JP2007516225A - Seaweed composition for the treatment of diabetes and diabetic complications - Google Patents

Abstract

【課題】哺乳動物に、有効投薬量の海草抽出物を投与する段階を含む、2型糖尿病およびその合併症の予防または治療に関する方法および組成物を記載する。
【解決手段】海藻は褐藻、紅藻および緑藻よりなる群から選択され、この時海藻抽出物は多糖類を含有する。場合により、多糖類は、約63〜78モル％のラムノースである。海藻抽出物は、場合により、約6.5〜9.2モルl%のキシロールを含有する。場合により、ラムノースおよびキシロースは、海藻抽出物中にキシロース1に対しラムノース約12から、キシロース1に対しラムノース8の割合の量比で存在する。好ましくは、ラムノース（藻類多糖類）は硫酸化される。場合により、海藻抽出物は、シリアル、パン、飲料、棒状健康食品、ジュース、濃縮果汁、缶詰食品、アイスクリーム、水等の食品、あらゆるの形の小麦、トウモロコシ、大麦、カラスムギ等の主要産品、ならびに砂糖やアスコルビン酸等の味覚遮蔽剤と混合される。
A method and composition for the prevention or treatment of type 2 diabetes and its complications, comprising administering to a mammal an effective dosage of seaweed extract.
The seaweed is selected from the group consisting of brown algae, red algae and green algae, wherein the seaweed extract contains a polysaccharide. In some cases, the polysaccharide is about 63-78 mole percent rhamnose. The seaweed extract optionally contains about 6.5 to 9.2 mol% xylol. Optionally, rhamnose and xylose are present in the seaweed extract at a ratio of about 12 rhamnose to xylose 1 to rhamnose 8 to xylose 1. Preferably, rhamnose (algal polysaccharide) is sulfated. In some cases, the seaweed extract is a major product such as cereals, breads, beverages, stick health foods, juices, concentrated fruit juices, canned foods, ice cream, water, all forms of wheat, corn, barley, oats, etc. In addition, it is mixed with taste masking agents such as sugar and ascorbic acid.

Description

関連出願
本出願は、「内皮機能障害治療のためのラムナン硫酸組成物」と題する、２００２年１２月１６日出願、出願連続番号１０／３２０，３０９の一部継続出願である、「糖尿病治療のための新規組成物および方法」と題する、２００３年５月１４日出願、出願連続番号１０／４３８，０８８の一部継続出願であり、参照によりその全てが本書に組込まれている。 RELATED APPLICATIONS This application is a continuation-in-part application of application serial number 10 / 320,309, filed Dec. 16, 2002 entitled "Rhamnan Sulfate Composition for Endothelial Dysfunction Treatment" No. 10 / 438,088, filed May 14, 2003, entitled “New Compositions and Methods for”, which is incorporated herein by reference in its entirety.

本発明は薬理組成物に関し、糖尿病と関連するが限定はされない神経障害を回復でき、糖尿病の状態およびその他の血管障害の状態での腎機能を保存できる方法に関する。この組成物は、糖尿病、内皮機能障害もしくは疾患、内皮機能障害および血管機能障害を生ずる炎症状態が疑われるか、または罹っている患者に好ましく用いられ、そしてより具体的には、これに限定されるものではないが、内的または外的傷害の結果としての患者の出血リスクを上げずに、２型糖尿病およびその合併症を予防および／または治療するための、吸収特性を高めた調剤に好ましく使用する。   The present invention relates to a pharmacological composition and relates to a method capable of reversing neurological disorders related to but not limited to diabetes and preserving renal function in diabetic and other vascular disorders. This composition is preferably used for, and more specifically limited to, patients with suspected or suffering inflammatory conditions that cause diabetes, endothelial dysfunction or disease, endothelial dysfunction and vascular dysfunction. Although not preferred, it is preferred for preparations with enhanced absorption properties to prevent and / or treat type 2 diabetes and its complications without increasing the patient's risk of bleeding as a result of internal or external injury use.

２型糖尿病および内皮機能障害から生ずるその他疾患、ならびにそれらの合併症は、世界中で個人の障害および死亡の主な原因である。例えば、近年米国内だけで、毎年７０万人を超す人数が冠動脈疾患の結果死亡しており、そしてさらに多くの患者が不安定狭心症、急性心筋梗塞、およびうっ血性心不全で入院しており、これらの発生率は病気の進行に伴い糖尿病患者の７０％を越す。更に、糖尿病は工業化社会に於いては、慢性腎不全および腎不全の最大の原因であり、失明および脚部虚血による四肢喪失の主要原因である。   Other diseases resulting from type 2 diabetes and endothelial dysfunction, and their complications, are a major cause of individual disability and death worldwide. For example, recently in the United States alone, more than 700,000 people die each year as a result of coronary artery disease, and more patients are hospitalized for unstable angina, acute myocardial infarction, and congestive heart failure. These incidences exceed 70% of diabetics as the disease progresses. In addition, diabetes is the leading cause of chronic renal failure and renal failure in industrialized societies and the leading cause of limb loss due to blindness and leg ischemia.

糖尿病の効果的な長期治療法を求めて、意義深い多くの研究が行われている。しかしかかる疾患に関する現在の治療法は、インスリン投与や経口低血糖剤といった部分的治療である。これらの治療法には長期有効性に関し重大な欠点がある。これら治療法を用いても、糖尿病のプロセスに付随する一連の分子的および生理学的異常は解決しない。   Many significant studies have been conducted in search of effective long-term treatments for diabetes. However, current therapies for such diseases are partial treatments such as insulin administration and oral hypoglycemic agents. These therapies have significant drawbacks with regard to long-term efficacy. Using these therapies does not resolve the set of molecular and physiological abnormalities associated with the diabetic process.

糖尿病はｅＮＯＳ活性の低下、および細胞高血糖症に伴って発生するスーパーオキサイドおよびその他の自由ラジカルの増加に関連する医学的状態である。これらの異常の結果、膵臓、肝臓、腎臓、内皮細胞および心臓血管系を含む多様な種類の細胞で、細胞マトリックス組成物や細胞機能に変化および欠陥が起こる。   Diabetes is a medical condition associated with decreased eNOS activity and increased superoxide and other free radicals that accompany cellular hyperglycemia. These abnormalities result in changes and defects in cell matrix composition and cell function in various cell types including pancreas, liver, kidney, endothelial cells and cardiovascular system.

現在利用されている治療法は、これまでのところ、望ましい長期的結果に対し、部分的な効果しかない。これらの治療法で、細胞マトリックスに作用して酸化窒素、スーパーオキサイドおよびその他の自由ラジカルの発生を抑制し、上記の臓器および組織の細胞マトリックスの細胞機能を維持、改善または回復するようにデザインされたものはない。   Currently used treatments so far have only a partial effect on the desired long-term outcome. These therapies are designed to act on the cell matrix to inhibit the generation of nitric oxide, superoxide and other free radicals, and to maintain, improve or restore the cellular function of the cell matrix of the above organs and tissues. There is nothing.

現在の治療法は、患者の生命に対する潜在的な直近の危険に作用することに焦点が当てられている。これらの治療法およびその欠点としては、次のことが挙げられる；
−インスリン注射療法：欠点：低血糖症、不便および投与の苦痛
−食事：欠点：遵守が難しい
−経口治療薬：メトホルミン、グルコファージ、欠点：重症の高血糖症の場合、本治療法は不十分であり、糖尿病に伴うその他の代謝異常の影響は治療しない
−腎臓−膵臓移植：欠点：臓器ドナーが見つからない Current therapies are focused on affecting the immediate immediate risk to the patient's life. These therapies and their drawbacks include the following:
-Insulin injection therapy: Disadvantages: hypoglycemia, inconvenience and pain of administration-Meals: Disadvantages: difficult to comply-Oral therapeutics: metformin, glucophage, Disadvantages: In case of severe hyperglycemia, this treatment is insufficient And does not treat the effects of other metabolic abnormalities associated with diabetes-kidney-pancreas transplantation: Disadvantages: organ donor not found

これら治療法で、病気の基礎プロセス、病気または障害の分子レベルの原因、細胞の基礎分子構成および特性に対する高血糖の作用に注意を向けている、または糖尿病によって生じる危険を減少する又は取り除くレベルに至るまで、血管およびその他の細胞種類の構造および機能が回復することに注意を向けている治療法はない。自由ラジカルの生成レベルを下げ、細胞マトリックスの再構成、細胞膜の組成、凝固活性または血栓抵抗性の保全を目的にデザインされた治療法はない。   With these therapies, attention is focused on the effects of hyperglycemia on the underlying process of the disease, the molecular cause of the disease or disorder, the basic molecular organization and properties of the cells, or at a level that reduces or eliminates the risk caused by diabetes To date, there is no cure that focuses attention on restoring the structure and function of blood vessels and other cell types. There are no therapies designed to reduce the level of free radical generation and to preserve cell matrix reconstitution, cell membrane composition, clotting activity, or thrombus resistance.

前記の観点に於いて、基礎となる糖尿病疾患プロセスを治療することを目的とし、また糖尿病のプロセスに関係する様々なタイプの細胞の構造を保全し、回復し、またその機能、特に心血管系全体を覆っていて血管系と血液との中間面であり、有効な腎機能の主要な決定因子でもある内皮細胞の機能−構造特性を改善することを目的とした薬理組成物および方法に対し大きな需要がある。   In view of the above, it aims to treat the underlying diabetic disease process and also preserves and restores the structure of various types of cells involved in the diabetic process and its function, particularly the cardiovascular system Greatly compared to pharmacological compositions and methods aimed at improving endothelial cell function-structural properties that cover the whole and are the interface between vasculature and blood and are also a major determinant of effective renal function There is demand.

本発明の目的は、糖尿病およびその様々な合併症を招く、ヒト細胞マトリックスまたは細胞環境内での原子および分子の相互作用の機能障害を予防および抑制することを目的とする治療手段を提供することである。   The object of the present invention is to provide a therapeutic means aimed at preventing and inhibiting the dysfunction of atomic and molecular interactions within the human cell matrix or cellular environment that leads to diabetes and its various complications. It is.

本発明の別の目的は、ヒト細胞マトリックス内に発生した自由ラジカルの有害な結果を阻止することを目的とした治療手段を提供することである。ヒト細胞マトリックスまたは細胞環境内での酸化窒素の生成増加を刺激すること、および病気の経過を通してスーパーオキサイドおよびその他の自由ラジカルの生成および影響を減少することも、本発明の別の目的である。   Another object of the present invention is to provide a therapeutic means aimed at preventing the harmful consequences of free radicals generated in the human cell matrix. It is another object of the present invention to stimulate increased production of nitric oxide in the human cell matrix or cellular environment and to reduce the production and effects of superoxide and other free radicals throughout the course of the disease.

本発明の更に別の目的は、糖尿病に伴う罹病率および死亡率の最大の原因である心血管疾患、特に細胞表面を基本とする血栓症の、患者の抗血液凝固活性を大きく増加させずに、予防および治療することである。   Yet another object of the present invention is to significantly increase the patient's anticoagulant activity of cardiovascular disease, especially cell surface-based thrombosis, which is the largest cause of morbidity and mortality associated with diabetes. Is to prevent and treat.

方法および組成物は、哺乳類に有効量の海藻抽出物を投与するステップを含む、２型糖尿病およびその合併症の予防または治療について記載される。褐藻、紅藻および緑藻を含む群から海藻を選択し、海藻抽出物は多糖類を含む。場合により、多糖類は約６３〜７８モル％のラムノースである。また、海藻抽出物は場合により約６．５〜９．２モル％のキシロースを含有する。場合によっては、ラムノースおよびキシロースは海藻抽出物中に、約１２ラムノース対１キシロースの量比、および８ラムノース対１キシロースの量比で存在する。好ましくは、ラムノース（藻類多糖類）は硫酸化される。   The methods and compositions are described for the prevention or treatment of type 2 diabetes and its complications comprising administering to a mammal an effective amount of seaweed extract. Seaweed is selected from the group comprising brown algae, red algae and green algae, and the seaweed extract contains polysaccharides. Optionally, the polysaccharide is about 63-78 mol% rhamnose. Also, the seaweed extract optionally contains about 6.5 to 9.2 mol% xylose. In some cases, rhamnose and xylose are present in the seaweed extract at a ratio of about 12 rhamnose to 1 xylose and 8 rhamnose to 1 xylose. Preferably, rhamnose (algal polysaccharide) is sulfated.

神経障害、腎症、動脈硬化症およびタンパク尿症を含む群から２型糖尿病の合併症を選択する。   A complication of type 2 diabetes is selected from the group including neuropathy, nephropathy, arteriosclerosis and proteinuria.

発明の組成物および方法は、窒素ドナーまたは酸化窒素ドナーを海藻抽出物と併用して投与することを含み、この時、Ｌ−アルギニンおよびリジンを含む群から窒素ドナーを選択する。   The compositions and methods of the invention comprise administering a nitrogen donor or nitric oxide donor in combination with a seaweed extract, wherein a nitrogen donor is selected from the group comprising L-arginine and lysine.

発明の方法および組成物の利点は、それが極めて高い抗血栓作用および細胞表面の凝固の集合体に対するその他の抑制効果、ならびに血栓抑制の活性を有していることである。心臓血管の動脈硬化症の促進、高血圧、糖尿病性腎症、およびうっ血性心不全は糖尿病のプロセスの長期合併症であることがよく知られている。これらの病的状態のそれぞれに、低ｅＮＯＳ活性、高自由ラジカルの生成、高血栓形成活性、およびそれによる血栓性および虚血性合併症が伴う。   An advantage of the method and composition of the invention is that it has a very high antithrombotic action and other inhibitory effects on cell surface coagulation aggregates, as well as thrombus-suppressing activity. It is well known that accelerated cardiovascular arteriosclerosis, hypertension, diabetic nephropathy, and congestive heart failure are long-term complications of the diabetic process. Each of these pathological conditions is associated with low eNOS activity, high free radical production, high thrombogenic activity, and thereby thrombotic and ischemic complications.

記載の組成物の別の利点は、動物細胞由来のヘパリンに比べ、植物細胞由来の組成物の抽出では残存ペプチドが少ないことである。それ故、アレルギー反応が起こりにくく、免疫原特性もほとんどない。   Another advantage of the described composition is that there is less residual peptide in the extraction of the composition derived from plant cells compared to heparin derived from animal cells. Therefore, allergic reactions are unlikely to occur and there are few immunogenic properties.

更に別の利点は、海藻抽出物は植物細胞に由来していることから、狂牛病の様な潜在的に致死的および重大なプリオン病の伝染の可能性がないことである。   Yet another advantage is that the seaweed extract is derived from plant cells, so there is no possibility of potentially lethal and serious prion disease transmission like mad cow disease.

別の利点は、海藻抽出物には血小板第ＩＶ因子を活性化する能力がないので、ヘパリン投与の際に見られる血小板を破壊する免疫複合体を生じないことである。   Another advantage is that the seaweed extract does not have the ability to activate platelet factor IV and therefore does not produce immune complexes that destroy the platelets seen upon heparin administration.

最後に、海藻抽出物の別の利点は、哺乳類およびヒトに対して使用する場合、使用に際して透析、バイパス手術、およびポリマーチューブコーティングやデバイスといった全身性の抗血液凝固活性を必要とする場合は海藻抽出物がヘパリンの機能的な代替物となることである。   Finally, another advantage of seaweed extract is that when used against mammals and humans, seaweed can be used if systemic anticoagulant activity such as dialysis, bypass surgery, and polymer tube coatings and devices is required for use. The extract is a functional replacement for heparin.

糖尿病や血管疾患の将来的な発生を予測すると考えられているＣ反応性タンパク質の血漿中濃度を下げることも、本発明の別の利点である。   It is another advantage of the present invention to lower the plasma concentration of C-reactive protein, which is believed to predict future development of diabetes and vascular disease.

血漿中のＬＤＬを下げること、および／またはＨＤＬレベルを上げることにより、血管を含む健康な心臓血管機能を保護することも、本発明の別の利点である。   It is another advantage of the present invention to protect healthy cardiovascular function, including blood vessels, by lowering LDL in plasma and / or raising HDL levels.

発明者がこれまでに記載した様に、ヘパリン−アルギニン−水の様な帯電ポリマー−高帯電ペプチド−水ポリマーから構成される細胞環境（細胞マトリックス、ゲルマトリックス、またはゲル）には、細胞環境内のヒト細胞の構造、最終的には機能の制御に対する責任がある。ヒトの血管は１細胞の厚さしかないため、帯電ポリマー−高帯電ペプチド−水の環境内に於いても機能する。即ち、この帯電ポリマー−アルギニン−水の環境は、タンパク質の分配および機能性、細胞信号伝達プロセス、遺伝的またはＤＮＡ−ＲＮＡ転写制御、および血管壁細胞を含めた細胞の物理的／化学的特性に影響することにより、かかる細胞の重要な機能に影響を与える。発明者は、特許番号第６、２５５、２９６号および第６、４９５、５３０号に於いて、細胞環境の構造、および特に内皮細胞の構造の破壊が心血管疾患といった病気の主因であるという事実を明確に示している。これら特許の明細書は、ここに参照することにより、本書に含まれる。特別な作業メカニズムと結びつくわけではないが、発明者は、ヘパリン硫酸の損失が酸化窒素形成の低下を招くと考えている。   As described above, the cellular environment (cell matrix, gel matrix, or gel) composed of a charged polymer such as heparin-arginine-water-a highly charged peptide-water polymer includes a cellular environment. Responsible for the control of the structure and ultimately function of human cells. Because human blood vessels are only one cell thick, they function in a charged polymer-highly charged peptide-water environment. That is, this charged polymer-arginine-water environment is responsible for protein partitioning and functionality, cell signaling processes, genetic or DNA-RNA transcriptional control, and physical / chemical properties of cells, including vascular wall cells. Influencing affects the important function of such cells. The inventors have found in patent numbers 6, 255, 296 and 6, 495, 530 the fact that the destruction of the structure of the cellular environment and in particular the structure of the endothelial cells is the main cause of diseases such as cardiovascular diseases. Is clearly shown. The specifications of these patents are hereby incorporated herein by reference. Although not tied to a special working mechanism, the inventor believes that the loss of heparin sulfate leads to a decrease in nitric oxide formation.

ヘパリンまたはこれらポリマー構造内にあるヘパリンドメインは、一般的に内因性ヘパランと呼ばれる群の構成要素であることを特に言及しなければならない。外因性ヘパランは、ヘパリンも含め、内因性ヘパランを保護する機能を有している。   It must be mentioned in particular that heparin or heparin domains within these polymer structures are members of a group commonly referred to as endogenous heparan. Exogenous heparan, including heparin, has a function of protecting endogenous heparan.

本発明は２型糖尿病の治療、および２型糖尿病患者に於ける神経障害、腎症およびタンパク尿症といった関連病もしくは合併症の遅延のための組成物の提供を目的とする。遅延とは、２型糖尿病および関連合併症の進行または発症を遅らせることと定義する。   The present invention aims to provide a composition for the treatment of type 2 diabetes and the delay of related diseases or complications such as neuropathy, nephropathy and proteinuria in patients with type 2 diabetes. Delay is defined as delaying the progression or onset of type 2 diabetes and related complications.

発明に拠れば、２型糖尿病または関連病もしくは合併症に罹りやすい、または罹っている患者を、ある投与量または物質量の海藻抽出物を特徴とする物質により治療する。更に、将来的に２型糖尿病を発症する可能性のある健康な人もまた、ある投与量または物質量の本発明の組成物で治療する。   In accordance with the invention, patients susceptible to or suffering from type 2 diabetes or related diseases or complications are treated with a substance characterized by a dose or substance amount of seaweed extract. In addition, healthy individuals who may develop type 2 diabetes in the future are also treated with a dose or substance amount of the composition of the present invention.

海藻抽出物で使用する、抽出という用語の定義は、実施例１の抽出方法に限定されず、むしろこの用語は広く用いられて、海藻を潰すこと、および水もしくはその他成分と混合すること、海藻を切り刻むこと、粉砕すること、ミンチにすること、ペーストを作ること、海藻を乾燥粉末に加工すること、押し出すこと、発酵すること、あるいはラムノースまたはその他多糖類のような多糖類を抽出物に残す他の工程を含む。   The definition of the term extraction used in the seaweed extract is not limited to the extraction method of Example 1, but rather this term is widely used to crush seaweed and mix with water or other components, seaweed Chopping, grinding, mincing, making paste, processing seaweed into dry powder, extruding, fermenting, or leaving polysaccharides like rhamnose or other polysaccharides in the extract Including other steps.

海藻は、褐藻および緑藻からなる群から選ぶのが好ましい。褐藻は、ブラダーラック、ブラジル産コンブまたはノルウェイ産ケルブからなる群より選ばれる。緑藻は、ヒトエグサ、モツキヒトエ、エゾヒトエグサ、ヒロハノヒトエグサ、シワヒトエグサ、アオヒトエグサ、ウスヒトエグサ、ヒラアオノリ、ナガアオサ、アサミドリシオグサ、アオタマリシオグサ、フトジュズモ、ホソジュズモ、モツレグサ、ミル、クロミル、ヒラミルまたはフサイワズタからなる群より選ばれる。   The seaweed is preferably selected from the group consisting of brown algae and green algae. The brown algae is selected from the group consisting of a bladder rack, a Brazilian kombu or a Norwegian cherub. Green algae is from human egusa, mochihitoe, ezohitoegusa, hirohanohitoexa, wrinkled egusa, aohitoegusa, ushitoexa, hiraaoonori, nagaaosa, asamidrioshigusa, aotamarisiogusa, ftjuzumo, hosojutsumo, motsurugusa Selected from the group.

合成もしくは哺乳類での代謝といった天然の手段によって硫酸化され、そして２型糖尿病の遅延に有益且つ効果的である、ラムノースまたはその他の多糖類を含有する、ある量の海藻抽出物は、患者による臨床反応によって主に定義され、約２、０００ＩＵから約２００、０００ＩＵヘパリン活性に相当する範囲にある。海藻抽出物の有効量のより好ましい範囲は、５、０００ＩＵから２０、０００ＩＵヘパリン活性に相当する。海藻抽出物の有効量の最も好ましい範囲は、８、０００ＩＵから１２、０００ＩＵヘパリン活性に相当する。   A quantity of seaweed extract containing rhamnose or other polysaccharides that is sulfated by natural means such as synthesis or metabolism in mammals and that is beneficial and effective in delaying type 2 diabetes is It is mainly defined by the reaction and ranges from about 2,000 IU to about 200,000 IU heparin activity. A more preferred range of effective amounts of seaweed extract corresponds to 5,000 IU to 20,000 IU heparin activity. The most preferred range of effective amount of seaweed extract corresponds to 8,000 IU to 12,000 IU heparin activity.

多糖類の硫酸化は、多糖類に硫酸基を結合して、多糖類の硫酸成分（sulfated moiety）を形成することと定義する。例えば、ラムノースからラムナン硫酸を、またはキシロースから硫酸キシロースを形成することである。ラムナン硫酸の主鎖は、２−、３−または４−の位置で少量（全量の１０％未満）のガラクツロン酸、キシロース、およびアラビノースで置換できる。   The sulfation of a polysaccharide is defined as binding a sulfate group to the polysaccharide to form a sulfated moiety of the polysaccharide. For example, forming rhamnan sulfate from rhamnose or xylose sulfate from xylose. The main chain of rhamnan sulfate can be replaced with a small amount (less than 10% of the total amount) of galacturonic acid, xylose and arabinose at the 2-, 3- or 4-position.

帯電ポリマー−高帯電ペプチド−水のマトリックス内に吸収されると、海藻抽出物内の多糖類はヘパランとして働き、内因性ヘパランの構造および役割を、保護および強化する。いかなるメカニズムによってか、海藻抽出物中の硫酸化多糖類は自由ラジカルを結合して、膵臓細胞および内皮細胞を包含する様々なタイプの細胞に対する損傷を防止する、強力な効果を有している。   When absorbed into the charged polymer-highly charged peptide-water matrix, the polysaccharide in the seaweed extract acts as a heparan, protecting and enhancing the structure and role of endogenous heparan. By whatever mechanism, sulfated polysaccharides in seaweed extracts have a powerful effect of binding free radicals and preventing damage to various types of cells, including pancreatic and endothelial cells.

経口投与によって投与されたヘパリンまたはヘパリン類似体の細胞表面（例えば内皮細胞表面）への局在は、現在入手可能な抗凝固剤に見られる様な血漿凝固因子の阻害を示すことなく、動脈内および血管表面上の血栓活性を阻害する。   Localization of heparin or heparin analogs administered by oral administration to the cell surface (eg, endothelial cell surface) is intraarterial without showing inhibition of plasma clotting factors as found in currently available anticoagulants. And inhibits thrombotic activity on the surface of blood vessels.

海藻抽出物内の硫酸化多糖類は、自由ラジカルに結合して膵臓細胞および内皮細胞への損傷を防止し、同時に患者の内的もしくは外的出血のリスクを大きく高めることなく、そして内皮細胞の細胞膜および周囲環境の全体性および機能性を効果的に維持するのに十分な量を投与することを特徴とする。   Sulfated polysaccharides in seaweed extracts bind to free radicals to prevent damage to pancreatic cells and endothelial cells, without significantly increasing the patient's risk of internal or external bleeding, and of endothelial cells It is characterized in that it is administered in an amount sufficient to effectively maintain the integrity and functionality of the cell membrane and surrounding environment.

発明者は、細胞表面をベースにした抗血栓作用が血漿の抗凝固とは明らかに異なることが、発明にとって不可欠なものと認識している。発明は、血漿の抗凝固因子を阻害することなしに細胞をベースにした抗血栓作用を達成する。従って、発明は血漿抗凝固に不随する血管傷害による突発的な出血または過度の出血のリスクを回避する。   The inventor recognizes that it is essential for the invention that cell surface-based antithrombotic effects are distinctly different from plasma anticoagulation. The invention achieves cell-based antithrombotic action without inhibiting plasma anticoagulation factors. Thus, the invention avoids the risk of sudden or excessive bleeding due to vascular injury associated with plasma anticoagulation.

海藻抽出物の有効用量は特定個人の状態と投与方法により異なる。例えば、ヘパリンの皮下注射は、静脈注射に比べて細胞領域および膜領域での濃度がより高くなり、そして経口ヘパラン硫酸は細胞表面膜、特に内皮細胞に殆ど独占的に局在することを発明者は観察している。従って、本発明の海藻抽出物の好ましい投与方法は、経口経路による投与であり、一方最も好ましくない方法は静脈内注射によるものである。   The effective dose of seaweed extract varies depending on the particular individual's condition and method of administration. For example, the inventors have shown that subcutaneous injection of heparin has higher concentrations in the cellular and membrane regions than intravenous injection, and that oral heparan sulfate is almost exclusively localized to cell surface membranes, particularly endothelial cells. Is observing. Accordingly, the preferred method of administration of the seaweed extract of the present invention is administration by the oral route, while the least preferred method is by intravenous injection.

海藻抽出物は、経口、舌下、皮下、静脈内、経皮または直腸投与といった投与経路に合わせて投薬量を調整し、埋め込みもしくはコントロール放出手段を含む薬学的添加剤または賦形剤と混合する。例えば海藻抽出物は、場合によって水の様な生理学的に受け入れ可能な、無毒の液体賦形剤に分散される。   Seaweed extract is adjusted for dosage according to the route of administration, such as oral, sublingual, subcutaneous, intravenous, transdermal or rectal administration, and mixed with pharmaceutical additives or excipients including implantable or controlled release means . For example, seaweed extract is dispersed in a physiologically acceptable, non-toxic liquid excipient such as water.

あるいは、海藻抽出物は錠剤、カプセル、粉末、顆粒、コーティング錠剤といった形で与えられるか、各種食物に混合して与えられる。各種食物とは、例えばシリアル、パン、飲み物、棒状健康食品、ジュース、濃縮果汁、缶詰の食品、アイスクリーム、水、加工品または未加工品に関わらず様々な形状の小麦、トウモロコシ、大麦、およびカラス麦などを原料とする主要産品、あるいは砂糖もしくはアスコルビン酸といった味覚隠蔽物、またはその他の機能性食物のことである。海藻抽出物は、硫酸化多糖類を含めて、結合剤、増量剤、保存剤、錠剤崩壊剤、流動調製剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶媒、遅延剤、および／または酸化防止剤といった一般的な薬学的補助剤と混合してもよい。海藻抽出物は更に、場合によっては各種処方および分子配置を有する脂質との複合体に含まれる、または形作られる。   Alternatively, the seaweed extract is given in the form of tablets, capsules, powders, granules, coated tablets, or mixed with various foods. Various foods include, for example, cereals, breads, drinks, stick-shaped health foods, juices, concentrated fruit juices, canned foods, ice cream, water, processed or unprocessed wheat, corn, barley, and various forms It is a major product made from raw materials such as oats, or a taste mask such as sugar or ascorbic acid, or other functional food. Seaweed extracts include sulfated polysaccharides, binders, extenders, preservatives, tablet disintegrating agents, flow preparation agents, plasticizers, wetting agents, dispersing agents, emulsifiers, solvents, retarders, and / or oxidations. You may mix with common pharmaceutical adjuvants, such as an inhibitor. The seaweed extract is further optionally contained or shaped into a complex with lipids having various formulations and molecular configurations.

恒常性システムを効率的に機能させることは、哺乳類の組織内での細胞機能にとって重要である。健全な状態では、ヘパリンのゲルマトリックス、高帯電ペプチド、および水ポリマーが形成され、それがゲル構造およびその制御的機能を破壊するような濃度レベルに達することなしに、かかる分子の動的な結合および放出を調整することによって多くの他分子を封入する。   Efficient functioning of the homeostatic system is important for cellular function within mammalian tissues. In a healthy state, heparin gel matrix, highly charged peptides, and water polymers are formed, and dynamic binding of such molecules without reaching a concentration level that destroys the gel structure and its regulatory functions. And encapsulate many other molecules by adjusting the release.

長鎖の帯電ポリマー要素は、膜、タンパク質、レセプター、イオンチャンネル、細胞オルガネラ、核膜、膜孔、およびその他の複雑な細胞成分の組成決定因子である。ポリマー、およびアルギニンといった高帯電アミノ酸は、封入脂質二重膜のエリア内に水を配置し、例えば細胞の膨圧を作り出し、そして他の分子構造に対する水の加水分解性を制限する。   Long chain charged polymer elements are determinants of the composition of membranes, proteins, receptors, ion channels, cellular organelles, nuclear membranes, membrane pores, and other complex cellular components. Polymers and highly charged amino acids, such as arginine, place water within the area of the encapsulated lipid bilayer, creating, for example, cellular turgor and limiting the hydrolyzability of water to other molecular structures.

健全なゲルマトリックスは、内因性の帯電ポリマー、内因性のアルギニン、および水から作られる。ゲルマトリックスの不健全状態では、ゲルの高帯電ペプチド分子の一部が開裂している。さらに、帯電ポリマーがゲルから取り除かれる。その結果、帯電ポリマー間に、他の分子が埋没もしくは通過できるギャップが生じる。   A healthy gel matrix is made from an endogenous charged polymer, endogenous arginine, and water. In the unhealthy state of the gel matrix, some of the gel's highly charged peptide molecules are cleaved. In addition, the charged polymer is removed from the gel. The result is a gap between charged polymers that allows other molecules to be buried or passed through.

健全なゲル構造は、外部分子の相互作用および結合を好ましく支持する立体配座を有している。ゲル構造が崩壊してその機能性を失う前の、かかる分子が有する侵入を調節する能力は、ゲルシステムの重要な特徴の一つである。   A healthy gel structure has a conformation that favorably supports the interaction and binding of external molecules. The ability to regulate the penetration of such molecules before the gel structure collapses and loses its functionality is one of the key features of the gel system.

即ち、膜の透過性により、高分子または細胞はゲル内に入ること、および通過することができる。例えば、コレステロール、凝固因子、および水はゲルを通過して脂質二重層、またはその他の内皮細胞下の場所に達する。更に、イオン強度、流圧、熱、浸透圧、またはゲルに移動する他の形態のエネルギーは、上記のゲルの特性を劣化できる。   That is, the permeability of the membrane allows macromolecules or cells to enter and pass through the gel. For example, cholesterol, clotting factors, and water pass through the gel to reach the lipid bilayer, or other subendothelial cell location. Furthermore, ionic strength, fluid pressure, heat, osmotic pressure, or other forms of energy transferred to the gel can degrade the properties of the gel.

このような侵入の結果、追加効果としてアルギニンの転置と酸化窒素の生成低下が起こる。侵入により、ゲル内にあるアルギニンおよび他分子に関するヘパリンの結合能力は制限を受ける。   As a result of such intrusion, arginine transposition and nitric oxide production decrease occur as additional effects. Invasion limits the ability of heparin to bind to arginine and other molecules in the gel.

更に、ある作用メカニズムと結びつけられてはいないが、膵臓島細胞のＬＤＬレセプターはＬＤＬを取り込み、それが炎症および組織因子（動脈内のプラークに類似）の産生をもたらす。海藻抽出物内の硫酸化多糖類は、内皮細胞および動脈細胞マトリックスにおける場合と同様に、膵臓細胞膜および細胞間マトリックスにおける炎症および組織因子が誘発する凝固を抑制すると考えられている。従って、硫酸化された海藻抽出物は,１型および２型糖尿病に伴う進行性の島細胞損傷およびインスリン欠乏症を防止する。   Furthermore, although not linked to a mechanism of action, the LDL receptor of pancreatic islet cells takes up LDL, which leads to the production of inflammation and tissue factor (similar to plaques in arteries). Sulfated polysaccharides in seaweed extracts are thought to suppress inflammation and tissue factor-induced clotting in pancreatic cell membranes and intercellular matrices, as in endothelial and arterial cell matrices. Thus, sulfated seaweed extracts prevent progressive islet cell damage and insulin deficiency associated with type 1 and type 2 diabetes.

アルギニンおよび／またはヘパリンの除去によるゲルマトリックスの破壊を回復するために、本発明は海藻抽出物中の多糖類（藻類多糖類）を使用してゲルマトリックスおよびその機能性を維持および新生させる。これら藻類多糖類は、ラムノース、キシロース、ガラクトースおよびマンノースからなる群より選択される。この点に関して、本発明で使用する海藻抽出物の多糖類は、特にラムノースに富み、最適な細孔閉鎖と安定性、および結合部位の数と分布を与えるが、この時信号伝達作用、抗増殖作用、細胞表面の抗血栓症作用、および抗炎症作用は維持される。このようにして、ヘパリン、アルギニンおよび、上述の組成物から生ずる上記組成物である帯電ポリマー−高帯電ペプチド−水ゲルマトリックスの恒常性促進機能は、細胞ドメインに対する継続的かつ累積的な変化および損傷を阻止する。この抑制作用により、一般に「動脈プラーク」と呼ばれるコレステロール蓄積を最小限に抑えることができる。   In order to recover the destruction of the gel matrix by removal of arginine and / or heparin, the present invention uses polysaccharides (algal polysaccharides) in seaweed extracts to maintain and regenerate the gel matrix and its functionality. These algal polysaccharides are selected from the group consisting of rhamnose, xylose, galactose and mannose. In this regard, the seaweed extract polysaccharide used in the present invention is particularly rich in rhamnose and provides optimal pore closure and stability, as well as the number and distribution of binding sites. The action, cell surface antithrombotic action, and anti-inflammatory action are maintained. In this way, the homeostasis-promoting function of heparin, arginine and the above composition resulting from the above composition, the charged polymer-highly charged peptide-water gel matrix, is a continuous and cumulative change and damage to the cellular domain. To prevent. This inhibitory action can minimize cholesterol accumulation, commonly referred to as “arterial plaque”.

海藻抽出物の投与は、リポ蛋白の増加、リパーゼおよび組織因子経路阻害剤の放出を誘発し、プラークの安定性、増殖、破壊および退縮に有益な効果を示す。   Administration of seaweed extract induces increased lipoprotein, lipase and tissue factor pathway inhibitor release, and has beneficial effects on plaque stability, growth, destruction and regression.

硫酸化ラムノース多糖類、ラムナン硫酸のゲルシステムへの添加は、ゲルマトリックス中のヘパリンおよびアルギニン双方の機能性を保護する。細胞外媒体では、ヘパリンの分子結合および静止能は、ラムナン硫酸の同時添加により増大し、この時ラムナン硫酸は細胞外にある潜在的侵入分子と結合し、それによってゲル内の帯電したポリマーをゲル内のアルギニンと結合させる。   Addition of the sulfated rhamnose polysaccharide, rhamnan sulfate, to the gel system protects the functionality of both heparin and arginine in the gel matrix. In extracellular media, heparin's molecular binding and resting ability is increased by the simultaneous addition of rhamnan sulfate, which binds to potentially invading molecules outside the cell, thereby causing the charged polymer in the gel to gel. It is combined with arginine inside.

アルギニンから生成される酸化窒素は、重要な生理学的メディエイタである。酸化窒素産生を担う酵素である酸化窒素シンターゼは、ＣＡ＋＋およびカルモジュリンを必要とする。ヘパリン−アルギニンゲルの機能性は、ＣＡ＋＋とカルモジュリンの結合と制御を含む。カルモジュリン活性を制御することにより、ラムナン硫酸は、帯電ポリマー−アルギニンゲルに作用し、酸化窒素産生を担う酸化窒素シンターゼの活性を制御する。   Nitric oxide produced from arginine is an important physiological mediator. Nitric oxide synthase, the enzyme responsible for nitric oxide production, requires CA ++ and calmodulin. Heparin-arginine gel functionality includes the binding and regulation of CA ++ and calmodulin. By controlling calmodulin activity, rhamnan sulfate acts on the charged polymer-arginine gel and controls the activity of nitric oxide synthase responsible for nitric oxide production.

アルギニンは酸化窒素産生に関し、窒素ドナーとして機能する。しかしながら、場合により、アルギニンに代ってリジンが窒素ドナーとして使用されることは、知られている。少量のアルギニン用量と同等の効果を得るには、多量のリジンが必要とされる。その他酸化窒素ドナーも、場合により使用できる。   Arginine functions as a nitrogen donor for nitric oxide production. However, it is known that in some cases lysine is used as a nitrogen donor instead of arginine. A large amount of lysine is required to obtain the same effect as a small arginine dose. Other nitric oxide donors can be used in some cases.

帯電ポリマー−アルギニン−水ゲル内での水、小さなアニオンおよびカチオンの結合は、帯電したポリマー内にある糖類の環状構造が本来持つパイ結合特性により、促進される。共有電子密度の変化および電荷変動は、ゲルポリマーの溶媒化および立体配座を制御している。このように、小さなアニオンおよびカチオン結合は、溶媒化状態、水の触媒特性および加水分解特性、およびゲルの水とその他の分子とを結合させる能力のそれぞれに変化をもたらす。海藻抽出物由来の低分子量〜高分子量のラムノース、好適には高硫酸化されたラムノースが好ましく用いられる。   The binding of water, small anions and cations in the charged polymer-arginine-water gel is facilitated by the pi-binding properties inherent in the cyclic structure of sugars in the charged polymer. Changes in the shared electron density and charge fluctuations control the solvation and conformation of the gel polymer. Thus, small anion and cation linkages change each of the solvation state, the catalytic and hydrolysis properties of water, and the ability of the gel to bind water to other molecules. A low to high molecular weight rhamnose derived from a seaweed extract, preferably a highly sulfated rhamnose is preferably used.

内皮細胞の損傷および膵臓細胞の損傷は、自由ラジカルによって引き起こされる。ヘパリンは、スパーオキシドジスムターゼに結合し、高エネルギー電子を吸収して自由ラジカルを非活性化させる。ラムナン硫酸、ヘパリン、および酸化窒素は自由ラジカルと結合して、膵臓細胞や内皮細胞を含む多様なタイプの細胞への損傷を防止する。   Endothelial cell damage and pancreatic cell damage are caused by free radicals. Heparin binds to superoxide dismutase and absorbs high energy electrons to deactivate free radicals. Rhamnan sulfate, heparin, and nitric oxide combine with free radicals to prevent damage to various types of cells, including pancreatic cells and endothelial cells.

２型糖尿病は、部分的には膵臓細胞に対する自由ラジカルによる損傷に起因している。ラムナン硫酸、ヘパリン、スーパーオキシドジスムターゼおよび酸化窒素は、全て自由ラジカルを攻撃し、中和することから、自由ラジカルによる細胞傷害と関連する病気は、本発明により効果的に治療および予防できる。またラムナン硫酸は、内因性ヘパリンの産生を促進して損傷組織の再構成を助け、さらに細胞外マトリックスのタンパク質の蓄積、例えばフィブロネクチンと複合体を形成して、これを排除し、結果として臓器の栄養過多状態を逆転または最小限化する。ラムナン硫酸は、内皮細胞表面に対する傷害に続く内皮細胞の再生を促進する。   Type 2 diabetes is due in part to free radical damage to pancreatic cells. Since rhamnan sulfate, heparin, superoxide dismutase and nitric oxide all attack and neutralize free radicals, diseases associated with free radical cytotoxicity can be effectively treated and prevented by the present invention. Rhamnan sulfate also promotes the production of endogenous heparin to help reorganize damaged tissues, and further eliminates the accumulation of proteins in the extracellular matrix, such as complexing with fibronectin, resulting in organ Reverse or minimize overnutrition. Rhamnan sulfate promotes endothelial cell regeneration following injury to the endothelial cell surface.

抽出方法
乾燥した緑藻（ヒトエグサ‐Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ Ｎｉｔｉｄｕｍ）を10倍量の水の中で、室温で１時間膨潤させた。続いて膨潤した緑藻をすり潰し、沸騰した水槽内で２時間還流した。この水抽出物を30分間遠心分離（４５００ｇ）し、凍結乾燥により非透析分画の水溶性多糖類を得た。 Extraction Method Dried green algae (Human Exa-Monostroma Nitridum) were swollen in 10 times the amount of water at room temperature for 1 hour. Subsequently, the swollen green algae were ground and refluxed in a boiling water bath for 2 hours. This water extract was centrifuged (4500 g) for 30 minutes, and the non-dialyzed water-soluble polysaccharide was obtained by freeze-drying.

上述の粗多糖類を水に溶解してからＤＥＡＥ−セルロース（Ｗａｈｔｍａｎ ＤＥ−５２）カラム（２．４×１００ｃｍ）にかけた。フェノール−硫酸検出によって完全に除かれたと判定されるまで、デンプンまたは中性多糖類を連続して水溶出を行い除去した。その後、ＫＣＬのイオン強度を０．５、０．７および２．０ Ｍに段階的に変更して酸性多糖類を分画し、それから各分画を脱塩して凍結乾燥した。０．５5 Ｍ ＫＣＬ分画（主要分画）の連続精製を、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ−６５（ｆｉｎｅ）カラム（１．２×１００ｃｍ）のゲル濾過クロマトグラフィーを用いて実行した。サンプルを、水を用い、流量０．４ ｍｌ／分で溶出した。これらの複合多糖類を抽出する手順またはその変形は、周知である。   The above-mentioned crude polysaccharide was dissolved in water and applied to a DEAE-cellulose (Whtman DE-52) column (2.4 × 100 cm). The starch or neutral polysaccharide was continuously removed by water elution until it was determined to be completely removed by phenol-sulfuric acid detection. Thereafter, the ionic strength of KCL was changed stepwise to 0.5, 0.7 and 2.0 M to fractionate acidic polysaccharides, and each fraction was then desalted and lyophilized. Continuous purification of 0.55 M KCL fraction (major fraction) was performed using gel filtration chromatography on a Toyopearl HW-65 (fine) column (1.2 x 100 cm). The sample was eluted with water at a flow rate of 0.4 ml / min. Procedures for extracting these complex polysaccharides or variations thereof are well known.

海藻抽出物の組成分析
グリコシル組成（多糖類組成）
グリコシル組成分析は、酸性メタノリシスによりサンプルから生成された単糖類メチルグルコシドのｐｅｒ−Ｏ−トリメチルシリル（ＴＭＳ）誘導体を、ガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ／ＭＳ）の組合せで行った。 Composition analysis of seaweed extract
Glycosyl composition (polysaccharide composition)
The glycosyl composition analysis was performed on a per-O-trimethylsilyl (TMS) derivative of the monosaccharide methyl glucoside produced from the sample by acidic methanolysis using a combination of gas chromatography / mass spectrometry (GC / MS).

メチルグリコシドは、まず１M ＨＣｌの８０℃のメタノール液（１８〜２２時間）でメタノリシスし、続いてメタノール液の中でピリジンおよび無水酢酸を再Ｎ−アセチル化して（アミノ糖を検出するため）、乾燥サンプルから調製した。次にサンプルを８０℃のＴｒｉ−Ｓｉｌ（Ｐｉｅｒｃｅ）で処理して（０．５5時間）ｐｅｒ−Ｏ−トリメチルシリル化した。これらの手順は、前述した通りに実行した（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２３０：１〜１５；Ｙｏｒｋ Ｗ．Ｓ．、Ｄａｒｖｉｌｌ， Ａ．Ｇ．，ＭｃＮｅｉｌ、 Ｍ．，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ， Ｔ．Ｔ．、およびＡｌｂｅｒｓｈｅｌｍ， Ｐ．（１９８５年） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．118：3~40）。ＴＭＳメチルグリコシドのＧＳ／ＭＳ分析は、５９７０ ＭＳＤとインターフェイスで接続されたＨＰ ５８９０ ＧＣで、Ａｌｌ Ｔｅｃｈ ＥＣ−１溶融シリカキャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ ＩＤ）を用いて行った。   The methyl glycoside is first methanolized with 1M HCl in 80 ° C. methanol (18-22 hours), followed by re-N-acetylation of pyridine and acetic anhydride in the methanol (to detect amino sugars). Prepared from dried samples. Samples were then treated with Tri-Sil (Pierce) at 80 ° C. (0.55 hours) for per-O-trimethylsilylation. These procedures were performed as previously described (Methods Enzymol. 230: 1-15; York WS, Darville, AG, McNeil, M., Stevenson, TT, and Alberthelm, P.) (1985) Methods Enzymol. 118: 3-40). GS / MS analysis of TMS methyl glycosides was performed on an HP 5890 GC interfaced with a 5970 MSD using an All Tech EC-1 fused silica capillary column (30 m × 0.25 mm ID).

海藻抽出物のベンチトップ試験では、約９０％〜９７％のラムノースと、約０％〜４．５％のキシロースを得た。海藻抽出物は、約６３モル％〜７８モル％のラムノースを含む。海藻抽出物は、約６．５モル％〜９．２モル％のキシロースを含む。この海藻抽出物中に存在するラムノースおよびキシロースの量の比率は、およそキシロース１に対しラムノース１２からキシロール１に対しラムノース８の間である。   Benchtop testing of seaweed extract yielded about 90% to 97% rhamnose and about 0% to 4.5% xylose. The seaweed extract contains about 63 mol% to 78 mol% rhamnose. The seaweed extract contains about 6.5 mol% to 9.2 mol% xylose. The ratio of the amount of rhamnose and xylose present in this seaweed extract is approximately between rhamnose 12 for xylose 1 and rhamnose 8 for xylol 1.

−インビボ研究
海藻抽出物由来の多糖類であるラムナン硫酸を、実施例１に記述したように調製し、細胞表面の抗血栓症活性について、以下に記述するように試験した。ラムナン硫酸は、水で２０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。Ｌ−アルギニンを利用する実験では、Ｌ−アルギニンカプセルを開き、その中身を水で、４時間試験については３００ｍｇ／ｍｌ、２８日試験については１５０ｍｇ／ｍｌになるよう溶解した。L−アルギニンがラムナン硫酸と共有結合して生理学的に許容されるラムナン硫酸塩を形成するラムナン硫酸−アルギニン複合体（ＲＳ−ＬＲ）を、水で２０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌおよび０．３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。ウシ軟膏低分子ヘパリン、１５０単位／ｍｇ、ロット番号ＺＸ３２０をＵｐｊｏｈｎ Ｌｔｄより得た。ヘパリンは、水で２０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。 -In vivo study A rhamnan sulfate, a polysaccharide from seaweed extract, was prepared as described in Example 1 and tested for cell surface antithrombotic activity as described below. Rhamnan sulfate was dissolved in water at concentrations of 20 mg / ml, 10 mg / ml and 5 mg / ml. In experiments utilizing L-arginine, L-arginine capsules were opened and their contents were dissolved in water to 300 mg / ml for the 4-hour test and 150 mg / ml for the 28-day test. A rhamnan sulfate-arginine complex (RS-LR), in which L-arginine is covalently bound to rhamnan sulfate to form a physiologically acceptable rhamnan sulfate, is dissolved in water at 20 mg / ml, 10 mg / ml, 3 mg / ml and Dissolved to a concentration of 0.3 mg / ml. Bovine ointment low molecular weight heparin, 150 units / mg, lot number ZX320 was obtained from Upjohn Ltd. Heparin was dissolved in water to a concentration of 20 mg / ml.

１０２匹の雄のウィスターラット（Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔ）、体重３１２±６４ｇ（±標準偏差）を、カナダ生物学学会（Ｃａｎaｄｉａｎ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ）が定めた動物飼育規則（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）に従って取扱い、飼育した。動物は処理前に一晩絶食させ、バルビツールおよびメトキシフルランで麻酔してから実験にかけた。   102 male Wistar rats, weighing 312 ± 64 g (± standard deviation) are handled and raised according to the Animal Care Rules established by the Canadian Federation of Biological Associates (Principles of Animal Care). did. Animals were fasted overnight prior to treatment and anesthetized with barbiturate and methoxyflurane prior to experimentation.

ラムナン硫酸７．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇを、それぞれ５匹、２０匹および５匹／群のラットに投与した。ラムナン硫酸（７．５ｍｇ／ｋｇ）にアルギニン（１１２．５ｍｇ／ｋｇ）を加えたものを５匹のラットに投与した。ラムナン硫酸−アルギニン複合体、４ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇを、２０匹／群のラットに投与した。ラムナン−アルギニン複合体は、毎日質量を測定し直した。全ての群および投与した化合物を表１に示す。１日当たり６〜８8匹のラットを処理した。胃管に食塩水０．２ｍｌを入れ、次にラットの体重に応じて、ラムナン硫酸溶液０．０９〜０．１８ｍｌ、またはアルギニン溶液０．１ｍｌを入れた。このようにして、胃管を胃の中に入れると、まず薬物が胃の中に導入され、続いて食塩水が導入されて総量約０．４ｍｌとなった。ヘパリン単独群では、ヘパリンを０．１〜０．２ｍｌ量投与してから、食塩水０．２ｍｌを投与した。対照群は食塩水のみを投与した。   Rhamnan sulfate 7.5 mg / kg, 4 mg / kg and 2 mg / kg were administered to 5, 20 and 5 / group rats, respectively. Rhamnan sulfate (7.5 mg / kg) plus arginine (112.5 mg / kg) was administered to 5 rats. Rhamnan sulfate-arginine complex, 4 mg / kg, 1 mg / kg and 0.1 mg / kg were administered to 20 rats / group of rats. The rhamnan-arginine complex was reweighed daily. All groups and administered compounds are shown in Table 1. Six to eighty-eight rats were treated per day. The stomach tube was filled with 0.2 ml of saline, and then 0.09 to 0.18 ml of a rhamnan sulfate solution or 0.1 ml of an arginine solution depending on the body weight of the rat. In this way, when the gastric tube was placed in the stomach, the drug was first introduced into the stomach and then saline was introduced to a total volume of about 0.4 ml. In the heparin alone group, 0.1 to 0.2 ml of heparin was administered, and then 0.2 ml of saline was administered. The control group received saline alone.

血栓症試験
血栓症試験は、Ｂｌａｋｅらにより改良された手順により実施した。４時間処理した動物では、露出させた血管外膜表面に１０％ホルマリンの６５％メタノール液を作用させて、右頚静脈に血栓を起こした。その直後に胃管を使って胃内に薬剤を導入した。血栓誘発後４時間目に、再度動物に深い麻酔をかけ、外部の出血の兆候を調べた。頚静脈を露出して、綿球を使って血栓の存在を調べた。血管が遮断されており、綿球を使った検査でも遮断されたままの場合、血栓には＋（ハードクロット（hard clot））のスコアを付けた。検査の初見では血管が完全に遮断されており、検査時に血管が開いた場合は、血栓には＋／−（ソフトクロット（soft clot））のスコアを付けた。血液が血管内を自由に流れている場合には、血栓には−（陰性）のスコアを付けた。 Thrombosis test The thrombosis test was performed according to a procedure modified by Blake et al. In animals treated for 4 hours, a 65% methanol solution of 10% formalin was allowed to act on the exposed adventitia surface to cause a thrombus in the right jugular vein. Immediately thereafter, the drug was introduced into the stomach using a gastric tube. Four hours after thrombus induction, the animals were again deeply anesthetized and examined for signs of external bleeding. The jugular vein was exposed and the presence of a thrombus was examined using a cotton ball. Thrombus was scored as + (hard clot) if the vessel was blocked and remained blocked in the cotton ball test. At the first look of the test, the blood vessels were completely blocked, and if the blood vessels opened at the time of the test, the thrombus was scored +/- (soft clot). Thrombus was scored as negative (-) when blood flowed freely within the blood vessel.

血液および血管の採取
頚静脈の検査直後に、開腹術を行い、血液サンプル約１０ｍｌ（３．８％クエン酸ナトリウム１に対し血液９の割合）を腹部大動脈より採取し、血漿を調製した。内皮細胞源として、胸部大動脈または大静脈を除去して食塩水内に入れた。それぞれの動物について、内出血の兆候を調べ、体腔内で血液が凝固した時間を記録した。 Collection of blood and blood vessels Immediately after the examination of the jugular vein, a laparotomy was performed, and about 10 ml of blood sample (ratio of blood 9 to 3.8% sodium citrate 1) was collected from the abdominal aorta to prepare plasma. As an endothelial cell source, the thoracic aorta or vena cava was removed and placed in saline. Each animal was examined for signs of internal bleeding and the time of blood clotting within the body cavity was recorded.

内皮細胞の回収
内皮細胞を、ＨｉｅｂｅｒｔとＪａｑｕｅｓの方法に従って、血管より除去した。血管を切開し、内腔側を上にして歯科用ワックスに留め、Ｌｏｃｋｅ液で洗浄した。セルロースアセテート紙を内腔表面に押しつけ、持ち上げると内皮細胞が剥がれた。痕跡の長さと幅をｍｍ単位で測定した。 Endothelial cell recovery Endothelial cells were removed from blood vessels according to the method of Hiebert and Jaques. The blood vessel was incised and fixed to dental wax with the lumen side up, and washed with Locke solution. When cellulose acetate paper was pressed against the lumen surface and lifted, the endothelial cells were detached. Trace length and width were measured in mm.

内皮細胞内でのヘパリン様化合物の判定
冷アセトン中に溶解してから、遠心分離を行い、上清を廃棄して、セルロースアセテート紙を内皮細胞から取り除いた。沈殿物を、プロナーゼ（４０ｍｇ／ｍｌのトリス緩衝液、１０μｌ）で消化して更に処理した。次に、サンプルを１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を集め、２６．８％ＮａＣｌ、１００ｕＬで沈殿物を２回洗浄し、これを上清に加えた。グリコサミノグリカン（ＧＡＧｓ）を、上清から５倍量のメタノールを用いて沈殿させ、その沈殿物を乾燥させた。既報の方法に従い、アガロスゲル電気泳動を使用して、内皮細胞抽出物中のラムナン硫酸を同定し測定した。乾燥粉末を好適量の水で溶解し、比較用として使用し投与したラムナン硫酸と共にアガロースゲルスライドにかけた。電気泳動後、ゲルは0.1％臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム内に固定し、風乾した。スライドを０．０４％トルイジンブルーの８０％アセトン溶液で染色し、背景色を１％酢酸で除去した。ヘパリンは、デンシトメトリーによって判定した対照物質よび量と比較して、電気泳動の移動度を同定した。 Determination of heparin-like compound in endothelial cells After dissolving in cold acetone, centrifugation was performed, the supernatant was discarded, and the cellulose acetate paper was removed from the endothelial cells. The precipitate was further processed by digestion with pronase (40 mg / ml Tris buffer, 10 μl). The sample was then centrifuged at 10,000 rpm for 10 minutes, the supernatant collected, the precipitate washed twice with 26.8% NaCl, 100 uL, and added to the supernatant. Glycosaminoglycans (GAGs) were precipitated from the supernatant using 5 times the amount of methanol, and the precipitates were dried. According to a previously reported method, agaros gel electrophoresis was used to identify and measure rhamnan sulfate in endothelial cell extracts. The dry powder was dissolved in a suitable amount of water and applied to an agarose gel slide with rhamnan sulfate used for comparison. After electrophoresis, the gel was fixed in 0.1% hexadecyltrimethylammonium bromide and air dried. Slides were stained with 80% acetone solution of 0.04% toluidine blue and the background color was removed with 1% acetic acid. Heparin identified electrophoretic mobility compared to control substance and amount as determined by densitometry.

統計的分析
血栓症データは信頼区間９５%で表示してある。比率間の差のχ二乗検定は、血栓症総発生率とハードクロットの発生率を群間で比較するために使用した。他のデータは平均値±標準誤差で表示してある。血漿凝固テストおよび尿中ヘパリン様濃度を検査した時の群間差を比較するためにTukeysポストホックテストによる１元配置分散分析を使った。 Statistical analysis Thrombosis data are displayed with a 95% confidence interval. A chi-square test of the difference between ratios was used to compare the total incidence of thrombosis and the incidence of hard clots between groups. Other data are expressed as mean ± standard error. A one-way analysis of variance with Tukeys post-hoc test was used to compare differences between groups when examining plasma clotting tests and urinary heparin-like concentrations.

図1に示すように、２mg/kgの場合を除いてラムナン硫酸のみを経口服用したものすべてに抗血栓症作用が認められた。さらに、アルギニンをラムナン硫酸に添加した場合や、ラムナン硫酸をアルギニンと複合体形成した場合にも、抗血栓症作用が認められた。ラムナン硫酸２mg/kgの場合は、有意とまでは言えないものの、対照に対するハードクロットには顕著な低下傾向が見られた。ラムナン硫酸のみの場合も、ラムナン硫酸をアルギニンと複合体形成した場合も、明らかな投薬反応が認められた。４mg/kgの化合物で比較した際、ハードクロット発生率が低下することを見てもわかるように、ラムナン硫酸アルギニン複合体は、ラムナン硫酸のみよりも抗血栓剤として顕著に高い効果を示した。さらに、ラムナン硫酸のみ２mg/kgと比較すると、ラムナン硫酸アルギニン複合体１mg/kgにおけるハードクロット発生率および血栓症総発生率は低かった。   As shown in FIG. 1, antithrombotic action was observed in all the oral doses of rhamnan sulfate except for 2 mg / kg. Furthermore, an antithrombotic effect was also observed when arginine was added to rhamnan sulfate or when rhamnan sulfate was complexed with arginine. In the case of rhamnan sulfate 2 mg / kg, although not significantly significant, the hard clot relative to the control showed a marked decrease. A clear dosing response was observed both with rhamnan sulfate alone and when rhamnan sulfate was complexed with arginine. The rhamnan sulfate arginine complex showed a significantly higher effect as an antithrombotic agent than rhamnan sulfate alone, as can be seen from the decrease in the incidence of hard clot when compared with the 4 mg / kg compound. Furthermore, when compared with 2 mg / kg of rhamnan sulfate alone, the incidence of hard clot and total thrombosis at 1 mg / kg of rhamnan sulfate arginine complex was low.

図１および図２は、非低分子ヘパリンを経口投与した場合と比較した、ラムナン硫酸またはラムナン硫酸およびアルギニンを経口投与した場合の抗血栓症活性を示す。エラーバーは、９５%信頼区間を示す。上側バーは総クロットを示す。下側バーはハードクロットを示す。RS + LRは７．５mg/kg ラムナン硫酸+１１２．５mg/kgアルギニンである。RS-LRは７．５mg/kg ラムナン硫酸アルギニン複合体である。バーの中の数字は、群ごとのラット数である。   FIG. 1 and FIG. 2 show the antithrombotic activity when rhamnan sulfate or rhamnan sulfate and arginine are administered orally compared to when non-low molecular weight heparin is administered orally. Error bars indicate 95% confidence intervals. The upper bar shows the total clot. The lower bar indicates a hard clot. RS + LR is 7.5 mg / kg rhamnan sulfate + 112.5 mg / kg arginine. RS-LR is a 7.5 mg / kg rhamnan arginine sulfate complex. The numbers in the bar are the number of rats per group.

血漿中濃度
ラムナン硫酸群は、すべての投薬量でAPTTまたはHeptest（表２）においては顕著な効果を示さなかった。ラムナン硫酸のみまたはアルギニンと複合体化した場合は、抗Xaまたは抗IIa活性に対する効果は、わずかであるか、全くなかった。 Plasma concentrations The rhamnan sulfate group had no significant effect on APTT or Heptest (Table 2) at all dosages. When rhamnan sulfate alone or complexed with arginine, there was little or no effect on anti-Xa or anti-IIa activity.

ラムナン硫酸のみの場合は、ラムナン硫酸アルギニン複合体よりも、やや抗Xa活性が高かった。ラットの血漿で抗Xa活性を測定すると、ラムナン硫酸またはラムナン硫酸アルギニン複合体を投与したラットの中には、血漿サンプルの光学的濃度の低下が見られた。(データ不表示)。動物に、出血または失血の痕跡は認められなかった。   The rhamnan sulfate alone had slightly higher anti-Xa activity than the rhamnan sulfate arginine complex. When anti-Xa activity was measured in rat plasma, there was a decrease in the optical concentration of plasma samples in rats administered rhamnan sulfate or rhamnan sulfate arginine complex. (Data not shown). There were no signs of bleeding or blood loss in the animals.

また、ラムナン硫酸様物質は、大動脈および大静脈内皮細胞双方に認められた。すべての化合物を投与した場合、大静脈の濃度は大動脈よりも高かった。(表３)（ P< ０．００００３片側t検定）ラムナン硫酸またはラムナン硫酸-アルギニンの投与後の大静脈濃度を見ると、投与効果は明らかである。ラムナン硫酸アルギニンの経口投与後に、ラムナン硫酸の大動脈濃度にも同様の投薬効果が認められたが、ラムナン硫酸のみの投与では認められなかった。ラムナン硫酸４mg/kgの場合は、大動脈濃度ではなく、大静脈濃度により高い濃度が認められ、ラムナン硫酸-アルギニン複合体の場合には、認められなかった。   In addition, rhamnan sulfate-like substance was found in both aorta and vena cava endothelial cells. When all compounds were administered, the vena cava concentration was higher than the aorta. (Table 3) (P <0.00003 one-sided t-test) The effect of administration is evident when looking at the vena cava concentration after administration of rhamnan sulfate or rhamnan sulfate-arginine. A similar dosing effect was observed in the aortic concentration of rhamnan sulfate after oral administration of rhamnan sulfate arginine, but not with rhamnan sulfate alone. In the case of rhamnan sulfate 4 mg / kg, not the aorta concentration but higher concentration was observed in the vena cava concentration, and in the case of rhamnan sulfate-arginine complex, it was not observed.

ラムナン硫酸様物質は、4時間に渡って蓄積された尿および便からも回収された。ラムナン硫酸-アルギニン複合体として投与するよりも、ラムナン硫酸のみで投与後に、回収された量と濃度を見ると、それらはより多く尿内に排出されていることがわかった。回収量は、ラムナン硫酸-アルギニン複合体に対するラムナン硫酸単剤の場合の投薬量のそれぞれ３．０±０．４および１．６±０．４ (平均値±標準誤差)％ であった。   Rhamnan sulfate-like material was also recovered from urine and feces accumulated over 4 hours. Rather than being administered as a rhamnan sulfate-arginine complex, the amount and concentration recovered after administration with rhamnan sulfate alone was found to be more excreted in the urine. The recoveries were 3.0 ± 0.4 and 1.6 ± 0.4 (mean ± standard error)% of the dosage for rhamnan sulfate alone versus rhamnan sulfate-arginine complex, respectively.

便から回収された量も、ラムナン硫酸単剤で投与した場合の方が、ラムナン硫酸-アルギニン複合体で投与した場合に対してより多かった。投薬効果は明白であった。ラムナン硫酸単剤の場合対ラムナン硫酸-アルギニン複合体の回収量は、それぞれ投与量の１３．７ ±４．４％および６．１ ±１．９％(平均値 ±標準誤差)であり、 これらの差は顕著なものではなかった。   The amount recovered from the stool was also greater when administered with rhamnan sulfate alone than when administered with rhamnan sulfate-arginine complex. The dosing effect was obvious. In the case of rhamnan sulfate alone, the recovered amounts of rhamnan sulfate-arginine complex were 13.7 ± 4.4% and 6.1 ± 1.9% (average value ± standard error) of the dose, respectively. The difference was not significant.

一般に、結果からラムナン硫酸は、血漿抗凝固活性の明白な上昇を伴わずに血管表面抗血栓症活性をもたらすことを示している。ハードクロットおよびソフトクロットは、損傷した血管内腔から形成され、放射状に血管内腔の内部まで伸長するが、上述の標準血漿凝固テストで測定した結果、血漿凝固活性にはほとんど、あるいは全く変化はなかった。従って、ラムナン硫酸は血管内面の血栓形成防止には有効であるが、患者に「血友病者」または顕著な大量出血の危険性を宣告するような血漿抗凝固活性の上昇は見られなかった。   In general, the results show that rhamnan sulfate provides vascular surface antithrombotic activity without an apparent increase in plasma anticoagulant activity. Hard clots and soft clots are formed from damaged vessel lumens and extend radially into the vessel lumen, but there is little or no change in plasma clotting activity as measured by the standard plasma clotting test described above. There wasn't. Thus, although rhamnan sulfate is effective in preventing thrombosis on the inner surface of blood vessels, it did not show an increase in plasma anticoagulant activity that would declare patients “hemophilia” or a significant risk of massive bleeding. .

結果より、処理をしない対照群では食塩水は血栓症に無効で、血栓症発生率は約９０%であり、このうち非常に高いパーセンテージを占めていたのはハードクロットであった。ヘパリンは抗凝固剤として一般に使われているが、７．５ mg/kgでは血栓症の総発生率にほとんど、または全く効果がなかったが、ハードクロットの発生率は減少した。反対に、ラムナン硫酸を同じ７．５mg/kg投与した場合は、血栓症発生率は顕著に減少し、ハードクロットはほとんど、または全く認められなかった。   From the results, saline was ineffective in thrombosis in the untreated control group, and the incidence of thrombosis was about 90%, of which hard clots accounted for a very high percentage. Heparin is commonly used as an anticoagulant, but 7.5 mg / kg had little or no effect on the total incidence of thrombosis, but the incidence of hard clots decreased. Conversely, when rhamnan sulfate was administered at the same dose of 7.5 mg / kg, the incidence of thrombosis was significantly reduced and little or no hard clot was observed.

ラムナン硫酸の投与量を４mg/kgおよび２mg/kgまで減らすと、血栓症発生率は増加し、投与量７．５ mg/kgからハードクロットは再び発生した。
図2は、再び対照群と一般に構造が知られているラムナン硫酸とL-アルギニンの同時投与の場合とを比較している。RS+LRはラムナン硫酸の同時投与である。RS-LRはラムナン硫酸塩とアルギニンの化合物である。図3はその化学構造である。グループ６、 RS + LR、７．５mg/kgでは、ラムナン硫酸単剤の場合と血栓症発生率およびハードクロットの非発生率にほとんど差がなかった。しかしながら、グループ７、 RS-LR化合物、４mg/kgの場合、硫酸塩のみ４mg/kgの場合と比較すると、血栓症総発生率は顕著に低く、ハードクロットも減少した。 グループ８、LS-LR化合物１mg/kgの場合でさえ、ラムナン硫酸４mg/kgの場合よりも、血栓症およびハードクロット発生率がわずかに減少を示した。 When the rhamnan sulfate dose was reduced to 4 mg / kg and 2 mg / kg, the incidence of thrombosis increased and hard clots reappeared from the dose of 7.5 mg / kg.
FIG. 2 again compares the control group with the commonly administered rhamnan sulfate and L-arginine co-administration. RS + LR is co-administration of rhamnan sulfate. RS-LR is a compound of rhamnan sulfate and arginine. Figure 3 shows its chemical structure. In group 6, RS + LR, 7.5 mg / kg, there was little difference in the incidence of thrombosis and non-occurrence of hard clots compared with rhamnan sulfate alone. However, in Group 7, RS-LR compound, 4 mg / kg, the total incidence of thrombosis was significantly lower and hard clots were reduced compared to sulfate alone, 4 mg / kg. Even with group 8, LS-LR compound 1 mg / kg, there was a slight decrease in the incidence of thrombosis and hard clot than with rhamnan sulfate 4 mg / kg.

結果は、ラムナン硫酸単剤の場合、血栓症発生率およびハードクロットの数の低減にヘパリンよりも有効であることを示している。 さらに、血液抗凝固活性の目立った上昇はなかった。血漿抗凝固活性を上昇させることが知られるヘパリンとは逆に、これは一層望ましい効果を示している。従って、内皮障害、特に心血管疾患、さらにアテローム硬化症および動脈硬化症の治療において、ラムナン硫酸の使用は望ましいと言える。第２の結果として、ラムナン硫酸塩-アルギニン化合物は、ラムナン硫酸単剤の同一量投与よりも血栓症およびハードクロットの発生率を低減するのに一層効果的である。   The results show that rhamnan sulfate alone is more effective than heparin in reducing the incidence of thrombosis and the number of hard clots. Furthermore, there was no significant increase in blood anticoagulant activity. In contrast to heparin, which is known to increase plasma anticoagulant activity, this shows a more desirable effect. Thus, the use of rhamnan sulfate is desirable in the treatment of endothelial disorders, particularly cardiovascular diseases, as well as atherosclerosis and arteriosclerosis. As a second result, the rhamnan sulfate-arginine compound is more effective in reducing the incidence of thrombosis and hard clot than administration of the same amount of rhamnan sulfate alone.

−臨床試験
心血管リスクバイオマーカー
海藻抽出物およびL-アルギニンの化合物が、血管機能と、内皮および心血管機能の指標となる一般に認められた血漿生化学的マーカーに与える影響を評価するために、非盲検、複数投与、投与量増量試験を実施した。 -Clinical trials Cardiovascular risk biomarkers To assess the effects of seaweed extract and L-arginine compounds on vascular function and commonly accepted plasma biochemical markers that are indicative of endothelial and cardiovascular function. An open-label, multiple dose, dose escalation study was conducted.

方法:
健常な被験者(HS)８人：男性8人、年齢３９．９±４．０才、本態性高血圧症患者(HT)8人：男性5人、女性3人、年齢５７．６±４．４才、末梢動脈閉塞症患者(PAOD)８人：男性5人、女性3人、年齢５５．６±５．１才に、３種類の量の新薬候補化合物（３００、６００、１２００ mg）をそれぞれ７日間にわたり６時間絶食後に経口投与した。 Method:
8 healthy subjects (HS): 8 men, age 39.9 ± 4.0 years, 8 patients with essential hypertension (HT): 5 men, 3 women, age 57.6 ± 4.4 8 years old, patients with peripheral arterial occlusion (PAOD): 5 males, 3 females, 55.6 ± 5.1 years old, 3 kinds of new drug candidate compounds (300, 600, 1200 mg) respectively Orally administered after 6 hours fast for 7 days.

結果および生化学的マーカー
選択したマーカーは、心血管リスク評価に関係するものと認められている。それらは高感受性 C-反応性タンパク質(hs-CRP)、 HDL-コレステロール、総コレステロール、LDL-コレステロール、トリグリセリド、および血圧である。これらは広範な臨床検査値のグループの一部である。 Results and biochemical markers The selected markers are recognized as related to cardiovascular risk assessment. They are hypersensitive C-reactive protein (hs-CRP), HDL-cholesterol, total cholesterol, LDL-cholesterol, triglycerides, and blood pressure. These are part of a broad group of laboratory values.

発表済みの信頼できる研究を考慮に入れると、被験者におけるこれらの結果の解釈は、特殊海藻抽出粉末およびL-アルギニン化合物の投与により、めざましい血管保護効果を示した。   Taking into account published and reliable studies, the interpretation of these results in subjects showed a remarkable vascular protective effect with the administration of special seaweed extract powder and L-arginine compound.

高血圧被験者全員、PAOD被験者全員、および健常被験者の数人においては、hs-CRPは標準範囲を超えていた。 ベースラインおよび試験終了時(3週間)には、hs-CRP平均濃度は高血圧群およびPAOD群よりも健常群の方が低かった。   In all hypertensive subjects, all PAOD subjects, and some healthy subjects, hs-CRP was above the standard range. At baseline and at the end of the study (3 weeks), the mean hs-CRP concentration was lower in the healthy group than in the hypertensive and PAOD groups.

図4に示すように、ベースラインから試験終了時までに、全群でhs-CRPは減少した。すべてのhs-CRPの４分位数は、LDLコレステロールレベルにかかわらず、増加した心血管イベントとの相関を示している。   As shown in FIG. 4, hs-CRP decreased in all groups from baseline to the end of the study. All hs-CRP quartiles correlate with increased cardiovascular events regardless of LDL cholesterol levels.

試験中、健常被験者の８７% はhs-CRP の低下(最大４３%の低下)を示し、高血圧被験者の７５%およびPAOD被験者の６２%はhs-CRPの低下を示した。通常の３倍のhs-CRPレベルを有する全試験患者の８０%は、試験中にレベルが低下した。最も高いレベルを有する被験者は、ベースラインレベルに対して最大７０%もの減少を示した。   During the study, 87% of healthy subjects showed a reduction in hs-CRP (up to 43% reduction), 75% of hypertensive subjects and 62% of PAOD subjects showed a reduction in hs-CRP. Eighty percent of all study patients with normal three-fold hs-CRP levels had decreased levels during the study. Subjects with the highest levels showed a reduction of up to 70% over baseline levels.

文献には、hs-CRP が３０−４０%低下すると、心臓発作および脳梗塞のリスクが少なくとも３０%減少することが示されている。   The literature shows that a 30-40% reduction in hs-CRP reduces the risk of heart attack and cerebral infarction by at least 30%.

HDL-コレステロールについては、ほとんどすべての被験者群が標準範囲にあった。しかしながら、各被験者群に上昇が認められた。すべての健常被験者は、試験中にベースライン値に対してHDLレベル上昇が認められた。健常被験者においては、試験中の７日以内に３８%ものHDLレベル上昇が観察された。試験中に、高血圧被験者の半数はHDLレベル上昇(最大２８%の上昇)を示し、PAOD被験者の半分はHDLレベル上昇(最大１５%の上昇)を示した。図５に示すように、試験結果から海藻抽出物および窒素ドナーアルギニンの併用によりHDLは７−８mg/dl上昇した。文献によれば、HDLが１％増加すると心臓発作のような有害な冠動脈イベントのリスクが3％減少することを示しており、このことからリスクはさらに２４％減少することになる。   For HDL-cholesterol, almost all groups of subjects were within the standard range. However, an increase was observed in each subject group. All healthy subjects had elevated HDL levels relative to baseline values during the study. In healthy subjects, an increase in HDL levels of as much as 38% was observed within 7 days of the study. During the trial, half of the hypertensive subjects showed an increase in HDL levels (up to 28% increase) and half of the PAOD subjects showed an increase in HDL levels (up to 15% increase). As shown in FIG. 5, HDL increased by 7-8 mg / dl by the combined use of seaweed extract and nitrogen donor arginine from the test results. The literature indicates that a 1% increase in HDL reduces the risk of adverse coronary events such as heart attacks by 3%, which further reduces the risk by 24%.

総コレステロールについては、 試験を通じて、全群のすべての測定値の大多数は標準範囲を超えていた。第２期で、健常群およびPOAD群は、平均的増加を示し、第３期の終期にかけてやや減少した。第１期を通じて、高血圧群はわずかな平均的増加を示し、第２、第３期で減少し、第１期の終期から第３期の終期にかけて９%の減少を示した。第３期の終期では、高血圧群はPOAD群よりも低かった。   For total cholesterol, the majority of all measurements in all groups exceeded the standard range throughout the study. In the second period, the healthy group and the POAD group showed an average increase and decreased slightly toward the end of the third period. Throughout the first period, the hypertension group showed a slight average increase, decreased in the second and third periods, and decreased by 9% from the end of the first period to the end of the third period. At the end of the third period, the hypertension group was lower than the POAD group.

LDLコレステロールについては、試験を通じて、全被験者での全測定値の約半分が標準範囲を超えていた。試験を通じて健常群およびPAOD群はやや平均増加を示した。図6の総コレステロールの結果に反映されているように、高血圧群は第１期では増加を示し、第２、第３期で減少し、結果的には第１期の終期から第３期の終期までに９%の減少を示した。 第３期の終期において高血圧群はPOADよりも低い値を示した。   For LDL cholesterol, approximately half of all measurements in all subjects exceeded the standard range throughout the study. The healthy group and PAOD group showed a slight average increase throughout the study. As reflected in the result of total cholesterol in FIG. 6, the hypertension group showed an increase in the first period, decreased in the second and third periods, and as a result, from the end of the first period to the third period. It showed a 9% decrease by the end. At the end of the third period, the hypertension group showed a lower value than POAD.

hs-CRPレベルは、LDLレベルよりも心血管イベントの強力な予測因子であることの証明が、益々多く成されている。 しかしながら、hs-CRPとLDLの測定は様々なリスクの高いグループを同定する傾向があるので、これら双方の生物学的マーカーをスクリーニングすれば、どちらか一方のみのスクリーニングに比べて、より適切な診断情報を提供できると考えられる。   There is increasing evidence that hs-CRP levels are a stronger predictor of cardiovascular events than LDL levels. However, because hs-CRP and LDL measurements tend to identify various high-risk groups, screening both of these biological markers is a more appropriate diagnosis than screening one or the other. Information can be provided.

トリグリセリドについては、試験期間を通じて健常被験者のほとんどすべての測定値は正常範囲にあり、高血圧被験者のほとんどすべての測定値は正常範囲を上回っていた。PAOD被験者群では、試験期間を通じて全測定値のほぼ半数は正常範囲を上回っていた。   For triglycerides, almost all measurements in healthy subjects were in the normal range throughout the study period, and almost all measurements in hypertensive subjects were above the normal range. In the PAOD group, almost half of all measurements were above the normal range throughout the study period.

図７に示すように、各被験者群は、第１期の終期に示した平均低下は、健常被験者-１８％、高血圧被験者-１８％、PAOD-８％であった。健常被験者および高血圧被験者はベースラインと比較して第３期の終期に、健常被験者については２％、高血圧被験者については１１％の低下を示した。PAOD被験者は、ベースラインと比較すると第３期の終期に+１０％の上昇を示した。本試験は、この化合物がトリグラセリドを５０mg/dl低下させることを示している。これは、少なくともリスクを２０％減少させることを意味する。   As shown in FIG. 7, in each subject group, the average decrease shown at the end of the first period was 18% for healthy subjects, 18% for hypertensive subjects, and 8% for PAOD. Healthy and hypertensive subjects showed a reduction of 2% for healthy subjects and 11% for hypertensive subjects at the end of the third phase compared to baseline. PAOD subjects showed a + 10% increase at the end of Phase 3 compared to baseline. This study shows that this compound reduces triglacelide by 50 mg / dl. This means at least a 20% reduction in risk.

血管拡張は動脈の正常状態であり、動脈の変形抵抗損傷および異常な平滑筋成長を最小限にとどめる。海藻抽出物とL-アルギニンとからなる新薬候補物質が誘発する血管拡張により、投与後の平均収縮期血圧は健常被験者で最大１１mmHg、高血圧被験者で最大１５mmHg、PAOD被験者群で最大２２mmHg低下した。投与後の平均拡張期血圧は、健常被験者で最大１１mmHg、高血圧被験者で最大８mmHg、PAOD被験者群で最大１１mmHg低下した。血圧が、典型的に１０−２０mm低下していることから明らかなように、すべての試験参加者の血管拡張が証明された。血圧が２０mm低下するごとに有害な心血管イベントのリスクは５０%減少する。上述の内容は図８、９、１０に示した。   Vasodilation is the normal state of the arteries, minimizing arterial deformation resistance damage and abnormal smooth muscle growth. Due to the vasodilation induced by a new drug candidate substance consisting of seaweed extract and L-arginine, the mean systolic blood pressure after administration was reduced by a maximum of 11 mmHg in healthy subjects, a maximum of 15 mmHg in hypertensive subjects, and a maximum of 22 mmHg in PAOD subjects. The mean diastolic blood pressure after administration decreased by a maximum of 11 mmHg in healthy subjects, a maximum of 8 mmHg in hypertensive subjects, and a maximum of 11 mmHg in PAOD subject groups. Vasodilation was demonstrated for all study participants, as evidenced by a typically 10-20 mm drop in blood pressure. Each 20 mm drop in blood pressure reduces the risk of adverse cardiovascular events by 50%. The above contents are shown in FIGS.

こうした血管保護効果は、互いの相乗効果により、スタチン系薬剤の投与による３０−３５%の効果に付加的に作用するものと考えられる。   Such a vascular protective effect is considered to additionally act on the effect of 30-35% by the administration of statin drugs due to the synergistic effect of each other.

作用機序
作用機序に拘束されずに、海藻とL-アルギニンの化合物は、内皮細胞に直接摂取され、選択的に結合することから内皮調整薬であるとされている。 Mechanism of Action Regardless of the mechanism of action, seaweed and L-arginine compounds are considered to be endothelium-regulating agents because they are directly taken up by endothelial cells and selectively bind to them.

正常なヒト被験者における結果が証明するように、海藻とL-アルギニンの化合物を投与することによって内皮機能が高められると、明らかな疾病に対する前に、正常な血管保護機能が強化され、正常な血管機能が保護される。   As evidenced by the results in normal human subjects, the administration of seaweed and L-arginine compounds enhances endothelial function before normal vascular protection, and normal blood vessels Function is protected.

従って、本発明の目的が達成されたことは明らかである。第１に、本発明の方法と組成物は非常に有効な抗血栓活性および細胞表面凝固群に対するその他の抑制効果や、血栓形成阻害効果を有する。急速な心血管動脈硬化症、高血圧、糖尿病性腎症、および鬱血性心不全が、糖尿病の過程における長期合併症であることは、よく知られている。これらの疾患は、それぞれeNOS活性の低下、自由ラジカル生成の増加、血栓形成活性の亢進を伴い、そのために血栓性および虚血性の合併症を伴う。   Thus, it is clear that the objectives of the present invention have been achieved. First, the methods and compositions of the present invention have very effective antithrombotic activity and other inhibitory effects on cell surface coagulation groups, and thrombus formation inhibitory effects. It is well known that rapid cardiovascular arteriosclerosis, hypertension, diabetic nephropathy, and congestive heart failure are long-term complications in the course of diabetes. Each of these diseases is accompanied by a decrease in eNOS activity, an increase in free radical generation, and an increase in thrombogenic activity, and therefore thrombotic and ischemic complications.

第２に、海藻抽出物は植物細胞から得られるので、狂牛病のような潜在的致命的な重篤なプリオン病に感染する可能性はない。   Secondly, since seaweed extract is obtained from plant cells, there is no possibility of infection with potentially fatal severe prion diseases such as mad cow disease.

第３に、海藻抽出物は、血小板第４因子を活性化する可能性はなく、ヘパリン投与の場合に見られるような血小板の免疫複合体を破壊することはない。   Third, seaweed extract has no possibility of activating platelet factor 4 and does not destroy platelet immune complexes as seen with heparin administration.

第４に、海藻抽出物は、透析、バイパス手術、哺乳類やヒトに使用するポリマーチューブコーティングおよび装置等の、全身的(非血漿の)抗凝固活性を必要とする用途に使用するヘパリンの機能的な置換体である。   Fourth, seaweed extract is a functional heparin used for applications requiring systemic (non-plasma) anticoagulant activity, such as dialysis, bypass surgery, polymer tube coatings and devices for use in mammals and humans. Is a substitute.

第５に、海藻抽出組成物は、植物細胞から抽出されるので、動物細胞から得られたヘパリンと比較してペプチド残基が少なく、したがって、アレルギー反応傾向が低く、免疫特性も少ない。   Fifth, since the seaweed extract composition is extracted from plant cells, it has fewer peptide residues than heparin obtained from animal cells, and therefore has a low tendency to allergic reaction and less immune properties.

第６に、本発明の海藻抽出物は、血漿中のC-反応性タンパク質レベルを低下させる。
第７に、本発明の海藻抽出物は、血漿中のLDLレベルを低下させ、および/またはHDLレベルを上昇させ、血管を含む健全な心血管機能を維持する。 Sixth, the seaweed extract of the present invention reduces C-reactive protein levels in plasma.
Seventh, the seaweed extract of the present invention reduces LDL levels in plasma and / or increases HDL levels and maintains healthy cardiovascular function including blood vessels.

本発明の範囲内において、多くの修正、派生、改良が可能であることは、当業者には容易に理解することができる。こうした修正、派生、および改良は、ここに添付した請求項による全範囲の保護に見合うものでなければならない。   It will be readily apparent to those skilled in the art that many modifications, derivations, and improvements can be made within the scope of the present invention. Such modifications, derivations and improvements must be commensurate with the full scope of protection provided by the claims appended hereto.

コントロール群とヘパリンおよび各種用量の硫酸化海藻抽出物、ラムナン硫酸とを比較した図である。It is the figure which compared the control group, heparin, sulfated seaweed extract of various doses, and rhamnan sulfate. コントロール群と、各種用量の硫酸化海藻抽出物、ラムナン硫酸、およびＬ−アルギニンとを比較した図である。It is the figure which compared the control group with various doses of the sulfated seaweed extract, rhamnan sulfate, and L-arginine. 硫酸化海藻抽出物、ラムナン硫酸（多糖類または藻類多糖類）、およびアルギニンのラムナン硫酸塩の化学的描写である。Chemical depiction of sulfated seaweed extract, rhamnan sulfate (polysaccharide or algal polysaccharide), and rhamnan sulfate of arginine. 発明の組成物の随意実施様態が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 shows the effect of optional embodiments of the inventive composition on C-reactive protein (CRP) levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and human subjects with peripheral arterial occlusion. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者の高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 shows the effect of optional embodiments of the inventive composition on high density lipoprotein (HDL) levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者の低密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 shows the effect of optional embodiments of the inventive composition on low density lipoprotein (HDL) levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者のトリグリセリドレベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 shows the effect of optional embodiments of the inventive composition on triglyceride levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者の収縮期または拡張期血圧レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 illustrates the effect of optional embodiments of the inventive composition on systolic or diastolic blood pressure levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者の収縮期または拡張期血圧レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 illustrates the effect of optional embodiments of the inventive composition on systolic or diastolic blood pressure levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects. 発明の組成物の随意実施態様が、健常なヒト被験者、高血圧のヒト被験者、および末梢動脈閉塞のヒト被験者の収縮期または拡張期血圧レベルに及ぼす効果を示す図である。FIG. 4 illustrates the effect of optional embodiments of the inventive composition on systolic or diastolic blood pressure levels in healthy human subjects, hypertensive human subjects, and peripheral arterial occlusion human subjects.

Claims (38)

有効投薬量の海藻抽出物を哺乳類に投与するステップを含むことを特徴とする２型糖尿病とその合併症に対する予防又は治療方法。   A method for preventing or treating type 2 diabetes and its complications, comprising the step of administering an effective dosage of seaweed extract to a mammal. 前記海藻は、褐藻、紅藻および緑藻類からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method according to claim 1, wherein the seaweed is selected from the group consisting of brown algae, red algae and green algae. 前記海藻抽出物は、多糖類を含有することを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method according to claim 1, wherein the seaweed extract contains a polysaccharide. 前記多糖類は、ラムノース、キシロース、ガラクトースおよびマンノースを単体か、またはそれらの組合せからなる群より選択されることを特徴とする請求項３に記載の方法。   The method according to claim 3, wherein the polysaccharide is selected from the group consisting of rhamnose, xylose, galactose and mannose alone or a combination thereof. 前記海藻抽出物は、約63mol％から78mol%の前記ラムノースを含有していることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the seaweed extract contains about 63 mol% to 78 mol% of the rhamnose. 前記海藻抽出物は、約6.5mol%から9.2mol%の前記キシロースを含有していることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the seaweed extract contains about 6.5 mol% to 9.2 mol% of the xylose. 前記ラムノースおよび前記キシロースは、前記キシロース１に対して前記ラムノース約１２から前記キシロース１に対して前記ラムノース約８の間の割合の量で、前記海藻抽出物中に存在していることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The rhamnose and the xylose are present in the seaweed extract in an amount between about 12 rhamnose to the xylose 1 and about 8 rhamnose to the xylose 1. The method of claim 1. 前記褐藻は、ブラダーラック、ヒバマタ、ブラジル産コンブまたはノルウェイ産ケルブを含む群より選択されることを特徴とする請求項２に記載の方法。   3. The method of claim 2, wherein the brown algae is selected from the group comprising bladder rack, hibermata, brazilian comb or norwegian cherub. 前記緑藻は、ヒトエグサ、モツキヒトエ、エゾヒトエグサ、ヒロハノヒトエグサ、シワヒトエグサ、アオヒトエグサ、ウスヒトエグサ、ヒラアオノリ、ナガアオサ、アナアオサ、アサミドリシオグサ、アオタマリシオグサ、フトジュズモ、ホソジュズモ、モツレグサ、ミル、クロミル、ヒラミルもしくはフサイワズタを含む群より選択されることを特徴とする請求項２に記載の方法。   The green algae is a human egusa, mochihitoe, ezohitoexa, hirohanohitoexa, wrinkled egusa, aohitoexa, ushitoexa, hiraanoori, nagaasaosa, anaaaosa, asamidriogusa, aotamarishigusa, ftjusmomo, tuna moss, The method according to claim 2, wherein the method is selected from the group comprising Fusaiwazuta. 前記２型糖尿病合併症は、神経障害、腎障害、動脈硬化症、蛋白尿を有する群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method according to claim 1, wherein the complication of type 2 diabetes is selected from the group comprising neuropathy, renal disorder, arteriosclerosis, and proteinuria. 前記２型糖尿病は、内皮機能障害を原因とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the type 2 diabetes is caused by endothelial dysfunction. さらに、前記海藻抽出物と窒素ドナーとの併用投与を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method according to claim 1, further comprising the combined administration of the seaweed extract and a nitrogen donor. 前記窒素ドナーは、Ｌ−アルギニンとリシンからなる群より選択されることを特徴とする請求項１２に記載の方法。   13. The method of claim 12, wherein the nitrogen donor is selected from the group consisting of L-arginine and lysine. 前記海藻抽出物は、経口投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method according to claim 1, wherein the seaweed extract is administered orally. 前記海藻抽出物は食品類と混合され前記食品類は、シリアル、パン、飲料、棒状健康食品、ジュース、濃縮果汁、缶詰の食品、アイスクリーム、水または、小麦、トウモロコシ、大麦、カラスムギなどを原料とした、様々な形状の食品、または砂糖やアスコルビン酸などの風味料を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。   The seaweed extract is mixed with foods, and the foods are made from cereals, breads, beverages, stick health foods, juices, concentrated fruit juices, canned foods, ice cream, water or wheat, corn, barley, oats, etc. 2. The method according to claim 1, characterized in that it is selected from the group comprising foods of various shapes or flavorings such as sugar or ascorbic acid. 前記海藻抽出物の１日投薬量は、約2000IUから200000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the daily dosage of the seaweed extract corresponds to heparin activity between about 2000 IU and 200,000 IU. 前記海藻抽出物の１日投薬量は、約5000IUから20000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the daily dosage of the seaweed extract corresponds to a heparin activity between about 5000 IU and 20000 IU. 前記海藻抽出物の１日投薬量は、約8000IUから12000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the daily dosage of the seaweed extract corresponds to a heparin activity between about 8000 IU and 12000 IU. 前記海藻抽出物の１日投薬量は、約7.5mg/kgであることを特徴とする請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the daily dosage of the seaweed extract is about 7.5 mg / kg. 前記海藻抽出物の投薬量は、反復して投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。   2. The method of claim 1, wherein the seaweed extract dosage is administered repeatedly. 前記哺乳類の血漿の抗凝固活性は、はっきり認められる程は上昇しないことを特徴とする請求項１に記載の方法。   2. The method of claim 1, wherein the anticoagulant activity of the mammalian plasma does not rise appreciably. 患者の、前記２型糖尿病およびその合併症に対する治療のための組成物であって、有効量内のある量の前記海藻抽出物と前記窒素ドナーとを含むことを特徴とする組成物。   A composition for the treatment of type 2 diabetes and its complications in a patient, comprising an amount of the seaweed extract and the nitrogen donor within an effective amount. 前記海藻は褐藻、紅藻および緑藻類からなる群より選択されることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein the seaweed is selected from the group consisting of brown algae, red algae and green algae. 前記褐藻は、ブラダーラック、ヒバマタ、ブラジル産コンブまたはノルウェイ産ケルブを含む群より選択されることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。   24. The composition of claim 23, wherein the brown algae is selected from the group comprising bladder rack, hibermata, brazilian comb or norwegian cherub. 前記緑藻は、ヒトエグサ、モツキヒトエ、エゾヒトエグサ、ヒロハノヒトエグサ、シワヒトエグサ、アオヒトエグサ、ウスヒトエグサ、ヒラアオノリ、ナガアオサ、アナアオサ、アサミドリシオグサ、アオタマリシオグサ、フトジュズモ、ホソジュズモ、モツレグサ、ミル、クロミル、ヒラミルもしくはフサイワズタを含む群より選択されることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。   The green algae is a human egusa, mochihitoe, ezohitoexa, hirohanohitoexa, wrinkled egusa, aohitoexa, ushitoexa, hiraanoori, nagaasaosa, anaaaosa, asamidriogusa, aotamarishigusa, ftjusmomo, tuna moss, 24. The composition of claim 23, wherein the composition is selected from the group comprising Fusaiwazuta. 前記海藻抽出物は多糖類を含有していることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   The composition according to claim 22, wherein the seaweed extract contains a polysaccharide. 前記海藻抽出物は硫酸化されていることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   The composition according to claim 22, wherein the seaweed extract is sulfated. 前記多糖類は、ラムノース、キシロース、ガラクトースおよびマンノースを単体か、それらの組合せからなる群より選択されることを特徴とする請求項２７に記載の組成物。   The composition according to claim 27, wherein the polysaccharide is selected from the group consisting of rhamnose, xylose, galactose and mannose alone or a combination thereof. 前記海藻抽出物は、約63mol％から78mol%のラムノースを含有していることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein the seaweed extract contains about 63 mol% to 78 mol% rhamnose. 前記海藻抽出物は、約6.5mol%から9.2mol%のキシロースを含有していることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein the seaweed extract contains about 6.5 mol% to 9.2 mol% xylose. 前記ラムノースおよび前記キシロースは、前記キシロース１に対して前記ラムノース約１２から前記キシロース１に対して前記ラムノース約８の間の割合の量で、前記海藻抽出物中に存在していることを特徴とする請求項２８に記載の組成物。   The rhamnose and the xylose are present in the seaweed extract in an amount between about 12 rhamnose to the xylose 1 and about 8 rhamnose to the xylose 1. 30. The composition of claim 28. 前記海藻抽出物は、前記食品類と混合されることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   The composition according to claim 22, wherein the seaweed extract is mixed with the food. 前記食品類は、前記シリアル、パン、飲料、棒状健康食品、ジュース、濃縮果汁、缶詰の食品、アイスクリーム、水または、小麦、トウモロコシ、大麦、カラスムギなどを原料とした、いろいろな形状の食品、または砂糖やアスコルビン酸などの風味料を含む群から選択されることを特徴とする請求項３２に記載の組成物。   The foods are foods of various shapes using the cereals, breads, beverages, stick-shaped health foods, juices, concentrated fruit juices, canned foods, ice cream, water or wheat, corn, barley, oats, etc. 33. The composition of claim 32, wherein the composition is selected from the group comprising flavors such as sugar and ascorbic acid. 前記海藻抽出物の１日投与量は、約2000IUから200000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein the daily dose of the seaweed extract corresponds to a heparin activity between about 2000 IU and 200,000 IU. 前記海藻抽出物の１日投与量は、約5000IUから20000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein a daily dose of the seaweed extract corresponds to a heparin activity between about 5000 IU and 20000 IU. 前記海藻抽出物の１日投与量は、約8000IUから12000IUの間のヘパリン活性にあたることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。   23. The composition of claim 22, wherein the daily dose of the seaweed extract corresponds to a heparin activity between about 8000 IU and 12000 IU. 前記窒素ドナーは、前記Ｌ−アルギニンと前記リシンからなる群より選択されることを特徴とする請求項２３に記載の組成物。   24. The composition of claim 23, wherein the nitrogen donor is selected from the group consisting of the L-arginine and the lysine. 請求項２２に記載の組成物を使用することを特徴とする２型糖尿病とその合併症に対する予防又は治療方法。   A method for preventing or treating type 2 diabetes and its complications, which comprises using the composition according to claim 22.

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