JP2008058033A - カルシウム濃度測定試薬および測定方法 - Google Patents
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Abstract
血清、血漿、尿等の体液検体中のカルシウム濃度をクロロホスホナゾ−IIIを用いて測定する際に、濁りに基づく正誤差を受けずに正確に測定できるカルシウム濃度測定試薬および測定方法を提供する。
【解決手段】
本発明のカルシウム濃度測定試薬は、クロロホスホナゾ−IIIと、アニオン型界面活性剤およびアミン類からなる群から選ばれた少なくとも1種とを含有する。
【選択図】なし
Description
クロロホスホナゾ−III(CPZ-III)とタンパク質との反応
CPZ-III添加または無添加の試薬と、下記試料との反応後のスペクトラムを比較した。
試料:
(1)Blank;精製水
(2)Ca10mg/dL;塩化カルシウム1水和物(関東化学(株)製)をカルシウム濃度として10mg/dLとなるように精製水に溶解した。
(3)γグロブリン5g/dL;ヒトγグロブリン精製品(SIGMA社製)を5g/dLとなるように精製水に溶解した。
(4)透析ヒト血清;血清を少なくとも血清の1000倍量以上の容量の生理食塩水を用いて一晩透析した。
試薬1:
50mmol/L コハク酸緩衝液pH5.0
※本緩衝液に0.3質量%となるようにスペルミジンまたはテトラデセンスルホン酸ナトリウムを添加して、各試薬を調製した。
2.25mmol/Lクロロホスホナゾ−III((株)同仁化学研究所製)水溶液
※CPZ−IIIを添加しない検討では、精製水を使用した。
1.60mLの試薬1に0.025mLの試料を添加し、撹拌して5分間放置した。次に0.40mLの試薬2を添加し、撹拌して5分間放置した(反応は室温で実施した)。試薬1および試薬2を混合した反応溶液のpHは5.0であり、反応溶液中のCPZ−IIIの濃度は約0.45mmol/Lであった。
U−3310((株)日立ハイテクノロジーズ製)を用い、以下の条件で反応溶液のスペクトラムを測定した。CPZ−IIIを添加した試薬による反応後のスペクトラムを図1に示し、CPZ−III無添加の試薬による反応後のスペクトラムを図2に示す。
試料中のカルシウム濃度測定値(1)
以下に示す測定条件で、試料A、BおよびCを測定した。
試料A:Ca水溶液
試料B:ヒト血清凍結乾燥品を通常の使用量の1/2容の精製水で溶解した試料
試料C:ウシ血清アルブミン10 g/dL水溶液
各試料のカルシウム濃度は、シカオートCa(OCPC法、関東化学(株)製)による測定値を基準に評価した。
試料中のカルシウム濃度測定値(2)
以下に示す測定条件で、試料DおよびEを測定した。
試料D:ヒト血清アルブミン(HSA)10g/dL水溶液
試料E:ヒト血清を生理食塩水で透析した試料
なお、試料Dは精製水で2倍または4倍に希釈し、試料1/2Dまたは1/4Dとしても測定した。
各試料に含まれるカルシウム量は、既存試薬であるシカオートCaにより測定、算出し、各試薬における測定値から減じた。
g/dLの試料である。添加剤無添加の試料では、総タンパク値10 g/dLのHSAよりも透析血清により受ける測定誤差が大きく、HSA以外のタンパク質によっても大きく影響を受けていることがわかる。HSAを試料とした場合、モノアミン類を添加する方法によってもある程度影響は回避できるものの、アニオン型界面活性剤またはポリアミン類と比較すると、効果の度合いは低いものであった。ただし、透析血清の測定誤差は小さくなっており、誤差の程度は試料中に含まれるHSAの影響程度であることから、HSA以外の血中タンパク質の影響は解消できていると考えられる。モノアミン類は、アニオン型界面活性剤やポリアミン類と併用することにより、HSA以外のタンパクに対する効果を増強させることができる。
Claims (10)
- クロロホスホナゾ−IIIと、アニオン型界面活性剤およびアミン類からなる群から選ばれた少なくとも1種とを含有する、カルシウム濃度測定試薬。
- アニオン型界面活性剤およびアミン類からなる群から選ばれた少なくとも1種を含有する第1の試薬と、クロロホスホナゾ−IIIを含有する第2の試薬とから構成される、請求項1に記載の試薬。
- クロロホスホナゾ−IIIと試料中のカルシウムが反応する反応溶液のpHが4.0〜7.0である、請求項1または2に記載の試薬。
- クロロホスホナゾ−IIIと試料中のカルシウムが反応することによる吸光度の上昇変化をカルシウム濃度として測定する、請求項1〜3のいずれかに記載の試薬。
- アニオン型界面活性剤が、N−アシルアミノ酸塩、アルキルエーテルカルボン酸塩、N−アシルタウリン塩、スルホン酸塩、アルキル硫酸塩およびポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩からなる群から選ばれた少なくとも1種である、請求項1〜4のいずれかに記載の試薬。
- アミン類がポリアミン類である、請求項1〜5のいずれかに記載の試薬。
- ポリアミン類が、プトレッシン、カダベリン、スペルミジン、スペルミン、1,3−ジアミノプロパン、ホモスペルミジン、3−アミノプロピルカタベリン、ノルスペルミン、テルモスペルミン、カルドペンタミン、およびそれらの塩からなる群から選ばれた少なくとも1種である、請求項6に記載の試薬。
- クロロホスホナゾ−IIIを用いる試料中のカルシウム濃度を測定する方法であって、クロロホスホナゾ−IIIとカルシウムを反応させる反応溶液中にアニオン型界面活性剤およびアミン類からなる群から選ばれた少なくとも1種を共存させる、前記方法。
- クロロホスホナゾ−IIIと試料中のカルシウムが反応する反応溶液のpHが4.0〜7.0である、請求項8に記載の方法。
- クロロホスホナゾ−IIIと試料中のカルシウムが反応することによる吸光度の上昇変化をカルシウム濃度として測定する、請求項8または9に記載の方法。
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