０８８をエム・アール・エス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）により３７℃で２４時間培養した培養液（２．０×１０^９／ｍｌの菌数）を１回０．５ｍｌ連日経口投与して常法により飼育し、４週間後の各マウスの糞便中の菌叢を光岡の方法（光岡知足著、「腸内菌の世界：嫌気性菌の分離と同定」、叢文社、１９８０年）により次のとおり検出した。尚、残りのヒトフローラ・マウス５匹には何も投与せず、常法により４週間飼育し、対照群とした。2. Test Method No. 10 was added to the 10 human flora mice. 10 ml of culture solution (2.0 × 10 ⁹ / ml of bacteria) cultured at 37 ° C. for 24 hours with MRS broth (manufactured by Becton Dickinson) once in 0.5 ml daily Orally administrated and bred in a conventional manner, and the microbial flora in the stool of each mouse 4 weeks later was prepared by Mitsuoka's method (Tomotsuka Mitsuoka, “The World of Enterobacteria: Isolation and Identification of Anaerobic Bacteria”, Sobunsha, 1980. By year). In addition, nothing was administered to the remaining 5 human flora mice, and they were raised for 4 weeks by a conventional method to serve as a control group.

次の培地を使用した。尚、メーカー名の記載のない培地は、本発明者が、前記光岡の方法に基づいて調製した。
１）非選択培地
ａ．嫌気培養用
イー・ジー（ＥＧ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）、ビー・エル（ＢＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）
ｂ．好気培養用
トリプト・ソイ血液寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）The following media was used. The medium without the manufacturer's name was prepared by the present inventor based on the method of Mitsuoka.
1) Non-selective medium a. EG (EG) agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.), bL (BL) agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) for anaerobic culture
b. Tryptic soy blood agar for aerobic culture (Becton Dickinson)

２）選択培地
ａ．嫌気培養用
＊ビー・エス（ＢＳ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊イー・エス（ＥＳ）寒天培地：ユーバクテイリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊エヌ・ビー・ジー・ティー（ＮＢＧＴ）寒天培地：バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）選択培地
＊変法ブイ・エス（ＶＳ）寒天培地：ベイロネラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ）選択培地
＊エヌ・エヌ（ＮＮ）寒天培地：クロストリジウム・パーフリンゲス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ）選択培地
＊シー・シー・エフ・エー（ＣＣＦＡ）寒天培地（オクソイド社製）：クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）選択培地2) Selection medium a. Anaerobic culture * BS (BS) agar (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.): Bifidobacterium selective medium * ES (agar) medium: Eubacterium selective medium * NB NBGT agar medium: Bacteroides selective medium * modified buoy es (VS) agar medium: Veilonella selective medium * NN agar medium: Clostridium perfringes ) Selection medium * CCFA agar medium (Oxoid): Clostridium difficile selection medium

ｂ．好気培養用
＊変法エル・ビー・エス（ＬＢＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）：ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）選択培地
＊ディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：エンテロバクテリア（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）選択培地
＊ティー・エー・ティー・エー・シー（ＴＡＴＡＣ）寒天培地：エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ピー・イー・イー・エス（ＰＥＥＳ）寒天培地：スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ポテト・デキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）：酵母選択培地
＊エヌ・エー・シー（ＮＡＣ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：緑膿菌選択培地b. Aerobic culture * Modified LBS (LBS) agar medium (Becton Dickinson): Lactobacillus selective medium * DHL agar medium (Nissui Pharmaceutical): Entero Bacterial (Enterobacteria) selection medium * TATAC agar medium: Enterococcus selection medium * PEES agar medium: Staphylococcus selection medium * Potato dextrose agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.): yeast selective medium * NAC (NAC) agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.): Pseudomonas aeruginosa selective medium

前記各平板培地に希釈した試料液を滴下し、３７℃で３日間好気培養又は嫌気ジャー（三菱化学社製。角型ジャー標凖型）にアネロパック（三菱化学社製）を入れて嫌気培養した。培養後、出現した集落を計測し、のちグラム染色し、細胞の形態学的観察及び集落の好気・嫌気培養条件下の育成の有無から細菌群を決定した。 The diluted sample solution is added dropwise to each of the above plate media, and an anaerobic jar (manufactured by Mitsubishi Chemical Co., Ltd., square jar standard) is placed at 37 ° C. for 3 days in an anaerobic culture or anaerobic jar. did. After culturing, the colonies that emerged were measured and then stained with Gram, and the bacterial group was determined from the morphological observation of the cells and the presence or absence of growth of the colonies under aerobic / anaerobic culture conditions.

３．試験結果
この試験の結果は、図８に示すとおりである。図中、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図８から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８投与群では糞便１ｇから１．０×１０^７〜１０^８のＮｏ．１０８８が検出された。また、善玉菌と言われているビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）が対照群よりも有意に増加し、腐敗菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）が対照群よりも有意に減少したことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８は、ヒトの腸内菌叢に極めて有利に作用することが確認された。3. Test Results The results of this test are as shown in FIG. In the figure, the result of the significant difference test (T test) of both groups is indicated as p <0.05. As is clear from FIG. In the 1088 administration group, feces 1 g to 1.0 × 10 ⁷ to 10 ⁸ No. 1088 was detected. It was also observed that Bifidobacterium, which is said to be good bacteria, was significantly increased compared to the control group, and rot bacteria were significantly decreased compared to the control group. Therefore, no. 1088 has been confirmed to act very beneficially on the human intestinal flora.

以上の試験結果を総括すれば、図２、図３、図４、図５及び図６に示すインビトロの試験において明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８は多くの病原菌に対して格段の抑制効果を有し、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）基準株ＪＣＭ２０１２よりも、その抑制効果は顕著であった。更に、動物実験においても図７及び図８に示すとおり、ヘリコバクター・ピロリ感染に対する抑制効果、整腸作用を有するビフィズス菌の増加、腐敗菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）の抑制が実証され、Ｎｏ．１０８８はプロバイオティクスとして格段に有効な菌株であることが立証された。 When the above test results are summarized, as is clear in the in vitro tests shown in FIGS. 2, 3, 4, 5, and 6, no. 1088 has a remarkable inhibitory effect on many pathogenic bacteria, and the inhibitory effect was more remarkable than the reference strain JCM2012 of Lactobacillus johnsonii. Furthermore, in animal experiments, as shown in FIGS. 7 and 8, an inhibitory effect on Helicobacter pylori infection, an increase in bifidobacteria having an intestinal regulating action, and suppression of rot bacteria (Clostridia) have been demonstrated. 1088 was proved to be a particularly effective strain as a probiotic.

本発明は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存し得る強い耐酸性を有すること、短時間で増殖すること、及び病原菌の増殖を抑制すること、の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌、並びに前記新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品に関するものであり、本発明が奏する効果は次のとおりである。
１）優れた耐酸性を有するので、服用又は摂取したとき胃酸による死滅が少なく、大量の菌数を腸に到達させ、プロバイオティクス効果を高める新規な乳酸菌を提供する。
２）この新規な乳酸菌は、発酵製品、健康食品、機能性食品、医薬品等の広範囲な製品に利用することが可能である。
３）この新規な乳酸菌は、プロバイオティクスとして広範囲の病原菌の抑制効果を有し、特に胃内のヘリコバクター・ピロリ感染に対して顕著な抑制効果を有する。
４）この新規な乳酸菌は、ビフィズス菌等の有用細菌を増加させ、腐敗菌であるクロストリジウムを減少させる効果を有する。The present invention is a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, having strong acid resistance capable of surviving for at least 60 minutes in a buffer solution of pH 1.0, growing in a short time, and suppressing the growth of pathogenic bacteria. The present invention relates to a novel lactic acid bacterium characterized by having properties and various products characterized by using and processing the novel lactic acid bacterium, and the effects of the present invention are as follows.
1) Since it has excellent acid resistance, it provides a new lactic acid bacterium that is less killed by gastric acid when taken or ingested, allows a large number of bacteria to reach the intestine, and enhances the probiotic effect.
2) The novel lactic acid bacteria can be used for a wide range of products such as fermented products, health foods, functional foods, and pharmaceuticals.
3) This novel lactic acid bacterium has a wide range of pathogen-inhibiting effects as probiotics, and has a particularly remarkable effect on inhibiting Helicobacter pylori infection in the stomach.
4) This novel lactic acid bacterium has an effect of increasing useful bacteria such as bifidobacteria and decreasing clostridium which is a spoilage bacterium.

次に本発明を実施するための最良の形態について、実施例を記載するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 Next, examples of the best mode for carrying out the present invention will be described, but the present invention is not limited to the following examples.

エムアールエス・ブロス（ＭＲＳｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）１０１にＮｏ．１０８８を生菌数濃度１×１０^７／ｍｌの割合で接種し、３７℃で１５時間培養し、培養終了後、遠心分離により集菌し、集菌した菌体を濃度０．８５％の滅菌食塩水に懸濁し、遠心分離により洗浄した菌体を集菌し、１０％の脱脂粉乳及び１％のグルタミン酸ナトリウムを含有する溶液に洗浄した菌体を懸濁し、常法により凍結乾燥し、約５０ｇの乾燥菌末を製造した。得られた乾燥菌末の生菌数を前記試験例１と同一の方法により測定した結果２．０×１０^１１／ｇであった。No. 1 to MR S broth (Made by Becton Dickinson) 101 1088 was inoculated at a live cell count concentration of 1 × 10 ⁷ / ml, cultured at 37 ° C. for 15 hours, collected after centrifugation by centrifugation, and the collected cells were sterilized at a concentration of 0.85% Bacterial cells suspended in saline and washed by centrifugation are collected, the washed cells are suspended in a solution containing 10% skim milk powder and 1% sodium glutamate, freeze-dried by a conventional method, 50 g of dry bacterial powder was produced. It was 2.0 * 10 < ¹¹ > / g as a result of measuring the viable cell count of the obtained dry microbe by the same method as the said Test Example 1.

前記Ｎｏ．１０８８の乾燥菌体１０ｇを水分３％以下の市販デキストリン（松谷化学社製。パインデックス）４．９９ｋｇに倍散し、乳酸菌末約５ｋｇを製造した。得られた乳酸菌末の生菌数を前記試験例１と同一の方法により測定した結果４．０×１０^８／ｇであった。No. 10 g of dried microbial cells of 1088 were triturated with 4.99 kg of a commercial dextrin (Matsutani Chemical Co., Ltd., Paindex) with a moisture content of 3% or less to produce about 5 kg of lactic acid bacteria powder. The number of viable bacteria of the obtained lactic acid bacteria powder was measured by the same method as in Test Example 1 and was 4.0 × 10 ⁸ / g.

殺菌した原料乳１０ｋｇに、スターターとしてＮｏ．１０８８、ラクトバシラス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（市販ヨーグルトから分離した菌株）及びストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（市販ヨーグルトから分離した菌株）の等量混合菌末を２％の割合で添加したことを除き、常法のタンク発酵タイプによりタンク内で発酵させ、約１０ｋｇのヨーグルトを製造した。 As a starter, no. 1088, Lactobacillus bulgaricus (a strain isolated from commercially available yogurt) and Streptococcus thermophilus (a strain isolated from commercially available yogurt) were added in an equivalent amount of 2%. Except about 1, and fermented in a tank by a conventional tank fermentation type to produce about 10 kg of yogurt.

実施例１で得られたＮｏ．１０８８の乾燥菌体２．０ｋｇを、約０．３ｇずつそのまま直接打錠し、約６．５００個の錠剤を製造した。 No. 1 obtained in Example 1. 2.0kg of 1088 dry cells were directly compressed into tablets of about 0.3g each to produce about 6.500 tablets.

以上記載したとおり、Ｎｏ．１０８８は、優れた耐酸性を有するので、発酵製品、健康食品、機能性食品、医薬品等の広範囲な製品に利用することが可能である。 As described above, no. Since 1088 has excellent acid resistance, it can be used for a wide range of products such as fermented products, health foods, functional foods, and pharmaceuticals.

図１は、Ｎｏ．１０８８とラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１のＤＮＡの電気泳動図である。 FIG. FIG. 10 is an electrophoretic diagram of DNA of 1088 and Lactobacillus johnsonii LC1. 図２は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 2 shows Helicobacter pylori no. No. 130 for No. The suppression effect of 1088 is shown. 図３は、腸管出血性大腸菌Ｏ−１５７に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 3 shows No. 1 against enterohemorrhagic E. coli O-157. The suppression effect of 1088 is shown. 図４は、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 4 shows the No. for Salmonella thyphimurium LT2. The suppression effect of 1088 is shown. 図５は、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 5 shows the No. 5 for Clostridium difficile JCM1296. The suppression effect of 1088 is shown. 図６は、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 6 shows the No. 1 for Candida albicans TI3001. The suppression effect of 1088 is shown. 図７は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウスに対するＮｏ．１０８８の抑制効果を示す。 FIG. 7 shows Helicobacter pylori no. No. 130 for infected mice. The suppression effect of 1088 is shown. 図８は、ヒトフローラマウスの腸内菌叢に対するＮｏ．１０８８の影響を示す。 FIG. 8 shows No. 1 for intestinal flora of human flora mice. The effect of 1088 is shown.

Claims

ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌。A lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, comprising the following a) to d):
a) have strong acid resistance to survive at least 60 minutes in pH 1.0 buffer;
b) multiply in a short time;
c) inhibiting pathogenic bacteria, and d) promoting the growth of useful bacteria,
A novel lactic acid bacterium characterized by having the following properties:

ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥＰ−２７８）である請求項１に記載の新規な乳酸菌。 Lactobacillus belonging to the genus Lactobacillus is Lactobacillus johnsonii No. The novel lactic acid bacterium according to claim 1, which is 1088 (accession number: NITE P-278).

ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有する新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品。A lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus, comprising the following a) to d):
a) have strong acid resistance to survive at least 60 minutes in pH 1.0 buffer;
b) multiply in a short time;
c) inhibiting pathogenic bacteria, and d) promoting the growth of useful bacteria,
Various products characterized by using and processing novel lactic acid bacteria having the properties of

ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥＰ−２７８）である請求項３に記載の各種製品。 Lactobacillus belonging to the genus Lactobacillus is Lactobacillus johnsonii No. The various products according to claim 3, which is 1088 (accession number: NITE P-278).

加工が、新規な乳酸菌による発酵、新規な乳酸菌の混合、新規な乳酸菌の菌末化又は新規な乳酸菌の錠剤化である請求項３に記載の各種製品。 The various products according to claim 3, wherein the processing is fermentation by a novel lactic acid bacterium, mixing of a novel lactic acid bacterium, conversion of a new lactic acid bacterium, or formation of a tablet of a novel lactic acid bacterium.