JP2008104789A - Method and device for separation of platelet rich plasma - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、シリンジを用いた多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置に関する。 The present invention relates to a platelet-rich plasma separation method and platelet-rich plasma separator using a syringe.
多血小板血漿(以下、「PRP」と称されることがある。)とは、血小板を多く含む血漿である。血球成分を含む全血においては、赤血球が約95%、白血球が3%、血小板が約1%の割合で含まれる。これに対し、多血小板血漿においては、血小板が高い割合で含まれる。PRPにおける血小板の割合は特に定義がない。一般に、全血における血漿の割合が約55%であることを考慮すると、血球成分が除去された血漿に含まれる血小板の割合は約2%程度と考えられる。この約2%程度より明らかに高い割合の血小板が、PRPに含まれる。 Platelet-rich plasma (hereinafter sometimes referred to as “PRP”) is plasma that is rich in platelets. Whole blood containing blood cell components contains about 95% red blood cells, 3% white blood cells, and about 1% platelets. In contrast, platelet-rich plasma contains a high percentage of platelets. The ratio of platelets in PRP is not particularly defined. In general, considering that the proportion of plasma in whole blood is about 55%, the proportion of platelets contained in plasma from which blood cell components have been removed is considered to be about 2%. A proportion of platelets clearly higher than about 2% is contained in PRP.
PRPは、全血を遠心分離することにより得られる。詳細に説明すると、まず、全血を弱遠心して赤血球を分離して血漿を得る。この血漿には白血球及び血小板が含まれる。さらに、得られた血漿を強遠心する。これにより、血小板は遠心力が加わる方向(以下、本明細書において遠心分離方向とも称する。)に集中し、上清には血小板がほぼ含まれない。強遠心された血漿から上清を取り除き、或いは遠心分離方向(下側)の所定量のみを取り出して、PRPを得る(特許文献1参照)。 PRP is obtained by centrifuging whole blood. More specifically, first, whole blood is subjected to weak centrifugation to separate red blood cells to obtain plasma. This plasma contains white blood cells and platelets. Further, the obtained plasma is subjected to strong centrifugation. As a result, the platelets are concentrated in the direction in which the centrifugal force is applied (hereinafter also referred to as the centrifugal separation direction in the present specification), and the supernatant is substantially free of platelets. The supernatant is removed from the strongly centrifuged plasma, or only a predetermined amount in the direction of centrifugation (lower side) is taken out to obtain PRP (see Patent Document 1).
血小板のα顆粒中には、PDGF、TGF−β、ILGFなどの成長因子が存在することが知られている。これら成長因子が創傷治癒や組織再生に効果的な役割を果たすことが着目されている。例えば、歯周組織再生法などの再生医療において、PRPの利用が期待されている(特許文献2、特許文献3及び非特許文献1参照)。 It is known that growth factors such as PDGF, TGF-β, and ILGF are present in the α granules of platelets. It is noted that these growth factors play an effective role in wound healing and tissue regeneration. For example, PRP is expected to be used in regenerative medicine such as periodontal tissue regeneration (see Patent Document 2, Patent Document 3, and Non-Patent Document 1).
PRPを再生医療に用いる場合には、安全性の観点から、PRPを調整する器具はすべてγ線滅菌を施すことが要求される。しかしながら、例えば特許文献1に記載されている真空採血管のように、ゴム栓を使用した容器に対してγ線滅菌を施すと、ゴム栓が劣化するという問題がある。ゴム栓の劣化は、ゴム栓に含まれる添加物の滲出、破断片や砕片の発生を惹起し、これら添加物や破断片などが血液やPRPに混入するおそれがある。 When using PRP for regenerative medicine, from the viewpoint of safety, all devices for adjusting PRP are required to be subjected to γ-ray sterilization. However, there is a problem that, when γ-ray sterilization is performed on a container using a rubber stopper, such as a vacuum blood collection tube described in Patent Document 1, the rubber stopper deteriorates. The deterioration of the rubber plug causes the additive contained in the rubber plug to ooze out and the generation of broken fragments and fragments, which may be mixed into blood and PRP.
本発明は、これらの事情に問題に鑑みてなされたものであり、γ線滅菌が可能な少数の器具で実施できる多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of these problems, and an object of the present invention is to provide a platelet-rich plasma separation method and a platelet-rich plasma separation apparatus that can be carried out with a small number of instruments capable of γ-ray sterilization.
(1) 本発明に係る多血小板血漿分離方法は、排出口を有するシリンジ筒と、該シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、該ガスケットに設けられたプランジャと、を具備するシリンジを用いる。本多血小板血漿分離方法は、採血された血液が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第1ステップと、上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の血液を、赤血球を含む第1区分と血小板及び血漿を含む第2区分とに遠心分離する第2ステップと、上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、上記第1区分を上記排出口から排出する第3ステップと、上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、遠心分離された上記第2区分から多血小板血漿を上記排出口から排出する最終ステップと、を含む。 (1) A platelet-rich plasma separation method according to the present invention is provided with a syringe cylinder having a discharge port, a gasket that is liquid-tightly sealed to reciprocate the syringe cylinder, and the gasket. And a syringe having a plunger. The present platelet-rich plasma separation method includes a first step of sealing the discharge port of the syringe cylinder filled with collected blood, and blood in the syringe cylinder with the discharge port side of the syringe cylinder as a centrifugal movement direction. A second step of centrifuging the first section containing red blood cells and the second section containing platelets and plasma, and moving the gasket in the syringe cylinder to discharge the first section from the outlet. 3 steps, and a final step of moving the gasket in the syringe cylinder to discharge platelet-rich plasma from the centrifuged second section from the outlet.
シリンジは、採血に使用される。シリンジ筒の排出口には採血針が取り付け可能である。採血針を取り付けたシリンジを用いて、通常の方法で採血が行われる。この採血により、シリンジ筒は血液(全血)で満たされる。第1ステップでは、シリンジの排出口を封止してシリンジ筒を密封状態にする。つまり、採血を行った後、シリンジ筒から採血針を取り外す。そして、シリンジ筒の排出口をキャップで封止する。 The syringe is used for blood collection. A blood collection needle can be attached to the discharge port of the syringe cylinder. Blood is collected by a normal method using a syringe with a blood collection needle attached. By this blood collection, the syringe cylinder is filled with blood (whole blood). In the first step, the syringe outlet is sealed to seal the syringe cylinder. That is, after blood collection, the blood collection needle is removed from the syringe cylinder. And the discharge port of a syringe cylinder is sealed with a cap.
第2ステップでは、密封したシリンジを用いて遠心分離を行う。この遠心分離において、シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、通常は下側である。この遠心分離により、シリンジ筒に密封された血液は、第1区分と第2区分とに分離される。第1区分は、赤血球を含む画分である。第2区分は血小板及び血漿を含む画分である。第1区分は、遠心分離により遠心移動方向、つまり下側に分離される。この遠心分離は、強遠心としても弱遠心としてもよい。強遠心であれば、第2区分において、遠心移動方向に血小板が移動して、多血小板血漿が第1区分との境界付近に生成される。弱遠心であれば、第1区分を排出した後、第2区分に対して再び強遠心を行うことにより、多血小板血漿が生成される。 In the second step, centrifugation is performed using a sealed syringe. In this centrifugation, the discharge port side of the syringe cylinder is set as the centrifugal movement direction. Here, the “centrifugal movement direction” is a direction in which centrifugal force acts in the centrifugal separation, and is usually on the lower side. By this centrifugation, the blood sealed in the syringe cylinder is separated into the first section and the second section. The first section is a fraction containing red blood cells. The second segment is a fraction containing platelets and plasma. The first section is separated by the centrifugal separation in the centrifugal movement direction, that is, the lower side. This centrifugation may be strong centrifugation or weak centrifugation. In the case of strong centrifugation, platelets move in the direction of centrifugal movement in the second section, and platelet-rich plasma is generated near the boundary with the first section. In the case of weak centrifugation, platelet-rich plasma is generated by discharging the first section and then performing strong centrifugation again on the second section.
第3ステップでは、シリンジ筒から第1区分を排出する。遠心分離を行った後、シリンジ筒からキャップを外して排出口を開封する。その状態で、プランジャを操作してガスケットを排出口側へ移動させる。これにより、シリンジ筒の排出口から第1区分が排出される。シリンジ筒から第1区分を完全に排出した後、ガスケットの移動を中止する。 In the third step, the first section is discharged from the syringe cylinder. After centrifugation, the cap is removed from the syringe cylinder and the discharge port is opened. In this state, the plunger is operated to move the gasket to the discharge port side. Thereby, the first section is discharged from the discharge port of the syringe cylinder. After completely discharging the first section from the syringe cylinder, the movement of the gasket is stopped.
最終ステップでは、シリンジ筒から多血小板血漿を排出する。第2ステップにおける遠心分離が強遠心であれば、第1区分を完全に排出した後、続いてガスケットを移動させて第2区分に生成された多血小板血漿を排出口から排出する。第2ステップにおける遠心分離が弱遠心であれば、第1区分を排出した後、第2区分に対して強遠心を行った後、ガスケットを移動させて第2区分に生成された多血小板血漿を排出口から排出する。これにより、採血された血液から多血小板血漿が分離される。 In the final step, platelet-rich plasma is discharged from the syringe barrel. If the centrifugation in the second step is strong centrifugation, the first section is completely discharged, and then the gasket is moved to discharge the platelet-rich plasma generated in the second section from the outlet. If the centrifugation in the second step is a weak centrifugation, after discharging the first section, after performing strong centrifugation on the second section, the gasket is moved and the platelet-rich plasma generated in the second section is removed. Discharge from the outlet. Thereby, platelet-rich plasma is separated from the collected blood.
(2) 上記最終ステップとして、遠心分離された上記第2区分から上記排出口側の所定量を多血小板血漿として排出することとしてもよい。 (2) As the final step, a predetermined amount on the outlet side may be discharged as platelet-rich plasma from the centrifuged second section.
(3) 上記第2ステップにおける遠心分離が弱遠心であってもよい。その場合、上記第3ステップの後、さらに、上記第2区分が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第4ステップと、上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の第2区分に対して強遠心を行う第5ステップと、を含んでもよい。 (3) The centrifugation in the second step may be weak centrifugation. In that case, after the third step, further, a fourth step of sealing the discharge port of the syringe cylinder filled with the second section, and the syringe cylinder with the discharge port side as a centrifugal movement direction, the syringe And a fifth step of performing strong centrifugation on the second section in the cylinder.
第2ステップを弱遠心とすることにより、血液(全血)を第1区分及び第2区分に分離することができる。また、第1区分と第2区分との境界付近に血小板が集中することがなく、第1区分の排出に伴う血小板のロスを少なくすることができる。第5ステップを強遠心とすることにより、第2区分から高濃度の多血小板血漿を分離することができる。 By setting the second step to weak centrifugation, blood (whole blood) can be separated into the first section and the second section. In addition, platelets do not concentrate near the boundary between the first segment and the second segment, and the loss of platelets associated with the discharge of the first segment can be reduced. By setting the fifth step to strong centrifugation, it is possible to separate high-concentration platelet-rich plasma from the second section.
上記第2ステップにおける遠心分離が弱遠心であれば、得られた第2区分に対してさらに強遠心を行う。第4ステップでは、シリンジの排出口を封止してシリンジ筒を密封状態にする。シリンジ筒には第2区分のみが残っている。このシリンジ筒の排出口をキャップで封止する。第5ステップでは、密封したシリンジを用いて強遠心を行う。この遠心分離において、シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向とする。この遠心分離により、第2区分が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり下側に移動する。これにより、第2区分は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側(排出口側)が血小板が多い多血小板血漿となる。したがって、ガスケットの移動により排出口から多血小板血漿が排出される。 If the centrifugation in the second step is a weak centrifugation, strong centrifugation is further performed on the obtained second section. In the fourth step, the syringe outlet is sealed to seal the syringe cylinder. Only the second section remains in the syringe barrel. The discharge port of this syringe cylinder is sealed with a cap. In the fifth step, strong centrifugation is performed using a sealed syringe. In this centrifugation, the discharge port side of the syringe cylinder is set as the centrifugal movement direction. By this centrifugation, the second section is centrifuged, and the platelets move in the centrifugal movement direction, that is, downward. As a result, in the second section, the upper side becomes a supernatant containing substantially only the plasma component, and the lower side (exhaust port side) becomes platelet-rich plasma having a lot of platelets. Therefore, platelet-rich plasma is discharged from the discharge port by the movement of the gasket.
(4) 上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであってもよい。上記第2ステップ及び上記第5ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、上記第3ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させてもよい。 (4) The plunger may be provided detachably on the gasket. In the second step and the fifth step, the plunger may be removed from the gasket and centrifuged, and in the third step and the final step, the plunger may be attached to the gasket to move the gasket. .
第2ステップ及び第5ステップにおいて、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、第3ステップ及び最終ステップにおいて、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。 In the second step and the fifth step, since the plunger is not projected from the syringe cylinder by removing the plunger from the gasket, the syringe cylinder can be easily handled in the centrifugal separation. Moreover, the plunger is not operated carelessly. Further, since the weight of the plunger does not act on the gasket in the centrifugal separation, it is possible to reduce the possibility that the cap is detached from the syringe cylinder. On the other hand, in the third step and the final step, the gasket can be easily moved by attaching the plunger to the gasket.
(5) 上記第2ステップにおける遠心分離は強遠心であってもよい。これにより、1回の遠心分離によって血液から多血小板血漿を分離することができる。 (5) The centrifugation in the second step may be strong centrifugation. Thereby, platelet-rich plasma can be separated from blood by one centrifugation.
(6) 上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであってもよい。上記第2ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、上記第3ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させてもよい。 (6) The plunger may be provided detachably on the gasket. In the second step, the plunger may be removed from the gasket and centrifuged, and in the third step and the final step, the plunger may be attached to the gasket to move the gasket.
第2ステップにおいて、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、第3ステップ及び最終ステップにおいて、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。 In the second step, since the plunger is not projected from the syringe cylinder by removing the plunger from the gasket, the syringe cylinder can be easily handled in the centrifugation. Moreover, the plunger is not operated carelessly. Further, since the weight of the plunger does not act on the gasket in the centrifugal separation, it is possible to reduce the possibility that the cap is detached from the syringe cylinder. On the other hand, in the third step and the final step, the gasket can be easily moved by attaching the plunger to the gasket.
(7) 本発明は、上記多血小板血漿分離方法により得られた多血小板血漿として捉えることができる。 (7) The present invention can be understood as platelet-rich plasma obtained by the above platelet-rich plasma separation method.
(8) 本発明に係る多血小板血漿分離装置は、採血針が取付可能な排出口を有するシリンジ筒と、上記排出口に着脱可能なキャップと、上記シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、上記ガスケットに着脱可能に設けられたプランジャと、を具備する。 (8) A platelet-rich plasma separator according to the present invention is a syringe cylinder having a discharge port to which a blood collection needle can be attached, a cap removable from the discharge port, and the syringe cylinder in a liquid-tight manner. A gasket reciprocated in the cylinder; and a plunger detachably attached to the gasket.
シリンジ筒は、採血針が取り付けられて採血に使用される。採血によりシリンジ筒には血液(全血)が満たされる。シリンジ筒から採血針が取り外され、排出口がキャップされることにより、シリンジ筒内に血液が密封される。シリンジ筒は、この状態で遠心分離が行われる。遠心分離により、血液が赤血球を含む画分(第1区分)と、白血球、血小板及び血漿を含む画分(第2区分)とに分離される。シリンジ筒の排出口から第1区分が排出されると、シリンジ筒には第2区分が残る。先の遠心分離が強遠心であれば、第2区分には多血小板血漿が生成されている。先の遠心分離が弱遠心であれば、第2区分に対して強遠心が行われることにより、第2区分は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側(排出口側)が血小板が多い多血小板血漿となる。多血小板血漿は、シリンジ筒の排出口から排出される。 The syringe cylinder is used for blood collection with a blood collection needle attached thereto. By collecting blood, the syringe cylinder is filled with blood (whole blood). The blood collection needle is removed from the syringe cylinder, and the discharge port is capped, whereby the blood is sealed in the syringe cylinder. The syringe cylinder is centrifuged in this state. Centrifugation separates blood into a fraction containing red blood cells (first section) and a fraction containing white blood cells, platelets and plasma (second section). When the first section is discharged from the discharge port of the syringe cylinder, the second section remains in the syringe cylinder. If the previous centrifugation is strong centrifugation, platelet-rich plasma is generated in the second section. If the previous centrifugation is weak centrifugation, strong centrifugation is performed on the second section, so that the second section becomes the supernatant of almost only the plasma component, and the lower (exhaust side) is platelet. There are many platelet-rich plasma. Platelet rich plasma is discharged from the discharge port of the syringe barrel.
シリンジ筒を用いた遠心分離において、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、シリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、血球成分の排出及び多血小板血漿の排出において、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。 In the centrifugation using the syringe cylinder, the plunger is not protruded from the syringe cylinder by removing the plunger from the gasket, so that the syringe cylinder is easy to handle. Moreover, the plunger is not operated carelessly. Further, since the weight of the plunger does not act on the gasket in the centrifugal separation, it is possible to reduce the possibility that the cap is detached from the syringe cylinder. On the other hand, in the discharge of blood cell components and the discharge of platelet-rich plasma, the gasket can be easily moved by attaching the plunger to the gasket.
(9) 上記プランジャは、ねじ込み式により上記ガスケットに対して着脱可能なものであってもよい。これにより、ガスケットに着脱可能なプランジャが簡易に実現される。また、プランジャをガスケットへ着脱することを繰り返すことができる。 (9) The plunger may be detachable from the gasket by a screw-in type. Thereby, the plunger which can be attached or detached to a gasket is implement | achieved easily. Moreover, attaching and detaching the plunger to and from the gasket can be repeated.
(10) 上記シリンジ筒、上記キャップ、上記ガスケット及び上記プランジャが滅菌袋に密封されたものが考えられる。これらがキットとして1つの滅菌袋に密封されることにより、使い勝手が向上する。 (10) The syringe cylinder, the cap, the gasket, and the plunger may be sealed in a sterilization bag. These are sealed in one sterilization bag as a kit, so that the usability is improved.
本発明に係る多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置によれば、採血に使用したシリンジを用いて遠心分離を行って、多血小板血漿を得ることができる。これにより、γ線滅菌を施した少数の器具で多血小板血漿の分離を実現できる。また、シリンジを用いることにより、第1区分を排出することができる。 According to the platelet-rich plasma separation method and platelet-rich plasma separator according to the present invention, platelet-rich plasma can be obtained by performing centrifugation using a syringe used for blood collection. Thereby, separation of platelet-rich plasma can be realized with a small number of instruments subjected to γ-ray sterilization. Moreover, a 1st division can be discharged | emitted by using a syringe.
以下、本発明の好ましい実施形態を説明する。なお、本実施形態は本発明の一実施態様にすぎず、本発明の要旨を変更しない範囲で実施態様を変更できることは言うまでもない。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described. In addition, this embodiment is only one embodiment of this invention, and it cannot be overemphasized that an embodiment can be changed in the range which does not change the summary of this invention.
図1は、本発明の実施形態に係る多血小板血漿分離装置10の外観構成を示す分解斜視図である。図2は、多血小板血漿分離装置10の内部構成を示す縦断面図である。
FIG. 1 is an exploded perspective view showing an external configuration of a platelet-
図1及び図2に示されるように、多血小板血漿分離装置10は、採血針が取付可能な排出口11を有するシリンジ筒12と、排出口11に着脱可能なキャップ13と、シリンジ筒12内を往復動されるガスケット14と、ガスケット14に着脱可能に設けられたプランジャ15とを具備する。
As shown in FIGS. 1 and 2, the platelet-
シリンジ筒12は、ガスケット14及びプランジャ15とともにシリンジを構成する。シリンジ筒12は、ほぼ円筒形状であり、一方の端部が縮径されて針取付部20が形成されている。針取付部20の内部空間は、シリンジ筒12の内部空間と連続している。針取付部20により本発明に係る排出口11が形成されている。針取付部20には、採血針が取り付け可能である。シリンジ筒12の他方の端部は、縮径されることなく開口されている。この他方の端部からシリンジ筒12の内部空間へプランジャ15が進退される。シリンジ筒12の他方の端部には、シリンジ筒12の外周側へ突出する鍔21が形成されている。鍔21はハンドリングを向上させるためのものであり、シリンジ筒12及びプランジャ15の操作の際に鍔21に指が掛けられる。
The
シリンジ筒12の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置10がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、シリンジ筒12をポリプロピレンの成形品とすることが一般的である。シリンジ筒12の内部空間に満たされた血液や血漿などを目視確認するために、シリンジ筒12は、透明ないし半透明であることが好ましい。シリンジ筒12の容量は特に限定されない。シリンジ筒12に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
The material of the
キャップ13は、シリンジ筒12の排出口11を封止する。図1及び図2に示されるように、キャップ13は、大径部30及び小径部31を有する。小径部31は、大径部30の内側の空間に配置されている。小径部31は、シリンジ筒12の針取付部20に外嵌可能な管形状である。小径部31の内部には、シリンジ筒12の排出口11に嵌入可能な栓部32が配設されている。大径部30は、キャップ13をシリンジ筒12に着脱する際の持ち手として機能する。キャップ13がシリンジ筒12に取り付けられると、図2に示されるように、小径部31が針取付部20の外周面に密着し、栓部32が排出口11に嵌入して、排出口11が液密に封止される。
The
キャップ13の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置10がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、キャップ13としてポリプロピレンやエラストマーの成形品が採用されうる。
The material of the
ガスケット14は、シリンジ筒12の内部に挿入されてシリンジ筒12を液密に封止する。ガスケット14は、液密状態を維持したまま、シリンジ筒12内を往復動可能である。ガスケット14の往復動により、シリンジ筒12の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図1に示されるように、ガスケット14は、シリンジ筒12の内径に対応した径の円柱形状である。図2に示されるように、ガスケット14の一方の端面は円錐形状に突出されている。この端面の形状は、シリンジ筒12の奥部の形状に対応している。プランジャ15と接続されるガスケット14の他方の端面には、取付孔40が形成されている。取付孔40はガスケット14の円形の端面の中心に形成されている。取付孔40は円孔であり、その内周面に雌ネジ41が形成されている。
The
ガスケット14の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置10がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、ガスケット14としてエラストマーの成形品が採用されうる。
The material of the
プランジャ15は、ねじ込み式によりガスケット14に対して着脱可能なものである。プランジャ15の全体形状は、シリンジ筒12の内部空間に挿入可能な外形であって、シリンジ筒12の軸方向(図1の1点鎖線方向、図2における上下方向)の長さより十分に長い。したがって、ガスケット14をシリンジ筒12の奥部(排出口11側)に押し込んだ状態で、プランジャ15の一部がシリンジ筒12の反対側の端部から突出する。
The
プランジャ15は、雄ネジ部50と軸部51と端板52とを有する。雄ネジ部50は、ガスケット14の取付孔40にねじ込まれる。取付孔40の雌ネジ41と雄ネジ部50とは噛合する。これにより、プランジャ15がガスケット14に対してねじ込み式により着脱される。この着脱は繰り返し行うことができる。
The
軸部51は、横断面(軸方向と直交する方向)が十字形状である。軸部51の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部51の一方端に雄ネジ部50が配置され、他方端に端板52が配置されている。端板52は、円板形状の平板であり、軸部51の軸方向に垂直に接続されている。端板52はプランジャ15のハンドリングを向上させるためのものであり、プランジャ15がシリンジ筒12に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、プランジャ15がシリンジ筒12から引き出される際に持ち手となる。
The
プランジャ15の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置10がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、プランジャ15をポリプロピレンの成形品とすることが一般的である。
The material of the
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離装置10を構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくともシリンジ筒12、キャップ13、及びガスケット14は、γ線滅菌される。また、シリンジ筒12、キャップ13、ガスケット14及びプランジャ15を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離装置10の使い勝手が向上する。キットの構成品は、少なくともシリンジ筒12、キャップ13、ガスケット14及びプランジャ15を各1個含んでいればよいが、例えば、後述される多血小板血漿分離方法における2回の遠心分離において用いるキャップ13を別品とする場合には、1キットにキャップ13が2個含まれてもよい。また、本実施形態に係るシリンジ筒12、キャップ13、ガスケット14、及びプランジャ15の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
Considering that platelet-rich plasma suitable for regenerative medicine is obtained, among the members constituting the platelet-
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法が説明される。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、弱遠心と強遠心との2回の遠心分離を行う態様である。この多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離装置10を用いて行われ、6つの主要なステップからなる。第1ステップでは、採血された血液が満たされたシリンジ筒12の排出口11を封止する。第2ステップでは、シリンジ筒12の排出口11側を遠心移動方向として、シリンジ筒12内の血液を、赤血球を含む第1区分と、白血球、血小板及び血漿を含む第2区分とに遠心分離する。第3ステップでは、シリンジ筒12内のガスケット14を移動させて、第1区分を排出口11から排出する。第4ステップでは、第2区分が満たされたシリンジ筒12の排出口11を封止する。第5ステップでは、シリンジ筒12の排出口11側を遠心移動方向として、シリンジ筒12内の第2区分に対して遠心分離を行う。最終ステップでは、シリンジ筒12内のガスケット14を移動させて、遠心分離された第2区分から多血小板血漿を排出口11から排出する。これら各ステップが、図3から図5を用いて以下に詳細に説明される。図3から図5は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離装置10の状態を示す断面図である。
Hereinafter, the platelet-rich plasma separation method according to the present invention will be described. The platelet-rich plasma separation method according to the present embodiment is an aspect in which centrifugation is performed twice, ie, weak centrifugation and strong centrifugation. This platelet-rich plasma separation method is performed using the platelet-
第1ステップでは、図3(a)に示されるように、シリンジ筒12の排出口11をキャップ13で封止してシリンジ筒12を密封状態にする。シリンジ筒12、ガスケット14、及びプランジャ15からなるシリンジは、採血に使用される。採血する際には、シリンジ筒12の排出口11には採血針が取り付けられる。また、プランジャ15はガスケット14に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略される。この採血により、シリンジ筒12は血液60で満たされる。血液60は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、シリンジ筒12の排出口11から採血針を取り外して、キャップ13を用いて排出口11を封止する。これにより、図3(a)に示されるように、シリンジ筒12が密封状態となる。
In the first step, as shown in FIG. 3A, the
第2ステップでは、密封したシリンジを用いて1回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図3(b)に示されるように、プランジャ15をガスケット14から取り外す。これにより、シリンジ筒12からプランジャ15が突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒12の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、プランジャ15が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離においてプランジャ15の重量がガスケット14に作用しないので、シリンジ筒12からキャップ13が外れるおそれを軽減できる。
In the second step, the first centrifugation is performed using a sealed syringe. Prior to this centrifugation, the
この遠心分離において、シリンジ筒12の排出口11側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、通常は下側である。また、第2ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他(白血球、血小板、血漿)に分離する遠心分離」(非特許文献1参照)と定義される。具体的には、遠心分離条件が約500〜2500rpmの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離に用いられる遠心分離装置は一般的なものなので、詳細な説明は省略される。
In this centrifugation, the
この遠心分離により、シリンジ筒12に密封された血液60は、第1区分61と第2区分62とに分離される。第1区分61は、赤血球画分61である。第2区分62は、白血球、血小板及び血漿を含む画分である。図3(c)に示されるように、第1区分61は、遠心分離により遠心移動方向、つまりシリンジ筒12の下側に分離される。
By this centrifugation, the
第3ステップでは、シリンジ筒12から第1区分61を排出する。遠心分離を終了した後、図4(a)に示されるように、プランジャ15をガスケット14に取り付ける。これにより、ガスケット14が容易に移動できる。そして、図4(b)に示されるように、シリンジ筒12からキャップ13を外して排出口11を開封する。その状態で、プランジャ15を操作してガスケット14を排出口11側へ移動させる。これにより、シリンジ筒12の排出口11から第1区分61が排出される。シリンジ筒12から第1区分61を完全に排出した後、ガスケット14の移動を中止する。これにより、シリンジ筒12には第2区分62のみが残る。排出された第1区分61は廃棄するか、別目的に使用する。
In the third step, the
第2ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液60を第1区分61と第2区分62とに分離するとともに、第2区分62においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第1区分61との境界付近に血小板が集中することがなく、第1区分61の完全な排出のために、第2区分62をも若干排出することに伴う血小板のロスを少なくすることができる。
By making the centrifugal separation in the second step a weak centrifugation, the
第4ステップでは、シリンジ筒12の排出口11をキャップ13で封止してシリンジ筒12を密封状態にする。図4に示されるように、シリンジ筒12には第2区分62のみが残っている。このシリンジ筒12の排出口11をキャップ13で封止する。この際、キャップ13は、第1ステップで使用したものと同じものを使用してもよいが、キャップに付着した血液によるコンタミネーションを避けるためには、別品を使用することが好ましい。
In a 4th step, the
第5ステップでは、密封したシリンジ筒12を用いて2回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図5(a)に示されるように、プランジャ15をガスケット14から取り外す。これにより、シリンジ筒12からプランジャ15が突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒12の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、プランジャ15が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離においてプランジャ15の重量がガスケット14に作用しないので、シリンジ筒12からキャップ13が外れるおそれを軽減できる。
In the fifth step, the second centrifugation is performed using the sealed
この遠心分離において、シリンジ筒12の排出口11側を遠心移動方向とする。また、第5ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」(非特許文献1参照)と定義される。本発明では、第2区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約3000〜4000rpmの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図5(b)に示されるように、第2区分62が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまりシリンジ筒12の下側に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第2区分62から高濃度のPRP63を分離することができる。なお、図5(b)において、第2区分62中に示された横線の密度が高いほど、血小板濃度が高いことが示されている。実際には、遠心分離された第2区分62において、上側から下側へ向けて形成されるほぼ透明から濃い黄色へのグラデーションにより、血小板が下側に移動したことが目視により確認できる。
In this centrifugation, the
最終ステップでは、シリンジ筒12からPRPを排出する。遠心分離を終了した後、図5(c)に示されるように、プランジャ15をガスケット14に取り付ける。これにより、ガスケット14が容易に移動できる。そして、シリンジ筒12からキャップ13を外して排出口11を開封する。その状態で、プランジャ15を操作してガスケット14を排出口11側へ移動させる。2回目の遠心分離により第2区分62中の血小板が遠心移動して、第2区分62は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側(排出口11側)が血小板が多いPRP63となる。したがって、ガスケット14の移動により排出口11からPRP63が排出される。排出されたPRP63は、滅菌された容器70で受け取る。これにより、採血された血液60からPRP63が分離される。
In the final step, PRP is discharged from the
PRP63における血小板の濃度は必ずしも明確に定義されていないが、例えば、1mLにおける血小板数を血小板の濃度とした場合、採取された全血における血小板の濃度に対して3〜7倍に濃縮されたものがPRP63とされる。また、本発明に係る多血小板血漿分離方法においては、最終ステップにおいて遠心分離された第2区分62のうちの排出口11側の所定量をPRP63とすることが考えられる。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法によれば、例えば、約10mLの血液60から約1mLのPRP63を得ることができる。
The concentration of platelets in PRP63 is not always clearly defined. For example, when the platelet count in 1 mL is the platelet concentration, the platelet concentration is 3 to 7 times the platelet concentration in the collected whole blood. Is PRP63. In the platelet-rich plasma separation method according to the present invention, it is conceivable that the predetermined amount on the
なお、本実施形態では、第3ステップにおける第1区分61の排出、及び最終ステップにおけるPRP63の排出を、シリンジ筒12の排出口11から容器70などに直接排出することとしたが、これらの廃棄の容易や感染防止を考慮して、シリンジ筒12の排出口にチューブ及び三方活栓などを接続して、排出される第1区分61やPRP63を別のシリンジ内に吸引してもよい。
In the present embodiment, the discharge of the
また、本実施形態では、本発明に係る多血小板血漿分離方法として、弱遠心と強遠心との2回の遠心分離を行う態様が説明されているが、本発明に係る多血小板血漿分離方法は、必ずしも2回の遠心分離を必要とせず、1回の遠心分離のみで行うこともできる。具体的には、第1ステップを行った後、第2ステップにおいて、シリンジ筒12の排出口11側を遠心移動方向として、シリンジ筒12内の血液60を強遠心する。これにより、血液60は、赤血球を含む第1区分61と、バフィーコート及び血漿を含む第2区分62とに分離される。第2区分62においては、血小板は第1区分61の境界付近に濃縮される。したがって、第3ステップにおいて、シリンジ筒12内のガスケット14を移動させて、第1区分61を排出口11から排出する。続いて、前述された第4ステップ及び第5ステップは行わずに、最終ステップにおいて、シリンジ筒12内のガスケット14を移動させて、第2区分62からPRP63を排出口11から排出する。この場合、PRP63にはバフィーコートが含まれる。また、PRP63に若干の赤血球が含まれることがある。
Further, in the present embodiment, as the platelet-rich plasma separation method according to the present invention, a mode in which the centrifugal separation of the weak centrifugation and the strong centrifugation is performed twice is described, but the platelet-rich plasma separation method according to the present invention is However, it is not always necessary to perform the centrifugation twice, and it can be performed only by one centrifugation. Specifically, after performing the first step, in the second step, the
このように、本発明に係る多血小板血漿分離方法によれば、採血に使用したシリンジ筒12を用いて遠心分離を行い、血液60からPRP63を得ることができる。これにより、γ線滅菌が可能な少数の器具でPRP63の分離を実現できる。また、シリンジ筒12を用いることにより、第1区分61を排出することができる。
Thus, according to the platelet-rich plasma separation method according to the present invention, the
10・・・多血小板血漿分離装置
11・・・排出口
12・・・シリンジ筒
13・・・キャップ
14・・・ガスケット
15・・・プランジャ
DESCRIPTION OF
Claims (10)
採血された血液が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第1ステップと、
上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の血液を、赤血球を含む第1区分と血小板及び血漿を含む第2区分とに遠心分離する第2ステップと、
上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、上記第1区分を上記排出口から排出する第3ステップと、
上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、遠心分離された上記第2区分から多血小板血漿を上記排出口から排出する最終ステップと、を含む多血小板血漿分離方法。 Platelet-rich plasma separation using a syringe comprising a syringe cylinder having an outlet, a gasket that is liquid-tightly sealed and reciprocated within the syringe cylinder, and a plunger provided in the gasket A method,
A first step of sealing the discharge port of the syringe cylinder filled with the collected blood;
A second step of centrifuging blood in the syringe cylinder into a first section containing red blood cells and a second section containing platelets and plasma, with the discharge port side of the syringe cylinder as a centrifugal movement direction;
A third step of moving the gasket in the syringe cylinder and discharging the first section from the outlet;
A final step of moving the gasket in the syringe cylinder and discharging platelet-rich plasma from the centrifuged second section through the outlet.
上記第3ステップの後、さらに、
上記第2区分が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第4ステップと、
上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の第2区分に対して強遠心を行う第5ステップと、を含む請求項1又は2に記載の多血小板血漿分離方法。 The centrifugation in the second step is weak centrifugation,
After the third step,
A fourth step of sealing the discharge port of the syringe cylinder in which the second section is satisfied;
The platelet-rich plasma separation method according to claim 1, further comprising: a fifth step of performing strong centrifugation on the second section in the syringe cylinder with the discharge port side of the syringe cylinder as a centrifugal movement direction.
上記第2ステップ及び上記第5ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、
上記第3ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させる請求項3に記載の多血小板血漿分離方法。 The plunger is provided detachably on the gasket,
In the second step and the fifth step, the plunger is removed from the gasket and centrifuged.
The platelet-rich plasma separation method according to claim 3, wherein, in the third step and the final step, the plunger is attached to the gasket and the gasket is moved.
上記第2ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、
上記第3ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させる請求項5に記載の多血小板血漿分離方法。 The plunger is provided detachably on the gasket,
In the second step, the plunger is removed from the gasket and centrifuged,
The platelet-rich plasma separation method according to claim 5, wherein, in the third step and the final step, the plunger is attached to the gasket and the gasket is moved.
上記排出口に着脱可能なキャップと、
上記シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、
上記ガスケットに着脱可能に設けられたプランジャと、を具備する多血小板血漿分離装置。 A syringe cylinder having a discharge port to which a blood collection needle can be attached;
A cap removable from the outlet,
A gasket that seals the syringe cylinder in a liquid-tight manner and reciprocates in the syringe cylinder;
A platelet-rich plasma separator comprising a plunger detachably provided on the gasket.
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