JP2007538235A - フロンタルアフィニティクロマトグラフィー/maldiタンデム質量分析 - Google Patents
フロンタルアフィニティクロマトグラフィー/maldiタンデム質量分析 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007538235A JP2007538235A JP2007516919A JP2007516919A JP2007538235A JP 2007538235 A JP2007538235 A JP 2007538235A JP 2007516919 A JP2007516919 A JP 2007516919A JP 2007516919 A JP2007516919 A JP 2007516919A JP 2007538235 A JP2007538235 A JP 2007538235A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- maldi
- column
- fac
- deposition
- deposited
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
- H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
- H01J49/02—Details
- H01J49/10—Ion sources; Ion guns
- H01J49/16—Ion sources; Ion guns using surface ionisation, e.g. field-, thermionic- or photo-emission
- H01J49/161—Ion sources; Ion guns using surface ionisation, e.g. field-, thermionic- or photo-emission using photoionisation, e.g. by laser
- H01J49/164—Laser desorption/ionisation, e.g. matrix-assisted laser desorption/ionisation [MALDI]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
- G01N30/728—Intermediate storage of effluent, including condensation on surface
- G01N30/7286—Intermediate storage of effluent, including condensation on surface the store moving as a whole, e.g. moving wire
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Description
本発明は、クロマトグラフィー分析からの化合物を、特に、質量分析を使用して分析する方法に関する。
バイオアフィニティクロマトグラフィーは、サンプルの精製および浄化1、キラル分離2、タンパク質のオンラインタンパク質分解消化3、支持された生体触媒の開発4、およびより最近は、フロンタルアフィニティクロマトグラフィー(FAC)方法を介する化合物ライブラリーのスクリーニング5、6のために、広範に使用されている。FACの基本的な前提は、化合物の連続的な注入が、遊離状態と結合状態との間でのリガンドの平衡を可能にし、ここで、遊離リガンドの正確な濃度が既知であることである。この場合、この化合物の漏出時間は、固定された生体分子に対するリガンドの親和性に対応する。より高い親和性を有するリガンドは、より遅く漏出する。
バイオアフィニティカラムから溶出する化合物を検出する、現在使用される方法に付随する、上に列挙された問題を克服するために、質量分析工程をオフラインで実施することにより、クロマトグラフィーと質量分析とを切り離すことが、有利である。このことは、フロンタルアフィニティクロマトグラフィー(FAC)を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)MSと組み合わせることによって、最も効率的に達成される。その一般的なアプローチは、MALDI標的にFAC溶出物を沈着させ、その後、MALDI/MS分析を行うことである。ESIと比較して、MALDI分析は、緩衝液に対するより高い許容性、1つの分析物あたりのより低いサンプル消費、および減少した分析時間という利点を有する。SM工程とMS工程との分離はまた、各分析物についてのMS検出パラメータの、独立した最適化を可能にする。
(a)FACカラムからの溶出物をマトリックスと混合する工程;
(b)(a)における混合物を表面に沈着させる工程;および
(c)MALDI質量分析を使用して、沈着された混合物を分析する工程。
FAC/MS研究のための新たなプラットフォームとしての、MALDI/MSとバイオアフィニティカラムとの連動が、本明細書中に記載される。捕捉されたジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)を収容する毛管カラムを、低分子混合物のフロンタルアフィニティクロマトグラフィーのために使用した。このカラムからの出力が、メタノール中にマトリックス分子であるα−シアノ−ヒドロキシコハク酸(CHCA)を含有する第二のストリームと混合され、そして噴霧器により補助されるエレクトロスプレー法を使用して、従来のMALDIプレート上に沈着され、このプレートは、コンピュータ制御されるx−yステージを介してカラムに対して移動し、FAC実行の半永久的な記録を作成した。MALDI MS/MSの使用は、FAC法とMA方途の切り離しを可能にし、かなり高いイオン強度の緩衝液が、FAC研究のために使用されることを可能にし、これによって、イオン性化合物の非特異的な結合が減少し、そして複数の実行にわたって、タンパク質活性のより良好な保持が可能になった。沈着後、MALDI分析は、クロマトグラフィーの実行時間の一部のみを必要とし、そして沈着したトラックは、複数回にわたって再実行され得、イオン化パラメータを最適化し、そして信号対雑音を改善するために、信号の平均化を可能にした。さらに、高レベルの潜在的なインヒビターが、制限されたイオン抑制効果で、MALDIを介して検出され得た。同じイオン強度条件が使用された場合、MALDIベースの分析とESIベースの分析との両方が、化合物混合物中に存在するインヒビターの、類似の保持を示した。これらの結果は、FAC/MALDI−MSが、化合物混合物のハイスループットのスクリーニングについて、FAC/ESI−MSより優れた利点を提供することを示す。
(a)FACカラムからの溶出物をマトリックスと混合する工程;
(b)(a)における混合物を表面に沈着させる工程;および
(c)この沈着した混合物を、MALDI質量分析を使用して分析する工程。
テトラエチルオルトシリケート(TEOS、99.999%)および3−アミノプロピルトリエトキシシラン(APTES)をAldrich(Oakville,ON)から入手した。ジグリセリルシラン前駆体を、TEOSから、他の箇所26に記載されるように調製した。トリメトプリム、ピリメタミン、葉酸、ポリ(エチレングリコール)(PEG/PEO,MW10kDa)およびフルオレセインを、Sigma(Oakville,ON)から入手した。MALDIマトリックス溶液(メタノール中6.2mg/mLのα−シアノ−ヒドロキシコハク酸、CHCA)を、Agilent(部品番号G2037A)から入手した。組換えジヒドロ葉酸還元酵素(E.coli由来)(これを、メトトレキサートカラムでアフィニティ精製した)を、Eric Brown教授(McMaster University)から入手した27。融解シリカ毛管チュービング(内径250μm、外径360μm、ポリイミドコーティング)を、Polymicro Technologies(Phoenix,AZ)から入手した。全ての水を、Milli−Q合成A10水精製システムを使用して、蒸留および脱イオンした。他の全ての試薬は、分析等級のものであり、そして入手した状態のままで使用した。
(FAC/MSシステム)
FAC/ESI−MS研究のために使用したシステムを、図3に示す。シリンジポンプ(Harvard Instruments Model 22)を使用して、溶液を送達し、そして流れ切り換え弁を使用して、アッセイ緩衝液と、化合物混合物を含有する溶液との間を切り替えた。次いで、この溶液を、カラムに通してポンプ送達し、平衡に達せさせた。溶出物を、適切な有機改変剤と混合して、三重四重極MSシステム(PE−Sciex API 3000TM)を使用する、安定なエレクトロスプレーの発生およびスプレーされる成分の検出可能性を補助した。Rheodyne 8125インジェクタ弁を使用して、操作の間、緩衝液ストリームから、緩衝液+分析物のストリームに切り替えた。カラムを、ルアー毛管アダプタ(ルアーアダプタ、Upchurch製のFerrule and Green Microtight Sleeve(P−659,M−100,F−185X))を使用して、FACシステムと連動させた。構成要素間の他の全ての接続を、融解シリカチュービングを使用して達成した。
(カラムの準備)
捕捉されたDHFRを収容するマクロ細孔シリカカラムを、他の箇所9に詳細に記載されるように、準備した。簡単に言えば、内径250μmの毛管を、最初に、APTESの層でコーティングし、モノリシックなシリカカラムの静電的結合を容易にした。シリカゾルを、最初に、1gのDGS(微細に粉砕した固体)と990μLのH2Oと混合して、1分間〜25分間の超音波処理後に約1.5mLの加水分解したDGAを得ることによって、調製した。pH7.5の50mM HEPESの第二の水溶液(16%(w/v)のPEO(MW=10kDa)および0.6%(v/v)のAPTESを含有する)を調製した。この水溶液はまた、約20μMのDHFRを含有した。100μLの緩衝液/PEG/APTES/DHFR溶液を、100μLの加水分解したDGSと混合し、そしてこの混合物を、シリンジポンプを介して、融解シリカ毛管(約2m長)に即座に装填した。この溶液の最終濃度は、25mM HEPES緩衝液中、8% w/v PEO(10kDa)、0.3% v/v APTESおよび10μM DHFRであった。この混合物は、シリカの重合(約10分間)の約2分〜3分の前の、1秒間〜3秒間にわたるスピノダール分解(相分離)に起因して曇り、捕捉されたタンパク質を収容する水和マクロ細孔モノリシックカラムが得られる。ゾル−ゲル混合物の装填後、これらのモノリシックカラムを、4℃で2日間〜5日間熟成させ、次いで、使用前に5cmの長さに切断した。これらのカラムは、5cmの中に、25pmolの活性DHFRを最初に装填され、このうちの約6pmolが活性であり、そしてこのカラムの中でアクセス可能であった9。
代表的なFAC/MS実験は、50nMの各化合物を含有し、空隙マーカーとしてのN−アセチルグルコサミンおよび/またはフルオレセイン、葉酸(マイクロモル濃度の基質)ならびにピリメタミンおよびトリメトプリム(nMのインヒビター)を含有する、化合物の混合物の注入を包含した。最初の実行の前に、カラムを、50mMのNH4OAc緩衝液(pH6.6、100mM NaCl)で、30分間、5μL/分の流量でフラッシュし、あらゆるグリセロールおよび捕捉されていないタンパク質を除去し、次いで、0〜100mM HH4OAcで、30分間、5μL/分で平衡化した。試験した全ての化合物は、0〜100mM NH4OAc中に存在し、そしてシリンジポンプを使用して、5μL/分の速度で送達された。形成流れ(安定なエレクトロスプレーイオン化の発生を補助するために使用した)は、10%(v/v)のNH4OH緩衝液(2mM)からなり、5μL/分で送達され、ESI質量分析形に入る、10μL/分の総流量を得た。MALDIについては、この形成流れを、5μL/分のマトリックスの流れ(CHCA、メタノール中6.2mg/mL)で置き換えた。ESI質量分析計を、MRMモードで作動させ、m/z 222→m/z 204(N−アセチルグルコサミンCE15eV);m/z 249→m/z 233(ピリメタミンCE42eV);m/z 291→m/z 230(トリメトプリムCE35eV);m/z 333→m/z 202(フルオレセインCE15eV)およびm/z 442→m/z 295(葉酸)を、同時に検出した。MALDI MS/MS分析をまた、MRM走査モードを使用して実施したが、MALDI脱離プロセスの間の断片化に起因して、N−アセチルグルコサミンおよび葉酸についての遷移は、それぞれ、m/z 204→m/z 138(CE18eV)およびm/z 295→m/z 276(CE30eV)に変化した。
DHFRを、2mMまたは100mMの酢酸アンモニウム(これは、3μMのHEPESおよび2μMのNaClを含有した)中に、40nMに希釈し、そして24時間までの種々の時間にわたって、インキュベートした。特定の間隔で、100μLのアリコートを、50mM Tris・HCl(pH=7.5)、2mM DTT、100μM NADPHおよび100μM DHFを含有する100μLの溶液と混合した。DHFR活性を、Tecan Safireマイクロプレートリーダーを使用して、340nmの吸光度の減少をモニタリングすることにより、測定した。活性データを、2mMのDTTを含有する50mM Tris・HcL(pH7.5)中に希釈したDHFRサンプルから得られた活性に対して報告する。
(実施例1:FAC/ESI−MS/MS)
図5は、DHFRインヒビターとコントロール化合物との混合物の、タンパク質を含まない(パネルA)か、または25pmolの活性DHFRの初期装填を含む(パネルB)、DGS/PEO/APESカラムを通しての溶出から得られた、FAC/ESI−MS/MSトレースを示す。ブランクカラムは、最初の数分間(1分と4分との間)における全ての化合物の、予測されたバックグラウンドを示すが、ピリメタミンとトリメトプリムとの両方は、陽イオン性であるが、陰イオン性の化合物であるフルオレセインおよび葉酸よりわずかに長く保持された。保持(これは、2mMの酢酸アンモニウム緩衝液を使用する場合に存在する)は、陽イオン性化合物と陰イオン性のシリカカラムとの間の、非選択的な相互作用を示し、このことは、順相シリカクロマトグラフィーが、低いイオン強度において、完全には抑制されないことを示す。パネルBは、2つのDHFRインヒビター(トリメトプリム(Kd=4nM、溶出時間22分)およびピリメタミン(Kd=45nM、保持時間28.5分))のかなり長い保持、弱い基質のより短い保持(葉酸、Kd=11μM、保持時間=3分)、およびDHFR装填されたカラム上の非選択的リガンド(フルオレセイン、N−アセチル−グルコンアミド、保持時間=1.5分)の保持がないことを示す。この結果は、DHFRが、カラム内に捕捉される場合に活性であることを示し、このことは、DGS由来の材料を捕捉する場合のDHFRの良好な活性を示す最近の結果9、28と一致する。ESI/MS/MS由来のクロマトグラムの興味深い局面は、ピリメタミンの溶出の際の、トリメトプリムについてのイオン電流の大きい減少である。このような効果は、以前には、「ロールアップ」現象と関連付けられていた。この現象において、より強く結合する化合物は、より弱い結合因子の効力をなくし、より弱く結合するリガンドの一時的な過剰濃縮を引き起こす5。しかし、本発明の場合、イオン電流の損失は、ロールアップ効果に起因するのではなく、むしろ、トリメトプリムのイオン電流の抑制(これは、この研究において使用されるインヒビター濃度(50nM)において、優勢である)に起因する。これらの化合物を低レベル(20nM)で使用する、以前のFAC−ESI/MS/MS研究は、このような効果を示さなかった9。イオン抑制効果は、以下に提供されるFAC−MALDI/MS/MSデータによって、さらに確認される。
(a)MALDI MRM遷移の最適化:
MALDIによるオフラインMS分析の有用な特徴は、サンプルトラックを複数回再実行し、異なるMSデータを獲得することを可能にする能力である。これにより、MRMパラメータの最適化が可能になる。図6は、4つの標的分析物(葉酸、ピリメタミン、トリメトプリムおよびフルオレセイン)の混合物の、適切なバックグラウンドを減算してCHCAバックグラウンド信号を減少させた後の、MALDI Q1スペクトルを示す。ピークは、これらの4つの化合物の各々について明らかである。しかし、葉酸についての主要なピークは、m/z 442ではなくm/z 295で起こる。このことは、断片イオンが、この化合物について存在する主要な種であることを示す。葉酸に焦点を当てると、m/z 295の親イオンを使用して同じトラックから得られた生成物イオンの走査は、m/z 176に極大ピークを示し、その強度は、5.5×105cpsである。m/z 442の親イオンから得られる、最も多い生成物イオンは、m/z 295→m/z 176のイオン対の強度のほんの15%であった。このことは、ESIの場合とは対照的である。ESIの場合、m/z 442→m/z 295の遷移が、最大の強度を示し、そしてMRM遷移をMALDIプレート上で直接最適化し得ることの重要性を強調する。
MALDIプレート上に沈着したトラックの分析は、本発明の沈着パラメータを使用して得られた代表的なトラック幅が、約2.5mmであったことを示す。レーザーのスポットサイズは、180μm×230μmであり、これは、沈着したトラックの幅の約10%のトラックの燃焼をもたらす。MALDIの獲得の間の、少量のみの沈着サンプルの利用は、方法の設定において利点を与える。ここで、MRM選択および分析器の最適化が、トラック/スポットの再実行を介して、ESI(約10pg)と比較して、少量のサンプル(約10pg)で達成され得る。
図8は、ブランクカラム(図8a)またはDHFRカラム(図8b)からの溶出物が、実行緩衝液として2mM酢酸アンモニウムを使用して沈着された、MALDIプレートからの沈着に関して得られた、FACトレースを示す。図8において、化合物は、MALDIプレート上に沈着した最初の2つのトレースにおいて溶出する(矢印は、分析されたトレースを示す)。図8の下の目盛は、MALDIの分析時間を示し、これは、沈着速度対レーザー読み取り速度の比(これは、この場合には、19である)を倍率因子として使用して、LC溶出時間に変換され得る。FAC−ESI/MS/MSについての場合と同様に、フルオレセイン、N−アセチルグルコサミンおよび葉酸が、最初に溶出し(1.5分間のLC時間)、引き続いて、トリメトプリム(3分間のLC時間)およびピリメタミン(3.5分間のLC時間)が溶出した。ここでまた、低いイオン濃度の緩衝液を使用する場合の、分析物の非特異的な結合が示される。このことは、驚くべきことではない。なぜなら、溶出時間は、検出のために使用されるMSの特定の型ではなく、カラムによって決定されるからである。より興味深いことには、プレート上のトレースを分析するために必要とされるMSの分析時間は、実際のLC時間の8分間と比較して、0.5分未満である。従って、LC沈着時間は、両方の方法について類似であるが、同じサンプルを解釈するためにMSの複数のモードを使用することが、可能である(図7を参照のこと)。各モードは、実行のために数分しか必要としない。
毛管規模のメソ細孔/マクロ細孔ゾル−ゲルベースのモノリシックバイオアフィニティカラムは、理想的には、混合物中の特定の化合物の同定のための、フロンタルアフィニティクロマトグラフィーを質量分析検出と一緒に使用する、化合物混合物のスクリーニングのために適切である。ゾル−ゲル由来のカラムの特定の利点は、それらの種々の異なるタンパク質との良好な適合性である。本研究は、可溶性酵素の捕捉に焦点を当てたが、本明細書中において使用されるゾル−ゲル方法は、広範な重要な薬物標的(膜結合タンパク質28およびレセプター33、ならびに全細胞34さえもが挙げられる)の捕捉にもまた、適用可能である。さらに、DGA由来のメタノールへの捕捉は、他の方法によって固定することが困難な不安定な酵素(例えば、第Xa因子およびCox−II28)の固定を可能にする。従って、モノリシックカラムは、広範な種々の有用な標的に対する、化合物混合物のスクリーニングにおいて、用途を見出し得る。
Claims (13)
- 化学サンプルを分析するためのシステムであって、該システムは、MALDI質量分析系と連動するフロンタルアフィニティクロマトグラフィー(FAC)カラムを備える、システム。
- 前記FACカラムからの溶出物ストリームが、MALDIマトリックス材料と混合され、そして該混合物が、MALDI−MSプレート上に沈着される、請求項1に記載のシステム。
- 前記混合物が、不連続なスポットとしてか、または連続的なトラックとして沈着される、請求項2に記載のシステム。
- 前記混合物が、連続的なトラックとして沈着される、請求項3に記載のシステム。
- 前記混合物が、MALDI沈着の前の画分収集;毛管からのスポットまたはトラックの直接的な沈着;電気動力学的な荷電液滴処理;加熱された液滴界面を使用する沈着;圧電フロースルー微小分配減圧により補助される沈着、電場により駆動される液滴沈着、エレクトロスプレー沈着、あるいは毛管噴霧器スプレーによって沈着される、請求項2に記載のシステム。
- 前記MALDIプレートが、コンピュータの制御下で移動される、請求項2〜5のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記FACカラムが、バイオアフィニティ毛管カラムである、請求項1〜6のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記FACカラムが、モノリシックなシリカマトリックスを収容する、請求項7に記載のシステム。
- 前記モノリシックなシリカマトリックスが、ゾル−ゲル技術を使用して調製される、請求項8に記載のシステム。
- 前記モノリシックなシリカマトリックスが、生体分子適合性の技術を使用して調製される、請求項8または9に記載のシステム。
- 前記FACカラムが、該カラムの内部に捕捉されたか、または該カラムの表面に固定された、1つ以上の生物学的分子を備える、請求項1〜10のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記化学サンプルが、化合物のライブラリーまたは天然供給源からの抽出物を含有する、請求項1〜11のいずれか1項に記載のシステム。
- フロンタルアフィニティクロマトグラフィー(FAC)からの化学サンプルを分析する方法であって、該方法は、以下:
(a)FACカラムからの溶出物を、マトリックスと混合する工程;
(b)該(a)における混合物を、表面に沈着させる工程;および
(c)該沈着された混合物を、MALDI質量分析を使用して分析する工程、
を包含する、方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US57300904P | 2004-05-21 | 2004-05-21 | |
PCT/CA2005/000790 WO2005114170A1 (en) | 2004-05-21 | 2005-05-24 | Frontal affinity chromatography/maldi tandem mass spectrometry |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007538235A true JP2007538235A (ja) | 2007-12-27 |
Family
ID=35428485
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007516919A Pending JP2007538235A (ja) | 2004-05-21 | 2005-05-24 | フロンタルアフィニティクロマトグラフィー/maldiタンデム質量分析 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1747456A4 (ja) |
JP (1) | JP2007538235A (ja) |
CA (1) | CA2566815A1 (ja) |
WO (1) | WO2005114170A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009186218A (ja) * | 2008-02-04 | 2009-08-20 | Bridgestone Corp | 液体クロマトグラフ溶出液の質量スペクトル測定方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10481164B2 (en) | 2012-03-26 | 2019-11-19 | Amgen Inc. | Method for using light scattering in real time to directly monitor and control impurity removal in purification processes |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999050669A1 (en) * | 1998-03-27 | 1999-10-07 | Synsorb Biotech, Inc. | Methods for screening compound libraries |
US20020175278A1 (en) * | 2001-05-25 | 2002-11-28 | Whitehouse Craig M. | Atmospheric and vacuum pressure MALDI ion source |
WO2004002063A1 (fr) * | 2002-06-19 | 2003-12-31 | Huawei Technologies Co.,Ltd | Boitier d'alarme servant a centraliser la gestion d'un reseau et traitement de l'alarme |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6054047A (en) * | 1998-03-27 | 2000-04-25 | Synsorb Biotech, Inc. | Apparatus for screening compound libraries |
CA2318905A1 (en) | 1998-03-30 | 1999-10-07 | Kevin B. Sparks | Tunable optical fiber bragg and long period grating |
US7198896B2 (en) * | 1998-09-04 | 2007-04-03 | Cell Signaling Technology, Inc. | Immunoaffinity isolation of modified peptides from complex mixtures |
US20020195555A1 (en) * | 2000-10-11 | 2002-12-26 | Weinberger Scot R. | Apparatus and methods for affinity capture tandem mass spectrometry |
-
2005
- 2005-05-24 CA CA002566815A patent/CA2566815A1/en not_active Abandoned
- 2005-05-24 JP JP2007516919A patent/JP2007538235A/ja active Pending
- 2005-05-24 WO PCT/CA2005/000790 patent/WO2005114170A1/en not_active Application Discontinuation
- 2005-05-24 EP EP05748644A patent/EP1747456A4/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999050669A1 (en) * | 1998-03-27 | 1999-10-07 | Synsorb Biotech, Inc. | Methods for screening compound libraries |
US20020175278A1 (en) * | 2001-05-25 | 2002-11-28 | Whitehouse Craig M. | Atmospheric and vacuum pressure MALDI ion source |
WO2004002063A1 (fr) * | 2002-06-19 | 2003-12-31 | Huawei Technologies Co.,Ltd | Boitier d'alarme servant a centraliser la gestion d'un reseau et traitement de l'alarme |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009186218A (ja) * | 2008-02-04 | 2009-08-20 | Bridgestone Corp | 液体クロマトグラフ溶出液の質量スペクトル測定方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2005114170A1 (en) | 2005-12-01 |
EP1747456A1 (en) | 2007-01-31 |
EP1747456A4 (en) | 2009-05-13 |
CA2566815A1 (en) | 2005-12-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8648297B2 (en) | Coupling of liquid chromatography with mass spectrometry by liquid sample desorption electrospray ionization (DESI) | |
Kauppila et al. | New surfaces for desorption electrospray ionization mass spectrometry: porous silicon and ultra‐thin layer chromatography plates | |
Marquet et al. | Liquid chromatography–mass spectrometry: potential in forensic and clinical toxicology | |
US10079138B2 (en) | Methods of detecting reverse triiodothyronine by mass spectrometry | |
US20120009614A1 (en) | Thyroglobulin quantitation by mass spectrometry | |
US6995363B2 (en) | Reduction of matrix interference for MALDI mass spectrometry analysis | |
Foret et al. | Liquid phase interfacing and miniaturization in matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometry | |
Huck et al. | Progress in capillary electrophoresis coupled to matrix‐assisted laser desorption/ionization–time of flight mass spectrometry | |
WO2005114700A2 (en) | Expression quantification using mass spectrometry | |
JP6301362B2 (ja) | 質量分析によるcペプチド検出 | |
Van Veelen et al. | Off-line coupling of capillary electrophoresis with matrix-assisted laser desorption mass spectrometry | |
Larsen et al. | Mass spectrometry of biological materials | |
Ho et al. | Nanoparticle-assisted MALDI-TOF MS combined with seed-layer surface preparation for quantification of small molecules | |
US7317187B2 (en) | Frontal affinity chromatography/MALDI tandem mass spectrometry | |
Kovarik et al. | Method development aspects for the quantitation of pharmaceutical compounds in human plasma with a matrix‐assisted laser desorption/ionization source in the multiple reaction monitoring mode | |
CN110044998B (zh) | 通过质谱法定量他莫昔芬及其代谢物 | |
Sakairi et al. | Multi-atmospheric pressure ionisation interface for liquid chromatography–mass spectrometry | |
JP2007538235A (ja) | フロンタルアフィニティクロマトグラフィー/maldiタンデム質量分析 | |
Govaerts et al. | Hyphenation of liquid chromatography to ion trap mass spectrometry to identify minor components in polypeptide antibiotics | |
Jian | Modern liquid chromatography and mass spectrometry for targeted biomarker quantitation | |
Crotti et al. | Aspects of the role of surfaces in ionization processes | |
US20070023640A1 (en) | Frontal affinity chromatography/maldi tandem mass spectrometry | |
Chen et al. | Compatible buffer for capillary electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry | |
Huck et al. | Capillary electrophoresis coupled to mass spectrometry for forensic analysis | |
Czuczy et al. | Selective detection of specific protein-ligand complexes by electrosonic spray-precursor ion scan tandem mass spectrometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080425 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20100127 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20100127 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100127 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100521 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101221 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20110120 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110318 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110420 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110420 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110427 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110520 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110527 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20111027 |