JP2007515965A - 抗レトロウイルス性の剤、組成物、方法および用途 - Google Patents

抗レトロウイルス性の剤、組成物、方法および用途 Download PDF

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Abstract

ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディポリペプチドおよびコードするポリヌクレオチドを開示する。細胞膜とのＨＩＶの融合および標的細胞中への進入を低減若しくは阻害するための該ポリペプチドの利用方法もまた開示する。

Description

本発明は、抗レトロウイルス剤、とりわけヒト免疫不全ウイルスｇｐ４１ミメティボディ（ｍｉｍｅｔｉｂｏｄｙ）および治療薬としてのそれらの使用に関する。
後天的免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を引き起こすレンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）への感染は世界の第一位の死亡原因の１つである。最近利用可能な抗レトロウイルス剤は、不可欠のＨＩＶ−１の酵素、逆転写酵素若しくはプロテアーゼのいずれかを阻害する。最近の進歩は、これらの分類の抗レトロウイルス薬物を受領する多くの患者の転帰を顕著に改善した。しかしながら、現在の治療の成功は、薬物耐性ウイルスの出現、複雑なレジメンの持続的順守の必要性、および毒性の副作用の可能性により制限される。他の抗レトロウイルス薬物との交差反応性の低い危険を伴う新規分類の安全かつ有効な剤が必要とされ続ける。
ウイルスの進入のターゲッティングが、細胞が感染した後のウイルスの生活環の段階の阻害を上回る利点を有するかもしれないと考えられている（非特許文献１において総説されている）。ＨＩＶ−１のエンベロープ糖タンパク質は、ウイルスの進入に関与しており、そして２種の非共有的に会合したサブユニット、表面糖タンパク質（ｇｐ１２０）および膜貫通糖タンパク質（ｇｐ４１）よりなる。ｇｐ１２０の部分は標的細胞上のＣＤ４受容体およびケモカイン補助受容体（ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ５）に結合する（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。ｇｐ１２０−ＣＤ４−補助受容体の結合後に、ｇｐ４１サブユニットは、ウイルスおよび細胞膜の融合を促進するコンホメーション変化を受けて、細胞中へのウイルス核の進入、核への輸送、ならびに最終的にプロウイルスの組込みおよび発現をもたらす（非特許文献５）。
ｇｐ４１の一次アミノ酸配列は、α−らせんの「コイルドコイル」二次構造中で見出される周期的な疎水性領域の存在を反映する「７アミノ酸繰り返し」領域（ＨＲ１およびＨＲ２）を包含する（非特許文献６：非特許文献７）。ＨＲ１およびＨＲ２は、各ドメインの３メンバー（三量体）を含有するらせん束を形成する（非特許文献５；非特許文献８；非特許文献９）。これらの７アミノ酸繰り返しは、宿主細胞とのＨＩＶ−１の膜融合に不可欠なコンホメーション変化においてある役割を有する（非特許文献１０；非特許文献１１）。
ｇｐ４１のＨＲ２セグメントを模倣する合成ペプチドは融合を阻害しかつ有意の抗レトロウイルス効果を有する（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献１０）。２種のペプチド、Ｔ−２０およびＴ−１２４９が臨床試験で検討された（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１に総説される；非特許文献１４にもまた総説される）。
ＨＲ２配列由来の３６アミノ酸のペプチド、Ｔ−２０（エンフュービルタイド（ｅｎｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）のＦＵＺＥＯＮ（Ｒ）銘柄）が、感染した患者のウイルスレベルを１〜２対数低下させることが臨床試験で示された（非特許文献１５）。この化合物は、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）のような複数の抗ＨＩＶ薬物を使用する既存の治療とともに使用され、そして、患者が彼らの処置レジメンにもはや応答しないサルベージ療法の症例を処置するのにもまた使用される。しかしながら、このペプチドＨＩＶ融合阻害剤はタンパク質分解性の消化に感受性であり、そして従って約１．８時間という短い血漿半減期を有する。結果、完全な有効性のために大用量（９０ｍｇ／注入）を１日２回投与する必要がある（非特許文献１４に総説される）。
相対的に、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のｇｐ−４１由来の３９アミノ酸のコンセンサスペプチド、Ｔ−１２４９は、９ないし１４時間という増大されたしかしなお相対的に短い血漿半減期を有し、そしてまた、有効血中濃度を持続するために１日２回投与することが必要でもある（非特許文献１６）。従って、より長い半減期をもつ改良されたＨＩＶ融合阻害剤に対する必要性が存在する。
ＫｉｌｂｙとＥｒｏｎ、Ｎ．Ｅｎｇｋ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２２２８−２２３８（２００３） Ｆｅｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：８７２−８７７（１９９６） Ｄｒａｇｉｃら、Ｎａｔｕｒｅ ３８１：６６７−６７３（１９９６） Ｄｅｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３８１：６６１−６６６（１９９６） Ｃｈａｎら、Ｃｅｌｌ ８９：２６３−２７３（１９９７） Ｇａｌｌａｈｅｒら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ５：４３１−４４０（１９８９） Ｄｅｌｗａｒｔら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ６：７０３−７０６（１９９０） Ｔａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９４：１２３０３−１２３０８（１９９７） Ｗｅｉｓｓｅｎｈｏｒｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３８７：４２６−４３０（１９９７） Ｄｕｂａｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：４７４８−４７５６（１９９２） Ｗｉｌｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ（ＵＳＡ）９１：１２６７６−１２６８０（１９９４） Ｗｉｌｄら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ９：１０５１−１０５３（１９９３） Ｅｒｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８９：１０７５−１０８３（２００４） Ｊｉａｎｇら、Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．８：５６３−５８０（２００２） Ｋｉｌｂｙら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４：１３０２−１３０７（１９９８） ＥｒｏｎとＨｏｇａｎ、ＰＲＮ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ ７：１６−２２（２００２）
［発明の要約］
本発明の一局面は、一般式（ＩＩ）：
（Ｖ１−ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
（ＩＩ）
［式中、Ｖ１は免疫グロブリン可変領域のＮ末端の一部分であり、ｇｐはＨＩＶ ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
を有するポリペプチドである。
本発明の別の局面は、式（ＩＩＩ）：
（ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
（ＩＩＩ）
［式中、ｇｐはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
で表されるポリペプチドである。
本発明の別の局面は、式（ＩＶ）：
（Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌｋ−ｇｐ）（ｔ）
（ＩＶ）
［式中、ｇｐはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
で表されるポリペプチドである。
本発明の別の局面は、配列番号１に示される配列を含んでなるポリペプチドである。
本発明の別の局面は、配列番号２に示される配列若しくは相補配列を含んでなるポリヌクレオチドである。
本発明の別の局面は、配列番号１、５、６、７、８、９、１０、１１、１２若しくは１３に示されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
本発明の別の局面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである。
本発明の別の局面は、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの製薬学的組成物と標的細胞を接触させることを含んでなる、標的細胞のＨＩＶ感染の阻害方法である。
本発明の別の局面は、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの製薬学的組成物をそれの必要な患者に投与することを含んでなる、最低１種のＨＩＶ感染に関係した状態若しくは障害の症状の低減方法若しくはそれらの処置方法である。
［発明の詳細な記述］
本明細で引用される、限定されるものでないが特許および特許出願を挙げることができる全部の刊行物は、完全に示されるかのように引用することにより本明細書に組み込まれる。１文字アミノ酸記号を本明細書で当業者により理解されるとおり使用する。免疫グロブリン定常領域のアミノ酸残基の番号付けは、野性型ＩｇＧ１若しくはＩｇＧ４のＦｃドメイン中のＮ末端アミノ酸である残基１に基づく。
本発明は、ＨＩＶ ｇｐ４１由来ペプチドの特性および活性を有するポリペプチドを提供し、該ポリペプチドはまた、多様な型のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭのような免疫グロブリン分子、およびＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４のようなそれらのいずれかのサブクラス、またはそれらの組合せも模倣し、下で「ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディ」と称される。本発明はまた、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディをコードする核酸、これらの核酸を含有するベクター、宿主細胞、組成物、ならびにＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの作成および使用方法も提供する。
ミメティボディポリペプチドおよび組成物
本発明は、全般として、一般式（Ｉ）：
（Ｖ１−Ｐｅｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
（Ｉ）
［式中、Ｖ１は免疫グロブリン可変領域のＮ末端の一部分であり、Ｐｅｐは所望の生物学的特性を有するポリペプチドであり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリンヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１ないし１０の整数である］
を有するミメティボディポリペプチドに関する。例えば、Ｐｅｐは、宿主細胞膜とのウイルスの融合を阻害することが可能である、宿主細胞膜の融合およびウイルスの進入に関与するいかなるウイルスタンパク質由来のポリペプチドでもあり得る。
より具体的には、本発明は、宿主細胞膜とのウイルスの融合を阻害することが可能であるＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディポリペプチドに関する。該ポリペプチドは、一般式（ＩＩ）：
（Ｖ１−ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
（ＩＩ）
［式中、Ｖ１は免疫グロブリン可変領域のＮ末端の一部分であり、ｇｐはｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリンヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１ないし１０の整数である］
を有する。
本明細書で使用されるところの「ｇｐ４１由来ペプチド」は、いずれかのＨＩＶ若しくはＳＩＶ単離物からのｇｐ４１のＨＲ２ドメイン由来であるコンセンサスペプチドを包含するペプチドを包含する。一例示的ｇｐ４１由来ペプチドは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有するＴ−２０である。別の例示的ｇｐ４１由来ペプチドは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有するペプチドＴ−１２４９である。他のｇｐ４１由来ペプチドは、Ｔ−２０若しくはＴ−１２４９の活性を模倣してｇｐ４１のＨＲ１およびＨＲ２ドメインを結合するための競合的囮としてはたらき得るペプチドを包含する。これらのペプチドは最低１アミノ酸の置換、欠失若しくは挿入を有するＴ−２０若しくはＴ−１２４９ホモログを包含し得る。他の例示的ｇｐ４１由来ペプチドは、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９４／０２５０５号、同第ＷＯ９４／２８９２０号、同第ＷＯ９６／１９４９５号、同第ＷＯ９９／５９６１５号、同第ＷＯ０１／０３７２３号、同第ＷＯ０１／５１７６３号および同第ＷＯ０４／０２９０７４号明細書に示され、そして、式（Ｖ）：
ＹＴＸ１Ｘ２ＩＹＸ３ＬＬＥＸ４ＳＱＸ５ＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＸ６ＷＦ
（Ｖ）
［式中、Ｘ１はＳ、Ｇ若しくはＮであり；Ｘ２はＬ、Ｉ若しくはＴであり；Ｘ３はＳ、Ｎ若しくはＴであり；Ｘ４はＫ、Ｅ若しくはＤであり；Ｘ５はＴ若しくはＮであり、そしてＸ６はＮ、Ｅ若しくはＤである］
で表されるペプチドもまた包含する。
本発明のポリペプチド中で、Ｖ１は免疫グロブリン可変領域のＮ末端の一部分である。例示的なＶ１のアミノ酸配列はＱＩＱ若しくはＱＶＱを包含する。
本発明のポリペプチド中で、リンカー部分（Ｌｋ）は、ミメティボディに代替の向きおよび結合特性を有させることにより構造の柔軟性を提供する。例示的リンカーはペプチド結合により連結された非ペプチド化学結合若しくはアミノ酸を包含し、該アミノ酸は２０種の天然に存在するアミノ酸から選択される。リンカー部分は、グリシン、アラニンおよびセリンのような立体的に障害されないアミノ酸の大多数を包含し得、そして、ＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１４）およびＧＳＧＧＧＳ（配列番号１５）、ＧＳ、ＧＧＧＳおよびＧＳＧＧＧＳの多量体、若しくはそれらのいかなる組合せも包含し得る。本発明の範囲内の他の例示的リンカーは２０残基より長いことができ、そしてグリシン、アラニンおよびセリン以外の残基を包含しうる。
本発明のポリペプチド中で、Ｖ２はＨ鎖可変領域のような免疫グロブリン可変領域のＣ末端ドメインの一部分である。一例示的Ｖ２アミノ酸配列はＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）である。
本発明のポリペプチド中で、ＨｇはＨ鎖可変領域のような免疫グロブリン可変領域のヒンジドメインの少なくとも一部分である。例示的Ｈｇアミノ酸配列は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１７）、ＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１８）、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１９）、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号２０）およびＣＰＰＣＰ（配列番号２１）を包含する。
本発明のポリペプチド中で、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域である。例示的ＣＨ２アミノ酸配列は：
Figure 2007515965
を包含する。
本発明のポリペプチド中で、ＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域である。例示的ＣＨ３アミノ酸配列は：
Figure 2007515965
を包含する。本発明のポリペプチドのＣＨ３領域は、ある種の組換え系中で発現される場合にそのＣ末端アミノ酸を切断分離させうることが当業者により認識されるであろう。
本発明のポリペプチド中で、免疫グロブリン分子のＦｃＲｎスカベンジャー受容体結合部位が、ＣＨ２およびＣＨ３領域の接合部で保存されている。ＦｃＲｎ結合は飲作用された（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｅｄ）免疫グロブリンの細胞外空隙への戻りを可能にするため、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの半減期は、Ｔ−２０、Ｔ−１２４９若しくは他のｇｐ４１由来ペプチドに関して有意に延長されるであろうことが期待される。
一態様において、本発明のポリペプチドはｇｐ４１由来ペプチドのＮ末端のＶ１配列を欠く。該ポリペプチドは一般式ＩＩＩを有する。
（ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
（ＩＩＩ）
本発明のポリペプチドの別の態様において、ｇｐ４１由来ペプチドは、式ＩＶに示されるとおりＣＨ３ドメインのＣ末端に連結される。式ＩＶのポリペプチド中で、ｇｐは、米国特許第６，７４７，１２６号および同第６，８１８，７４０号明細書に示されるところのＤ−アミノ酸含有ペプチドでもあり得る。
（Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌｋ−ｇｐ）（ｔ）
（ＩＶ）
本発明のポリペプチドの別の態様において、単量体（ＶＩ−ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）および単量体（Ｖ１−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）若しくは単量体（Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌｋ−ｇｐ）を含有するヘテロ二量体構造が、ヒンジ領域中のＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合のような共有結合により形成され得る。
本発明の一態様は、Ｖ１がＱＩＱであり、ｇｐが１コピーのＴ−１２４９（配列番号４）であり、Ｖ２が天然に存在するＩｇＧのＪ領域（配列番号１６）であり、Ｈｇが完全なＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号１７）であり、ＣＨ２およびＣＨ３がＩｇＧ１アイソタイプのサブクラスのもの（配列番号２２および２６）であり、そしてｔが２である、式（ＩＩ）のポリペプチドを含んでなるポリペプチドである。本態様の単量体の形態の完全なポリペプチド配列を配列番号１に示す。
本発明の別の態様は、Ｖ１がＱＩＱであり、ｇｐが１コピーのＴ−２０（配列番号３）であり、Ｖ２が天然に存在するＩｇＧのＪ領域（配列番号１６）であり、Ｈｇが完全なＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号１７）であり、ＣＨ２およびＣＨ３がＩｇＧ１アイソタイプのサブクラスのもの（配列番号２２および２６）であり、そしてｔが２である、式（ＩＩ）のポリペプチドを含んでなるポリペプチドである。本態様の単量体の形態の完全なポリペプチド配列を配列番号１１に示す。
本発明の他の態様において、Ｖ１、Ｂ２、Ｈｇ、ＣＨ２およびＣＨ３は、ＩｇＧ４のようなＩｇＧ１以外の免疫グロブリンのアイソタイプのサブクラスのもの由来である。ＩｇＧ１およびＩｇＧ４サブクラスはヒンジ領域のシステインの数が異なる。ＩｇＧ１サブクラスと同様に、Ｈ鎖間のジスルフィド結合に参画するＩｇＧ４ヒンジ中に２個のシステインが存在する。しかしながら、Ｌ鎖へのジスルフィド結合に通常関与するＩｇＧ１ヒンジ中のシステインは、ＩｇＧ４ヒンジ中に非存在である。従って、ＩｇＧ４ヒンジはＩｇＧ１ヒンジより少なく柔軟性である。
加えて、該２種のアイソタイプは、補体依存性の細胞傷害性（ＣＤＣ）および抗体依存性の細胞の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介するそれらの能力が異なる。ＣＤＣは補体の存在下での標的の溶解である。補体活性化経路は、同族の抗原と複合体形成した分子への補体系の第一の成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始する。ＩｇＧ１は補体カスケードおよびその後のＣＤＣ活性の強力な誘導物質である一方、ＩｇＧ４は補体誘導活性をほとんど有しない。
ＡＤＣＣは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する細胞傷害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識しかつその後該標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性の反応である。ＩｇＧ１サブクラスはＦｃ受容体に高親和性で結合しそしてＡＤＣＣに寄与する一方、ＩｇＧ４は弱くのみ結合する。エフェクター機能の活性化のＩｇＧ４の相対的不能は、ある状況下で望ましいことがある。
さらに、ＦｃＲｎスカベンジャー受容体の結合部位がＩｇＧ４およびＩｇＧ１アイソタイプに存在し、そして双方が類似の結合特徴を有する。従って、本発明のＩｇＧ１およびＩｇＧ４ミメティボディの薬物動態は同様であることが期待される。
免疫グロブリン領域のヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３部分（Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）は、本発明のバリアントを形成するようにもまた広範囲に改変しうる。例えば、ミメティボディ分子により必要とされない構造の特徴若しくは機能的活性を提供する１個若しくはそれ以上の天然の部位を除去し得る。これらの部位は、例えば、残基を置換若しくは欠失すること、該部位に残基を挿入すること、または該部位を含有する部分を切断することにより除去しうる。例示的Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３バリアントを下述する。
１．ジスルフィド結合形成に関与する部位を、本発明のミメティボディ中で欠失若しくは他のアミノ酸での置換により除去し得る。典型的には、これらのモチーフ中に存在するシステイン残基を除去若しくは置換する。これらの部位の除去は、一緒に非共有的に保持される二量体のＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジドメインをなお見込みつつ、ミメティボディを産生する宿主細胞中に存在する他のシステイン含有タンパク質とのジスルフィド結合、若しくは、ＩｇＧ４に基づく構築物中でのＨ鎖内ジスルフィド結合を回避しうる。
ＩｇＧ１のような大部分のＩｇＧタイプの抗体は、典型的にＨ２Ｌ２と略記される、２個の同一のＨ鎖および２個の同一のＬ鎖から構成されるホモ二量体分子である。従って、これらの分子は一般に抗原結合に関して二価である。すなわち、ＩｇＧ分子の双方の抗原結合（Ｆａｂ）アームが同一の結合特異性を有する。
ＩｇＧ４アイソタイプのＨ鎖は、Ｈ鎖間若しくはＨ鎖内いずれのジスルフィド結合も形成することが可能な、それらのヒンジ領域中のＣＰＳＣ（配列番号２８）モチーフを含有する。すなわち、ＣＰＳＣモチーフ中の２個のＣｙｓ残基は、他のＨ鎖の対応するＣｙｓ残基とジスルフィド結合しうるか（間）、若しくは、所定のＣＰＳＣモチーフ内の２個のＣｙｓ残基が相互とジスルフィド結合しうる（内）。ｉｎ ｖｉｖｏの異性化酵素が、ＩｇＧ４分子のＨ鎖間結合をＨ鎖内結合に転換することが可能であり、かつ、逆もまた真であると考えられている（ＡａｌｂｅｒｓｅとＳｃｈｕｕｒｍａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０５：９−１９（２００２））。従って、ヒンジ領域にＨ鎖内結合をもつＩｇＧ４分子中のＨ鎖／Ｌ鎖（ＨＬ）対は相互と共有的に会合していないため、それらはＨＬ単量体に解離することができ、それらはその後、他のＩｇＧ４分子由来のＨＬ単量体と再会合して二特異性のヘテロ二量体ＩｇＧ４分子を形成する。二特異性ＩｇＧ抗体において、抗体分子の２個のＦａｂはそれらが結合するエピトープが異なる。ＩｇＧ４のヒンジ領域のＳｅｒ２２８をＰｒｏで置換すること（Ｓ２２８Ｐ）は「ＩｇＧ１様挙動」をもたらす。すなわち、該分子はＨ鎖間で安定なジスルフィド結合を形成し、そして従って他のＩｇＧ４分子でのＨＬ交換に感受性でない。
２．Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３は、本発明のミメティボディを選択された宿主細胞とより適合性にするように改変し得る。例えば、本発明のミメティボディを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような細菌細胞中で組換え発現させる場合、ヒンジ中のＰｒｏ−Ａｌａ配列は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の酵素プロリンイミノペプチダーゼによる消化を予防するために除去しうる。
３．ヒンジ領域の一部分を、本発明のミメティボディ中で欠失若しくは他のアミノ酸で置換して、選択された宿主細胞中で発現される産物の不均一性を予防し得る。
４．１個若しくはそれ以上のグリコシル化部位を本発明のミメティボディ中で除去し得る。典型的にグリコシル化される残基（例えばＡｓｎ）は、ミメティボディにＦｃ依存性の細胞媒介性の細胞溶解活性を賦与しうる。こうした残基を欠失しうるか、若しくはＡｌａのようなグリコシル化されない残基で置換しうる。
５．Ｃ１ｑ結合部位のような補体との相互作用に関与する部位を、本発明のミメティボディ中で除去し得る。
６．本発明のミメティボディ中で、ＦｃＲｎサルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響を及ぼす部位を除去し得る。例えば、ＡＤＣＣ活性に関与するＦｃ受容体を本発明のミメティボディ中で除去し得る。例えば、ＩｇＧ１のヒンジ領域中のＬｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５のＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、若しくはＩｇＧ４のヒンジ領域中のＰｈｅ２３４／Ｌｅｕ２３５のＰ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａへの突然変異はＦｃＲ結合を最小化し、そして補体依存性の細胞傷害性およびＡＤＣＣを媒介する免疫グロブリンの能力を低下させる。
本発明のポリペプチドはまた、グリコシル化、異性化、アグリコシル化、若しくはポリエチレングリコール部分の付加（ペギル化）およびリピド化のような天然に存在しない共有修飾のような方法により翻訳後に修飾もし得る。こうした修飾はｉｎ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｔｒｏでも起こりうる。
核酸、ベクターおよび細胞株
本発明の別の局面は、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド若しくは相補核酸である。本発明の範囲内の他のポリヌクレオチドは、所定の発現系での遺伝暗号すなわちコドンの好みの縮重を考えれば本発明のポリペプチドをコードするものである。
一態様において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１および５ないし１３のいずれか１つに同一の若しくは実質的に相同なアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。例示的一ポリヌクレオチドは配列番号２に示される配列を有する。
本発明の他の局面は、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディをコードするポリヌクレオチドを含んでなる組換えベクターを包含する。これらのベクターは適切な細胞株中でＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディを発現するのに有用である。本発明の範囲内のベクターは、ＣＭＶプロモーターに駆動されるベクター、例えばｐｃＤＮＡ３．１、ｐＣＥＰ４およびそれらの誘導体のようなウイルスプロモーターに駆動されるベクター、バキュロウイルス発現ベクター、ショウジョウバエ発現ベクター、ならびにヒトＩｇ遺伝子プロモーターのような哺乳動物遺伝子プロモーターにより駆動される発現ベクターを包含する、真核生物発現に必要な要素を提供する。他の例は、Ｔ７プロモーターに駆動されるベクター、例えばｐＥＴ４１、乳糖プロモーターに駆動されるベクター、およびアラビノース遺伝子プロモーターに駆動されるベクターのような原核生物発現ベクターを包含する。
本発明はまた、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディを発現する細胞株にも関する。宿主細胞は原核生物、若しくは植物細胞を包含する真核生物細胞であり得る。例示的真核生物細胞は、限定されるものでないがＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、ＮＳ０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫、リンパ腫細胞を挙げることができる哺乳動物細胞、およびアオウキクサ属（Ｌｅｍｎａ）（ウキクサ）の植物細胞、若しくはそれらのいずれかの誘導体である。ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＣＨＯおよびウキクサ属（Ｌｅｍｎａ）細胞がとりわけ有用である。本発明の細胞株は、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディを安定に発現しうる。細胞株は、当該技術分野で公知である安定な若しくは一過性のトランスフェクション手順により生成させうる。
本発明はさらに、ミメティボディが検出可能若しくは回収可能な量で発現される条件下で細胞株を培養することを含んでなる、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの発現方法を提供する。本発明はまた、ミメティボディが検出可能若しくは回収可能な量で発現されるようなｉｎ ｖｉｔｒｏ条件下でミメティボディをコードする核酸を翻訳することを含んでなる、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの生成方法も提供する。本発明は、上の方法により製造されるＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディもまた包含する。
ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディは、限定されるものでないがプロテインＡ精製、硫酸アンモニウム若しくはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオン若しくは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを挙げることができる公知の方法により回収かつ精製し得る。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もまた精製に使用し得る。
使用方法
ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディは、とりわけ研究試薬および治療薬として有用である。本発明は、ＨＩＶおよび宿主細胞膜の融合を阻害若しくは低減させることが可能であるＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディを包含する。本発明のこれらのＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディは、限定されるものでないがＡＩＤＳを挙げることができるＨＩＶ感染、ニューモシスチス肺炎、ＣＭＶ網膜炎、カポジ肉腫、進行性多病巣性白質脳障害（ＰＭＬ）、エントアメーバ下痢のような日和見感染症、または他の状態、例えば悪液質若しくは痴呆から生じる障害若しくは症状の処置において有用である。
従って、別の局面において、本発明は、宿主へのＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの投与によるＨＩＶおよび宿主細胞膜の融合の低減若しくは阻害方法に関する。とりわけ、ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディはｇｐ４１のアンタゴニストとして機能しうる。「アンタゴニスト」という用語は最も広範な意味で使用され、そしてｇｐ４１の１種若しくはそれ以上の生物学的活性を直接若しくは間接的に、部分的に若しくは完全に打ち消す、低下させる若しくは阻害することが可能である分子を包含する。
本発明はさらに、治療上有効な量の最低１種のＨＩＶミメティボディの製薬学的組成物をそれの必要な患者に投与することを含んでなる、最低１種のＨＩＶ感染に関係した状態若しくは疾患の症状の低減方法若しくはその処置方法を提供する。さらに、本発明のミメティボディは、ＨＩＶ感染の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）方法、および曝露後の予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）方法、すなわち無症候性のＨＩＶ陽性患者におけるＨＩＶ感染の続発症の予防方法で有用である。
さらに下述されるとおり、本発明の製薬学的組成物は、有効量の最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディおよび製薬学的に許容できる担体若しくは希釈剤を含んでなる。所定の治療の有効量は、治癒的であろうと予防的であろうと、一般に、投与手段、標的部位および投与される他の医薬品を包含する多くの多様な因子に依存することができる。従って、処置用量は安全性および有効性を最適化するように滴定される必要があることができる。
本発明の方法は、例えばヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジンおよびラミブジン、ネビラピンおよびデラビルジンのような非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、ならびにサキナビル、リトナビル、インジナビルおよびネルフィナビルのようなプロテアーゼ阻害剤のようないずれかの他の抗レトロウイルス性化合物、タンパク質若しくは組成物との共投与若しくは併用療法をさらに含み得る。
投与様式は、製薬学的有効量の本発明のＨＩＶミメティボディを宿主に送達するためのいかなる適する経路でもあり得る。例えば、ＨＩＶミメティボディは、皮下、筋肉内、皮内、静脈内若しくは鼻内投与のような非経口投与、または当該技術分野で既知のいずれかの他の適する手段を介して送達し得る。長時間送達および生物学的有効濃度を提供し得る他の投与経路は、デポー製剤および内的若しくは外的装置のような技術により達成し得る。
従って、本発明の別の局面は、最低１種のＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディおよび当該技術分野で既知の製薬学的に許容できる担体若しくは希釈剤を含んでなる製薬学的組成物である。担体若しくは希釈剤は粉末、溶液、懸濁液、乳液若しくはコロイドであり得る。
本発明のＨＩＶミメティボディは、治療上若しくは予防上有効な量で製薬学的組成物として処方される。「有効量」という用語は、一般に、有効な治療、すなわちそのための処置が探求された症状若しくは障害の部分的若しくは完全な軽減に必要なミメティボディの量を指す。前述の症状若しくは障害の発症の見込みを低下させることを意図している予防的処置が、有効な治療の定義内に包含される。
該組成物は、場合によっては、ＨＩＶ感染若しくはその続発症を処置するのに有用な最低１種の他の抗レトロウイルス性化合物、タンパク質若しくは組成物を含み得る。こうした付加的な抗レトロウイルス性化合物、タンパク質若しくは組成物は、ウイルス進入過程の個別の段階、例えばＣＤ４細胞結合、補助受容体結合、ウイルス融合に向けられることができるか、またはＨＩＶ逆転写酵素若しくはプロテアーゼ酵素のようなＨＩＶ感染の他の機構を標的としうる。組合せ処置レジメンはウイルス複製の強力な抑制を生じることがありそうである。
本発明は以下の実施例に関してさらに記述される。これらの実施例は単に本発明の局面を具体的に説明するためであり、そして本発明の制限として意図されない。
哺乳動物細胞中でのＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディのクローニング、発現および精製
Ｔ−１２４９をコードするｃＤＮＡをオーバーラップＰＣＲにより増幅し、そしてｐＣＥＰ４由来のヒトＩｇＧ１発現ベクターに挿入した。ｐＣＥＰ４はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州カールズバッドから得た。該ベクターは、高コピーエピソーム複製を可能にするためにＣＭＶプロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）複製起点（ｏｒｉＰ）および核抗原（ＥＢＮＡ−１）を含有する。該ベクターはまた、部分的Ｖ領域、少なくとも部分的なヒンジ領域、ならびにヒトＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３領域のような、他のミメティボディ成分をコードする配列も供給する。
Ｔ−１２４９ミメティボディ発現プラスミドをＨＥＫ２９３細胞に一過性にトランスフェクトし、そして、発現されたミメティボディを、標準的手順に従ってプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して、細胞培養物上清から精製した。
ＨＩＶ感染に対するＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディの阻害効果
ＬＴＲ−Ｌｕｃアッセイは、標的細胞中に存在する、ルシフェラーゼレポーター遺伝子に連結されたＨＩＶ ＬＴＲのＨＩＶ Ｔａｔタンパク質媒介性のトランス活性化に基づく。ＬＴＲ中のＴＡＲエレメントへのＴａｔの結合はルシフェラーゼ遺伝子発現の転写活性化をもたらす。ルシフェラーゼ出力はＨＩＶ感染の量に比例する。
ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ濃縮ウイルス（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、メリーランド州コロンビア）を使用してＭＴ４細胞を感染させ、そしてＨＩＶの作業ストックを生成させた。安定なＭＴ４−Ｌｕｃ細胞を生成させるため、ＨＩＶ ＬＴＲの制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子を、当該技術分野で既知の標準的手順に従って親ＭＴ４細胞株にトランスフェクトした。Ｔ−１２４９ペプチドＷＱＥＷＥＱＫＩＴＡＬＬＥＱＡＱＩＱＱＥＫＮＥＹＥＬＱＫＬＤＫＷＡＳＬＷＥＷＦ（配列番号４）を、およそ９５％純度まで化学合成した。
９６ウェル形式でＨＩＶ ＬＴＲ−Ｌｕｃアッセイを実施するため、２×１０４のＭＴ４−Ｌｕｃ細胞を各ウェルにプレーティングした。ＨＩＶ−１ウイルスおよびＴ−１２４９ペプチド（配列番号４）若しくはＴ−１２４９ミメティボディ（配列番号１）を、２００μｌの最終容量までウェルごとに添加した。サンプルを４日のアッセイの間三重で試験した（ｒｕｎ）。各実験の終了時に、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を使用して、製造元のプロトコルに従ってルシフェラーゼ活性を検出した。ルシフェラーゼ活性は、ＢＭＧ ＦｌｕｏＳｔａｒ装置（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＧｍｂＨ、ドイツ・オッフェンブルク）で発光モードを使用して測定した。
５０μｌの作業ウイルスストックを使用した場合、Ｔ−１２４９ペプチドは、低下されたルシフェラーゼ産生に反映されるとおり（図１Ａ）、ＨＩＶ感染を効果的に阻害することが示された。該ペプチドのＩＣ５０は約３．３ｎＭであると計算された。相対的に、Ｔ−１２４９ミメティボディは該ペプチドの阻害活性を保持した（図１Ｂ）とは言え、それは本来のペプチドのものほど強力でなかった。該ミメティボディのＩＣ５０は約８９ｎＭであると計算された。
類似の実験において、Ｔ−１２４９ミメティボディは、エンフュービルタイド耐性株を包含するＨＩＶの他の単離物に対してもまた活性であった。
ＨＩＶ ｇｐ４１ミメティボディのｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴ−１２４９ミメティボディの安定性を、ＨＰＬＣを使用して測定した。Ｔ−１２４９ミメティボディ（配列番号１）を１ｍｇ／ｍｌでヒト血清に添加した。Ｃ１８クロマトグラフィーマトリックスを使用して、Ｔ−１２４９ミメティボディに対応するピークが他の血清タンパク質から分離された。ピークの同一性は、質量分析およびウエスタンブロッティングを使用して、Ｔ−１２４９ミメティボディと確認された。サンプルは、ヒト血清へのＴ−１２４９ミメティボディの添加後０、５、２５および７２時間に採取した。バックグラウンドピークを各サンプルの参照として使用した。この方法を使用して、Ｔ−１２４９ミメティボディの９３％以上が３７℃で７２時間後に無傷のままであったことが見出された。類似の結果が、ヘパリン処理したヒト全血若しくはカニクイザル全血いずれか中でのＴ−１２４９ミメティボディの３７℃で２４時間のインキュベーション後に得られた。
本発明は今や完全に記述され、付属として付けられる請求の範囲の技術思想若しくは範囲から離れることなく多くの変更および改変をそれになし得ることが、当業者に明らかであろう。
Ｔ−１２４９ペプチド（図１Ａ）およびＴ−１２４９ミメティボディ（図１Ｂ）によるＭＴ４−Ｌｕｃ細胞のＨＩＶ感染の阻害を示す。

Claims (27)

  1. 式（ＩＩ）：
    （Ｖ１−ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
    （ＩＩ）
    ［式中、Ｖ１は免疫グロブリン可変領域のＮ末端の一部分であり、ｇｐはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
    で表されるポリペプチド。
  2. 式（ＩＩＩ）：
    （ｇｐ−Ｌｋ−Ｖ２−Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３）（ｔ）
    （ＩＩＩ）
    ［式中、ｇｐはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
    で表されるポリペプチド。
  3. 式（ＩＶ）：
    （Ｈｇ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌｋ−ｇｐ）（ｔ）
    （ＩＶ）
    ［式中、ｇｐはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１由来ペプチド配列であり、Ｌｋはポリペプチド若しくは化学結合であり、Ｖ２は免疫グロブリン可変領域のＣ末端の一部分であり、Ｈｇは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ２定常領域であり、そしてＣＨ３は免疫グロブリンＨ鎖ＣＨ３定常領域であり、かつ、ｔは独立に１から１０までの整数である］
    で表されるポリペプチド。
  4. ｇｐが配列番号３若しくは４に示されるアミノ酸配列を有し、かつ、ｔが２である、請求項１、２若しくは３に記載のポリペプチド。
  5. 配列番号１、５、６、７、８、９、１０、１１、１２若しくは１３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド。
  6. Ｈｇ、ＣＨ２およびＣＨ３がＩｇＧ１若しくはＩｇＧ４サブクラスのものである、請求項１、２若しくは３に記載のポリペプチド。
  7. ポリペプチドが、ＨＩＶウイルスと宿主細胞膜の融合を阻害する、請求項１、２若しくは３に記載のポリペプチド。
  8. ポリペプチドが翻訳後に修飾される、請求項１、２若しくは３に記載のポリペプチド。
  9. ポリエチレングリコール部分の付加により修飾される、請求項８に記載のポリペプチド。
  10. 請求項１、２若しくは３の１つに記載ののポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  11. 配列番号２に示される配列若しくは相補配列を含んでなるポリヌクレオチド。
  12. 配列番号１、５、６、７、８、９、１０、１１、１２若しくは１３に示されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。
  13. 請求項１１若しくは１２に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
  14. 請求項１、２若しくは３の１つに記載ののポリペプチドを発現する細胞株。
  15. 請求項１３に記載のベクターを含んでなる細胞株。
  16. 細胞株が、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＣＨＯ若しくはウキクサ属（Ｌｅｍｎａ）細胞である、請求項１５に記載の細胞株。
  17. 請求項１５に記載の細胞株を培養する段階、および発現されたポリペプチドを精製する段階を含んでなる、ポリペプチドの製造方法。
  18. 有効量の請求項５に記載の最低１種のポリペプチド、および製薬学的に許容できる担体若しくは希釈剤を含んでなる製薬学的組成物。
  19. 標的細胞を、ある量の請求項１８に記載の製薬学的組成物と接触させることを含んでなる、標的細胞のＨＩＶ感染の阻害方法。
  20. 請求項１８に記載の製薬学的組成物をそれの必要な患者に投与することを含んでなる、最低１種のＨＩＶ感染に関係した状態若しくは障害の症状の低減方法、若しくはそれらの処置方法。
  21. ＨＩＶ感染に関係した状態若しくは障害が、ＡＩＤＳ、日和見感染症、若しくはＨＩＶ感染による他の状態である、請求項２０に記載の方法。
  22. 日和見感染症が、ニューモシスチス肺炎、ＣＭＶ網膜炎、カポジ肉腫、進行性多病巣性白質脳障害（ＰＭＬ）若しくはエントアメーバ下痢である、請求項２１に記載の方法。
  23. 他の状態が悪液質若しくは痴呆である、請求項２１に記載の方法。
  24. いずれかの他の抗ウイルス性化合物、タンパク質若しくは組成物を投与することをさらに含んでなる、請求項２０に記載の方法。
  25. 他の抗ウイルス性化合物、タンパク質若しくは組成物が、ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤若しくはプロテアーゼ阻害剤の最低１種である、請求項２４に記載の方法。
  26. 請求項１８に記載の製薬学的組成物を患者に投与することを含んでなる、患者におけるＨＩＶ感染の予防方法。
  27. 請求項１８に記載の製薬学的組成物を、ＨＩＶ陽性の無症候性患者に投与することを含んでなる、患者におけるＨＩＶ感染の続発症の予防方法。
JP2006547331A 2003-12-23 2004-12-21 抗レトロウイルス性の剤、組成物、方法および用途 Pending JP2007515965A (ja)

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