JP2007269654A - Compound having antibacterial activity or antitumor activity and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、微生物が生産する新規な化合物およびその製造方法、ならびに該化合物を有効成分として含む抗菌剤および抗腫瘍剤に関する。 The present invention relates to a novel compound produced by a microorganism, a method for producing the same, and an antibacterial agent and an antitumor agent containing the compound as an active ingredient.
感染症の治療のためにペニシリンやストレプトマイシン等多くの抗生物質や抗菌剤が利用されてきた。しかしながら、医療現場における抗生物質の頻繁な使用によって、被使用菌が薬剤耐性を獲得し、抗生物質が効かなくなるという問題がある。また、癌などの腫瘍についても、抗生物質の使用を継続すると、抗生物質に対して耐性が生じるという問題がある。 Many antibiotics and antibacterial agents such as penicillin and streptomycin have been used to treat infections. However, due to frequent use of antibiotics in the medical field, there is a problem that the bacteria to be used acquire drug resistance and the antibiotics become ineffective. In addition, with respect to tumors such as cancer, there is a problem that resistance to antibiotics occurs when antibiotics are continuously used.
また現在、先に述べたペニシリンやストレプトマイシンに代表されるように、微生物代謝産物から有用な抗生物質を探索するという試みが行われている（特許文献１、２および３参照）。また、生理活性物質の探索資源として真菌類や海洋性生物が着目されつつある（非特許文献１および２）。 At present, attempts are being made to search for useful antibiotics from microbial metabolites, as represented by the aforementioned penicillin and streptomycin (see Patent Documents 1, 2 and 3). In addition, fungi and marine organisms are attracting attention as search resources for physiologically active substances (Non-Patent Documents 1 and 2).
上記で述べたような既存の抗生物質に耐性を獲得した病原菌に対して有効な新規物質、また、既存の抗癌剤では十分な治療効果が得られないような腫瘍に対して効果を有するような新規物質の発見が常に望まれていた。特に、抗腫瘍活性を有する新規物質の発見が望まれていた。 New substances that are effective against pathogenic bacteria that have acquired resistance to existing antibiotics as described above, and that are effective against tumors for which sufficient therapeutic effects cannot be obtained with existing anticancer agents The discovery of materials has always been desired. In particular, the discovery of novel substances having antitumor activity has been desired.
本発明は、抗腫瘍活性を有する新規物質を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a novel substance having antitumor activity.
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、アクレモニウム属に属する微生物の培養物から得られた化合物が、新規であり、かつ抗菌活性および／または抗腫瘍活性を示す有用な化合物であることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that a compound obtained from a culture of a microorganism belonging to the genus Acremonium is novel and has antibacterial activity and / or antitumor activity. The present inventors have found that the present invention is a useful compound and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。 That is, the present invention includes the following inventions.
（１）下記式（I）：
で表される化合物。
(1) The following formula (I):
A compound represented by
（２）下記式（II）：
で表される化合物。
(2) The following formula (II):
A compound represented by
（３）（１）または（２）に記載の化合物の製造方法であって、アクレモニウム属に属し、該化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、得られる培養物から該化合物の少なくとも１種を単離することを特徴とする、前記方法。
（４）（１）に記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
（５）（１）に記載の化合物および／または（２）に記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
（６）アクレモニウム・スピーシーズ(Acremonium sp.)AWA16-1株。
(3) A process for producing the compound according to (1) or (2), wherein a microorganism belonging to the genus Acremonium and capable of producing the compound is cultured, and at least one of the compounds is obtained from the obtained culture. Said method, characterized in that the species is isolated.
(4) An antibacterial agent comprising the compound according to (1) as an active ingredient.
(5) An antitumor agent comprising the compound according to (1) and / or the compound according to (2) as an active ingredient.
(6) Acremonium sp. AWA16-1 strain.
本発明により、抗腫瘍活性を有する新規化合物、ならびに微生物を用いた該化合物の製造方法が提供される。 The present invention provides a novel compound having antitumor activity and a method for producing the compound using a microorganism.
以下に本発明を詳細に説明する。 The present invention is described in detail below.
１．本発明の化合物
本発明者らは、アクレモニウム属に属する微生物の培養物から得られた化合物が、新規であり、かつ抗菌活性および／または抗腫瘍活性を示すことを見出した。
1. Compound of the present invention The present inventors have found that a compound obtained from a culture of a microorganism belonging to the genus Acremonium is novel and exhibits antibacterial activity and / or antitumor activity.
一実施形態において本発明は、式（I）：
本明細書において、各一般式で表される化合物には、該化合物の塩も包含される。該化合物の塩は、必要に応じて所望の酸または塩基を使用することにより、容易に調製することができる。該塩は、溶液から析出させてからこれを濾過により集めることができ、また溶媒の蒸発により回収することもできる。 In the present specification, the compound represented by each general formula includes salts of the compound. The salt of the compound can be easily prepared by using a desired acid or base as necessary. The salt may precipitate from solution and then be collected by filtration or may be recovered by evaporation of the solvent.
式（I）で表される化合物は、抗菌活性および抗腫瘍活性を有する。本発明の式（I）で表される化合物は、特にバシラス（Bacillus）属に属する細菌、例えばバシラス・サブティリス（Bacillussubtilis）、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属に属する細菌、例えばスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、サリニビブリオ（Salinivibrio）属に属する細菌、例えばサリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibriocosticola）、サイトファーガ（Cytophaga）属に属する細菌、例えばサイトファーガ・マリノフラバ（Cytophagamarinoflava）、およびカンジダ（Candida）属に属する細菌、例えばカンジダ・アルビカンス（Candidaalbicans）に対して抗菌活性を有する。本発明の式（I）で表される化合物は、特に、哺乳動物由来の癌細胞、例えば、ヒト由来の肺癌細胞に対して、抗腫瘍活性を有する。 The compound represented by the formula (I) has antibacterial activity and antitumor activity. Compounds of the formula (I) of the present invention, particularly Bacillus (Bacillus) bacteria belonging to the genus, for example, Bacillus subtilis (Bacillus subtilis), Staphylococcus (Staphylococcus) bacterium belonging to the genus, for example, Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Sarinibiburio (Salinivibrio) bacterium belonging to the genus, for example Sarinibiburio-Kosuchiikora (Salinivibriocosticola), site fur moth (Cytophaga) bacterium belonging to the genus, for example, site Far gas-Marinofuraba (Cytophagamarinoflava), and Candida (Candida) in the genus It has antibacterial activity against bacteria belonging to it, such as Candidaalbicans . The compound represented by the formula (I) of the present invention has antitumor activity particularly against cancer cells derived from mammals, for example, human-derived lung cancer cells.
本発明の式（I）で表される化合物の具体例として、式（I）においてＲ１およびＲ２がメチルである下記式（III）により表される化合物が挙げられる。 Specific examples of the compound represented by the formula (I) of the present invention include compounds represented by the following formula (III) in which R 1 and R 2 are methyl in the formula (I).
上記式（III）で表される化合物の構造式および理化学的性質は以下のとおりである：
（１）物質の色 ：無色
（２）分子量 ：314
（３）分子式 ：C19H22O4
（４）質量分析 ：FAB-MS（高速中性粒子衝突イオン化質量分析）
実測値 315.25 (M + H)+
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）： λmax（e）206 nm (38,000)
（６）1H NMR（重ジメチルスルホキシド中で測定、750 MHz）：
δppm 1.13 (6H, s), 2.15 (3H, s), 2.17 (3H, s), 3.00 (2H, q), 4.55 (1H, s), 4.56 (1H, dd), 6.12 (1H, s), 6.17 (1H, s), 6.20 (1H, s), 6.25 (1H, s), 6.30 (1H, s), 9.35 (1H, s)
（７）13C NMR（重ジメチルスルホキシド中で測定、125 MHz）:
δppm 18.6, 21.1, 24.8, 25.9, 28.3, 70.0, 89.7, 98.0, 102.3, 109.4, 110. 8, 111.3, 121.6, 134.8, 139.9, 156.2, 158.2, 158.3, 160.3
（８）溶解性 ：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶。ヘキサンに難溶。
（９）抗菌活性 ：ペーパーディスク法にて、50 mgの式（III）の化合物を直径6 mmのペーパーディスクに加えた時、バシラス・サブティリス（Bacillus subtilisIFO3134）に対して直径10 mmの阻止円が形成された。また、50 mgの式（III）の化合物を直径6 mmのペーパーディスクに加えた時、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcusaureus IFO12732）に対して直径18 mmの阻止円が形成された。また、50 mgの式（III）の化合物を直径6 mmのペーパーディスクに加えた時、サリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibriocosticola ATCC 33508）に対して直径9 mmの阻止円が形成された。また、50 mgの式（III）の化合物を直径6 mmのペーパーディスクに加えた時、サイトファーガ・マリノフラバ（Cytophagamarinoflava IFO14170）に対して直径8 mmの阻止円が形成された。また、50 mgの式（I）の化合物を直径6 mmのペーパーディスクに加えた時、カンジダ・アルビカンス（Candidaalbicans IFO 1060）に対して直径15 mmの阻止円が形成された。
（１０）ヒト肺癌由来細胞株A549細胞を、125 mg/ml濃度の式（III）の化合物の存在下で48時間培養したところ、A549細胞を完全に死滅させた。IC50値は17 mg/mlであった。
The structural formula and physicochemical properties of the compound represented by the above formula (III) are as follows:
(1) Color of the substance: colorless (2) Molecular weight: 314
(3) Molecular formula: C 19 H 22 O 4
(4) Mass spectrometry: FAB-MS (fast neutral particle impact ionization mass spectrometry)
Actual value 315.25 (M + H) +
(5) UV absorption spectrum (in methanol): λ max (e) 206 nm (38,000)
(6) 1 H NMR (measured in deuterated dimethyl sulfoxide, 750 MHz):
δppm 1.13 (6H, s), 2.15 (3H, s), 2.17 (3H, s), 3.00 (2H, q), 4.55 (1H, s), 4.56 (1H, dd), 6.12 (1H, s), 6.17 (1H, s), 6.20 (1H, s), 6.25 (1H, s), 6.30 (1H, s), 9.35 (1H, s)
(7) 13 C NMR (measured in deuterated dimethyl sulfoxide, 125 MHz):
δppm 18.6, 21.1, 24.8, 25.9, 28.3, 70.0, 89.7, 98.0, 102.3, 109.4, 110. 8, 111.3, 121.6, 134.8, 139.9, 156.2, 158.2, 158.3, 160.3
(8) Solubility: Soluble in methanol, ethyl acetate and chloroform. Insoluble in hexane.
(9) Antibacterial activity: When 50 mg of the compound of formula (III) is added to a 6 mm diameter paper disc by the paper disc method, 10 mm in diameter against Bacillus subtilis IFO3134 A circle was formed. In addition, when 50 mg of the compound of formula (III) was added to a 6 mm diameter paper disk, an inhibition circle with a diameter of 18 mm was formed with respect to Staphylococcusaureus IFO12732. In addition, when 50 mg of the compound of formula (III) was added to a 6 mm diameter paper disc, a 9 mm diameter blocking circle was formed against Salinivibriocosticola ATCC 33508. In addition, when 50 mg of the compound of formula (III) was added to a 6 mm diameter paper disk, an 8 mm diameter blocking circle was formed against Cytophagamarinoflava IFO14170. In addition, when 50 mg of the compound of formula (I) was added to a 6 mm diameter paper disc, a 15 mm diameter blocking circle was formed against Candidaalbicans IFO 1060.
(10) When human lung cancer-derived cell line A549 cells were cultured for 48 hours in the presence of a compound of formula (III) at a concentration of 125 mg / ml, A549 cells were completely killed. The IC 50 value was 17 mg / ml.
一実施形態において本発明は、式（II）：
また、本発明の式（II）で表される化合物の具体例として、式（II）においてＲ３がヘプチルであり、Ｒ４がメチルである式（IV）により表される化合物が挙げられる。 Further, specific examples of the compound represented by the formula (II) of the present invention include a compound represented by the formula (IV) in which R 3 is heptyl and R 4 is methyl in the formula (II).
上記式（IV）で表される化合物の構造式および理化学的性質は以下のとおりである：
（１）物質の色 ：無色
（２）分子量 ：325
（３）分子式 ：C17H27NO5
（４）質量分析 ：FAB-MS（高速中性粒子衝突イオン化質量分析）
実測値308.26 (M - H2O + H)+
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）： λmax（e）274 nm (5,400)
（６）1H NMR（重ジメチルスルホキシド中で測定、750 MHz）:
δppm 0.86 (3H, t), 1.22(3H, d), 1.23 (8H, m), 1.25 (2H, m), 1.36 (2H, m), 3.30 (1H, d), 3.68 (1H, q), 3.92 (1H, m), 4.64 (1H, s), 4.70 (1H, d), 5.52 (1H, dd), 5.75 (1H, dd), 5.92 (1H, d), 8.20 (1H, s)
（７）13C NMR（重ジメチルスルホキシド中で測定、125 MHz）:
δppm 14.0, 18.1, 22.1, 24.9, 28.6, 29.0, 31.2, 37.2, 43.7, 51.6, 70.2, 77.1, 79.6, 121.1, 138.4, 165.9, 172.5
（８）溶解性 ：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶。ヘキサンに難溶。
（９）ヒト肺癌由来細胞株A549細胞を、125 mg/ml濃度の式（IV）の化合物の存在下で48時間培養したところ、化合物無添加の細胞と比べて、A549細胞の増殖を42％阻害した。
The structural formula and physicochemical properties of the compound represented by the above formula (IV) are as follows:
(1) Color of the substance: colorless (2) Molecular weight: 325
(3) Molecular formula: C 17 H 27 NO 5
(4) Mass spectrometry: FAB-MS (fast neutral particle impact ionization mass spectrometry)
Actual value 308.26 (M-H 2 O + H) +
(5) UV absorption spectrum (in methanol): λ max (e) 274 nm (5,400)
(6) 1 H NMR (measured in deuterated dimethyl sulfoxide, 750 MHz):
δppm 0.86 (3H, t), 1.22 (3H, d), 1.23 (8H, m), 1.25 (2H, m), 1.36 (2H, m), 3.30 (1H, d), 3.68 (1H, q), 3.92 (1H, m), 4.64 (1H, s), 4.70 (1H, d), 5.52 (1H, dd), 5.75 (1H, dd), 5.92 (1H, d), 8.20 (1H, s)
(7) 13 C NMR (measured in deuterated dimethyl sulfoxide, 125 MHz):
δppm 14.0, 18.1, 22.1, 24.9, 28.6, 29.0, 31.2, 37.2, 43.7, 51.6, 70.2, 77.1, 79.6, 121.1, 138.4, 165.9, 172.5
(8) Solubility: Soluble in methanol, ethyl acetate and chloroform. Insoluble in hexane.
(9) When human lung cancer-derived cell line A549 cells were cultured for 48 hours in the presence of a compound of formula (IV) at a concentration of 125 mg / ml, the growth of A549 cells was 42% compared to cells without compound addition. Inhibited.
２．本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物は、アクレモニウム属に属し、該化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、得られる培養物から該化合物の少なくとも１種を単離することにより製造することができる。すなわち、該化合物を産生する微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄積させ、該培養物から該化合物を単離することにより製造する。上記式（I）で表される化合物と式（II）で表される化合物は、同時に製造してもよいし、別々に製造してもよい。
2. Process for producing the compound of the present invention The compound of the present invention is produced by culturing a microorganism belonging to the genus Acremonium and capable of producing the compound, and isolating at least one of the compounds from the obtained culture. can do. That is, it is produced by culturing a microorganism producing the compound in a medium, producing and accumulating the compound in the culture, and isolating the compound from the culture. The compound represented by the above formula (I) and the compound represented by the formula (II) may be produced simultaneously or separately.
（１）微生物
本発明の製造方法において用いることのできる微生物としては、アクレモニウム属（Acremonium sp.）に属し、かつ上記式（I）で表される化合物および／または式（II）で表される化合物を生産する能力を有する微生物であれば特に限定されない。式（I）で表される化合物を製造する場合は、少なくとも式（I）で表される化合物を生産する能力を有する微生物を用い、式（II）で表される化合物を製造する場合は、少なくとも式（II）で表される化合物を生産する能力を有する微生物を用いる。式（I）で表される化合物および式（II）で表される化合物の双方を生産することが可能な微生物を用いることにより、式（I）で表される化合物と式（II）で表される化合物を、同時に製造することができる。そして、微生物の培養物から所望の化合物を単離する。
(1) Microorganism The microorganism that can be used in the production method of the present invention belongs to the genus Acremonium ( Acremonium sp.) And is represented by the above formula (I) and / or the formula (II). The microorganism is not particularly limited as long as it is a microorganism having an ability to produce a compound. When producing a compound represented by formula (I), using a microorganism having the ability to produce at least a compound represented by formula (I), and producing a compound represented by formula (II), A microorganism having the ability to produce at least the compound represented by the formula (II) is used. By using a microorganism capable of producing both the compound represented by the formula (I) and the compound represented by the formula (II), the compound represented by the formula (I) and the formula (II) are represented. Can be produced at the same time. The desired compound is then isolated from the microbial culture.
本発明において用いることができる微生物の具体例としては、兵庫県淡路島の底泥から分離されたアクレモニウム・スピーシーズ(Acremonium sp.)AWA16-1株、および該菌株に由来する変異株を挙げることができる。なお、アクレモニウム・スピーシーズ(Acremoniumsp.)AWA16-1株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８）に、平成17年11月15日に、寄託番号NITE P-151として寄託されている。当該菌株は、式IIIで表される化合物および式IVで表される化合物を生産する能力を有する。 Specific examples of microorganisms that can be used in the present invention include Acremonium sp. AWA16-1 strain isolated from the bottom mud of Awaji Island, Hyogo Prefecture, and mutant strains derived from the strain. it can. Acremonium sp. AWA16-1 was established in November 2005 at the Japan Institute for Product Evaluation Technology Patent Microorganism Depositary (2-8 Kazusa-Kamashita, Kisarazu City, Chiba Prefecture). On the 15th, it is deposited under the deposit number NITE P-151. The strain has the ability to produce a compound represented by Formula III and a compound represented by Formula IV.
変異株とは、上記菌株を変異誘発処理することにより得られる菌株をさす。変異誘発処理は任意の適当な変異原を用いて行われ得る。ここで、「変異原」なる語は、例えば変異原効果を有する薬剤のみならずＵＶ照射のごとき変異原効果を有する処理をも含むものと理解すべきである。適当な変異原の例としてエチルメタンスルホネート、ＵＶ照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、ブロモウラシルのようなヌクレオチド塩基類似体およびアクリジン類が挙げられるが、他の任意の効果的な変異原もまた使用できる。
アクレモニウム・スピーシーズ(Acremonium sp.)AWA16-1株は次の菌学的性質を有する。
The mutant strain refers to a strain obtained by subjecting the strain to mutagenesis treatment. The mutagenesis treatment can be performed using any suitable mutagen. Here, the term “mutagen” should be understood to include not only a drug having a mutagen effect but also a treatment having a mutagen effect such as UV irradiation. Examples of suitable mutagens include ethyl methanesulfonate, UV irradiation, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, nucleotide base analogs such as bromouracil and acridines, but any other effect A typical mutagen can also be used.
Acremonium sp. AWA16-1 strain has the following mycological properties.
各種培地における生育形態
各培養平板において２週間（２５℃）培養後に巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調(コロニー表面および裏面)、表面性状、可溶性色素産生の有無を観察した。なお、色調の（ ）内はKornerup and Wanscher(1978)で用いられている「色」のCode No.を示す。
Growth forms in various media Macroscopic observation was carried out after culturing for 2 weeks (25 ° C.) on each culture plate, and the colony diameter, color tone (colony surface and back surface), surface properties, and presence or absence of soluble pigment production were observed. In addition, () in the color tone indicates the code number of “color” used in Kornerup and Wanscher (1978).
a. PDA (Potato Dextrose Agar) 培地における生育
コロニー直径：12-14 mm。
色調、表面：Yellowish white(2A-2)〜White(2A-1)。
色調、裏面：Pale yellow(4A-3)。
表面性状：ビロード状、放射状の漠を形成。
可溶性色素：あまり顕著ではない、Yellowish white(1A-2)
a. Growing colony diameter in PDA (Potato Dextrose Agar) medium: 12-14 mm.
Color tone, surface: Yellowish white (2A-2) to White (2A-1).
Color tone, reverse side: Pale yellow (4A-3).
Surface properties: velvety and radial vague.
Soluble pigment: not very prominent, Yellowish white (1A-2)
b. ２％MA (2%Malt agar) 培地における生育
コロニー直径：9-12 mm。
色調、表面：Yellowish white(2A-2)〜White(2A-1)。
色調、裏面：Yellowish white(2A-2)。
表面性状：ビロード状。
可溶性色素：産生なし。
b. Growing colony diameter in 2% MA (2% Malt agar) medium: 9-12 mm.
Color tone, surface: Yellowish white (2A-2) to White (2A-1).
Color tone, reverse side: Yellowish white (2A-2).
Surface texture: velvety.
Soluble pigment: no production.
c. OA (Oatmeal Agar) 培地における生育
コロニー直径：10-14 mm。
色調、表面：Yellowish white(2A-2)。
色調、裏面：Greyish orange(6B-4)。
表面性状：ビロード状。
可溶性色素：産生なし。
c. Growing colony diameter in OA (Oatmeal Agar) medium: 10-14 mm.
Color, surface: Yellowish white (2A-2).
Color tone, reverse side: Greyish orange (6B-4).
Surface texture: velvety.
Soluble pigment: no production.
d. LCA培地 (三浦培地) における生育
コロニー直径：10-14 mm。
色調：White(1A-1)。
表面性状：ビロード状。
可溶性色素：産生なし。
d. Growing colony diameter in LCA medium (Miura medium): 10-14 mm.
Color tone: White (1A-1).
Surface texture: velvety.
Soluble pigment: no production.
形態的特徴
a. 栄養菌糸：菌糸は寒天表面上もしくは寒天内に形成され、無色で有隔壁菌糸。栄養菌糸のいたるところで円筒形の短い細胞から、亜球形で１細胞の厚膜胞子と考えられる構造が形成された。
Morphological features
a. Vegetative mycelium: Mycelia are formed on or in the agar surface and are colorless and septal mycelium. Cylindrical short-celled cells were formed throughout the vegetative mycelium and were considered to be subspherical and one cell thick spore.
b. 生殖器官
無性生殖器官：分生子柄および分生子形成細胞：分生子柄はほとんど発育がみとめられず分生子形成細胞であるフィアライドが栄養菌糸から直接単性して形成される。フィアライドは基部に隔壁を形成。フィアライドの基部はやや膨らみ、基部から先端にむかってなだらかに細くなる傾向がみられた。
分生子：分生子はフィアロ型分生子、またはアレウム型分生子で卵型〜倒卵型、楕円型、無色、１細胞、表面は円滑でフィアライド先端部に分生子塊を形成する。
有性生殖器官：約１ヶ月間の培養検体からはテレオモルフの形成は確認されなかった。
b. Reproductive organs Asexual reproductive organs: conidia and conidia cells: Conidia are almost undeveloped, and conidia cells, phialides, are formed directly from vegetative mycelium. The phialide forms a partition at the base. The base of the phialide swelled slightly, and it tended to become thinner gradually from the base to the tip.
Conidia: Conidia are fiaro-type conidia or areum-type conidia, egg-shaped to egg-shaped, oval, colorless, one cell, the surface is smooth and forms a conidial mass at the tip of the phialide.
Sexual reproductive organs: The formation of teleomorphs was not confirmed from cultured specimens for about one month.
（２）微生物の培養
本発明の化合物の製造方法において微生物の培養は、通常の微生物の培養方法で実施できる。培地としては、資化可能な炭素源、窒素源、無機物および必要な生育・生産促進物質を適宜含有する培地であれば、合成培地または天然培地のいずれでも使用可能である。炭素源としては、グルコース、澱粉、デキストリン、マンノース、フラクトース、シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが単独または組み合わせて用いられる。さらに、必要に応じて炭化水素、アルコール類、有機酸、アミノ酸（トリプトファン等）なども用いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実かす、カザミノ酸などが単独または組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛などの無機塩類を加えてもよい。さらに使用する微生物の生育や本発明の化合物の生産を促進する微量成分を適当に添加することができ、そのような成分は当業者であれば適当なものを選択することができる。
(2) Microbial culture In the method for producing a compound of the present invention, the culture of a microorganism can be carried out by an ordinary microorganism culture method. As the medium, any of a synthetic medium and a natural medium can be used as long as the medium appropriately contains an assimitable carbon source, nitrogen source, inorganic substance, and necessary growth / production promoting substances. As the carbon source, glucose, starch, dextrin, mannose, fructose, sucrose, lactose, xylose, arabinose, mannitol, molasses and the like are used alone or in combination. Furthermore, hydrocarbons, alcohols, organic acids, amino acids (such as tryptophan) and the like are used as necessary. As the nitrogen source, ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium nitrate, sodium nitrate, urea, peptone, meat extract, yeast extract, dry yeast, corn steep liquor, soybean flour, cottonseed meal, casamino acid, etc. are used alone or in combination. . In addition, inorganic salts such as sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, calcium carbonate, potassium dihydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate, ferrous sulfate, calcium chloride, manganese sulfate, and zinc sulfate can be added as necessary. Good. Furthermore, trace components that promote the growth of the microorganisms to be used and the production of the compounds of the present invention can be appropriately added, and such components can be appropriately selected by those skilled in the art.
培養法としては、液体培養もしくは寒天培養が適しているが、これに限定されない。液体培養の場合、培養温度は、２５〜３５℃が適当であり、培養中の培地のｐＨは６〜８に維持することが望ましく、３０〜１２０ｒｐｍの震盪速度で回転または往復震盪培養することが望ましい。液体培養で通常５〜１４日間培養を行うと、目的化合物が培養液中ならびに菌体中に生成蓄積される。培養物中の生成量が最大に達した時に培養を停止する。寒天培養の場合、培養温度は、２５〜３５℃が適当であり、培養中の培地のｐＨは６〜８に維持することが望ましい。寒天培養で通常１０〜２０日間培養を行うと、目的化合物が寒天培地中ならびに菌体中に生成蓄積される。培養物中の生成量が最大に達した時に培養を停止する。 As the culture method, liquid culture or agar culture is suitable, but not limited thereto. In the case of liquid culture, the culture temperature is suitably 25 to 35 ° C., the pH of the medium during the culture is preferably maintained at 6 to 8, and rotation or reciprocal shaking culture is performed at a shaking speed of 30 to 120 rpm. desirable. When culturing is usually performed for 5 to 14 days in liquid culture, the target compound is produced and accumulated in the culture solution and in the cells. The culture is stopped when the production amount in the culture reaches the maximum. In the case of agar culture, the culture temperature is suitably 25 to 35 ° C., and the pH of the medium during the culture is desirably maintained at 6 to 8. When culturing is usually carried out for 10 to 20 days in agar culture, the target compound is produced and accumulated in the agar medium and in the cells. The culture is stopped when the production amount in the culture reaches the maximum.
（３）化合物の単離・精製
培養物からの本発明の化合物の単離・精製は、微生物代謝生産物をその培養物から単離・精製するために常用される方法に従って行われる。ここで、「培養物」とは、培養上清、培養菌体、または菌体の破砕物のいずれをも包含するものである。例えば培養物を濾過や遠心分離により培養濾液と菌体に分け、菌体をアセトン、もしくはクロロホルム／メタノール（９／１）混合溶媒などで抽出する。培養濾液は、そのまま、または酢酸エチル、クロロホルムなどで抽出して用いる。ついで、菌体抽出液と培養濾液もしくは培養濾液の抽出物とを合わせて濃縮し、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより精製を行い、本発明の化合物を得る。得られた化合物は、NMR解析などの通常の化学的手法により、上記「１．本発明の化合物」に記載した性質を示すか否かを調べることにより、本発明の化合物であることを確認することができる。
(3) Isolation / Purification of Compound Isolation / purification of the compound of the present invention from the culture is carried out according to a commonly used method for isolating / purifying a microbial metabolite from the culture. Here, the “culture” includes any of culture supernatant, cultured cells, and disrupted cells. For example, the culture is divided into a culture filtrate and cells by filtration or centrifugation, and the cells are extracted with acetone or a mixed solvent of chloroform / methanol (9/1). The culture filtrate is used as it is or extracted with ethyl acetate, chloroform or the like. Subsequently, the bacterial cell extract and the culture filtrate or the extract of the culture filtrate are combined and concentrated, and purified by column chromatography, preparative thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, or the like to obtain the compound of the present invention. The obtained compound is confirmed to be the compound of the present invention by examining whether or not it exhibits the properties described in “1. Compound of the present invention” by a usual chemical method such as NMR analysis. be able to.
一方、得られた化合物が抗腫瘍活性を有することを確認するには、例えば、癌細胞を播種したマイクロプレートに、得られた化合物を適当な濃度で添加し、培養する。培養後に例えばアラマーブルーを用いて生存癌細胞数を測定し、対照の化合物無添加群における細胞数と比較して、その癌細胞の増殖が抑制されたか否かを観察する。 On the other hand, in order to confirm that the obtained compound has antitumor activity, for example, the obtained compound is added at an appropriate concentration to a microplate seeded with cancer cells and cultured. After culturing, the number of viable cancer cells is measured using, for example, Alamar Blue, and compared with the number of cells in the control compound-free group, it is observed whether or not the growth of the cancer cells is suppressed.
また、得られた化合物が抗菌活性を有することを確認するには、例えば、得られた化合物を含む溶液をそのまま使用するかまたはメタノールなどの適当な溶媒で希釈した溶液を調製し、その溶液をペーパーディスクにしみ込ませ、あらかじめ微生物（細菌、真菌など）を植菌しておいた栄養寒天培地上にのせ、培養する。培養後、ペーパーディスク周辺に阻止円（ハロー）が形成されるか否かを観察する。 In order to confirm that the obtained compound has antibacterial activity, for example, a solution containing the obtained compound is used as it is, or a solution diluted with an appropriate solvent such as methanol is prepared, and the solution is used. The sample is soaked in a paper disk and placed on a nutrient agar medium inoculated with microorganisms (bacteria, fungi, etc.) and cultured. After incubation, observe whether or not a blocking circle (halo) is formed around the paper disk.
３．本発明の化合物の用途
（１）抗菌剤
本発明の式（I）の化合物は、優れた抗菌活性を有するため抗菌剤として有用であり、ヒトおよび動物用医薬品、医薬品原料、農薬、食品の保存剤等として使用することができる。
3. Uses of the Compound of the Present Invention (1) Antibacterial Agent The compound of the formula (I) of the present invention is useful as an antibacterial agent because of its excellent antibacterial activity, and preserves human and veterinary drugs, pharmaceutical raw materials, agricultural chemicals and foods. It can be used as an agent.
すなわち本発明の抗菌剤は、式（I）の化合物を有効成分として含むものである。本発明の抗菌剤は、式（I）の化合物のうちの１種のみを単独で含有してもよいし、複数種を含有してもよい。また本発明の抗菌剤は、本発明の化合物を含有する培養物を含むものであってもよい。さらに本発明の抗菌剤は、他の抗菌剤および／または添加剤などをさらに含有するものであってもよい。このような他の抗菌剤および添加剤は、本発明の化合物の抗菌活性を低減させるものでなければ任意のものを使用することができ、例えば、抗生物質（ペニシリン類、アミノグリコシド類、セファロスポリン類等）などが挙げられる。 That is, the antibacterial agent of the present invention contains the compound of formula (I) as an active ingredient. The antibacterial agent of this invention may contain only 1 type in the compound of a formula (I), and may contain multiple types. The antibacterial agent of the present invention may include a culture containing the compound of the present invention. Furthermore, the antibacterial agent of the present invention may further contain other antibacterial agents and / or additives. Any other antibacterial agents and additives can be used as long as they do not reduce the antibacterial activity of the compound of the present invention. For example, antibiotics (penicillins, aminoglycosides, cephalosporins) can be used. Etc.).
本発明の抗菌剤は、使用する対象が特に限定されるものではなく、例えば、化膿性疾患、呼吸器感染症、胆道感染症、***症などの感染症（特に細菌感染症）の予防および治療に有用である。また、バシラス属細菌、特にバシラス・サブティリスによる感染症、スタフィロコッカス属細菌、特にスタフィロコッカス・アウレウスによる感染症、サリニビブリオ（Salinivibrio）属細菌、特にサリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibrio costicola）による感染症、サイトファーガ（Cytophaga）属細菌、特にサイトファーガ・マリノフラバ（Cytophagamarinoflava）による感染症、およびカンジダ（Candida）属細菌、特にカンジダ・アルビカンス（Candidaalbicans）による感染症の治療に特に有効である。 The target to be used for the antibacterial agent of the present invention is not particularly limited. For example, prevention of infections (especially bacterial infections) such as purulent diseases, respiratory infections, biliary tract infections, urinary tract infections, and the like. And useful for treatment. In addition, Bacillus bacteria, especially Bacillus subtilis infections caused by Staphylococcus bacteria belonging to the genus, particularly infections caused by Staphylococcus aureus, Sarinibiburio (Salinivibrio) bacteria belonging to the genus, especially infection by Sarinibiburio-Kosuchiikora (Salinivibrio costicola), infection by site Far moth (Cytophaga) bacteria, in particular sites fur moth-Marinofuraba (Cytophagamarinoflava), and Candida (Candida) bacteria, in particular, especially useful in treatment of infections caused by Candida albicans (Candidaalbicans).
本発明の抗菌剤を適用する対象としては、哺乳動物、例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ等）、愛玩動物（イヌ、ネコ等）、実験動物（マウス、ラット、ハムスター等）が含まれるが、特に限定されるものではない。 The target to which the antibacterial agent of the present invention is applied includes mammals such as humans, domestic animals (cattle, horses, etc.), pets (dogs, cats, etc.), and laboratory animals (mouse, rats, hamsters, etc.). There is no particular limitation.
（２）抗腫瘍剤
本発明の化合物は、優れた抗腫瘍活性を有するため抗腫瘍剤として有用であり、ヒトおよび動物用医薬品、医薬品原料等として使用することができる。
(2) Antitumor Agent The compound of the present invention is useful as an antitumor agent because it has excellent antitumor activity, and can be used as a human and veterinary drug, a pharmaceutical raw material, and the like.
本発明の抗腫瘍剤は、上記式（I）の化合物および／または式（II）の化合物を有効成分として含むものである。本発明の抗腫瘍剤は、上記化合物のうちの１種のみ（例えば式（I）の化合物または式（II）の化合物）を単独で含有してもよいし、複数種を含有してもよい。また本発明の抗腫瘍剤は、式（I）の化合物および／または式（II）の化合物を含有する培養物を含むものであってもよい。さらに本発明の抗腫瘍剤は、他の抗腫瘍剤および／または添加剤などをさらに含有するものであってもよい。このような他の抗腫瘍剤および添加剤は、本発明の化合物の抗腫瘍活性を低減させるものでなければ任意のものを使用することができ、例えば、アドリアマイシン、シスプラチン、タキソール、ハーセプチンなどが挙げられる。 The antitumor agent of the present invention comprises the compound of formula (I) and / or the compound of formula (II) as an active ingredient. The antitumor agent of the present invention may contain only one of the above compounds (for example, the compound of formula (I) or the compound of formula (II)), or may contain a plurality of types. . Further, the antitumor agent of the present invention may include a culture containing a compound of formula (I) and / or a compound of formula (II). Furthermore, the antitumor agent of the present invention may further contain other antitumor agents and / or additives. Any other antitumor agents and additives can be used as long as they do not reduce the antitumor activity of the compound of the present invention, and examples thereof include adriamycin, cisplatin, taxol, herceptin and the like. It is done.
本発明の抗腫瘍剤を腫瘍の予防または治療目的で使用する場合は、使用する対象を特に限定するものではない。例えば、癌、肉腫、良性腫瘍などの少なくとも一種の腫瘍について予防または治療を目的として用いることができる。これらの疾病は、単独であっても、併発したものであっても、上記以外の他の疾病を併発したものであっても、使用の対象とすることができる。対象となる癌種は特に限定されるものではなく、例えば肺癌、脳腫瘍、上咽頭癌、舌癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、肝癌、直腸癌、結腸癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌、骨肉腫および白血病からなる群から選択される。単一の癌のみならず複数の癌が併発したものも含まれる。 When the antitumor agent of the present invention is used for the purpose of preventing or treating tumors, the subject to be used is not particularly limited. For example, it can be used for the purpose of prevention or treatment of at least one kind of tumor such as cancer, sarcoma, or benign tumor. These illnesses can be used, whether they are singly or co-occurring, or are combined with other illnesses other than those described above. The target cancer type is not particularly limited. For example, lung cancer, brain tumor, nasopharyngeal cancer, tongue cancer, esophageal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, liver cancer, rectal cancer, colon cancer, uterine cancer, ovarian cancer, testicular cancer Selected from the group consisting of osteosarcoma and leukemia. This includes not only a single cancer but also multiple cancers.
本発明の抗腫瘍剤を投与する対象としては、限定するものではないが、哺乳動物、例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ等）、愛玩動物（イヌ、ネコ等）、実験動物（マウス、ラット、ハムスター等）でありうる。 The subject to which the antitumor agent of the present invention is administered is not limited, but mammals such as humans, domestic animals (cattle, horses, etc.), pet animals (dogs, cats, etc.), laboratory animals (mouse, rats). Hamster, etc.).
（３）投与
本発明の抗菌剤および抗腫瘍剤を哺乳動物に投与する場合には、これらの医薬製剤は、医薬的に許容される担体または添加物を共に含むものであってもよい。このような担体および添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤などの他、リポゾームなどの人工細胞構造物などが挙げられる。使用される添加物は、医薬組成物の剤形に応じて上記の中から適宜または組み合わせて選択される。
(3) Administration When the antibacterial agent and antitumor agent of the present invention are administered to a mammal, these pharmaceutical preparations may contain a pharmaceutically acceptable carrier or additive. Examples of such carriers and additives include water, pharmaceutically acceptable organic solvents, collagen, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, carboxyvinyl polymer, sodium alginate, water soluble dextran, sodium carboxymethyl starch, pectin, xanthan gum, Others such as gum arabic, casein, gelatin, agar, glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, petrolatum, paraffin, stearyl alcohol, stearic acid, human serum albumin, mannitol, sorbitol, lactose, surfactants acceptable as pharmaceutical additives, etc. And artificial cell structures such as liposomes. The additive to be used is appropriately selected or combined from the above according to the dosage form of the pharmaceutical composition.
本発明の抗菌剤および抗腫瘍剤は、経口経路または非経口経路のいずれでも投与することができる。 The antibacterial and antitumor agents of the present invention can be administered by either oral or parenteral routes.
本発明の抗菌剤および抗腫瘍剤を経口的に投与する場合は、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤などの固形製剤、あるいは液剤、シロップ剤などの液体製剤等とすればよい。特に顆粒剤および散剤は、カプセル剤として単位投与剤形とすることができ、液体製剤の場合は使用する際に再溶解させる乾燥生成物とすることができる。 When the antibacterial agent or antitumor agent of the present invention is administered orally, it may be a solid preparation such as a tablet, granule, powder or pill, or a liquid preparation such as a liquid or syrup. In particular, granules and powders can be made into unit dosage forms as capsules, and in the case of liquid preparations, they can be dried products that are redissolved when used.
これら剤形のうち経口用固形製剤は、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される結合剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤などの添加剤を含有する。また、経口用液体製剤は、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される安定剤、緩衝剤、矯味剤、保存剤、芳香剤、着色剤などの添加剤を含有する。 Of these dosage forms, oral solid preparations usually contain additives such as binders, excipients, lubricants, disintegrants, wetting agents and the like that are commonly used in the formulation. Oral liquid preparations usually contain additives such as stabilizers, buffering agents, corrigents, preservatives, fragrances, coloring agents and the like that are generally used in the formulation.
また非経口的に投与する場合は、注射剤または坐剤などの剤形とすることができる。例えば注射剤は、ポリアルコキシフラボノイドを溶液、懸濁液、乳液などに溶解または懸濁して調製されるものであり、通常単位投与量アンプルまたは多投与量容器の形態で提供される。また注射剤は、使用する際に適当な担体、例えば発熱物質不含の滅菌水に再溶解させる粉剤であってもよい。注射手法としては、例えば点滴静脈内注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、皮内注射が挙げられる。これらの非経口投与剤形は、通常それらの組成物中に薬学上一般的に使用される乳化剤、懸濁剤などの添加剤を含有する。 Moreover, when administering parenterally, it can be set as dosage forms, such as an injection or a suppository. For example, injections are prepared by dissolving or suspending polyalkoxyflavonoids in solutions, suspensions, emulsions, etc., and are usually provided in the form of unit dose ampoules or multi-dose containers. The injection may be a powder that is redissolved in a suitable carrier, such as sterile pyrogen-free water, when used. Examples of the injection technique include intravenous drip injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, and intradermal injection. These parenteral dosage forms usually contain additives such as emulsifiers and suspending agents which are generally used pharmaceutically in their compositions.
上記抗菌剤および抗腫瘍剤における本発明の化合物の量は、用途、剤形および投与経路などにより異なるが、総重量を基準として１〜５重量％、好ましくは２〜３重量％である。また、本発明の化合物の有効量は、投与対象の年齢、投与経路、投与回数により異なり、広範囲に変えることができる。例えば、有効成分として、１日につき体重１ｋｇ当たり１〜１０００ｍｇであり、１日数回から数週間に１回の間隔で投与することができる。 The amount of the compound of the present invention in the antibacterial agent and antitumor agent varies depending on the use, dosage form, administration route and the like, but is 1 to 5% by weight, preferably 2 to 3% by weight based on the total weight. In addition, the effective amount of the compound of the present invention varies depending on the age of the administration subject, the administration route, and the frequency of administration, and can be varied over a wide range. For example, the active ingredient is 1-1000 mg per kg body weight per day, and can be administered at intervals of several times a day to once every several weeks.
以下に本発明を実施例により具体的に説明する。ただし、本発明は実施例によりその技術的範囲が限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described specifically by way of examples. However, the technical scope of the present invention is not limited by the examples.
実施例１ 本発明の化合物の製造
種菌としてアクレモニウム・スピーシーズAWA16-1株を用いた。該菌株を、4 Lの寒天平板培地（1 L中、ポテトデキストロースブロース（ディフコ社製）24 g、寒天 15 g（和光純薬工業株式会社製）、自然海水 500 mL、蒸留水 500 mL（pH 6.8）を含む。）上で、25℃にて14日間培養した。
Example 1 Acremonium sp. AWA16-1 strain was used as an inoculum for producing the compound of the present invention . The strain was mixed with 4 L of agar plate medium (1 L, potato dextrose broth (Difco) 24 g, agar 15 g (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), natural seawater 500 mL, distilled water 500 mL (pH 6.8).) In the above, the cells were cultured at 25 ° C. for 14 days.
このようにして得られた培養物をアセトンで三日間抽出しその抽出液を濾紙（アドバンテック２番）にて濾過した。濾液を酢酸エチルと水中に二層分配し、酢酸エチル層を減圧濃縮した。得られた濃縮抽出物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ２００）を担体として用い、移動層として、まず、クロロホルム200 mLにて溶出した。次に、クロロホルム／メタノール（95:5, 9:1, 8:2）にて溶出し、ついでクロロホルム／メタノール/水（7:3:0.5）にて溶出した。クロロホルム／メタノール（95:5）にて溶出した画分に抗腫瘍活性が認められた。 The culture thus obtained was extracted with acetone for 3 days, and the extract was filtered through a filter paper (Advantech No. 2). The filtrate was partitioned between ethyl acetate and water, and the ethyl acetate layer was concentrated under reduced pressure. The obtained concentrated extract was eluted with 200 mL of chloroform as a moving layer using silica gel column chromatography (Wakogel C200) as a carrier. Next, elution was performed with chloroform / methanol (95: 5, 9: 1, 8: 2), followed by elution with chloroform / methanol / water (7: 3: 0.5). Antitumor activity was observed in the fraction eluted with chloroform / methanol (95: 5).
次に、抗腫瘍活性が認められたクロロホルム／メタノール（95:5）にて溶出した画分を逆相クロマトグラフィー(コスモシール75C18-OPN)を用い、移動層として含水メタノールを用いて溶出した結果、50％〜70％メタノール/水にての溶出画分に抗腫瘍活性が認められた。 Next, the fraction eluted with chloroform / methanol (95: 5) with anti-tumor activity was eluted using reverse phase chromatography (Cosmosil 75C18-OPN) and water-containing methanol as the moving bed. Antitumor activity was observed in the fraction eluted with 50% to 70% methanol / water.
次に、抗腫瘍活性が認められた50％〜70％メタノール/水画分を高速液体クロマトグラフィー（カラム：TSK-Gel ODS80Ts（直径20 mm、長さ250 mm）、移動相：65％メタノール−水、流速10 mL/min）にて最終精製し、化合物A（1.2 mg）および化合物B（7.8 mg）を得た。化合物AおよびBについて理化学的性状および化学構造を特定した。化合物Aは以下の式（III）で表される化合物として、化合物Bは以下の式（IV）で表される化合物として同定された。 Next, high-performance liquid chromatography (column: TSK-Gel ODS80Ts (diameter: 20 mm, length: 250 mm), mobile phase: 65% methanol- Final purification was performed with water and a flow rate of 10 mL / min to obtain Compound A (1.2 mg) and Compound B (7.8 mg). The physicochemical properties and chemical structures for compounds A and B were identified. Compound A was identified as a compound represented by the following formula (III), and Compound B was identified as a compound represented by the following formula (IV).
式(III)の化合物および式（IV)の化合物の理化学的性状については、上述のとおりである。 The physicochemical properties of the compound of formula (III) and the compound of formula (IV) are as described above.
実施例２ 抗腫瘍活性の評価
本発明の化合物の抗腫瘍活性を以下の様に評価した。ヒト肺癌由来細胞A549細胞を96穴マイクロプレートに8 x 103個/ 200 mL/ ウェルの濃度で播種し、14時間、CO2インキュベーター（5％二酸化炭素、37 ℃）にて培養した。上記式（III）の化合物および式（IV）の各化合物がそれぞれ125 mg/ mL〜0.5 mg/ mLの濃度になるような希釈系列を作成し、上記マイクロプレートのウェルに添加し、さらに72時間培養した。72時間後にアラマーブルー（関東化学株式会社より購入）を用いて生存細胞数を測定した。その結果、式（III）の化合物は、125 mg/ mLの濃度でA549細胞を完全に死滅させた。式（IV）の化合物は125 mg/ mLの濃度でA549細胞の増殖を、薬剤無添加群の42％に抑制した。
Example 2 Evaluation of Antitumor Activity The antitumor activity of the compound of the present invention was evaluated as follows. Human lung cancer-derived cells A549 cells were seeded in a 96-well microplate at a concentration of 8 × 10 3 cells / 200 mL / well and cultured for 14 hours in a CO 2 incubator (5% carbon dioxide, 37 ° C.). Prepare a dilution series so that the compound of formula (III) and the compound of formula (IV) each have a concentration of 125 mg / mL to 0.5 mg / mL, add it to the well of the microplate, and continue for 72 hours. Cultured. After 72 hours, the number of viable cells was measured using Alamar Blue (purchased from Kanto Chemical Co., Inc.). As a result, the compound of formula (III) completely killed A549 cells at a concentration of 125 mg / mL. The compound of formula (IV) suppressed the growth of A549 cells at a concentration of 125 mg / mL to 42% of the group without any drug.
実施例３ 抗菌活性の評価
本発明の化合物の抗菌活性を以下の様に評価した。上記式（III）の化合物および（IV）の化合物の溶液を、2 mg/mLの濃度のメタノール溶液となるように調製した。この溶液から25 mLをとって、ペーパーディスク（東洋ろ紙株式会社製、直径6 mm）にしみ込ませた。クリーンベンチ中で15分間放置し、メタノールを蒸発させ除去した。このペーパーディスクを、あらかじめバシラス・サブティリス（Bacillussubtilis IFO3134）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureusIFO12732）、サリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibrio costicola ATCC 33508）、サイトファーガ・マリノフラバ（Cytophagamarinoflava IFO14170）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans IFO 1060）を植菌しておいた栄養寒天培地（日水製薬株式会社製）上にのせ、30℃にて、24時間培養した。24時間後にペーパーディスク周辺に形成された阻止円の直径を測定した。本発明の式（III）の化合物は、バシラス・サブティリス（Bacillussubtilis IFO3134）に対して直径10 mm、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureusIFO12732）に対して直径18 mm、サリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibrio costicola ATCC 33508）に対して直径9 mm、サイトファーガ・マリノフラバ（Cytophaga marinoflava IFO14170）に対して直径8 mm、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans IFO 1060）に対して直径15 mmの阻止円を形成した。本発明の式（IV）の化合物は、バシラス・サブティリス（Bacillussubtilis IFO3134）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureusIFO12732）、サリニビブリオ・コスチィコラ（Salinivibrio costicola ATCC 33508）、サイトファーガ・マリノフラバ（Cytophagamarinoflava IFO14170）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans IFO 1060）のいずれに対しても阻止円を形成しなかった。
Example 3 Evaluation of Antibacterial Activity The antibacterial activity of the compound of the present invention was evaluated as follows. A solution of the compound of formula (III) and the compound of (IV) was prepared to be a methanol solution having a concentration of 2 mg / mL. 25 mL was taken from this solution and soaked in a paper disk (Toyo Roshi Kaisha, Ltd., diameter 6 mm). It was left in a clean bench for 15 minutes to evaporate and remove methanol. This paper disk, in advance Bacillus subtilis (Bacillussubtilis IFO3134), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus IFO12732), Sarinibiburio-Kosuchiikora (Salinivibrio costicola ATCC 33508), site fur moth-Marinofuraba (Cytophagamarinoflava IFO14170), Candida albicans ( Candida albicans IFO 1060) was placed on a nutrient agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) that had been inoculated, and cultured at 30 ° C. for 24 hours. The diameter of the blocking circle formed around the paper disk after 24 hours was measured. The compound of formula (III) of the present invention is 10 mm in diameter against Bacillus subtilis IFO3134, 18 mm in diameter against Staphylococcus aureus IFO12732, Salinivibrio costicola ATCC Inhibitory circles were formed with a diameter of 9 mm for 33508), a diameter of 8 mm for Cytophaga marinoflava IFO14170, and a diameter of 15 mm for Candida albicans IFO 1060. The compounds of formula (IV) of the present invention include Bacillus subtilis IFO 3134, Staphylococcus aureus IFO12732, Salinivibrio costicola ATCC 33508, Cytophagamarino Neither did Candida albicans IFO 1060 form a blocking circle.
本発明により、抗腫瘍活性を有する新規な化合物、ならびに微生物を用いた該化合物の製造方法が提供される。本発明の化合物は、医薬品、医薬品原料、農薬および農薬原料として有用である。 The present invention provides a novel compound having antitumor activity and a method for producing the compound using a microorganism. The compounds of the present invention are useful as pharmaceuticals, pharmaceutical raw materials, agricultural chemicals and agricultural chemical raw materials.
Claims (6)
で表される化合物。 Formula (I) below
A compound represented by
で表される化合物。 Formula (II) below:
A compound represented by
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