JP2008106008A - Geniposidic acid derivative - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a pharmaceutical composition for therapy or prophylaxis of diseases such as obesity comprising a new compound contained in a leaf of Eucommia ulmoides oliver. <P>SOLUTION: The pharmaceutical composition comprises a compound represented by formula (I) (wherein, R<SP>1</SP>to R<SP>4</SP>and R<SP>11</SP>to R<SP>14</SP>represent each a specific substituent) or a salt thereof. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は、新規なゲニポシド酸誘導体、および当該化合物を含む医薬組成物および食品に関する。   The present invention relates to a novel geniposide acid derivative, and a pharmaceutical composition and food containing the compound.

杜仲（Eucommia ulmoides oliver）は、中国中央部起源のトチュウ科トチュウ属の一科一属一種に分類される落葉性木本類で、樹高が２０ｍに達する喬木である。杜仲は、一般にお茶と称するツバキ科の植物と比較し、カフェインを全く含んでいないほか、含有物も異なる。杜仲葉は、１９８０年代から飲料としての用途が普及している。   Eucommia ulmoides oliver is a deciduous woody tree that is classified as a genus of the family Eucommia from the central part of China and has a height of 20 m. Compared with the camellia plant generally called tea, Tochu does not contain caffeine at all and its contents are also different. Tochu Nakaba has been widely used as a drink since the 1980s.

天然物由来の食品や漢方薬は、一般に副作用が少ないなどの利点を有することから、近年において発生が増加している生活習慣病に対してのその有用性が注目されている。上述の杜仲に関しても、杜仲葉の成分のリパーゼ阻害活性について検討した例もいくつかの報告がされている（特許文献１〜５を参照）。杜仲葉に含まれる天然成分としては、アスペルロサイド、アウクビン、クロロゲン酸およびゲニポシド酸などが知られており、このうち杜仲葉に特徴的な成分であるゲニポシド酸は、体内に吸収されると、副交感神経に作用し、動脈の筋肉（平滑筋）を弛緩させることにより、血圧降下作用を示すことが知られている（非特許文献１）。
特開２００５−２８９９５０号公報 特開２００５−２８９９５１号公報 特開２００３−３４２１８５号公報 特開２００２−１７９５８６号公報 特開２００２−２７５０７７号公報 Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ５９（３），１１７〜１２０ Natural foods and herbal medicines generally have advantages such as fewer side effects, and thus their usefulness against lifestyle-related diseases that have been increasing in recent years has attracted attention. Regarding the above-mentioned Tochu, several examples have also been reported in which the lipase inhibitory activity of Tonaka leaf components was examined (see Patent Documents 1 to 5). As natural ingredients contained in Tochu Nakaba, asperloside, aucubin, chlorogenic acid, geniposide acid and the like are known. Of these, geniposide acid, a characteristic component of Tochu Nakaba, is absorbed into the body, It is known to exert a blood pressure lowering effect by acting on parasympathetic nerves and relaxing arterial muscles (smooth muscles) (Non-patent Document 1).
JP 2005-289950 A JP 2005-289951 A JP 2003-342185 A JP 2002-179586 A JP 2002-275077 A Natural Medicines 59 (3), 117-120

杜仲葉は漢方薬として種々の効能が知られており、医薬品探索の観点から杜仲葉に含まれる成分には興味関心が寄せられていた。特に、杜仲葉には微量成分として未知の化合物が含まれると考えられており、成分の化学構造の特定および有機合成による製造により、薬効を有する新規化合物を見いだす可能性がある。   Yunakaha is known for its various effects as a Chinese herbal medicine, and from the viewpoint of drug discovery, the ingredients contained in Yunakaha have been of interest. In particular, it is considered that Tochu leaves contain unknown compounds as trace components, and there is a possibility that novel compounds having medicinal effects may be found by specifying the chemical structure of the components and producing them by organic synthesis.

したがって、本発明は、杜仲葉に含まれる化合物、特に新規な化合物を提供すること目的とする。さらに、本発明は、当該化合物を含む医薬組成物、食品および飲料を提供することを目的とする。さらに、本発明は、当該化合物を含む肥満またはそれと関連する疾患の治療または予防のための医薬組成物、肥満またはそれと関連する疾患の症状を改善するための食品および飲料を提供することを目的とする。   Therefore, an object of the present invention is to provide a compound, particularly a novel compound, contained in Tochu Nakaba. Furthermore, this invention aims at providing the pharmaceutical composition, foodstuff, and drink containing the said compound. Furthermore, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating or preventing obesity or a disease associated therewith containing the compound, and a food and beverage for improving symptoms of obesity or a disease associated therewith. To do.

本発明者は、上記の課題解決のために鋭意研究を進めたところ、杜仲葉に含まれる化合物およびその類縁体が抗肥満作用を有することを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち、本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）： The present inventor conducted extensive research to solve the above problems, and found that the compound and its analogs contained in Tochu Nakaha had an anti-obesity action, and completed the present invention.
That is, according to one aspect of the present invention, the formula (I):

［式中、Ｒ^１は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^２は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり、前記アルキルはアリールまたはヘテロシクリルにより置換されていてもよく、前記アリールおよびヘテロシクリルは、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_７−１４アラルキルオキシから選択される置換基により置換されていてもよく；
Ｒ^３は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり；
Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルから選択される］
の化合物、またはその塩が提供される。 [Wherein, R ¹ is a hydrogen atom, C _1-6 alkyl or C _7-14 aralkyl;
R ² is a hydrogen atom or C _1-6 alkyl, and the alkyl may be substituted with aryl or heterocyclyl, and the aryl and heterocyclyl are hydroxy, C _1-6 alkylcarbonyloxy, C _1-6 alkoxy. Or optionally substituted with a substituent selected from C _7-14 aralkyloxy;
R ³ is a hydrogen atom or C _1-6 alkyl;
R ⁴ is a hydrogen atom, C _1-6 alkylcarbonyl or C _7-14 aralkyl;
R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ and R ¹⁴ are independently selected from a hydrogen atom, C _1-6 alkylcarbonyl or C _7-14 aralkyl.
Or a salt thereof.

Ｒ^２の例としては、水素原子、メチル、ヒドロキシメチル、イソプロピル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ベンジル（フェニルメチル）および（４−ヒドロキシフェニル）メチルなどが挙げられ、特に、ベンジルまたはインドール−３−イルメチルが好ましい。 Examples of R ² include a hydrogen atom, methyl, hydroxymethyl, isopropyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, benzyl (phenylmethyl) and (4-hydroxyphenyl) methyl, and in particular, benzyl or indole -3-ylmethyl is preferred.

本発明の別の側面において、上記式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む医薬組成物が提供される。１つの態様において、前記医薬組成物は、肥満、メタボリックシンドローム、２型糖尿病、高血圧および高脂質血症から選択される疾患の治療または予防に使用される。   In another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) above or a salt thereof. In one embodiment, the pharmaceutical composition is used for the treatment or prevention of a disease selected from obesity, metabolic syndrome, type 2 diabetes, hypertension and hyperlipidemia.

本発明のさらに別の側面において、上記式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む食品または飲料が提供される。１つの態様において、前記食品および飲料は、機能性食品、健康食品、健康補助食品、栄養補助食品、保健機能食品、特定保健用食品または栄養機能食品として使用される。   In still another aspect of the present invention, there is provided a food or beverage comprising the compound of formula (I) or a salt thereof. In one embodiment, the food and beverage are used as a functional food, a health food, a health supplement, a nutritional supplement, a health functional food, a food for specified health use, or a functional nutrition food.

本発明のさらに別の側面において、式（ＩＩ）：   In yet another aspect of the invention, the formula (II):

［式中、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、請求項１に定義したとおりである］
の化合物を、式（ＩＩＩ）： [Wherein R ⁴ , R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ and R ¹⁴ are as defined in claim 1]
A compound of formula (III):

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、請求項１に定義したとおりである］
と反応させる工程を含む、請求項１に記載の化合物の製造方法が提供される。 [Wherein R ¹ , R ² and R ³ are as defined in claim 1]
The manufacturing method of the compound of Claim 1 including the process made to react is provided.

本発明の具体的な態様Specific embodiments of the present invention

以下、本発明をさらに具体的に説明する。
本明細書において「Ｃ_１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ_１−４アルキルおよびＣ_１−３アルキルなども含まれる。 Hereinafter, the present invention will be described more specifically.
As used herein, “C _1-6 alkyl” means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl. I-propyl, n-butyl, s-butyl, i-butyl, t-butyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 4-methylpentyl , 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3-ethylbutyl, and 2-ethylbutyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclopropylmethyl, and the like, for example, C _1-4 alkyl And C _1-3 alkyl are also included.

本明細書において「アリール」とは、６〜１０員芳香族炭素環基を意味し、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルなどが含まれる。
本明細書において「ヘテロシクリル」とは、５〜１０員の飽和、部分飽和または芳香族のヘテロ環基を意味し、例えば、インドリル、イミダゾリル、ピロリルなどが含まれる。 In the present specification, “aryl” means a 6 to 10 membered aromatic carbocyclic group, and includes, for example, phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl and the like.
As used herein, “heterocyclyl” means a 5- to 10-membered saturated, partially saturated or aromatic heterocyclic group, and includes, for example, indolyl, imidazolyl, pyrrolyl and the like.

本明細書において「Ｃ_７−１４アラルキル」とはアリール基を含む炭素数が７〜１４のアリールアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチルなどが含まれる。 In the present specification, “C _7-14 aralkyl” means an arylalkyl group having 7 to 14 carbon atoms including an aryl group, such as benzyl, 1-phenethyl, 2-phenethyl, 1-naphthylmethyl, 2- Naphthylmethyl and the like are included.

本明細書において「Ｃ_７−１４アラルキルオキシ」とは、基−Ｏ（Ｃ_７−１４アラルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アラルキルは既に定義したとおりである。
本明細書において「Ｃ_１−６アルキルカルボニル」とは、基−ＣＯ（Ｃ_１−６アルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アルキルは既に定義したとおりである。 In the present specification, “C _7-14 aralkyloxy” represents a group —O (C _7-14 aralkyl), in which the C _1-6 aralkyl is as defined above.
As used herein, “C _1-6 alkylcarbonyl” refers to a group —CO (C _1-6 alkyl), where the C _1-6 alkyl is as previously defined.

本明細書において「Ｃ_１−６アルキルカルボニルオキシ」とは、基−ＯＣＯ（Ｃ_１−６アルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アルキルは既に定義したとおりである。
本発明の化合物の塩とは、有機化学において通常使用されうる塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。 As used herein, “C _1-6 alkylcarbonyloxy” refers to the group —OCO (C _1-6 alkyl), where C _1-6 alkyl is as previously defined.
The salt of the compound of the present invention is not particularly limited as long as it can be usually used in organic chemistry. Examples of the salt formed by the compound of the present invention with a base include salts with inorganic bases such as sodium, potassium, magnesium, calcium and aluminum; salts with organic bases such as methylamine, ethylamine and ethanolamine.

本発明の化合物は、例えば、以下の方法により調製することができる。   The compound of the present invention can be prepared, for example, by the following method.

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４は、本明細書において既に定義したとおりである］
式（ＩＩ）のゲニポシド酸誘導体を、適当な縮合剤の存在下、適当な溶媒中で、式（ＩＩＩ）のアミノ酸エステルによりアミド化することにより、式（Ｉ）の化合物を調製することができる。本反応で使用される適当な溶媒としては、非プロトン性溶媒、例えば、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＨＭＰＡ、アセトニトリル、プロピオニトリル、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンなどが挙げられる。本反応で使用される適当な縮合剤としては、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（以下、ＷＳＣとも称する）、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミドなどのカルボジイミド化合物や、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスフォニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンなどが挙げられる。本反応においては、必要に応じて反応促進性の添加剤を使用してもよい。反応促進性の添加剤としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−カルボキシミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下、ＨＯＢｔとも称する）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアゾール、などの活性エステル剤や、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミンなどのｐＨ調整剤、またはブタノールなどが挙げられる。この工程は、特に限定はされないが、例えば０℃〜５０℃、好ましくは室温の反応温度、および例えば０．１〜４８時間の反応時間で行うことができる。 [Wherein R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ , and R ¹⁴ are as already defined herein]
Compounds of formula (I) can be prepared by amidating a geniposide acid derivative of formula (II) with an amino acid ester of formula (III) in the presence of a suitable condensing agent in a suitable solvent. . Suitable solvents used in this reaction include aprotic solvents such as DMF, DMSO, HMPA, acetonitrile, propionitrile, THF, dioxane, diethyl ether, dibutyl ether, dimethoxyethane and the like. Examples of suitable condensing agents used in this reaction include carbodiimide compounds such as 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (hereinafter also referred to as WSC), dicyclohexylcarbodiimide, diisopropylcarbodiimide, and benzotriazole. -1-yl-oxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, O- (7-azabenzotriazol-1-yl-)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate, Examples include 1-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline. In this reaction, a reaction promoting additive may be used as necessary. Examples of the reaction promoting additive include N-hydroxysuccinimide, N-hydroxy-5-norbornene-2,3-carboximide, 1-hydroxybenzotriazole (hereinafter also referred to as HOBt), 1-hydroxy-7- Active ester agents such as azabenzotriazole and 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazole, triethylamine, N-methylmorpholine, N, N-diisopropylethylamine, tris [ PH adjusting agents such as 2- (2-methoxyethoxy) ethyl] amine or butanol. Although this process is not specifically limited, For example, 0 to 50 degreeC, Preferably it can carry out with the reaction temperature of room temperature, and the reaction time of 0.1 to 48 hours, for example.

式（ＩＩＩ）のアミノ酸エステルとして光学活性体（Ｓ体またはＲ体）を使用することにより、光学活性な式（Ｉ）の化合物を調製することができる。当該アミノ酸エステルの具体例としては、例えば、フェニルアラニンのエステル（例えば、メチルエステル）、水酸基が保護基により保護されたチロシンエステル（例えば、メチルエステル）、ヘテロ環内の窒素原子が保護基により保護されたヒスチジンのエステル（例えば、メチルエステル）、ヘテロ環内の窒素原子が保護基により保護されたトリプトファンのエステル（例えば、メチルエステル）等が挙げられる。ここで、適切な保護基の選択、保護基の導入および脱離は、有機化学の技術分野に属する当業者によって容易になされる事項である。   By using an optically active form (S form or R form) as an amino acid ester of the formula (III), an optically active compound of the formula (I) can be prepared. Specific examples of the amino acid ester include phenylalanine ester (for example, methyl ester), tyrosine ester (for example, methyl ester) in which a hydroxyl group is protected by a protecting group, and a nitrogen atom in the heterocyclic ring is protected by a protecting group. Histidine esters (for example, methyl esters), tryptophan esters in which the nitrogen atom in the heterocycle is protected by a protecting group (for example, methyl esters), and the like. Here, selection of an appropriate protecting group, introduction and removal of the protecting group are matters easily made by those skilled in the art of organic chemistry.

上記反応により得られた式（Ｉ）の化合物をさらに変換することにより、別の式（Ｉ）の化合物に誘導することもできる。前記変換の例としては、エステルの加水分解、水酸基の脱保護、または保護基の導入などが挙げられ、これらの変換は有機化学の技術常識に基づいて容易に行うことができる。   The compound of formula (I) obtained by the above reaction can be further converted to another compound of formula (I). Examples of the conversion include hydrolysis of esters, deprotection of hydroxyl groups, introduction of protecting groups, and the like, and these conversions can be easily performed based on common general technical knowledge of organic chemistry.

本発明の化合物は、杜仲葉に含まれる成分を精製することにより入手することもできる。当該精製により、例えば以下の化合物を得ることができる。   The compound of the present invention can also be obtained by purifying components contained in Tochu Nakaba. By the purification, for example, the following compounds can be obtained.

本発明の医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤などとすることができ、例えば、経口投与のための錠剤、顆粒、散剤またはカプセル剤などとすることができるが、これらには限定されない。当該医薬組成物は、一般に用いられる各種成分を含みうるものであり、例えば、１種もしくはそれ以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を含みうる。また本発明の医薬組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。   The pharmaceutical composition of the present invention can be used in various dosage forms such as tablets, capsules, powders, granules, pills, solutions, emulsions, suspensions, solutions, spirits, syrups for oral administration. An agent, an extract, an elixir, and the like can be used, and examples thereof include, but are not limited to, tablets, granules, powders, or capsules for oral administration. The pharmaceutical composition can contain various commonly used ingredients, such as one or more pharmaceutically acceptable excipients, disintegrants, diluents, lubricants, flavoring agents, Coloring agents, sweetening agents, flavoring agents, suspending agents, wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents, adjuvants, preservatives, buffering agents, binders, stabilizers, coating agents and the like can be included. The pharmaceutical composition of the present invention may be in a sustained or sustained release dosage form.

本発明の分画物は、例えば錠剤の成分として使用することができる。当該錠剤は、医薬製剤の分野において通常使用される製造方法により製造され、例えば、結晶セルロース、二酸化ケイ素、ショ糖脂肪酸エステル、酵母細胞壁、グリセリンなどの添加剤を使用することができる。また、賦形剤（例えば、麦芽糖、デキストリン、サイクロデキストリン、寒天、トウモロコシたん白、リン酸三カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、植物油脂、グリセリン脂肪酸エステル、アラビアガム）を使用してもよい。   The fraction of the present invention can be used, for example, as a component of a tablet. The said tablet is manufactured by the manufacturing method normally used in the field | area of a pharmaceutical formulation, For example, additives, such as a crystalline cellulose, a silicon dioxide, a sucrose fatty acid ester, a yeast cell wall, and glycerol, can be used. In addition, excipients (eg, maltose, dextrin, cyclodextrin, agar, corn protein, tricalcium phosphate, carboxymethylcellulose calcium, vegetable oil, glycerin fatty acid ester, gum arabic) may be used.

例えば上記錠剤の成分として使用することができる。当該錠剤は、医薬製剤の分野において通常使用される製造方法により製造され、例えば、結晶セルロース、二酸化ケイ素、ショ糖脂肪酸エステル、酵母細胞壁、グリセリンなどの添加剤を使用することができる。   For example, it can be used as a component of the tablet. The said tablet is manufactured by the manufacturing method normally used in the field | area of a pharmaceutical formulation, For example, additives, such as a crystalline cellulose, a silicon dioxide, a sucrose fatty acid ester, a yeast cell wall, and glycerol, can be used.

本発明の抗肥満剤の投与量は、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の医薬組成物は、治療有効量および／または予防有効量の抗肥満剤を含むことができる。例えば本発明の杜仲葉粉砕物またはその水抽出物として、一般に１０〜５００００ｍｇ／日／成人、好ましくは１００〜５０００ｍｇ／日／成人の用量で使用される。当該医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよく、例えば他の抗肥満剤などの他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。   The dosage of the anti-obesity agent of the present invention can be appropriately selected depending on the patient's body type, age, physical condition, degree of disease, elapsed time after onset, etc. The pharmaceutical composition of the present invention comprises a therapeutically effective amount and A prophylactically effective amount of an anti-obesity agent can be included. For example, it is generally used at a dose of 10 to 50000 mg / day / adult, preferably 100 to 5000 mg / day / adult, as the pulverized mash of the present invention or its water extract. Administration of the pharmaceutical composition may be single dose or multiple dose, and may be used in combination with other drugs such as other anti-obesity agents.

本発明に係る食品および飲料の例としては、抗肥満効果を有する機能性食品、健康食品、健康補助食品、栄養補助食品（栄養ドリンク等）、保険機能食品、特定保険用食品、栄養機能食品、一般食品（ジュース、菓子、加工食品等）などが含まれる。本発明の食品または飲料は、任意の添加物として、鉄およびカルシウムなどの無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖およびキトサンなどの食物繊維、大豆抽出物などのタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖および乳糖などの糖類を含むことができる。本発明の食品または飲料を使用することにより、本発明の肥満改善効果を有する当該食品または飲料の日常的および継続的な摂取が可能となり、肥満の効果的な改善、および肥満に関連する疾患（例えば、高血圧症、高脂質血症、糖尿病、メタボリックシンドロームなど）の効果的な予防が可能となる。   Examples of foods and beverages according to the present invention include functional foods having an anti-obesity effect, health foods, health supplements, nutritional supplements (such as nutritional drinks), insurance functional foods, foods for specified insurance, nutritional functional foods, General foods (juices, confectionery, processed foods, etc.) are included. The food or beverage of the present invention includes, as optional additives, inorganic components such as iron and calcium, various vitamins, dietary fibers such as oligosaccharides and chitosan, proteins such as soybean extract, lipids such as lecithin, sucrose And sugars such as lactose. By using the food or beverage of the present invention, the food or beverage having the obesity-improving effect of the present invention can be taken daily and continuously, effectively improving obesity, and obesity-related diseases ( For example, hypertension, hyperlipidemia, diabetes, metabolic syndrome, etc.) can be effectively prevented.

以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、特に言及がなければ、使用した溶離液は容積％で表すものとする。   EXAMPLES Hereinafter, although the preferable Example of this invention is described in detail, this invention is not limited to these Examples. Unless otherwise stated, the used eluent is expressed by volume%.

［実施例１］ 乾燥杜仲葉水抽出物からの本発明の化合物の単離
乾燥杜仲葉水抽出物から式（ＩＶ）の化合物（式（Ｉ）において、Ｒ^２がベンジルであり、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４が、水素原子である。以下、化合物１と称する）を単離した。 [Example 1] Isolation of a compound of the present invention from a dried persimmon Nakaba water extract A compound of formula (IV) from a dried persimmon Nakaba water extract (in the formula (I), R ² is benzyl, R ¹ , R ³ , R ⁴ , R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ , and R ¹⁴ are hydrogen atoms (hereinafter referred to as Compound 1).

プラスチック樹脂製容器（１０Ｌ）に特開２００５−２８７４６９号公報の実施例４の記載に基づいて製造される乾燥杜仲葉（５７７．６ｇ）を入れ，蒸留水（４．６Ｌ）を加え、６５℃で１０時間加熱した。その後、綿栓およびろ紙にて、ろ過し、葉を取り除き、ろ液をＤｉａｉｏｎ ＨＰ２０（三菱化学社製）を充填したカラム（直径５７０ｘ長さ３１００ｍｍ）に付した。カラムから溶出する水溶液を回収し、さらに水（３．０Ｌ）および３０％ＭｅＯＨ水溶液（２．５Ｌ）にて溶出後、３０％ＭｅＯＨ水溶液（０．５Ｌ）にて目的の化合物を含むフラクションを溶出させ、減圧濃縮して３．７８ｇの画分を得た。得られた画分を、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ（富士シリシア化学）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１５：８５→３０：７０→５０：５０→１００：０）で精製し、目的の化合物を含むフラクション（７０１．４ｍｇ）を得た。この画分をさらにＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳを充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝０：１００→５：９５→１０：９０→１５：８５→１００：０）で精製し、化合物１（１３．０ｍｇ）を白色粉末として得た。 Into a plastic resin container (10 L) is placed dried rice bran (577.6 g) produced based on the description in Example 4 of JP-A-2005-287469, distilled water (4.6 L) is added, and 65 ° C. For 10 hours. Then, it filtered with the cotton plug and the filter paper, the leaf was removed, and the filtrate was attached | subjected to the column (diameter 570x length 3100mm) filled with Diaion HP20 (made by Mitsubishi Chemical Corporation). The aqueous solution eluting from the column is collected and further eluted with water (3.0 L) and 30% MeOH aqueous solution (2.5 L), and then the fraction containing the target compound is eluted with 30% MeOH aqueous solution (0.5 L). And concentrated under reduced pressure to give 3.78 g of fraction. The obtained fraction was purified by column chromatography (MeOH: H ₂ O = 15: 85 → 30: 70 → 50: 50 → 100: 0) packed with Chromatorex ODS (Fuji Silysia Chemical) A fraction (701.4 mg) containing was obtained. This fraction was further purified by column chromatography (MeOH: H ₂ O = 0: 100 → 5: 95 → 10: 90 → 15: 85 → 100: 0) packed with Chromatorex ODS, and compound 1 (13.0 mg ) Was obtained as a white powder.

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ａ）、２．５０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．３Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２、９．２Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、１４．０Ｈｚ、Ｈ−７’ａ）、３．２０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２２−３．３１（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２，９．２Ｈｚ、グルコースＨ−３）、３．６５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、Ｈ−３）、７．１７−７．２５（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、 ３’、４’、 ５’、 ６’）。 ¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.88 (1H, dd, J = 7.9, 15.9 Hz, H-6a), 2.50 (1H, dd, J = 7.9, 15. 3Hz, H-6b), 2.72 (1H, dd, J = 9.2, 9.2Hz, H-9), 3.09 (1H, dd, J = 7.3, 14.0Hz, H- 7'a), 3.20 (1H, m, H-5), 3.22-3.31 (4H, m, glucose H-2, 4, 5, H-7'b), 3.39 ( 1H, dd, J = 9.2, 9.2 Hz, glucose H-3), 3.65 (1H, dd, J = 5.5, 12.2 Hz, glucose H-6a), 3.85 (1H, dd, J = 1.8, 12.2 Hz, glucose H-6b), 4.16 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-10a), 4.29 (1H, d, J = 14. Hz, H-10b), 4.60 (1H, m, H-8 ′), 4.69 (1H, d, J = 7.3 Hz, glucose H-1), 5.10 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1), 5.69 (1H, s, H-7), 7.14 (1H, d, J = 1.2 Hz, H-3), 7.17-7.25 ( 5H, m, H-2 ′, 3 ′, 4 ′, 5 ′, 6 ′).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．２（Ｃ−５），３８．７（Ｃ−７’）、３９．２（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５６．７（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．８（グルコースＣ−３）、７８．３（グルコースＣ−５）、９７．８（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）１２７．４（Ｃ−４’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．２（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．８（Ｃ−１’） 、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．６（Ｃ−３）、１６８．９（Ｃ−１１）、１７７．０（Ｃ−９’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 36.2 (C-5), 38.7 (C-7 ′), 39.2 (C-6), 47.4 (C-9), 56. 7 (C-8 ′), 61.4 (C-10), 62.7 (glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 74.9 (glucose C-2), 77.8 (Glucose C-3), 78.3 (glucose C-5), 97.8 (C-1), 100.3 (glucose C-1), 115.8 (C-4) 127.4 (C- 4 '), 127.9 (C-7), 129.2 (C-3', -5 '), 130.7 (C-2', -6 '), 139.8 (C-1') 144.8 (C-8), 148.6 (C-3), 168.9 (C-11), 177.0 (C-9 ').

ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：５２２［Ｍ＋Ｈ］^＋。
［実施例２］ 乾燥杜仲葉水抽出物からの本発明の化合物の単離
乾燥杜仲葉水抽出物から式（ＩＶ）の化合物（化合物１）および式（Ｖ）の化合物（式（Ｉ）において、Ｒ^２がインドール−３−イルメチルであり、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４が、水素原子である。以下、化合物２と称する）を単離した。 Positive FAB-MS m / z: 522 [M + H] ⁺ .
[Example 2] Isolation of a compound of the present invention from a dried persimmon nakaba water extract A compound of formula (IV) (compound 1) and a compound of formula (V) (from formula (I) , R ² is indol-3-ylmethyl, and R ¹ , R ³ , R ⁴ , R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ , and R ¹⁴ are hydrogen atoms (hereinafter referred to as Compound 2). did.

実施例１と同様の手法により、乾燥杜仲葉（５７８ｇ）から、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０を３０％ＭｅＯＨ水溶液で溶出させて得られる画分（４ｇ）を得た。当該画分をＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製して得られる画分（実施例１と同じ条件）のうち、化合物１を含む画分（７０１ｍｇ）をさらにＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製し（実施例１と同じ条件）、化合物１（１２ｍｇ）および化合物２（４ｍｇ）を得た。   In the same manner as in Example 1, a fraction (4 g) obtained by eluting Diaion HP20 with a 30% aqueous MeOH solution was obtained from dried persimmon leaves (578 g). Of the fraction obtained by purifying the fraction with Chromatorex ODS (same conditions as in Example 1), the fraction containing Compound 1 (701 mg) was further purified with Chromatorex ODS (same conditions as in Example 1). Compound 1 (12 mg) and compound 2 (4 mg) were obtained.

さらに、最初のＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製して得られる画分のうち、アスペルロサイドとして得られた画分（２ｇ）以外の画分（１３４ｍｇ）をシリカゲルカラムで精製し（関東化学製のシリカゲル６０（球状）；ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１５：１：０→１０：２：０．１）、式（ＶＩ）の化合物（３ｍｇ）を得た。 Further, among the fractions obtained by purification with the first Chromatorex ODS, fractions (134 mg) other than the fraction (2 g) obtained as asperoside were purified with a silica gel column (silica gel 60 ( Spherical); CHCl ₃ : MeOH: H ₂ O = 15: 1: 0 → 10: 2: 0.1), a compound of the formula (VI) (3 mg) was obtained.

化合物２
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．６３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ａ）、２．２４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．３Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．６７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２、９．２Ｈｚ、Ｈ−９）、３．１３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．１８−３．２１（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、Ｈ−１０’ａ）、３．２６−３．２７（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−４、５）、３．３７（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．４３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．３、１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０’ｂ）、３．６３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、Ｈ−１１’）、４．６５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．０６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．５８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、６．９８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．９Ｈｚ、Ｈ−５’）、 ７．０６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．９Ｈｚ、Ｈ−６’）、 ７．０９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−２’）、 ７．１１（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、７．３０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、Ｈ−７’）、 ７．５７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、Ｈ−４’）。 Compound 2
¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.63 (1H, dd, J = 7.9, 15.9 Hz, H-6a), 2.24 (1H, dd, J = 7.9, 15. 3Hz, H-6b), 2.67 (1H, dd, J = 9.2, 9.2Hz, H-9), 3.13 (1H, m, H-5), 3.18-3.21 (2H, m, glucose H-2, H-10′a), 3.26-3.27 (2H, m, glucose H-4, 5), 3.37 (1H, m, glucose H-3) 3.43 (1H, dd, J = 4.3, 14.7 Hz, H-10′b), 3.63 (1H, dd, J = 5.5, 11.6 Hz, glucose H-6a), 3.84 (1H, dd, J = 1.8, 12.2 Hz, glucose H-6b), 4.12 (1H, d, J = 14.7 Hz, H-10a), 4.2 (1H, d, J = 14.7 Hz, H-10b), 4.61 (1H, d, J = 6.7 Hz, H-11 ′), 4.65 (1H, d, J = 7.9 Hz, Glucose H-1), 5.06 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1), 5.58 (1H, s, H-7), 6.98 (1H, dd, J = 7. 3, 7.9 Hz, H-5 ′), 7.06 (1H, dd, J = 7.3, 7.9 Hz, H-6 ′), 7.09 (1H, s, H-2 ′), 7.11 (1H, s, H-3), 7.30 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-7 ′), 7.57 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-4) ').

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）２８．３（Ｃ−１０’）、３６．０（Ｃ−５），３８．８（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５７．５（Ｃ−１１’） 、６１．３（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．７（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１１．８（Ｃ−３’）、１１２．２（Ｃ−７’）、１１５．５（Ｃ−４）、１１９．６（Ｃ−４’）、１１９．８（Ｃ−５’）、１２２．４（Ｃ−６’）、１２４．４（Ｃ−２’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．０（Ｃ−８’） 、１３８．１（Ｃ−９’）、１４４．７（Ｃ−８）、１５０．２（Ｃ−３）、１６９．９（Ｃ−１１）、１８０．０（Ｃ−１２’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 28.3 (C-10 ′), 36.0 (C-5), 38.8 (C-6), 47.4 (C-9), 57. 5 (C-11 ′), 61.3 (C-10), 62.7 (glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 74.9 (glucose C-2), 77.9 (Glucose C-3), 78.4 (glucose C-5), 97.7 (C-1), 100.3 (glucose C-1), 111.8 (C-3 '), 112.2 ( C-7 ′), 115.5 (C-4), 119.6 (C-4 ′), 119.8 (C-5 ′), 122.4 (C-6 ′), 124.4 (C -2 '), 127.9 (C-7), 129.0 (C-8'), 138.1 (C-9 '), 144.7 (C-8), 150.2 (C-3) ), 169.9 (C-11) 180.0 (C-12 ').

ネガティブ ＥＳＩ ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５９［Ｍ−Ｈ］^＋。
式（ＶＩ）の化合物
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）２．０７（３Ｈ、ｓ、Ａｃ）、３．１８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．２０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−４）、３．３７（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−４、５）、３．４２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、０．６Ｈｚ、グルコースＨ−２）、３．５７（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−５）、３．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．３、１２．０Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）４．６６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．３２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、Ｈ−３）、５．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．２、７．９Ｈｚ、Ｈ−６）、５．９０（１Ｈ、ｂｒ ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−７）。 Negative ESI LC-MS m / z: 559 [M−H] ⁺ .
Compound of formula (VI)
¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 2.07 (3H, s, Ac), 3.18 (1H, m, H-9), 3.20 (1H, m, H-4), 3. 37 (2H, m, glucose H-4, 5), 3.42 (1H, dd, J = 1.8, 0.6 Hz, glucose H-2), 3.57 (1H, m, glucose H-3) ), 3.64 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-5), 3.68 (1H, dd, J = 4.3, 12.0 Hz, glucose H-6a), 3.88 (1H) , D, J = 12.0 Hz, glucose H-6b) 4.66 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-10a), 4.79 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-10b) ), 4.93 (1H, d, J = 7.9 Hz, glucose H-1), 5.32 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-3), 5.5 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-1), 5.60 (1H, dd, J = 1.2, 7.9 Hz, H-6), 5.90 (1H, br d, J = 1.8 Hz, H-7).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）２０．０（ＯＣＯＣＨ_３）、３６．１（Ｃ−５），３８．９（Ｃ−４）、４６．２（Ｃ−９）、６１．８（Ｃ−１０）、６２．６（グルコースＣ−６）、７１．２（グルコースＣ−４）、７５．９（グルコースＣ−３）、７９．３（グルコースＣ−５）、８０．０（グルコースＣ−２）、８８．３（Ｃ−６）、９２．９（Ｃ−１）、９６．５（Ｃ−３）、９９．３（グルコースＣ−１）、１３０．０（Ｃ−７） 、１４４．７（Ｃ−８）、１７２．１（ＯＣＯＣＨ_３）、１８０．２（Ｃ−１１）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 20.0 (OCO C H ₃ ), 36.1 (C-5), 38.9 (C-4), 46.2 (C-9), 61. 8 (C-10), 62.6 (glucose C-6), 71.2 (glucose C-4), 75.9 (glucose C-3), 79.3 (glucose C-5), 80.0 (Glucose C-2), 88.3 (C-6), 92.9 (C-1), 96.5 (C-3), 99.3 (glucose C-1), 130.0 (C- 7), 144.7 (C-8), 172.1 (O C OCH ₃ ), 180.2 (C-11).

ネガティブ ＥＳＩ ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ：４１３［Ｍ−Ｈ］^＋。
［実施例３］ Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド（化合物１）の合成
（工程１）Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド
ゲニポシド酸（３０．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（２７．７ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）を加え、その後、トリエチルアミン（０．０３０ｍＬ，０．２１５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣ（４０．０ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２３．５ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１７時間攪拌した。その後、減圧濃縮後、ＣＨＣｌ_３（１．５ｍＬ）に溶解し、ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ（富士シリシア化学）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１４：２：０．１）で精製することにより、表題の化合物を白色粉末として得た（４２．０ｍｇ、収率９８％）。 Negative ESI LC-MS m / z: 413 [M−H] ⁺ .
Example 3 Synthesis of N-[(1S) -2-phenyl-1-carboxyethyl] -geniposidic acid amide (Compound 1) (Step 1) N-[(1S) -2-phenyl-1-methoxycarbonyl Ethyl] -geniposide amide Geniposide acid (30.0 mg, 0.080 mmol) was dissolved in DMF (2 mL) and L-phenylalanine methyl ester (27.7 mg, 0.128 mmol) was added, followed by triethylamine (0.030 mL). , 0.215 mmol), WSC (40.0 mg, 0.209 mmol) and HOBt (23.5 mg, 0.174 mmol) were added and stirred at room temperature for 17 hours. After concentration under reduced pressure, the product was dissolved in CHCl ₃ (1.5 mL) and purified by column chromatography (CHCl ₃ : MeOH: H ₂ O = 14: 2: 0.1) packed with silica gel (Fuji Silysia Chemical). This gave the title compound as a white powder (42.0 mg, 98% yield).

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．９１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．５６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．５、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．０１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１９−３．３９（６Ｈ、ｍ、Ｈ−５、グルコースＨ−２、３、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．７１（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ_３）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９、Ｈｚ、グルコースＨ−１）、４．７１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、９．２Ｈｚ、Ｈ−８’）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１０（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、７．２１-７．３０（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。 ¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.91 (1H, m, H-6a), 2.56 (1H, dd, J = 8.5, 15.9 Hz, H-6b), 2.71 (1H, m, H-9), 3.01 (1H, m, H-7'a), 3.19-3.39 (6H, m, H-5, glucose H-2, 3, 4, 5, H-7′b), 3.64 (1H, m, glucose H-6a), 3.71 (3H, s, OCH ₃ ), 3.85 (1H, dd, J = 1.8, 11 .6 Hz, glucose H-6b), 4.16 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-10a), 4.29 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-10b), 4.68 (1H, d, J = 7.9, Hz, glucose H-1), 4.71 (1H, dd, J = 5.5, 9.2 Hz, H-8 ′), 5.10 (1H, d , J = .3 Hz, H-1), 5.72 (1H, s, H-7), 7.10 (1H, s, H-3), 7.21-7.30 (5H, m, H-2 ′ 3 ′, 4 ′, 5 ′, 6 ′).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．１（Ｃ−５），３８．０（Ｃ−７’）、３９．０（Ｃ−６）、４７．３（Ｃ−９）、５２．７（ＯＣＨ_３）、５５．３（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．３（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）、１２７．９（Ｃ−４’、Ｃ−７）、１２９．５（Ｃ−３’、−５’）、１３０．２（Ｃ−２’、−６’）、１３８．４（Ｃ−１’）、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．７（Ｃ−３）、１７０．２（Ｃ−１１）、１７３．９（Ｃ−９’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 36.1 (C-5), 38.0 (C-7 ′), 39.0 (C-6), 47.3 (C-9), 52. 7 (OCH ₃ ), 55.3 (C-8 ′), 61.4 (C-10), 62.7 (glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 74.9 (glucose) C-2), 77.9 (glucose C-3), 78.4 (glucose C-5), 97.3 (C-1), 100.3 (glucose C-1), 115.8 (C- 4) 127.9 (C-4 ′, C-7), 129.5 (C-3 ′, −5 ′), 130.2 (C-2 ′, −6 ′), 138.4 (C -1 ′), 144.8 (C-8), 148.7 (C-3), 170.2 (C-11), 173.9 (C-9 ′).

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５８［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
（工程２）Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド
Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド（４２．０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を０．５Ｎ水酸化ナトリウムのメタノール溶液（１．０ｍＬ）に溶解し、室温で５時間攪拌した。その後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０（ファルマシア社製）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ）で精製することにより、表題の化合物を白色粉末として得た（１８．８ｍｇ、４６％）。 Positive ESI-MS m / z: 558 [M + Na] ⁺ .
(Step 2) N-[(1S) -2-phenyl-1-carboxyethyl] -geniposidic acid amide N-[(1S) -2-phenyl-1-methoxycarbonylethyl] -geniposidic acid amide (42.0 mg, 0.079 mmol) was dissolved in a methanol solution (1.0 mL) of 0.5N sodium hydroxide and stirred at room temperature for 5 hours. The title compound was then obtained as a white powder (18.8 mg, 46%) by purification by column chromatography (MeOH) packed with Sephadex LH20 (Pharmacia).

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８６（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．４８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１６．５Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．３Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、１３．４Ｈｚ、Ｈ−７’ａ）、３．２１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２８−３．３２（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３８（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、Ｈ−３）、７．１５-７．２５（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。 ¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.86 (1H, m, H-6a), 2.48 (1H, dd, J = 7.9, 16.5 Hz, H-6b), 2.70 (1H, dd, J = 7.3, 7.3 Hz, H-9), 3.08 (1H, dd, J = 7.3, 13.4 Hz, H-7′a), 3.21 (1H , M, H-5), 3.28-3.32 (4H, m, glucose H-2, 4, 5, H-7′b), 3.38 (1H, m, glucose H-3), 3.64 (1H, m, glucose H-6a), 3.85 (1H, dd, J = 1.8, 12.2 Hz, glucose H-6b), 4.15 (1H, d, J = 14. 0 Hz, H-10a), 4.28 (1H, d, J = 14.7 Hz, H-10b), 4.60 (1H, m, H-8 ′), 4.68 (1H, d, J = 2.4 7.9 Hz, glucose H-1), 5.10 (1H, d, J = 2.4, 7.3 Hz, H-1), 5.68 (1H, s, H-7), 7.13 ( 1H, d, J = 1.2 Hz, H-3), 7.15-7.25 (5H, m, H-2 ′, 3 ′, 4 ′, 5 ′, 6 ′).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．２（Ｃ−５），３８．７（Ｃ−７’）、３９．２（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５６．８（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７５．０（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．９（Ｃ−１）、１００．４（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）、１２７．５（Ｃ−４’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．３（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．３（Ｃ−１’） 、１４４．９（Ｃ−８）、１４８．８（Ｃ−３）、１６９．２（Ｃ−１１）、１７５．０（Ｃ−９’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 36.2 (C-5), 38.7 (C-7 ′), 39.2 (C-6), 47.4 (C-9), 56. 8 (C-8 ′), 61.4 (C-10), 62.7 (glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 75.0 (glucose C-2), 77.9 (Glucose C-3), 78.4 (glucose C-5), 97.9 (C-1), 100.4 (glucose C-1), 115.8 (C-4), 127.5 (C -4 '), 127.9 (C-7), 129.3 (C-3', -5 '), 130.7 (C-2', -6 '), 139.3 (C-1') ), 144.9 (C-8), 148.8 (C-3), 169.2 (C-11), 175.0 (C-9 ′).

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
［実施例４］ Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミドの合成
（工程１）Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド
出発物質としてゲニポシド酸（２８．９ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）およびＤ−フェニルアラニンメチルエステル（２８．０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１、工程１と同様の手法により、表題の化合物を白色の粉末として得た（３５．０ｍｇ、８５％）。 Positive ESI-MS m / z: 544 [M + Na] ⁺ .
Example 4 Synthesis of N-[(1R) -2-phenyl-1-carboxyethyl] -geniposide amide (Step 1) N-[(1R) -2-phenyl-1-methoxycarbonylethyl] -geniposide Acid amides Using geniposidic acid (28.9 mg, 0.077 mmol) and D-phenylalanine methyl ester (28.0 mg, 0.130 mmol) as starting materials, in a manner similar to Example 1, Step 1, The compound was obtained as a white powder (35.0 mg, 85%).

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８９（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．５９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．５、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．０４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１８−３．３８（６Ｈ、ｍ、Ｈ−５、グルコースＨ−２、３、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．７０（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ_３）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、７．９、ＨｚグルコースＨ−１）、４．７３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、９．２Ｈｚ、Ｈ−８’）、５．１２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１７-７．２７（６Ｈ、ｍ、Ｈ−３，Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。 ¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.89 (1H, m, H-6a), 2.59 (1H, dd, J = 8.5, 15.9 Hz, H-6b), 2.73 (1H, m, H-9), 3.04 (1H, m, H-7'a), 3.18-3.38 (6H, m, H-5, glucose H-2, 3, 4, 5, H-7′b), 3.64 (1H, m, glucose H-6a), 3.70 (3H, s, OCH ₃ ), 3.85 (1H, dd, J = 1.8, 11 .6 Hz, glucose H-6b), 4.16 (1H, d, J = 14.7 Hz, H-10a), 4.29 (1H, d, J = 15.3 Hz, H-10b), 4.68 (1H, dd, J = 2.4, 7.9, Hz glucose H-1), 4.73 (1H, dd, J = 5.5, 9.2 Hz, H-8 ′), 5.12 ( 1H, d, J = 2.4, 7.3 Hz, H-1), 5.72 (1H, s, H-7), 7.17-7.27 (6H, m, H-3, H-2 ' 3 ′, 4 ′, 5 ′, 6 ′).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．１（Ｃ−５），３８．２（Ｃ−７’）、３９．１（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５２．７（ＯＣＨ_３）、５６．１（Ｃ−８’） 、６１．３（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．７（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．９（Ｃ−４）、１２７．８（Ｃ−４’）、１２８．２（Ｃ−７）、１２９．５（Ｃ−３’、−５’）、１３０．２（Ｃ−２’、−６’）、１３８．４（Ｃ−１’）、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．３（Ｃ−３）、１６９．８（Ｃ−１１）、１７３．７（Ｃ−９’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 36.1 (C-5), 38.2 (C-7 ′), 39.1 (C-6), 47.4 (C-9), 52. _{7 (OCH 3), 56.1 (} C-8 '), 61.3 (C-10), 62.7 ( glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 74.9 (glucose C-2), 77.9 (glucose C-3), 78.4 (glucose C-5), 97.7 (C-1), 100.3 (glucose C-1), 115.9 (C- 4) 127.8 (C-4 ′), 128.2 (C-7), 129.5 (C-3 ′, −5 ′), 130.2 (C-2 ′, −6 ′), 138.4 (C-1 ′), 144.8 (C-8), 148.3 (C-3), 169.8 (C-11), and 173.7 (C-9 ′).

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５８［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
（工程２）Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド
出発物質としてＮ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド（３５．０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１、工程２と同様の手法により、表題の化合物を白色の粉末として得た（２５．０ｍｇ、収率７３％）。 Positive ESI-MS m / z: 558 [M + Na] ⁺ .
(Step 2) N-[(1R) -2-phenyl-1-carboxyethyl] -geniposidic acid amide N-[(1R) -2-phenyl-1-methoxycarbonylethyl] -geniposidic acid amide (35 The title compound was obtained as a white powder (25.0 mg, 73% yield) in the same manner as in Example 1, Step 2 using 0.0 mg, 0.065 mmol).

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．９４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、７．９Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ｂ）、３．２１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２６−３．３１（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３８（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６３（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．２、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．５５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．１、７．９、Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１２-７．２５（６Ｈ、ｍ、Ｈ−３、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。 ¹ H-NMR (CD ₃ OD, 500 MHz) 1.94 (1H, m, H-6a), 2.68 (1H, dd, J = 7.9, 7.9 Hz, H-9), 3.08 (1H, m, H-7′a), 3.11 (1H, m, H-6b), 3.21 (1H, m, H-5), 3.26-3.31 (4H, m, Glucose H-2, 4, 5, H-7′b), 3.38 (1H, m, glucose H-3), 3.63 (1H, m, glucose H-6a), 3.84 (1H, dd, J = 1.2, 11.6 Hz, glucose H-6b), 4.16 (1H, d, J = 14.7 Hz, H-10a), 4.28 (1H, d, J = 14.7 Hz) , H-10b), 4.55 (1H, m, H-8 ′), 4.68 (1H, d, J = 3.1, 7.9, Hz, glucose H-1), 5.10 ( 1H, d, = 2.4, 7.3 Hz, H-1), 5.72 (1H, s, H-7), 7.12-7.25 (6H, m, H-3, H-2 ', 3' 4 ′, 5 ′, 6 ′).

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．５（Ｃ−５），３９．０（Ｃ−７’）、３９．３（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５７．２（Ｃ−８’） 、６１．５（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７５．０（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９８．０（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１６．２（Ｃ−４）１２７．４（Ｃ−４’）、１２８．０（Ｃ−７）、１２９．２（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．５（Ｃ−１’）、１４５．０（Ｃ−８）、１４８．１（Ｃ−３）、１６９．２（Ｃ−１１）、１７８．５（Ｃ−９’）。 ¹³ C-NMR (CD ₃ OD, 125 MHz) 36.5 (C-5), 39.0 (C-7 ′), 39.3 (C-6), 47.4 (C-9), 57. 2 (C-8 ′), 61.5 (C-10), 62.7 (glucose C-6), 71.6 (glucose C-4), 75.0 (glucose C-2), 77.9 (Glucose C-3), 78.4 (glucose C-5), 98.0 (C-1), 100.3 (glucose C-1), 116.2 (C-4) 127.4 (C- 4 '), 128.0 (C-7), 129.2 (C-3', -5 '), 130.7 (C-2', -6 '), 139.5 (C-1') 145.0 (C-8), 148.1 (C-3), 169.2 (C-11), 178.5 (C-9 ').

ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
ＨＰＬＣによる化合物１の構造確認
実施例１、３および４で得られた化合物について、以下の条件によるＨＰＬＣ分析を行った。 Positive FAB-MS m / z: 544 [M + Na] ⁺ .
Confirmation of structure of compound 1 by HPLC The compounds obtained in Examples 1, 3 and 4 were subjected to HPLC analysis under the following conditions.

カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ
移動相 Ａ：メタノール
Ｂ：２０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ２．５）
グラジエント設定 Ａ：Ｂ＝１５：８５→５０：５０（０〜３０分）
→５０：５０（３０から３５分）
温度：３０℃
検出：ＳＰＤ−ＭＸＡ（２４０ｎｍ）
その結果、実施例１の化合物１の保持時間は２９．３分、実施例３のＳ体は２９．３分、実施例４のＲ体は２９．６分であった。実施例１の化合物１の保持時間は実施例３のＳ体のものとよく一致し、化合物１が実施例３のＳ体であることが確認された。 Column: Cosmosil 5C18-MS-II
Mobile phase A: Methanol
B: 20 mM phosphate buffer (pH 2.5)
Gradient setting A: B = 15: 85 → 50: 50 (0 to 30 minutes)
→ 50: 50 (30 to 35 minutes)
Temperature: 30 ° C
Detection: SPD-MXA (240 nm)
As a result, the retention time of the compound 1 of Example 1 was 29.3 minutes, the S form of Example 3 was 29.3 minutes, and the R form of Example 4 was 29.6 minutes. The retention time of the compound 1 of Example 1 was in good agreement with that of the S form of Example 3, and it was confirmed that the compound 1 was the S form of Example 3.

［実施例５］ ラット褐色脂肪細胞を用いた抗肥満作用試験
（１）褐色脂肪前駆細胞の培養
ラット褐色脂肪細胞培養キット（タカラバイオ、ＭＫ４２２）を使用して、褐色脂肪前駆細胞の培養を行った。前記脂肪細胞は、増殖・凍結保存後、３代目で分化誘導して試験に用いた。 [Example 5] Anti-obesity effect test using rat brown adipocytes (1) Culture of brown adipose precursor cells Brown adipose precursor cells were cultured using a rat brown adipocyte culture kit (Takara Bio, MK422). It was. The adipocytes were induced for differentiation at the third generation after growth and cryopreservation and used for the test.

増殖培地（ＤＭＥＭ ５００ｍＬ、アスコルビン酸 １ｍＬ、ビオチン １ｍＬ、パントテン酸 １ｍＬ、トリヨードチロニン ０．５ｍＬ、オクタン酸 １ｍＬ、牛胎児血清 ５０ｍＬ、抗生物質 １ｍＬ）、維持培地（増殖培地 １００ｍＬ、インシュリン １ｍＬ）、分化培地（増殖培地 １００ｍＬ、インシュリン １ｍＬ、デキサメタゾン ０．５ｍＬ、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）０．１ｍＬ）を調製した。   Growth medium (DMEM 500 mL, ascorbic acid 1 mL, biotin 1 mL, pantothenic acid 1 mL, triiodothyronine 0.5 mL, octanoic acid 1 mL, fetal calf serum 50 mL, antibiotics 1 mL), maintenance medium (growth medium 100 mL, insulin 1 mL), A differentiation medium (growth medium 100 mL, insulin 1 mL, dexamethasone 0.5 mL, 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) 0.1 mL) was prepared.

ラット褐色脂肪前駆細胞（凍結細胞、＞１．８×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｖｉａｌ）を融解した。細胞接種密度は２．５−５×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるように、融解サンプルを４５ｍＬの増殖培地に接種し、接種した増殖培地を７５ｃｍ^２デッシュに１０ｍＬずつ分注した。３７℃、５％インキュベーターで２４時間培養した後に、ＤＭＳＯおよび未接着の細胞を除くために増殖培地を交換し、４８時間培養した（７０％コンフルエンス状態となった）。培養細胞を、上記培養キットに付属の説明書に従い、凍結保存した。 Rat brown adipose precursor cells (frozen cells,> 1.8 × 10 ⁶ cells / vial) were thawed. The thawed sample was inoculated into 45 mL of growth medium so that the cell inoculation density was 2.5-5 × 10 ³ cells / cm ^2, and 10 mL of the inoculated growth medium was dispensed into 75 cm ² dishes. After culturing at 37 ° C. in a 5% incubator for 24 hours, the growth medium was changed to remove DMSO and non-adherent cells and cultured for 48 hours (becomes 70% confluent). The cultured cells were stored frozen according to the instructions attached to the culture kit.

（２）脂肪細胞における脂肪燃焼量の測定
凍結した培養細胞の融解サンプル（１０μＬ）を５００μＬの増殖培地（２４穴プレート）に播種し、２４時間培養した。その後、培地交換を行い、さらに４８時間培養した（９０％コンフルエンス）。さらに培地を分化培地に交換し４８時間培養し、その後維持培地に交換して２日間培養した。得られた培養液に化合物１（実施例３の方法により調製）を１００μｇ／ｍＬになるように添加し、３日間培養した。 (2) Measurement of fat burning amount in fat cells A frozen sample of cultured cells (10 μL) was seeded in a 500 μL growth medium (24-well plate) and cultured for 24 hours. Thereafter, the medium was changed and further cultured for 48 hours (90% confluence). Furthermore, the medium was changed to a differentiation medium and cultured for 48 hours, and then the maintenance medium was changed and cultured for 2 days. Compound 1 (prepared by the method of Example 3) was added to the obtained culture solution so as to be 100 μg / mL, and the mixture was cultured for 3 days.

各ウェルに培地の１／５量の１０％グルタルアルデヒドを添加し、３０分間静置した。その後、培地およびグルタルアルデヒド溶液を除去し、２００μＬの１０％グルタルアルデヒドを添加し、６０分間静置した。グルタルアルデヒドを除去後、水で２回洗浄し、２００μＬのＯｉｌ Ｏ Ｒｅｄ調整液を加え、６０分間静置し、各ウェルを水で３回洗浄した。各ウェルに２００μＬの２−プロパノールを添加し、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ色素を抽出し、抽出液をＯＤ５７０で測定した。   10% glutaraldehyde of 1/5 volume of the medium was added to each well and allowed to stand for 30 minutes. Thereafter, the medium and the glutaraldehyde solution were removed, 200 μL of 10% glutaraldehyde was added, and the mixture was allowed to stand for 60 minutes. After removing glutaraldehyde, the plate was washed twice with water, 200 μL of Oil OR Red adjustment solution was added, and allowed to stand for 60 minutes, and each well was washed with water three times. 200 μL of 2-propanol was added to each well to extract Oil O Red dye, and the extract was measured at OD570.

なお、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ調整液は、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ（０．０８ｇ）／２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液：水が３：２となるように混合し、１０分後に０．４５μｍフィルターにて濾過することにより調製した。   The Oil O Red adjusting solution is mixed so that Oil O Red (0.08 g) / 2-propanol (10 mL) solution: water is 3: 2, and filtered through a 0.45 μm filter after 10 minutes. It was prepared by.

試験結果のグラフを以下に示す。   A graph of the test results is shown below.

上記の結果は、化合物１が、脂肪細胞における脂肪の燃焼を促進する効果を有することを示すものであり、化合物１が抗肥満効果を有することが確認された。     The above results indicate that Compound 1 has an effect of promoting fat burning in fat cells, and it was confirmed that Compound 1 has an anti-obesity effect.

Claims (8)

式（Ｉ）：

［式中、Ｒ^１は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^２は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり、前記アルキルはアリールまたはヘテロシクリルにより置換されていてもよく、前記アリールおよびヘテロシクリルは、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_７−１４アラルキルオキシから選択される置換基により置換されていてもよく；
Ｒ^３は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり；
Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルから選択される］
の化合物、またはその塩。 Formula (I):

[Wherein, R ¹ is a hydrogen atom, C _1-6 alkyl or C _7-14 aralkyl;
R ² is a hydrogen atom or C _1-6 alkyl, and the alkyl may be substituted with aryl or heterocyclyl, and the aryl and heterocyclyl are hydroxy, C _1-6 alkylcarbonyloxy, C _1-6 alkoxy. Or optionally substituted with a substituent selected from C _7-14 aralkyloxy;
R ³ is a hydrogen atom or C _1-6 alkyl;
R ⁴ is a hydrogen atom, C _1-6 alkylcarbonyl or C _7-14 aralkyl;
R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ and R ¹⁴ are independently selected from a hydrogen atom, C _1-6 alkylcarbonyl or C _7-14 aralkyl.
Or a salt thereof. Ｒ^２が結合する炭素原子の立体化学がＳである、請求項１に記載の化合物、またはその塩。 The compound according to claim 1, wherein the stereochemistry of the carbon atom to which R ² is bonded is S, or a salt thereof. Ｒ^２がベンジルまたはインドール−３−イルメチルである、請求項１に記載の化合物、またはその塩。 The compound according to claim 1, wherein R ² is benzyl or indol-3-ylmethyl, or a salt thereof. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩を含む医薬組成物。   The pharmaceutical composition containing the compound or its salt of any one of Claims 1-3. 肥満、メタボリックシンドローム、２型糖尿病、高血圧および高脂質血症から選択される疾患の治療または予防に使用される、請求項４に記載の医薬組成物。   The pharmaceutical composition according to claim 4, which is used for the treatment or prevention of a disease selected from obesity, metabolic syndrome, type 2 diabetes, hypertension and hyperlipidemia. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を含む食品または飲料。   The foodstuff or drink containing the compound of any one of Claims 1-3. 機能性食品、健康食品、健康補助食品、栄養補助食品、保健機能食品、特定保健用食品または栄養機能食品である、請求項６に記載の食品または飲料。   The food or beverage according to claim 6, which is a functional food, a health food, a health supplement, a nutritional supplement, a health functional food, a food for specified health use, or a functional nutrition food. 式（ＩＩ）：

［式中、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、請求項１に定義したとおりである］
の化合物を、式（ＩＩＩ）：

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、請求項１に定義したとおりである］
を反応させる工程を含む、請求項１に記載の化合物の製造方法。 Formula (II):

[Wherein R ⁴ , R ¹¹ , R ¹² , R ¹³ and R ¹⁴ are as defined in claim 1]
A compound of formula (III):

[Wherein R ¹ , R ² and R ³ are as defined in claim 1]
The manufacturing method of the compound of Claim 1 including the process made to react.