JP2007231009A - Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same - Google Patents
Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007231009A JP2007231009A JP2007023481A JP2007023481A JP2007231009A JP 2007231009 A JP2007231009 A JP 2007231009A JP 2007023481 A JP2007023481 A JP 2007023481A JP 2007023481 A JP2007023481 A JP 2007023481A JP 2007231009 A JP2007231009 A JP 2007231009A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tea leaves
- leaves
- blood glucose
- fermented tea
- loquat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 101
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 101
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 title claims abstract description 76
- 239000008103 glucose Substances 0.000 title claims abstract description 76
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 42
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 39
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 39
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims abstract description 39
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 claims abstract description 37
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 claims abstract description 28
- JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N (3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1C1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229920001991 Proanthocyanidin Polymers 0.000 claims abstract description 12
- CMGRMMSVGCHWOK-FQRUVTKNSA-N [(2r,3r)-5,7-dihydroxy-2-(2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxobenzo[7]annulen-8-yl)-3,4-dihydro-2h-chromen-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C1=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C(O)=CC2=C1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 CMGRMMSVGCHWOK-FQRUVTKNSA-N 0.000 claims abstract description 11
- JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N Phloroglucinol Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCCC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N phloroglucinol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1 QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229960001553 phloroglucinol Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 235000019225 fermented tea Nutrition 0.000 claims description 149
- 235000009008 Eriobotrya japonica Nutrition 0.000 claims description 108
- 241001092070 Eriobotrya Species 0.000 claims description 107
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 claims description 30
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 20
- 229940092665 tea leaf extract Drugs 0.000 claims description 19
- YUULFXAQUWEYNP-UHFFFAOYSA-N Theasinensin D Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=C(C=2C(=CC(O)=C(O)C=2O)C2C(CC3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 YUULFXAQUWEYNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 11
- YUULFXAQUWEYNP-GXAWFILRSA-N theasinensin A Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C(=C(O)C(O)=C(O)C=1)C=1C(=CC(O)=C(O)C=1O)[C@@H]1[C@@H](CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1)OC(=O)C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 YUULFXAQUWEYNP-GXAWFILRSA-N 0.000 claims description 10
- YUULFXAQUWEYNP-COILPUSUSA-N Theasinensin A Natural products O=C(O[C@@H]1[C@H](c2c(c(O)c(O)c(O)c2)-c2c(O)c(O)c(O)cc2[C@@H]2[C@H](OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)Cc3c(O)cc(O)cc3O2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1)c1cc(O)c(O)c(O)c1 YUULFXAQUWEYNP-COILPUSUSA-N 0.000 claims description 9
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 4
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 abstract description 13
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 8
- -1 catechin gallate compound Chemical class 0.000 abstract description 5
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- LVJJFMLUMNSUFN-UHFFFAOYSA-N gallocatechin gallate Natural products C1=C(O)C=C2OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LVJJFMLUMNSUFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 abstract 1
- 240000007524 Camellia sinensis var. sinensis Species 0.000 abstract 1
- SDZPYNMXGUHFMZ-UHFFFAOYSA-N epi-Afzelechin gallate Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 SDZPYNMXGUHFMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 159
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 133
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 116
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 70
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 63
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 63
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 description 52
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 43
- 239000000306 component Substances 0.000 description 43
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 37
- 235000014620 theaflavin Nutrition 0.000 description 37
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N theaflavin Chemical class C1=C2C([C@H]3OC4=CC(O)=CC(O)=C4C[C@H]3O)=CC(O)=C(O)C2=C(O)C(=O)C=C1[C@@H]1[C@H](O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N 0.000 description 29
- IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N Isotheaflavin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C1=C2)=CC(O)=C(O)C1=C(O)C(=O)C=C2C1C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 28
- UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N Theaflavin Natural products C1=CC(C2C(CC3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C(O)C(=O)C2=C1C(C1OC3=CC(O)=CC(O)=C3CC1O)=CC(O)=C2O UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 229940026509 theaflavin Drugs 0.000 description 28
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 23
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 22
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 21
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 21
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 19
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 19
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 18
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000020940 control diet Nutrition 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N epi-Gallocatechin 3-O-gallate Natural products Oc1ccc2C(=O)C(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)C(Oc2c1)c4cc(O)c(O)c(O)c4 VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 14
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 14
- GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N Phlegmanol A-acetat Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(=CC1=2)C=C(O)C(=O)C1=C(O)C(O)=CC=2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- KMJPKUVSXFVQGZ-UHFFFAOYSA-N TF2B Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C1=C2)=CC(O)=C(O)C1=C(O)C(=O)C=C2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KMJPKUVSXFVQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- ZEASWHWETFMWCV-ISBUVJFSSA-N Theaflavin 3,3'-digallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C2=CC(=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=1)[C@@H]1[C@@H](CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1)OC(=O)C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZEASWHWETFMWCV-ISBUVJFSSA-N 0.000 description 12
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 12
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 12
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 12
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 11
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 description 11
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 11
- LSHVYAFMTMFKBA-PZJWPPBQSA-N (+)-catechin-3-O-gallate Chemical compound O([C@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=CC=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-PZJWPPBQSA-N 0.000 description 10
- MBDOYVRWFFCFHM-SNAWJCMRSA-N (2E)-hexenal Chemical compound CCC\C=C\C=O MBDOYVRWFFCFHM-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 10
- GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N Geraniol Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCO GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 description 10
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 description 10
- CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N linalool Chemical compound CC(C)=CCCC(C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 10
- LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N ECG Natural products C=1C=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N [(2r,3r)-5,7-dihydroxy-2-[3,4,5-trihydroxy-6-oxo-1-[(2r,3r)-3,5,7-trihydroxy-3,4-dihydro-2h-chromen-2-yl]benzo[7]annulen-8-yl]-3,4-dihydro-2h-chromen-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(O)C=C2O[C@@H]1C1=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=C(C2=C1)[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 9
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 9
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- LYDDTLMHZWWJST-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3-O-gallate Natural products OC1Cc2c(O)cc(O)cc2OC1c3cc(O)c(O)c4C(=O)C(=C(C=Cc34)C5Oc6cc(O)cc(O)c6CC5OC(=O)c7cc(O)c(O)c(O)c7)O LYDDTLMHZWWJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 7
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZEASWHWETFMWCV-UHFFFAOYSA-N 7-O-(2-O-Acetyl-6-O-Methyl-beta-D-glucuronoside)-4',5,7-Trihydroxyflavone Natural products C=1C(O)=C(O)C2=C(O)C(=O)C=C(C3C(CC4=C(O)C=C(O)C=C4O3)OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C=C2C=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZEASWHWETFMWCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 6
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 description 6
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 6
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 6
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 6
- YLQIFALAJQXJLU-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3,3'-di-O-gallate Natural products OC1=C(C=Cc2c(cc(O)c(O)c2C1=O)C3Oc4cc(O)cc(O)c4CC3OC(=O)c5cc(O)c(O)c(O)c5)C6Oc7cc(O)cc(O)c7CC6OC(=O)c8cc(O)c(O)c(O)c8 YLQIFALAJQXJLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 6
- FQTLCLSUCSAZDY-UHFFFAOYSA-N (+) E(S) nerolidol Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)(O)C=C FQTLCLSUCSAZDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001490 (3R)-3,7-dimethylocta-1,6-dien-3-ol Substances 0.000 description 5
- UFLHIIWVXFIJGU-ONEGZZNKSA-N (E)-3-Hexenol Natural products CC\C=C\CCO UFLHIIWVXFIJGU-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 5
- CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N (R)-linalool Natural products CC(C)=CCC[C@@](C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N 0.000 description 5
- UFLHIIWVXFIJGU-ARJAWSKDSA-N (Z)-hex-3-en-1-ol Chemical compound CC\C=C/CCO UFLHIIWVXFIJGU-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 5
- 239000000267 (Z)-hex-3-en-1-ol Substances 0.000 description 5
- 239000005792 Geraniol Substances 0.000 description 5
- GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N Geraniol Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CO GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N 0.000 description 5
- FQTLCLSUCSAZDY-ATGUSINASA-N Nerolidol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC[C@](C)(O)C=C FQTLCLSUCSAZDY-ATGUSINASA-N 0.000 description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 5
- 229940095076 benzaldehyde Drugs 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 5
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 5
- 229940113087 geraniol Drugs 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- UFLHIIWVXFIJGU-UHFFFAOYSA-N hex-3-en-1-ol Natural products CCC=CCCO UFLHIIWVXFIJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NPFVOOAXDOBMCE-UHFFFAOYSA-N hex-3-enyl acetate Chemical compound CCC=CCCOC(C)=O NPFVOOAXDOBMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930007744 linalool Natural products 0.000 description 5
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 5
- WASNIKZYIWZQIP-AWEZNQCLSA-N nerolidol Natural products CC(=CCCC(=CCC[C@@H](O)C=C)C)C WASNIKZYIWZQIP-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 5
- BEHKEBMWHIDHDT-UHFFFAOYSA-N oolongtheanine Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C12)=CC(=O)C2(O)OC(C(=C(O)C=2)O)=C1C=2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 BEHKEBMWHIDHDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- MBDOYVRWFFCFHM-UHFFFAOYSA-N trans-2-hexenal Natural products CCCC=CC=O MBDOYVRWFFCFHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GPLOTACQBREROW-KLRQSTNJSA-N Theaflavin 3'-O-gallate Natural products O=C(O[C@@H]1[C@@H](c2c3c(c(O)c(O)c2)C(=O)C(O)=CC([C@@H]2[C@H](O)Cc4c(O)cc(O)cc4O2)=C3)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1)c1cc(O)c(O)c(O)c1 GPLOTACQBREROW-KLRQSTNJSA-N 0.000 description 4
- GPLOTACQBREROW-WQLSNUALSA-N Theaflavin-3-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(O)C=C2O[C@@H]1C=1C2=CC(=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=1)[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 GPLOTACQBREROW-WQLSNUALSA-N 0.000 description 4
- 150000001766 catechin derivatives Chemical class 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 238000007730 finishing process Methods 0.000 description 4
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 4
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- AAMWFMOHRYFSEU-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one;hydrate Chemical compound O.OC.CC(C)=O AAMWFMOHRYFSEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XITMOAPLXFZPNE-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3'-O-gallate Natural products OC1Cc2c(O)cc(O)cc2OC1C3=C(O)C(=O)c4c(O)c(O)cc(C5Oc6cc(O)cc(O)c6CC5OC(=O)c7cc(O)c(O)c(O)c7)c4C=C3 XITMOAPLXFZPNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 3
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 3
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 3
- 238000003975 animal breeding Methods 0.000 description 3
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 3
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 3
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 2
- 102100037815 Fas apoptotic inhibitory molecule 3 Human genes 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 101000878510 Homo sapiens Fas apoptotic inhibitory molecule 3 Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930185110 Theasinensin Natural products 0.000 description 2
- JPBGHWKYWUEIOT-XYTTVBAYSA-N Theasinensin C Chemical compound O1C2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@@H](O)[C@H]1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1C1=C(O)C(O)=C(O)C=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O JPBGHWKYWUEIOT-XYTTVBAYSA-N 0.000 description 2
- JPBGHWKYWUEIOT-UHFFFAOYSA-N Theasinensin E Natural products O1C2=CC(O)=CC(O)=C2CC(O)C1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1C1=C(O)C(O)=C(O)C=C1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1O JPBGHWKYWUEIOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 2
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 2
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229960004874 choline bitartrate Drugs 0.000 description 2
- QWJSAWXRUVVRLH-UHFFFAOYSA-M choline bitartrate Chemical compound C[N+](C)(C)CCO.OC(=O)C(O)C(O)C([O-])=O QWJSAWXRUVVRLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N formic acid Substances OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000018984 mastication Effects 0.000 description 2
- 238000010077 mastication Methods 0.000 description 2
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylcyclopentane-1,2-dione Chemical compound CC1CC(C)C(=O)C1=O MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 101000856500 Bacillus subtilis subsp. natto Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 description 1
- 241001589086 Bellapiscis medius Species 0.000 description 1
- 240000001548 Camellia japonica Species 0.000 description 1
- 241000206601 Carnobacterium mobile Species 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 238000008789 Direct Bilirubin Methods 0.000 description 1
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000061508 Eriobotrya japonica Species 0.000 description 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 244000294411 Mirabilis expansa Species 0.000 description 1
- 235000015429 Mirabilis expansa Nutrition 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000990681 Puttea Species 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 1
- 101000717863 Sporidiobolus salmonicolor Aldehyde reductase 2 Proteins 0.000 description 1
- JPBGHWKYWUEIOT-YVZLHCJQSA-N Theasinensin C Natural products O[C@H]1[C@H](c2c(c(O)c(O)c(O)c2)-c2c(O)c(O)c(O)cc2[C@@H]2[C@H](O)Cc3c(O)cc(O)cc3O2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1 JPBGHWKYWUEIOT-YVZLHCJQSA-N 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000397 acetylating effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- UIFJOXOHICDFDO-UHFFFAOYSA-N benzene-1,3,5-triol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1.OC1=CC(O)=CC(O)=C1 UIFJOXOHICDFDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 235000021152 breakfast Nutrition 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 235000013736 caramel Nutrition 0.000 description 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical group C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical group OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 235000018597 common camellia Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- COVFEVWNJUOYRL-UHFFFAOYSA-M digallate Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C([O-])=O)O)=C1 COVFEVWNJUOYRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013536 miso Nutrition 0.000 description 1
- 235000013557 nattō Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 235000020333 oolong tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000005813 organ abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000000252 photodiode array detection Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000020991 processed meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000003303 reheating Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000013597 soy food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 235000021195 test diet Nutrition 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Description
本発明は血糖値上昇抑制用組成物およびこれを含有する飲食品に関する。 The present invention relates to a composition for suppressing an increase in blood glucose level and a food or drink containing the same.
現代、不規則な食生活や運動不足等が原因で発症する生活習慣病への関心は高く、中でも糖尿病は大幅な増加傾向にある。糖尿病を発症していなくても高めの血糖値は様々な生活習慣病のシグナルとされており、また肥満は生活習慣病を引き起こし易いと言われていることから、血糖値の上昇を抑える飲食品が注目されている。 At present, interest in lifestyle-related diseases that develop due to irregular eating habits, lack of exercise, etc. is high, and diabetes, in particular, tends to increase significantly. Even if diabetes does not occur, high blood sugar level is considered as a signal of various lifestyle-related diseases, and obesity is said to easily cause lifestyle-related diseases. Is attracting attention.
例えば、下記特許文献１には、グアバ葉の抽出液に含まれるα−アミラーゼ阻害物質を用いたダイエット食品が提案されている。
グアバ葉抽出液のほかにも、糖の吸収をおだやかにする作用を有する特定保健用食品として、難消化性デキストリン、小麦アルブミン、Ｌ−アラビノース、豆鼓エキスを有効成分とする飲食品が知られている。
In addition to guava leaf extract, foods and drinks with active ingredients of indigestible dextrin, wheat albumin, L-arabinose, and bean drum extract are known as foods for specified health use that have the effect of gently absorbing sugar. ing.
近年、血糖値の上昇を抑える飲食品への関心は増しており、より有効な血糖値上昇抑制用組成物および飲食品が求められている。 In recent years, interest in foods and drinks that suppress an increase in blood glucose level has increased, and there is a need for more effective blood sugar level elevation-suppressing compositions and foods and drinks.
本発明者等は、茶の葉とビワ葉を原料として製造された混合発酵茶葉が、血糖値上昇抑制作用の指標となるＡＧＨ阻害性（マルターゼ阻害性およびスクラーゼ阻害性）が高く、かつマウスを用いた実験で優れた血糖値上昇抑制効果を奏することを知見し、かかる優れた血糖値上昇抑制効果をもたらす有効成分の特定について鋭意研究を行った結果、テアシネンシンＡ、ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでカテキンＡ環のフロログルシノール由来のシグナルとガロイル基由来のシグナルを示し、アセチル化体の分子量が２０００を極大とする１０００〜１５０００であるカテキンガレート類の酸化縮合したポリフェノールＰの各成分が、それぞれ高いＡＧＨ阻害性を示すことを見出して、本発明に至った。 The present inventors have found that mixed fermented tea leaves produced using tea leaves and loquat leaves as raw materials have high AGH inhibitory properties (maltase inhibitory activity and sucrase inhibitory activity) that serve as an indicator of an inhibitory effect on the increase in blood glucose level. As a result of discovering that it has an excellent inhibitory effect on the increase in blood glucose level in the experiment used, and as a result of earnest research on the identification of an active ingredient that brings about such an excellent inhibitory effect on increase in blood glucose level, theasinensin A, a theaflavin derivative having a galloyl group, Proanthocyanidins having epiafzeletin gallate as a constituent unit, and 13 C-NMR spectrum show signals derived from phloroglucinol and galloyl group of catechin A ring, and the molecular weight of acetylated compound is 2000 maximum Oxidative condensed polyphenols of catechin gallates of 1000-15000 The present inventors have found that each component of P exhibits high AGH inhibitory activity, and have reached the present invention.
すなわち本発明は、テアシネンシンＡ、ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでカテキンＡ環のフロログルシノール由来のシグナルとガロイル基由来のシグナルを示し、アセチル化体の分子量が２０００を極大とする１０００〜１５０００であるカテキンガレート類の酸化縮合したポリフェノールＰからなる群から選ばれる１種以上を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物を提供する。
好ましくは、さらにビワプロアントシアニジンを含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物である。
That is, the present invention relates to theasinensin A, a theaflavin derivative having a galloyl group, a proanthocyanidin having an epiaphzeletine gallate as a constituent unit, and a signal derived from phloroglucinol of the catechin A ring and a galloyl group in a 13 C-NMR spectrum. Suppressing the increase in blood glucose level, characterized by containing one or more selected from the group consisting of oxidatively condensed polyphenols P of catechin gallates having a signal and a molecular weight of the acetylated compound of 1000 to 15000 with a maximum of 2000 A composition is provided.
Preferably, the composition for suppressing an increase in blood glucose level is characterized by further containing loquat proanthocyanidins.
また本発明は、テアシネンシンＡ、ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでカテキンＡ環のフロログルシノール由来のシグナルとガロイル基由来のシグナルを示し、アセチル化体の分子量が２０００を極大とする１０００〜１５０００であるカテキンガレート類の酸化縮合したポリフェノールＰからなる群から選ばれる１種以上を含有する発酵茶葉からなることを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物を提供する。
好ましくは、前記発酵茶葉が、さらにビワプロアントシアニジンを含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物である。
The present invention also includes theasinensin A, a theaflavin derivative having a galloyl group, a proanthocyanidin having epiaphzeletine gallate as a constituent unit, and a signal derived from phloroglucinol of the catechin A ring and a galloyl group in a 13 C-NMR spectrum. It is characterized by comprising a fermented tea leaf containing one or more selected from the group consisting of oxidatively condensed polyphenols P of catechin gallates having a signal and a molecular weight of acetylated compounds of 1000 to 15000 with a maximum of 2000. A composition for suppressing an increase in blood glucose level is provided.
Preferably, the fermented tea leaf further contains loquat proanthocyanidins, which is a composition for suppressing an increase in blood glucose level.
また本発明は、テアシネンシンＡ、ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでカテキンＡ環のフロログルシノール由来のシグナルとガロイル基由来のシグナルを示し、アセチル化体の分子量が２０００を極大とする１０００〜１５０００であるカテキンガレート類の酸化縮合したポリフェノールＰからなる群から選ばれる１種以上を含有する発酵茶葉抽出物からなることを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物を提供する。
好ましくは、前記発酵茶葉抽出物が、さらにビワプロアントシアニジンを含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物である。
また本発明は、本発明の血糖値上昇抑制用組成物を含有する飲食品を提供する。
The present invention also includes theasinensin A, a theaflavin derivative having a galloyl group, a proanthocyanidin having epiaphzeletine gallate as a constituent unit, and a signal derived from phloroglucinol of the catechin A ring and a galloyl group in a 13 C-NMR spectrum. It is characterized by comprising a fermented tea leaf extract containing at least one selected from the group consisting of polyphenol P obtained by oxidative condensation of catechin gallates having a signal and a molecular weight of an acetylated compound of 1000 to 15000 with a maximum of 2000. A composition for suppressing an increase in blood glucose level is provided.
Preferably, the fermented tea leaf extract further contains loquat proanthocyanidins, which is a composition for suppressing an increase in blood glucose level.
Moreover, this invention provides the food / beverage products containing the composition for a blood glucose level raise suppression of this invention.
本発明によれば、良好な血糖値上昇抑制作用を有する組成物およびこれを含有する飲食品が得られる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the composition which has a favorable blood glucose level raise inhibitory effect, and the food-drinks containing this are obtained.
本発明の血糖値上昇抑制用組成物は、
（１）テアシネンシンＡ（以下、ＴＳ−Ａと略記することもある。）、
（２）ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、
（３）エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、
（４）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでカテキンＡ環のフロログルシノール由来のシグナルとガロイル基由来のシグナルを示し、アセチル化体の分子量が２０００を極大とする１０００〜１５０００であるカテキンガレート類の酸化縮合したポリフェノール（以下、ポリフェノールＰと略記することもある。）
からなる群から選ばれる１種または２種以上の成分を含有する。２種以上含有する場合の組み合わせは任意であり、４種全部を含有することがより好ましい。
これら（１）〜（４）の成分はいずれも、後述の実験例および分析試験例に示されるように、高いＡＧＨ阻害性（マルターゼ阻害性およびスクラーゼ阻害性）を示す成分である。
このような成分を含む本発明の血糖値上昇抑制用組成物は、これを経口摂取することにより血糖値上昇抑制効果が得られる。
The composition for suppressing an increase in blood glucose level of the present invention comprises:
(1) Theacinensin A (hereinafter sometimes abbreviated as TS-A),
(2) a theaflavin derivative having a galloyl group,
(3) Proanthocyanidins having epiafuzeretin gallate as a constituent unit;
(4) Oxidative condensation of catechin gallates having a catechin A ring-derived phloroglucinol-derived signal and a galloyl group-derived signal in a 13 C-NMR spectrum, wherein the molecular weight of the acetylated compound is 1000-15000 with a maximum of 2000. Polyphenols (hereinafter sometimes abbreviated as polyphenol P)
1 type, or 2 or more types of components chosen from the group which consists of. The combination in the case of containing 2 or more types is arbitrary, and it is more preferable to contain all 4 types.
These components (1) to (4) are all components exhibiting high AGH inhibition (maltase inhibition and sucrase inhibition) as shown in the experimental examples and analytical test examples described later.
The composition for suppressing an increase in blood glucose level according to the present invention containing such a component can obtain an effect of suppressing an increase in blood glucose level by ingesting the composition.
（１）テアシネンシンＡは、図３に示される構造を有する化合物である。
（２）ガロイル基を有するテアフラビン誘導体は、具体的には、テアフラビン−３−Ｏ−ガレート（３−ＴＦＧ）、テアフラビン−３’−Ｏ−ガレート（３’−ＴＦＧ）、テアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレート（３，３’−ＴＦＧＧ）から選ばれる１種以上である。これらの構造は図３に示される。これらの中でも、特に、テアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレートはＡＧＨ阻害性がより強いので、これを含むことが好ましい。
（３）エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジンは、後述の分析試験例３におけるFｒ．７に含まれており、メルカプトエタノールによるチオール分解により、エピカテキン（ＥＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピガロカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＧＣｇ）、およびエピカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＣｇ（以下、ＥＣＧと記載することもある））からなる群から選ばれる１種以上と、ＥＧＣ−ＭＥ（以下、「−ＭＥ」は「４−（２’−ハイドロキシエチルチオ）エーテル」を示す。例えばＥＧＣ−ＭＥは、ＥＧＣの４−（２’−ハイドロキシエチルチオ）エーテルであることを示す。以下同様）、ＥＣ−ＭＥ、ＥＧＣｇ−ＭＥ、およびＥＣｇ−ＭＥからなる群から選ばれる１種以上と、エピアフゼレチン−３−O−ガレート−ＭＥとを生じるものである。かかるプロアントシアニジンのチオール分解前の構造は例えば図４に示されるものと推定される。なお、（３）成分におけるエピアフゼレチンガレートは、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレートを指す。
(1) Theasinensin A is a compound having the structure shown in FIG.
(2) Theaflavin derivatives having a galloyl group specifically include theaflavin-3-O-gallate (3-TFG), theaflavin-3′-O-gallate (3′-TFG), theaflavin-3,3 ′. -It is 1 or more types chosen from di-O-gallate (3,3'-TFGG). These structures are shown in FIG. Among these, since theaflavin-3,3′-di-O-gallate is more strongly AGH inhibitory, it is preferable to include this.
(3) Proanthocyanidins having epiafzeletin gallate as a constituent unit are those described in Fr. 7 and epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), epigallocatechin-3-O-gallate (EGCg), and epicatechin-3-O-gallate (thiol degradation with mercaptoethanol). One or more selected from the group consisting of ECg (hereinafter sometimes referred to as ECG) and EGC-ME (hereinafter “-ME” represents “4- (2′-hydroxyethylthio) ether”). For example, EGC-ME is EGC 4- (2′-hydroxyethylthio) ether, the same applies hereinafter), one selected from the group consisting of EC-ME, EGCg-ME, and ECg-ME. As a result, Epiafzeletin-3-O-gallate-ME is produced. The structure of proanthocyanidins before thiol decomposition is presumed to be as shown in FIG. 4, for example. In addition, the epiafzeletin gallate in (3) component points out an epiafzeletin-3-O-gallate.
上記（４）ポリフェノールＰは、例えば後述の分析試験例５に示されるように、これを含有する発酵茶葉を、６０％エタノール（濃度６０体積％のエタノール水溶液、以下、同様）で室温抽出した抽出液をエチルエーテル、酢酸エチル、ｎ−ブタノールで順次溶媒分配し、ｎ−ブタノール可溶部を６０％メタノールに溶かしたものを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムにて、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノール、次いでメタノール−水―アセトン（８：１：１）混合溶液、メタノール−水―アセトン（６：２：２）混合溶液、水―アセトン（１：１）混合溶液で順次溶出した溶出液を、薄層クロマトグラフィー（トルエン−ギ酸エチル−ギ酸、１：７：１）分析して、原点から移動しない物質を含むフラクションだけを集めて濃縮して得られるものである。 The above (4) polyphenol P is extracted by, for example, extracting the fermented tea leaves containing this with room temperature extracted with 60% ethanol (60% by volume ethanol aqueous solution, hereinafter the same) as shown in Analytical Test Example 5 described later. The solution was sequentially partitioned with ethyl ether, ethyl acetate, and n-butanol, and the n-butanol soluble part dissolved in 60% methanol was added to a Sephadex LH-20 column using 60% methanol, 80% methanol, 100%. Eluate sequentially eluted with 1% methanol, then methanol-water-acetone (8: 1: 1) mixed solution, methanol-water-acetone (6: 2: 2) mixed solution, water-acetone (1: 1) mixed solution Was analyzed by thin layer chromatography (toluene-ethyl formate-formic acid, 1: 7: 1) and fractions containing material that did not migrate from the origin Only it is obtained collected and concentrated to.
本発明の血糖値上昇抑制用組成物の好ましい実施形態は上記（１）〜（４）の成分の１種以上を含有する発酵茶葉または発酵茶葉抽出物である。
発酵茶葉とは、原料となる葉を、加熱による酸化酵素失活を行わずに揉捻する工程を経て得られるもので、製造過程で酸化酵素による成分の酸化が生じている。本発明の血糖値上昇抑制用組成物としての発酵茶葉の形態は特に限定されず、発酵が生じた茶葉を加熱して発酵を止め、乾燥したもの（いわゆる荒茶）でもよく、さらに必要に応じて仕上げ加工を施した仕上げ茶であってもよい。また荒茶または仕上げ茶を適宜の大きさの粉末状にしたものでもよい。
A preferred embodiment of the composition for suppressing an increase in blood sugar level of the present invention is a fermented tea leaf or a fermented tea leaf extract containing one or more of the above components (1) to (4).
Fermented tea leaves are obtained through a process of twisting leaves as raw materials without deactivating oxidase by heating, and oxidation of components by oxidase occurs during the production process. The form of the fermented tea leaf as the composition for suppressing an increase in blood glucose level of the present invention is not particularly limited, and the fermented tea leaf may be heated to stop the fermentation and dried (so-called crude tea), and further if necessary. Finished tea with a finishing process may be used. Further, rough tea or finished tea may be made into a powder form having an appropriate size.
発酵茶葉抽出物とは、発酵茶葉の可溶性成分を抽出溶媒で抽出して得られる抽出物である。抽出溶媒は水（温水または熱水を含む）でもよく、有機溶媒でもよい。有機溶媒の具定例としてはメタノール、エタノール、アセトン等が挙げられる。本発明の血糖値上昇抑制用組成物としての発酵茶葉抽出物の形態は特に限定されず、溶液状でもよく、その濃縮物でもよく、さらに凍結乾燥等により乾燥させた固体でもよい。固体の場合は、塊状であってもよく、さらにそれを適宜の大きさに粉砕した粉末状であってもよい。発酵茶葉抽出物を有機溶媒を含む形態で飲食品に用いる場合は、有機溶媒としてエタノールが用いられる。 The fermented tea leaf extract is an extract obtained by extracting soluble components of fermented tea leaves with an extraction solvent. The extraction solvent may be water (including warm water or hot water) or an organic solvent. Specific examples of the organic solvent include methanol, ethanol, acetone and the like. The form of the fermented tea leaf extract as the blood glucose level elevation suppressing composition of the present invention is not particularly limited, and may be in the form of a solution, a concentrate thereof, or a solid dried by lyophilization or the like. In the case of a solid, it may be a lump or may be a powder obtained by pulverizing it to an appropriate size. When the fermented tea leaf extract is used in a food or drink in a form containing an organic solvent, ethanol is used as the organic solvent.
抽出条件は特に制限されないが、水で抽出する場合は、温度４０〜１００℃の温水または熱水に発酵茶葉を３分間〜６０分間程度浸して抽出することが好ましい。水と発酵茶葉との割合は、水１００質量部に対して、発酵茶葉（含水率５質量％）０．５〜２０質量部程度が好ましく、０．５〜５質量部程度がより好ましい。
有機溶媒で抽出する場合は、有機溶媒１００質量部に対して発酵茶葉（含水率５質量％）０．１〜２０質量部程度を用い、常圧または加圧下で、温度−２０〜６０℃、時間１〜６０分の条件で行うことが好ましいが、この範囲に限定されず、適宜変更することができる。
抽出処理後、ろ過、遠心分離などで、固形分を除去して抽出液が得られる。
Extraction conditions are not particularly limited, but when extracting with water, it is preferable to extract by immersing the fermented tea leaves in warm water or hot water at a temperature of 40 to 100 ° C. for about 3 to 60 minutes. The ratio of water and fermented tea leaves is preferably about 0.5 to 20 parts by mass, more preferably about 0.5 to 5 parts by mass, with respect to 100 parts by mass of water.
In the case of extracting with an organic solvent, about 0.1 to 20 parts by mass of fermented tea leaves (
After the extraction treatment, the solid content is removed by filtration, centrifugation, etc. to obtain an extract.
本発明における発酵茶葉は、茶の葉とビワ葉が混合、揉捻され、発酵してなる混合発酵茶葉が好ましい。該混合発酵茶葉には、上記（１）テアシネンシンＡ、（２）ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、および（４）上記ポリフェノールＰが含まれる。
さらに、原料の茶の葉として、上記（３）エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジンを含有する茶の葉を用いて製造した混合発酵茶葉には、上記（１）〜（４）の成分が全部含まれるため、より好ましい。
The fermented tea leaves in the present invention are preferably mixed fermented tea leaves obtained by mixing, twisting and fermenting tea leaves and loquat leaves. The mixed fermented tea leaves contain (1) theacinensin A, (2) a theaflavin derivative having a galloyl group, and (4) the polyphenol P.
Furthermore, the mixed fermented tea leaves produced using tea leaves containing proanthocyanidins having (3) epiafzeletin gallate as a constituent unit as the raw tea leaves include the above (1) to (4). Since all the components are contained, it is more preferable.
上記混合発酵茶葉には、ビワプロアントシアニジンが含まれることが特徴的である。後述の分析試験例３に示されるように、ビワプロアントシアニジンは、ＡＧＨ阻害性が高い混合発酵茶葉の抽出物から得られる複数のフラクションの中で、最もＡＧＨ阻害性が高いフラクション（Ｆｒ．７）に含まれていることからＡＧＨ阻害性に寄与していると考えられる。 The mixed fermented tea leaves are characterized by containing loquat proanthocyanidins. As shown in Analytical Test Example 3 described later, biwaproanthocyanidin has the highest AGH-inhibiting fraction (Fr. 7) among a plurality of fractions obtained from the mixed fermented tea leaf extract having a high AGH-inhibiting property. It is considered that it contributes to AGH inhibition.
また、上記混合発酵茶葉にあっては、テアフラビン類（テアフラビン（ＴＦ）、テアフラビン−３−Ｏ−ガレート（３−ＴＦＧ）、テアフラビン−３’−Ｏ−ガレート（３’−ＴＦＧ）、テアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレート（３，３’−ＴＦＧＧ））の合計の含有量が、茶の葉とビワ葉とをそれぞれ単独で同様に揉捻し、発酵してなる単独発酵茶葉に比べて、多く含まれることも特徴的である。
さらに、上記混合発酵茶葉にあっては、（４）上記ポリフェノールＰの含有量が、茶の葉とビワ葉とをそれぞれ単独で同様に揉捻し、発酵してなる発酵茶葉に比べて、多く含まれることも特徴的である。
In the mixed fermented tea leaves, theaflavins (theaflavin (TF), theaflavin-3-O-gallate (3-TFG), theaflavin-3′-O-gallate (3′-TFG), theaflavin-3 , 3'-di-O-gallate (3,3'-TFGG)), compared to a single fermented tea leaf obtained by twisting and fermenting tea leaves and loquat leaves in the same manner. It is also characteristic that many are included.
Furthermore, in the mixed fermented tea leaves, (4) the content of the polyphenol P is larger than the fermented tea leaves obtained by twisting and fermenting tea leaves and loquat leaves in the same manner. It is also characteristic.
＜香気成分＞
また上記混合発酵茶葉は、１−ヘキサノール、トランス−２−ヘキセナール、酢酸３−ヘキセン−１−オール、３−ヘキセン−１−オール、リナロール、ベンツアルデヒド、サリチル酸メチル、ゲラニオール、およびネロリドールの香気成分を含み、固相マイクロ抽出法においてトランス−２−ヘキセナール、酢酸３−ヘキセン−１−オール、３−ヘキセン−１−オール、リナロール、ベンツアルデヒド、サリチル酸メチル、ゲラニオール、ネロリドールの香気成分の各ピーク面積が、いずれも１−ヘキサノールのピーク面積より大きいという、特徴的な香気成分組成を有する。
上記に挙げた香気成分のうち、後述の分析試験例８にも示されるように、リナロール、ベンツアルデヒド、サリチル酸メチル、ゲラニオール、およびネロリドールは、紅茶等の発酵茶にも比較的多く含まれ、緑茶等の不発酵茶および発酵したビワ葉には少ない香気成分である。また、トランス−２−ヘキセナール、酢酸３−ヘキセン−１−オール、および３−ヘキセン−１−オールは、発酵したビワ葉にも比較的多く含まれる香気成分である。本発明の混合発酵茶葉は、これらの香気成分を比較的多い含有量で有しており、これにより発酵茶として特有な香りを味わうことができる。
<Aroma component>
The mixed fermented tea leaves are 1-hexanol, trans-2-hexenal, 3-hexen-1-ol acetate, 3-hexen-1-ol, linalool, benzaldehyde, methyl salicylate, geraniol, and nerolidol. In the solid phase microextraction method, each peak of aroma components of trans-2-hexenal, 3-hexen-1-ol acetate, 3-hexen-1-ol, linalool, benzaldehyde, methyl salicylate, geraniol, and nerolidol It has a characteristic fragrance component composition that the area is larger than the peak area of 1-hexanol.
Among the aromatic components listed above, as shown in Analytical Test Example 8 described later, linalool, benzaldehyde, methyl salicylate, geraniol, and nerolidol are also relatively contained in fermented teas such as black tea, It is a small aroma component in unfermented tea such as green tea and fermented loquat leaves. Moreover, trans-2-hexenal, 3-hexen-1-ol acetate, and 3-hexen-1-ol are aromatic components that are relatively contained in fermented loquat leaves. The mixed fermented tea leaf of the present invention has a relatively large content of these aroma components, so that a unique scent as a fermented tea can be tasted.
上記混合発酵茶葉は、以下の方法で製造することができる。
原料として用いられる茶の葉は、いわゆるツバキ科の常緑低木Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ．の葉である。この葉としては、一番茶以外に二番茶、三番茶、秋冬番茶、刈番茶なども使用でき、比較的多くのポリフェノール類を含む二番茶以降の安価な茶の葉のほうが好ましい。なお、これらの遅手の番茶は、現在価格が低迷し、かなりのものが廃棄されているが、このものを有効に利用できる。
特に、後述の実験例および分析試験例で用いた長崎東彼杵産の中国種の茶葉、好ましくはヤブキタ種の茶葉には、天然での存在が少ししか確認されていないエピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジンが含まれるので好ましい。また該エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジンを含む可能性がある茶葉としては、インド産ダージリン紅茶や中国産キーモン紅茶の製造に用いられる茶葉が挙げられる。
The mixed fermented tea leaves can be produced by the following method.
The tea leaves used as the raw material are the so-called camellia evergreen shrub Thea sinensis L. Leaves. As this leaf, in addition to the first tea, second tea, third tea, autumn / winter ban tea, banban tea and the like can be used, and cheap tea leaves after the second tea containing a relatively large amount of polyphenols are preferred. The price of these late banchas is currently sluggish and a considerable amount is discarded, but this can be used effectively.
In particular, in the tea leaves of Nagasaki Higashi, which is used in the following experimental examples and analytical test examples, preferably tea leaves of Yabukita seeds, eapiafzeletin-3-O-gallate, which has been confirmed to have little natural presence, is used. Proanthocyanidins that are included as constituent units are included, which is preferable. Examples of tea leaves that may contain proanthocyanidins having the epiaphzeletin-3-O-gallate as a constituent unit include tea leaves used in the production of Indian darjeeling black tea and Chinese kimmon black tea.
原料として用いられるビワ葉は、バラ科、植物名「ビワ」の葉であり、特に制限なく用いることができる。 The loquat leaves used as a raw material are leaves of the family Rosaceae and the plant name “Biwa”, and can be used without particular limitation.
混合発酵茶葉を製造するには、まず、前処理として、ビワ葉および茶の葉を、必要に応じて乾燥し、含水率を５０〜６０質量％程度としておくことが好ましい。また適宜の寸法、例えば１〜１０ｍｍ角程度の大きさに切断しておくことが好ましい。
そして、茶の葉を乾燥し、水分量を減少させ、萎凋させる。この工程では、例えば粗揉機や、直火または電気で加熱した鍋または板状の器具を用い、茶の葉を撹拌しつつ、温度４０〜１５０℃の加熱空気を茶の葉に当てる方法、密閉撹拌容器内に茶の葉を投入し、容器内の空気を吸引して内部を減圧状態として撹拌して乾燥する方法、萎凋槽を用いてネット上に散布した茶の葉の下方から通気する方法などが用いられる。
この萎凋により原料の茶の葉の含水率を４５〜６５質量％、好ましくは５０〜６０質量％程度に減少させておくと、次の揉捻工程で茶の葉から水分が揉み出れ難くなるため、有効成分の流亡を防止できるとともに品質の低下を抑えることができる。また後の乾燥工程が短縮できる点でも好ましい。
In order to produce a mixed fermented tea leaf, first, as a pretreatment, it is preferable to dry loquat leaves and tea leaves as necessary, and to keep the water content at about 50 to 60% by mass. Moreover, it is preferable to cut | disconnect to an appropriate dimension, for example, about 1-10 square mm.
The tea leaves are then dried, the water content is reduced, and the leaves are wilted. In this process, for example, using a roughing machine, a pot or plate-like appliance heated directly or with electricity, stirring the tea leaves and applying heated air at a temperature of 40 to 150 ° C. to the tea leaves, sealing A method in which tea leaves are put into a stirring container, the air in the container is sucked and the inside is decompressed and stirred and dried, and a method in which air is blown from below the tea leaves sprayed on the net using a wilt tank Etc. are used.
If the moisture content of the raw tea leaves is reduced to 45 to 65% by mass, preferably about 50 to 60% by mass due to this wilt, it becomes difficult for the water to ooze out from the tea leaves in the next twisting step. The loss of the active ingredient can be prevented and the deterioration of the quality can be suppressed. It is also preferable in that the subsequent drying step can be shortened.
次いで、萎凋工程を経た原料の茶の葉を加圧しながら揉む（揉捻）とともに、この揉捻時にビワ葉を添加して、両者を一緒に揉捻する。ビワ葉は茶の葉の揉捻開始と同時に添加してもよく、あるいは一定時間茶の葉のみの揉捻を行った後、びわ葉を添加してさらに揉捻してもよい。全揉捻時間のうち、揉捻開始から０〜４０％の時間が経過したのち、ビワ葉を添加することが好ましい。ビワ葉を揉捻工程の最初から添加しておくことがより好ましい。
ビワ葉の添加量は、ビワ葉／茶の葉の絶乾質量比が、５／９５〜３５／６５の範囲が好ましく、８／９２〜３０／７０の範囲がより好ましい。ビワ葉の添加量が上記範囲内であれば、茶の葉とビワ葉を混合したことによる血糖値上昇抑制作用の向上効果が良好に得られる。
Next, the raw tea leaves that have undergone the wilting process are massaged while being pressed (twisting), and loquat leaves are added at the time of twisting, and both are twisted together. Loquat leaves may be added simultaneously with the start of tea leaf twisting, or after only tea leaf twisting for a certain period of time, loquat leaves may be added and further twisted. It is preferable to add loquat leaves after 0 to 40% of the total twisting time has elapsed since the start of twisting. It is more preferable to add loquat leaves from the beginning of the twisting process.
The amount of loquat leaves added is preferably in the range of 5/95 to 35/65, more preferably 8/92 to 30/70. If the addition amount of loquat leaves is within the above range, the effect of improving the blood glucose level increase effect by mixing tea leaves and loquat leaves can be obtained satisfactorily.
揉捻は、茶の葉の揉捻に用いられている通常の揉捻機を用いる方法など、公知の方法を適宜採用できる。
揉捻時間は、１５〜２５分とされる。この範囲とすることにより血糖値上昇抑制作用が良好となる。
また、揉捻時の原料の温度は、２０〜４０℃とされる。２０℃未満では発酵不足となり、４０℃を越えると品質低下が著しくなる。
For the twisting, a known method such as a method using a normal twisting machine used for twisting tea leaves can be appropriately employed.
The twisting time is 15 to 25 minutes. By setting it within this range, the blood sugar level increase suppressing effect is improved.
Moreover, the temperature of the raw material at the time of twisting shall be 20-40 degreeC. If the temperature is lower than 20 ° C, the fermentation is insufficient. If the temperature is higher than 40 ° C, the quality deteriorates significantly.
この揉捻により、茶の葉およびビワ葉の組織が破壊され、茶の葉に含まれるポリフェノールオキシダーゼなどの酸化酵素が茶の葉およびビワ葉に含まれるポリフェノールを酸化、重合し、酸化重合物が生成する。 This twisting destroys the tissue of tea leaves and loquat leaves, and oxidative enzymes such as polyphenol oxidase contained in tea leaves oxidize and polymerize polyphenols contained in tea leaves and loquat leaves, producing an oxidized polymer. To do.
次いで、この状態の混合原料を発酵工程に移す。すなわち、揉捻後の混合原料を数ｃｍの厚さに堆積させた状態で、温度２０〜２７℃、湿度３０〜６０％ＲＨの発酵室内などの環境下に静置する。なお、茶類の製造工程における「発酵」とは葉中の酸化酵素による酸化反応を意味する。
発酵時間は０〜４時間とされる。ここで、発酵時間が０時間と言うことは、先の揉捻工程において、揉捻の開始と同時に発酵が開始するためであり、揉捻工程の時間を発酵工程に含めない場合には、発酵時間が０時間と言うこともあり得るのであり、実体は０時間でも発酵が行われているものである。発酵時間が４時間を超えると、得られる混合発酵茶葉またはその抽出物の味、香りが低下する傾向がある。特に優れたＡＧＨ阻害性を得るには、発酵時間は１時間以下が好ましく、０時間が最も好ましい。
Next, the mixed raw material in this state is transferred to the fermentation process. That is, in a state where the mixed raw material after twisting is deposited to a thickness of several centimeters, the mixture is left in an environment such as a fermentation chamber at a temperature of 20 to 27 ° C. and a humidity of 30 to 60% RH. “Fermentation” in the tea production process means an oxidation reaction by oxidase in leaves.
The fermentation time is 0 to 4 hours. Here, the fermentation time of 0 hours means that in the previous twisting process, fermentation starts simultaneously with the start of twisting, and when the time of the twisting process is not included in the fermentation process, the fermentation time is 0. It can also be called time, and the substance is one that is fermented even at 0 hours. When fermentation time exceeds 4 hours, there exists a tendency for the taste and aroma of the obtained mixed fermented tea leaves or its extract to fall. In order to obtain particularly excellent AGH inhibition, the fermentation time is preferably 1 hour or less, and most preferably 0 hour.
次いで、所定の発酵時間が経過したならば、原料を加熱して発酵を止め、乾燥する。例えば、連続式乾燥機に原料を投入し、これに温度８０〜１２０℃の熱風を吹き込み、排気温度が５０〜６０℃となるように操作する。加熱時間は１０〜３０分程度で十分であり、これにより原料中の含水率を５質量％程度とする。
上記製造工程において、揉捻時間、発酵時間が長くなるほどＡＧＨ阻害性が低くなる。また、抗酸化作用（１，１−ジピクリル−２−フェニルヒドラジル（ＤＰＰＨ）消去活性）も低くなる。機能性に注目して製造を行うなら揉捻時間を１５〜２５分とし、発酵時間をなるべく短くすることが理想である。
また、発酵時間が長くなるほど味に関しては苦渋みが強くなり、香りも悪くなり発酵時間が短いほど味、香りとも優れる。
Next, when a predetermined fermentation time has elapsed, the raw material is heated to stop the fermentation and dried. For example, raw materials are put into a continuous dryer, hot air having a temperature of 80 to 120 ° C. is blown into the continuous dryer, and the exhaust temperature is controlled to be 50 to 60 ° C. A heating time of about 10 to 30 minutes is sufficient, so that the water content in the raw material is about 5% by mass.
In the above production process, AGH inhibition becomes lower as the twisting time and fermentation time become longer. Further, the antioxidant action (1,1-dipicryl-2-phenylhydrazyl (DPPH) scavenging activity) is also lowered. If production is performed with attention paid to functionality, it is ideal to set the twisting time to 15 to 25 minutes and to shorten the fermentation time as much as possible.
In addition, the longer the fermentation time, the stronger the bitterness and the worse the aroma. The shorter the fermentation time, the better the taste and aroma.
こうして混合発酵茶葉が得られる。加熱工程後のものは、いわゆる荒茶であり、これに必要に応じて仕上げ加工を施して仕上げ茶としてもよい。仕上げ加工は、再乾燥、火入れ、篩い分け、整形、選別など、従来の茶葉製造における仕上げ加工と同様の工程を適宜採用することができる。上記火入れは、再加熱して香味の発揚を図る工程である。仕上げ加工を行うことにより、貯蔵性、香りなどの品質を高めて商品性を向上させることができる。 In this way, mixed fermented tea leaves are obtained. What is after a heating process is what is called rough tea, and it is good also as finishing tea by giving finishing processing to this as needed. For the finishing process, steps similar to the finishing process in conventional tea leaf production, such as re-drying, burning, sieving, shaping, and sorting, can be appropriately employed. The above-mentioned burning is a process of reheating to improve the flavor. By performing the finishing process, quality such as storability and fragrance can be improved and merchantability can be improved.
また上記揉捻工程は、上述したように茶の葉およびビワ葉の組織が破壊されればよく、揉捻機を用いる方法のほかに、例えば手で揉む方法、すりつぶす方法、水を加えて粉砕する方法等を用いて行うことができる。
手で揉む方法を用いる場合は、通常、茶の葉の揉み込みに用いられている手法を適宜用いることができる。例えば、「ねこぶき」と呼ばれる荒縄で編んだ凹凸のある敷物上で、手で揉み込む方法などが採用でき、これ以外の方法を用いてもよい。具体的には、萎凋工程を経た原料の茶の葉を手で揉む方法で揉捻するとともに、この揉捻時にビワ葉を添加して、両者を一緒に揉捻する。この場合の揉捻時間は２０〜３０分が好ましく、２０分未満または３０分を超えると、得られる発酵茶の血糖値上昇抑制作用が低くなる。その他の条件等は上記と同じである。発酵工程は上記と同様に行うことができる。
本方法において、揉捻時間、発酵時間が長くなるほどＡＧＨ阻害性が低くなる。また、抗酸化作用（ＤＰＰＨ消去活性）も低くなる。機能性に注目して製造を行うなら揉捻時間を２０〜３０分とし、発酵時間をなるべく短くすることが理想である。
In addition, as described above, the twisting step only needs to destroy the tissue of tea leaves and loquat leaves. In addition to the method of using a twisting machine, for example, a method of squeezing by hand, a method of grinding, a method of pulverizing by adding water Etc. can be used.
In the case of using a method of massaging by hand, a method usually used for massaging tea leaves can be appropriately used. For example, a method of rubbing by hand on an uneven rug knitted with a rough rope called “Nekobuki” can be employed, and other methods may be used. Specifically, the raw tea leaves that have undergone the wilting process are twisted by hand, and loquat leaves are added at the time of twisting, and both are twisted together. The twisting time in this case is preferably 20 to 30 minutes, and if it is less than 20 minutes or more than 30 minutes, the effect of inhibiting the increase in blood sugar level of the obtained fermented tea becomes low. Other conditions are the same as above. The fermentation process can be performed in the same manner as described above.
In this method, AGH inhibition becomes lower as the twisting time and fermentation time become longer. Further, the antioxidant action (DPPH scavenging activity) is also lowered. If production is performed with attention paid to functionality, it is ideal that the twisting time is 20 to 30 minutes and the fermentation time is as short as possible.
すりつぶす方法を用いる場合は、茶の葉のすりつぶしに用いられている通常の乳鉢を用いる方法などが採用でき、これ以外のすりつぶし方法を用いてもよい。具体的には、萎凋工程を経た原料の茶の葉をすりつぶすとともに、このすり込み時にビワ葉を添加し、両方の原料をすり込む。この場合のすりつぶし時間は、１５〜２５分が好ましく、１５分未満または２５分を超えると、得られる発酵茶の血糖値上昇抑制が低くなる。すりつぶし時間の原料の温度は、２０〜４０℃とされる。２０℃未満では発酵不足となり、４０℃を超えると品質低下となる。さらに、ビワ葉の添加のタイミングは、茶の葉のすりつぶし開始と同時に添加してもよく、あるいは一定時間茶の葉のみのすりつぶしを行った後、ビワ葉を添加してさらにすりつぶしてもよい。全すりつぶし時間のうち、すりつぶし開始から０〜４０％の時間が経過したのち、ビワ葉を添加することができる。その他の条件等は上記と同じである。
こうしてすりつぶすことによって、茶の葉およびビワ葉の原料の組織が破壊され、茶の葉に含まれるポリフェノールオキシダーゼなどの酸化酵素が茶の葉およびビワ葉に含まれるポリフェノールを酸化、重合し、酸化重合物が生成する。発酵工程は上記と同様に行うことができる。
本方法において、すりつぶし時間、発酵時間が長くなるほどＡＧＨ阻害性が低くなる。また、抗酸化作用（ＤＰＰＨ消去活性）も低くなる。機能性に注目して製造を行うならすりつぶし時間を１５〜２５分とし、発酵時間をなるべく短くすることが理想である。
また、発酵時間が長くなるほど味に関しては苦渋みが強くなり、香りも悪くなり発酵時間が短いほど味、香りとも優れる。
In the case of using the mashing method, a method using a normal mortar used for mashing tea leaves can be employed, and other mashing methods may be used. Specifically, the raw tea leaves that have undergone the wilting process are ground, and loquat leaves are added at the time of this rubbing, and both raw materials are rubbed. In this case, the grinding time is preferably 15 to 25 minutes, and if it is less than 15 minutes or more than 25 minutes, the increase in blood sugar level of the obtained fermented tea becomes low. The temperature of the raw material during the grinding time is 20 to 40 ° C. If it is less than 20 degreeC, it will become inadequate fermentation, and if it exceeds 40 degreeC, it will become a quality fall. Furthermore, the timing of adding loquat leaves may be added simultaneously with the start of grinding of tea leaves, or after grinding of only tea leaves for a certain period of time, loquat leaves may be added and further ground. The loquat leaf can be added after 0 to 40% of the total grinding time has elapsed from the start of grinding. Other conditions are the same as above.
By grinding in this way, the raw tissue of tea leaves and loquat leaves is destroyed, and oxidative enzymes such as polyphenol oxidase contained in tea leaves oxidize and polymerize polyphenols contained in tea leaves and loquat leaves. Things are generated. The fermentation process can be performed in the same manner as described above.
In this method, AGH inhibitory property becomes low, so that grinding time and fermentation time become long. Further, the antioxidant action (DPPH scavenging activity) is also lowered. If production is performed with attention paid to functionality, it is ideal that the grinding time is 15 to 25 minutes and the fermentation time is as short as possible.
In addition, the longer the fermentation time, the stronger the bitterness and the worse the aroma. The shorter the fermentation time, the better the taste and aroma.
水を加えて粉砕する方法を用いる場合は、茶の葉とビワ葉に水を加え粉砕撹拌することによって、これらを混合するとともに茶の葉およびビワ葉の原料の組織を破壊することができる。粉砕撹拌は、茶の葉の粉砕撹拌に用いられている通常のミキサー等を用いる方法などが採用でき、これ以外の粉砕撹拌方法を用いてもよい。具体的には、萎凋工程を経た原料の茶の葉およびビワ葉に水を加えて粉砕撹拌する。茶の葉とビワ葉の混合割合は上記と同様である。加える水の量は茶の葉とビワ葉の合計１００質量部に対して、２０〜２００質量部が好ましく、５０〜１５０質量部がより好ましい。
粉砕撹拌時間は、５〜１５分とされ、５分未満または１５分を超えると、得られる発酵茶の血糖値上昇抑制が低くなる。粉砕撹拌時の原料の温度は上記と同様であり、２０〜４０℃とされる。
ビワ葉の添加のタイミングは、粉砕撹拌開始と同時に添加してもよく、あるいは一定時間茶の葉のみの粉砕撹拌を行った後、ビワ葉を添加してさらに粉砕撹拌してもよい。全粉砕撹拌時間のうち、粉砕撹拌開始から０〜５０％の時間が経過したのち、ビワ葉を添加することが好ましい。
こうして粉砕撹拌することによって、茶の葉およびビワ葉が混合されるとともに、これら原料の組織が破壊され、茶の葉に含まれるポリフェノールオキシダーゼなどの酸化酵素が茶の葉およびビワ葉に含まれるポリフェノールを酸化、重合し、酸化重合物が生成する。
ついで、粉砕撹拌により得られた混合原料を発酵する工程においては、粉砕撹拌後の混合原料を数ｃｍの厚さに堆積し、温度２０〜２７℃、湿度３０〜６０％ＲＨの発酵室内などの環境下において静置する。発酵時間は４〜１２時間が好ましい。発酵時間が４時間未満では、発酵が進んでいないので血糖値上昇抑制作用が低く、香りも青臭い。発酵時間が１２時間を超えると、得られる発酵茶の味、香りが低下する傾向がある。薬効を重視した場合では、４〜１２時間が好ましい。すなわち発酵時間４〜１２時間が、特にＡＧＨ阻害性が高くなる。また抗酸化作用（ＤＰＰＨ消去活性）も高くなる。機能性に注目して製造を行うなら粉砕撹拌時間１０〜１５分、発酵時間を４〜１２時間に保つことが理想である。また、この時間外では味に関しては苦渋みが強くなり、香りも悪くなる。
ついで、所定の発酵時間が経過したならば、原料を加熱して発酵を止め、乾燥する。例えば、容器に原料を流し込んだものを、乾燥機に入れ温度８０〜１２０℃の熱風を吹き込み、排気温度が５０〜６０℃となるように操作する。加熱時間は６０〜１２０分程度が好ましく、これにより原料中の水分量を５％程度とする。こうして、本発明の発酵茶が得られるが、加熱工程後のものは、粉状に粉砕してもよく、粉砕せずに固形物として用いることもできる。
In the case of using a method of pulverizing by adding water, by adding water to the tea leaves and loquat leaves and pulverizing and stirring them, the tea leaves and loquat leaf raw materials can be destroyed. For the pulverization and stirring, a method using an ordinary mixer or the like used for pulverizing and stirring tea leaves can be employed, and other pulverization and stirring methods may be used. Specifically, water is added to the raw tea leaves and loquat leaves that have undergone the wilting step, followed by pulverization and stirring. The mixing ratio of tea leaves and loquat leaves is the same as above. The amount of water added is preferably 20 to 200 parts by weight, more preferably 50 to 150 parts by weight, based on a total of 100 parts by weight of tea leaves and loquat leaves.
The pulverization stirring time is 5 to 15 minutes, and when the pulverization stirring time is less than 5 minutes or exceeds 15 minutes, the increase in blood sugar level of the obtained fermented tea becomes low. The temperature of the raw material at the time of pulverization and stirring is the same as described above, and is set to 20 to 40 ° C.
The timing of adding loquat leaves may be added simultaneously with the start of pulverization stirring, or after pulverizing and stirring only tea leaves for a certain period of time, loquat leaves may be added and further pulverized and stirred. It is preferable to add loquat leaves after 0 to 50% of the total pulverization stirring time has elapsed since the start of pulverization stirring.
By crushing and stirring in this way, tea leaves and loquat leaves are mixed, and the tissues of these raw materials are destroyed, and oxidative enzymes such as polyphenol oxidase contained in tea leaves are polyphenols contained in tea leaves and loquat leaves. Is oxidized and polymerized to produce an oxidized polymer.
Next, in the step of fermenting the mixed raw material obtained by pulverization and stirring, the mixed raw material after pulverization and stirring is deposited to a thickness of several centimeters, such as in a fermentation chamber at a temperature of 20 to 27 ° C. and a humidity of 30 to 60% RH. Leave in the environment. The fermentation time is preferably 4 to 12 hours. If the fermentation time is less than 4 hours, since the fermentation has not progressed, the blood glucose level increase-inhibiting action is low, and the aroma also has a blue odor. When fermentation time exceeds 12 hours, there exists a tendency for the taste and aroma of the obtained fermented tea to fall. In the case where the medicinal effect is emphasized, 4 to 12 hours are preferable. That is, fermentation time of 4 to 12 hours is particularly high in AGH inhibition. In addition, the antioxidant action (DPPH scavenging activity) is also increased. If production is performed with attention paid to functionality, it is ideal to keep the pulverization stirring time at 10 to 15 minutes and the fermentation time at 4 to 12 hours. In addition, outside this time, the bitterness and taste become worse with respect to taste.
Then, when a predetermined fermentation time has elapsed, the raw material is heated to stop the fermentation and dried. For example, what poured the raw material into the container is put into a drier, and hot air with a temperature of 80 to 120 ° C. is blown into the container, and the exhaust temperature is set to 50 to 60 ° C. The heating time is preferably about 60 to 120 minutes, so that the water content in the raw material is about 5%. Thus, the fermented tea of the present invention is obtained, but the product after the heating step may be pulverized or used as a solid without being pulverized.
本発明の血糖値上昇抑制用組成物における上記（１）テアシネンシンＡ、（２）ガロイル基を有するテアフラビン誘導体、（３）エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジン、（４）ポリフェノールＰの各成分の含有量は特に限定されない。各成分が有するＡＧＨ阻害性（例えばＩＣ５０）を目安として、得ようとする血糖値上昇抑制効果、および該血糖値上昇抑制用組成物の摂取量に応じて適宜設定することができる。 (1) Theacinensin A, (2) Theaflavin derivative having a galloyl group, (3) Proanthocyanidins having epiaphzeletine gallate as a constituent unit in the composition for suppressing an increase in blood glucose level of the present invention, (4) Polyphenol P The content of each component is not particularly limited. Using the AGH inhibitory property (for example, IC 50 ) of each component as a guide, it can be appropriately set according to the blood glucose level increase inhibitory effect to be obtained and the intake amount of the composition for suppressing blood glucose level increase.
本発明の飲食品は、本発明の血糖値上昇抑制用組成物を含有しており、かつ経口摂取できる形態のものであれば特に限定されない。
例えば、本発明の血糖値上昇抑制用組成物としての発酵茶葉抽出物を含有する各種飲料である。また該発酵茶葉抽出物が発酵茶葉を水で抽出したものであって、そのまま飲用可能な風味を有するものであれば、該抽出物を茶飲料とすることもできる。
または、本発明の血糖値上昇抑制用組成物としての発酵茶葉または発酵茶葉抽出物を含有を種々の食品素材に添加した食品である。食品素材としては特に限定されることはなく、納豆、豆乳、味噌、醤油などの大豆食品、はんぺん、かまぼこ、ちくわなどの練り製品、ハム、ソーセージなどの食肉加工品、飴、キャラメル、最中、羊羹などの菓子類など多岐にわたる。
The food or drink of the present invention is not particularly limited as long as it contains the composition for suppressing an increase in blood sugar level of the present invention and can be taken orally.
For example, it is various drinks containing the fermented tea leaf extract as the composition for suppressing an increase in blood glucose level of the present invention. Further, if the fermented tea leaf extract is obtained by extracting fermented tea leaves with water and has a flavor that can be drunk as it is, the extract can be used as a tea beverage.
Or it is the foodstuff which added the fermented tea leaf or fermented tea leaf extract as a blood glucose level rise suppression composition of this invention to various food materials. The food material is not particularly limited, soy foods such as natto, soy milk, miso and soy sauce, kneaded products such as hampen, kamaboko and chikuwa, processed meat products such as ham and sausage, salmon, caramel, middle A wide variety of confectionery such as.
本発明の飲食品における、血糖値上昇抑制用組成物の含有量は任意であり、血糖値上昇抑制用組成物自身が有するＡＧＨ阻害性（例えばＩＣ５０）を目安として、得ようとする血糖値上昇抑制効果、および期待される風味および摂取量に応じて適宜設定することができる。
例えば、発酵茶葉を水で抽出した抽出物をそのまま茶飲料とする場合、水と発酵茶葉との割合は、水１００質量部に対して、発酵茶葉（含水率５質量％）０．５〜２０質量部程度が好ましい。また抽出方法は、温度４０〜１００℃の温水または熱水に３分間〜６０分間浸す方法が好ましい。
また発酵茶葉を食品素材に添加する場合、例えば、食品素材１００質量部に対して、発酵茶（含水率５質量％）０．１〜２００質量部の範囲で適宜に決めることができる。
このような、本発明の血糖値上昇抑制用組成物を含有する飲食品は、これを摂取することにより血糖値上昇抑制効果が得られる。
The content of the composition for suppressing blood sugar level increase in the food and drink of the present invention is arbitrary, and the blood sugar level to be obtained is based on the AGH inhibitory property (for example, IC 50 ) of the composition for suppressing blood sugar level increase. It can be set as appropriate according to the rise-inhibiting effect and the expected flavor and intake.
For example, when an extract obtained by extracting fermented tea leaves with water is used as it is as a tea beverage, the ratio of water and fermented tea leaves is 0.5 to 20 fermented tea leaves (
Moreover, when adding a fermented tea leaf to a food material, it can determine suitably in the range of 0.1-200 mass parts fermented tea (
Such a food or drink containing the composition for suppressing an increase in blood glucose level of the present invention can obtain an effect of suppressing an increase in blood glucose level by ingesting it.
以下の実験例および分析試験例において「％」は特に断りのない限り「質量％」である。
以下の実験例および分析試験例で用いた原料の「茶の葉」はいずれも長崎県総合農林試験場東彼杵茶葉支場で栽培したヤブキタ種の三番茶の葉である。また、特に断りのない限り揉捻は揉捻機を用いて行った。
なお実施例１、分析試験例１〜５におけるＡＧＨ阻害性の評価は、松井らによる遊離ＡＧＨを用いた方法（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．， ４７，５５０−５５３，（１９９９））に拠って行い、測定結果をα−グルコシダーゼ（ＡＧＨ）酵素活性の阻害率（単位：％）で表している。
In the following experimental examples and analytical test examples, “%” is “% by mass” unless otherwise specified.
The raw material “tea leaves” used in the following experimental examples and analytical test examples are the leaves of the third tea of Yabukita cultivated at the Nagasaki Prefectural Agricultural and Forestry Experiment Station, Higashisonobe Tea Leaf Branch. Further, unless otherwise specified, twisting was performed using a twisting machine.
The evaluation of AGH inhibition in Example 1 and analytical test examples 1 to 5 is based on the method using free AGH by Matsui et al. (J. Agric. Food Chem., 47, 550-553 (1999)). The measurement results are expressed as an inhibition rate (unit:%) of α-glucosidase (AGH) enzyme activity.
［実験例１］
（混合発酵茶葉の製造）
茶の葉にビワ葉を投入し、揉捻機で揉み込んだ。茶の葉とビワ葉の配合割合は茶の葉：ビワ茶の質量比が９０：１０（ビワ投入割合１０％）と７５：２５（ビワ投入割合２５％）の２通りとした。揉み込みの時間は２０分と４０分の２通りとした。
この後、０時間、１時間、２時間、４時間、６時間、２４時間の６通りの発酵工程を経て２４種類の混合発酵茶葉を得た。なお、発酵工程０時間のものは揉み込み終了直後に得られる混合発酵茶葉である。
[Experimental Example 1]
(Production of mixed fermented tea leaves)
The loquat leaves were put into the tea leaves and swallowed with a twister. The blending ratio of tea leaves and loquat leaves was set to two ratios: 90:10 (10% loquat input ratio) and 75:25 (25% loquat input ratio). The time for squeezing was set at 2 minutes for 20 minutes and 40 minutes.
Thereafter, 24 types of mixed fermented tea leaves were obtained through 6 fermentation processes of 0 hour, 1 hour, 2 hours, 4 hours, 6 hours, and 24 hours. In addition, the thing of the
（官能審査）
緑茶の官能審査経験がある３名のパネラーにて、上記で得た２４種類の混合発酵茶葉について、緑茶の審査法に従って香気および味の審査を行った。審査に当たっては、審査茶碗に混合発酵茶葉３ｇを入れ熱水１８０ｍｌを注ぎ、香りについては熱水を注いだ直後に、味については５分後に審査を行った。結果を表１に示す。
(Sensory examination)
Three panelists with sensory examination experience of green tea examined the flavor and taste of the 24 types of mixed fermented tea leaves obtained above according to the green tea examination method. In the examination, 3 g of mixed fermented tea leaves were poured into the examination tea bowl, 180 ml of hot water was poured in, and the fragrance was examined immediately after pouring hot water, and the taste was examined after 5 minutes. The results are shown in Table 1.
表１の結果に示されるように、味、香りに関しては、揉捻時間が２０分、発酵時間が０〜４時間で香気が高く、後味がさっぱりして優れる。揉捻時間が４０分になると味が低下し、発酵時間が６時間以上になると香りの劣化が顕著になる。 As shown in the results of Table 1, regarding the taste and aroma, the twisting time is 20 minutes, the fermentation time is 0 to 4 hours, the aroma is high, and the aftertaste is refreshing and excellent. When the twisting time is 40 minutes, the taste is lowered, and when the fermentation time is 6 hours or more, the deterioration of the fragrance becomes remarkable.
（ＡＧＨ活性の測定）
上記で得た２４種類の混合発酵茶葉のうち、発酵時間が６時間と２４時間のものを除く１６種類について、１００℃の熱水で１０分間抽出した抽出液（混合発酵茶葉の使用量；２．０ｍｇ／ｍｌ）のＡＧＨ阻害性を測定した。結果を表２に示す。
また、市販の緑茶、ビワ茶、グアバ茶、紅茶をそれぞれ同様に熱水で抽出した抽出液について、同様にしてＡＧＨ阻害性を測定した。結果を表３に示す。
(Measurement of AGH activity)
Of the 24 types of mixed fermented tea leaves obtained above, 16 types excluding those with fermentation times of 6 hours and 24 hours were extracted with hot water at 100 ° C. for 10 minutes (the amount of mixed fermented tea leaves used: 2 0 mg / ml) was measured. The results are shown in Table 2.
In addition, AGH inhibition was measured in the same manner for extracts obtained by similarly extracting commercially available green tea, loquat tea, guava tea, and black tea with hot water. The results are shown in Table 3.
表２に示されるように、ＡＧＨ阻害性は、茶の葉に対してビワ葉の配合割合を多くすると阻害率が低くなり、揉捻時間が長くても低くなる。また、発酵時間が長くなるにつれて阻害率が低くなる傾向がある。
また表２，３の結果より、特にビワ葉の配合割合１０質量％、揉捻時間２０分、発酵時間０〜１時間、およびビワ葉の配合割合２５質量％、揉捻時間２０分、発酵時間０時間の条件で、緑茶よりも優れたＡＧＨ阻害性が得られた。
As shown in Table 2, the AGH inhibitory effect is lowered when the blending ratio of loquat leaves is increased with respect to tea leaves, and becomes low even when the twisting time is long. Moreover, there exists a tendency for an inhibition rate to become low as fermentation time becomes long.
In addition, from the results of Tables 2 and 3, in particular, the mixing ratio of
［分析試験例１］
表２において、優れたＡＧＨ阻害性を示した混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）を７０％アセトン（濃度７０体積％のアセトン水溶液、以下同様。）で室温抽出し、抽出液を濃縮して水溶液とした後、エーテルを加え溶媒分配してクロロフィルなどの脂溶性成分を除いた。得られた水層を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した結果を図１に示す。
図１に示されるように、緑茶成分であるカフェイン、エピカテキン（ＥＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピガロカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＧＣｇ）、エピカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＣｇ）に加えて、これらのカテキンの酸化により生成する二量体であるところのテアシネンシンＣ、テアシネンシンＥ、テアシネンシンＡ、テアシネンシンＤ（ＥＧＣｇと重なっている）、テアフラビン類（テアフラビン（ＴＦ）、テアフラビン−３−Ｏ−ガレート（３−ＴＦＧ）、テアフラビン−３’−Ｏ−ガレート（３’−ＴＦＧ）、テアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレート（３，３’−ＴＦＧＧ）を含む。）のピークが検出された。また、ベースラインの盛り上がりとして検出されるカテキン酸化生成物の存在も認められた。
[Analysis Test Example 1]
In Table 2, mixed fermented tea leaves that showed excellent AGH inhibitory properties (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
As shown in FIG. 1, the green tea components caffeine, epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), epigallocatechin-3-O-gallate (EGCg), epicatechin-3-O-gallate ( ECa), theasinensin C, theasinensin E, theasinensin A, theasinensin D (overlapping EGCg), theaflavins (theaflavin (TF), theaflavin-) which are dimers formed by oxidation of these catechins (Including 3-O-gallate (3-TFG), theaflavin-3′-O-gallate (3′-TFG), theaflavin-3,3′-di-O-gallate (3,3′-TFGG)) The peak was detected. In addition, the presence of catechin oxidation products detected as a rise in the baseline was also observed.
［分析試験例２］
表２において、優れたＡＧＨ阻害性を示した混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）を乾燥させた乾燥発酵茶葉を図２に示す手順で分画した。
＜操作（１）＞ 乾燥発酵茶葉（含水率５質量％）１２５ｇを、７０％アセトン２Ｌと共に破砕機（製品名；ワーリングブレンダー ７０１１Ｓ型、エフ・エム・アイ社製）中で破砕し、ろ過した。残渣を７０％アセトン３Ｌで抽出してアセトン抽出液を得た後、該残渣をメタノール３Ｌで抽出してメタノール抽出液を得た。前記ろ過で得られたろ液と、前記アセトン抽出液と、前記メタノール抽出液を合わせてロータリーエバポレーターで濃縮後乾燥してエキス（乾燥物）５９．９ｇを得た。
＜操作（２）＞ 得られたエキスを水に懸濁し、エーテルを加え溶媒分配してクロロフィルなどの脂溶性成分を除いた。
＜操作（３）＞ 操作（２）で得られた水層を水で調製したＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム（ファルマシア ファイン ケミカル社製、４ｃｍ×２８ｃｍ）に流し込み、水（５００ｍＬ）、４０％メタノール（２００ｍＬ）、６０％メタノール（３００ｍＬ）、８０％メタノール（３００ｍＬ）、メタノール（３００ｍＬ）、６０％アセトン（５００ｍＬ）で順次溶出した。
溶出液を濃縮してフラクションＦｒ．１（１８．６６ｇ）、Ｆｒ．２（５．７９ｇ）、Ｆｒ．３（３．１２ｇ）、Ｆｒ．４（４．８７ｇ）、Ｆｒ．５（６．０１ｇ）、Ｆｒ．６（３．５５ｇ）、Ｆｒ．７（２．０７ｇ）に分画した。
各フラクションについてＡＧＨ阻害活性を測定したところ、下記表４に示すように、Ｆｒ．６及び７が非常に高い阻害率を示した。
[Analysis Test Example 2]
In Table 2, dry fermented tea leaves obtained by drying mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
<Operation (1)> 125 g of dried fermented tea leaves (
<Operation (2)> The obtained extract was suspended in water, ether was added and the solvent was partitioned to remove fat-soluble components such as chlorophyll.
<Operation (3)> The aqueous layer obtained in operation (2) is poured into a Sephadex LH-20 column (manufactured by Pharmacia Fine Chemical Co., 4 cm × 28 cm) prepared with water, and water (500 mL), 40% methanol (200 mL). ), 60% methanol (300 mL), 80% methanol (300 mL), methanol (300 mL), and 60% acetone (500 mL).
The eluate was concentrated to fraction Fr. 1 (18.66 g), Fr. 2 (5.79 g), Fr. 3 (3.12 g), Fr. 4 (4.87 g), Fr. 5 (6.01 g), Fr. 6 (3.55 g), Fr. Fractionated to 7 (2.07 g).
When AGH inhibitory activity was measured for each fraction, as shown in Table 4 below, Fr. 6 and 7 showed very high inhibition rates.
そこで、Ｆｒ．６及び７について、さらに図２に示す操作で分離精製を行った。
＜操作（４）＞ Ｆｒ．６およびＦｒ．７それぞれについて、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ（三菱化学社製、３ｃｍ×２８ｃｍ）に付して、２０％メタノール（1００ｍＬ）、３０％メタノール（1００ｍＬ）、４０％メタノール（1００ｍＬ）、５０％メタノール（1００ｍＬ）、６０％メタノール（1００ｍＬ）、７０％メタノール（1００ｍＬ）、８０％メタノール（1００ｍＬ）、９０％メタノール（１００ｍＬ）、メタノール（２００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．６からＦｒ．６−１（８９９ｍｇ）、Ｆｒ．６−２（２．１６ｇ）、Ｆｒ．６−３（２８２ｍｇ）の画分を得た。また、Ｆｒ．７からＦｒ．７−１（６７ｍｇ）、Ｆｒ．７−２（１．１７ｇ）、Ｆｒ．７−３（６００ｍｇ）の画分を得た。
このうちＦｒ．６−１とＦｒ．７−１は水素核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）スペクトルを測定し、標品のスペクトルと比較することにより、それぞれテアシネンシンＡおよびテアシネンシンＤと同定した。Ｆｒ．６−３とＦｒ．７−３はいずれもＨＰＬＣと薄層クロマトグラフィーの結果からテアフラビン類であると同定した。
Therefore, Fr. 6 and 7 were further separated and purified by the operation shown in FIG.
<Operation (4)> Fr. 6 and Fr. Each of 7 was attached to MCIgel CHP20P (Mitsubishi Chemical Co., Ltd., 3 cm × 28 cm), 20% methanol (100 mL), 30% methanol (100 mL), 40% methanol (100 mL), 50% methanol (100 mL), 60% Elution was successively performed with methanol (100 mL), 70% methanol (100 mL), 80% methanol (100 mL), 90% methanol (100 mL), and methanol (200 mL).
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 6 to Fr. 6-1 (899 mg), Fr. 6-2 (2.16 g), Fr. A fraction of 6-3 (282 mg) was obtained. In addition, Fr. 7 to Fr. 7-1 (67 mg), Fr. 7-2 (1.17 g), Fr. A fraction of 7-3 (600 mg) was obtained.
Of these, Fr. 6-1 and Fr. 7-1 is a hydrogen nuclear magnetic resonance (1 H-NMR) spectra were measured, by comparison with the spectrum of the specimen, respectively identified as Teashinenshin A and Teashinenshin D. Fr. 6-3 and Fr. 7-3 was identified as theaflavins from the results of HPLC and thin layer chromatography.
＜操作（５）＞ Ｆｒ．６−２とＦｒ．７−２を合わせたものをＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ（富士シリシア社製、３ｃｍ×３０ｃｍ）に付して、１０％メタノール（1００ｍＬ）、２０％メタノール（1００ｍＬ）、３０％メタノール（1００ｍＬ）、４０％メタノール（1００ｍＬ）、５０％メタノール（1００ｍＬ）、６０％メタノール（1００ｍＬ）、メタノール（２００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．７２１（１７９ｍｇ）、Ｆｒ．７２２（１．１０ｇ）、Ｆｒ．７２３（５３０ｍｇ）、Ｆｒ．７２４（１．２７ｇ）に分画した。
このうちＦｒ．７２１は１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、ＥＧＣｇとテアシネンシンＡの混合物であると同定した。
<Operation (5)> Fr. 6-2 and Fr. 7-2 was added to Chromatorex ODS (manufactured by Fuji Silysia Co., Ltd., 3 cm × 30 cm), and 10% methanol (100 mL), 20% methanol (100 mL), 30% methanol (100 mL), 40% methanol ( 100 mL), 50% methanol (100 mL), 60% methanol (100 mL), and methanol (200 mL) were eluted successively.
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 721 (179 mg), Fr. 722 (1.10 g), Fr. 723 (530 mg), Fr. Fractionated to 724 (1.27 g).
Of these, Fr. 721 measured a 1 H-NMR spectrum and was identified as a mixture of EGCg and theacinensin A.
＜操作（６）＞ Ｆｒ．７２２と７２３を合わせたものをＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム（３ｃｍ×２０ｃｍ）に流し込み、エタノール（５００ｍＬ）、９０％エタノール（２００ｍＬ）、２０％メタノール（３００ｍＬ）、６０％アセトン（４００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．７２２１（３．７ｍｇ）、Ｆｒ．７２２２（４１．３ｍｇ）、Ｆｒ．７２２３（４７．０ｍｇ）、Ｆｒ．７２２４（１６６．２ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５（４５８ｍｇ）、Ｆｒ．７２２６（６５７．５ｍｇ）に分画した。
このうちＦｒ．７２２１、Ｆｒ．７２２２、Ｆｒ．７２２３とＦｒ．７２２４は１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、標品のスペクトルと比較することにより、それぞれ没食子酸、ＥＣｇ、ＥＧＣｇ、エピガロカテキン−３，３’（４’）−Ｏ−ガレートと同定した。
<Operation (6)> Fr. A combination of 722 and 723 was poured into a Sephadex LH-20 column (3 cm × 20 cm) and eluted sequentially with ethanol (500 mL), 90% ethanol (200 mL), 20% methanol (300 mL), and 60% acetone (400 mL). .
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 7221 (3.7 mg), Fr. 7222 (41.3 mg), Fr. 7223 (47.0 mg), Fr. 7224 (166.2 mg), Fr. 7225 (458 mg), Fr. Fractionated to 7226 (657.5 mg).
Of these, Fr. 7221, Fr. 7222, Fr. 7223 and Fr. 7224 was identified as gallic acid, ECg, EGCg, and epigallocatechin-3,3 ′ (4 ′)-O-gallate by measuring the 1 H-NMR spectrum and comparing it with the spectrum of the sample.
＜操作（７）＞ Ｆｒ．７２２５をＤｉａｉｏｎＨＰ２０ＳＳ（三菱化学社製、２ｃｍ×２０ｃｍ）に付して、２０％メタノール（1００ｍＬ）、２５％メタノール（1００ｍＬ）、３０％メタノール（1００ｍＬ）、３５％メタノール（1００ｍＬ）、４０％メタノール（1００ｍＬ）、４５％メタノール（1００ｍＬ）、５０％メタノール（1００ｍＬ）、６０％メタノール（１００ｍＬ）、メタノール（２００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．７２２５１（３９．６ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５２（３２０ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５３（４７．７ｍｇ）に分画した。
このうちＦｒ．７２２５１は１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、標品のスペクトルと比較することにより、ウーロンテアニンと同定した。
<Operation (7)> Fr. 7225 is attached to Diaion HP20SS (Mitsubishi Chemical Co., Ltd., 2 cm × 20 cm), 20% methanol (100 mL), 25% methanol (100 mL), 30% methanol (100 mL), 35% methanol (100 mL), 40% methanol ( 100 mL), 45% methanol (100 mL), 50% methanol (100 mL), 60% methanol (100 mL), and methanol (200 mL) were sequentially eluted.
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 72251 (39.6 mg), Fr. 72252 (320 mg), Fr. Fractionated to 72253 (47.7 mg).
Of these, Fr. 72251 was identified as oolong theanine by measuring a 1 H-NMR spectrum and comparing it with the spectrum of a sample.
＜操作（８）＞Ｆｒ．７２２５２をＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ（富士シリシア社製、２ｃｍ×２０ｃｍ）に比して、１０％メタノール（1００ｍＬ）、２０％メタノール（1００ｍＬ）、３０％メタノール（1００ｍＬ）、４０％メタノール（1００ｍＬ）、５０％メタノール（1００ｍＬ）、６０％メタノール（1００ｍＬ）、メタノール（２００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．７２２５２１（１０．５ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５２２（３８．３ｇ）、Ｆｒ．７２２５２３（６０ｍｇ）に分画した。
このうちＦｒ．７２２５２１は１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、エピガロカテキン−３，３’（４’）−Ｏ−ガレートと同定した。
<Operation (8)> Fr. Compared to Chromatorex ODS (manufactured by Fuji Silysia Co., Ltd., 2 cm × 20 cm), 72252 is 10% methanol (100 mL), 20% methanol (100 mL), 30% methanol (100 mL), 40% methanol (100 mL), 50% methanol. (100 mL), 60% methanol (100 mL), and methanol (200 mL) were eluted successively.
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 722521 (10.5 mg), Fr. 722522 (38.3 g), Fr. Fractionated to 722523 (60 mg).
Of these, Fr. 722521 measured a 1 H-NMR spectrum and was identified as epigallocatechin-3,3 ′ (4 ′)-O-gallate.
＜操作（９）＞ Ｆｒ．７２２５２３をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム（１．５ｃｍ×２０ｃｍ）に流し込み、８０％メタノール（２００ｍＬ）、９０％メタノール（２００ｍＬ）、メタノール（２００ｍＬ）、６０％アセトン（２００ｍＬ）で順次溶出した。
得られた溶出液を濃縮してＦｒ．７２２５２３１（１４．４ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５２３２（１６．１ｍｇ）、Ｆｒ．７２２５２３３（１５．５ｍｇ）に分画した。
このうちＦｒ．７２２５２３２は１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、標品のスペクトルと比較することにより、ガロイル ウーロンテアニンと同定した。
<Operation (9)> Fr. 722523 was applied to a Sephadex LH-20 column (1.5 cm × 20 cm) and eluted sequentially with 80% methanol (200 mL), 90% methanol (200 mL), methanol (200 mL), and 60% acetone (200 mL).
The obtained eluate was concentrated to obtain Fr. 7225231 (14.4 mg), Fr. 7225232 (16.1 mg), Fr. Fractionated to 7225233 (15.5 mg).
Of these, Fr. 7225232 was identified as galloyl oolong theanine by measuring the 1 H-NMR spectrum and comparing it with the spectrum of the sample.
これらの結果より、ＡＧＨ阻害活性が高いＦｒ．６及び７の下記の画分にはそれぞれ下記化合物が含まれていることが判明した。下記化合物の構造を図３に示す。
Ｆｒ．６−１：テアシネンシンＡ（ＴＳ−Ａ）、
Ｆｒ．６−３、７−３：テアフラビン（ＴＦ）混合物（テアフラビン、テアフラビン−３−Ｏ−ガレート、テアフラビン−３’−Ｏ−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレートを含む）、
Ｆｒ．７−１：テアシネンシンＤ （ＴＳ−Ｄ）、
Ｆｒ．７２２１：没食子酸
Ｆｒ．７２２２：エピカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＣｇ）、
Ｆｒ．７２２３：エピガロカテキン−３−Ｏ−ガレート（ＥＧＣｇ）、
Ｆｒ．７２２４およびＦｒ．７２２５２１：エピガロカテキン（ＥＧＣ）−３，３’（４’）−ジ−Ｏ−ガレート、
Ｆｒ．７２２５１：ウーロンテアニン、
Ｆｒ．７２２５２３２：ガロイルウーロンテアニン。
From these results, Fr. The following fractions of 6 and 7 were found to contain the following compounds, respectively. The structure of the following compound is shown in FIG.
Fr. 6-1: Theacinensin A (TS-A),
Fr. 6-3, 7-3: Theaflavin (TF) mixture (including theaflavin, theaflavin-3-O-gallate, theaflavin-3′-O-gallate, theaflavin-3,3′-di-O-gallate),
Fr. 7-1: Teasinensin D (TS-D),
Fr. 7221: Gallic acid Fr. 7222: Epicatechin-3-O-gallate (ECg),
Fr. 7223: Epigallocatechin-3-O-gallate (EGCg),
Fr. 7224 and Fr. 722521: Epigallocatechin (EGC) -3,3 '(4')-di-O-gallate,
Fr. 72251: Oolong theanine,
Fr. 7225232: Galloyl oolong theanine.
また上記各化合物の含有量を定量した結果を図２中に示している。この結果より、ＡＧＨ阻害活性が高いＦｒ．６の主成分はテアシネンシンＡであることが判明した。またＡＧＨ阻害活性が高いＦｒ．７の主成分はテアフラビン（ＴＦ）混合物であることが判明した。該テアフラビン混合物に含まれる上記テアフラビン類について、それぞれＡＧＨ阻害活性を測定したところ、特にテアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレートが強い酵素阻害活性を示した。このことは後述の分析試験例５、６の結果からもわかる。 Moreover, the result of having quantified content of each said compound is shown in FIG. From this result, Fr. The main component of 6 was found to be theacinensin A. In addition, Fr. The main component of 7 was found to be a theaflavin (TF) mixture. The above-mentioned theaflavins contained in the theaflavin mixture were each measured for AGH inhibitory activity, and particularly theaflavin-3,3'-di-O-gallate showed strong enzyme inhibitory activity. This can be seen from the results of analytical test examples 5 and 6 described later.
［分析試験例３］
上記分析試験例２において非常に高いＡＧＨ阻害活性を示したＦｒ．７について、ＨＰＬＣ分析を行った結果を図４Ａに示す。分析条件は、
カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８ ＡＲＩＩ（ナカライテスク社製、４．６×２５０ｍｍ）、
カラム温度：３５℃、
移動相：Ａ；５０ｍＭリン酸、Ｂ；ＣＨ３ＣＮ、Ｂ ４％から３０％（３９分間）、３０％から７５％（１５分間）、
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、
検出：フォトダイオードアレイ検出（Ｍａｘ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）とした。
（なお、以下の分析試験例におけるＨＰＬＣ分析条件は、特に断りがない限り、本試験例と同様である。）
この図の結果より、Ｆｒ．７には上記分析試験例２で存在が判明したテアフラビン混合物および上記化合物のほかに、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析では原点として検出され、ＨＰＬＣ分析ではベースラインの盛り上がりとして検出される物質がかなり多く含まれていることが明らかになった。かかる物質は主に図２中のＦｒ．７２４に分画されていた。
かかる物質は、各種カラムクロマトでの挙動および紫外可視吸収スペクトルがＥＧＣｇのものと類似していること、塩化第二鉄試薬及びバニリン塩酸試薬に対して陽性であることから、上記分析試験例２で存在が判明したカテキン類よりも分子量の大きいカテキン酸化生成物と推測される。
通常、茶に含まれる高分子ポリフェノールの典型的なものにプロアントシアニジンがあり、ビワ葉にはエピカテキンを構成ユニットとするプロアントシアニジン（ビワプロアントシアニジン）が含まれることが知られていることから、前記Ｆｒ．７における「分子量の大きいカテキン酸化生成物」にはプロアントシアニジンが含まれていると推測される。
[Analysis Test Example 3]
In the above-mentioned analytical test example 2, Fr. The results of HPLC analysis for 7 are shown in FIG. 4A. The analysis conditions are
Column: Cosmosil 5C 18 ARII (manufactured by Nacalai Tesque, 4.6 × 250 mm),
Column temperature: 35 ° C.
Mobile phase: A; 50 mM phosphoric acid, B; CH 3 CN,
Flow rate: 0.8 ml / min,
Detection: Photodiode array detection (Max absorption).
(The HPLC analysis conditions in the following analytical test examples are the same as in this test example unless otherwise specified.)
From the result of this figure, Fr. In addition to the theaflavin mixture and the above compound that were found to be present in Analytical Test Example 2 above, there are many substances that are detected as the origin in thin layer chromatography (TLC) analysis and detected as a bulge in the baseline in HPLC analysis. It became clear that many were included. Such materials are mainly Fr. It was fractionated to 724.
Such a substance is similar to that of EGCg in behavior and ultraviolet-visible absorption spectrum in various column chromatograms, and positive for ferric chloride reagent and vanillin hydrochloric acid reagent. It is presumed to be a catechin oxidation product having a higher molecular weight than catechins whose existence has been found.
Typically, proanthocyanidins are typical of high-molecular polyphenols contained in tea, and loquat leaves are known to contain proanthocyanidins (biwaproanthocyanidins) containing epicatechin as constituent units, Fr. It is presumed that proanthocyanidins are contained in the “catechin oxidation product having a large molecular weight” in No. 7.
プロアントシアニジンは、カテキンまたはカテキン誘導体を構成ユニットとする二量体または重合体であり、これを構成するカテキンまたはカテキン誘導体は、４位の炭素（Ｃ−４）と８位の炭素（Ｃ−８）、あるいは４位の炭素（Ｃ−４）と６位の炭素（Ｃ−６）とが炭素−炭素結合されている。
そこで、前記Ｆｒ．７に含まれているプロアントシアニジンの構成ユニットを明らかにする目的で、Ｆｒ．７に対して、下記の方法でメルカプトエタノールによるチオール分解を行った。
すなわち、Ｆｒ．７の６０％エタノール溶液（Ｆｒ．７の濃度；１０ｍｇ／ｍＬ）０．２ｍＬに、メルカプトエタノール試液（メルカプトエタノール２．５ｍＬ、０．１％塩酸４ｍＬ，エタノール２７．５ｍＬ、水１６ｍＬを混合したもの）１．８ｍＬを加えて６０℃で６時間加熱し、反応液２０μＬをＨＰＬＣで分析した。分析条件は図４Ａを得たときと同じとした。こうして得られたチオール分解後のクロマトグラムを図４Ｂに示す。
Proanthocyanidins are dimers or polymers having catechins or catechin derivatives as constituent units, and catechins or catechin derivatives constituting the catechins or catechin derivatives are composed of carbon at the 4th position (C-4) and carbon at the 8th position (C-8). ), Or carbon (C-4) at
Therefore, the Fr. For the purpose of clarifying the structural unit of proanthocyanidins contained in Fr. 7 was subjected to thiol decomposition with mercaptoethanol by the following method.
That is, Fr. No. 7 60% ethanol solution (concentration of Fr. 7; 10 mg / mL) mixed with mercaptoethanol test solution (mercaptoethanol 2.5 mL, 0.1
この図４Ｂに示されるように、Ｆｒ．７をチオール分解すると分解前（図４Ａ）には認められないピークが多数出現している。分解前には認められなかったピークおよび分解前よりも増大したピークについて、標品（Ｔａｎａｋａ，Ｔ．ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．ＣＨｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １，１９９４，３０１３）の保持時間及び紫外吸収スペクトルとの比較を行った結果、ＥＧＣ、ＥＣ、ＥＧＣｇ、ＥＣｇ、ＥＧＣ−ＭＥ、ＥＣ−ＭＥ、ＥＧＣｇ−ＭＥ、ＥＣｇ−ＭＥが同定された。
As shown in FIG. 4B, Fr. When 7 is subjected to thiol decomposition, many peaks that are not recognized before decomposition (FIG. 4A) appear. Retention time and UV of the standard (Tanaka, T. et. Al., J. Chem. Soc.
また、図４Ｂにおいて、３９分に検出されるピークは、Fｒ．７（５００ｍｇ）をメルカプトエタノール試液１０ｍＬに溶解し、６時間加熱後、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ（富士シリシア社製）（水−メタノール溶離液）カラムクロマト、次いでＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（ＥｔＯＨ溶離液）カラムクロマトで分離して精製したところ、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥであることが１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの解析結果より明らかになった。エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥの構造式を図５に示す。
すなわち、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、Ａ環、Ｃ環、ガロイル基及びヒドロキシエチルチオ基のシグナルはＥＧＣｇ−ＭＥのものとほとんど同じであるが、Ｂ環のシグナルがｄ７．４０及び６．８１にいずれも２Ｈ分の二重線（Ｊ＝８Ｈｚ）として観察され、これはＢ環がｐ−ヒドロキシフェノールであることを示していた。また、ＴＯＦ（飛行時間型）質量分析ではｍ／ｚ ５０３に［Ｍ＋Ｈ］＋ピークを示したこともこのことを支持していた。
In FIG. 4B, the peak detected at 39 minutes is Fr. 7 (500 mg) was dissolved in 10 mL of a mercaptoethanol test solution, heated for 6 hours, and then separated by Chromatorex ODS (manufactured by Fuji Silysia) (water-methanol eluent) column chromatography, followed by Sephadex LH-20 (EtOH eluent) column chromatography. As a result of the purification, it was revealed from the analysis result of 1 H-NMR spectrum that it was epiafzeletin-3-O-gallate-ME. The structural formula of Epiafzeletin-3-O-gallate-ME is shown in FIG.
That is, in the 1 H-NMR spectrum, the signals of A ring, C ring, galloyl group and hydroxyethylthio group are almost the same as those of EGCg-ME, but the signal of B ring is d7.40 and 6.81. Both were observed as a double line for 2H (J = 8 Hz), indicating that the B ring was p-hydroxyphenol. This was also supported by the fact that TOF (time-of-flight) mass spectrometry showed an [M + H] + peak at m / z 503.
これら同定された構成ユニットのうち、ＥＧＣ、ＥＧＣｇ、ＥＣｇは高分子化合物の末端ユニットに由来し、チオエーテル化合物は延長ユニットに由来する。したがって、チオール分解される前の高分子化合物の構造、すなわち前記Ｆｒ．７に含まれるプロアントシアニジンの構造は、例えば図５に示すような構造を有すると推測される。 Among these identified structural units, EGC, EGCg, and ECg are derived from the terminal unit of the polymer compound, and the thioether compound is derived from the extension unit. Therefore, the structure of the polymer compound before thiol decomposition, that is, the Fr. The structure of proanthocyanidins contained in 7 is estimated to have a structure as shown in FIG. 5, for example.
これまで、エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとするプロアントシアニジンは烏龍茶から得られる二量体が１種知られているのみである（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｆ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８９，３７，３２５５−３２６３）。通常、二量体はＨＰＬＣで明確なピークとして検出されるが、Ｆｒ．７のＨＰＬＣでは、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥの生成量を説明できるほどの二量体に相当するピークは認められないことから、Ｆｒ．７のチオール分解により生成したエピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥは、三量体以上のプロアントシアニジンオリゴマーまたはポリマー由来であるといえる。かかる「エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとするプロアントシアニジン（三量体以上のオリゴマーまたはポリマー）」は、これまで知られていない新規な化合物である。 So far, only one kind of dianthr obtained from oolong tea has been known as proanthocyanidins having epiafuzeretin gallate as a constitutional unit (Hashimoto, F. et al., Chem. Pharm. Bull.,). 1989, 37, 3255-3263). Usually, the dimer is detected as a clear peak by HPLC, but Fr. In the HPLC of No. 7, no peak corresponding to a dimer that can explain the amount of production of epiafzeletin-3-O-gallate-ME is observed, so Fr. It can be said that Epiafzeletin-3-O-gallate-ME produced by the thiol decomposition of 7 is derived from a trimer or higher proanthocyanidin oligomer or polymer. Such a “proanthocyanidin (oligomer or polymer of trimer or higher) having an epiaphzeletin gallate as a constituent unit” is a novel compound that has not been known so far.
なお、ビワ葉を加えず、茶の葉のみを用いたほかは同様にして製造した発酵茶葉について、同様の分析試験を行い、チオール分解後に得られたチオエーテル化合物を比較したところ、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥのピークは、ビワ葉を混合した場合も、混合しない場合もほぼ同じ大きさで検出された。また、ビワ葉から抽出したプロアントシアニジンをチオール分解しても、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥは検出されなかった。このことから、Ｆｒ．７に含まれる「エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとするプロアントシアニジン」は茶の葉由来であることがわかる。
また、ＥＣ−ＭＥのピークは、ビワ葉を混合しない場合よりも、混合した場合の方が明らかに大きかった。このことから、ビワ葉に含まれる「エピカテキンを構成ユニットとするプロアントシアニジン（ビワプロアントシアニジン）」は、ＡＧＨ阻害性が高いＦｒ．７に含まれていることがわかる。
The same analysis test was performed on fermented tea leaves produced in the same manner except that only loaf leaves were used without using loquat leaves, and thioether compounds obtained after thiol decomposition were compared. The peak of O-gallate-ME was detected with almost the same size when the loquat leaf was mixed and when it was not mixed. Moreover, even if thiol decomposition was performed on proanthocyanidins extracted from loquat leaves, no epiafzeletin-3-O-gallate-ME was detected. From this, Fr. It can be seen that “Proanthocyanidins having Epiafzeletin gallate as a constituent unit” contained in No. 7 is derived from tea leaves.
Moreover, the peak of EC-ME was clearly larger when the loquat leaves were not mixed than when the loquat leaves were not mixed. From this, “proanthocyanidins having epicatechin as a constituent unit (biwaproanthocyanidins)” contained in loquat leaves are Fr. 7 is included.
［分析試験例４］
図４Ｂに示されるように、ＡＧＨ阻害性が高いＦｒ．７をチオール分解した後も、ベースラインの盛り上がりは残っている。
このことは、Ｆｒ．７には、上記分析試験例３で述べた「エピアフゼレチンガレートを構成ユニットとするプロアントシアニジン」および「ビワプロアントシアニジン」のほかに、ＨＰＬＣ分析においてベースラインの盛り上がりとして検出される物質が存在することを示している。
そこで、ＨＰＬＣ分析においてベースラインの盛り上がりとして検出される物質が、茶の葉とビワ葉を混合した場合の混合発酵茶葉と、ビワ葉を混合しないほかは同様にした場合の発酵茶葉（以下、単独発酵茶葉ということがある）とで生成量が異なるかどうか比較した。なお混合発酵茶葉の製造条件は分析試験例１，２と同様であり、茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間である。
[Analysis Test Example 4]
As shown in FIG. 4B, Fr. Even after 7 is thiolized, the climax of the baseline remains.
This is because Fr. 7. In addition to “proanthocyanidins having epiaphzeletin gallate as a constituent unit” and “biwaproanthocyanidins” described in the above-mentioned Analytical Test Example 3, there are substances detected as a rise in the baseline in HPLC analysis. It shows that
Therefore, the substances detected as the climax of the baseline in HPLC analysis are mixed fermented tea leaves when tea leaves and loquat leaves are mixed, and fermented tea leaves when not mixed with loquat leaves (hereinafter referred to as single It was compared whether or not the production amount was different in some cases. The production conditions of the mixed fermented tea leaves are the same as those in Analytical Test Examples 1 and 2. The blending ratio of tea leaves and loquat leaves is 9: 1, the twisting time is 20 minutes, and the fermentation time is 0 hours.
混合発酵茶葉及び単独発酵茶葉それぞれについて、茶葉（含水率５質量％）３ｇを７０％アセトン１００ｍＬで室温抽出（抽出時間１８時間）した後ろ過した。ろ液を濃縮して水溶液（２０ｍＬ）とした後、エーテル、酢酸エチルで２回ずつ溶媒分配した。
残った水層を一旦濃縮した後、７０％エタノールで３０ｍＬとし、その１０μＬをＨＰＬＣで分析した。該水層のＨＰＬＣ分析結果を図６に示す。
この図に示されるように、混合発酵茶葉の方が、単独発酵茶葉よりも、明らかにベースラインの盛り上がりとして検出される物質の量が多い。ピークの面積を比較すると、混合発酵茶葉においてベースラインの盛り上がりとして検出される物質の量は、単独発酵茶葉の１５９％と見積もられる。この増加分にはビワ葉由来のプロアントシアニジンも含まれるが、混合発酵茶葉におけるビワ葉の添加量は茶の葉の１０分の１量にすぎないため、元々ビワ葉に含まれていた成分だけで５９％の増加は説明できない。したがって、この増加分は、ビワ葉を添加したことにより生成が促進され、ビワ葉を添加しないと生成されないカテキン酸化生成物の存在を示している。
About each of mixed fermented tea leaves and single fermented tea leaves, 3 g of tea leaves (
The remaining aqueous layer was once concentrated, made up to 30 mL with 70% ethanol, and 10 μL thereof was analyzed by HPLC. The HPLC analysis result of the aqueous layer is shown in FIG.
As shown in this figure, the mixed fermented tea leaves clearly have a larger amount of substance detected as a rise in the baseline than the single fermented tea leaves. Comparing the areas of the peaks, the amount of substance detected as a baseline swell in the mixed fermented tea leaves is estimated at 159% of the single fermented tea leaves. This increase includes proanthocyanidins derived from loquat leaves, but the amount of loquat leaves added to mixed fermented tea leaves is only one-tenth that of tea leaves, so only the ingredients originally contained in loquat leaves The 59% increase cannot be explained. Therefore, this increase indicates the presence of catechin oxidation products that are promoted by the addition of loquat leaves and are not produced without the addition of loquat leaves.
一方、上記で得られた酢酸エチル層を濃縮後、８０％メタノールで３０ｍＬとした後、その１ｍＬをＯＤＳショートカラム（ＴＯＹＯＰＡＫ ＯＤＳ Ｍ、ＴＯＳＯ、東ソー社製）に８０％メタノールで通導し、溶出液を５．０ｍＬとして、その５μＬをＨＰＬＣで分析した。該酢酸エチル層のＨＰＬＣ分析結果を図７に示す。
この図に示されるように、混合発酵茶葉では単独発酵茶葉に比べてテアフラビン類のピーク面積が合わせて２．７倍に増加している。一方、カテキン類のピーク面積は減少しており、具体的にはＥＧＣは０．２４倍、ＥＣは０．４４倍、ＥＧＣｇは０．５７倍、ＥＣｇは０．６４倍にそれぞれ減少している。
このことは、混合発酵茶葉においては、茶葉にビワ葉を添加し揉み込むことで高分子のカテキン酸化生成物が多量に生成されることを示している。
On the other hand, after concentrating the ethyl acetate layer obtained above to 30 mL with 80% methanol, 1 mL thereof was introduced into an ODS short column (TOYOPAK ODS M, TOSO, manufactured by Tosoh Corporation) with 80% methanol and eluted. The liquid was adjusted to 5.0 mL, and 5 μL thereof was analyzed by HPLC. The HPLC analysis result of the ethyl acetate layer is shown in FIG.
As shown in this figure, the peak area of theaflavins in the mixed fermented tea leaves is increased 2.7 times in comparison with the single fermented tea leaves. On the other hand, the peak area of catechins is decreasing, specifically, EGC is 0.24 times, EC is 0.44 times, EGCg is 0.57 times, and ECg is 0.64 times. .
This indicates that in mixed fermented tea leaves, a large amount of high-molecular catechin oxidation products are produced by adding loquat leaves to the tea leaves and squeezing them.
［分析試験例５］
分析試験例４の結果より、混合発酵茶葉においては、茶葉にビワ葉を添加し揉み込むことで高分子のカテキン酸化生成物が多量に生成され、それはＨＰＬＣ分析ではベースラインの盛り上がりとして検出されること、すなわち薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析では原点として検出されることがわかった。
そこで、かかる混合発酵茶葉において特異的に増加する成分を特定することを目的として、以下の方法により、混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）に含まれる成分のうち、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析において原点として検出される酸化型高分子ポリフェノールを分離した。
すなわち、混合発酵茶葉（含水率５質量％）２２８ｇを６０％エタノール３Ｌで３回室温抽出し、３回の抽出液を合わせて減圧濃縮した。得られた水溶液（１．５Ｌ）をエチルエーテル、酢酸エチル、ｎ−ブタノールで順次溶媒分配して、エチルエーテル可溶部（４．０３ｇ）、酢酸エチル可溶部（９．８ｇ）、ｎ−ブタノール可溶部（２２．１ｇ）を得た。
ｎ−ブタノール可溶部１５ｇを６０％メタノールに溶かし、６０％メタノールでコンディショニングしたＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムにかけ、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノール、次いでメタノール−水―アセトン（８：１：１）混合溶液、メタノール−水―アセトン（６：２：２）混合溶液、水―アセトン（１：１）混合溶液で順次溶出した。溶出液をＴＬＣ（トルエン−ギ酸エチル−ギ酸、１：７：１）分析して、原点から移動しない物質を含むフラクションだけを集め濃縮して、ポリマー様物質（酸化型高分子ポリフェノール画分）１．４ｇを得た。そのＨＰＬＣ分析結果を図８Ａに示す。
[Analysis Test Example 5]
From the results of the analytical test example 4, in the mixed fermented tea leaves, a large amount of high molecular catechin oxidation products are generated by adding and mixing the loquat leaves into the tea leaves, which is detected as a rise in the baseline in the HPLC analysis. That is, it was found to be detected as the origin in thin layer chromatography (TLC) analysis.
Therefore, for the purpose of specifying the components that increase specifically in such mixed fermented tea leaves, the following method is used to prepare mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
That is, 228 g of mixed fermented tea leaves (
15 g of n-butanol soluble part was dissolved in 60% methanol, applied to a Sephadex LH-20 column conditioned with 60% methanol, 60% methanol, 80% methanol, 100% methanol, then methanol-water-acetone (8: 1: 1) Elution was performed sequentially with a mixed solution, a methanol-water-acetone (6: 2: 2) mixed solution, and a water-acetone (1: 1) mixed solution. The eluate was analyzed by TLC (toluene-ethyl formate-formic acid, 1: 7: 1), and only fractions containing substances that did not move from the origin were collected and concentrated to obtain a polymer-like substance (oxidized polymer polyphenol fraction) 1 .4 g was obtained. The HPLC analysis result is shown in FIG. 8A.
図８Ａにおいて、４５分付近の小さいピークはそのＵＶ吸収からテアフラビン類の混在を示しているが、そのピーク面積はベースライン盛り上がり全体の２％以下であった。
こうして得られたポリマー様物質（酸化型高分子ポリフェノール画分）についてＡＧＨ阻害性を測定した。その結果を表５に示す。
またテアフラビン−３，３’−ジ−Ｏ−ガレートについてのＡＧＨ阻害性の測定結果も合わせて表５に示す。
In FIG. 8A, a small peak around 45 minutes indicates the presence of theaflavins due to its UV absorption, but the peak area was 2% or less of the total rise in the baseline.
The thus obtained polymer-like substance (oxidized polymer polyphenol fraction) was measured for AGH inhibition. The results are shown in Table 5.
In addition, Table 5 also shows the measurement results of AGH inhibitory properties for theaflavin-3,3′-di-O-gallate.
表５に示されるように、混合発酵茶葉から上記の方法で分離した酸化型高分子ポリフェノール画分、すなわち混合発酵茶葉において特異的に増加する高分子ポリフェノールは、テアフラビン−３，３’−Ｏ−ジガレートと同等の強いマルターゼ及びスクラーゼ阻害活性を示した。この活性は、含有量から考えて、混入しているテアフラビン類（４５分付近のピーク）によるものではなく、高分子ポリフェノールに由来するものである。 As shown in Table 5, the oxidized polymer polyphenol fraction separated from the mixed fermented tea leaves by the above method, ie, the polymer polyphenol specifically increased in the mixed fermented tea leaves is theaflavin-3,3′-O—. It showed strong maltase and sucrase inhibitory activity equivalent to digallate. In view of the content, this activity is not due to contaminating theaflavins (peaks near 45 minutes) but is derived from high molecular weight polyphenols.
さらに、上記で得られた酸化型高分子ポリフェノール画分に対して、下記の方法でメルカプトエタノールによるチオール分解を行った。
すなわち、上記で得た酸化型高分子ポリフェノールを６０％エタノールに溶解させた溶液（酸化型高分子ポリフェノールの濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）０．２ｍＬと、メルカプトエタノール試液０．８ｍＬとを混合し、６０℃で５時間反応させ、その５μＬをＨＰＬＣで分析した。その結果を図８Ｂに示す。
前記分析試験例３においてＦｒ．７をチオール分解したものをＨＰＬＣ分析したときと同様に、エピアフゼレチン−３−Ｏ−ガレート−ＭＥを初めとするチオエーテル化合物及びカテキン類のピークが検出された。また図８Ｂにはチオール分解後にもベースラインの盛り上がりが観察された。
このことから、上記で得られた酸化型高分子ポリフェノール画分には、前述したエピアフゼレチンガレートを構成ユニットとして有するプロアントシアニジンが含まれるが、その含有割合は少なく、チオール分解されない物質がかなり含まれていることが示唆される。
Furthermore, the oxidized polymer polyphenol fraction obtained above was subjected to thiol decomposition with mercaptoethanol by the following method.
That is, 0.2 mL of a solution obtained by dissolving the oxidized polymer polyphenol obtained above in 60% ethanol (oxidized polymer polyphenol concentration: 10 mg / mL) and 0.8 mL of a mercaptoethanol test solution were mixed. The mixture was reacted at 5 ° C. for 5 hours, and 5 μL thereof was analyzed by HPLC. The result is shown in FIG. 8B.
In the analytical test example 3, Fr. As in the case of HPLC analysis of the 7-thiol-decomposed product, peaks of thioether compounds and catechins including epiafzeletin-3-O-gallate-ME were detected. Further, in FIG. 8B, the bulge of the baseline was observed even after thiol decomposition.
From this, the oxidized polymer polyphenol fraction obtained above contains proanthocyanidins having the above-mentioned epiafzeletin gallate as a constituent unit, but the content ratio is small and there are quite a few substances that are not decomposed by thiol. It is suggested that it is included.
そこで、この酸化型高分子ポリフェノール画分の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを測定し、それをビワ葉に含まれる「エピカテキンを構成ユニットとするプロアントシアニジン（ビワプロアントシアニジン）」の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと比較した。その結果を図９に示す。図９Ａはビワプロアントシアニジンのスペクトルであり、図９Ｂは前記酸化型高分子ポリフェノール画分のスペクトルである。
図９の結果より、ビワプロアントシアニジンにはカテコール環型Ｂ環（Ｂｃ）由来のシグナルが観察されるのに対して、混合発酵茶葉から分離された酸化型高分子ポリフェノールにはＢ環由来のシグナルがほとんど観察されず、カテキンのＡ環に対応するフロログルシノール（１，３，５−トリヒドロキシベンゼン）に由来するシグナル、及びガロイル基のピロガロール（１，２，３−トリヒドロキシベンゼン）に由来するシグナルが観察され、小さいながらＣ環由来のシグナルも一部認められた。
このことから、混合発酵茶葉から上記の方法で分離された酸化型高分子ポリフェノールの主成分はビワプロアントシアニジンではなく、Ｂ環部に様々な構造を持つカテキン誘導体が酸化的に縮合して高分子化した物質であることがわかる。
かかる高分子ポリフェノールの構造は、明確ではないが、図３に示した化合物からの類推により、主にカテキンガレート類のＢ環同士が酸化的に縮合して高分子化したものと考えられる。Ｂ環の結合様式としては図３に示すテアシネンシン、テアフラビン、ウーロンテアニンなど様々なタイプが推測されるが、現在のところ詳細は不明である。
Therefore, the 13 C-NMR spectrum of the oxidized polymer polyphenol fraction was measured, it and a 13 C-NMR spectrum of included in loquat leaves "proanthocyanidins configured unit epicatechin (loquat proanthocyanidins)" Compared. The result is shown in FIG. FIG. 9A is a spectrum of biwaproanthocyanidins, and FIG. 9B is a spectrum of the oxidized polymer polyphenol fraction.
From the results shown in FIG. 9, a signal derived from catechol ring type B ring (Bc) is observed in biwaproanthocyanidins, whereas a signal derived from B ring is present in oxidized polymer polyphenols separated from mixed fermented tea leaves. Is hardly observed, derived from phloroglucinol (1,3,5-trihydroxybenzene) corresponding to the A ring of catechin, and derived from pyrogallol (1,2,3-trihydroxybenzene) of the galloyl group A small signal was also observed from the C ring, although it was small.
Therefore, the main component of the oxidized polymer polyphenol separated from the mixed fermented tea leaves by the above method is not Biwa proanthocyanidin, but catechin derivatives having various structures in the B ring part are oxidatively condensed and polymerized. It turns out that it is the material which became.
Although the structure of such a high molecular polyphenol is not clear, it is considered that the B rings of catechin gallates are mainly oxidatively condensed and polymerized by analogy with the compound shown in FIG. Various types such as theacinensin, theaflavin, and oolong theanine shown in FIG. 3 are presumed as the binding mode of the B ring, but the details are currently unknown.
また、この酸化型高分子ポリフェノール画分を元素分析した結果、炭素５７．０６％、水素４．５１％、窒素０．３５％であった。
ＥＧＣｇの計算値（Ｃ２２Ｈ１８Ｏ１１：炭素５７．６５％、水素３．９６％、Ｃ２２Ｈ１８Ｏ１１・２Ｈ２Ｏ：炭素５３．４４％、水素４．４９％）に比べて水素含有率が高く、通常の酸化では水素含有率は減少するはずであるので、カテキン酸化の過程で別の代謝産物が取り込まれている可能性が示唆される。
As a result of elemental analysis of the oxidized polymer polyphenol fraction, it was 57.06% carbon, 4.51% hydrogen, and 0.35% nitrogen.
Calculated EGCg (C 22 H 18 O 11 : carbon 57.65%, hydrogen 3.96%, C 22 H 18 O 11 · 2H 2 O: carbon 53.44%, hydrogen 4.49%) compared to Since the hydrogen content is high and the hydrogen content should decrease in normal oxidation, it is suggested that another metabolite may be incorporated during the catechin oxidation process.
さらに、得られた酸化型高分子ポリフェノールをアセチル化した後、ゲル浸透クロマトグラフィーにより分子量を測定したところ、ピークトップ分子量は２０００（数平均分子量１４００、質量平均分子量３２００）であり、分子量分布は広く１０００〜１５０００程度であった。
ゲル浸透クロマトグラフィーの測定条件は以下の通りとした。
カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ Ｇ ４０００Ｈ６、直径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、東ソー社製、
ポンプ：ＴＯＳＯ ＤＰ８０２０、東ソー社製、
検出器：ＪＡＳＣＯ ＵＶ９７０日本分光社製、２５４ｎｍ、
移動層：テトラヒドロフラン、
温度：室温、
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、
標準ポリスチレンとの比較による分子量計算：ＪＡＳＣＯ ８０７ＩＴインテグレータ、日本分光社製。
なお、カテキン類からの類推でアセチル化による分子量増加分を１．５倍とすると、分子量は１３３０を極大とする６７０〜１０，０００となる。カテキンガレート類だけから生成したものと仮定すると、二量体に相当するもの（テアフラビン）から２０量体に相当するものまで含まれることになる。
Furthermore, after acetylating the obtained oxidized polymer polyphenol and measuring the molecular weight by gel permeation chromatography, the peak top molecular weight was 2000 (number average molecular weight 1400, mass average molecular weight 3200), and the molecular weight distribution was wide. It was about 1000 to 15000.
The measurement conditions for gel permeation chromatography were as follows.
Column: TSK-gel G 4000H 6 , diameter 4.6 mm ×
Pump: TOSO DP8020, manufactured by Tosoh Corporation
Detector: JASCO UV970 made by JASCO Corporation, 254 nm,
Moving bed: tetrahydrofuran,
Temperature: room temperature,
Flow rate: 1.0 mL / min,
Molecular weight calculation by comparison with standard polystyrene: JASCO 807IT integrator, manufactured by JASCO Corporation.
If the molecular weight increase due to acetylation is 1.5 times by analogy with catechins, the molecular weight is 670 to 10,000 with 1330 as the maximum. Assuming that the catechin gallate is produced only from catechin gallates, it is included from those corresponding to dimers (theaflavins) to those corresponding to 20-mers.
［分析試験例６］
ＥＣ、ＥＣＧ、ＥＧＣ、ＥＧＣｇ、テアフラビン（ＴＦ）、３−ＴＦＧ、３’−ＴＦＧ、３，３’−ＴＦＧＧ、およびテアシネンシンＡ（ＴＳ−Ａ）の純品（市販品）をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：水＝１：９からなる混合溶媒に溶解させてサンプル溶液を調製し、各サンプル溶液に関してＡＧＨ阻害活性測定を行った。
本試験例および分析試験例７におけるＡＧＨ阻害性の評価は、ラット小腸ＡＧＨを固定化した担体を用いたｐｓｅｕｄｏ−ｉｎ ｖｉｖｏ法（Ｔ．Ｏｋｉ．ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２３，１０８４−１０８７（２０００））によって行い、酵素活性を５０％阻害する終濃度（ＩＣ５０値、単位：ｍＭ）で表している。その結果を表６に示す。
[Analysis Test Example 6]
DMSO (dimethyl sulfoxide) is a pure product (commercial product) of EC, ECG, EGC, EGCg, theaflavin (TF), 3-TFG, 3′-TFG, 3,3′-TFGG, and theacinensin A (TS-A). A sample solution was prepared by dissolving in a mixed solvent consisting of 1: water = 1: 9, and AGH inhibitory activity was measured for each sample solution.
The evaluation of AGH inhibition in this test example and analytical test example 7 was carried out using the pseudo-in vivo method (T. Oki. Et. Al., Biol. Pharm. Bull., 23) using a carrier on which rat small intestine AGH was immobilized. , 1084-1087 (2000)), and is expressed as a final concentration (IC 50 value, unit: mM) that inhibits enzyme activity by 50%. The results are shown in Table 6.
表６の結果より、マルターゼ阻害性が強いのは、ＥＣＧ、ＥＧＣＧ、３−ＴＦＧ、３，３，−ＴＦＧＧであり、スクラーゼ阻害性が強いのは、ＥＣＧ、ＥＧＣＧ、３，３，−ＴＦＧＧであることが判明した。すなわち、カテキンではエステル型、テアフラビンではガロイル基の多置換ＯＨ基を有する分子構造をもつものがＡＧＨ阻害性がより強いことが明らかとなった。 From the results of Table 6, the strong maltase inhibitory properties, ECG, EGCG, 3-TFG , 3,3, a -TFGG, the sucrase inhibitory is strong, ECG, EGCG, 3,3, in -TFGG It turned out to be. That is, it has been clarified that those having a molecular structure having an ester type for catechin and a polysubstituted OH group of galloyl group for theaflavin are stronger in AGH inhibition.
［分析試験例７］
混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間、含水率５質量％）２０ｇを１００℃の熱水１０００ｍＬで１０分間抽出し、遠心分離して得られる上澄み液を凍結乾燥したものを試料としてＡＧＨ阻害性を調べた。
試料をＤＭＳＯ：水＝１：９の混合溶媒に溶解させてサンプル溶液を調製し、このサンプル溶液に関して上記ｐｓｅｕｄｏ−ｉｎ ｖｉｖｏ法によりＡＧＨ阻害性を測定した。またこのサンプル溶液に含まれるカテキン類（ＥＣ、ＥＣＧ、ＥＧＣ、ＥＧＣｇ）およびテアフラビン類（ＴＦ、３−ＴＦＧ、３’−ＴＦＧ、３，３’−ＴＦＧＧ）の含有量を測定した。そして前記分析試験例６で測定したＩＣ５０値に基づいて、混合発酵茶葉によって奏されるＡＧＨ阻害性を１００％としたときの、各成分によって奏されるＡＧＨ阻害性の割合（活性寄与率、単位：％）を求めた。マルターゼ阻害性の結果を表７に示し、スクラーゼ阻害性の結果を表８に示す。
[Analysis Test Example 7]
20 g of mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
A sample solution was dissolved in a mixed solvent of DMSO: water = 1: 9 to prepare a sample solution, and the AGH inhibitory property was measured on the sample solution by the pseudo-in vivo method. Further, the contents of catechins (EC, ECG, EGC, EGCg) and theaflavins (TF, 3-TFG, 3′-TFG, 3,3′-TFGG) contained in this sample solution were measured. Then, based on the IC 50 value measured in the analytical test example 6, the ratio of AGH inhibitory activity (activity contribution rate, Unit:%). The results of maltase inhibition are shown in Table 7, and the results of sucrase inhibition are shown in Table 8.
［実験例２］
混合発酵茶葉の熱水抽出物（凍結乾燥品）の耐糖能に及ぼす影響を調べるために動物実験を行った。
混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）、番茶、ビワ葉を乾燥させ粉砕したビワ葉、およびビワ葉を混合せず茶の葉だけを２０分間揉捻して得た単独発酵茶葉を試料茶葉として用意した。なお上記番茶は、混合発酵茶葉の原料として使用したのと同じ茶の葉を用い、通常の緑茶の製造法に従って製造した番茶（茶の葉を発酵させずに製造した荒茶）である。
それぞれの試料茶葉（含水率５質量％）２０ｇを１００℃の熱水１，０００ｍｌで１０分間抽出した後、ろ過した。ろ液を凍結乾燥した粉末状の抽出物を得た。
コレステロールを含まないＡＩＮ−７６組成を基本とした食餌に、上記で調製した各熱水抽出物を含有率１質量％となるように添加した飼料（４種）を、それぞれ４週齢雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットに自由摂食させた。
また、コントロールとして、食餌に熱水抽出物を添加しないコントロール食を、同様のラットに自由摂取させた。
ラットは、室温２２±１℃、湿度５５±５％、８：００〜２０：００点灯のライトサイクルの動物飼育室で飼育した。４週間後、６時間絶食した後、１ｇ／ｋｇ体重のマルトースを経口投与した。投与後、０、１０、２０、３０および６０分後にそれぞれ尾静脈より採血して、血糖試験測定メディセーフチップ（テルモ社製）を用いて血糖値を測定した。
その結果を図１０に示す。
[Experiment 2]
An animal experiment was conducted to examine the effect of hot water extract (freeze-dried product) of mixed fermented tea leaves on glucose tolerance.
Mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
20 g of each sample tea leaf (
Four weeks old male Sprague were prepared by adding each of the hot water extracts prepared above to a diet based on the AIN-76 composition containing no cholesterol so that the content was 1% by mass (4 species). -Dawley (SD) rats were fed ad libitum.
In addition, as a control, the same rats were allowed to freely ingest a control diet in which no hot water extract was added to the diet.
Rats were housed in an animal breeding room with a light cycle of room temperature 22 ± 1 ° C., humidity 55 ± 5%, and 8:00:00 to 20:00 lighting. After 4 weeks, fasted for 6 hours, 1 g / kg body weight of maltose was orally administered. After administration, blood was collected from the tail vein at 0, 10, 20, 30, and 60 minutes, respectively, and the blood glucose level was measured using a blood glucose test measurement Medisafe chip (manufactured by Terumo).
The result is shown in FIG.
図１０において、横軸はマルトース投与後の経過時間を示し、縦軸は血糖値の値を示している。なお血糖値の値は、マルトース投与時の血糖値を０ｍｇ／ｄｌとして表している。
この図に示されるように、混合発酵茶葉の熱水抽出物を摂取したラットの血糖値は、いずれの試料茶葉よりも低いレベルで推移している。
このことから、混合発酵茶葉の熱水抽出物の摂取により優れた血糖値上昇抑制効果が得られることわかる。またその効果は、ビワ葉のみを乾燥させたビワ葉や、茶の葉のみを発酵させた茶葉で得られる効果よりも優れており、茶の葉とビワ葉を混合、揉捻、発酵させることにより相乗効果が得られることがわかる。
In FIG. 10, the horizontal axis indicates the elapsed time after maltose administration, and the vertical axis indicates the blood glucose level. In addition, the value of a blood glucose level represents the blood glucose level at the time of maltose administration as 0 mg / dl.
As shown in this figure, the blood sugar level of the rat ingesting the hot water extract of the mixed fermented tea leaves is changing at a level lower than that of any sample tea leaves.
From this, it is understood that an excellent effect of suppressing the increase in blood sugar level is obtained by ingesting the hot water extract of mixed fermented tea leaves. In addition, its effect is superior to the effect obtained with loquat leaves dried only loquat leaves and tea leaves fermented with tea leaves only. By mixing, twisting and fermenting tea leaves and loquat leaves, It turns out that a synergistic effect is acquired.
［実験例３］
混合発酵茶葉の摂取による血糖値に及ぼす影響を調べるために動物実験を行った。
混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間、含水率５質量％）、をフードプロセッサを用いて、６０〜１００メッシュの大きさの粉末状態になるまで、粉砕加工して粉末状混合発酵茶葉を得た。
ラットは、１ヶ月齢の２型糖尿病を自然発症する雄性のＯｔｓｕｋａ Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｆａｔｔｙ ラット（以下ＯＬＥＴＦラットという）と、その対象モデル動物で糖尿病を発症しない雄性のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｏｔｓｕｋａ ラット（以下ＬＥＴＯラットという）とを用いた。ラットは、室温２２±１℃、湿度５５±５％、８：００〜２０：００点灯のライトサイクルの動物飼育室で飼育した。
最初の３ヶ月間はＬＥＴＯおよびＯＬＥＴＦラットにＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母工業（株）製）を与えて予備飼育を行った。ＯＬＥＴＦラットは通常５ヶ月齢から８ヶ月齢までに２型糖尿病を発症することから、発症の可能性のある１ヶ月前の４ヶ月齢からＬＥＴＯラットと共に試験食の摂食を開始した。
すなわち、４ヶ月齢の時に６時間絶食（９：００〜１５：００）後、尾静脈より採血して血糖値を測定し、体重と血糖値が等しくなるように１群６匹ずつ群分けし、以下の試験食を５ヶ月間自由摂食させた。
試験食は、ＡＩＮ−７６に基づいた純化食をコントロール食とし、ＬＥＴＯラット−コントロール群とＯＬＥＴＦラット−コントロール群に摂食させた。コントロール食の組成（ｇ／ｋｇ）は、カゼイン２００、サラダ油１００、ミネラル混合（ＡＩＮ−７６−ＭＸ）３５、ビタミン混合（ＡＩＮ−７６−ＶＸ）１０、セルロース５０、重酒石酸コリン２、ＤＬ−メチオニン３、コーンスターチ１５０およびショ糖４５０とした。
ＯＬＥＴＦラット−混合発酵茶葉添加群には、上記コントロール食に粉末状混合発酵茶葉を飼料総質量の５％添加し、その添加量分のショ糖量を減じた。
いずれの群も、飼育期間中、摂食量は毎日、体重および摂水量は１日おきに測定した。
[Experiment 3]
An animal experiment was conducted to investigate the effect of mixed fermented tea leaves on blood glucose levels.
Mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
The rats include male Otsuka Long-Evans Tokyo Fatty rats (hereinafter referred to as OLETF rats) that spontaneously develop
During the first 3 months, MF chow (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) was given to LETO and OLETF rats for preliminary breeding. Since OLETF rats usually develop
That is, after a 6-hour fast (9: 0 to 15:00) at the age of 4 months, blood was collected from the tail vein and blood glucose levels were measured. Each group was divided into 6 animals so that the body weight and blood glucose levels were equal. The following test meals were fed freely for 5 months.
As the test meal, a purified meal based on AIN-76 was used as a control meal and fed to the LETO rat-control group and the OLETF rat-control group. The composition of the control food (g / kg) is:
In the OLETF rat-mixed fermented tea leaf addition group, 5% of the total feed mass of powdered mixed fermented tea leaf was added to the control food, and the amount of sucrose was reduced by the added amount.
In each group, during the breeding period, food intake was measured every day, and body weight and water intake were measured every other day.
試験食投与開始から１、２、３、４および５ヶ月後に、血糖試験測定メディセーフチップ（テルモ社製）を用い、６時間絶食後尾静脈より採血して血糖値を測定した。試験食を摂取した５ヶ月間のラット血糖値の変化を図１１に示す。
図１１において、横軸は試験食摂食後の経過時間（単位：月）を示し、縦軸は血糖値の値を示している。
この図に示されるように、コントロール食を摂取した糖尿病を発症しないＬＥＴＯラットの血糖値は、飼育期間を通じて低値であった。一方、コントロール食を摂取した糖尿病を発症するＯＬＥＴＦラットの血糖値は、経時的に上昇し、糖尿病を発症したとみなされた。
これに対して、糖尿病を発症するＯＬＥＴＦラットに混合発酵茶葉の粉末を添加した飼料を摂取させた群では、時間が長期間経過しても血糖値は上昇せず糖尿病を発症しないＬＥＴＯラットと同程度の低レベルであった。このことから混合発酵茶葉の粉末は優れた血糖上昇抑制効果を有することが明らかとなった。
1, 2, 3, 4 and 5 months after the start of the test meal administration, blood glucose was measured using a Medisafe chip (manufactured by Terumo) and blood was collected from the tail vein after 6 hours of fasting. FIG. 11 shows the change in blood glucose level in the rat for 5 months after taking the test meal.
In FIG. 11, the horizontal axis indicates the elapsed time (unit: month) after eating the test meal, and the vertical axis indicates the blood glucose level.
As shown in this figure, the blood glucose level of LETO rats that did not develop diabetes who took the control diet was low throughout the breeding period. On the other hand, the blood glucose level of OLETF rats that developed diabetes that took the control diet increased over time, and was considered to have developed diabetes.
On the other hand, in a group in which a diet supplemented with powder of mixed fermented tea leaves was ingested in OLETF rats that develop diabetes, blood glucose levels did not increase over time and did not develop diabetes. The level was low. From this, it became clear that the powder of mixed fermented tea leaves has an excellent blood glucose rise inhibitory effect.
［実験例４］
混合発酵茶葉の熱水抽出物（凍結乾燥品）摂取による血糖値に及ぼす影響を調べるために動物実験を行った。
混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間、含水率５質量％）２０ｇを１００℃の熱水１０００ｍＬで１０分間抽出し、ろ過して得られるろ液を凍結乾燥して粉末状の混合発酵茶葉抽出物を得た。
比較例として、通常の緑茶の製造法に従って製造した番茶（茶の葉を発酵させずに製造した荒茶）を同様の条件で抽出、ろ過、乾燥して粉末状の番茶抽出物を得た。また同じ含水率となるように乾燥させたビワ葉を同様の条件で抽出、ろ過、乾燥して粉末状のビワ葉抽出物を得た。
ラットは上記実験例３と同条件のものを用い、４ヶ月齢までの飼育条件も同じとした。
４ヶ月齢の時に６時間絶食（９：００〜１５：００）後、尾静脈より採血して血糖値を測定し、体重と血糖値が等しくなるように１群６匹ずつに群分けし、以下の試験食を５ヶ月間自由摂食させた。
ＬＥＴＯラットとＯＬＥＴＦラットのコントロール食群には、実験例３と同じコントロール食を摂食させた。
ＯＬＥＴＦラット−混合発酵茶葉添加群には、上記コントロール食に粉末状の混合発酵茶葉抽出物を飼料総質量の５％添加し、その添加量分のショ糖量を減じた。
ＯＬＥＴＦラット−番茶添加群には、上記コントロール食に粉末状の番茶抽出物を飼料総質量の５％添加し、その添加量分のショ糖量を減じた。
ＯＬＥＴＦラット−ビワ葉添加群には、上記コントロール食に粉末状のビワ葉抽出物を飼料総質量の５％添加し、その添加量分のショ糖量を減じた。
飼育期間中、摂食量は毎日、体重および摂水量は１日おきに測定した。
[Experimental Example 4]
An animal experiment was conducted to investigate the effect of hot water extract (freeze-dried product) of mixed fermented tea leaves on blood glucose levels.
20 g of mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
As a comparative example, bancha (produced without fermenting tea leaves) produced according to a normal method for producing green tea was extracted, filtered and dried under the same conditions to obtain a powdery bancha extract. In addition, loquat leaves dried to have the same water content were extracted, filtered and dried under the same conditions to obtain powdered loquat leaf extract.
Rats were used under the same conditions as in Experimental Example 3 above, and the breeding conditions up to 4 months of age were the same.
After being fasted for 6 hours at the age of 4 months (9: 00-15: 00), blood was collected from the tail vein to measure blood sugar levels, and divided into groups of 6 animals so that the body weight and blood sugar levels were equal, The following test meals were fed freely for 5 months.
The control diet group of LETO rats and OLETF rats was fed the same control diet as in Experimental Example 3.
In the OLETF rat-mixed fermented tea leaf addition group, 5% of the total feed mass of the powdered mixed fermented tea leaf extract was added to the control food, and the sucrose amount corresponding to the added amount was reduced.
In the OLETF rat-bancha addition group, the powdered bancha extract was added to the control diet at 5% of the total feed mass, and the amount of sucrose was reduced by the added amount.
In the OLETF rat-loquat leaf addition group, powdered loquat leaf extract was added to the control diet at 5% of the total feed mass, and the sucrose amount corresponding to the added amount was reduced.
During the breeding period, food intake was measured every day, and body weight and water intake were measured every other day.
試験食投与開始から１、２、３、４および５ヶ月後に、実験例３と同様にして血糖値を測定した。試験食を摂取した５ヶ月間のラット血糖値の変化を図１２に示す。
図１２における縦軸と横軸は図１１と同様である。この図に示されるように、コントロール食を摂取した糖尿病を発症しないＬＥＴＯラットの血糖値は、飼育期間を通じて低値であった。一方、コントロール食を摂取した糖尿病を発症するＯＬＥＴＦラットの血糖値は、経時的に上昇し、糖尿病を発症したとみなされた。
これに対して、２型糖尿病を発症するＯＬＥＴＦラットに混合発酵茶葉の熱水抽出物（凍結乾燥品）を添加した飼料を摂取させた群では、時間が長期間経過しても血糖値は上昇せず糖尿病を発症しないＬＥＴＯラットと同程度の低レベルであった。このことから混合発酵茶葉の熱水抽出物は優れた血糖上昇抑制効果を有することが明らかとなった。
Blood glucose levels were measured in the same manner as in Experimental Example 3 after 1, 2, 3, 4 and 5 months from the start of test meal administration. FIG. 12 shows the change in the blood glucose level of the rat during the 5 months after taking the test meal.
The vertical and horizontal axes in FIG. 12 are the same as those in FIG. As shown in this figure, the blood glucose level of LETO rats that did not develop diabetes who took the control diet was low throughout the breeding period. On the other hand, the blood glucose level of OLETF rats that developed diabetes that took the control diet increased over time, and was considered to have developed diabetes.
On the other hand, in the group in which OLETF rats that develop
［実験例５］
発酵茶葉の安全性を確認するために動物実験を行った。
すなわち、混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）、を、フードプロセッサを用いて６０〜１００メッシュの大きさの粉末状態になるまで粉砕加工して得られた粉末状混合発酵茶葉を、４週齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄ラットに１日当たり５０００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で経口投与した。温度２２±１℃、湿度５５±５％、飼料および水自由摂食の条件下で４週間飼育したところ、死亡は認められず、異常な体重変化はみられず、飼育終了後の剖検においても臓器の異常は観察されなかった。
従って、ラットに対する発酵茶の致死量（ＬＤ５０）は５０００ｍｇ／ｋｇ体重より多いと推定され、安全性はかなり高いものと判断された。
[Experimental Example 5]
Animal experiments were conducted to confirm the safety of fermented tea leaves.
That is, mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
Therefore, the lethal dose (LD 50 ) of fermented tea to rats was estimated to be more than 5000 mg / kg body weight, and the safety was judged to be quite high.
［実験例６］
（混合発酵茶葉の製造−手で揉む方法）
茶の葉にビワ葉を投入し、手で揉む方法で揉捻した。茶の葉とビワ葉の配合割合は茶の葉：ビワ茶の質量比が９０：１０（ビワ投入割合１０％）と７５：２５（ビワ投入割合２５％）の２通りとした。揉み込みの時間（手揉み時間）は２５分と５０分の２通りとした。
この後、０時間、１時間、２時間、４時間の４通りの発酵工程を経て１６種類の混合発酵茶葉を得た。なお、発酵工程０時間のものは揉み込み終了直後に得られる混合発酵茶葉である。
得られた混合発酵茶葉について実験例１と同様にして１００℃の熱水で１０分間抽出した抽出液（混合発酵茶葉の使用量；２．０ｍｇ／ｍｌ）を得、該抽出液について実施例１と同様にしてＡＧＨ阻害性（マルターゼ阻害性およびスクラーゼ阻害性）を測定し、また下記の方法でＤＰＰＨ（１，１−ジピクリル−２−フェニルヒドラジル）消去活性を測定した。それぞれの結果を表９、１０に示す。なお、ＤＰＰＨ消去活性の測定値が大きいほど抗酸化作用が高いことを示す。また実験例１と同様にして官能審査を行った。結果を表１１に示す。
[Experimental Example 6]
(Production of mixed fermented tea leaves-hand brewing method)
The loquat leaves were put into the tea leaves and twisted by the method of squeezing them by hand. The blending ratio of tea leaves and loquat leaves was set to two ratios: 90:10 (10% loquat input ratio) and 75:25 (25% loquat input ratio). The time for squeezing (hand squeezing time) was 25 minutes and 50 minutes.
Thereafter, 16 kinds of mixed fermented tea leaves were obtained through four fermentation processes of 0 hour, 1 hour, 2 hours and 4 hours. In addition, the thing of the
The obtained mixed fermented tea leaves were extracted in the same manner as in Experimental Example 1 with hot water at 100 ° C. for 10 minutes to obtain an extract (amount of mixed fermented tea leaves used: 2.0 mg / ml). In the same manner as above, AGH inhibition (maltase inhibition and sucrase inhibition) was measured, and DPPH (1,1-dipicryl-2-phenylhydrazyl) scavenging activity was measured by the following method. The respective results are shown in Tables 9 and 10. In addition, it shows that an antioxidant effect is so high that the measured value of DPPH elimination activity is large. Further, sensory examination was conducted in the same manner as in Experimental Example 1. The results are shown in Table 11.
（ＤＰＰＨ消去活性の測定方法）
ＤＰＰＨ消去活性（単位：μｍｏｌ−Ｔｒｏｌｏｘ／ｍｇ）の測定は以下の方法で行った（以下、同様。）
混合発酵茶葉を粉砕したものを８０％エタノール溶液に溶かし、同じく８０％エタノール溶液を用いて０．５ｍｇ／ｍｌに希釈した。４００μＭ ＤＰＰＨ１２ｍｌと、２００ｍＭ ＭＥＳ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６．０）１２ｍｌと、２０％エタノール１２ｍｌとの混液を作り、エッペンドルフマルチピペットを用いて試験管（ａ）〜（ｆ）に該混液をそれぞれ０．９ｍｌずつ分注した後、試験管（ａ）〜（ｆ）のそれぞれに８０％エタノールを（３００−ｘ）μｌ加えた（ｘは分析試料の添加量であり、具体的に試験管（ａ）〜（ｆ）におけるｘは、順に０、３０、６０、１２０、１８０、２４０である）。さらに試験管（ａ）〜（ｆ）にそれぞれ分析試料（ｘ）μｌを加えて撹拌し、分析試料を添加してから２０分後に波長５２０ｎｍでの吸光度を測定した。
具体的には、時間の測定を開始してから３０秒後に試験管（ｂ）に分析試料を３０μｌ加え、６０秒後に試験管（ｃ）に分析試料を６０μｌ加え、１２０秒後に試験管（ｄ）に１２０μｌ加え、１８０秒後に試験管（ｅ）に１８０μｌを加え、２４０秒後に試験管（ｆ）に２４０μｌ加えた。そして時間の測定を開始してから２０分後に試験管（ａ）の吸光度を測定し、２０分３０秒後に試験管（ｂ）の吸光度を測定し、２１分後に試験管（ｃ）の吸光度を測定し、というように３０秒おきに吸光度の測定を行った。
一方、標準試料としてＴｒｏｌｏｘを用いて検量線を作成した。検量線の横軸は試料添加量（単位：μｍｏｌ）、縦軸は５２０ｎｍでの吸光度である。
分析試料についての測定値を、横軸を試料添加量（単位：μｌ）、縦軸を５２０ｎｍでの吸光度としてプロットし、直線的な吸光度減少が続く範囲内にて添加量（ｘ’μｌ）に対する吸光度（△Ａ５２０）の値を求める。次に検量線において同じ（△Ａ５２０）が得られるときのＴｒｏｌｏｘ添加量（単位：μｍｏｌ）を求める。こうして得られるＴｒｏｌｏｘ相当量（単位：μｍｏｌ）から、混合発酵茶葉１ｍｇ当たりの消去活性の値（単位：μｍｏｌ−Ｔｒｏｌｏｘ／ｍｇ）を求める。
(Measurement method of DPPH elimination activity)
DPPH scavenging activity (unit: μmol-Trolox / mg) was measured by the following method (the same applies hereinafter).
The pulverized mixed fermented tea leaves were dissolved in 80% ethanol solution and diluted to 0.5 mg / ml using the same 80% ethanol solution. Make 12 ml of 400 μM DPPH, 12 ml of 200 mM MES buffer (pH 6.0), and 12 ml of 20% ethanol, and use the Eppendorf multipipette to dispense 0.9 ml of each mixture into test tubes (a) to (f). After the injection, (300-x) μl of 80% ethanol was added to each of the test tubes (a) to (f) (x is the amount of analysis sample added, specifically, the test tubes (a) to (f) X in 0) is 0, 30, 60, 120, 180, 240 in this order). Furthermore, the analytical sample (x) μl was added to each of the test tubes (a) to (f) and stirred, and the absorbance at a wavelength of 520 nm was measured 20 minutes after the analytical sample was added.
Specifically, 30 μl of analysis sample is added to the test tube (b) 30 seconds after the start of time measurement, 60 μl of analysis sample is added to the test tube (c) 60 seconds later, and the test tube (d ), 120 μl was added to the test tube (e) after 180 seconds, and 240 μl was added to the test tube (f) after 240 seconds. Then, the absorbance of the test tube (a) is measured 20 minutes after the start of time measurement, the absorbance of the test tube (b) is measured 20 minutes and 30 seconds later, and the absorbance of the test tube (c) is measured 21 minutes later. The absorbance was measured every 30 seconds.
On the other hand, a calibration curve was created using Trolox as a standard sample. The horizontal axis of the calibration curve is the amount of sample added (unit: μmol), and the vertical axis is the absorbance at 520 nm.
The measured value for the analytical sample is plotted with the sample addition amount (unit: μl) on the horizontal axis and the absorbance at 520 nm on the vertical axis, with respect to the addition amount (x ′ μl) within a range where linear absorbance decrease continues. The absorbance (ΔA520) value is determined. Next, the Trolox addition amount (unit: μmol) when the same (ΔA520) is obtained in the calibration curve is obtained. From the Trolox equivalent amount thus obtained (unit: μmol), the value of the erasing activity per 1 mg of mixed fermented tea leaves (unit: μmol-Trolox / mg) is determined.
［実験例７］
（混合発酵茶葉の製造−すりつぶす方法）
乳鉢に茶の葉とビワ葉を入れてすりつぶした。茶の葉とビワ葉の配合割合は茶の葉：ビワ茶の質量比が９０：１０（ビワ投入割合１０％）と７５：２５（ビワ投入割合２５％）の２通りとした。すりつぶし時間は２０分と４０分の２通りとした。
この後、０時間、１時間、２時間、４時間の４通りの発酵工程を経て１６種類の混合発酵茶葉を得た。なお、発酵工程０時間のものはすりつぶし直後に得られる混合発酵茶葉である。
得られた混合発酵茶葉について実験例１と同様にしてＡＧＨ阻害性を測定し、またＤＰＰＨ消去活性を測定した。それぞれの結果を表１２、１３に示す。また実験例１と同様にして官能審査を行った。その結果を表１４に示す。
[Experimental Example 7]
(Production of mixed fermented tea leaves-grinding method)
Put tea leaves and loquat leaves in a mortar and grind them. The blending ratio of tea leaves and loquat leaves was set to two ratios: 90:10 (10% loquat input ratio) and 75:25 (25% loquat input ratio). The grinding time was set to two types of 20 minutes and 40 minutes.
Thereafter, 16 kinds of mixed fermented tea leaves were obtained through four fermentation processes of 0 hour, 1 hour, 2 hours and 4 hours. In addition, the thing of
About the obtained mixed fermented tea leaves, AGH inhibitory activity was measured in the same manner as in Experimental Example 1, and DPPH elimination activity was also measured. The respective results are shown in Tables 12 and 13. Further, sensory examination was conducted in the same manner as in Experimental Example 1. The results are shown in Table 14.
［実験例８］
（混合発酵茶葉の製造−粉砕撹拌する方法）
ミキサー（製品名：ミルアンドミキサー、テスコム社製）に茶の葉とビワ葉と水を入れて粉砕撹拌した。茶の葉とビワ葉の配合割合は茶の葉：ビワ茶の質量比が９０：１０（ビワ投入割合１０％）と７５：２５（ビワ投入割合２５％）の２通りとした。水の添加量は、茶の葉とビワ葉の合計１００質量部に対して、１００質量部とした。粉砕撹拌時間は１０分と２０分の２通りとした。
この後、１時間、４時間、８時間、１２時間、１６時間の５通りの発酵工程を経て２０種類の混合発酵茶葉を得た。
得られた混合発酵茶葉について実験例１と同様にしてＡＧＨ阻害性を測定し、またＤＰＰＨ消去活性を測定した。それぞれの結果を表１５、１６に示す。また実験例１と同様にして官能審査を行った。その結果を表１７に示す。
[Experimental Example 8]
(Production of mixed fermented tea leaves-crushing and stirring method)
Tea leaves, loquat leaves and water were put into a mixer (product name: Mill and Mixer, manufactured by Tescom) and pulverized and stirred. The blending ratio of tea leaves and loquat leaves was set to two ratios: 90:10 (10% loquat input ratio) and 75:25 (25% loquat input ratio). The amount of water added was 100 parts by mass with respect to 100 parts by mass in total of tea leaves and loquat leaves. The pulverization stirring time was set to two types of 10 minutes and 20 minutes.
Thereafter, 20 types of mixed fermented tea leaves were obtained through five fermentation processes of 1 hour, 4 hours, 8 hours, 12 hours, and 16 hours.
About the obtained mixed fermented tea leaves, AGH inhibitory activity was measured in the same manner as in Experimental Example 1, and DPPH elimination activity was also measured. The respective results are shown in Tables 15 and 16. Further, sensory examination was conducted in the same manner as in Experimental Example 1. The results are shown in Table 17.
［分析試験例８］
（香気成分の分析）
ビワ葉のみを乾燥させたもの、ビワ葉のみを発酵させたもの、市販されている紅茶（ダージリン紅茶およびアッサム紅茶）、長崎県総合農林試験場東彼杵茶業支場で栽培された茶の葉を用いて発酵させた紅茶、同じ茶の葉を用い発酵させずに製造した緑茶（荒茶）、および混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間）のそれぞれをサンプルとして、香気成分の定量分析を行った。
一般に茶系の香気成分の前処理は、カラム濃縮法等で行われている。ここでは、簡易・迅速な試料の抽出、濃縮、クロマトグラフ導入法として固相マイクロ抽出法で行った。定量は、測定対象である試料に内標準としてシクロヘキサノールを添加しておき、各香気成分のピーク面積を内標準に対する相対ピーク面積比として求めた。
[Analysis Test Example 8]
(Aroma component analysis)
Using only dried loquat leaves, fermented loquat leaves only, commercially available black tea (Darjeeling black tea and Assam black tea), tea leaves grown at Nagasaki Prefectural Agricultural and Forestry Experiment Station Higashisonogi Tea Business Branch Fermented black tea, green tea produced without fermentation using the same tea leaves (rough tea), and mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
In general, pretreatment of tea-based aroma components is performed by a column concentration method or the like. Here, solid-phase microextraction was used as a simple and rapid sample extraction, concentration, and chromatographic introduction method. For quantification, cyclohexanol was added as an internal standard to the sample to be measured, and the peak area of each aroma component was determined as a relative peak area ratio to the internal standard.
具体的には、以下の方法で行った。試料の調整は２００ｍＬの三角フラスコに、サンプルを２０ｇ、３０％塩化ナトリウム水溶液を１ｍＬ、内標準として１％シクロヘキサノールを５０μＬ加えて密栓した後、８０℃で５分間加熱して三角フラスコ内を安定させた後、捕集管を２０分間挿入して、発生した香気成分をトラップした。香気成分をトラップした捕集管を２５０℃に加熱したガスクロマトグラフの注入口に挿入し、香気成分をガスクロマトグラフのカラムに３分間導入して分析を行った。捕集管はＳＵＰＥＬＣＯ社製のポリジメチルシクロヘキサン／ｃａｒｂｏｘｅｎ／ジビニルベンゼンを用いた。ガスクロマトグラフの分析条件については、カラムはＲｅａｐｅｃｔ社製のｓｔａｂｉｌ−ＷＡＸ（ポリエチレングリコール系）６０ｍ×０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μを使用し、カラム温度は７０℃に３分間保持後、２５０℃まで１０℃／分で昇温した。注入口温度は２５０℃、ヘリウム圧力は１２０ｋＰａとした。成分同定のためのガスクロマトグラフ質量分析は、Ｉ／Ｆ温度２５０℃、イオン化電圧７０ｅＶ、イオン化電流６０μＡで行った。１−ヘキサノール、トランス−２−ヘキセナール、酢酸３−ヘキセン−１−オール、３−ヘキセン−１−オール、リナロール、ベンツアルデヒド、サリチル酸メチル、ゲラニオール、ネロリドールの９成分について、内標準に対する相対ピーク面積比を測定した。その結果を表１８に示す。 Specifically, the following method was used. The sample was prepared in a 200 mL Erlenmeyer flask, 20 g of the sample, 1 mL of 30% sodium chloride aqueous solution and 50 μL of 1% cyclohexanol as the internal standard were added and sealed, then heated at 80 ° C. for 5 minutes to stabilize the Erlenmeyer flask. Then, the collection tube was inserted for 20 minutes to trap the generated aroma component. The collection tube trapping the aroma component was inserted into the inlet of the gas chromatograph heated to 250 ° C., and the aroma component was introduced into the gas chromatograph column for 3 minutes for analysis. The collection tube used was polydimethylcyclohexane / carboxen / divinylbenzene manufactured by SUPELCO. As for the analysis conditions of the gas chromatograph, the column uses a Stabil-WAX (polyethylene glycol system) 60 m × 0.25 mm and a film thickness of 0.25 μ manufactured by Reapect. The temperature was raised at 10 ° C./min. The inlet temperature was 250 ° C. and the helium pressure was 120 kPa. Gas chromatograph mass spectrometry for component identification was performed at an I / F temperature of 250 ° C., an ionization voltage of 70 eV, and an ionization current of 60 μA. Relative peak area with respect to internal standard for 9 components: 1-hexanol, trans-2-hexenal, 3-hexen-1-ol acetate, 3-hexen-1-ol, linalool, benzaldehyde, methyl salicylate, geraniol, and nerolidol The ratio was measured. The results are shown in Table 18.
表の結果より、混合発酵茶葉には表に挙げた９成分が全て含まれている。これらのうち、リナロール、ベンツアルデヒド、サリチル酸メチル、ゲラニオール、およびネロリドールは、試験場の茶の葉を発酵させた紅茶にも比較的多く含まれており、市販の紅茶２種にも含まれているが、緑茶および発酵したビワ葉における含有量は比較的少ない。また、トランス−２−ヘキセナール、酢酸３−ヘキセン−１−オール、および３−ヘキセン−１−オールは、発酵したビワ葉に特徴的に多く含まれている。１−ヘキサノール以外の８成分のピーク面積（内標準に対する相対面積の値）を１−ヘキサノールのピーク面積（内標準に対する相対面積の値）と比較すると、８成分全部の各ピーク面積が、１−ヘキサノールのピーク面積よりも大きいのは混合発酵茶葉のみである。
なお１−ヘキサノールは、混合発酵茶葉において、茶の葉とビワ葉の配合割合、揉捻時間、発酵時間などの製造条件を変えても必ず検出され、かつ表に記載の他の８成分よりも常に少なく検出される香気成分である。
From the results in the table, the mixed fermented tea leaves contain all 9 components listed in the table. Among these, linalool, benzaldehyde, methyl salicylate, geraniol, and nerolidol are also relatively abundant in black tea fermented with tea leaves at the test site, and are also included in two types of commercial black tea. However, the content in green tea and fermented loquat leaves is relatively low. Moreover, trans-2-hexenal, 3-hexen-1-ol acetate, and 3-hexen-1-ol are characteristically contained in fermented loquat leaves. Comparing the peak area of 8 components other than 1-hexanol (value of relative area with respect to internal standard) with the peak area of 1-hexanol (value of relative area with respect to internal standard), each peak area of all 8 components is Only the mixed fermented tea leaves are larger than the peak area of hexanol.
In addition, 1-hexanol is always detected in mixed fermented tea leaves even if the production conditions such as blending ratio of tea leaves and loquat leaves, twisting time, fermentation time, etc. are changed, and always more than the other 8 ingredients listed in the table. It is an aroma component detected in a small amount.
［実験例９］
２型糖尿病を自然発症するＫＫ−Ａｙマウスに混合発酵茶葉の熱水抽出物（凍結乾燥品）、テアシネンシンを多く含むフラクション（以下、ＴＳフラクションという。）、およびテアフラビンを多く含むフラクション（以下、ＴＦフラクションという。）をそれぞれ摂取させて、血糖値に及ぼす影響を調べた。
混合発酵茶葉の熱水抽出物は、混合発酵茶葉（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間、含水率５質量％）２０ｇを１００℃の熱水１，０００ｍｌで１０分間抽出した後、ろ過し、ろ液を凍結乾燥して粉末状にしたものを用いた。
ＴＳフラクションとしては、前記分析試験例２で得られるＦｒ．６を凍結乾燥して粉末状にしたものを用いた。
ＴＦフラクションとしては、前記分析試験例２で得られるＦｒ．７を凍結乾燥して粉末状にしたものを用いた。
マウスは、室温２２±１℃、湿度５５±５％、８：００〜２０：００点灯のライトサイクルの動物飼育室で飼育した。
５週齢のＫＫ−Ａｙマウスを用い、最初の２週間はＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母工業（株）製）を与えて予備飼育を行った。ＫＫ−Ａｙマウスは７〜８週齢頃に糖尿病を自然発症することから、発症する可能性のある７週齢から試験食の摂食を開始した。すなわち、７週齢のときに６時間絶食（９：００〜１５：００）後、尾静脈より採血して血糖値を測定し、体重と血糖値が等しくなるように１群７匹ずつに群分けし、以下の試験食を６週間自由摂食させた
[Experimental Example 9]
KK-A y mice that spontaneously develop
The hot water extract of mixed fermented tea leaves is obtained by mixing 20 g of mixed fermented tea leaves (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
As the TS fraction, the Fr. 6 was freeze-dried and powdered.
As the TF fraction, the Fr. 7 was freeze-dried and powdered.
Mice were raised in an animal breeding room with a light cycle of room temperature 22 ± 1 ° C., humidity 55 ± 5%, and 8:00:00 to 20:00 lighting.
A 5-week-old KK-A y mouse was used, and MF solid feed (produced by Oriental Yeast Co., Ltd.) was given for the first two weeks for preliminary breeding. Since KK-A y mice spontaneously develop diabetes around 7-8 weeks of age, feeding of the test meal was started at the age of 7 weeks, which is likely to develop. That is, after 6-hour fasting at 7 weeks of age (9:00 to 15:00), blood was collected from the tail vein and blood glucose level was measured. Separately, the following test meals were allowed to eat freely for 6 weeks
試験食は以下の７通りである。
・コントロール食：ＡＩＮ−７６組成に基づいた純化食をコントロール食とした。コントロール食の質量組成（ｇ／ｋｇ）は、カゼイン２００ｇ／ｋｇ、コーン油１００ｇ／ｋｇ、ミネラル混合物（ＡＩＮ−７６−ＭＸ）３５ｇ／ｋｇ、ビタミン混合物（ＡＩＮ−７６−ＶＸ）１０ｇ／ｋｇ、セルロース５０ｇ／ｋｇ、重酒石酸コリン２ｇ／ｋｇ、ＤＬ−メチオニン３ｇ／ｋｇ、コーンスターチ１５０ｇ／ｋｇおよびショ糖４５０ｇ／ｋｇとした。
・抽出物添加食：前記コントロール食１００質量部に、上記粉末状の熱水抽出物（凍結乾燥品）を１質量部を添加し、その添加量分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
・ＴＳ添加食：上記熱水抽出物（凍結乾燥品）にはテアシネンシンが５．４質量％含まれることから、前記抽出物添加試験食中とテアシネンシン含有量が等しくなるように、コントロール食に前記ＴＳフラクションを添加し、その添加量分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
・ＴＳ２倍添加食：テアシネンシン含有量が前記抽出物添加試験食の２倍となるように、コントロール食に前記ＴＳフラクションを添加し、その添加量分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
・ＴＦ添加食：上記熱水抽出物（凍結乾燥品）にはテアフラビンが４．８質量％含まれることから、前記抽出物添加試験食中とテアフラビン含有量が等しくなるように、コントロール食に前記ＴＦフラクションを添加し、その添加量分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
・ＴＦ２倍添加食：テアフラビン含有量が前記抽出物添加試験食の２倍となるように、コントロール食に前記ＴＦフラクションを添加し、その添加量分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
・ＴＳ＋ＴＦ添加食：テアシネンシン含有量およびテアフラビン含有量が前記抽出物添加試験食とそれぞれ等しくなるように、コントロール食に前記ＴＳフラクションおよびＴＦフラクションを添加し、それらの添加量の合計分のショ糖を前記コントロール食から減じた。
The test meals are as follows.
Control food: A purified food based on the AIN-76 composition was used as a control food. The mass composition (g / kg) of the control food is 200 g / kg of casein, 100 g / kg of corn oil, 35 g / kg of the mineral mixture (AIN-76-MX), 10 g / kg of the vitamin mixture (AIN-76-VX), cellulose. 50 g / kg, choline bitartrate 2 g / kg, DL-methionine 3 g / kg, corn starch 150 g / kg and sucrose 450 g / kg.
Extract-added diet: 1 part by mass of the powdered hot water extract (lyophilized product) was added to 100 parts by mass of the control diet, and the amount of sucrose added was subtracted from the control diet.
-TS-added food: Since the hot water extract (freeze-dried product) contains 5.4% by mass of theacinensin, the above-mentioned extract-added test meal and the control food are adjusted so that the content of theacinensin is the same. TS fraction was added and the amount of sucrose added was reduced from the control diet.
-TS double-added food: The TS fraction was added to the control food so that the content of theasinensin was double that of the extract-added test food, and the amount of sucrose added was reduced from the control food.
-TF-added food: Since the hot water extract (lyophilized product) contains 4.8% by mass of theaflavin, the above-described extract-added test meal has the same content of theaflavin as the control food. The TF fraction was added, and the amount of sucrose added was reduced from the control diet.
-TF double addition food: The TF fraction was added to the control food so that the theaflavin content was twice that of the extract-added test food, and the amount of sucrose added was reduced from the control food.
TS + TF-added diet: The TS fraction and TF fraction are added to the control diet so that the theasinensin content and theaflavin content are equal to the extract-added test diet, respectively. Reduced from the control diet.
飼育期間中、摂食量は毎日測定し、体重および摂水量は１日おきに測定した。
試験食摂食開始２、４および６週間後に、血糖試験測定メディセーフチップ（テルモ社製）を用い、６時間絶食後、尾静脈より採血して血糖値を測定した。試験食を摂取した６週間のマウスの血糖値の変化を図１３から図１６に示す。
図１３に示すように、コントロール食を摂取したマウスの血糖値は、経時的に上昇して６週間後には３００ｍｇ／ｄｌを超えた。また摂水量も同様に増加したことから、コントロール食を摂取したマウスは糖尿病を発症したとみなされる。一方、抽出物添加食を摂取したマウスの血糖値は、経時的に減少する傾向にあり、６週間後の値はコントロール食を摂取したマウスの約半分に低下した。
図１４に示すように、ＴＳ添加食を摂取したマウスの血糖値は６週間後に低下し、ＴＳ２倍添加食を摂取した場合はさらに効果的に低下した。
図１５に示すように、ＴＦ添加食を摂取したマウスの血糖値は６週間後に低下し、ＴＦ２倍添加食を摂取した場合は４週間後から低下した。
図１６に示すように、ＴＳ＋ＴＦ添加食を摂取したマウスの血糖値は、４週間以降に抽出物添加食を摂取したマウスとほぼ同じレベルになった。
以上の結果から、混合発酵茶葉の熱水抽出物の血糖上昇抑制作用は、主にテアシネンシンとテアフラビンにより発揮されていることが明らかとなった。
During the breeding period, food intake was measured every day, and body weight and water intake were measured every other day.
2, 4, and 6 weeks after the start of the test meal feeding, blood glucose test was performed using a Medisafe chip (manufactured by Terumo Corp.), fasted for 6 hours, blood was collected from the tail vein, and blood glucose level was measured. Changes in blood glucose levels of mice for 6 weeks after taking the test meal are shown in FIGS.
As shown in FIG. 13, the blood glucose level of the mice that took the control diet increased with time and exceeded 300 mg / dl after 6 weeks. Also, since the amount of water intake increased in the same manner, mice that received the control diet are considered to have developed diabetes. On the other hand, the blood glucose level of the mice that received the extract-added diet tended to decrease over time, and the value after 6 weeks decreased to about half that of the mice that received the control diet.
As shown in FIG. 14, the blood glucose level of the mice ingesting the TS-added food decreased after 6 weeks, and when the TS2-fold added food was ingested, the blood glucose level was further effectively reduced.
As shown in FIG. 15, the blood glucose level of the mice that received the TF-added diet decreased after 6 weeks, and when the TF double-added diet was consumed, the blood glucose level decreased after 4 weeks.
As shown in FIG. 16, the blood glucose level of the mice that received the TS + TF-added diet was almost the same level as that of the mice that received the extract-added diet after 4 weeks.
From the above results, it was clarified that the blood glucose rise inhibitory action of the hot water extract of mixed fermented tea leaves was mainly exerted by theacinensin and theaflavin.
［臨床試験例１］
混合発酵茶葉の抽出物を含む飲料の摂取が、成人の血糖値に及ぼす影響を検討した。なお、本試験は県立長崎シーボルト大学研究倫理委員会の承認を受け、ヘルシンキ宣言の精神を遵守して実施した。
被験者は、長崎県庁内での募集に応募した長崎県庁職員で、健康な者と同様の日常生活を営んでおり、医師からの服薬指導を受けておらず、非妊娠者であり医師が適当と判断した者で、本試験の内容について十分な説明を受け、本人の自由意志により本人が同意書を提出した２８名である。
試験飲料は、９０℃の熱水１００質量部に対して、混合発酵茶葉を焙煎したもの（茶の葉とビワ葉の配合割合９：１、揉捻時間２０分、発酵時間０時間、含水率１質量％）を０．８３質量部添加して４分間抽出した後、ろ過したろ液を２００ｍｌずつ紙パックに充填し密封したものを用いた。
試験飲料を被験者に、朝食または昼食時と夕食時に各１本の１日合計２本を３ヶ月間飲用させた。試験飲料摂取前、摂取開始１ヶ月後、２ヶ月後および３ヶ月後の、早朝空腹時に採血、体重測定、体脂肪率測定および血圧（収縮期血圧および拡張期血圧）測定を行った。なお、採血前日の夜９時以降の飲食を禁止した。試験期間３ヶ月中の食事については特別な制限を設けず、日常と変わらない生活をするよう指導した。
血液成分についての測定項目として、総タンパク質、Ａ／Ｇ比、総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、中性脂肪、遊離脂肪酸、尿酸、尿素窒素、クレアチニン、Ｎａ、Ｃｌ、Ｋ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−ＧＴＰ、リン脂質、Ｃａ、無機リン、コリンエステラーゼ、ＬＤＨ、ＡＬＰ、アルブミン、直接ビリルビン、間接ビリルビン、インスリン、血糖、ヘモグロビンＡ１ｃ、白血球数、赤血球数、血色素量、ヘマトクリット、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、血小板数を測定した。
[Clinical trial example 1]
We investigated the effects of ingestion of beverages containing extracts of mixed fermented tea leaves on blood glucose levels in adults. This study was approved by the Prefectural Nagasaki Siebold University Research Ethics Committee and was conducted in compliance with the spirit of the Declaration of Helsinki.
The subject is a Nagasaki prefectural government official who applied for recruitment within the Nagasaki prefectural office, and has a daily life similar to that of a healthy person. The 28 persons who were judged and received sufficient explanation about the contents of this study and submitted their consent form by their own free will.
The test beverage was prepared by roasting mixed fermented tea leaves against 100 parts by mass of hot water at 90 ° C. (tea leaf to loquat blending ratio 9: 1, twisting
The test drinks were allowed to be drunk for 3 months at breakfast or lunch and dinner, each with a total of 2 drinks per day. Blood intake, body weight measurement, body fat percentage measurement, and blood pressure (systolic blood pressure and diastolic blood pressure) were measured on an early morning fasting, 1 month, 2 months, and 3 months after ingestion of the test beverage. In addition, eating and drinking after 9:00 pm the day before blood collection was prohibited. There were no special restrictions on meals during the three-month test period, and guidance was given to live a life that was not different from everyday life.
As measurement items for blood components, total protein, A / G ratio, total cholesterol, HDL-cholesterol, neutral fat, free fatty acid, uric acid, urea nitrogen, creatinine, Na, Cl, K, GOT, GPT, γ-GTP Phospholipid, Ca, inorganic phosphorus, cholinesterase, LDH, ALP, albumin, direct bilirubin, indirect bilirubin, insulin, blood glucose, hemoglobin A1c, white blood cell count, red blood cell count, hemoglobin content, hematocrit, MCV, MCH, MCHC, platelet count It was measured.
試験飲料を摂取した３ヶ月間、２８名の平均値は、すべての測定項目において正常範囲内であった。
図１７、１８は、血糖値の測定結果を示すグラフであり、図１７は２８名全員の平均値、図１８は、試験飲料摂取開始前の血糖値（初期値）が１１０ｍｇ／ｄＬ以上のヒト（１０名）の平均値を初期値に対する変動率で表している。該変動率は、（測定値の平均値−初期値）／初期値×１００（単位：％）で算出される値であり、図中の「＊」は初期値に対して有意差があることを示す（以下、同様）。
図に示されるように、全員の平均値は試験期間中変動しなかったが、初期値が高いヒトでは摂取開始２ヶ月後および３ヶ月後に摂取前に比べて有意に低下した。
この結果から、混合発酵茶葉の抽出液を含有する飲料を摂取することにより、血糖値の値が高い傾向を有するヒトにおいて、その値を改善させる効果が得られることが明らかとなった。さらに、正常なヒトでは血糖値の測定値を低下させないことから、安全性が高い飲料であると評価される。
During the three months of taking the test beverage, the average value of 28 subjects was within the normal range in all measurement items.
17 and 18 are graphs showing blood glucose level measurement results. FIG. 17 is an average value of all 28 persons, and FIG. 18 is a human whose blood glucose level (initial value) before the start of test beverage intake is 110 mg / dL or more. The average value of (10 persons) is represented by the fluctuation rate with respect to the initial value. The fluctuation rate is a value calculated by (average value of measured values−initial value) / initial value × 100 (unit:%), and “*” in the figure is significantly different from the initial value. (Hereinafter the same).
As shown in the figure, the average value of all the members did not change during the test period, but in the human having a high initial value, it significantly decreased after 2 months and 3 months after the start of intake compared to before the intake.
From this result, it was clarified that by ingesting a beverage containing the extract of mixed fermented tea leaves, an effect of improving the value of the blood sugar level can be obtained in a human having a high blood sugar level. Furthermore, since normal humans do not lower the blood glucose level, it is evaluated as a highly safe beverage.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007023481A JP2007231009A (en) | 2006-02-02 | 2007-02-01 | Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006025839 | 2006-02-02 | ||
| JP2007023481A JP2007231009A (en) | 2006-02-02 | 2007-02-01 | Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2007231009A true JP2007231009A (en) | 2007-09-13 |
Family
ID=38551953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007023481A Pending JP2007231009A (en) | 2006-02-02 | 2007-02-01 | Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2007231009A (en) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007228964A (en) * | 2006-02-02 | 2007-09-13 | Nagasaki Prefecture | Fermented tea leaf, fermented tea leaf extract, and food and drink |
| JP2009221158A (en) * | 2008-03-17 | 2009-10-01 | Nagasaki Prefecture | Neutral fat-reducing agent and suppressor of body fat increase |
| JP2009268420A (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-19 | Kataoka & Co Ltd | Functional food composition |
| WO2010134595A1 (en) | 2009-05-21 | 2010-11-25 | サントリーホールディングス株式会社 | Anti-obesity agent comprising compound containing benzotropolone ring |
| JP2012135227A (en) * | 2010-12-24 | 2012-07-19 | Mitsui Norin Co Ltd | α-AMYLASE INHIBITOR |
| US8367718B2 (en) | 2008-08-29 | 2013-02-05 | Suntory Holdings Limited | Epigallocatechin gallate trimer and α-glucosidase inhibitor containing epigallocatechin gallate polymer |
| JP2014240431A (en) * | 2014-09-17 | 2014-12-25 | 富士フイルム株式会社 | Intestinal harmful bacteria reducing agent, and food or medicine containing the same |
| CN109879850A (en) * | 2019-02-26 | 2019-06-14 | 中国农业科学院茶叶研究所 | A method of preparing three kinds of polyester catechins monomers |
| CN111233810A (en) * | 2020-01-18 | 2020-06-05 | 安徽农业大学 | Preparation method and application of hydroxycinnamoyl ester type catechin |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003128571A (en) * | 2001-10-22 | 2003-05-08 | Matsuura Yakugyo Kk | Diabetic medicine and health food |
-
2007
- 2007-02-01 JP JP2007023481A patent/JP2007231009A/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003128571A (en) * | 2001-10-22 | 2003-05-08 | Matsuura Yakugyo Kk | Diabetic medicine and health food |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007228964A (en) * | 2006-02-02 | 2007-09-13 | Nagasaki Prefecture | Fermented tea leaf, fermented tea leaf extract, and food and drink |
| JP4701328B2 (en) * | 2006-02-02 | 2011-06-15 | 長崎県 | Fermented tea leaves and production method thereof, fermented tea leaf extract and food and drink |
| JP2009221158A (en) * | 2008-03-17 | 2009-10-01 | Nagasaki Prefecture | Neutral fat-reducing agent and suppressor of body fat increase |
| JP2009268420A (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-19 | Kataoka & Co Ltd | Functional food composition |
| US8367718B2 (en) | 2008-08-29 | 2013-02-05 | Suntory Holdings Limited | Epigallocatechin gallate trimer and α-glucosidase inhibitor containing epigallocatechin gallate polymer |
| WO2010134595A1 (en) | 2009-05-21 | 2010-11-25 | サントリーホールディングス株式会社 | Anti-obesity agent comprising compound containing benzotropolone ring |
| JP2012135227A (en) * | 2010-12-24 | 2012-07-19 | Mitsui Norin Co Ltd | α-AMYLASE INHIBITOR |
| JP2014240431A (en) * | 2014-09-17 | 2014-12-25 | 富士フイルム株式会社 | Intestinal harmful bacteria reducing agent, and food or medicine containing the same |
| CN109879850A (en) * | 2019-02-26 | 2019-06-14 | 中国农业科学院茶叶研究所 | A method of preparing three kinds of polyester catechins monomers |
| CN111233810A (en) * | 2020-01-18 | 2020-06-05 | 安徽农业大学 | Preparation method and application of hydroxycinnamoyl ester type catechin |
| CN111233810B (en) * | 2020-01-18 | 2023-03-21 | 安徽农业大学 | Preparation method and application of hydroxycinnamoyl ester type catechin |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4701328B2 (en) | Fermented tea leaves and production method thereof, fermented tea leaf extract and food and drink | |
| Nikoo et al. | Antioxidant and antimicrobial activities of (‐)‐epigallocatechin‐3‐gallate (EGCG) and its potential to preserve the quality and safety of foods | |
| Zhang et al. | Chemistry and biological activities of processed Camellia sinensis teas: A comprehensive review | |
| Sajilata et al. | Tea polyphenols as nutraceuticals | |
| Tenore et al. | Simulated gastrointestinal digestion, intestinal permeation and plasma protein interaction of white, green, and black tea polyphenols | |
| Khan et al. | Tea and health: studies in humans | |
| Ho et al. | Tea and tea products: chemistry and health-promoting properties | |
| JP2007231009A (en) | Composition for inhibiting blood glucose level elevation and food or drink containing the same | |
| JP4701327B2 (en) | Composition comprising as an active ingredient a fermented tea produced by twisting tea leaves and loquat leaves, and an extract contained in the fermented tea | |
| Boaventura et al. | Enhancement of bioactive compounds content and antioxidant activity of aqueous extract of mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil.) through freeze concentration technology | |
| CA2595860A1 (en) | Anti-inflammatory supplement compositions and regimens to reduce cardiovascular disease risks | |
| Durak et al. | Coffee with ginger–Interactions of biologically active phytochemicals in the model system | |
| JP6353034B2 (en) | Diabetes preventive or ameliorating agent | |
| CN101683165B (en) | Composition for restraining rise of blood glucose and food and drink using these | |
| JP4974116B2 (en) | Foods and beverages and pharmaceuticals containing loquat leaf extract | |
| Ricci et al. | The nutraceutical impact of polyphenolic composition in commonly consumed green tea, green coffee and red wine beverages: a review | |
| Baldi et al. | Tea catechins | |
| JP2009173652A (en) | Neutral fat absorption inhibitor composition comprising black tea extract as active ingredient | |
| JP2009298769A (en) | Fat accumulation-suppressing composition | |
| WO2011105042A1 (en) | Deodorant composition | |
| WO2012115026A1 (en) | Tomatoside a-containing composition | |
| JP2016132641A (en) | Food taking method | |
| JP5786169B2 (en) | Fermented tea, extract from fermented tea and medicinal composition containing the same | |
| JP2009221158A (en) | Neutral fat-reducing agent and suppressor of body fat increase | |
| Wang et al. | Antioxidative effect of large molecular polymeric pigments extracted from zijuan pu-erh tea in vitro and in vivo |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070718 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070822 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110118 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110317 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110510 |