JP2007517506A - 標的化用化合物 - Google Patents
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Abstract
Description
図面において、図2は構築体pdHL11-huBC1-M1-hup35を示す図である(実施例1参照)。以下の特徴を示す:
[表A]
図面において、図3は構築体pNeo-CMV-hup40を示す図である(実施例1参照)。以下の特徴を示す:
[表B]
(実施例1-huBC1-huIL12融合タンパク質の生成)
I.huBC1-huIL12用の発現ベクターの構築
1.軽鎖の可変領域(VL)
ヒト化BC1抗体の軽鎖の可変領域(VL)をコードするDNAは、プラスミド、RKA.pMMR010の形で与えられた。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用して、VLDNAを発現ベクターpdHL11に適合させた。正方向プライマーは配列5'-CTTAAGCGAAATTGTGTTGACGCAGTC-3'[配列番号11]を有し、この場合CTTAAGはAflII制限部位であり、GAAは成熟VLのN末端アミノ酸残基である。逆方向プライマーは配列5'-GGATCCACTTACGTTTGATCTCCAGCTTGG-3'[配列番号12]を有し、この場合、VLの3'端およびGGATCCとハイブリダイズした下線部分の配列が、VLスプライシングドナー部位の下流にBamHI制限部位を加える。
ヒト化BC1抗体の重鎖の可変領域(VH)をコードするDNAは、プラスミドRHA.pGammalの形で得た。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用して、VHDNAを発現ベクターpdHL11に適合させた。正方向プライマーは配列5'-CTTAAGCGAGGTGCAGCTGGTGCAGTC-3'[配列番号14]を有し、この場合CTTAAGはAflII制限部位であり、GAGは成熟VHのN末端アミノ酸残基である。逆方向プライマーは配列5'-AAGCTTACTTACCTGAGGAGACGGAGACC-3'[配列番号15]を有し、この場合、VHの3'端およびAAGCTTとハイブリダイズした下線部分の配列が、VHスプライシングドナー部位の下流にHindIII制限部位を加える。
軽鎖構築体はヒトkappa鎖遺伝子の定常領域を使用し、重鎖構築体はヒトガンマ-1鎖の定常領域を使用する。CH3ドメインをコードする野生型DNA配列中の翻訳停止コドンの280bp上流に位置する、SmaI制限部位が存在する。このSmaI部位は、サイレント突然変異(TCCからTCA)の導入によって破壊した。他のサイレント突然変異を停止コドンの10bp上流に導入して、新たなSmaI部位を含む配列CCCGGGTAAA(停止)[配列番号17]を作製した[Lo et al.(1998) Protein Engineering11 : 495]。ここでこのSmaI部位はpdHL11発現ベクター中に特有のものであり、抗体-サイトカイン融合タンパク質を作製するための融合接合部として使用する。
ヒトIL-12のp35およびp40サブユニットのcDNAを、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用してヒト末梢血単核球(PBMC)からクローニングした。第一鎖cDNAは、オリゴdTプライマーおよび逆転写酵素を使用して合成した。cDNA産物はPCR用の鋳型として使用した。p35サブユニット用に、センスプライマーは配列5'-CCAGAAAGCAAGAGACCAGAG-3'[配列番号18]を有し、アンチセンスプライマーは配列5'-GGAGGGACCTCGAGTTTTAGGAAGCATTCAG-3'[配列番号19]を有する。センスプライマーはXmaI部位のすぐ上流のp35メッセージの5'非翻訳領域中の配列に由来し、一方アンチセンスプライマーは翻訳停止コドン、その直後に定方向的クローニング用のXhoI部位をコードする。p40サブユニットcDNA用のプライマーは、センスプライマー用には5'-CTCCGTCCTGTCTAGAGCAAGATGTGTC-3'[配列番号20]、およびアンチセンスプライマー用には5'-GCTTCTCGAGAACCTAACTGCAGGGCACAG-3'[配列番号21]であった。センスプライマーは特有のXbaI部位を翻訳開始部位の上流に加え、一方アンチセンスプライマーはXhoI部位を翻訳停止コドンの下流に加える。
クローニングしたp35cDNAは、配列を確認した後に、以下のような融合タンパク質としての発現に適合させた。融合接合部において、CH3のC末端アミノ酸残基はリシンであり、成熟p35のN末端残基はアルギニンである。この2つの塩基性残基との融合接合部におけるタンパク質分解を最小にするために、この両方をアラニンに突然変異させ、これはIL2イムノサイトカインの場合、血清半減期を延長させることが示されてきている[Gillies et al.(2002) Clin.Cancer Res.8:210]。融合接合部を再構築するために、p35の成熟N末端のわずか11塩基対(bp)下流に好都合なBalI部位が存在する。したがって、センス鎖5'-CCGGGCGCCGCAAACCTCCCCGTGG-3'[配列番号22]およびアンチセンス鎖5'-CCACGGGGAGGTTTGCGGCGC-3'[配列番号23]からなり、GCCGCAが2つのアラニン置換基を示すXmaI-BalIオリゴヌクレオチドリンカーを合成し、p35サブユニットの残り部分をコードするBalI-XhoI制限断片と連結させた。生成したXmaI-XhoI断片は、次いでpdHL11発現ベクター中の特有のXmaI部位と連結させ、CH3-p35融合接合部を形成した。この接合部におけるペプチド配列、AAが2つのアラニン置換基であるLSLSPGAANLPV[SEQ[配列番号24]は、新規でおそらく免疫原性がある。実際それは、脱免疫処置と呼ばれるBiovationの技術に基づいてLSLS残基をATATに突然変異させることにより除去することができると思われる、考えられるTヘルパー細胞のエピトープを含んでいた。生成した脱免疫融合接合部の配列はM1と呼ぶ。したがってhuBC1-H鎖-M1-hup35DNAは、シグナルペプチド-VHをコードするXhoI-HindIII断片、脱免疫接合部を有するゲノムのヒトIgG1H鎖定常領域をコードするHindIII-XmaI断片、およびp35サブユニットをコードするXmaI-XhoI断片からなる。
発現ベクターpdHL11は、以前に記載されたpdHL7に由来する(Gllies et al.(1998) J.Immunol.160 : 6195)。pdHL7中と同様に、pdHL11中のL鎖とH鎖の2つの転写単位は、CMVエンハンサー-プロモーターを含む[Boshart et al.(1985) Cell41 : 521〜530]。CMVエンハンサー-プロモーターのDNAは、市販のpcDNAI(Invitrogen Corp、サンディエゴ、CA)のAflII-HindIII断片から得た。3'端では、L鎖はヒト免疫グロブリンkappa鎖遺伝子の3'非翻訳領域およびポリアデニル化シグナルを使用し、H鎖はSV40後期領域の3'非翻訳領域およびポリアデニル化シグナルを使用する。
完全なオープンリーディングフレームを含むクローニングしたp40cDNAは、配列を確認した後に、XbaI-XhoI断片として別の発現ベクターに連結させた。この発現ベクターpNeo-CMV-hup40は、ネオマイシン類似体G418を使用するトランスフェクト細胞の選択用にネオマイシン耐性遺伝子を含む。p40の発現はCMVエンハンサー-プロモーターの制御下にあり、ネズミkappaポリアデニル化シグナルを利用する。
1.huBC1-huIL12の軽鎖のペプチドおよびDNA配列
ヒト化BC1-huIL12の分泌軽鎖のペプチド配列は以下の通りである(VLには下線を引く):
分泌重鎖huBC1-hup35のペプチド配列は以下の通りである(VHには下線を引き、脱免疫M1接合部はイタリックで表し、およびヒトp35は太字で表す):
分泌ヒトp40サブユニットのペプチド配列は以下の通りである:
表面プラズモン共鳴および免疫染色実験を行って、本発明の例示的なBC1-IL12融合タンパク質と癌胎児性フィブロネクチンの結合を特徴付けた。
導入部
表面プラズモン共鳴(SPR)技術を使用して、抗原結合の特異性(すなわち、組換え癌胎児性フィブロネクチンFN7B89のみの認識)を実証し、ネズミおよびヒトBC1抗体およびBC1-IL12イムノサイトカインに関する動態速度定数/親和性値を測定/比較した。全ての測定試薬およびソフトウェアはBiocoreによって与えられた(試薬およびソフトウェアのリストに関する付録を参照のこと)。
ED-B陰性(FN789)組換えフィブロネクチンとED-B陽性(FN7B89)組換えフィブロネクチン(以下の「配列情報」を参照)を、標準的なアミン結合プロトコルおよびBiacoreによって与えられた結合試薬を使用して、CM5センサーチップの2つの異なるフローセル上で結合させた。他の2つのフローセルは空の状態にして、陰性対照表面を使用した。抗原特異性を実証するために、さまざまなBC1抗体およびイムノサイトカインを、ランニングバッファー、HEPES緩衝生理食塩水(HBS-EP)中に500nMに希釈した。これらのサンプルはフィブロネクチン結合表面に5分間注入し、結合曲線を比較した。ランニングバッファー(HBS-EP)は陰性対照としてそれぞれの表面に注入して、基底シグナルを示した。チップ表面は、0.1MのHCl、pH1.5の1分間のパルス、次に0.1MのH3PO4の第2の1分間のパルスによって再生した。
さまざまなBC1分子が組換え癌胎児性フィブロネクチン、FN7B89と異なる強度で結合するが、組換え「正常」フィブロネクチン、FN789とは全く結合しない(図4参照)。これは試験した全てのBC1分子において、抗体とイムノサイトカインの両方が(原型muBC1と比較して)それらの抗原特異性を有していたことを示す。これらのデータは、抗原結合の動態は分子ごとに変わることも実証する。
全てのBC1分子が組換え癌胎児性フィブロネクチン、FN7B89と特異的に結合し、hyBC-huIL12イムノサイトカインの構築体は、抗原特異性の消失をもたらさなかったことが示される。BC1ネズミ抗体のヒト化は、増大した結合親和性を有する分子をもたらした。親和性のこの増大は、有意に速いオンレートによるものである。このヒト化抗体は、そのネズミ相当物より約34倍速くその抗原と結合する。しかしながら、ヒト化は負の影響も有する。huBC1のオフレートはmuBC1より約5倍速い。BC1-IL12イムノサイトカインを作製するために抗体にILI2を加えることは、これを相殺するのを手助けし、muBC1から見られたのと同様のオフレートをもたらす。In vitroにおいてhuBC1-hulL12は、in vivoで強力な腫瘍標的分子である可能性を有する高親和性イムノサイトカインである。
(a)フィブロネクチン789断片
遺伝子座 FN789.DNA、1126bpのmRNA、PRI 01-OCT-1999
定義 pQE12(pAS32)中のフィブロネクチンドメイン789のヒトmRNA(ED-B無し)
NID g31396およびpQE12(Qiagen)に由来。
バージョン X02761.1 GI:31396
キーワード 可変スプライシング;フィブロネクチン。
供給源 ヒト
生物 ホモサピエンス
真核生物;後生動物;脊索動物門;有頭動物;脊椎動物門;哺乳類;
真獣類;霊長類;狭鼻類;ヒト科;ホモ。
CDS <208..1068
/生成物="FnMRGS-789-HHHHHH"
/翻訳="
塩基数 319a 297c 226g 284t
起源
遺伝子座 FN7B89.DNA、1399bpのmRNA、PRI 01-OCT-1999
定義 pQE12(pAS33)中のフィブロネクチンドメイン7B89のヒトmRNA
NID g31396およびpQE12(Qiagen)に由来。
バージョン X02761.1 GI:31396
キーワード 可変スプライシング;フィブロネクチン。
供給源 ヒト
生物 ホモサピエンス
真核生物;後生動物;脊索動物門;有頭動物;脊椎動物門;哺乳類;
真獣類;霊長類;狭鼻類;ヒト科;ホモ。
CDS <208..1341
/生成物="FnMRGS-7B89-HHHHHH"
/翻訳="
塩基数 390a 368c 290g 351t
起源
1.物質:Biacore AB、Uppsala
カタログ番号およびウェブサイト上で入手可能な接触情報:
www.biacore.com
Biacore2000
(機器を動かす)BIA制御ソフトウェア
BIA評価ソフトウェア(データ分析用)
SeniorチップCM5(保証等級)
HBS-EP
アミン結合用キット
曲線の当てはめ=二価(分析物は抗体である)
注入開始=0秒
会合=30〜270秒(4分)
注入停止=300秒
解離=330〜600(4.5分)
癌の治療におけるBCI-M12融合タンパク質の有用性を確認するために、標準的手順(実施例1および参照により本明細書に組み込まれているGillies et al、WO99/29732を参照)に従い、huBC1-muIL12融合タンパク質を構築し発現させた。ヒトIL-12はネズミIL-12受容体によって認識されないので、このタンパク質はネズミIL-12を使用した。
1.導入部
目的は、マウスの異なる腫瘍モデルにおけるhuBC1-IL12の有効性を測定することである。huBC1(ヒト化BC1抗体)は、血管新生腫瘍の血管新生部分の内皮下細胞外マトリクス(ECM)中に存在するヒトフィブロネクチンイソ型、B-FNを標的化する。B-FNは優れた腫瘍マーカーである、何故ならそれは癌胎児性であり、血管形成と関係があり、かつ正常成体組織中で検出不能だからである。huBC-1はヒトB-FNのみを認識し、ネズミB-FNとは交差反応しないので、重症複合免疫不全(SCID)マウスおよびヌードマウスにおけるヒト腫瘍細胞と関係がある異種腫瘍モデルを、前臨床試験用に使用した。さらにIL12は種特異的なので、ヒト目的用のhuBC1-huIL12(ヒト化BC1抗体-ヒトIL12融合タンパク質)は、マウス中では働かない。したがって本発明者らは、ネズミモデルにおける評価用の代理薬剤候補としてhuBC1-ネズミIL12を生成した。
2.1 マウス系統
SCIDCB17およびヌードマウスは、Taconic、Charles River、and Jackson Lab
から購入した。
ヒト前立腺癌PC3mm2は、Scripps Research InstituteのDr.Ralph Reisfeldからの贈呈品であった。ヒト星状細胞種U-87MG、ヒト表皮癌A431およびヒト結腸癌HT29はAmerican Type Culture Collectionから得た。
huBC1-g1-muIL12はhuBC1-g1-M1-muIL12と同じである。それは、ヒトg1定常領域を有するヒト化BC1抗体とネズミIL-12の融合タンパク質であり、M1は脱免疫融合接合部である(前の実施例1参照)。
3.1 SCIDCB17マウスにおけるU-87MG皮下モデル
02-23 SCIDCB17マウスにおける皮下モデルに対するヒトU-87MG星状細胞種細胞中のhuBC1-g1-M1-muIL12の影響
7週齢のSCIDCB17マウス、オス
プロトコルに従い、SCIDCB17マウスの皮下背部、近位の正中線に、0.1mlのPBS中に4×106個の生命力のあるU-87MG腫瘍細胞を注射する。
腫瘍の大きさが約100mm3に達したとき、治療を開始する。マウスは、等しい平均値および範囲の腫瘍体積を有する5群(n=8)のマウスに選別する:
1.PBS 0.2ml、静脈内注射、第0〜8日
2.huBC1-g1-M1-MuIL12 20μg、静脈内注射、第0〜8日
3.huBC1-g1-M1-MuIL12 5μg、静脈内注射、第0〜8日
4.huBC1-g1-M1-MuIL12 20μg、静脈内注射、一日おき、合計12回投与
5.huBC1Ab 0.5mg、腹膜内注射、第0日および第4日(3匹のマウスのみ)
腫瘍の大きさを1週間に2回測定する。
式、幅×長さ×高さ×0.5236を使用して、腫瘍体積を決定する。
5000mm3を超える腫瘍の大きさを有する、任意のマウスを殺傷する。
適切な時間地点でT/C比(治療した腫瘍体積と対照腫瘍体積の比)を計算する。
02-37 SCIDCB17マウスにおけるA431皮下モデルに対するBC1-g1-M1-muIL12の影響
8週齢のSCIDCB17マウス、オス
プロトコルに従い、SCIDCB17マウスの皮下背部、近位の正中線に、0.1mlのPBS中に1×106個の生命力のあるA431腫瘍細胞を注射する。
腫瘍の大きさが〜100mm3に達したとき、治療を開始する。マウスは、等しい平均値および範囲の腫瘍体積を有する2群(n=8)のマウスに選別する:
1.PBS 0.2ml、静脈内注射、第0〜7日
2.huBC1-muIL12 20μg、静脈内注射、第0〜7日
腫瘍の大きさを1週間に2回測定する。
式、幅×長さ×高さ×0.5236を使用して、腫瘍体積を決定する。
5000mm3を超える腫瘍の大きさを有する、任意のマウスを殺傷する。
適切な時間地点でT/C比(治療した腫瘍体積と対照腫瘍体積の比)を計算する。
02-44 SCIDCB17マウスにおけるPC3mm2皮下モデルに対するBC1-g1-M1-muIL12の影響
8週齢のSCIDCB17マウス、オス
プロトコルに従い、SCIDCB17マウスの皮下背部、近位の正中線に、0.1mlのPBS中に2×106個の生命力のあるPC3mm2細胞を注射する。
腫瘍の大きさが約100mm3に達したとき、治療を開始する。マウスは、等しい平均値および範囲の腫瘍体積を有する2群(n=7)のマウスに選別する:
1.PBS 0.2ml、静脈内注射、第0〜6日
2.BC1-g1-muIL12 20μg、静脈内注射、第0〜6日
腫瘍の大きさを1週間に2回測定する。
式、幅×長さ×高さ×0.5236を使用して、腫瘍体積を決定する。
5000mm3を超える腫瘍の大きさを有する、任意のマウスを殺傷する。
適切な時間地点でT/C比(治療した腫瘍体積と対照腫瘍体積の比)を計算する。
02-70 ヌードマウスにおけるHT-29皮下モデルに対するhuBC1-g1-M1-muIL12の影響
6〜7週齢のヌードマウス(nu/nu)、オス
プロトコルに従い、ヌードマウスの皮下背部、近位の正中線に、0.1mlのPBS中に1×106個の生命力のあるHT-29腫瘍細胞を注射する。
腫瘍の大きさが約100mm3に達したとき、治療を開始する。マウスは、等しい平均値および範囲の腫瘍体積を有する2群(n=5)のマウスに選別する:
1.PBS 0.2ml、静脈内注射、第0〜4日
2.huBC1-g1-muIL12 20μg、静脈内注射、第0〜4日
腫瘍の大きさを1週間に2回測定する。
式、幅2×長さ×0.5236を使用して、腫瘍体積を決定する。
5000mm3を超える腫瘍の大きさを有する、任意のマウスを殺傷する。
適切な時間地点でT/C比(治療した腫瘍体積と対照腫瘍体積の比)を計算する。
03-11 SCIDCB17マウスにおけるPC3mm2肺転移モデルに対するBC1-g1-M1-muIL12の影響
8週齢のSCIDCB17マウス、オス
0.3mlのPBS中に2×106個の生命力のあるPC3mm2の単細胞を、第0日にマウスに静脈内注射する。
1.PBS 0.2ml、静脈内注射、第11〜15日
2.BC1-g1-M1-muIL12 16μg、静脈内注射、第11〜15日
3.BC1-g1-M1-muIL12 8μg、静脈内注射、第11〜15日
第28日に、あるいは対照マウスが疾患状態になったときに、マウスを殺傷する。
肺を除去し、それらをブアン溶液中に固定する。
肺重量および体重を測定する。
肺転移を記録する。
他の器官およびリンパ節における転移を調べ記録する。
4.1 免疫欠如SCIDCB17マウスにおけるU-87MG皮下モデル
最初に本発明者らは、この腫瘍細胞系での高レベルのB-FN発現のために選択したヒト星状細胞種U-87MGを使用して、皮下腫瘍モデルを確立しなければならなかった(Marian et al、1997、Cancer80 : 2378)。滴定を行って、最適な腫瘍増殖のために注射する細胞数を決定した。異なる数の生命力のある細胞(1〜6×106個)を、それぞれのマウスの背部に注射して皮膚腫瘍を形成させ、それらの増殖率を調べた(図5a)。興味深いことに、注射した細胞数とは無関係に、腫瘍の増殖率は約3週間一定状態であり、その後はいずれも急速に増大した。
それぞれ20μgのhuBC1-mulL12を7日連続1日1回静脈内注射する1サイクル治療は、SCIDマウスにおけるヒトメラノーマA431皮下モデルで有効であり、第14日までに0.31のT/C比および第25日までに0.26のT/C比を得た(図6参照)。
それぞれ20μgのhuBC1-mulL12を7日連続1日1回静脈内注射する1サイクル治療は、SCIDマウスにおけるヒト前立腺癌PC3mm2皮下モデルで有効であり、第15日までに0.34のT/C比および第25日までに0.33のT/C比を得た(図7参照)。
それぞれ20μgのhuBC1-mulL12を5日連続1日1回静脈内注射する1サイクル治療は、SCIDマウスにおけるヒト前立腺癌PC3mm2皮下モデルで有効であり、第13日までに0.46のT/C比および第20日までに0.43のT/C比を得た(図8参照)。これはわずか1サイクルの治療であり、ヌードマウスは機能的T細胞を欠いていたので、20日後に治療群における腫瘍の増殖率が増大し始めたことは、それほど驚くべきことではなかった。この時点における第2の治療サイクルの利点を評価することは興味深いと思われる。
この異種移植片モデルでは、ヒト前立腺癌PC3mm2細胞を、治療を始める11日前に重症複合免疫不全(SCID)マウスに注射して、転移が確定するのに充分な時間を与えた。SCIDマウスにおいて機能的T細胞およびB細胞が欠如していたにもかかわらず、16μgのhuBC1-mulL12を5日間1日1回静脈内注射することによって、全てのマウスにおいて確立した転移をほぼ完全に根絶し、転移腫(図9A)および腫瘍塊(図9B)によって覆われた肺表面により測定して、それらの過剰増殖を防いだ。8μgの用量でさえも非常に有効であり、PBS対照と比較して肺転移を約85%減少させた。
薬剤候補huBC1-huIL12は、ヒトIL-12が種特異的であるため、現在のネズミ腫瘍モデルにおいて評価することはできない。したがって、本発明者らはhuBC1ネズミIL12を生成し、表8中に要約したように、この代理分子がさまざまな異種移植片転移および皮下腫瘍モデルにおいて有効であったことを示した。SCIDマウスが機能的T細胞およびB細胞を欠いていたという事実にもかかわらず、7日間1日1回の注射による1サイクルの治療は、A431およびPC3モデルにおいてそれぞれ74%および67%腫瘍の増殖を阻害した。huBC1-hmIL12がhuBC1-huIL12と比較して、マウス中でα期において非常に速いクリアランス速度を有していたという事実を鑑みると特に、これらの結果は印象的である(図10および以下の付録を参照)。5日間1日1回の注射による1サイクルの治療も、ヌードマウスにおけるHT-29モデルで有効であり、57%の腫瘍増殖の阻害を示した。化学療法を受けているかあるいは受けた後の患者がSCIDマウスより機能的な免疫系を有する可能性がある臨床試験における、huBC1-huIL12を用いる多サイクルの治療によって有効性は向上するはずである。SCIDマウスにおけるPC3mm2実験肺転移モデルでは、16μgのhuBC1-mulL12を5日間1日1回静脈内注射することによって、治療を始める前に11日間確立することができた転移をほぼ完全に根絶した。
huBC1-muIL12およびhuBC1-huIL12の薬物動態を、BALE/cマウスにおいて測定した。huBC1-huIL12はマウス中、特にα期においてhuBC1-muIL12より長い血清半減期を有することが分かった(図10)。
本発明の化合物、例えば融合タンパク質は、以下のように使用することができる。
Claims (52)
- 標的特異的部分およびエフェクター部分を含む化合物であって、
(i)前記標的特異的部分が、親モノクローナル抗体の癌胎児性フィブロネクチンに対する結合特異性を保持する、癌胎児性フィブロネクチンに対する特異性を有するモノクローナル抗体、またはその断片もしくは変異体を含むか、それらからなり、かつ
(ii)前記エフェクター部分が、インターロイキン-12、またはその機能性断片もしくは変異体を含むか、それらからなり、
癌胎児性フィブロネクチンに対する特異性を有する前記モノクローナル抗体が、ED-B領域以外の癌胎児性フィブロネクチンの領域と結合することを特徴とする化合物。 - 前記標的特異的部分が、胎児組織と正常成体組織の両方で発現されるフィブロネクチン内に存在するアミノ酸配列と結合することができる、請求項1に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が、フィブロネクチンの反復配列7ドメイン内のアミノ酸配列と結合することができる、請求項1または2に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分がヒト癌胎児性フィブロネクチンに特異的である、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物。
- 癌胎児性フィブロネクチンに対する特異性を有する前記モノクローナル抗体がBC1抗体、またはBC1抗体と癌胎児性フィブロネクチンの結合に関して競合することができる抗体である、請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物。
- 癌胎児性フィブロネクチンに対する特異性を有する前記モノクローナル抗体がBC1抗体である、請求項5に記載の化合物。
- 前記モノクローナル抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が前記親モノクローナル抗体より強く癌胎児性フィブロネクチンと結合する、請求項6または7に記載の化合物。
- 前記化合物が前記親モノクローナル抗体より少なくとも2倍強く癌胎児性フィブロネクチンと結合する、請求項8に記載の化合物。
- 前記化合物が癌胎児性フィブロネクチンと結合する前記親BC1抗体より少なくとも10倍強く癌胎児性フィブロネクチンと結合する、請求項8または9に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が配列番号1のポリペプチドを含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が配列番号2のポリペプチドを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が配列番号1のポリペプチドおよび配列番号2のポリペプチドを含む、請求項11または12に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が、癌胎児性フィブロネクチンに対する特異性を有するモノクローナル抗体の抗原結合断片を含むか、それからなる、請求項1から13のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が、FabおよびF(ab')2、Fv分子、ジスルフィド結合Fv分子、ScFv分子およびシングルドメイン抗体(dAb)などのFab様分子からなる群から選択される抗原結合断片を含むか、それらからなる、請求項14に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が1つまたは複数の抗体定常領域を含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記1つまたは複数の抗体定常領域がCH1ドメインを含むか、それからなる、請求項16に記載の化合物。
- Fc部分をさらに含む、請求項1から17のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記Fc部分がヒトIgG1に由来する、請求項18に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が完全BC1抗体を含むか、それからなる、請求項1から19のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記エフェクター部分が、ヒトインターロイキン-12、またはその機能性断片もしくは変異体を含むか、それらからなる、請求項1から20のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記エフェクター部分が、単鎖インターロイキン-12を含むか、それからなる、請求項1から21のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記単鎖IL-12がIL-12p35ドメインおよびIL-12p40ドメインからなる、請求項22に記載の化合物。
- 前記IL-12p35ドメインがジスルフィド結合によって前記IL-12p40ドメインと結合している、請求項23に記載の化合物。
- 前記化合物が融合タンパク質である、請求項1から24のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記標的特異的部分が前記エフェクター部分と融合している、請求項1から25のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記エフェクター部分と融合した免疫グロブリン重鎖を含む、請求項26に記載の化合物。
- 前記免疫グロブリン重鎖と前記エフェクター部分が突然変異リンカー配列を介して結合している、請求項27に記載の化合物。
- 前記リンカーがアミノ酸配列ATATPGAA(配列番号5)を含むか、それからなる、請求項28に記載の化合物。
- 前記化合物が配列番号6のポリペプチドを含む、請求項1から29のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が配列番号7のポリペプチドを含む、請求項1から30のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が配列番号6のポリペプチドおよび配列番号7のポリペプチドを含む、請求項30または31に記載の化合物。
- 前記配列番号6のポリペプチドとジスルフィド結合によって結合した配列番号4のポリペプチドをさらに含む、請求項30から32のいずれか一項に記載の化合物。
- 癌胎児性フィブロネクチンを対象とする抗体V領域、Fc部分、およびインターロイキンン-12部分を含む融合タンパク質。
- 請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその標的特異的部分、エフェクター部分または要素ポリペプチドをコードする核酸分子。
- 前記分子が配列番号8〜10からなる群から選択される1つまたは複数のヌクレオチド配列を含む、請求項35に記載の核酸分子。
- 前記分子が配列番号8のヌクレオチド配列を含む、請求項36に記載の核酸分子。
- 前記分子が配列番号9のヌクレオチド配列を含む、請求項36または37に記載の核酸分子。
- 前記分子が配列番号8のヌクレオチド配列および配列番号9のヌクレオチド配列を含む、請求項36から38のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 請求項35から39のいずれか一項に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項35から39のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項40に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその標的特異的部分、エフェクター部分または要素ポリペプチドを作製する方法であって、宿主細胞中で請求項35から39のいずれか一項に記載の核酸分子を発現させること、および前記化合物、その一部分または要素ポリペプチドを単離することを含む方法。
- 請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物、および薬剤として許容可能な担体を含む医薬組成物。
- 前記組成物が非経口投与に適している、請求項43に記載の医薬組成物。
- 薬剤中に使用するための、請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物。
- 癌を有する患者を治療するための医薬品の調製における、請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物の使用。
- 癌を有する患者を治療する方法であって、請求項1から34のいずれか一項に記載の化合物を前記患者に投与することを含む方法。
- 哺乳動物がヒトである、請求項46に記載の使用または請求項47に記載の方法。
- 前記患者が固形腫瘍を有する、請求項46に記載の使用または請求項47に記載の方法。
- 前記癌が膠芽細胞腫である、請求項46に記載の使用または請求項47に記載の方法。
- 記載および図面を参照しながら本明細書に記載したのと実質的に同じ化合物。
- 記載および図面を参照しながら本明細書に記載したのと実質的に同じ医薬組成物。
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